Набор реагентов для иммуноферментного определения IgG антител к антигенам Toxoplasma spp. в сыворотке (плазме) крови "Toxoplasma IgG-ИФА" по ТУ 9398-101-18619450-2009 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
УТВЕРЖ ДЕНА
Приказом Росздравнадзора
от_________________2009 г.
№
ВЕРЖ ДЛЮ »
Ъ о «ХЕМ А»
, С. Лебедин
Ц 2009 г.
И Н С Т Р У К Ц И Я
по применению Набора реагентов для нммуноферментного определения
IgG-антител к антигенам T o x o p l a s m a s p p . в сыворотке и плазме крови
« T o x o p l a s m a IgG- И Ф А »
1 . Н А З Н А Ч Е Н И Е .
1.1. Набор реагентов «Toxoplasma IgG-И Ф А » предназначен для определения
специфических IgG-антител к антигенам Toxoplasma spp. в сыворотке или плазме крови
человека методом твердофазного иммуноферментного анализа.
1.2. Токсоплазмоз является широко распространенным инфекционным заболеванием,
вызываемым внутриклеточным паразитом Toxoplasma spp., способным инфицировать все виды
млекопитающих. Определение IgG -антител к Toxoplasma spp. используется с целью изучения
иммунитета беременных женщин. IgG-антитела к Toxoplasma spp. имеют протективную
функцию и обеспечивают устойчивый иммунитет от повторной инфекции. Специфическое
ведение неиммунизированных (отрицательных по IgG'aнтитeлaм) беременных женщин
уменьшает риск развития первичных инфекций.
2. Х А Р А К Т Е Р И С Т И К А Н А Б О Р А .
2.1. П р и н ц и п работы Набора. Определение IgG-антител к антигенам Toxoplasma spp.
основано на использовании твердофазного варианта иммуноферментного анализа. На
внутренней поверхности лунок иммобилизован высокоочищенный рекомбинантный антиген
Toxoplasma spp. В лунках планщета, при добавлении исследуемого образца, во время инкубации,
происходит специфическое связывание IgG-антител, содержащихся в исследуемом образце, и
антигена на твердой фазе.
Отмывка лунок планшета позволяет удалить избыток непрореагировавших компонентов.
Во время инкубации с конъюгатом происходит образование иммунного комплекса
«антиген Toxoplasma spp. твердой фазы - специфические IgG антитела (исследуемый образец) -
мышиные моноклональные анти-IgG антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена
(конъюгат)».
Отмывка лунок планшета позволяет удалить избыток непрореагировавших компоненюв.
Во время инкубации с раствором субстрата тетраметилбензидина (ТМ Б) происходит
специфическое связывание пероксидазы (конъюгат) с раствором субстрата тетраметилбензидина
(ТМ Б), сопровождающееся изменением окраски растворов в лунках. Интен^
прямо пропорциональна концентрации cпeциф ичecкиx^G ачти т^;гк ян
1 ^ ^
аски
--- стр. 2 ---
в исследуемом образце.
Регистрация результатов реакции производится измерением оптической плотности
содержимого лунок планшета на спектрофотометре при длине волны 450 нм.
Обработка результатов реакции производится с помощью коэффициентного метода.
2.2. Состав Набора:
- планшет 96-луночный стрипированный с сорбированным на внутренней поверхности
лунок рекомбинантным антигеном Toxoplasma spp., готов к использованию -1 шт.;
- положительная контрольная сыворотка на основе инактивированного пула
сывороток крови человека с высоким содержанием IgG-антител к антигенам Toxoplasma spp.,
готова к использованию - I пробирка или флакон (1,0 мл);
- отрицательная контрольная сыворотка на основе инактивированного пула
сывороток крови человека без содержания IgG-антител к антигенам Toxoplasma spp., готова к
использованию - 1 пробирка или флакон ( 1 , 0 мл);
- калибровочная проба на основе инактивированного пула сывороток крови человека с
известным содержанием IgG -антител к антигенам Toxoplasma spp., готова к использованию - I
пробирка или флакон ( 1 , 0 мл);
- конъюгат (мышиные моноклональные антитела к IgG человека, конъюгированные с
пероксидазой хрена), готов к использованию - 1 флакон ( 1 1 мл);
- И Ф А - Б у ф е р (pH 7,0 - 7,2), готов к использованию - I флакон (22 мл);
- раствор субстрата тетраметилбензидина (ТМБ), готов к использованию - 1 флакон
( I I мл);
- концентрат отмывочного раствора, 2 1-кратный концентрат - ] флакон ( 2 2 мл);
- стоп-реагент, готов к использованию - 1 флакон ( 1 1 мл);
- липкая лента с бумажной подложкой для заклеивания планшета, готова к
использованию - 2 шт.
3 . А Н А Л И Т И Ч Е С К И Е И Д И А Г Н О С Т И Ч Е С К И Е Х А Р А К Т Е Р И С Т И К И ,
3.1. Специфичность. Использование высокоочищенного рекомбинантного антигена
Toxoplasma spp. на твердой фазе позволяет достичь высокой специфичности анализа.
