Набор реагентов для определения ДНК Trichomonas vaginalis, Neisseria gonorrhoeae и Chlamydia trachomatis методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) для диагностики in vitro "АмплиПрайм® TV/NG/CT" по ТУ 9398-016-09286667-2014 — инструкция и характеристики

РУ: РЗН 2016/3577 от 27.01.2016 · класс риска 2б

Производитель: ООО "НекстБио" (Россия)

Вид изделия: Trichomonas vaginalis нуклеиновая кислота ИВД, набор, анализ нуклеиновых кислот

В госконтрактах 44-ФЗ: 1 контракт, медианная цена за единицу 9 051 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Главный технолог
ограниченной 
Vbra «НекстБио»
!! |у|.Ю. Сорокина 
2015 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для определения ДНК 
Trichomonas vaginalis, Neisseria gonorrhoeae и Chlamydia 
trachomatis методом полимеразной цепной реакции (ПЦР)
для диагностики in vitro
«АмплиПрайм® TV/NG/СТ»
АмплиПрайм
mJ
ООО «НекстБио»,
Российская Федерация, 111394,
город Москва, улица Полимерная, дом 8, стр. 2 IVD


--- стр. 2 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ....................................................................................................3
НАЗНАЧЕНИЕ.....................................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА............................................................................................................4
ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ......................................................................5
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ...........................................................................6
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ......................................................................9
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ.......................................................................................10
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ .............................................13
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА. 16
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ ДНК .......................21
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ
ПРОБ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА............................................................................22
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ...........................................................................22
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ...................................................23
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 1 («ПЦР-комплект» вариант FRT-100)...............................25
СОСТАВ..........................................................................................................................25
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ............25
A. Подготовка пробирок для амплификации...........................................................25
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени»....26
B. Анализ и интерпретация результатов.................................................................28
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ 2 и 3 («ПЦР-комплект» вариант FEP-100-0,2 или FEP-100- 
0,5).......................................................................................................................................34
СОСТАВ..........................................................................................................................34
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ ПО «КОНЕЧНОЙ ТОЧКЕ»..................................34
A. Подготовка пробирок для амплификации............................................................34
Б. Проведение амплификации..................................................................................36
B. Флуоресцентная детекция продуктов амплификации по «конечной точке»... 36
Г. Интерпретация результатов.................................................................................37
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 4 («ПЦР-комплект» вариант FRT-100 FN) ........................40
СОСТАВ..........................................................................................................................40
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ............40
A. Подготовка пробирок для амплификации...........................................................40
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени»....42
B. Анализ и интерпретация результатов.................................................................43
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 5 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L)...................................49
СОСТАВ..........................................................................................................................49
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ............49
A. Подготовка пробирок для амплификации...........................................................49
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени»....50
B. Анализ и интерпретация результатов..................................................................52
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 6 (комплекты реагентов «АмплиПрайм® МАГНО-сорб- 
УРО» и «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 FN)..............................................................58
СОСТАВ..........................................................................................................................58
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ............59
A. Подготовка пробирок для амплификации...........................................................59
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени»....60
B. Анализ и интерпретация результатов..................................................................61
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ....................68
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ПРОИЗВОДИТЕЛЯ ..............................................69
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ........................................70
ПРИЛОЖЕНИЕ 1................................................................................................................71
стр. 2 из 73


