Реагенты in vitro для исследования гемостаза "Латекс" в наборах и отдельных упаковках — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДАЮ
^ Г е н е р а л ь н ы й д и р е к т о р
О О О « Э к о - м е д - с М »
В о р о ш и л о в Н .А .
« 0 1 » ф евраля 2 0 1 0 г
ИНСТРУКЦИЯ
п о ПРИМЕНЕНИЮ
Реагенты in-vitro для исследования гемостаза
«Латекс»
в наборах и отдельных упаковках
1 . НАЗНАЧЕНИЕ
2. ОСНОВНЫЕ ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3. ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ
4. ПОДГОТОВКА К РАБОТЕ ИЗДЕЛИЯ
5. ПОРЯДОК РАБОТЫ ИЗДЕЛИЯ
6 ПРАВИЛА ХРАНЕНИЯ И ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
2010
--- стр. 2 ---
е н р ^ ь н М д и р е к т о р
0 © 0 « 5 'к о - м е д - с М »
- у У
В о р о ш и л о в Н .А .
«01» февраля 2010 г
/ 'Ч.Ш ВЕРЖ ДАЮ
ИНСТРУКЦИЯ
по ПРИМЕНЕНИЮ
Наборы in-vitro для исследования гемостаза Латекс
1. НАЗНАЧЕНИЕ
2. ОСНОВНЫЕ ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3. ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ
4. ПОДГОТОВКА К РАБОТЕ ИЗДЕЛИЯ
5. ПОРЯДОК РАБОТЫ ИЗДЕЛИЯ
6 ПРАВИЛА ХРАНЕНИЯ И ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
2010
--- стр. 3 ---
SIEMENS
Дейд Димертест латексный тест.
Для качественного и полуколичествбнного определения производных
поперечно-связанного фибрина (содержащего О^димер домен) в плазме
Область применения
Dimertest® Латексный Анализ предназначается дпя быстрого качественного или
попуколичественного определения циркулирующих производных поперечно-связанного
фибрина (XDP) в человеческой плазме.
Конспект и пояснения
Сгусток фибрина формируется при разложении растворимого фибриногена,
катализируемым тромбином, с образованием мономеров фибрина. Мономеры фибрина
собираются в наполовину устойчивую совмещенную структуру в форме цепей фибрина,
которые со временем загустевают, образуя комки фибрина. На этом этапе
полимеризации фибрина, тромбин активизирует фактор X III в состояние активного
фермента - фактора Xllla. Затем фактор X I Н а переводит растворимый фибрин в
нерастворимый сгусток фибрина, образуя поперечные связи с соседними молекулами
фибрина в области D -домена.'
В местах свертывания крови образуется ллазмин. Плазмин это главный фермент,
растворяющий тромбы, обладающий способностью расщеплять и фибриноген и
фибрин до различных продуктов распада. В отличие от продуктов распада фибриногена
(ПРФ), ллазмин расщепляет фибрин, поперечно-связанный фактором Xllla, на
производные (XDP), которые содержат поперечно-связанный D-Домен (Р-димер).
Поэтому, наличие производных фибрина, содержащих D -димер, в плазме - это
специфичный признак фибринолиза.
Латексный анализ Dimertest* предназначен для быстрого качественного или
попуколичественного определения циркулирующих производных поперечно-связанного
ф и Л ^ а (XDP) в человеческой плазме. Весьма специфичное к D -димеру
мо^^ональное антитело прикрепляется к частицам латекса. Видимая агглютинация
данных частиц в присутствии О-димера является положительным признаком
фибринолиза. Порог выявления для Латексного анализа Dade® Dimertest* установлен с
использованием того же моноклонального антитела в иммуноферментном анализе для
очищенного фрагмента D -димера человека. Он дает положительную агглютинацию при
концентрации производных поперечно-связанного фибрина, содержащих D -димеры,
приблизительно 0,20 мг/мл.
Реактивы
Состав
1 . Частицы латекса Dimertest*: 0,83% суспензия частиц латекса, покрытых мышиным
моноклональным антителом, специфичным к человеческому О-димеру производных
поперечно-связанного фибрина, содержащая стабилизаторы и 0,1% азид натрия в
качестве консерванта.
2. Положительный Контроль Dimertest*: раствор, содержащий очищенный фрагмент
человеческого D -димера, стабилизаторы и 0,1% азид натрия в качестве
консерванта. Раствор дает положительную реакцию агглютинации с частицами
латекса Dimertest*.
3. Отрицательный Контроль Dimertest*: раствор буфера и 0,1% азида натрия в
качестве консерванта. Раствор не агглютинирует с частицами латекса Dimertest*.
4. Буфер Dimertest*: 10 мм фосфатный бу<^рный раствор и 0,1% азид натрия в
качестве консерванта.
Предупреждения и Меры предосторожности
1 , Для in vitro диагностики,
2 С реагентами, содержащими азид натрия необходимо обращаться с должной
осторожностью:
Не проглатывайте и не допускайте контакта с кожей или слизистыми! Азид натрия
может образовывать взрывоопасные азиды при контакте с тяжелыми металлами,
такими как медь или свинец.
3. Предупреждение: Обращаться с материалами как с потенциально инфекционными
D a r J ^ Dimertest* Латексный Анализ содержит компоненты человеческого
прсЩрждения. Каждый образец донорской крови, использованный дпя получения этих
компонентов тестировался на антиген к гепатиту В , анти-HCV, анти-HIVI и анти-Н|\/2
методами, утвержденными Управлением по контролю за продуктами и лекарствами
(С Ш А ). Используются только образцы с отрицательными результатами. Тем не менее,
пока отсутствие возбудителей инфекции не будет подтверждено, со всеми анализами,
взятыми у человека, стоит обращаться с должной осторожностью, соблюдая
рекомендации для работы с биологически опасными веществами
Признак порчи: неудачная реакция агглютинации частиц латекса и положительного
контроля, ап-лютинация с отрицательным контролем или очевидное бактериальное
заражение.
Хранение и стабильность
Если компоненты Латексного анализа Dimertest* не используются, их следует хранить
яри температуре от+2 до + 8 ® С. Не замораживайте реактивы.
Сбор и подготовка образцов
Плазма
Для Латексного анализа Dimertest* подходят свежая или свежезамороженная (не более
чем за 2 недели) плазма, собранная в любой цитрат, этилендиаминтетрауксусную
кислоту или гепарин. 14итрат является предпочтительным антикоагулянтом.
Использование этилендиаминтетрауксусной кислоты или гепарина приведет к
увеличению вероятности наступления ошибочной положительной реакции. После
отделения плазмы центрифугированием, образцьг могут быть сразу протестированы на
наличие XDP. Дефибринирование плазмы не обязательно, не рекомендуется.
• Патент С Ш А 4 758 524
Методика
предоставляемые материалы
Шифр Продукт Упаковка
В4233-60 Латексный анализ Dade* Dimertest® 60 тестов
B4233-61L Частицы латекса Dimertest* 2,0 мл
Гест-набор, К оО В4233-60
1 . Частицы латекса Dimertest*
2 Положительный контроль Dimertest*
3. Буфер Dimertest*
4. Отрицательный контроль Dimertest®
5 Контрольное предметное стекло с 8 реакционными зонами.
6 Пластиковые мешалки: для перемешивания и распределения плазмы
Необходимые дополнительные материалы, не входящие в комплект
1. Пипетки и наконечники дозировкой 20 и 100 мкп
Примечание: Для надежного выполнения анализа необходимы высокоточные
пипетки.
2. Одноразовые пластиковые пробирки (12 х 75 мм)
3. Стойка для пробирок
4. Механический ротатор для предметного стекла (необязательно)
Контроль Качества
Рекомендуется применять и положительный и отрицательный контроль в каждой
партии испытаний, чтобы удостовериться в исправности системы. Следуйте
инструкциям для качественного скрининг-теста (отборочного испытания) при
оценочном контроле. Положительный результат (агглютинация) может быть получен
заменой Положительного контроля Dimertest® на плазму на шагах с 4 по 6: и наоборот,
отрицательный результат (отсутствие агглютинации) может быть получен заменой
Dimertest® Отрицательного Контроля на плазму на шагах с 4 по 6. Когда выполняется
процедура попуколичественного анализа, рекомендуется проведение испытаний
последовательных разведений Положительного контроля. Положительный контроль
Dimertest® состоит из раствора человеческого D -димера на уровне около 0,8 мг/мл.
Процедура
Примечание: Компоненты Латексного анализа Dimertest* должны быть доведены до
комнатной температуры (оптимальна температура от +20 до +25"’ С: относительная
влажность >20%) перед использованием, а частицы латекса должны быть
перемешаны переворачиванием пробирки несколько раз непосредственно перед
использованием.
A, Качественный скрининг-тест
1. Доведите реактивы Латексного анализа Dimertest® и образцы до комнатной
температуры.
2. Отметьте (или сделайте заметки) схемы расположения образцов на контрольном
предметном стекле и, если необходимо, для положительного и отрицательного
контроля.
3. Держите капельницу с частицами латекса вертикально и добавьте по одной капле
частиц к каждой контрольной зоне,
4. Распределите 20 мкл неразбавленной плазмы или 1 каплю контрольного раствора
рядом с латексом. Сразу перемешайте суспензию кончиком пластиковой мешалки
покрыв реакционную зону. После работы с каждым образцом мешалку следует
выбрасывать.
5. Вручную, ипи используя механический ротатор, осторожно вращайте предметное
стекло в течение 3 минут.
6. Строго через 3 минуты после смешивания, проверьте на агглютинацию под
мощным источником света.
Примечание: Результат должен быть считан через 3 минуты инкубации при условиях
описанных выше. Если считывание результата откладывается более чем на 3 минуты,
латексная суспензия может высохнуть и дать ложную структуру агглютинации. Если
на это есть подозрение, образец необходимо протестировать заново.
B . Полуколичественный анализ
Положительная агглютинация будет наблюдаться у образцов, содержащих более чем
0,20 мг/мл XDP е плазме. Оценка повышенного уровня XDP в образце может быть
получена путем серийного разбавления плазмы в буфере Dimertest® , при
исследовании разбавленных образцов как описано выше. Наивысшая степень
разбавления, при которой наблюдается видимая агглютинация, это титр. Пример:
Если неразбавленный образец плазмы агглютинирует, разбавьте часть образца
(минимум 100 мл) с равным объемом буфера (раствор 1:2). Смешайте подходящий
объем этого разбавленного образца с равным объемом буфера для получения
раствора 1:4. Повторяйте эту процедуру, что бы продолжить серию разбавлений по
желанию.
Результаты
A . Качественный анализ
Для протокола качественного анализа характерны следующие результаты:
Неразбавленная плазма ХО Р концентрация
Отрицательный И Л енее чем 0,20 мг/мл
Положительный Более чем 0,20 мг/мл
Примечание: Все значения в мг/мл даны приблизительно.
B . Полуколичественный анализ
Приблизительный уровень ХОР, содержащих О-димер домен, для разбавленных
образцов приведен в Таблице 1 . Как и со всеми лопукопичественными тестами,
следует ожидать определенное непостоянство в соотношении доза-реакция.
Таблица 1
Разбавленный Образец
Приблизительный
интервал
D-димер (XDP) (мг/мл) Неразбавленный 1:2 1:4 1:8
< 0,20 - . . -
0,20 - 0,40 + . . .
