Набор реагентов для выявления и идентификации РНК вирусов денге и желтой лихорадки методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ОМ-Скрин-денге/ЖЛ-РВ) по ТУ 9398-002-46395995-2013 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- синтол г. Москва, ул. Тимирязевская, д.42, к. 352 Тел/факс: (495) 977-7455 Тел.: (495) 984-69-93 e-mail; syntol@lab.ac.ru www.syntol.ru ПАСПОРТ КАЧЕСТВА «ОМ-Скрин-денге/ЖЛ-РВ» «НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ РНК ВИРУСОВ ДЕНГЕ И ЖЕЛТОЙ ЛИХОРАДКИ МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ (ОМ-Скрин-денге/ЖЛ-РВ)» Серия Наборов в серии_ ш т. Дата изготовления Пункт ТУ Наименование показателя Требования ТУ 9398-002-46395995-2013 Результаты контроля (соответствует/не соответствует/значение полученной величины (по применимости)) 1.3 Комплектность, состав Комплект включает набор реагентов, инструкцию по применению и паспорт Состав: 6 стрипов по 8 микропробирок объемом 0,2 мл, две пробирки объемом 1,5 мл, четыре пробирки объемом 0,5 мл Соответствует Комплект включает набор реагентов, инструкцию по применению и паспорт Состав; 6 стрипов по 8 микропробирок объемом 0,2 мл, две пробирки объемом 1,5 мл. четыре пробирки объемом 0,5 мл 1.5, 1.6 Упаковка и маркировка Полипропиленовые пробирки 0,2 мл (в Стрипах), 0,5 и 1,5 мл (с резьбовой крышкой), пакеты типа Zip-lock, этикетки из клеящей бумаги Соответствует Полипропиленовые пробирки 0,2 мл (в стрипах), 0,5 и 1,5 мл (с резьбовой крышкой), пакеты типа Zip-lock, этикетки из клеящей бумаги Реакционная смесь в стрипованных микропробирках, РС-денге/ЖЛ* Сухое вещество белого цвета Соответствует Сухое вещество белого цвета 1.2, табл. 1, п. 1,2 Разбавитель, РБ** Прозрачная бесцветная жидкость, pH 8,8 Соответствует Прозрачная бесцветная жидкость, pH Внутренний положительный контроль выделения, ВПК-В-РНК Сухое вещество белого цвета Соответствует Сухое вещество белого цвега Положительный контрольный образец, ПКО-денге/ЖЛ Сухое вещество белого цвета Соответствует Сухое вещество белого цвета Раствор для разбавления ПКО, ОКО Прозрачная бесцветная жидкость, pH 8,0 Соответствует * Прозрачная бесцветная жидкость, pH Положительный результат ОТ-ПЦР-РВ, Регистрация роста сигнала с любой величиной порогового цикла Ct в пробирках с ПКО- денге/ЖЛ по каналам R60 и ROX. Регистрация роста сигнала с Ct менее 37,0 в пробирках е ПКО-денге/ЖЛ по каналам РАМ и Су5 Соответствует Зарегистрирован рост сигнала в пробирках с ПКО-денге/ЖЛ по каналам R6G и ROX. Зарегистрирован рост сигнала в пробирках с ПКО-денге/ЖЛ по каналам FAM и Су5 с Ct менее 37,0 1.2, табл. 1 , п. 3 Отрицательный результат ОТ-ПЦР-РВ Регистрация роста сигнала с Ct менее 37,0 в пробирках с ОКО по каналам РАМ и Су5. Отсутствие регистрации роста сигнала в пробирках с ОКО по каналам R6G и ROX Соответствует Зарегистрирован рост сигнала в пробирках с ОКО по каналам FAM и Су5 е Ct менее 37,0. Не зарегистрирован рост сигнала в пробирках с ОКО по каналам R6G и ROX Аналитическая чувствительность Регистрация роста сигнала с любой величиной порогового цикла Ct в пробирках с СКО-ЖЛ по каналу ROX; СКО-Денге по каналу R6G. Регистрация роста сигнала с Cl менее 37,0 во всех пробирках по каналам РАМ и Су5 Соответствует Зарегистрирован рост сигнала в пробирках с СКО-ЖЛ по каналу ROX; СКО-Денге по каналу R6G. Зарегистрирован рост сигнала во всех пробирках по каналам FAM и Су5 с Ct менее 37,0 Пригиечания: ♦Содержит дезоксинуклеозидтрифосфаты, специфические праймеры, флуоресцентные зонды, Taq-полимеразу, MMLV- ревертазу, РНК внутреннего положительного контроля, трегалозу для проведения ОТ-ПЦР-РВ. ♦♦Содержит ПЦР буфер (КС1, ТрисНС! (pH 8,8), MgClj, глицерол). Заключение ОБТК: «Набор реагентов для выявления и идентификации РНК вирусов денге и желтой лихорадки методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ОМ-Скрин-денге/ЖЛ-РВ)» серии _________по своим показателям соответствует требованиям ТУ 9398-002-46395995-2013. Хранить в сухом, защищенном от света месте при температуре от плюс 2 до плюс 8 °С. Суммарный срок хранения при температуре от плюс 9 до плюс 20 °С не должен преаш щ У 4 суток в течение срока годности набора реагентов. Транспортировать крытым транспортом (автом1^^^^^жкя^знодорожным либо воздушным) при температуре от плюс 2 до плюс 8 °С. Допускается транспортированнййрм cyroK'Iijftqi^epaType до 20 ® С . Ж Г я /£ИНтол\^, ||S Y N T O L y » | Годен до:____________ Начальник отдела ОБТК Н.Ю. Минакова Company Паспорт №_ « » 201 г. --- стр. 2 --- УТВЕРЖДАЮ Г енеральн ЗАО «С «09» на узубов ИНСТРУКЦИЯ по применению «Набора реагентов для выявления и идентификации РНК вирусов денге и желтой лихорадки методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ОМ-Скрин-денге/ЖЛ-РВ)» 2015 Вер. 071115 --- стр. 3 --- 1 НАЗНАЧЕНИЕ 1.1 Полное название набора «Набор реагентов для выявления и идентификации РНК вирусов денге и желтой лихорадки методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ОМ-Скрин-денге/ЖЛ-РВ)». 1.2 Предназначение набора и его диагностическая роль Набор реагентов «ОМ-Скрин-денге/ЖЛ-РВ» предназначен для качественного определения (скрининг, мониторинг) РНК вирусов денге и желтой лихорадки (ЖЛ) в препаратах НК, выделенных из проб: объектов окружающей среды, насекомых, клинических образцов, вируссодержащей суспензии, биопсийного и аутопсийного материала. Диагностическая роль набора реагентов заключается в возможности его использования в поддержке диагностики специфических патологий (лихорадки денге и желтой лихорадки) при исследовании материала от больного (подозрительного на заболевание) и индикации патогенных биологических агентов (ПБА), в объектах окружающей среды; как ускоренного предварительного теста при выполнении культурального и биологического методов исследования и идентификации подозрительных культур; для эпидемиологического мониторинга. 1.3 Область применения набора Область применения набора - клиническая лабораторная диагностика ли хорадки денге и желтой лихорадки, специфическая индикация патогенных био логических агентов, эпидемиологический мониторинг, научные исследования. Набор может быть использован в учреждениях медицины и здравоохранения, вирусологических лабораториях Центров гигиены и эпидемиологии Роспотреб надзора, в эпидемиологических службах для расщифровки вспыщек арбовирус- ных инфекций, а также в стационарных и мобильных лабораториях специали зированных учреждений других министерств и ведомств, в том числе Мини стерства Обороны. --- стр. 4 --- 2 ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА Компоненты набора являются одноразовыми. Набор реагентов «ОМ-Скрин-денге/ЖЛ-РВ» не требует технического обслуживания и калибровки. 2.1 Состав набора Набор реагентов состоит из 5 реагентов. № Состав комплекта Описание Объем Кол-во 1. Реакционная смесь в стрипованных микропробирках, РС-денге/ЖЛ сухое вепдество белого цвета 1 мг 6 стрипов по 8 микропробирок 2. Разбавитель, РБ прозрачная бесцветная жидкость 0,8 мл 1 пробирка 3. Положительный контрольный образец, ПКО-денге/ЖЛ сухое вещество белого цвета 2 мг 3 пробирки 4. Раствор для разбавления ПКО, ОКО прозрачная бесцветная жидкость 1 мл 1 пробирка 5. Внутренний положительный контроль выделения, ВПК-В-РНК сухое вещество белого цвета 2 мг 1 пробирка Реакционная смесь в стрипованных микропробирках, РС-денге/ЖЛ, расфасована в микропробирки в стрипах (по 8 штук в каждом) объемом 0,2 мл, упакованные в непрозрачный полиэтиленовый пакет Zip-Lock размером 9x12 см, состав: эквимолярная смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов, десять олигонуклеотидных праймеров, шесть флуоресцентных зондов, фермент Taq