--- стр. 3 ---
список СОКРАЩЕНИЙ
В настоящей инструкции применяются следующие сокращения и обозначения:
BKO-FL - экзогенный внутренний контрольный образец
ГЭ - геномные эквиваленты
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
дНТФ - дезоксирибонуклеотидтрифосфат
и п п п - инфекции, передаваемые половым путем
К1, К2 - ДНК-калибраторы
К+ - положительный контроль ПЦР
К- - отрицательный контроль ПЦР
НК - нуклеиновые кислоты
ок - отрицательный контроль экстракции
око - отрицательный контрольный образец
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РУ - регистрационное удостоверение
УДГ - урацил-ДНК-гликозилаза
FEP - флуоресцентная детекция по «конечной точке»
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «АмплиПрайм® TV/NG/CT» предназначен для качественного 
(формы комплектации набора 1, 2, 3, 4, 5 ,6) и количественного определения 
(формы комплектации набора 1, 4, 5, 6) ДНК Trichomonas vaginalis, Neisseria  
gonorrhoeae и Chlamydia trachomatis  в биологическом материале (отделяемое 
слизистых оболочек урогенитального тракта (отделяемое слизистой оболочки 
влагалища, соскоб эпителия со слизистой оболочки цервикального канала и соскоб 
эпителия со слизистой оболочки уретры), прямой кишки, ротоглотки, конъюнктивы; 
моча, секрет предстательной железы) методом ПЦР с гибридизационно- 
флуоресцентной детекцией продуктов амплификации. Набор реагентов 
используется в клинической лабораторной диагностике для исследования 
биологического материала, полученного от лиц с подозрением на наличие 
инфекций, передаваемых половым путем.
Материалом для проведения ПЦР служат пробы ДНК, экстрагированные из 
исследуемого материала с помощью комплектов реагентов, рекомендованных 
Производителем.
ВНИМАНИЕ! В соответствии с федеральным законом от 21.11.2011 №323-Ф3 «Об 
основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» ПЦР-исследование 
является одним из методов всестороннего обследования пациента, на основании 
которых лечащий врач устанавливает диагноз и выбирает мероприятия по лечению 
пациента.
стр. 3 из 73


--- стр. 5 ---
содержащего клетки человека, и требует лроведения лараллельного тестирования 
пробы ДНК с использованием набора реагентов «АмплиПрайм® TV/NG/CT» и набора 
реагентов для количественного определения ДНК человека, рекомендованного 
Производителем. Во втором варианте рассчитываются нормированные значения 
концентрации ДНК микроорганизмов, отражающие количество клеток 
микроорганизмов относительно клеток слизистой оболочки человека.
Набор реагентов содержит систему защиты от контаминации ампликонами за 
счет применения фермента урацил-ДНК-гликозилазы (УДГ) и трифосфата 
дезоксиуридина. Фермент УДГ распознает и катализирует разрушение цепей ДНК, 
содержащих дезоксиуридин, но не ДНК, содержащей дезокситимидин. 
Дезоксиуридин отсутствует в природной ДНК, но всегда присутствует в ампликонах, 
поскольку трифосфат дезоксиуридина входит в состав смеси дНТФ в реагентах для 
амплификации. Дезоксиуридин делает контаминирующие ампликоны 
восприимчивыми к разрушению ферментом УДГ до начала амплификации ДНК- 
мишени, и, следовательно, они не могут быть в дальнейшем амплифицированы.
Фермент УДГ термолабилен и инактивируется при нагревании выше 50 °С и 
поэтому не разрушает ампликоны мишени, нарабатываемые в процессе ПЦР.
На этапе амплификации одновременно в одной пробирке проводятся 4 реакции - 
амплификация участков ДНК Г. vaginalis, N. gonorrhoeae и С. trachomatis, а также 
амплификация последовательности BKO-FL. Результаты амплификации ДНК 
Г. vaginalis, N. gonorrhoeae и С. trachomatis, а также ДНК BKO-FL регистрируются по 
4 различным каналам флуоресцентной детекции:
Таблица 1
Канал для 
флуорофора FAM JOE ROX Cy5
ДНК-мишень ДНК
Т . vaginalis
ДНК
N . gonorrhoeae
ДНК
с. trachomatis ДНК BKO-FL
Область
амплификации
ДНК-повторы 
для ПЦР- 
идентификации
16S rRNA gene cryptic plasmid
искусственно
синтезированная
последовательность
ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ
Набор реагентов выпускается в 6 формах комплектации:
Форма 1 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100.
Форма 2 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FEP-100-0,2 
(пробирки 0,2 мл).
Форма 3 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FEP-100-0,5 
(пробирки 0,5 мл).
Форма 4 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 FN.
стр. 5 из 73


