Набор реагентов для выявления и идентификации ДНК возбудителя легионеллеза методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ОМ-Скрин-Легионеллез-РВ) по ТУ 9398-010-46395995-2013 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 2 ---
1 НАЗНАЧЕНИЕ
1.1 Полное название набора
«Набор реагентов для выявления и идентификации ДНК возбудителя
легионеллеза методом полимеразной цепной реакции в реальном времени
(ОМ-Скрин-Легионеллез-РВ) по ТУ 9398-010-46395995-2013».О
1.2 Предназначение набора и его диагностическая роль
Набор реагентов «ОМ-Скрин-Легионеллез-РВ» предназначен для
качественного определения (скрининг, мониторинг) ДНК микроорганизмов
рода Legionella, с возможностью идентификации наиболее опасного для
человека вида Legionella pneumophila в биологическом материале -
бронхоальвеолярный лаваж, респираторный секрет, легочная ткань, сыворотка
крови, смывы из носоглотки, спинномозговая жидкость, мокрота, микро- и
макроаутоптаты; патологическом материале, в бактериальных культурах, а
также в пробах воды, воздуха, смывах и соскобах биопленок с объектов
окружающей среды методом ПЦР-РВ. Для внутрибольничного легионеллеза
помимо типичной клинической симптоматики характерны внелегочные
проявления, в связи с чем возбудитель может быть выделен не только из
отделяемого респираторного тракта, но и из крови.
Диагностическая роль набора реагентов заключается в возможности его
использования в поддержке диагностики специфической патологии
(легионеллез) при исследовании материала от больного (подозрительного на
заболевание) и индикации патогенных биологических агентов (ПБА), в
объектах окружающей среды; как ускоренного предварителъного теста при
выполнении биологического метода исследования и идентификации
подозрителъных культур; для эпидемиологического мониторинга.
1.3 Область применения набора
Область применения набора - клиническая лабораторная диагностика
легионеллеза, специфическая индикация патогенных биологических агентов,
эпидемиологический мониторинг, научные исследования. Набор может быть
использован в учреждениях медицины и здравоохранения, в лабораториях
--- стр. 3 ---
Центров гигиены и эпидемиологии и противочумных учреждениях Рос
потребнадзора, в эпидемиологических службах, а также в стационарных и
мобильных лабораториях специализированных учреждений других
министерств и ведомств, в т-ом числе Министерства обороны.
2 ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
Компоненты набора являются одноразовыми.
Набор реагентов «ОМ-Скрин-Легионеллез-РВ» не требует технического
обслуживания и калибровки.
2.1 Состав набора
Набор реагентов состоит из 5 реагентов.
№
п/п Состав комплекта Описание Объем Кол-во
1. Реакционная смесь в стрипованных
микропробирках, РС-Лег
сухое вещество белого
цвета
1 мг 6 стрипов
2. Разбавитель, РБ прозрачная бесцветная
жидкость 0,8 мл 1 пробирка
3. Положительный контрольный
образец, ПКО-Лег
сухое вещество белого
цвета
2 мг 3 пробирки
4. Раствор для разбавления ПКО,
ОКО
прозрачная бесцветная
жидкость
1 мл 1 пробирка
5. Внутренний положительный
контроль выделения, ВПК-В
сухое вещество
белого цвета
2 мг 1 пробирка
Реакционная смесь в стрипованных микропробирках (лиофилизованная),
РС-Лег, расфасована в микропробирки в стрипах объемом 0,2 мл, упакованные
в непрозрачный полиэтиленовый пакет Zip-Lock размером 9x12 см, состав:
эквимолярная смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов, шесть олигонуклеотидных
праймеров, четыре флуоресцентных зонда, фермент Taq ДНК-полимераза,
синтетическая ДНК внутреннего положительного контроля (ВПК), трегалоза.
Разбавитель РБ, расфасован в пробирку из полипропилена объемом 1,5 мл
с завинчивающейся крышкой, упакованную в полиэтиленовый пакет Zip-Lock
размером 4x7 см, состав: ПЦР-буфер, хлорид магния, глицерол, вода для ПЦР.