ДНК-полимераза; фермент MMLV-ревертаза; синтетическая РНК ВПК, трегалоза. Разбавитель, РБ, расфасован в пробирку из полипропилена объемом 1,5 мл с завинчивающейся крышкой, упакованную в полиэтиленовый пакет Zip- Lock размером 4x7 см, состав: ПЦР-буфер; хлорид магния; глицерол; вода для ПЦР. Раствор для разбавления ПКО, ОКО, расфасован в пробирку из полипро пилена объемом 1,5 мл с завинчивающейся крышкой, упакованную в полиэти леновый пакет Zip-Lock размером 4x7 см, состав: ТЕ буфер. --- стр. 5 --- V . Положительный контрольный образец, ПКО-денге/ЖЛ, расфасован в пробирку из полипропилена объемом 0,5 мл с завинчивающейся крышкой, упа кованную в полиэтиленовый пакет Zip-Lock размером 6x7 см, состав; смесь синтетических РНК, полученных с помощью in vitro транскрипции с рекомби нантных плазмид pGem-T с встроенными специфическими фрагментами НК 5 ’ UTR и гена капсида вируса денге и 5 ’ UTR и гена капсида вируса желтой ли хорадки. Внутренний положительный контроль выделения, ВПК-В-РНК, расфасо ван в пробирку из полипропилена объемом 0,5 мл с завинчивающейся крыш кой, упакованную в полиэтиленовый пакет Zip-Lock размером 4x7 см, состав: синтетическая РНК, полученная с помощью ш vitro транскрипции с рекомби нантной плазмиды pGem-T со встроенным специфическим фрагментом ДНК. Примечание; Ингредиентами, которые могут влиять на измерения, явля ются праймеры и флуоресцентные зонды, основной характеристикой которых для конечного пользователя является температура отжига Та, составляющая 59 °С. Данная характеристика реализуется с помощью температурно временного режима амплификации, следовательно, его соблюдение является строго обязательным. 2.2 Количество анализируемых проб Набор реагентов рассчитан на 48 определений, включая контрольные образцы. 2.3 Метод исследования Обнаружение фрагментов нуклеиновых кислот возбудителей опасных вирусных инфекций основано на использовании метода мультиплексной одностадийной реакции обратной транскрипции, совмещенной с полимеразной цепной реакцией в реальном времени (ОТ-ПЦР-РВ) в одной микропробирке. При амплификации с помощью ОТ-ПЦР-РВ используют четыре олигонуклеотидных праймера, фланкирующих фрагмент генома вируса денге, два олигонуклеотидных праймера, фланкирующих фрагмент генома вируса желтой лихорадки, два олигонуклеотидных праймера, фланкирующих нуклеиновые кислоты (НК) внутреннего положительного контроля ОТ-ПЦР- РВ, два олигонуклеотидных праймера, фланкирующих НК внутреннего --- стр. 6 --- положительного контроля выделения, а также шесть флуоресцентных зондов. Процесс амплификации специфичных фрагментов заключается в повторяющихся циклах температурной денатурации ДНК, отжига праймеров с комплементарными последовательностями и последующей достройке полинуклеотидных цепей с этих праймеров ДНК-полимеразой с детекцией результатов в режиме реального времени. Постановка ОТ-ПЦР-РВ осуществляется на специальных приборах, например, «АНК-32 (32М, 48)» (ИАП РАН, г. Санкт-Петербург), СРХ-96 (В1оКа(1, США), или эквивалентных по характеристикам (см. п. 5.1 настоящей инструкции). Набор реагентов «ОМ-Скрин-денге/ЖЛ-РВ» реализует преимущества мультиплексной ОТ-ПЦР-РВ в части одновременного выявления в одной пробе РНК двух вирусов, а также двух контролей анализа по разным каналам детек ции флуоресценции. Сигналы флуоресценции регистрируются независимо друг от друга по следующим канал-ам: РАМ - внутренний положительный контроль выделения РНК; КбС - вирус денге; КОХ - вирус желтой лихорадки; Су5 - внутренний положительный контроль ОТ-ПЦР-РВ. Положительный результат теста означает, что исследуемый материал со держит РНК вирусов денге и/или желтой лихорадки. Отрицательный результат теста означает, что исследуемый материал не содержит РНК вирусов денге и/или желтой лихорадки. 