--- стр. 6 ---
Форма 5 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-L.
Форма 6 включает комплекты реагентов «АмплиПрайм® МАГНО-сорб-УРО» и «ПЦР- 
комплект» вариант FRT-100 FN.
Формы комплектации 1, 4, 5 предназначены для проведения амплификации ДНК 
с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» и 
позволяют выявлять ДНК в качественном и количественном формате. Для 
проведения полного ПЦР-исследования необходимо использовать комплекты 
реагентов для экстракции ДНК, рекомендованные Производителем.
Форма комплектации 4 может быть использована совместно с автоматическими 
станциями приготовления реакционных смесей.
Формы комплектации 2 и 3 предназначены для проведения амплификации ДНК с 
гибридизационно-флуоресцентной детекцией по «конечной точке» и позволяют 
выявлять ДНК в качественном формате. Для проведения полного ПЦР- 
исследования необходимо использовать комплекты реагентов для экстракции ДНК, 
рекомендованные Производителем.
Форма комплектации 6 предназначена для проведения полного ПЦР- 
исследования, включающего экстракцию ДНК из биологического материала и 
амплификацию ДНК с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме 
«реального времени», и позволяет выявлять ДНК в качественном и количественном 
формате.
Форма комплектации 6 может быть использована совместно с автоматическими 
станциями пробоподготовки и приготовления реакционных смесей.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для данного набора реагентов применимы следующие характеристики: 
Аналитическая чувствительность и линейный диапазон измерения
Таблица 2
Вид
исследуемог 
О  материала
Транспортная
среда
Комплект
для
экстракции
ДНК
Комплект
для
амплифи­
кации
Микроорга­
низм
Аналитическая 
чувствитель­
ность, ГЭ/мл^
Линейный
диапазон
измерения,
ГЭ/мл
отделяемое
слизистых
оболочек
/рогенитального
тракта
«АмплиПрайм 
ТС» или 
«АмплиПрайм 
тем» или 
«Транспортная 
среда ТС- 
ЭДЭМ»^
«АмплиПрайм
ДНК-сорб-
АМ»,
«АмплиПрайм 
® МАГНО- 
сорб-УРО»
«ПЦР- 
комплект» 
вариант 
FEP-100, 
FRT-100, 
FRT-100 
FN, FRT-L
Т. va g in a lis 5x10^ 2x10^-
1x10’'
N. допоггЬоеае 5x10^ 2x10^-
1x10^
С. tra c h o m a tis 5x10^ 2x10®-
1x10’’
^Количество геномных эквивалентов микроорганизма (Г Э ) :
-  в  биологическом м а т е р и а л е  (о т д е л я е м о е слизистых о б о л о ч е к  у р о г е н и т а л ь н о г о  тракта, п р я м о й  
кишки, рот оглот ки,  конъюнктивы), п о м е щ е н н о м  в  у к а з а н н у ю  т р а н с п о р т н у ю  с р е д у ,  в п е р е с ч е т е  н а
7 МЛ,”
^ в п е р е сче т е  н а  1  м л образца мочи или секрета предстательной железы. 
Форма комплектации 3 или 4 к о м п л е к т а  р е а г е н т о в  « А м п л и П р а й м  Э Д Э М » .
стр. 6 из 73


