Набор реагентов для обнаружения ДНК возбудителей протозойных инфекций (Lamblia Intestinalis Giardia, Blastocystis hominis, Dientamoeba fragilis, Isospora belli, Cryptosporidium parvum, Entamoeba hystolyica) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в образцах биоматериала человека "Прото-скрин" по ТУ 9398-004-53300432-2013 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас 1 закупка, где это изделие полностью проходит по требованиям хотя бы в одной позиции.
| Закупка | Окончание подачи | Нач. цена |
|---|---|---|
| Ц-9715_Закупка медицинских изделий
№ 0432200000826005670 · ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПРЕДПРИЯТИЕ НИЖЕГОРОДСКОЙ ОБЛАСТИ "НИЖЕГОРОДСКАЯ ОБЛАСТНАЯ ФАРМАЦИЯ" · Нижегородская область |
11.11.2026 | 542 080 ₽ |
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- ООО «АльфаЛаб» «УТВЕРЖДАЮ» ктор ООО «АльфаЛаб» М.А.Суворова « / / » 2013г. ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для обнаружения ДНК возбудителей протозойных инфекций (Lamblia Intestinalis Giardia, Blastocystis hominis, Dientamoeba fragilis, Isospora belli, Cryptosporidium parvum, Entamoeba hystolyica) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в образцах биоматериала человека «Прото-скрин» ВНИМАНИЕ! Изучите инструкцию перед началом работы У --- стр. 2 --- 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор «Прото-скрин» предназначен для качественного обнаружения ДНК простейших (Lamblia Intestinalis Giardia, Blastocystis hominis, Dientamoeba fragilis, Isospora belli, Cryptosporidium parvum, Entamoeba hystolyica). Набор реагентов предназначен для выявления наиболее часто встречающихся у человека протозойных инвазий (лямблиоза, амебиаза, бластоцистной инвазии, криптоспоридиоза, изоспороза). Перечисленные инфекции имеют общие пзо'и заражения и могут иметь сходные клинические проявления (нарушения функций желудочно-кишечного тракта, аллергические реакции, повышенная утомляемость и др.), что обуславливает необходимость одновременного скрининга на наличие указанных возбудителей и проведения дифференциальной диагностики, в особенности у пациентов с иммунодефицитными состояниями. Материалом для исследования являются фекальные образцы. Для выявления возбудителей перечисленных заболеваний используется амплификация специфических участков ДНК методом ПЦР ■ с применением специфических олигонуклеотидов и меченых олигонуклеотидных зондов Taqman. В присутствии фермента Taq-полимеразы происходит гибридизация олигонуклеотидов и зонда с комплементарным участком ДНК-мишени. Образование специфического продукта амплификации сопровождается отщеплением флуоресцентной метки (благодаря наличию у Taq-полимеразы 5’- экзонуклеазной активности) и появлению детектируемого флуоресцентного сигнала, регистрация которого проводится в режиме реального времени. Интенсивность флуоресценции прямо пропорциональна количеству специфических продуктов амплификации и, следовательно, нарастает с каждым последующим циклом. Набор предназначен для использования на амплификаторах детектирующих для постановки полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (MiniOpticon, BioRad; ДТ-96 или другие амплификаторы с аналогичными техническими характеристиками). Набор (каждый из вариантов) рассчитан на проведение анализа 50 образцов, включая положительные контрольные образцы ДНК простейших и отрицательные контрольные образцы. Область применения набора - клиническая лабораторная диагностика, научные исследования. Только для исследований in vitro. 2. ВАРИАНТЫ И ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ. «Прото-скрин» - набор для качественного обнаружения ДНК простейших (Lamblia Intestinalis Giardia, Blastocystis hominis. Dientamoeba fragilis, Isospora belli, Cryptosporidium parvum. Entamoeba hystolyica) в фекальных образцах методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией результатов амплификации в режиме реального времени. Выпускается в двух комплектациях, различающихся степенью готовности компонентов к постановке амплификации: а) комплект реагентов для амплификации (стрипованные пробирки 0,2 мл - раскапанный вариант). б) комплект реагентов для амплификации (нераскапанный вариант), 3. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 3.1. Принцип метода --- стр. 3 --- Анализ образцов включает следующие этапы: 1. Пробоподготовка (выделение ДНК из образцов биологического материала). 2. Постановка реакции ПЦР-амплификации. 3. Детекция продуктов амплификации. 