2.3 Ограничения метода В инфицированном материале РНК вирусов может быть не обнаружена по причине ингибирования ОТ-ПЦР-РВ и/или недостаточной эффективности выделения нуклеиновых кислот. Для достижения показателей аналитической чувствительности используемый набор для выделения должен обеспечивать эффективность выделения НК на уровне не менее 20 %. Причиной получения ложноположительного результата является конта минация на этапе выделения НК либо проведения реакции ОТ-ПЦР-РВ. Лож ноположительный результат выявляется с помощью отрицательных контроль ных образцов выделения и ОТ-ПЦР-РВ (п. 8.3 настоящей инструкции). --- стр. 7 --- 4 i Причиной получения ложноотрицательного результата является ингиби рование ОТ-ПЦР-РВ и/или недостаточная эффективность выделения НК. Лож ноотрицательный результат выявляется с помощью внутренних положительных контрольных образцов выделения РНК (ВПК-В-РЬЖ) и ОТ-ПЦР-РВ (ВПК) (п. 8.3 настоящей инструкции). И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ3 АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1 АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ Исследования аналитических характеристик набора проведены на базах ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России (г. Сергиев Посад Московской области) и ЗАО Синтол (г. Москва) в рамках исследования эффективности набора и проведения технических испытаний. 3.1.1 Чувствительность Чувствительность - не более 1,0-10^ копий РНК в 1 миллилитре пробы (копий мл'^). Данный показатель достигается при условии объема аликвоты исходного материала (пробы) не менее 100 мкл. 3.1.2 Специфичность Специфичность - ложноположительные и ложноотрицательные результаты при анализе образцов НК вирусов лихорадки денге и желтой лихорадки (6 заведомо положительных образцов), а также НК вирусов Марбург, Эбола, Ласса, Мачупо, Хунин, ВЭЛ, Западного Нила, лихорадки долины Рифт, клещевого и японского энцефалитов, ККГЛ, ТОРС; бактериях Bacillus anthracis, Yersinia pestis, Coxiella burnetii, ДНК человека и грызунов, культур клеток Vero, GMK и ВНК, а также РКЭ (24 заведомо отрицательных образца) отсутствовали. При проведении исследований наблюдалась полная внутрипостановочная, межпостановочная и межсерийная воспроизводимость для всех положительных образцов. --- стр. 8 --- ^ 1 3.2 ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ Клинические исследования набора проведены на базе ФБУН ГНЦ ВБ Вектор (р.п. Кольцово, Новосибирской области). Результаты приведены в приложении к инструкции по применению. 3.2.1 Диагностическая чувствительность Диагностическая чувствительность МИ «Набор реагентов для выявле ния и идентификации РНК вирусов денге и желтой лихорадки методом поли меразной цепной реакции в реальном времени (ОМ-Скрин-денге/ЖЛ-РВ)» при исследовании 640 положительных проб (320 проб содержащих вирус денге 1-4 с концентрацией 1 х 10^ копий/мл и 160 проб содержащих вирус желтой лихо- л радки с концентрацией 1x10 копий/мл, а также 160 мультиплексных проб, со держащих вирусы денге и желтой лихорадки с концентрацией 1x10^ копий/мл) положительный результат получен в 640 случаях 3.2.2 Диагностическая специфичность Диагностическая специфичность - при исследовании 64 отрицательных образцов, содержащих гетерологичные микроорганизмы (вирусы клещевого энцефалита, японского энцефалита. Западного Нила, лихорадки долины Рифт, венесуэльского энцефаломиелита лошадей, Ласса, Мачупо, Эбола, Марбург) в п концентрации не менее 1,0-10 копий/мл, отрицательный ответ в ПЦР получен во всех 64 случаях. При проведении исследований наблюдалась полная внутрипостановочная, межпостановочная и межсерийная воспроизводимость для всех положительных образцов. Диагностические характеристики применительно к каждому из аналитов, а также каждому из типов образцов материала отдельно приведены в Приложении. 