0,40 - 0,80 + + . .
0,80-1,60 + + + .
1,60-3,20* + + + +
("+" = агглю тинация,= нет агглютинации)
* Уровень XDP выше чем 3,2 мг/мл может быть оценен дальнейшим разбавлением
более чем 1:8.
Интерпретация Результатов:
Нормальная концентрация продуктов полураспада поперечно-связанного фибрина
(XDP, вкпючающиеО-димер домен) в плазме обычно менее 0,20 мг/мл, поэтому
предполагается что образцы, взятые у обычных людей, дадут отрицательный
результат при данном испытании . Концентрация приблизительно 0,20 мг/мл ХОР или
выше вызовет реакцию агглютинации с Латексным анализом Dimertest*. Скрининг-тест
плазмы дпя установления диагностического значения XDP при диссеминированном
внутрисосудистом свертывании (ДВС) и острых сосудистых заболеваниях, включая
эмболию сосудов легких (РЕ) и глубокий венозный тромбоз (ГВ Т ), состояние которых
трудно установить диспансеризацией. Концентрация XDP в плазме {выраженная в
мг/мл) может быть проанализирована полукопичественным анализом путем
определения наивысшего титра разбавления, который остается положительным для
частного образца (Таблица 1). Количество XDP, обнаруженных в образце, будет
--- стр. 4 ---
зависеть от различных взаимосвязанных факторов in vivo, таких как серьезность
тромботического случая, величина образования поперечно-связанного фибрина и
время, прошедшее после тромботического случая до момента забора кров у пациента.
К ак и со всеми лабораторными тестами, выявление повышенных уровней поперечно
связанного фибрина в образцах при постановке диагноза, должно использоваться
совместно с другой клинической информацией. Повышенный уровень поперечно-
связанного фибрина, продукта распада включающего D -димер домен, проявляется у
пациентов при сочетании иммунопреципитации и гель-электрофорез метода.^^
Моноклональные Антитела (М А )® сейчас позволяют специфично определять D -димер
домены, и используются во вспомогательной диагностике эмболии сосудов легких,
глубокого венозного тромбоза, артериального тромбоза и диссеминированного
внутрисосудистого свертывания.® Dimertest® Латексный Анализ не реагирует
перекрестно с фибриногеном, фактор Xllla поперечно-связанный фибриноген.'” иначе,
фибриноген продукт распада. ®
Ограничения анализа
Ревматоидный Фактор: При изучении образцов взятых у пациентов с ревматоидным
артритом. 17 образцов агглютинировали с Латексным анализом Dimertest®. Во всех 17
образцах, агглютинация могла быть подавлена добавлением D -димера особого
моноклонального антитела DD3B6/22. но не вместе с неспецифичным моноклональным
антителом той же подгруппы. lgG 3l< .
Это предполагает что Латексный анализ Dimertest* невосприимчив к нарушениям
ревматоидных факторов.
Вмешательство других циркулярных факторов вероятно, но о них пока не сообщалось.
Однако, образцы пациентов с серповидно-клеточной болезнью, перенесшие кризис
окклюзии сосудов покажут положительную реакцию агглютинации с Латексным
анализом Dimertest®.
Особые рабочие характеристики
Плазма ста семидесяти (170) практически здоровых доноров крови была проверена с
помощью Латексного анализа Dimertest*. Отрицательный результат был получен для
ста шестидесяти двух (162) образцов. Это приравнивается к специфичности в 95,3 %
(162/170).
Сто сорок пять (145) образцов плазмы состоящих из образцов, взятых у пациентов
страдающих от подтвержденного диагноза или с вьюокой вероятностью
тромботического случая, были протестированы при помощи Латексного анализа, а
также другим эталонным методом агглютинации. Корреляция составила г = 0,94 и
уравнение регрессии: у = 1,19х. Внутри анализа повторяемость была определена для
1|в^торных испытаний 3 образцов плазмы с различным уровнем XDP. Повторные
и^р1^ования дали тот же результат.
Между анализами воспроизводимость была установлена с использованием 10
образцов плазмы с XDP титрами от 1 до 16. В серии из 10 опытов, повторное
испытание этих образцов не выявило отклонение более чем на один титр.
Билирубин (0,2 мг/мл), липемия (30 мг/мл триглицерида), гемоглобин (5,0 мг/мл) и
белок (0,06 г/мл гамма глобулина) не оказывают воздействия на Латексный анализ
Dimertest*, что и было проверено в максимальной концентрации.
При изучении 50 антикоагулянтов сравнили цитратные, EDTA и гепариновые образцы
плазмы, корреляция между титрами полученными Латексным анализом Dimertest* и
вероятными титрами (полученными на основании Иммуноферментного твердофазного
анализа значений XDP) составила г = 0,91 для образцов цитратной плазмы, г = 0,73 для
образцов EDTA-плазмы и г = 0,78 для образцов гепариновой плазмы. Цитрат является
предпочтительным антикоагулянтом.
Список литературы
1. Pepper, D.S.; Preston, F.E.; Mibashan. R.S. Seminars in Hematology 15: 73-92; 1978.
2. U.S. Department of Health and Human Services GDC. Biosafety in Microbiological and
Biomedical Laboratories. HHS Publication (GDC) 93-8395; 1999; Section I I ; 8-16
3. Gaffney, P.J. G lin. Ghim. Acta 65: 109-115; 1975.
4. Lane, D .A .; Preston, F.E.; van Ross, M .E.; Kakkar, V .V . B rit. J. Haematol. 40: 609-615;
1978.
5. Whitaker, A.N.; Rowe, E.A.; Masci, P.P.; Gaffney, P.J. Thromb. Res. 18: 453-459; 1980.
6. Graef, H .; Hafter, R. Sem. Thromb. Haemostas, 8: 57-68; 1982.
7. Yoshioka, K .; Mizuno, S.; Myata, H .; M aki, S. Eur, Pediatrics. 138: 46-48; 1982.
8. Rylatt, D.B.; Blake, A.S.; Gottis, L.E.; Massingham, D.A.; Fletcher, W.A.; Masci. P.P.;
Whitaker. A.N.; Elms, М .; Bunce, I.; Webber, A.J.; Wyatt. D .; Bundesen. P.G. Thromb.
Res. 31:767-778:1983.
9. Elms. M .J.; Bunce, I.H .; Bundesen, P.G. Rylatt, D.B.; Webber, A.J.; Masci, P.P.;
Whitaker, A.N. A m . J. G lin. Path. 85: 360-364; 1986.
10. Greenberg, G.S.; Devine, D .V .; McGrea, K .M . Am. J. Clin. Path. 87: 94-100; 1986,
11^||itaker A ,N .; Elms, M .J.; Masci, P.P.; Bundesen, P.G.; Rylatt, D.B.; Webber, A.J.;
nee, I.H . J. Clin. Pathol. 37: 882-887; 1984,
Д л я т о ч н о г о н а н е с е н и я к а п л и ...
в ы т р и т е н а с у х о н а к о н е ч н и к
п е р е д и с п о л ь з о в а н и е м .
--- стр. 5 ---
SIEMENS
N Латекс HCY [NHCY]
Область применения
при irvvitro диагностике для количественного определения общего гомоцистина (HCY) а
сыворотке, геларинизироеэнной и EDTA плазме человека с помощью нефелометрического
иммуноанализа на системах BN* II и BN ProSpec®. Устройства помогает диагностировать и
назначить печение пациенту, с подозрением на гмпергомоцистенимию или
гомоцисти нурию.
Конспект и пояснения
Гомоцисгин - это аминокислота, получаемая из метионина, с добавлением фолиевой
кислоты, витамина В6 и В12 для дальнейшего метаболизма. Гомоцистин существует в
свободном виде, но, как правило, связан с белком Мутация в генетическом коде
ферментов, вовлеченных в метаболизм, таких как, MTHFR (редуктаза 5,10*
метилентетрагидрофолат), приеод*тт к гилергомоцистинемии'"^. Фолиевая кислота,
витамины В6 и В12 являются необходимыми факторами для разрушения связей
гомоцистина. Нехватка этих е т ’аминов вызывает повышение уровня гомоцистина в
ллазме’" *. Гомозиготные мутации гена CBS (цистатионин li-синтаза) вызыеают тяжелую
форму гипергомоцистинемии, а также гомоцистонурию.
Гилергомоцистинемия, как правило, связана с повышенным риском ишемической болезни
сердца, ее приступов, болезни периферийных артерий и тромбоза глубоких вен’’® , наравне
с повреждениями нервных трубок и преэклампсии во время беременности^’^ . Высокая
концентрация гомоцистина в крови вызывает эндотелиальную дисфункцию и ифает
значительную роль при сосудистых заболевай и я х^'^, Гипергомоцистинемия чаще
встречается у пожилых людей, курильщиков, пациентов с почечными болезнями, диабетом
или при жестком соблюдении вегетарианской диеть»^.
Некоторые лекарства, такие как протиаоэпилептические, антифолатные, а также
анестезия с применением окиси азота и антагонисты витамина В6, повышают
уровень концентрации гомоцистина в крови человека. При анализе образцов, взятых
у пациентов, проходящих лечение с использованием З-аденозил-метгюнина,
существует возможность получить завышенные результаты по гомоцистину.
Основа методики
Сравнительный анализ
^Связанный гомоцистин в образце высвобождается под воздействием дитиотреитола, после
^его, при помощи фермента, превращается в S-аденозил-гомоцистин (SAH)
Конъюгированный З-аденозилцистин (SAC), добавляемый на следующем шаге, связывает
антитела к ЭДН и частицы полистирола. При наличии SAH в образце, афегация частиц
полистирола либо отсутствует, либо наблюдается в незначительном количестве. В случае
отсутствия SAH в образце, частицы полистирола агрегируются с конъюгированным SAC.
Чем выше концентрация SAH в реакционной смеси, тем меньше рассеивается пучок света.
Оценка выполняется путем сравнения со стандартом заданной концентрации.
Реагенты
Предоставляемые материалы
[NHCY). код ОРАХ
3 X 1,7 мл [NHCY] [REAGENT], N HCY реагент
3 X 2,2 мл [NHCY) RA
3 X 0,6 мл [NHCY} SR А
3x1,1 мл [NHCYl SRB
Состав
N HCY Реагент состоит из суспензии частиц полистирола, покрытьи моноклональными
антителами к S-аденозил-гомоцистину (SAH, мышь) (<0,1 г/л).
N HCY RA состоит из буферного стабилизированного раствора с редуцирующим агентом
(дигтиотреитолом, <0,5 г/л) и аденозина (<20 мг/л).
N HCY SR А состоит из буферного стабилизированного раствора с ферментом S-аденозил-
L-гомоцистином гидролазы (рекомбинант) (<100 кЕд/л).
N HCY SR В состоит из буферного стабилизированного раствора коньгагата SAC со
свиным тиреоглобулином (PTG-SAC) (<0,1 г/л).
Консерванты
N HCY Реагент: гентамицин 6,25 мг/л, амфотерицин 0,625 мг/п.
N HCY SR после смешивания с N HCY SR А и N HCY SR В : азид натрия < 0,1%
Предупреждения и меры предосторожности
1 . Только для in vitro диагностики.