3.2. Состав набора: Сокращенные названия амплификационных смесей: «Lamb» - Lamblia Intestinalis Giardia, «ВЬ» - Blastocystis hominis, «AmFr» - Dientamoeba fragilis, «IsoB» - Isospora belli, «Ср» - Cryptosporidium parvum, «EnHi» - Entamoeba histolytica, «ВК» - внутренний контроль. «Прото-скрин» - набор для качественного обнаружения ДНК простейших включает: - амплификационную смесь «ПЦР-смесь «Lamb»» - 2 пробирки в каждом стрипе по 10 мкл, всего 25 стрипов - раскапанный вариант, 1 пробирка 520 мкл - нераскапанный вариант. - амплификационную смесь «ПЦР-смесь «Bh»» - 2 пробирки в каждом стрипе по 10 мкл, всего 25 стрипов - раскапанный вариант, 1 пробирка 520 мкл - нераскапанный вариант. - амплификационную смесь «ПЦР-смесь «AmFr/IsoB»» - 2 пробирки в каждом стрипе по 10 мкл, всего 25 стрипов - раскапанный вариант, 1 пробирка 520 мкл - нераскапанный вариант. - амплификационную смесь «ПЦР-смесь «Ср/EnHi»»- 2 пробирки в каждом стрипе по 10 мкл, всего 25 стрипов - раскапанный вариант, 1 пробирка 520 мкл - нераскапанный вариант. - амплификационную смесь «ПЦР-смесь «ВК»» для обнаружения бактериальной ДНК, предназначенную для оценки качества выделения тотальной ДНК в анализируемых образцах, всего 7 стрипов - раскапанный вариант, 1 пробирка 520 мкл - нераскапанный вариант. - раствор Taq-полимеразы - 5 пробирок по 520 мкл - комплект положительных контрольных образцов (ПКО) - 5 пробирок по 30 мкл - отрицательный контрольный образец - 1 пробирка 150 мкл i 4. КЛИНИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ 4.1. Диагностическая чувствительность составляет 95,0% для каждого из показателей, определяемых с применением набора «Прото-скрин». В качестве положительных образцов для определения диагностической чувствительности набора в отношении ДНК Lamblia Intestinalis Giardia, Blastocystis hominis. Dientamoeba fragilis, Isospora belli, Cryptosporidium parvum. Entamoeba histolytica были исследованы фекальные образцы, содержащие цисты указанных простейших по данным микроскопического анализа. 4.2. Диагностическая специфичность анализа при постановке тестов с применением набора «Прото-скрин» доказана методом секвенирования продуктов амплификации и подтверждена отсутствием перекрестных реакций между выявляемыми показателями. 5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Приказ М3 России от 06.06.2012 № 4н). 4.2. Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными. --- стр. 5 --- Материал доставляют в лабораторию в течение суток, хранить образцы при температуре 2-8 °С . 7.2. Предварительная обработка клинического материала не требуется. 7.3. Выделение ДНК из фекальных образцов и ректальных мазков ДНК желательно выделять из жидкого материала. Если образец твердый (кал), небольшое количество материала (не более 100 мг) ресуспендировать в транспортной среде или физиологическом растворе. Также возможно выделение ДНК из твердого материала. В этом случае небольшое количество образца можно перенести прямо в пробирку на кончике наконечника дозатора (примерное количество вносимого образца показано на рисунке). Внимание; использование избытка материала для выделения может привести к ингибированию ПНР. 8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА 8.1. Подготовка ПЦР (раскапанный вариант) 1. В штатив поставить необходимое количество стрипов с амплификационными смесями из расчета - 1 стрип на 2 пробы плюс один стрип для положительного и отрицательного контролей, а также необходимое количество стрипов для амплификационной смеси «ВК» (при расчете необходимо учитывать пробирки для положительного и отрицательного контролей). Расположение смесей в Стрипе для набора «Прото-скрин» см. в таблице 1. 2. В каждую пробирку внести по 10 мкл тшательно перемешанного раствора Taq- полимеразы (не повреждая слой воска), закрыть пробирки. Таблица 1. Порядок расположения смесей для амплификации в стрипах набора «Прото- № пробирки Название смеси Внешний вид 1 ПЦР-смесь «Lamb» Окрашенная жидкость 2 ПЦР-смесь «ВЬ» Прозрачная бесцветная жидкость 3 ПЦР-смесь «AmFr/IsoB» Прозрачная бесцветная жидкость 4 ПЦР-смесь «Ср/ЕпН1» Прозрачная бесцветная жидкость 5 ПЦР-смесь «Lamb» Окрашенная жидкость 6 ПЦР-смесь «ВЬ» Прозрачная бесцветная жидкость 7 ПЦР-смесь «AmFr/IsoB» Прозрачная или светло-розовая жидкость 8 ПЦР-смесь «Ср/ЕпН1» Прозрачная или светло-розовая жидкость 8.2. Подготовка ПЦР (нераскапанный вариант) 1. В штатив поставить необходимое количество пробирок в соответствии с количеством проб, и две пробирки для положительного и отрицательного контролей для амплификационной смеси каждой специфичности (ПЦР-смесь «Lamb», ПЦР-смесь «ВЬ», ПЦР-смесь «AmFr/IsoB», ПЦР-смесь «Ср/ЕпН1», ПЦР- смесь «ВК»). 2. В каждую пробирку внести по 10 мкл соответствуюшей амплификационной смеси 3. В каждую пробирку внести по 10 мкл тшательно перемешанного раствора Taq- полимеразы. 