Положительный контрольный образец (лиофилизованный), ПКО-Лег,
расфасован в пробирку из полипропилена объемом 0,5 мл с завинчивающейся
крышкой, упакованную в полиэтиленовый пакет Zip-Lock размером 6x7 см,
3
--- стр. 4 ---
состав: эквимолярная смесь двух рекомбинантных плазмид pGem-T,
содержащих встроенные специфические последовательности ДНК легионелл:
фрагмент гена S12 рибосомальной субъединицы S30 rRNA, специфичный для
Legionella spp. и фрагмент гена mip, специфичный только для L.pneumophila.
Раствор для разбавления ПКО, ОКО, расфасован в пробирку изО
полипропилена объемом 1,5 мл с завинчивающейся крышкой, упакованную в
полиэтиленовый пакет Zip-Lock размером 4x7 см, состав: ТЕ буфер.
Внутренний положительный контроль выделения, ВПК-В
(лиофилизованный), расфасован в пробирку из полипропилена объемом 0,5 мл
с завинчивающейся крышкой, упакованную в полиэтиленовый пакет Zip-Lock
размером 4x7 см, состав: рекомбинантная плазмида pGem-T со встроенным
специфическим фрагментом ДНК.
Примечание: ингредиентами, которые могут влиять на измерения,
являются праймеры и флуоресцентные зонды, основной характеристикой
которых для конечного пользователя является температура отжига Та,
составляюшая 60 °С. Данная характеристика реализуется с помошью
температурно-временного режима амплификации, следовательно, его
соблюдение является строго обязательным.
2.2 Количество анализируемых проб
Набор реагентов рассчитан на 48 определений, включая контрольные
образцы.
2.3 Метод исследования
Обнаружение специфических фрагментов нуклеиновых кислот легионелл
основано на использовании метода мультиплексной полимеразной цепной
реакции с получением результата в режиме реального времени - ПЦР-РВ.
При амплификации используют четыре олигонуклеотидных праймера,
фланкирующих фрагменты ДНК легионелл, два олигонуклеотидных праймера,
фланкирующих фрагменты ДНК внутреннего положительного контроля ПЦР-
РВ, а также четыре флуоресцентных зонда. Процесс амплификации
специфичных фрагментов заключается в повторяющихся циклах
--- стр. 5 ---
температурной денатурации ДНК, отжига праймеров с комплементарными
последовательностями и последующей достройке полинуклеотидных цепей с
этих праймеров ДНК-полимеразой с детекцией результатов в режиме реального
времени. Постановка ПЦР-РВ осуществляется на специальных приборах,
например, «АНК-32 (32М, 48)» (ИАП РАН, г. Санкт-Петербург, Россия), «CFX-
о
96» («BioRad», США), или эквивалентных по характеристикам (см. п. 5.1
настоящей инструкции).
Набор реагентов «ОМ-Скрин-Легионеллез-РВ» позволяет одновременно
выявлять в одной реакционной смеси две специфические последовательности
ДНК легионелл: фрагмент гена S12 рибосомальной субъединицы S30 rRNA,
специфичный для всех представителей рода Legionella по каналу
флуоресценции ROX и фрагмент гена mip, специфичный только для
L.pneumophila - по каналу флуоресценции R6G, а также внутренний
положительный контроль - по каналу флуоресценции Су5.
Положительный результат теста означает, что исследуемый материал
содержит ДНК возбудителя легионеллеза. Отрицательный результат теста
означает, что исследуемый материал не содержит ДНК возбудителя
легионеллеза.
2.4 Ограничения метода
В инфицированном материале ДНК Legionella spp. и L.pneumophila может
быть не обнаружена по причине ингибирования ПЦР-РВ и/или недостаточной
эффективности выделения ДНК. Для достижения показателей аналитической
чувствительности используемый набор для выделения должен обеспечивать
эффективность выделения НК на уровне не менее 20 %.