2. Содержит азид натрия (< 0,1 %) а качестве консерванта. Азид натрия может вступать в
реакцию с медными или свинцовыми трубами сливной системы и образовывать
взрывоопасные соединения. Утилизация должна проводиться в соответствии с
региональными нормами и стандартами
В. Каждый донор или донорный орган был протестирован и получен отрицатепьный
W результат по анализу на наличие вируса иммунодефицита (HIV) 1 и 2, вируса гепатита В
(HBV) и вируса гепатита С (HCV) либо при помощи методов, соответствующих
директиве по in vitro диатостике для Евросоюза, либо методами, утвержденными
Управлением по контролю за продуктами и пекарствами (США). Так как ни один из
известных тестов не может дать 100 % гарантии отсутствия инфекционных агентов, со
всеми анализами, взятыми у человека, следует обращаться с должной осторожностью
Подготовка реагентов
N HCY Реагент и N HCY RA поставляются готовыми к использованию N HCY Реагент
необходимо аккуратно перемешать перед использованием.
N HCY SR при помощи липетки поместите все содержимое пробирки с N HCY SR А в
пробирку с N HCY SR В и аккуратно перемешайте.
Хранение и устойчивость
Храните реагенты вдали от солнечного света!
Устойчивость от +2 до +6 °С: срок годности указан ка этикетке.
Устойчивость после открытия:
Две недели (N HCY Реагент, N HCY RA и N HCY SR смесь), если плотно закрыть сразу
после использования в целях предотвращения зафязнения (например, микроорганизмами)
и хранить при температуре от +2 до +в “С.
Не замораживайте реагенты.
Устойчивость в приборе:
N HCY Реагент, N HCY RA и N HCY SR смесь - не менее трех дней (по 8 часов в день) или
сопоставимый промежуток времени.
Примечание: Устойчивость в приборе зависит от используемой системь[ BN*, а также
лабораторных условий. Для получения более подробной информации см. руководство по
эксплуатации систем BN* II и BN ProSpec®.
Необходимые дополнительные материалы, не входящие в комплект поставки
Система BN* II или BN ProSpec®
N Белковый стандарт (Protein Standard) SL. код OQIM
N/T Бепковый контроль (Protein Standard) SL/L, код OQIN
N H " белковый контроль (Protein Standard) SL/M, код OQIO
N/T Белковый контроль (Protein Standard) SL/H, код OQIP
N Разбавитель (Diluent), код OUMT
BN* II Антиисларительная пробка (доп.), код OVLE
Доступные материалы и оборудование, описанные в руководстве по системам BN*.
Пробы
Чтобы максимально уменьшить синтез HCY е эритроцитах после забора образцов,
настоятельно рекомендуется их готовить следующим образом:
> Помещать все образцы крови (сыворотку и плазму) на лед сразу после забора.
> Не оставлять образцы при комнатной температуре перед центрифугированием.
* Проводить центрифугирование в течение часа, чтобы отделить плазму или сыворотку
от клеток крови.
Для исследования используйте наиболее свежие (находящиеся на хранении максимум 7
дней при температуре от +2 до +8 ’С) или замороженные пробы человеческой сыворотки, а
также гепаринизированные и EDTA (этилендиаминтетрауксусная кислота) образцы плазмы.
Образцы сыворотки и плазмы могут храниться до трех месяцев при температуре ниже -
20°С, в случае, если они бьши заморожены в течение 24 часов после сбора и при хранении
отсутствовала повторная заморозка Сыворотка должна быть полностью свернувшейся и
не содержать каких-либо частиц или следов фибрина после центрифугирования
Липемические или замороженные образцы, мутные после оттаивания, должны бьпь
очищены центрифугированием (10 минут приблизительно на 15 О О О х д) до анализа. Для
мониторинга пациента не рекомендуется использовать различные типы образцов
Процедура
Примечания
1 Обращайтесь к соответствующему руководству по системам BN* для подробных
инструкций.
2. Реагенты и образцы, хранящиеся при температуре от +2 до +8 'С, могут бьп'ь сразу
использованы для анализа в системах BN* II и BN ProSpec®,
Протокол испьпания для систем BN*
Протокол испытания для сыворотки кроеи и плазмы включен в руководство, так же как и
Профаммное обеспечение для соответствующего оборудования. Все действия
выполняются системой автоматически.
Расчет референсной кривой
Референсные кривые строятся при мультиточечной калибровке. Серийные разбавления N
Белкового стандарта SL производятся прибором автоматически при помощи N
Разбавителя. Стандартные растворы должны быть использованы е течение 4 часов.
Референсную кривую можно использовать в течение 2 недель или дольше, при контроле
точности, например, если N/T Белковые контроли SL/L, М и И остаются в пределах
соответствующих интервапов доверия. При каждой замене партии реагентов необходимо
строить новую референсную кривую, Точнь(й диапазон измерений зависит от концентрации
аналита в каждой партии N Белкового стандарта SL,
Исследование образцов
Образцы автоматически разбавляются в соотношении 1:5 N Разбавителем Растворы
должны бьп-ь исследованы в течение 4 часов. Для результатов, находящихся вне
диапазона измерений, исследование можно повторить разбавив образец как 120,
Повторные исследования с дальнейшим разбавлением проб описаны в руководстве по
системам BN*.
Внутренний контроль качества
Анализ ЫЯ Белковых контролей SL/L, М и Н должен проводиться после каждого расчета
референсной кривой, после первого использования колбы с реагентом, а так же для
каждого измерения образцов Контрольные растворь! исследуются и оцениваются так же,
как и тестируемые образцы. Присвоенное значение и доверительный интервал для
контролей дань( в соответствующей Таблице приписанных значений. Для ввода
приписанных значений в систему BN ProSpec® можно воспользоваться информационным
компакт-диском (код OVLP),
Если результат контрольных измерений лежит за пределами интервала доверия, анализ
необходимо повторить. Если отклонение подтверждается повторным измерением, должна
быть вычислена новая референсиая кривая. Результаты пациента не должны бь 1ть
оглашены, пока причина отклонений не установлена и не устранена.
Результаты
Оценка выполняется автоматически е мкмоль/л или производной единице, определяемой
пользователем системы BN*,
Ограничения анализа
Мутные пробы и сод^жащиеся в них частицы могут повлиять на результаты анализа
Пробы, содержащие осадок, должны быть центрифугированы перед анализом,
Липемические пробы, которые не очищаются центрифугированием (10 минут
приблизительно 15 О О О х д), должны быть исключены из анализа. Следующие вещества не
оказывают значительного эффекта (± 20%) в методе HCY при добавлении в указаннь1х
концентрациях: билирубин до 600 мг/л, триглицерид до 4,21 ммоль, общий белок до 88 г/л.
Некоторые лекарства, такие как противоэпилептические, антифолатные, а также
анестезия с применением окиси азота и антагонисты витамина В6, повышают
уровень концентрации гомоцистина в крови человека.
Образцы пациентов могут содержать ревматоидные и гетерофильные антитела, что может
повлечь ошибочно завышенные или заниженные результаты иммуноанализа. Данный
анализ разработан в целях минимизации влияния ревматоидньгх и гетерофильных антител
на результат исследования. Однако, полностью исключить их влияние не представляется
возможным.
Компания Siemens Healthcare Diagnostics провела тестирование на использование данных
реагентов с различными анализаторами а целях оптимизации производительности и
соответствия требованиям, предъявляемых к продукции. Компания Siemens не
поддерживает попьзовательские изменения, так как они могут повлиять на
производительность системы и результаты анализа. За использование рекомендаций,
отличающихся от приведенных здесь, или реагентов, не входящих в список заявки Siemens
Application Sheets, вместо оригинальных, ответственность ложится на пользователя
Полученные результаты анализов всегда должны интерпретироваться совместно с
историей болезни, клинической картиной пациента, а так же с результатами других
медицинских обследований.
Из-за матричных эффектов, отличающиеся результаты для контроля и лабораторные
опьп-ные результаты исследования образцов могут означать их зависимость от выбранного
метода исследования. Поэтому может понадобиться оценка данных результатов е
отношении целевь;х значений, хараетерных для метода.
Сравнительные исследования сыворотки и плазмы методом N Латекс HCY для сыворотки
показали результаты более чем на 10% выше, чем для аналогичного анализа EDTA-
плазмы. Поэтому не рекомендуется производить анализы для одного и того же пациента
попеременно по EDTA плазме или по сь 1воротке. Между концентрацией гомоцистина в
ЕОТА и гепаринизированной плазме значительных различий выявлено не было,
Референсный интервал
Концентрация гомоцистина е плазме или сыворотке крови здоровых людей может
изменяться в зависимости от возраста, пола, геофафического расположения, состояния
питания и генетических факторов. Эталонные интервалы в научной литературе для
взрослых мужчин и женщин составляют от 5 до 15 мкмоль/л. При исследовании 800
практически здоровых людей, 95 лроцентиль составил 15,7 мкмоль/л гомоцистина^. При
исследовании 193 образцов ЕОТА плазмы крови здоровых людей из центральной Европы
были получены значения от 4,9 до 15,0 мкмоль/л (2,5 - 95 лроцентиль) при помощи N
Латекс HCY Тем не менее, каждая лаборатория определяет свой собственный эталонный
интервал, с учетом многих леременнь1х, которые могут отличаться для каждой изученной
группы жителей.
Особые рабочие характеристики
Аналитическая чувствительность
Чувствительность теста определяется по нижней границе референсной кривой и поэтому
зависит от концентрации аналита в N Белковом Стандарте SL /Аналитическая
чувствительность рассчить1вается при помощи среднего, стандартного отклонения и
коэффициента вариации (CV) в 20 прогонов с N Разбавителем и N Белковым стандартом
SL - 1 : 160 (нижняя точка референсной кривой) проанализированных при помощи системь!
BN*. Стандартная чувствительность для гомоцистина составляет 2 мкмоль/л.
--- стр. 6 ---
Стандартные диапазоны измерений даны в рукоаодстве по эксплуатации системы BN*
Стандартный диапазон измерений для образцов, разведенных в соотношении 1:5.
составляет от 2 до 64 мкмоль/л
Специфичность
Перекрестные реакции среди используемых антител не выявлены. При помощи системы
BN‘ II были исследованы образцы плазмы стимулируемые различными концентрациями
аденозина (до 1 мМ), S-аденозил-L-метионина (до 0,5 мМ), L-цистатионина (до 2 мМ), L-
цистина (до 5 мМ), L-метионина (до 0,4 мМ), гомоцистин-тиолактона (до 0,1 мМ) и
глютатиона (до 50 мМ), и было получено отклонение результатов в сравнении с
аналогичными не стимулированными образцами с содержанием L-цистина <5,0% и <1,0%,
и < 10,0% глютатиона.
Точность
Следующие коэффициенты вариации (CV) бь1ли получены с использованием N Латекс
HCY (п = 40) на системе BN*
Образец Среднее
значение
(мкмоль/л)
Внутри
анализа
СУ(%)
Между
анализами
СУ (%)
Общий
CV {%)
МЯ Белк. контроль SUL 6,7 4,5 7,3 в,5
МЯ Белк. контроль SUM 1 1 , 03,4 5,6 6 , 6
М Я Белк. контроль S L /H22,3 4,6 3,7 5,9
П ул ЁРТА плазмы 1 1 1 , 8 4,2 6 , 1 7,4
Пул ЕРТА плазмы 2 32,9 2,7 3,7 4,6
Результаты были оценены при помощи дисперсионного анализа,
Солоставлвиие методов
Было проведено исследование 87 образцов плазмы с концентрацией гомоцистина от 4,83
до 60.13 мкмоль/л при помощи N Латекс HCY (у). Для сравнения, эти образцы были также
исследованы методом иммуноанализа (х) представленным на рынке Рвфессивмый анализ
результатов выявил следующую зависимость: у = 0,97 х + 0,01 мкмоль/л (с = 0,99).