--- стр. 7 ---
«Транспортная 
среда ТС-
эдэм»^
«АмплиПрайм
ЭДЭМ»"*
«ПЦР- 
комплект» 
вариант 
FEP-100, 
FRT-100, 
FRT-100 
FN, FRT-L
T. va g in a lis 5x10^ -
N. g o n o rrh o e a e 5x10^ -
C. tra c h o m a tis 5x10^ -
отделяемое 
слизистой 
оболочки 
прямой кишки, 
конъюнктивы
«АмплиПрайм ТС» 
или «АмплиПрайм 
тем» или 
«Транспортная 
среда ТС-ЭДЭМ»^
«АмплиПрайм
ДНК-сорб-АМ»
«ПЦР- 
комплект» 
вариант 
FEP-100, 
FRT-100, 
FRT-100 FN, 
FRT-L
T. va g in a lis He используется®
N. g o n o rrh o e a e 5x10^ 2x10®-
1x10®
C. tra c h o m a tis 5x10^ 2x10®-
1x10®
«Транспортная 
среда ТС-ЭДЭМ»^
«АмплиПрайм
эдэм»'*
«ПЦР- 
комплект» 
вариант 
FEP-100, 
FRT-100, 
FRT-100 FN, 
FRT-L
T. va g in a lis He используется®
N. g o n o rrh o e a e 5x10^ -
C. tra c h o m a tis 5x10^ -
отделяемое
слизистой
оболочки
ротоглотки
«АмплиПрайм ТС» 
или «АмплиПрайм 
тем» или 
«Транспортная 
среда ТС-ЭДЭМ»^
«АмплиПрайм
ДНК-сорб-АМ»
«ПЦР- 
комплект» 
вариант 
FEP-100, 
FRT-100, 
FRT-100 FN, 
FRT-L
T. va g in a lis He используется®
N. g o n o rrh o e a e 5x10^ 2x10®-
1x10®
C. tra c h o m a tis He используется®
«Транспортная 
среда ТС-ЭДЭМ»®
«АмплиПрайм
ЭДЭМ»''
«ПЦР- 
комплект» 
вариант 
FEP-100, 
FRT-100, 
FRT-100 FN, 
FRT-L
T. va g in a lis He используется®
N. g o n o rrh o e a e 5x10^ -
C. tra c h o m a tis He используется®
секрет
предстательной
железы
-
«АмплиПрайм
ДНК-сорб-АМ»
«АмплиПрайм®
МАГНО-сорб-
УРО»
«ПЦР- 
комплект» 
вариант 
FEP-100 
FRT-100, 
FRT-100 FN, 
FRT-L
T. va g in a lis 5x10^ 2x10®-
1x10®
N. g o n o rrh o e a e 5x10^ 2x10®-
1x10®
C. tra c h o m a tis 5x10^ 2x10®-
1x10®
моча
«АмплиПрайм 
ТС» или 
«АмплиПрайм 
тем» или 
«Транспортная 
среда ТС-
эдэм»^
«АмплиПрайм
ДНК-сорб-
АМ»,
«АмплиПрайм 
® МАГНО- 
сорб-УРО»
«ПЦР- 
комплект» 
вариант 
FEP-100, 
FRT-100, 
FRT-100 
FN, FRT-L
T. va g in a lis 1x10^ 4x10®-
1x10®
N. g o n o rrh o e a e 1x10® 4x10®-
1x10®
C. tra c h o m a tis 1x10® 4x10®-
1x10®
«Транспортная 
среда ТС-
эдэм»^
«АмплиПрайм
ЭДЭМ»''
«ПЦР- 
комплект» 
вариант 
FEP-100, 
FRT-100, 
FRT-100 
FN, FRT-L
T. va g in a lis 1x10® -
N. g o n o rrh o e a e 1x10® -
C. tra c h o m a tis 1x10® -
Данные значения характеристик достигаются при соблюдении правил, указанных 
в разделах «Взятие, транспортирование и хранение исследуемого материала» и 
«Подготовка исследуемого материала к экстракции ДНК».
Используется только при качественном определении.
Выявление данного микроорганизма в указанном виде биоматериала не имеет клинического 
значения.
стр. 7 из 73