7 --- стр. 9 --- й ) 4 МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ Работу с материалом, зараженным или подозрительным на зараженность вирусами лихорадки денге и желтой лихорадки проводят в соответствии с требованиями санитарно-эпидемиологических правил по безопасности работы с микроорганизмами 1-П групп патогенности (опасности) (СП 1.3.3118-13), методических указаний «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы 1-1У групп патогенности» (МУ 1.3.2569-09), МУ 3.1.3012-12 «Сбор, учет и подготовка к лабораторному исследованию кровососущих членистоногих в природных очагах опасных инфекционных болезней» Необходимо одновременно обеспечить и соблюдать персоналом правила биологической безопасности и требования к организации и проведению данных работ с целью предотвращения контаминации нуклеиновыми кислотами и (или) 1 * ампликонами исследуемых проб помещений и оборудования. Потенциальный риск применения набора - класс 3 (п. 9 приложения № 2 к приказу Минздрава России от 06.06.2012 № 4н). 4.1 Необходимость обучения персонала Для выполнения анализа с помощью данного набора реагентов необхо димо участие специалиста с высшим медицинским образованием, прошедшего обучение на лицензированных курсах специализации по работе с ПБА 1-П групп патогенности и по ПЦР-диагностике, а также лаборанта со средним специальным медицинским образованием. Персонал должен иметь навыки ра боты с биохимическими реактивами и современным лабораторным оборудова нием. 4.2 Меры безопасности, позволяющие предохранять оператора При работе с набором соблюдать требования ГОСТ Р 52905-2007 «Лабо ратории медицинские. Требования безопасности». Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными, вредного влияния на организм оператора не оказывают. При работе с набором следует соблюдать обычные меры предосторожности для лабораторий: 8 --- стр. 10 --- ^ 1 - пользоваться лабораторными перчатками и надевать лабораторные ха латы; - не принимать пищу, пить или курить в лабораторных помещениях; - после работы с пробами и реактивами следует тщательно вымыть руки водой с мылом. Избегать контакта с кожей, глазами и слизистыми оболочками, при попа дании на них компонентов набора промыть большим количеством воды. При приеме внутрь компонентов набора реагентов за медицинской помощью следу ет обратиться немедленно. 4.3 Необходимые меры предосторожности в отношении влияния фи зических факторов При использовании набора реагентов нет необходимости принимать ме ры предосторожности в отношении влияния магнитных полей, внешних элек трических воздействий, электростатических разрядов, давления или перепадов Ф давления, перегрузки, источников термического воспламенения. 4.4 Необходимые меры предосторожности против специальных рис ков При использовании набора реагентов нет необходимости принимать ме ры предосторожности против любых специальных рисков при использовании или реализации, поскольку в состав изделия не входят вещества человеческого или животного происхождения с учетом их потенциальной инфекционной при роды. 5 ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РА БОТЕ С НАБОРОМ 5.1 Рекомендуемое измерительное оборудование Прибор для ПЦР-РВ - зарегистрированный в РФ как медицинское изделие и имеющий каналы детекции, соответствующие красителям РАМ, КбО, КОХ, Су5 (либо их спектральным аналогам) со следующими характеристиками - ^м акс.возб/^м акс.эм . (№1 - 490нм/520нм, №2 - 525нм/550нм, №3 - 550нм/580нм, №4 - 630нм/665нм), например, «АНК-32 (32М, 48)», СРХ-96. --- стр. 11 --- щ 5.2 Указания о необходимости использования специального оборудования Работу с набором следует проводить в настольном боксе с бактерицидной лампой (например, БАВ-ПЦР-«Ламинар-С», ЗАО «Ламинарные системы», г. Миасс, Россия), установленном в рабочей зоне 3 (МУ 1.3.2569-09). 