Причиной получения ложноположительного результата является
контаминация на этапе выделения ДНК или на этапе проведения реакции ПЦР-
РВ. Ложноположительный результат выявляется с помощью отрицательных
контрольных образцов выделения и ПЦР-РВ (п. 7.5 настоящей инструкции).
Причиной получения ложноотрицательного результата является
ингибирование ПЦР-РВ и/или недостаточная эффективность выделения ДНК.
--- стр. 6 ---
Ложноотрицательный результат выявляется с помощью внутреннего
положительного контрольного образца и ПЦР-РВ (п. 7.5 настоящей
инструкции).
3 АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ о
ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1 АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1.1 Чувствительность
л
Чувствительность - не более 1,0-10 копий ДНК в миллилитре пробы
(копий-мл'*). Данный показатель достижим при условии отбора для выделения
ДНК аликвоты исходного материала (пробы) объемом не менее 100 мкл.
3.1.2 Специфичность
Специфичность - ложноположительные и ложноотрицательные
результаты при анализе образцов НК музейных тест-штаммов Legionella
pneumophila, непатогенных легионелл Legionella micdadei, Legionella bozemanii,
Legionella dumofii (12 заведомо положительных образцов), a также НК
гетерологичных видов микроорганизмов: Bacillus anthracis. Yersinia pestis,
Escherichia coli, Burkholderia mallei, Burkholderia pseudomallei. Vibrio cholerae,
Francisella tularensis, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca.
Pseudomonas aeruginosa. Staphylococcus aureus (12- заведомо отрицательных
образцов) отсутствовали.
При проведении исследований наблюдалась полная
внутрипостановочная, межпостановочная и межсерийная воспроизводимость
для всех положительных образцов.
3.2 ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Диагностическая чувствительность - при исследовании 104 проб
бактериальных суспензий культур легионелл с концентрацией 1,0-10 м.к./мл,
24 проб биологического материала с концентрацией возбудителя легионеллеза
1,0-10^ м.к./мл и 100 проб воды из объектов окружающей среды, содержащих
возбудитель легионеллеза, (228 положительных проб) положительный
--- стр. 7 ---
результат получен в 228 случаях. Диагностическая чувствительность - не менее
99,0 % с доверительной вероятностью 90 %.
Диагностическая специфичность - при исследовании 40 отрицательных
образцов, содержащих гетерологичные микроорганизмы {Staphylococcus aureus,
Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Klebsiella pneumoniae,
О
Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Escherichia coli. Pseudomonas aeruginosa.
Pseudomonas cepacia, Serratia marcescens. Yersinia pestis. Yersinia
pseudotuberculosis, Francisella tularensis. Bacillus anthracis. Vibrio cholerae,
Aeromonas spp.. Salmonella typhi) в концентрации не менее 1,0-10^ м.к./мл,
отрицательный ответ в ПЦР получен во всех 40 случаях. Диагностическая
специфичность - не менее 94 % с доверительной вероятностью 90%.
4 МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ
Работу проводят в соответствии с требованиями СП 1.3.2322-08
«Безопасность работы с микроорганизмами III- IV групп патогенности
(опасности) и возбудителями паразитарных болезней», МУ 1.3.2569-09
«Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации
нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-
IV групп патогенности», МУК 4.2.22-17-07 «Методические указания по
выявлению бактерий Legionella pneumophila в объектах окружающей среды».
Потенциальный риск применения набора - класс 26 (п. 9 приложения № 2
к приказу Минздрава России от 06.06.2012 № 4н).
4.1 Необходимость обучения персонала
Для выполнения анализа с помощью данного набора реагентов
необходимо участие специалиста с высшим медицинским образованием,
прошедшего обучение на лицензированных курсах специализации по работе с
ПБА I-1I групп патогенности и по ПЦР-диагностике, а также лаборанта со
средним специальным медицинским образованием. Персонал должен иметь
навыки работы с биохимическими реактивами и современным лабораторным
оборудованием.