Примечание
Значения, ссылающиеся на особые рабочие характеристики анализа, являются
стандартными и не должны приниматься за спецификации N Латекса HCY,
Список литературы
к 1 Stanger О, Herrmann W. Pietrzik К et al, DACH-DGA Homocysteine (German, Austrian
f and Swiss Homocysteine Society^ Consensus paper on the rational clinical use of
homocysteine, folic acid and B-vitamins in cardiovascular and thrombotic diseases:
guidelines and recommendations, Clin Chem Lab Med 2003; 41: 1392-1403,
2. The Homocysteine Studies Collaboration. Homocysteine and risk of ischemic heart
disease and stroke. JAMA 2002; 288:2015-22.
Refsum H, Smith AD, Ueland PM, et al. Facts and Recommendalions about Total
Homocysteine Determinations: An Expert Opinion, Clin Chem 2004, 50: 3-32,
Chambers JC, Seddon MDI, Shah S, Kooner JS, Homocysteine - a novel risk factor for
vascular disease. J R Soc Med 2001; 94: 10-3.
Herrmann W. The importance of hyperhomocysteinemia as a risk factor for diseases: an
overview. Clin Chem Lab Med 2001; 39: 666-74
Wald DS, Law M, Morns JK. Homocysteine and cardiovascular disease: evidence on
causality from a meta-analysis. BMJ 2002; 325: 1202-8,
Graham IM, Daly LE. Refsum HM, et al. Plasma homocysteine as a risk factor for vascular
disease. The European Concerted Action Project. JAMA 1997; 277: 1775-81.
BN ProSpec является торговой маркой Siemens Healthcare Diagnostics.
* BN является торговой маркой Siemens Healthcare Diagnostics.
I Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH
Emil-von-Behring-Str, 76
U M 35041 Марбург/Германия
www.»i«m »n»,com /di«anostics C€
--- стр. 7 ---
Список обозначений
E X I
Ж
I1«Х1m
Г
ш
А
С С » ^ Т Ш Г 8 |
i L E V E L l
Не использовать повторно.
Использовать до
Партия
Код номер
Внимание, см. соответствующие документы
Производитель
Уполномоченный представитель в европейском сообществе
Содержимого достаточно для <п> тестов
Медицинский прибор для In Vitro диагностики
Температурный режим
См. Инструкции по эксплуатации
Но стерильно
Знак СЕ
Содержимое
Объем восстановления
Концентрация
©200В Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH.
Все права защищены
--- стр. 8 ---
SIEMENS
Набор N Латекс RF [NRF]
Область применения
Количественное определение ревматоидных факторов (РФ) в человеческой сыворотке,
плазме с добавлением гепарина лития и EDTA-плаэме при помощи систем BN* И и BN
ProSpeo® в помощь при диатостике ревматического артрта.
Конспект и пояснения
РФ являются аутоиммунными антителами к Fc фрагменту человеческого IgG с измененной
третичной структурой Данные аутоиммунные антитела также взаимодействуют с IgG
животных, РФ преимущественно принадлежат к классу 1дМ , однако также встречаются и во
всех друтох классах иммуноглобулинов'-^.
Выявление РФ является одним из критериев, используемых Американской Ассоциацией по
лечению ревматизма (ARA), при диагностике ревматоидного артрита (РА)*, так как у 70 -
90% пациентов с РА обнаруживаются ревматоидные факторы. РФ ифают важную роль в
дифференциальном диапностировании РА и его отделении от прочих ревматических
заболеваний’. Кроме того они позволяют делать прогнозы в отношении Р А '*. Высокое
содержание РФ часто указывает на более тяжелое протекание болезни. Однако, также
существуют сероотрицательмые типы РА, при которых РФ не выявляется, а может быть
связан с другими ревматическими заболеваниями, такими как гепатит, эндокардит и
паразитными или вирусными инфекциями или иными аутоиммунными заболеваниями В
процессе старения также увеличивается процент положительных результатов на РФ при
отсутствии соответствующих признаков заболеваний''. Таким образом, тест ка выявление
только РФ не может использоваться в качестве диагностики, а должен интерпретироваться
совместно с результатами дальнейших клинических исследований
РФ был впервые обнаружен при агглютинировании эритроцитов овцы антителами крови
кролика (тест Ваалера-Розе (Waaler-Rose)), но затем предпочтение было отдано методу
ап-лютинирования частиц полистирола, покрьп-ых человеческим IgG (латексный тест)'.
Последний метод леп<о может быть автоматизирован и обеспечивает
стандартизированные количественнь(е результаты. Набор N Латекс RF сочетает в себе
элементы обеих процедур обнаружения, в которых частицы полистирола покрьп-ы
иммунным комплексом IgG человека и животного.
Основа методики
Совокупность частиц полистирола, покрытых иммунным комплексом, содержащим
"человеческий иммуноглобулин и антитела овцы к IgG человека, при смешивании с
образцами, содержащими РФ, афвтруются. При облучении светом агрегат рассеивает
световой пучок. Интенсивность рассеивания света зависит от концентрации
соответствующего белка в образце. Оценка выполняется путем сравнения со стандартом
заданной концектрации.
Реагенты
Предоставляемые материалы
Набор N Латекс RF, код ОРСЕ 03, содерж ащий
3 X 2 М П [N RF1 [REAGENT], N RF реагент
3 X 2,4 М П [N RF) (SUPPLEMENT], N RF присадка
Н абор N Л ат екс RF. код ОРСЕ 05, содержащий
4 X 4 М П [N RF] [REAGENT], N RF реагент
4 X 4,8 М П [N RF] [SUPPLEMENT], N RF присадка
Состав
N RF Реагент состоит из частиц полистирола, покрытых иммунным комплексом,
содержащим человеческий уГ'ПОбулин и анти-у-глобулин овцы, то есть комбинацию
человеческого и животного у-глобулина,
N RF Присадка состоит из водного раствора полиэтилен гликоля {макс. 70 г/л) с
детергентом.
Консерванты
N RF Реагент: гентамицин сульфат 6,96 мг/л, амфотерцин В 0,696 мг/п
N RF Присадка; азид натрия < 0,1 %
Предупреждения и меры предосторожности
1, Только для in vitro диатостики.
2, Содержит азид натрия (< 0,1 %) а качестве консерванта. Азид натрия может вступать в
реакцию с медными ипи свинцовыми трубами сливной системы и образовывать
взрывоопасные соединения. Утилизация должна проводиться в соответствии с
региональными нормами и стандартами,
3, Содержит человеческий материал.
Каждый донор или донорный орган был протестирован и получен отрицательный
результат по анализу на наличие вируса иммунодефицита (HIV) 1 и 2. вируса гепатита В
^ (HBV) и вируса гепатита С (HCV) либо при помощи методов, соответствующих
Щ директиве по in vitro диагностике для Евросоюза, либо методами, утвержденными
Управлением по контролю за продуктами и пекарствами (США). Так как ни один иэ
известных тестов не может дать 100 % гарантии отсутствия инфекционных агентов, со
всеми анализами, взятыми у человека, следует обращаться с должной осторожностью.
Подготовка реагентов
N RF Реагент находится в жидком состоянии и готов к использованию. Перед
использованием его необходимо аккуратно перемешать, избегайте энергичных
взбалтываний и образования пены.
N RF Присадка; раствор готов к использованию.
Хранение и устойчивость
Устойчивость от +2 до +8 "С;
Срок годности указан на этикетке.
Устойчивость после откры тия:
Четыре недели (N RF Реагент и N RF Присадка), если плотно закрьпь сразу после
использования в целях предотвращения эафяэнения (например, микроорганизмами) и
хранить при температуре от +2 до +8 “ С, Не за1моражиеайте реагенты
Во время хранения при температуре от +2® до +8 “С возможна кристаллизация N RF
Присадки, однако раствор снова перейдет в жидкое состояние при комнатной температуре
(от +15 до +25°С), На ра^чие характеристики кристаллизация воздействия не оказывает.
Устойчивость, в пвиборе:
Устойчивость в приборе зависит от используемой системы BN*, а также лабораторных
условий. Не следует оставлять емкость с реагентами для системы BN* II открытыми,
вместо чего рекомендовано закрыть емкость сразу после использования и хранить при
температуре от +2 до +8° С, Для получения более подробной информации см руководство
по эксплуатации систем BN‘ И и BN Pro8рее®.
Необходимые дополнительные материалы, ме входящие в комплект поставки
Система BN* II или BN ProSpeo®
N Ревматолошческий стандарт (Rheumatology Control) SL, код OQKZ
NH " Ревматологический контроль (Rheumatology Control) SL/1 и SL/2, код OQDB и OQDC
N Растворитель (Diluent), код OUMT
BN' II Антииспарительная пробка (доп.), код OVLE
Дополнительные материалы и оборудование, описаннь<е в руководстве по системам BN*.
Образцы
Подходящими являются образцы человеческой сыворотки, плазмы, обработанной
гепарином лития, или Е0ТАч1лазмы, либо свежие (хранение не более 8 дней при
температуре от +2 до +0°С), либо е замороженном виде. Образцы сыворотки и плазмы
могут храниться до трех месяцев при температуре -20 “С, в случае, если они были
заморожены в течение 24 часов гюсле сбора и при хранении отсутствовала повторная
заморозка Сыворотка должна быть полностью свернувшейся и не содержать каких-либо
частиц или следов фибрина после центрифугирования. Не следует использовать
липемические образцы.
Мутные образцы должны бьп-ь очищены центрифугированием (10 минут приблизительно
на 15 О О О X д) до анализа
Процедура
Примечания
1. Обращайтесь к соответствующему руководству по системам BN* для подробных
инструкций.
2. Разрешается использовать совместно только компоненть» иэ наборе® с одинаковым
номером партии
3. N RF Реагент и N RF Присадка должны заменяться е системах BN* одновременно.
Протокол испьпания для систем BN*
Протокол испытания для сыворотки крови и плазмы включен в руководство, так же как и
Профаммное обеспечение для соответствующего оборудования. Все действия
выполняются системой автоматически.
Расчет референсной кривой
Референсные кривые строятся при мультиточечной калибровке, Серийнь1в разбавления N
Белкового стандарта SL производятся прибором автоматически при помощи N
Разбавителя. Стандартные растворы должны бьп-ь использованы в течение 4 часов.
Референсную кривую можно использовать в течение 4 недель или дальше, при контроле
точности, например, если N/T Ревматологические контропи SU1 и S U 2 остаются в
пределах соответствующих интервалов доверия При каждой замене партии реагентов
необходимо строить новую референсную кривую, Точнь1й диапазон измерений зависит от
концентрации аналита в каждой партии N Ревматологического стандарта SL, Стандартные
диапазоны измерений указаны е соответствующем руководстве по эксплуатации системы
BN*
Исследование образцов
Образцы сыворотки и плазмы автоматически разбавпяются в соотношении 120 при
помощи N Разбавителя, Разбавленные образцы должны бьп'ь исследованы в течение 4
часов.