5.3 Дозирующие устройства Набор автоматических пипеток переменного объема на 0,5-10 мкл, 2-20 мкл, 10-100 мкл и на 20-200 мкл; штатив-карусель для данных пипеток. 5.4 Другое используемое оборудование Микроцентрифуга-вортекс (например, «Циклотемп-90 Ь>); микроцентрифуга для стрипов (например, «Циклотемп-903»); штатив типа «НоРгееге»; штативы для наконечников, микропробирок на 0,5 и 1,5 мл; штатив для работы со стрипами (кат. номер СТ-15, ЗАО Синтол); холодильник на 2-8 °С. 5.5 Лабораторная посуда Емкости для сброса наконечников и микропробирок. 5.6 Материалы и реагенты, не входящие в состав набора Одноразовые наконечники для пипеток переменного объема с аэрозольным барьером до 10 мкл; одноразовые наконечники для пипеток переменного объема с аэрозольным барьером до 20 мкл; одноразовые наконечники для пипеток переменного объема с аэрозольным барьером до 200 мкл; набор реагентов для выделения ДНК/РЖ; ТЕ-буфер (кат. номер В-014, ЗАО «Синтол»); отдельный халат и одноразовые медицинские перчатки; комплект средств для обработки рабочего места. 10 --- стр. 14 --- Клинический материал утилизируют по классу В, как чрезвычайно эпидемиологически опасные отходы в соответствии с Санитарно- эпидемиологическими требованиями к обращению с медицинскими отходами (СанПиН 2.1.7.2790-10). 7 ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА 7Л Процедура приготовления контрольных образцов В пробирку с сухим содержимым ПКО-денге/ЖЛ добавляют 200 мкл ОКО, перемешивают на вортексе до полного растворения, центрифугируют 5 секунд при 3000 об'мин''. Хранение разведенных препаратов ПКО-денге/ЖЛ допускается при температуре не выше минус 20 °С не более месяца. 7.2 Разведение препарата РНК (при необходимости) Для выявления и идентификации РНК вирусов а денге и желтой лихорадки необходимо внести в реакцию 20 мкл препарата РНК. В случае необходимости, раствор препарата РНК разводят с помощью ТЕ- буфера (кат. номер В-014, ЗАО «Синтол»). 8 ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА Анализ проводят в рабочей зоне 3, не подразумевающей контакта с био материалом (МУ 1.3.2569-09). 8.1 Расход каждого реагента (минимальный) На одно определение расходуются: - одна микропробирка с РС-денге/ЖЛ; - 15 мкл РБ. На каждый анализ расходуются: - 20 мкл ПКО-денге/ЖЛ; - 20 мкл ОКО. 13 --- стр. 15 --- f i 8.2 Последовательность проведения этапов анализа Анализ с помощью набора реагентов проводится в один этап: - включают прибор, запускают программу в соответствии с инструкцией по эксплуатации; - вводят параметры температурно-временного режима амплификации со гласно таблице 1 и вводят красители РАМ, К6С, КОХ и Су5; Таблица 1 - Температурно-временной режим амплификации № п/п Температурно-временной режим Число цик лов 1 50 °С - 900 секунд 1 2 95 °С - 300 секунд 1 3 59 °С - 40 секунд Считывание сигнала флуоресценции 50 4 95 °С - 15 секунд - вводят сведения об образцах по всем красителям и активируют прибор в соответствии с руководством по эксплуатации; При работе с РНК необходимо использовать только одноразовые пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку «RNase-free», «DNase-free». - набор реагентов извлекают из холодильника, РБ и ОКО перемешивают на вортексе и центрифугируют в течение 5 секунд при 3000 об-мин''; - помещают микропробирки в стрипах (РС-денге/ЖЛ) в штатив типа «IsoFreeze»** и маркируют в соответствии с протоколом исследования на боко вой стенке пробирки; открывают крышки микропробирок и вносят в них по 15 мкл РБ; **Примечание: До начала работы штатив рекомендуется охладить в бы товом холодильнике до температуры 2-8 °С 14 --- стр. 16 --- - используя наконечники с аэрозольным барьером, последовательно вно сят в микропробирки соответственно порядку исследования образцов по 20 мкл ОКО, ОКО-В и далее по 20 мкл растворов исследуемых образцов в необходи мой повторности***, закрывают крышки