4.2 Меры безопасности, позволяющие предохранять оператора
7
--- стр. 8 ---
Все компоненты набора в используемых концентрациях являются
нетоксичными, вредного влияния на организм оператора не оказывают. При
работе с набором следует соблюдать обычные меры предосторожности для
лабораторий:
- пользоваться лабораторными перчатками и надевать лабораторныеО
халаты;
- не принимать пищу, пить или курить в лабораторных помещениях;
- после работы с пробами и реактивами следует тщательно вымыть руки
водой с мылом.
Избегать контакта с кожей, глазами и слизистыми оболочками, при
попадании на них компонентов набора промыть большим количеством воды.
При приеме внутрь компонентов набора реагентов за медицинской помощью
следует обратиться немедленно.
4.3 Необходимые меры предосторожности в отношении влияния
физических факторов
При использовании набора реагентов нет необходимости принимать
меры предосторожности в отношении влияния магнитных полей, внешних
электрических воздействий, электростатических разрядов, давления или
перепадов давления, перегрузки, источников термического воспламенения.
4.4 Необходимые меры предосторожности против специальных
рисков
При использовании набора реагентов нет необходимости принимать
меры предосторожности против любых специальных рисков при использовании
или реализации, поскольку в состав изделия не входят вещества человеческого
или животного происхождения с учетом их потенциальной инфекционной
природы.
--- стр. 9 ---
5 ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ
РАБОТЕ С НАБОРОМ
5.1 Рекомендуемое измерительное оборудование
Прибор для ПЦР-РВ ■ - зарегистрированный в РФ как медицинское
изделие и имеющий каналы детекции, соответствующие красителям R6G,О
ROX, Су5 (либо их спектральным аналогам) со следующими характеристиками
- А,^,акс.возб/^акс.эм. (№ 2 - 525нм/550нм, № 3 - 550нм/580нм, № 4 - 630нм/665нм),
например, «А1Ж-32 (32М, 48)», «CFX-96».
5.2 Указания о необходимости использования специального
оборудования
Работу с набором следует проводить в настольном боксе с бактерицидной
лампой (например, БАВ-ПЦР-«Ламинар-С», ЗАО «Ламинарные системы»,
г. Миасс, Россия), установленном в рабочей зоне 3 (МУ 1.3.2569-09).
5.3 Дозирующие устройства
Набор автоматических пипеток переменного объема на 0,5-10 мкл,
2-20 мкл, 10-100 мкл и на 20-200 мкл;
штатив-карусель для данных пипеток.
5.4 Другое используемое оборудование
Микроцентрифуга-вортекс (например, «Циклотемп-901»);
микроцентрифуга для стрипов (например, «Циклотемп-903»);
штативы для наконечников, микропробирок на 0,5 и 1,5 мл;
штатив для работы со стрипами (кат. номер СТ-15, ЗАО Синтол);
холодильник на 2-8 °С.
5.5 Лабораторная посуда
Емкости для сброса наконечников и микропробирок.
5.6 Материалы и реагенты, не входящие в состав набора
Одноразовые наконечники для пипеток переменного объема с
аэрозольным барьером до 10 мкл;
одноразовые наконечники для пипеток переменного объема с
аэрозольным барьером до 20 мкл;
--- стр. 10 ---
одноразовые наконечники для пипеток переменного объема с
аэрозольным барьером до 200 мкл;
ТЕ-буфер (кат. номер В-014, ЗАО «Синтол»);
набор реагентов для выделения ДНК/РЬЖ;
отдельный халат и одноразовые медицинские перчатки; С
комплект средств для обработки рабочего места.
6 АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ПРОБЫ
Получение и обработка биологического материала, зараженного или
подозрительного на зараженность возбудителем легионеллеза, не являются
частью процедуры анализа с использованием набора реагентов «ОМ-Скрин-
Легионеллез-РВ».