8.3. Постановка ПЦР (аналогично для раскапанного и нераскапанного вариантов) 1. В подготовленные пробирки внести по 5 мкл анализируемых проб. --- стр. 6 --- Для В контрольные пробирки внести по 5 мкл положительных контрольных образцов соответствующей специфичности или 5 мкл ОКО. Установить все пробирки в блок детектирующего амплификатора. Запустить программу амплификации в соответствии с параметрами, указанными в таблице 3. внесения в пробирки реагентов, проб ДНК и контрольных образцов используются одноразовые наконечники с фильтрами. Таблица 3. Программа амплификации Температура Время Количество циклов 94°С 5 мин 1 94°С 5 сек 4558°С 6 сек 72°С 10 сек 10°С - хранение 8.4. Регистрация результатов Детекция продуктов амплификации. Для анализа результатов тестов необходимо использовать: - канал РАМ для обнаружения ДНК Lamblia Intestinalis Giardia, Blastocystis hominis, Dientamoeba fragilis, Cryptosporidium parvum, a также бактериальной ДНК (используется в качестве внутреннего контроля качества выделения ДНК из фекальных образцов); - канал HEX для обнаружения ДНК Isospora belli, Entamoeba histolytica. Флуоресцентная детекция продуктов амплификации осуществляется в режиме реального времени с использованием детектирующего амплификатора. Учет результатов следует начинать с результатов амплификации положительных и отрицательных контрольных образцов и внутреннего контроля. 9. АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ Анализ результатов проводят с помощью программного обеспечения используемого прибора для проведения ПЦР с детекцией в режиме реального времени. Результаты интерпретируются на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой флуоресценции на канале FAM/HEX с установленной на соответствующем уровне пороговой линией, что определяет наличие (или отсутствие) для данной пробы значения порогового цикла Ct. Принцип интерпретации: Результаты анализа не учитываются, если: - Во время прохождения реакции детектирующий амплификатор не регистрирует экспоненциальный рост уровня флуоресценции в пробирке с положительными контрольными образцами; в данной ситуации необходимо повторное исследование всех образцов. - В пробирках с ВК не регистрируется экспоненциальный рост уровня флуоресценции или значение порогового цикла Ct превышает допустимое значение, указанное в паспорте набора; в этой ситуации необходим повторный анализ всех образцов, включающий стадию выделения ДНК. - В пробирке с ОКО регистрируется экспоненциальный рост уровня флуоресценции. Необходимо принятие мер для устранения контаминации в ПЦР-лаборатории и повторное исследование всех образцов. --- стр. 7 --- Результаты анализа учитываются, если - Во время прохождения амплификации регистрируется экспоненциальный рост уровня флуоресценции в пробирке с положительными контрольными образцами и значение пороговых циклов Ct для каждого из образцов не превышает допустимых значений, указанных в паспорте набора; - Во время прохождения амплификации отсутствует флуоресцентный сигнал в пробирке с отрицательным контрольным образцом или не превышает допустимого значения, указанного в паспорте набора; - Во время прохождения амплификации регистрируется экспоненциальный рост уровня флуоресценции в пробирке с внутренними контрольными образцами и значение порогового цикла Ct для каждого из образцов не превышает допустимого значения, указанного в паспорте набора. - Образец положителен на наличие ДНК простейших (Lamblia Intestinalis Giardia, Blastocystis hominis. Dientamoeba fragilis, Isospora belli, Cryptosporidium parvum. Entamoeba histolytica), если для данной пробы определено значение порогового цикла, причем кривая флуоресценции данной пробы должна пересекать пороговую линию на участке экпоненциального роста флуоресценции. - Образец отрицателен на наличие ДНК простейших (Lamblia Intestinalis Giardia, Blastocystis hominis. Dientamoeba fragilis, Isospora belli, Cryptosporidium parvum. Entamoeba histolytica), если для данной пробы отсутствует (не определяется) значение порогового цикла (кривая флуоресценции данной пробы не пересекает пороговую линию). 10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА Для транспортировки, хранения и работы с наборами реагентов необходимо соблюдать температурный режим (2-8) °С. Набор реагентов пригоден для применения в течение 6 месяцев с даты изготовления. По вопросам, касаюгцимся качества набора, следует обрагцаться в ООО «АльфаЛаб», Санкт Петербург, ул. Академика Павло^14а, тел/факс 8(812)385-00-55 Разработчик Людыно В.И. «СОГЛАСОВАНО» Зав. кафедрой клинической