данных микропробирок; - вносят в микропробирки соответственно маркировке по 20 мкл ПКО- денге/ЖЛ, закрывают крышки данных микропробирок; - перемешивают содержимое микропробирок на вортексе и центрифуги руют 5 секунд при 3000 об-мин'*. ВНИМАНИЕ! После смешивания РС-денге/ЖЛ, разбавителя и пре парата РНК, микропробирки сразу установить в амплификатор и запус тить ОТ-ПЦР-РВ. Помещают микропробирки в прибор в соответствии с протоколом иссле дования (таблица 2) и прикатывают крышки микропробирок; Таблица 2 - Рекомендуемый порядок исследования образцов М ячейки Образец 1 ПКО-денге/ЖЛ 2 ПКО-денге/ЖЛ 3 ОКО 4 ОКО 5 ОКО-В 6 ОКО-В 7 исследуемый образец (проба) 1 8 исследуемый образец (проба) 1 9 исследуемый образец (проба) 2 10 исследуемый образец (проба) 2 11 - закрывают крышку прибора, запускают реакцию ОТ-ПЦР-РВ и фикси руют в рабочем журнале название файла с результатом работы прибора, рас четное время анализа составляет в среднем 2 часа. ***Примечание: каждый образец рекомендуется анализировать в двух повторах. 15 --- стр. 17 --- 8.3 Процедура измерения и оценки результатов анализа Оценку результатов проводят с помощью приборов для ПЦР-РВ, напри мер, «АНК-32 (32М, 48)», СРХ-96 или эквивалентные им (см. п. 5.1 настоящей инструкции). Кинетическая кривая роста сигнала флуоресценции (регистрация роста сигнала) означает любую величину порогового цикла С1 менее 50. Отсутствие регистрации роста сигнала прибором описывается программой прибора, на пример, как величина порогового цикла (С1 >=50 в приборах АНК), либо как ее отсутствие (ША в приборах фирмы В1оКа(1) и т.п. Подробная информация при ведена в руководстве по эксплуатации конкретного прибора. Кинетическая кривая роста сигнала флуоресценции по каналу КбС либо КОХ относительно отрицательного контроля означает регистрацию роста сиг нала и свидетельствует о наличии специфических фрагментов НК вирусов ли хорадки денге или желтой лихорадки в данной микропробирке. Кинетическая кривая роста сигнала флуоресценции по каналу Су5 в слу чае отсутствия положительной динамики по каналам КбС и КОХ означает ре гистрацию роста сигнала и свидетельствует об успешном прохождении реакций ОТ и ПЦР-РВ, и подтверждает отсутствие специфических фрагментов НК ви русов лихорадки денге или желтой лихорадки в данной микропробирке. Кинетическая кривая роста сигнала флуоресценции по каналу ТАМ в случае отсутствия положительной динамики по каналам КбС и КОХ означает регистрацию роста сигнала и свидетельствует об успешном выделении РНК из пробы, и дополнительно подтверждает отсутствие специфических фрагментов НК вирусов лихорадки денге или желтой лихорадки в данной микропробирке. Учет результатов анализа (толкование характера реакций) Результаты анализа не подлежат учету: - в случае регистрации роста сигнала ОКО по каналам КбС или КОХ (ложноположительный результат всего эксперимента). Величина порогового цикла С 1 при этом не имеет значения; - в случае отсутствия регистрации роста сигнала ПКО-денге/ЖЛ по ка налам КбС или КОХ (ложноотрицательный результат всего эксперимента); 16 --- стр. 20 --- 10 УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ЭКС ПЛУАТАЦИИ НАБОРА ЮЛ Условия хранения набора В соответствии с ТУ 9398-002-46395995-2013 - в сухом, защищенном от света месте при температуре от плюс 2 до плюс 8 °С. Суммарный срок хранения при температуре от плюс 9 до плюс 20 °С не должен превышать 14 суток в те чение срока годности набора реагентов. 