6.1 Тип исследуемых образцов
Материалом для исследований служат препараты нуклеиновых кислот,
выделенные из проб: материал от больных или подозрительных на заболевание
людей (в зависимости от формы заболевания - (бронхоальвеолярный лаваж,
кровь, смывы из носоглотки, легочная ткань, спинномозговая жидкость,
мокрота, микро- и макроаутоптаты), патологический материал, подозрительные
культуры микроорганизмов, а также пробы воздуха, воды (водных контуров
систем кондиционирования и охлаждения воздуха, градирен промышленных
предприятий, джакузи массового пользования, систем горячего и холодного
водоснабжения, других водных систем и объектов общественного пользования,
эксплуатация которых сопровождается образованием водного аэрозоля), смывы
и соскобы биопленок вышеперечисленных объектов. Для внутрибольничного
легионеллеза помимо типичной клинической симптоматики характерны
внелегочные проявления, в связи с чем возбудитель может быть выделен не
только из отделяемого респираторного тракта, но и из крови.
6.2 Процедура получения биологичеекого материала
Все работы по забору проб клинического и секционного материала от
людей и из объектов окружающей среды осуществляют в строгом соответствии
10
--- стр. 14 ---
Для определения эффективности выделения ДНК из исследуемого
материала в каждую пробу на этапе ее подготовки к анализу добавляют
внутренний положительный контроль выделения (ВПК-В) из состава набора
реагентов «ОМ-Скрин-Легионеллез-РВ». Для его приготовления в пробирку с
сухим содержимым ВПК-В вносят 200 мкл элюента из состава наборовО
реагентов для выделения, перемешивают на вортексе до полного растворения,
центрифугируют 5 секунд при 3000 об*мин''. Полученный раствор ВПК-В
добавляют по 10 мкл во все пробирки с исследуемыми образцами после их
обеззараживания и в пробирку с ОКО-В.
При применении на этапе пробоподготовки наборов производства
ЗАО «Синтол» добавления ВПК-В для контроля выделения нуклеиновых
кислот не требуется, поскольку он входит в состав лизирующего компонента.
7 ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
7Л Процедура приготовления положительного контрольного образца
В пробирку с сухим содержимым ПКО-Лег из набора реагентов «ОМ-
Скрин-Легионеллез-РВ» добавляют 200 мкл ОКО, перемешивают на вортексе
до полного растворения, центрифугируют 5 секунд при 3000 об-мин"’. Хранение
разведенных препаратов ПКО-Лег допускается при температуре не выше
минус 20 °С не более месяца.
7.2 Разведение препарата ДНК (при необходимости)
Для выявления и идентификации ДНК возбудителя легионеллеза
необходимо внести в реакцию 20 мкл препарата ДНК. В случае необходимости,
раствор препарата ДНК разводят с помощью ТЕ-буфера.
7.3 Проведение ПЦР
Расход каждого реагента
На одну постановку ПЦР-РВ (без учета повторов) требуются:
1 пробирка - для ОКО;
1 пробирка - для ОКО-В;
1 пробирка - для ПКО;
необходимое количество пробирок по числу исследуемых образцов.
15
--- стр. 15 ---
9.5 Гарантийные обязательства производителя
Предприятие-производитель гарантирует соответствие функциональных
характеристик набора реагентов требованиям, указанным в технической и
эксплуатационной документации, в течение установленного срока годности
(12 месяцев) при соблюдении всех условий транспортирования, хранения иО
применения.
Рекламации на качество набора реагентов «ОМ-Скрин-Легионеллез-РВ»
направлять на предприятие-изготовитель ЗАО «Синтол» (127550, г. Москва, ул.
Тимирязевская, 42, тел. (495) 984-69-93, факс. (499) 977-74-55
E.mail: syntol@syntol.ru).
При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по
применению набора реагентов, нежелательных реакций при его использовании,
фактов и обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и
медицинских работников при применении набора реагентов, рекомендуется
направить сообщение на предприятие-изготовитель ЗАО «Синтол» по адресу,
указанному выше, и в уполномоченную государственную регулирующую
организацию в соответствии с действующим законодательством.
Директор ФКУЗ «Российский
научно-исследовательский противочум!^»»'-^^^^
институт «Микроб» Роспотребнадзорй^^§;^5^^
академик РАН, д.м.н., профессор
- * 4 '
V
чгЛ^'
В.В. Кутырев
23
--- стр. 16 ---