Внутренний контроль качества
Анализ N/T Ревматологическопз контроля SL/1 и SL/2 должен проводиться после каждого
расчета референсной кривой, после первого использования колбы с реагентом, а гак же
для каждого измерения образцов. Контрольные растворы исследуются и оцениваются так
же, как и тестируемые образцы Заданное значение и доверительный интервал для
контроля даны в соответствующей Таблице приписанных значений. Для ввода
приписанных значений в систему В N Pro Spec® можно воспользоваться информационным
компакт-диском {код OVLP).
Если результат контрольных измерений лежит за пределами интервала доверия, анализ
необходимо повторить. Если отклонение подтверждается повторным измерением, должна
быть вычислена новая референсная кривая. Результаты пациента не должны быть
оглашень!. пока причина отклонений не установлена и не устранена.
Результаты
Оценка выполняется автоматически в МЕ/мп на системе BN*
Для результатов, находящихся вне диапазона измерений, исследование можно повторить
с более высокой степенью разбавления образцов. Повторные исследования с дальнейшим
разбавлением образцов описань! в руководстве по системам BN*
Ограничения анализа
Концентрации билирубина до 0,6 г/п и свободного гемоглобина до 10 г/л не оказывают
воздействия на измерения сыворотки
Мутные образцы и содержащиеся в них частицы могут повлиять на результаты анализа.
Поэтому образцы, содержащие осадок, должны бьп-ь центрифугированы перед анализом
Липемические образцы, которые не очищаются центрифугированием {10 минут
приблизительно 15 О О О х д) и образцы, инактивированные нафеванием. должны быть
исключены из испытаний
Компания Siemens Healthcare Diagnostics провела тестирование на использование данных
реагентов с различными анализаторами в цепях оптимизации производительности и
соответствия требованиям, предъявляемых к продукции. Компания Siemens не
поддерживает пользовательские изменения, так как они могут повлиять на
производительность системы и результаты анализа. За использование рекомендаций,
отличающихся от приведенных здесь, ипи реагентов, не входящих в список заявки Siemens
Application Sheets, вместо оригинальных, ответственность ложится на пользователя.
Из-за матричных эффектов, отличающиеся результаты для контроля и лабораторные
результаты исследования образцов могут означать их зависимость от выбранного метода
исследования. Поэтому может понадобш-ься оценка данных результатов в отношении
целевых значений, характернь(х для метода.
Эталонный интервал
при исследовании сыворотки крови 253 доноров из центральной Европы при помощи
набора N Латекс RF. 97.5 процентипь составил: 15,9 МЕ/мл.
В нормальной популяции РФ, как правило, ниже диапазона измерения данного метода.
Однако, у здоровых асимпоматичных людей, РФ может показывать в том числе и низкий
титр. Частота появления ложноположитепьного результата растет с возрастом и схожа для
мужчин и женщин. Тем не менее, каждая лаборатория определяет свой собственный
эталонный интервал, с учетом многих переменных, которые могут отличаться для каждой
изученной фуппы жителей Попученные результаты анализов всегда должны
интерпретироваться совместно с историей болезни, клинической картиной пациента, а так
же с результатами других медицинских обследований.
Особые рабочие характеристики
Диапазон анализа
Базовый диапазон измерений для набора N Латекс RF составляет от 10 до 640 МЕ/мп,
Чувствительность теста определяется по нижней границе референсной кривой и поэтому
зависит от концентрации аналита в N Ревматологическом стандарте SL,
Специфичность
Агглюцинация, возбуждаемая частицами, чаще всего выявляет РФ в иммуноглобулине
класса М (1дМ)’.
Точность
Тестирование точности прибора проведено в соответствии с директивой CLSt ЕР5-А2 ^ с
двумя контрольными пробами и 4 пулами сь1 воротки с различным содержанием РФ. При
помощи дисперсионного анализа (п = 80) результатов для системь! BN* были получены
следующие значения коэффициента вариации {CV):
Образец Среднее
значение
(МЕ/мл)
Воспроизв.
CV(%)
Между
анализами
CV(%)
Внутри
анализа
C V (% )
Контроль 1 69,3 2,2 5,2 5,7
Контропь 2 170,2 2,2 3,1 3.8
Пуп сыворотки низкий 1 27,9 2,7 5,4 7.9
Пул cbiBopoTKH низкий 2 81,3 2,2 4,8 5,3
Пул сыворотки высокий 1 582,7 5,1 4,8 7.7
Пуп сыворотки высокий 2 600,8 5.3 5,8 8.1
--- стр. 9 ---
Сопоставление методов
90 образцов сыворотки (с содержанием РФ от 15,8 МЕ/мл до 589,8 МЕ/мл) были
проанализированы при помощи N Латекс RF (х) и набора N Латекс RF (у) на системе BN*
Корреляция результатов выявила следующую зависимость: у = 1,098 х - 12,94 МЕ/мл, г =
0.98
Примечание
Значения, ссылающиеся на особые рабочие характеристики анализа, являются
стандартными значениями и не должны приниматься за слецификации набора N Латекс
RF
Список литературы
1. Mierau R, Genth Е. Autoantibodies in rheumatoid arthritis. In : Thomas L ed. Clinical
Laboratory Diagnostics, TH-Books, Frankfurt/Main 1998;810-3.
2. Dorner RW, Alexander RL, Moore TL Rheumatoid factors Clin Chim Acta 1987:167:1-21.
3. Amett FC, Edworthy SM, Bloch DA et al. The American Rheumatism Association 1987 revised
criteria for the classification of rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum 1988;31:315-24.
4, Scott DL, Prognostic factors In early rheumatoid arthritis. Rheumatol 2000;39 Supp11:24-9.
5, Clinical and Latjoratory Standards Institute (CLSI). Evaluation of Precision Perfonriance of
Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline - Second Edition. CLSI document
EP5-A2 (ISBN 1-56238-542-9). CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA 19087-
1898, USA, 2004,
* BN является торговой маркой Siemens Healthcare Diagnostics.
BN ProSpec яапяется торговой маркой Siemens Healthcare Diagnostics,
I Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH
J Emil-von-Behring-Str, 76 35041
Map6ypr/r ермания
w ww.(iem *n*.com /<li«gnostlcs C €
--- стр. 10 ---
Список обозначений
~ w
ЕКР О
Ж
m i
f lw n |
т
т
<€
C0»(T««1S
LEVEi
Не использовать повторно.
Использовать до
Партия
Код номер
Внимание, см. соответствующие документы
Производитель
Уполномоченный представитель в европейском сообществе
Содержимого достаточно для <п> тестов
Медицинский прибор для In Vitro диагаостики
Температурный режим
См. Инструкции по эксплуатации
Не стерильно
Знак СЕ
Содержимое
Объем восстановления
Концентрация
© 2008 Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH.
Все права защищены
--- стр. 11 ---
SIEMENS
K 9 |
Набор N Латекс CDT
Область применения
При in-vitro диатостике для количественного определения угле вод о-дефицитм ого
трансферрина (СОТ) в сыворотке Kpowi человека с помощью нефелометрического
иммуноанапиза на системах BN* II и BN ProSpec® для выявпения хронически повышенного
потребления алкоголя.
Конспект и пояснения
Главным компонентом трансферрина сь'воротки крови является гликопротвин с
молекулярной массой около 80 кД, содержащий две полисахаридных боковых цепи. На
каждой боковой цепи есть по 2 окончания сиаловой кислоты Однако, трансферрин
сыворотки крови человека также может встречаться в различных изоформах с различной
степенью гликолизации^
Тетрасиалоформа с двумя углеводными боковыми цепями, на каждой из которых есть по
два окончания опаловой кислоты, преобладает у 90% здоровых людей' Молекулы
трансферрина с одной боковой углеводной цепью (дисиалотрансферрин) или без боковых
цепей (асиалотрамсферрин) встречаются в большом количестве у людей, регулярно
употребляющих алкоголь^. Эти и другие структурно измененные изоформы трансферрина
вызываются чрезмерным употреблением алкоголя и более известны как СОТ (карбогедрат-
дефицитный трансферрин).
Как правило, ежедневное употребление 50 - 60 г этилового спирта в течение двух недель
приводит к повышению концентра1.^и СОТ. Повышенная концентрация СОТ может позднее
нормализоваться в случав воздержания от употребления алкоголя от двух до четырех
недель, в зависимости содержания СОТ^ *. Определение уровня СОТ позволяет упростить
выявление хронической алкогольной зависимости у пациентов, осуществлять мониторинг
изменений в потреблении алкоголя и воздержании от дальнейшего употребления.
Различные исследования показали, что уровень СОТ является одним из явных признаков,
указывающих на продолжительное употребление алкоголя^®®.
Также некоторые болезни, не вызь1еаемые алкоголем, могут повышать уровень СОТ,
например, хронический активный гепатит, билиарный цирроз печени, отказ в работе печени
и , крайне редко, уровень может повышаться из-за COG (карбогидрат-дефицитный
гликопротеин) ,
Подсчет процентного содержания СОТ в растворах СОТ и трансферрина позволяет
минимизировать влияние концентрации трансферрина, железа и дисфункции печени от
леп<их до форм средней тяжести на результат анализа СОТ. Также точность
диагностирования возможно увеличить используя комбинацию СОТ и yGT (Г-
гл икоми лтрансфераза)®'^,
Основа методики
Сравнительный анализ
СОТ в образце борется с частицами полистирола, покрытыми СОТ, за точки крепления к
моноклональным антителам, специфичным к человеческому СОТ При наличии СОТ в
образце, агрегация отсутствует или наблюдается незначительная агрегация частиц
полистирола, В случав отсутствия СОТ в образце частицы полистирола агрегируются. Чем
выше концентрация СОТ в образце, тем меньше рассеивается пучок света. Оценка
выполняется путем сравнения со стандартом заданной концентрации.
Реагенты
Предоставляемые материалы
[N СОТ), К О Д OPCS
3 X 0,9 мл [N СОТ) [REAGENTI1), N СОТ Реагент 1
3 X 0,9 мл [N СОТ] IREAGENT[2), N СОТ Реагент 2
3 X 2 мл [N СОТ) [SUPPLEMENT], N СОТ Дополнительный реагент
3 X 1 мл [N СОТ) [STANDARD), N СОТ Стандарт SL
3 X 1 мл [N СОТ) ICONTROLI1), N СОТ Контроль SL/1
3 X 1 мл [N СОТ) [C0NTR0LI2], N СОТ Контроль SU2
Состав и стандартизация
N СОТ Реагент 1 состоит из суспензии частиц полистирола, покрыть 1х карбогидрат-
дефицитным трансферрином (< 0,011 г/л)
N СОТ Реагент 2 состоит из суспензии частиц полистирола, покрытых моноклональными
ант;^влами к СОТ (мышь) (< 0,009 г/л).
N СОТ Дополнительный реагент состоит из буферного фосфатного физиологического
раствора с добавлением полиэтилен гликоль сорбит монолаурата {5 г/л) и EOT А {< 0,2
моль/л).
N СОТ Стандарт SL состоит из матрицы стабилизированной сыворотки крови человека и
карбогидрат-дефицитного трансферрина. Концентрация СОТ задана относительно
1Ищенного CDT. Приписанное значение дано во вложенной таблице.