10.2 Условия транспортирования набора Транспортирование набора реагентов «ОМ-Скрин-денге/ЖЛ-РВ» должно производиться в соответствии с ТУ 9398-002-46395995-2013 крытым транспор том (автомобильным, железнодорожным либо воздушным) при температуре от плюс 2 до плюс 8 °С. Допускается транспортирование до 14 суток при темпера туре до плюс 20 °С. 10.3 Срок годности набора Срок годности набора реагентов составляет 12 месяцев с даты выпуска предприятием-изготовителем. Серии наборов реагентов с истекшим сроком годности применению не подлежат. Срок годности вскрытых реагентов соот ветствует сроку годности, указанному на этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не указано иное. Срок годности разведенных препаратов ПКО-денге/ЖЛ и ВПК-В-РНК не более месяца при температуре хранения не выше минус 20 °С. 10.4 Информация по безопасной утилизации Использование набора происходит в рабочей зоне 3, не подразумевающей контакта с биоматериалом (МУ 1.3.2569-09). Использованные наборы после анализа препаратов РНК собирают в пластиковые закрывающиеся емкости и выносят в рабочую зону 4-1 либо специально предназначенное вспомогатель ное помещение (МУ 1.3.2569-09) с целью последующей утилизации по классу Б (СанПиН 2.1.7.2790-10). Наборы с истекщим сроком годности, а также в случае повреждения упа ковки, утилизируют по классу А (СанПиН 2.1.7.2790-10). 19 --- стр. 21 --- 10.5 Гарантийные обязательства производителя Предприятие-производитель гарантирует соответствие функциональных характеристик набора реагентов требованиям, указанным в технической и экс плуатационной документации, в течение установленного срока годности (12 месяцев) при соблюдении всех условий транспортирования, хранения и применения. Рекламации на качество набора реагентов «ОМ-Скрин-денге/ЖЛ-РВ» направлять на предприятие-изготовитель ЗАО «Синтол» (127550, г. Москва, ул. Тимирязевская, 42, тел. (495) 984-69-93, факс. (499) 977-74-55 E.mail: syntol@syntol.ru). При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по при менению набора реагентов, нежелательных реакций при его использовании, фактов и обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и меди цинских работников при применении набора реагентов, рекомендуется напра вить сообщение на предприятие-изготовитель ЗАО «Синтол» по адресу, ука занному выше, и в уполномоченную государственную регулирующую органи зацию в соответствии с действующим законодательством. Е Научный директор ЗАО «Синтол Л.И. Алексеев ря 2015 г СОГЛАСОВАНО: И.о. генерального директора ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор», К.М .Н., доцент В.Н. Михеев 20 --- стр. 22 --- Приложение РЕЗУЛЬТАТЫ КЛИНИЧЕСКОЙ АПРОБАЦИИ НАБОРА РЕАГЕНТОВ «Набор реагентов для выявления и идентификации РНК вирусов денге и желтой лихорадки методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ОМ-Скрин-денге/ЖЛ-РВ)» на базе ФБУН ГНЦ ВБ «Век тор») € Всего каждой серией набора реагентов было исследовано 160 проб, содержащих вирус денге (ВЕМУ-1-4) и 80 проб, содержащих вирус желтой лихорадки; а также 160 проб, содер жащих одновременно вирус денге и вирус желтой лихорадки. Результаты приведены в таб лице 1. Таблица 1 Образец Положитель ные образцы* Подтверждённые положительные образцы серия 020914 серия 150914 Данные по моделированию нагрузки проб вирусом денге Клеточные культуры (вируссодержащая жидкость), содержащие вирус денге 1-4 32 32 32 Кровь, содержащая вирус денге 1 -4 32 32 32 Мозговая суспензия мышей, содержащая вирус денге 1 -4 32 32 32 Пул комаров, содержащих вирус денге 1 -4 32 32 32 Пробы окружающей среды, содержащие вирус денге 1 -4 32 32 32 Итого проб, еодержащих вирус денге 1-4 160 160 160 Данные по моделированию нагрузки проб вирусом желтой лихорадки Клеточные культуры (вируссодержащая жидкость), содержащие вирус желтой ли хорадки 16 16 16 Кровь, содержащая вирус желтой лихорад ки 16 16 16 Мозговая суспензия мышей, содержащая вирус желтой лихорадки 16 16 16 Пул комаров, содержащих вирус желтой лихорадки 16 16 16 Пробы окружающей среды, содержащие вирус желтой лихорадки 16 16 16 Итого проб, содержащих вирус желтой ли хорадки 80 80 80 * Согласно интерпретации результатов инструкции по применению 21