3.2. Воспроизводимость. Коэффициент вариации результатов определения содержания
IgG-антител к антигенам Toxoplasma spp. в одном и том же образце сыворотки (плазмы) крови с
использованием Набора «Toxoplasma IgG -И Ф А » не превышает 8,0%.
--- стр. 3 ---
3
4 . М Е Р Ы П Р Е Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И .
4.1. Потенциальный риск ирименения Набора - класс 26 ( Г О С Т Р 51609-2000).
4.2. Меры предосторожности-соблюдение «Правил устройства, техники безопасности,
производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в
лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы
Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г).
5. О Б О Р У Д О В А Н И Е И М А Т Е Р И А Л Ы , Н Е О Б Х О Д И М Ы Е П Р И Р А Б О Т Е С Н А Б О Р О М :
- фотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять омгическую
плотность раствора в лунках при длине волны 450 нм;
-дозаторы со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости
в диапазоне 25-250 мкл;
- цилиндр м е р н ы й вместимостью 500 мл;
- вода дистиллированная;
- перчатки резиновые или пластиковые;
- бумага фильтровальная.
6 . А Н А Л И З И Р У Е М Ы Е О Б Р А З Ц Ы . П О Д Г О Т О В К А Р Е А Г Е Н Т О В Д Л Я
А Н А Л И З А ,
6.1. Перед проведением анализа компоненты Набора и исследуемые образцы сыворотки
(плазмы) крови следует выдержать при комнатной температуре (+1 8-25 ^С) не менее 30 мим.
6.2. Образцы сыворотки (плазмы) крови, используемые для ана^пиза, допускасгся
хранить при температуре +2-8 ® С не более 24 ч или при температуре -20 V не более 2 недель.
6.3. Для проведения анализа не следует использовать гемолизированную, мутную
сыворотку (плазму) крови, а также сыворотку (плазму) крови, содержащую азид натрия.
6.4. Приготовление планшета.
Вскрыть пакет с планшетом и установить на рамку необходимое количество стрипов.
Вскрытые стрипы следует использовать в течение 1 ч, длительному хранению не подлежат.
Оставшиеся неиспользованными стрипы, чтобы предотвратить воздействие на них влаги,
необходимо тщательно заклеить липкой лентой для заклеивания планшета и хранить в
упаковке при температуре +2-8 *^С в течение всего срока годности Набора.
6.5. Приготовление отмывочного раствора.
Содержимое флакона с концентратом отмывочного раствора перенести в мерный
цилиндр вместимостью 500 мл, добавить 440 мл дистиллированной воды и тщательно
перемешать.
В случае дробного использования Набора следует отобрать необходимое количество
концентрата отмывочного раствора и развести дистиллированной водой в
концентрата + 19 объемов дистиллированной воды).
Приготовленный отмывочный раствор допускается хранить при 1/]^^йатно^
(+18-25 V ) не более 2 сут. или при температуре +2-8 ?С не более IО сут.
--- стр. 4 ---
7. П Р О В Е Д Е Н И Е А Н А Л И З А .
7.1. Развести исследуемые образцы сыворотки (плазмы) крови в 2] раз ИФА-Буфером
{например, 10,0 мкл сыворотки (плазмы) крови + 200 мкл ИФА-Буфера}.
Тщательно перемешать предразведенный образец, избегая вспенивания.
Предраз веде иные образцы сывороток (плазм) крови длительному хранению не
подлежат.
7.2. Внести в соответствующие лунки в дубликатах по 100 мкл положительной
контрольной сыворотки, отрицательной контрольной сыворотки и калибровочной пробы.
В остальные лунки внести в дубликатах по 100 мкл предразведенных (см. п. 7.1.)
исследуемых образцов сыворотки (плазмы) крови.
Внесение образцов в лунки планшета необходимо произвести в течение 5-10 мин.
7.3. Аккуратно перемешать содержимое планшета круговыми движениями по
горизонтальной поверхности, заклеить планшет липкой лентой для заклеивания планшета и
инкубировать его в течение 30 мин при комнатной температуре (+18-25 '^С ).
7.4. По окончании инкубации удалить содержимое лунок аспирацией (например, с
помощью водоструйного насоса) или декантированием и промыть лунки 3 раза. При каждой
промывке добавить во все лунки по 250 мкл отмывочного раствора, перемешать содержимое
планшета круговыми движениями по горизонтальной поверхности с последующей аспирацией
или декантированием. При каждом декантировании необходимо тщательно удалять остатки
жидкости из лунок постукиванием планшета в перевернутом положении по фильтровальной
бумаге.
7.5. Внести во все лунки планшета по 100 мкл конъюгата.
Внесение конъюгата в лунки планшета необходимо произвести в течение 5-10 мин.
7.6. Аккуратно перемешать содержимое планшета круговыми движениями по
горизонтальной поверхности, заклеить планшет липкой лентой для заклеивания планшета и
инкубировать его в течение 30 мин при комнатной температуре (+18-25 ).