СОТ Контроль SL/1 и N СОТ Контроль SL/2 состоят из матрицы стабилизированной
сь|воротки крови человека и карбогидрат-дефицитного трансферрина. Концентрация СОТ
задана относительно N СОТ Стандарта SL. Присвоенное значение и интервал доверия для
N СОТ Контроль SL/1 и SU2 приведены в таблице ниже. Также в них приведены
концентрация трансферрина и % СОТ для N СОТ Контроля SU1 и SL/2. Концентрация
трансферрина для данных растворов откалибрована а соответствии с N Белковым
стандартом SL, а % СОТ рассчитан с учетом соответствующих концентраций СОТ и
трансферрина.
Консерванты:
N СОТ Реагент 1 и N СОТ Реагент 2: Гентамицин 6,25 мг/л, амфотерцин 0,625 мг/л
N СОТ Дополнительная присадка, N СОТ Стандарт SL, N СОТ Контроль SU1 и N СОТ
Контроль SL/2:
АзкЩ натрия <0,1 % .
Предулреждвния и меры предосторожности
1 Только для т vitro диагностики.
2. Содержит азид натрия {< 0,1 %) в качестве консерванта. Азид натрия может вступать в
реакцию с медными или свинцовь<ми трубами сливной системы и образовывать
взрывоопасные соединения. Утилизация должна проводиться в соответствии с
региональными нормами и стандартами.
3. Каждый донор или донорный орган был протестирован и получен отрицательный
результат по анализу на наличие вируса иммунодефицита человека (HIV) 1 и 2. вируса
гепатита В (HBV) и вируса гепатита С (HCV) либо при помощи методов,
соответствующих директиве по in vitro диагностике для Евросоюза, либо методами,
утвержденными Управлением по контролю за продуктами и лекарствами (США). Так как
ни один из известных тестов не может дать 100 % гарантии отсутствия инфекционных
агентов, со всеми анализами, взятыми у человека, следует обращаться с должной
осторожностью.
Подготовка реагентов
Реагенты, ста>адарт и контроль готовы к использованию и не требуют предварительной
подготовки. Перед первым использованием необходимо аккуратно перемешать.
Хранение и устойчивость
Храните реагенты вдали от солнечного света!
Устойчивость от 42 до +6 “ С :
Срок годности указан на этикетке.
Две недели для всех реагентов, стандартов и контролей, если плотно закрьггь сразу после
использования и хранить при температуре от +2 до +8‘ С. Не замораживайте реагенты.
Устойчивость в системах BN* II и BN РгоЗрес®:
Не менее трех дней (по 8 часов в день) ипи сопоставимый промежуток времени.
Примечание: Устойчивость в приборе зависит от используемой системы BN*, а также
лабораторных условий. Для получения бопее подробной информации см. руководство по
эксплуатации систем BN' II и BN РгоЗрес®. Устойчивость в системе BN* ProSpec® N СОТ
Контроля SL/1 и SI72 указаны в руководстве по эксплуатации системы.
Необходимые дополнительные материалы, не входящие а комплект поставки
Система BN* II или BN ProSpec®
N Дополнительный реагент (Supplementary Reagent) L , код OQTD
N Разбаеитель (Diluent), код OUMT
BN* II Антииспарительная пробка ((доп.), код OVLE
Дополнительно, для выявления трансферрина:
N Иммунная сыворотка для человеческого трансферрина (Antiserum to Human Transferrin),
код OSAX
N Белковый стандарт (Protein Standard) SL, код OQIM
N/T Белковый контроль (Protein Control) SL/L, M, H, коды OQIN, OQIO, OQIP (для
подтверждения точности обнаружения транферрина)
( S t Буфер реакции (N Reaction Buffer), код OUMS
Дополнительные материалы и оборудование, описанные в руководстве по системам BN*.
Пробы
Подходят образцы человеческой сыворотки либо саежие (хранение не более 7 дней при
температуре от +2 до +8”С), либо в замороженном виде. Образцы могут храниться до трех
месяцев при температуре -20 “ С. в случав, если они были заморожены в течение 24 часов
после сбора и при хранении удалось избежать повторной заморозки Сыворотка должна
бьп-ь полностью свернувшейся и не содержать каких-либо частиц или следов фибрина
после центрифугирования. Липемические или замороженные образцы, мутнью после
оттаивания, должны быть очищены центрифугированием (10 минут приблизительно на 15
О О О X д) до анализа.
Процедура
примечания
1. Обращайтесь к соответствующему руководству по системам BN' для подробных
инструкций
2. Реагенты и образцы, хранящиеся при температуре от +2 до +8 'С, могут быть сразу
использованы для анализа в системах BN* It и BN ProSpeo®.
3 Чтобы получить процентное содержание СОТ в образце на системе BN* К или в BN
ProSpec®, помимо концентрации СОТ, необходимо указать концентрацию
трансферрина, что может бьп-ь реализовано при помощи анализа трансферрина на
системах BN*.
4. Ввод содержания трансферрина для N СОТ Контроля SL/1 и SL/2 упрощает вычисление
процентного содержания СОТ для индивидуальных контрольных измерений. Но не
подходит для контроля качества анализа трансферрина, произведенного системами
BN‘.
Протокол испьп-ания для систем BN*
Протокол испытания для сыворотки крови включен в руководство, так же как и
программное обеспечение для соответствующего оборудования.
Все действия выполняются системой автоматически
Расчет референсной кривой
Референснь1в кривые строятся при мультиточечной калибровке. Серийные разбавления N
СОТ Стандарта SL производятся автоматически при помощи N Разбавителя Стандартные
растворы должны б ь п ^ ь использованы в течение 4 часов. Приписанное значение дано во
вложенной таблице. Для ввода приписанных значений в систему BN ProSpec® можно
воспользоваться инс(х)рмационным компакт-диском (код OVLP). Референсная кривая
может использоваться в течение 2 недель. Референсную кривую можно испопьзовать
сверх указанного срока, если контролируется точность, например, если N СОТ Контроль
SL/1 и SL/2 остаются в пределах соответствующего интервала доверия При каждой
замене партии реагентов необходимо строить новую референсную кривую. Точньм
диапазон измерений зависит от концентрации белка а каждой партии N СОТ Стандарта SL.
Стандартные диапазоны измерений даны а руководстве по эксплуатации системы BN.
Исследование образцов
Образцы автоматически разбавляются в соотношении 1:5 N Разбавителем. Растворь1
должны быть исследованы в течение 4 часов. Ввод вручную коэффициента разбавления
образцов, отличного от 1;5 недопустимо.
Внутренний контроль качества
Анализ N СОТ Контроля SL/1 и SL/2 должен проводиться после каждого расчета
референсной кривой, после первого использования колбы с реагентом, а так же для
каждого измерения образцов сыворотки или плазмы. Контрольные растворы исследуются и
оцениваются так же. как и тестируемые образцы. Приписанное значение и интервал
доверия указаны во вложенной таблице. Для ввода приписанных значений в систему BN
ProSpec® можно воспользоваться информационным компакт-диском (код OVLP)
Указаннью приписанные значения предназначены для испопьзоеания е лаборатории в
качестве контроля при оценке точности и референсных кривых. При использовании в целях
контроля точности, пользователь должен ввести конечную концентрацию и интервалы
доверия во время предварительной настройки. Если результат контрольных измерений
лежит за пределами интервала доверия, анализ необходимо повторить. Если отклонение
подтверждается повторнь1М измерением, следует рассчитать новую референсную кривую.
Результаты пациента не должнь! бьп-ь оглашены, пока причина отклонений не установлена
и не устранена.
Результаты
Оценка выполняется автоматически в мг/л или в любых единицах, определяемых
пользователем систвмь1 BN*.
Также, вычисление процентного содержания СОТ было встроено в программное
обеспечение, поставляемое с системами BN*. В случае одновременного выявления СОТ и
трансферрина из одного и того же образца, можно получить данные по процентному
содержанию СОТ.
Ограничения анализа
Мутные пробы и содержащиеся в них частицы могут повлиять на результаты анализа
Поэтому образць;, содержащие частицы, должны быть центрифуплрованы перед анализом
Липемические образцы ипи образцы, содержащие частицы, которые не очищаются
центрифугированием (10 минут приблизительно на 15 О О О х д) должны быть исключены из
испытаний.
Концентрации триглицерида до 16,2 г/л, билирубина до 0,6 мг/л, свободного гемоглобина
до 10 г/л и ревматоидных факторов до 3 390 МЕ/мл не оказывают воздействия на
измерения. Воздействия со стороны широко раслространенньгх лекарств не выявлено.
Образцы могут содержать гетерофильные антитела, которые оказывают влияние на
иммунолошческий анализ и могут привести к завышению или занижению результатов.
Данный тест был разработан с целью минимизировать воздействие со стороны
гетерофильных антител. Тем не менее, полное исключение подобного влияния из
образцов всех пациентов не гарантируется.
Диагностическую помощь по процентному содержанию СОТ, полученную при помощи N
Латекс СОТ, следует использовать только дли образцов с очень низкой концентрацией
трансферрина (< 1,2 г/п трансферрина).
Компания Siemens Healthcare Diagnostics провела тестирование на использование данных
реагентов с различными анализаторами в целях оптимизации производительности и
соответствия требованиям, предъявляемых к продукции. Компания Siemens не
поддерживает пользоватепьские изменения, так как они могут повлиять на
производительность системы и результаты анализа. За использование рекомендаций,
отличающихся от приведенных здесь, или реагентов, не входящих в список заявки Siemens
Application Sheets, вместо оригинальных, ответственность ложится на пользователя
--- стр. 12 ---
Полученные результаты анализов всегда должны интерпретироваться совместно с
историей болезни, клинической картиной пациекта, а так же с результатами других
медицинских обследований.
Из-за матричных эффектов, отличающиеся результаты для контроля и лабораторные
результаты исследования образцов могут означать их зависимость от выбранного метода
исследования Поэтому может понадобиться оценка данных результатов в отношении
целевых значений, характерных для метода.
Референсный интервал
При исследовании 561 образца сыворотки, взятого у здоровых взрослых людей из
центральной Евролы, исключая результаты с повышенным уровнем потребления
алкоголя, были получены значения; от 28,1 до 76,0 мг/п СОТ (1 - 99 процентиль)
Исследования были проведены с использованием реагента N Латекс СОТ. Процентное
содержание СОТ, учитывая результаты, полученные при помощи N Иммунной сыворотки к
человеческому трансферрину, для данной популяции составило 1,19 - 2,47% (1-99
лроцентиль)®
Кроме того, каждая лаборатория определяет свой собственньм эталонный интервал, с
учетом многих леременнь1х, которые могут отличаться для кам здой изученной группы
жителей
Особые рабочие характеристики
Чувствительность
Аналитическая чувствительность теста определяется по нижней границе референсной
кривой и поэтому зависит от концентрации аналита в N СОТ Стандарте SL. Стандартная
чувствительность для СОТ составляет 20 мг/л
Специфичность
Перекрестная реакция среди используемых антител не выявлена
Точность
Точность измерения N Латекс СОТ была вычислена при помощи измерения контрольного
раствора и двух пулов сыворотки с различными концентрациями СОТ и просчета
коэффициентов вариации (CV).