--- стр. 8 ---
Аналитическая чувствительность в отношении каждого из микроорганизмов 
сохраняется и в присутствии высоких концентраций ДНК двух других анализируемых 
микроорганизмов - до 10^ ГЭ/мл.
Аналитическая специфичность
Набор реагентов обнаруживает фрагменты ДНК заявленных микроорганизмов. 
Аналитическая специфичность набора реагентов доказана при исследовании ДНК 
следующих микроорганизмов: Gardnerella vaginalis; Lactobacillus spp.; Escherichia coli; 
Staphylococcus aureus; Streptococcus pyogenes; Streptococcus agalactiae; Candida  
albicans; Candida glabrata; Candida krusei; Mycoplasma hominis; Ureaplasma  
urealyticum; Ureaplasma parvum; Mycoplasma genitalium; Neisseria flava; Neisseria  
subfiava; Neisseria sicca; Neisseria mucosa; Treponema pallidum; Toxoplasma gondii;  
H S V1 и 2 типа; CMV; HPV, a также геномной ДНК человека.
При тестировании образцов ДНК вышеперечисленных микроорганизмов и ДНК 
человека неспецифических реакций выявлено не было.
Воспроизводимость, повторяемость и правильность
Воспроизводимость и повторяемость были определены путем тестирования 
модельного образца биоматериала. Модельный образец биоматериала был 
приготовлен разведением стандартного образца предприятия в трех диапазонах 
концентраций (от 2x10^ до 5x10^ , от 1x10"^ до бхЮ'*, от 1x10® до 5x10® ГЭ/мл) в 
биологическом материале, не содержащем ДНК каких-либо других возбудителей 
ИППП.
Правильность была определена путем тестирования стандартных образцов 
предприятия в концентрации 5x10"^ ГЭ/мл.
Таблица 3
Воспроизводимость
Микроорганизм
Исходное
значение
концентрации,
ГЭ/мл
Количество
повторов
Среднее значение 
концентрации,
|д
Стандартное
отклонение
(SD)
Коэффициент 
вариации (CV), 
%
Т. v a g in alis
от 2x10^ до 5x10^
80 3,58 0,10 2,83
N. g o n o rrh o e a e 80 3,54 0,18 5,03
С. tra c h o m a tis 80 3,62 0,17 4,79
Т. v a g in alis
от 1x1 o'* до 5x10“
80 4,4 0,09 1,90
N. g o n o rrh o e a e 80 4,46 0,09 2,01
С. tra c h o m a tis 80 4,23 0,13 3,12
Т. v a g in alis
от 1x10® до 5x10®
80 5,42 0,08 1,52
N. g o n o rrh o e a e 80 5,61 0,10 1,76
С. tra c h o m a tis 80 5,51 0,13 2,33
стр. 8 из 73


--- стр. 9 ---
ф #
Таблица 4
Повторяемость
Микроорганизм
Исходное
значение
концентрации,
ГЭ/мл
Количество
повторов
Среднее значение 
концентрации,
>9
Стандартное
отклонение
(SD)
Коэффициент 
вариации (CV), 
%
Т. va g in alis
от 2x10^ до 5x10^
40 3,61 0,09 2,54
N. g o n o rrtio e a e 40 3,65 0,08 2,20
С. tra c h o m a tis 40 3,62 0,07 2,04
Т. va g in a lis
от 1x1 O '* до 5x1 O '*
40 4,53 0,09 1,88
N. g o n o n fio e a e 40 4,56 0,08 1,86
С. tra c h o m a tis 40 4,62 0,08 1,79
Т. v a g in alis
от 1  х10®  до 5x10®
40 5,42 0,08 1,47
N. g o n o rrh o e a e 40 5,56 0,08 1.37
С. tra c h o m a tis 40 5,51 0,08 1,46
Таблица 5
Правильность
Микроорганизм Количество
повторов
Среднее 
значение 
измерения, 1д
Установленное
значение
Систематическая 
погрешность (В)
>9 %
Т. v a g in alis 100 4,70 4,73 0,03 0,63
N. g o n o rrh o e a e 100 4,67 4,71 0,04 0,85
С. tra c h o m a tis 100 4,63 4,69 0,06 1,28
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Таблица 6
Результаты тестирования набора реагентов «АмплиПрайм® TV/NG/CT» в
сравнении с референтным методом
Тип
образцов
Результаты 
применения набора 
реагентов 
«АмплиПрайм® 
T V /N G /C T »
Результаты применения референтного метода^
Т. v a g i n a l i s N . g o n o r r h o e a e С. t r a c h o m a t i s
положи­
тельных
отрица­
тельных
положи­
тельных
отрица­
тельных
положи­
тельных
отрица­
тельных
отделяемое 
слизистых 
оболочек 
урогениталь­
ного тракта
Всего
исследовано 
701 образец
положи­
тельных 101 0 100 0 116 0
отрица­
тельных 0 600 1 600 0 585
отделяемое 
слизистой 
оболочки 
прямой кишки
Всего
исследовано 
250 образцов
положи­
тельных 0 0 109 0 101 0
отрица­
тельных 0 250 0 141 0 149
отделяемое
слизистой
оболочки
ротоглотки
Всего
исследовано 
250 образцов
положи­
тельных 0 0 109 1 0 0
отрица­
тельных 0 250 1 139 0 250
отделяемое
конъюнктивы
Всего
исследовано 
306 образцов
положи­
тельных 0 0 109 0 110 0
отрица­
тельных 0 306 0 197 0 196
моча Всего
исследовано
положи­
тельных 115 1 103 1 109 0
“ в качестве референтного метода использовались наборы реагентов «АмплиСенс® Т. v a g in a lis  / 
Л/. goлorr/7oeae-Myльтипpaйм-FL» (РУ № ФСР 2011/10380), «АмплиСенс® C h la m y d ia  tr a c h o m a tis - F L »  
(РУ № ФСР 2009/06555).
стр. 9 из 73