7.7. По окончании инкубации удалить содержимое лунок аспирацией (например, с
помощью водоструйного насоса) или декантированием и промыть лунки 5 раз. При каждой
промывке добавить во все лунки по 250 мкл отмывочного раствора, перемешать содержимое
планшета круговыми движениями по горизонтальной поверхности с последующей аспирацией
или декантированием. При каждом декантировании необходимо тщательно удалять остатки
жидкости из лунок постукиванием планшета в перевернутом положении но филыров^Ь 1ьпой
бумаге.
7.8. Внести во все лунки планшета по 100 мкл раствора субстрата тетраметилбензидина
(ТМБ).
Внесение раствора субстрата тетраметилбензидина (ТМ Б)
необходимо произвести в течение 1 - 2 мин.
Инкубировать планшет в темноте при ко м ичной температуре (4
4
--- стр. 5 ---
25 мин в зависимости от степени развития синего окрашивания.
7.9, Внести во все лунки планшета с той же скоростью и в той же последовательное г и.
как и раствор субстрата тетраметилбензидина (ТМБ), по 100 мкл стоп-рсагснта; при пом
содержимое лунок окрашивается в ярко-желтый цвет.
Внесение стоп-реагента в лунки планшета необходимо произвести в течение 1-2 мин.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ.
8.1. Измерить величину оптической плотности (ОП) в лунках планшета на фотометре
вертикального сканирования при длине волны 450 нм. Измерение ОП растворов в лунках
планшета необходимо произвести не позднее 5 мин после внесения стоп-реагента.
В случае невозможности своевременного измерения ОП растворов в лунках на
фотометре, планшет допускается хранить при температуре +2-8 не более 4 ч.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ РЕАКЦИИ.
9.1. Расчитать среднее значение оптической плотности лунок с калибровочной пробой.
9.2. Умножить полученное значение на Коэффициент Q , приведенный в аналитическом
паспорте. Полученное значение называется граничным значением оптической тотпости
(ОПГ).
9.3. Для каждого исследуемого образца вычислить К обр, получаемый делением среднего
значения оптической плотности лунок с исследуемым образцом на ОПГ (см. п. 9.2.).
9.4. При значении > 1 ,1 исследуемый образец сыворотки (плазмы) крови счигать
серопозитивным (положительным). При значении К о б р 0,9 исследуемый образец сыворотки
(плазмы) крови считать серонегативным (отрицательным). При значении 0,91 < К о г ,,, < L09
результат находится в пограничной («серой») зоне.
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА.
10.1. Набор реагентов «Toxoplasma IgG-ИФА» должен храничься в упаковке
предприятия-изготовителя при температуре +2-8 в течение всего срока годности (12 мес.).
Допускается хранение (транспортировка) Набора при температуре до +25 не более 5
сут.
10.2. Набор рассчитан на проведение анализа в дубликатах 45 неизвестных образцов, 1
пробы положительной контрольной сыворотки. I пробы отрицательной контрольной сыворо7ки
и 1 калибровочной пробы - всего 96 определений при пспользовании всего комплск га с гринов.
10.3. В случае дробного использования Набора компоненты следует хранить
следующим образом:
- вскрытые стрипы следует использовать в течение 1 ч, длительному хранению не
подлежат;
- оставшиеся неиспользованными стрипы тщательно заклеить липкр^г ^ У 1ля
заклеивания планшета и хранить в упаковке при температуре +2-8 в т^
годности Набора;
- конъюгат и раствор субстрата тетраметилбензидина (ТМБ) поел
--- стр. 6 ---
допускается хранить при температуре +2-8 не более 1 мес.;
- стоп-реагент и ИФА-Буфер после вскрытия флаконов допускается хранить при
температуре +2-8 °С в течение всего срока годности Набора;
- калибровочную пробу и контрольные сыворотки после вскрытия пробирок (флаконов)
допускается хранить при температуре +2-8 не более 1 мес.; при необходимости болсс
длительного хранения - при температуре -20 “С в течение всего срока годности Набора;
- приготовленный отмывочный раствор допускается хранить при комнатной
температуре (+18-25 ^С) не более 2 сут. или при температуре +2-8 “С не более 10 сут.;
- оставшийся неиспользованным концентрат отмывочного раствора допускается
хранить при температуре +2-8 "С в течение всего срока годности Набора;
10.4. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение
Инструкции по применению Набора.
По вопросам, касающимся качества Набора реагентов «Toxoplasma lgG-ИФА»,
следует обращаться в ООО «ХЕМА» по адресу: 125319, Москва, 4~я уя. 8 Марта, д. 3, стр. 3.
тел/факс (495) 7370040.
/■' • • •
Руководитель исследошт^ь^Сб]Х|
отдела ООО «XEMA)f,’ .
10 января 2009 г.
«СОГЛАСОВАНО»
Заведующий кафедрой клинической
лабораторной диагностики
ГОУ ДПО РМАПО Росздрава
. б. н. Д.С. Кострикин
М .Н ., профессор В.В. Долюв