Точность (п = 40)
Образец Среднее
значение
СУ (мг/л)
Внутри анализа
CV(%)
М ежду
анализами
СУ(%)
Общий
CV(%)
N СОТ Контроль SL/1 61,1 4.2 1 , 6 4,2
N СОТ Контроль SL/2 166,2 1.5 3,0
Пуп сыворотки 1 49.4 4,9 7.6
Пул сыворотки 2 213,9 3,5 2.4 4,0
I Коэффициент вариации процентного содержания СОТ в данных образцах был рассчитан
на основе результатов, полученных лри помощи N Иммунной сыворотки к человеческому
трансферрину с применением системы BN*. Диапазон для 0V составил от 2,7% до 9,8%
Сопоставление методов
Процентное содержание СОТ в образцах сыворотки, взятых у 200 доноров, было
измерено двумя различными способами: при помощи высокопроизводительной
жидкостной хроматографии (HPLC) и при помощи системы BN*. Если установлено
предельное значение в 2,5% содержания СОТ, то результаты, полученные при помощи
HPLC, будут составлять 97% по точности и 93% по чувствительности от результатов,
полученных лри помощи системы BN*.
Примечание
Значения, ссылающиеся на особые рабочие характеристики анализа, являются
стаьщартными значениями и не должны приниматься за слецификации реагента N Латекс
СОТ.
Список литературы
Golka К, Wiese А . Carbohydrate-deficient transferrin (СОТ) - а biomarker for long-terrn
alcotiol consump^on. J Toxicol Environ Health В 2004;7:319-37
Peter J. Unverzagt C, Engel WD, et al. Identification of carbohydrate deficient transferring
forms by MALDI-TOF mass spectrometry and lectin ELISA. Biochim Biophys Acta 1998;
1380: 93-101.
Helander A Biological m ariners in alcoholism. J Neural Transm 2003; 66 (Suppl): 15-32,
Allen JP. Use of biomarKers of heavy drinking in health care practice. Mil Med 2003, 168:
364-7.
Anttita P. Jarvi K , Latvala J, et al. A new modified y-%COT method improves the detection
of problem drinking: studies in alcoholics with or without liver disease. Clin Chim Acta 2003,
338: 45-51.
Schwan R, Albuisson E, Malet L, et al The use of biological laboratory markers in the
diagnosis of alcohol misuse: an evidence-based approach. Drug Alcohol Depend 2004; 74:
273-9.
Chen J, Conigrave KM. Macaskill P. et ai. Combining carbohydrate-deficient transferrin and
gammaglutamyltransferase to increase diagnostic accuracy for problem drinking. Alcohol
Alcoholism 2(X)3: 38: 574-82.
Delanghe JR, Helander A. Wielders JPM, et al. Oevelopment and muiticenter evaluation of
the N Latex COT direct immunonephelometric assay for semm carbohydrate-deficient
transferrin, Clin Chem 2007;53:1115-21.
BN является торговой маркой Siemens Healthcare Diagnostics.
BN ProSpec является торговой маркой Siemens Healthcare Diagnostics.
Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76 35041
Марбург/Германия
www.slem ens.com /diagiKistlcsd C €
--- стр. 13 ---
Список обозначений
ЕЁ1
ж
m l
V
I ITfrr
r
СШ
C €Г с т ^ т ш Щ
He использовать повторно.
Использовать до
Партия
Код номер
Внимание, см. соответствующие документы
Производитель
Уполномоченный представитель в европейском сообществе
Содержимого достаточно для <п> тестов
Медицинский прибор для In Vitro диагностики
Температурный режим
См. Инструкции по эксплуатации
Не стерильно
Знак СЕ
Содержимое
Объем восстановления
Концентрация
©2008 Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH,
I Все права защищены.
--- стр. 14 ---
SIEM ENS
Реагенты N Л атекс IgA (N Latex IgA Reagents)/
N Латекс IgM (N Latex IgM R eagen ts)
Предполагаемое использование и применение
Реагенты для in vitro диагностики для количественного определения иммуноглобулина
IgA/IgM в спинномозговой жидкости (СМЖ) и сыворотки при помощи
нефеломвтрического имунноанализа с частицами полистирола, обработанными
антителами к IgA/IgM человека. Измерение IgA/IgM помогает при диагностике
анормального метаболизма белков и неспособности организма сопротивляться
инфекционным агентам.
Конспект и пояснения
Концентрация сывороточнь1х белков в МЖ показывает установившееся состояние, где
самыми важными параметрами являются диффузия между кровью и СМЖ
(проходимость) и поток самой СМЖ, Также результат зависит от возрастной группы и
пола. Помимо данных физиологических переменных, воспалительные процессы
вы зьрваю т увеличение количества белков сыворотки в СМЖ. Кроме того, в СМЖ может
еьщеляться иммуноглобулин, как следствие процесса синтеза антител в рамках
центральной нервной системы (ЦНС) (1, 2) Чтобы получить надежные результаты при
тесте белков СМЖ необходимо использовать методы, обеспечивающие
дифференциацию в рамках пробы белков СМЖ, полученной из сыворотки, и пробы,
полученной при внутриоболочечном синтезе. Здесь помощь при диагностике
обеспечивается подсчетом подходящих коэффициентов концентрации (3). При оценке
альбумин используется в качестве эталонного б«лка для проверки барьерной функции
крови/СМЖ, так как он синтезируется исключительно в печени. Даже в случае
патологий альбумин СМЖ производится исключительно в крови. Это означает, что при
помощи соотношения альбумина С МЖ/сы воротки можно измерять индивидуальную
барьерную функцию как при нормальном состоянии, так и в патолошчоском.
Используя схему частных Райбера (Reiber) и Фелывнхауэра (Felgenhauer) для IgG, IgA
и IgM (4), можно диатостировать нарушения барьерной функции и/или наличие
внутри оболочеч ного синтеза иммуноглобулина при помощи отношения альбумина
СМЖ/сыворотки, Сбор образцов СМЖ и сыворотки следует производить параллельно
и рассматривать в рамках одного анализа, чтобы исключить неточность между
анализами и методологические различия, которые могут исказить соотношение
концентраций Доминантный синтез IgA наблюдается в основном при бактериальных
инфекциях и была выявлена его полезность при диагностировании туберкулезного
менингита или фокальном эмболичесхом энцефалите (1),
Основа методики
Частицы полистирола, покрыть1в антителами, специфичными к человеческому IgA при
смешении с пробами, содержащими человеческий IgA, ап"лютинируют Интенсивность
рассеивания света в нефелометре зависит от содержания IgA в образце и,
следовательно, концентрацию IgA можно определить при помощи стандартов
известной концентрации.
Реагенты
Првдост авл}^емы е мат ериалы :
W Lafex IgA, набор д л я ан а ли за 3 х 35 (/<од ООА1)
N IgA Реагент (N IgA Reagent) 3 х 2 мл
N IgA Стандарт (N IgA Standard) (челов.) 3 х 1 мл
N IgA Дополнительный реагент А (N IgA Supplementary Reagent А) 3 х 1 мл
N IgA Дополнительный реагент В (N IgA Supplementary Reagent В) 1 х 0.5 мл
N IgA Контроль (N IgA Control) (челов.) 3 х 1 мл
Состав
N IgA Реагент состоит из замороженных сухих частиц полистирола, покрытых
антителами (кролика) к IgA. При условии восстановления реагента в соответствии с
данными инструкциями, концентрация суспензии частиц полистирола будет
оптимальной для измерения агглютинации при помощи нефелометров Betiring
N IgA Стандарт (челов.) состоит из смеси сывороток человеческой крови. После
восстановления, концентрация IgA в стандарте соответствует указанной на этикетке.
N IgA Дополнительный реагент А состоит из физио л отческого раствора
пирролидона (макс, 100 г/л) и Твина (Tween) 20 (макс 10 г/л).
N IgA Дополнительный реагент В состоит из раствора животных и человеческих
белков с добавлением пирролидона (ок. 50 г/л).
Совместное использование обоих дополнительнь1Х реагентов используется для
исключения воздействия со стороны ревматоидных факторов.
N IgA Контроль (челов ) состоит из смеси сывороток человеческой крови. После
восстановления, концентрация IgA в контроле соответствует указанной на этикетке.
Консервант во всех реагентах: asvvi натрия (< 1 г/л).
Предупреждения и меры предосторожности
1, Только для in vitro диагностики.
2 С реагентами, содержащими азид натрия, необходимо обращаться с
осторох<ностью : не вдь1хать и не допускать контакта с кожей или слизистыми
оболочками. Азид натрия может образовывать взрывчатые азиды, если содержит
тяжелые металлы, такие как медь или свинец,
3. Каждый образец донорской кроеи, используемый а качестве исходного материала
для стандарта и контроля N IgA (челов.), проверяется на поверхностный антиген
гепатита В , анти-HCV, анти-HIVI и анти-Н1\/2 методами, утвержденными
Управлением по контролю за продуктами и лекарствами (CUJA). Топько образцы с
отрицательными результатами используются для производства. Тем не менее, пока
отсутствие возбудителей инфекции не будет подтверждено, со всеми анализами,
взятыми у человека, следует обращаться с должной осторожностью, соблюдая
рекомендации для работы с биологически опасными веществами (5)
Подготовка реагентов
N IgA Реагент: смешайте лиофилизированное содержимое пробирки с 2 мл
дистиллированной воды и оставьте на 15 минут перед использованием. Ежедневно
перед использованием суспензию следует аккуратно потрясти.
N tgA Стандарт (челов.): Растворите лиофилизированное содержимое пробирки 1 мп
дистиллированной воды. Аккуратно перемешайте. Стандарт готое к использованию
через 15 минут после восстановления.
N IgA Дополнительные реагенты; при помощи пипетки перенесите 25 мл N IgA
Дополнительного реагента В (N IgA Supplementary Reagent В) в одну пробирку с N IgA
Дополнительным реагентом А (N IgA Supplementary Reagent А) и аккуратно
перемешайте.
N IgA Контроль (челов.); Растворите пиофилизированное содержимое пробирки 1 мл
дистиллированной воды . Аккуратно перемешайте. Контроль готов к использованию
через 15 минут после восстановления.
Хранение и устойчивость
При условии хранения при температуре от +2 до +8 “С, все компоненты набора можно
использовать до дат. указанных на этикетках. Восстановленные N IgA Реагент, N IgA
Стандарт (челов.) и N IgA Контроль (челов.) можно использовать не более 1 недели
при условии хранения в плотно закрытом контейнере при температуре от +2 до +8 ”С .
N IgA Дополнительные реагенты можно использовать в течении 1 недели после
смешивания компонентов А и В . Не замораживать повторно. Помутневшие
стандартнь1е и/ипи контропьные сыворотки использовать запрещается.
Необходимые дополнительные материалы, не входящие в комплект поставки
Нефелометры Behring
N Разбавитель (N Diluent), код OUMT
Пробы
Допускается и необходимо использовать самые свежие образцы СМЖ и сыворотки
(хранение не более 8 дней при +2 . +8 “ С). Сыворотка должна бьп-ь полностью
свернувшейся и не содержать каких-либо частиц или следов фибрина после
центрифугирования Образцы СМЖ, содержащие частицы и/или клетки, и высоко
липемические образцы следует очистить перед анализом путем центрифугирования
(10 минут приблизительно при 15 О О О х д).
Методика
Примечания по процедуре:
1. Бопее подробная информация дана в соответствующем руководстве по
нефелометру Behnng
2 Не используйте реагенть( с истекшим сроком годности,
3 Совместно разрешается использовать только компоненты из тестовых наборов с
одинаковым номером партии (кодом).