--- стр. 10 ---
г
• »
600 образцов отрица­
тельных 1 483 1 495 0 491
секрет
предстательной
железы
Всего
исследовано 
426 образцов
положи­
тельных 101 0 110 0 118 0
отрица­
тельных 0 325 0 316 0 308
Были использованы 701 образец отделяемого слизистых оболочек 
урогенитального тракта; 250 образцов отделяемого слизистой оболочки прямой 
кишки; 250 образцов отделяемого слизистой оболочки ротоглотки; 306 образцов 
отделяемого конъюнктивы; 600 образцов мочи; 426 образцов секрета 
предстательной железы полученных от пациентов с подозрением на 
урогенитальную инфекцию, с острым воспалением конъюнктивы, острым 
фарингитом, с проктитом.
Таблица 7
Диагностические характеристики набора реагентов 
«АмплиПрайм® TV/NG/CT»
Тип образцов
Диагности ческая чувствител ьность^ 
(с доверительной вероятностью 
95 %), не менее %
Диагностическая специфичность^, 
(с доверительной вероятностью 
95 %), не менее %
Г. vaginalis N. gonorrh 
oeae
С. trachom 
atis Т. vaginalisN. gonorrh 
oeae
С. tracho 
matis
отделяемое
слизистых
оболочек
урогенитального
тракта
98,1 98,0 98,3 99,1 99,1 99,0
отделяемое 
слизистой 
оболочки прямой 
кишки
- 98,2 98,3 99,4 99,0 99,0
отделяемое
слизистой
оболочки
ротоглотки
- 97,9 - 99,1 98,3 99,1
отделяемое
конъюнктивы - 98,2 98,1 99,1 98,4 98,5
моча 98,2 98,1 98,6 99,2 99,2 99,1
секрет
предстательной
железы
98,9 98,9 98,9 98,9 98,9 98,9
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно­
биологические (ПЦР) исследования биологического материала на наличие 
возбудителей инфекционных болезней, с соблюдением санитарно- 
эпидемиологических правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с 
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями
^ Относительная чувствительность в сравнении с использованным референтным методом. 
®  Относительная специфичность в сравнении с использованным референтным методом.
стр. 10 из 73