4. Лиофилизироваиные реагенты запрещается использовать до полного
восстановления (не менее 15 минут после добавления дистиллированной воды).
5. Перед использованием подождите пока образцы сьЕворотки и реактивы достигнут
комнатной температуры (от +15 до +25 °С).
6. Образцы следует анализировать приблизительно при температуре окружающей
среды (максимальное отклонение З'С), так как результаты измерений используются
для создания референсной кривой.
Протокол испытания для нефелометров Behring (тест N a 62)
Подробная информация по порядку анализа приведена в приложении к руководству по
эксплуатации соответствующего Нефелометра Behring (тест t s is 62).
Анализ следует проводить при комнатной температуре (от +15 до +25 °С)
Расчет референсной кривой
Концентрация IgA в N IgA Стандарте (челов ) приведена на этикетке.
Нефелометр Behring при помощи N Разбавителя (N Diluent) автоматически
подготавливает следующие разбавпения N IgA Стандарта (челов ): 1:10, 1:20; 1:40;
1:80; 1:160; 1 320. Растворы должны бьп-ь использованы в течение 4 часов.
Референсная кривая может использоваться в течение одного дня Допустимо
использовать ее в течении большего времени, пока результат для N IgA Контроля
(челов.) лежит в пределах интервала доверия (присвоенное значение ± 20 %). Если
необходимо обработать достаточно большое количество образцов, рекомендуем
подготовить пулы необходимых для анализа реагентов и для них рассчитать
референсную кривую. Если используется новая партия реагента, необходимо
построить новую референсную кривую.
Анализ образцов
Необходимо разбавить образцы СМЖ 1:5 и сыворотки 1:2000 при помощи N
Разбавителя, после чего в течении 4 часов произвести измерения.
Примечание:
Некоторые образцы СМЖ и сыворютки могут содержать достаточно низкую или
высокую концентрацию IgA. которая приведет к появлению результата за пределами
референсной кривой. Если необходима дальнейшая количественная оценка, повторите
выявление с большим или меньшим разбавлением (по необходимости) образца.
Внутренний контроль качества
Контроль качества точности количественного анализа IgA на нефелометрах Behring
следует проводить включая N IgA Контропь (челов.) в каждую серию образцов. В
анализе разбавление N IgA Контроля (челов.) должно быть 1:5. Приписанное значение
для контроля напечатано на этикетке пробирки. Интервал доверия для приписанных
значений составляет ±20 %.
Вычисление результатов анализе
Результаты анализируются автоматически при помощи логистически-логарифмической
(логит-лог) функции,
Офаничения и интерференция
Мутные пробы и содержащиеся в них частицы влияют на результаты анализа. Поэтому
частицы, образовавшиеся в не полностью свернувшейся сыворотке, или из-за
денатурации белков, необходимо удалить центрифугированием перед началом
анализа. Высоко липемические образцы или обраэць!, содержащие частицы, которые
не удается удалить центрифугированием (10 минут приблизительно 15 О О О х д) должны
бьп-ь исключены из исльнаний, В случав, если лабораторные результаты или
клиническая картина указывают на наличие моноклонального IgA у пациента, следует
произвести проверку иммуноэлектрофорезом или иммунофиксацией. Если перед
проведением анализа СМЖ проводились тесты образцов с высоким уровнем IgA.
результать(, попученные для )дА в СМЖ могут быть завышень) из-за условий
проведения (например, грязнь^е кюветы) Таким образом, желательно выявление IgA в
СМЖ проводить перед анализом сыворотки.
Интерпретация лабораторных результатов
При оценке нарушений в СМЖ необходимо определить их природу - первичные
воспалительные процессы или метаболизм. При интерпретации результатов
необходимо тщательное сопоставление клинических и лабораторных результатов.
Эталонный интервал
Верхний предел эталонного интервала для IgA в СМЖ составляет 6 мг/л (2) или 5 мг/л
(IFCC) (6) Полученное значение дано только в качестве ориентировочного,
Референсные значения в строгом смысле существуют только для отношений
CMW cbiBOpOTKH (3, 4).
Для вычисления соотношения IgA в СМЖ/сыворотке количественную оценку IgA в
С ы в о р о тк е также следует проводить при помощи нефелометрии. Также для
определения IgA можно использовать набор для исследования N Иммунной сыворотки
IgA (N Anti serum IgA te,it Kit) (тест № 2)
Особые рабочие характеристики
Чувствительность и диапазон измерений
Набор N Латекс IgA разработан для измерения концентрации IgA в диапазоне
приблизительно от 1,25 до 41,5 мг/п (IFCC) (6) для образцов СМЖ с коэффициентом
разбавления 1:5, и в диапазоне приблизительно от 493 до 16 600 мг/л (IFCC) (6) для
образцов сыворотки, разведенных в отношении 1 : 2 О О О .
Чувствительность теста определяется по нижней границе референсной кривой и
поэтому зависит от концентрации IgA а стандарте. Стандартная граница выявления IgA
в СМЖ составляет 1.25 мг/л (IFCC) (6). В случае, если необходимо исследовать
образцы СМЖ с концентрацией IgA ниже 1,25 мг/л (IFCC). данные образцы следует
обрабатывать в отношении 11 (без разбавления). Что позволит сместить нижнюю
границу выявления IgA в СМЖ до 0,25 мг/п (IFCC) (6)
Специфичность
Тест специфичен для иммуноглобулина класса А (IgA).
--- стр. 15 ---
Точность и воспроизводимость результатов
Точность внутри анализа была определена при измерении различных концентраций
IgA в сыворотке и СМЖ (п=10), с использованием набора N Латекс IgA, и были
вычислены следующие коэффициенты вариации (CV) Точность между анализами
была определена при измерении различных концентраций IgA е сыворотке и СМЖ (е
течении в дней, п=8), с ислользованием набора N Латекс IgA, и были вычислены
следующие коэффициенты вариации (CV).
Точность
Спинномозговая жидкость Сыворотка
Внутри анализа:
л=10/уроеень
Среднее значение (мг/л IFCC) 4,2 10,5 1729
%CV 6,6 3,3 1,8
Между анализами:
п=8/уроввнь
Среднее значение (мг/л IFCC) 2,8 30.3 1924
%CV 10.1 3,5 4,4
Сопоставление методов
В сравнительном исследовании 54 образцов сыворотки, лроведенном при помощи
набора N Latex IgA и коммерческого анализа на IgA, был получен коэффициент
корреляции 0.90, пересечение с осью Y 0,05 и уклон 0,97,
В сравнительном исследовании 67 образцов СМЖ, лроведенном при помощи набора N
Latex IgA и коммерческого анализа на IgA, был получен коэффициент корреляции 0,98,
пересечение с осью Y -0,27 и уклон 1,13, Также, при помощи набора N Latex IgA (х) и
ферментного иммуноанализа (у)*, был произведен сравнительный анализ 26 парных
образцов СМЖ/сыеоротхи, Сопоставительный анализ линейной регрессии отношений
СМЖ/сыворотки, полученных при помощи обоих методов, выявил следующее
соотношение у = 0,94 х +0,22, а коэффициент корреляции г = 0,99.
Примечание:
Значения, ссылающиеся на особые рабочие характеристики анализа, представляют
стандартные значения и не должны приниматься за спецификации набора N Латекса
IgA
Список литературы
1) Н , ReltJer, идиоф го1е1пс11адпо511к, ш : L Ttramas et al.. Proleindiagnostil<, Behringwerl^e
AG, 1891, 140- 167
2) H , Reiber: Aktuelle Methoden der Liquoranalytik. Lab, med. 12,1988.101-109
3) H Reiber: The discrimination between different blood - CSF barrier dysfunctions and
inflammatory reactions of the CNS by a recent evaluation graph for the protein profile of
cerebrospinal fluid J Neurol. 224,1980, 69 - 99
4) H, Reiber, K . Felgenhauer; Protein transfer at the blood cerebrospinal fluid (мп-ier and the
quan-titation of the humoral immune response within the central nervous system, Clinica
Chimica Acta 163.1987, 319 - 328
5) Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, U S Department of Health and
Human Services, Washington 1993 (HHS Publication No. (CDC) 93-8395)
6) Report EUR 15243 EN, Ttie Certification of a Matnx Reference Material for
Immunochemical Measurement of 14 Human Serum Proteins - CRM 470 frorn BCR =
Community Bureau of Reference of the European Communities. Rue Montoyer 75,
Brussels (1993)
Производитель: Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76 35041
Марбург/Германия
www.siemens.com/diaa nostics
--- стр. 16 ---
S I E M E N S
N Дополнительный реагент
(N Supplem entary R eagent L)
Предполагаемое использование и применение
Дополнт-вльный реагент для иммунонефелометрического анализа иммуноглобулина класса Е
(IgE), Ьг-микроглобулина (bj М) и растворимого [звцептсра трансферрина (sTfR) при помощи
реагентов N Latex IgE mono, N Latex bj-Mlcroglobulin и N Latex sTfR на системе BN™.
Смесь обоих дололнитвльных реагентов используется для подавления интерференции со
cTopoHbi ревматоидных факторов и антител человека к антителам мыши (НАМА),
Реактивы
предоставляемые материалы
N Дополнительный реагент L {N Supplementary Reagent L), код OQTD
б X 0,5 мл N Дополнительного реагента L/A (N Supplementary Reagent UA)
2 X 6 мл N Дополнительного реагента \JB (N Supplementary Reagent L/B)
Состав
N Дополнительный реагент UA содержит иммуноглобулин мыши в буферном растворе.
N Дополнительный реагент L/B содержит детергент в буферном солевом растворе.
Консервант в обоих реагентах: азид натрия (< 1 г/л)
Предупреждения и меры предосторожности
1 . Только для in vitro диатостики,
2. С реагентами, содержащими азид натрия, необходимо обращаться с осторожностью: не
вдыхать и не допускать контакта с кожей или слизистыми о^лочками. В случае утилизации
через канализацию, в целях предотвращения образования азидов, необходимо смывать
большим количеством воды. Азид натрия может образовывать взрывчатые азиды, если
содержит тяжелые металлы, такие как медь или свинец
Подготовка реактивов
При помощи пипетки поместите 2,0 мл N Дополнительного реагента L/B в пробирку с N
Дoпoлнитeльньiм реагентом L/A и аккуратно встряхните, чтобы перемешать.
Хранение и устойчивость
N Дополнительный реагент L/A и UB следует хранить при +2,.+0 “С и использовать до даты,
указанной на этикетке. Смесь двух данных реагентов следует использовать в течении А
недель, если после использования раствор хранится в герметичном контейнере при +2 ,+8 °С
или остается в системе BN ProSpec* После открьшания, N Дополнительный реагент L/B
следует использовать в течении 12 недель, если после приготовления раствор хранится в
герметичном контейнере при +2 +8 'С, Замораживание растворов может привести к потере
реакционной способности, и этого следует избегать.
Методика
Процедура
Подробнее процедура тестирования приведена на листах-вкладышах к соответствующим
реагентам, а протокол анализа и руководство по эксплуатации прилагается к системе BN™,
BN™ является торговой маркой Siemens GmbH в США,
* BN РгоЗрес зарегистрированная торговая марка Siemens GmbH в Германии и других
странах.
Производитель: Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76 35041
Марбург/Германия
www.siemens.com/diaqno8tlcs