--- стр. 11 ---
щ
паразитарных болезней», СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические 
требования к обращению с медицинскими отходами» и методических указаний 
МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы 
амллификации нуклеиновых кислот лри работе с материалом, содержащим 
микроорганизмы I-IV групп патогенности».
При работе необходимо всегда выполнять следующие требования:
- Рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные, организовывать 
работу и хранение в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с 
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями 
паразитарных болезней».
- Убирать и дезинфицировать разлитые образцы или реагенты, используя 
дезинфицирующие средства в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность 
работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и 
возбудителями паразитарных болезней».
- Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. Анализ проводится в 
отдельных помещениях (зонах). Работу следует начинать в Зоне Экстракции, 
продолжать в Зоне Амплификации и Детекции. Не возвращать образцы, 
оборудование и реагенты в зону, в которой была проведена предыдущая стадия 
процесса.
- Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, а также 
использованные реагенты, упаковку, биологический материал, включая 
материалы, инструменты и предметы, загрязненные биологическим материалом, 
следует удалять в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.7.2790-10 
«Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими 
отходами».
ВНИМАНИЕ! При удалении отходов после амплификации (пробирок, содержащих 
продукты ПЦР) недопустимо открывание пробирок и разбрызгивание содержимого, 
поскольку это может привести к контаминации продуктами ПЦР лабораторной зоны, 
оборудования и реагентов.
- Использовать и менять при каждой операции одноразовые наконечники для 
автоматических дозаторов с фильтром®. Одноразовую пластиковую посуду 
(пробирки, наконечники) необходимо сбрасывать в специальный контейнер, 
содержащий дезинфицирующее средство, которое может быть использовано для 
обеззараживания медицинских отходов.
®  Для удаления надосадочной жидкости в процессе экстракции используются одноразовые наконечники 
без фильтра.
стр. 11 из 73


--- стр. 32 ---
Таблица 14
Результаты для контролей различных этапов 
количественного ПЦР-исследования
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 1. КАЧЕСТВЕННЫЙ И КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
Контроль
Контролируемый 
этап ПЦР- 
исследования
Значение порогового 
флуорос
цикла по каналу для 
юра (Ct)
РАМ JOE ROX Су5
ОК Экстракция ДНК отсутствует отсутствует отсутствует
определено
меньше
граничного
К- ПЦР отсутствует отсутствует отсутствует отсутствует
К1 ПЦР определено определено определено определено
К2 ПЦР
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
Возможные ошибки:
1. Для лоложительного контроля ПЦР (К+) значение порогового цикла (Cf) по любому 
из указанных каналов для флуорофоров (см. табл. 12) отсутствует или превышает 
граничное значение. Необходимо повторить амплификацию и детекцию для всех 
образцов.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК):
а) по каналам для флуорофоров РАМ и/или JOE и/или ROX определено 
значение порогового цикла (Cf). Вероятна контаминация лаборатории 
продуктами амплификации или контаминация реагентов, исследуемых 
образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо предпринять 
меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить ПЦР- 
исследование для всех образцов, в которых обнаружена ДНК анализируемых 
микроорганизмов, начиная с этапа экстракции ДНК;
б) по каналу для флуорофора Суб значение порогового цикла (Ct) отсутствует 
или определено больше граничного. Это означает, что ОК не выполнил 
функцию контроля контаминации. Требуется повторное ПЦР-исследование 
всех образцов, в которых обнаружена ДНК анализируемых микроорганизмов, 
начиная с этапа экстракции ДНК.
3. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для флуорофоров РАМ и/или 
JOE и/или ROX определено значение порогового цикла (Cf). Вероятна 
контаминация лаборатории продуктами амплификации или контаминация 
реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. 
Необходимо предпринять меры по выявлению и ликвидации источника 
контаминации и повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в
стр. 32 из 73


--- стр. 33 ---
которых обнаружена ДНК анализируемых микроорганизмов и/или ВКО.
4. При проведении количественного ПЦР-исследования для ДНК-калибратора К1 
отсутствует значение порогового цикла (Cf) по какому-либо из указанных каналов 
для флуорофоров (см. табл. 14). Необходимо повторить амплификацию и 
детекцию для всех образцов.
5. При проведении количественного ПЦР-исследования для ДНК-калибратора К2 
значение порогового цикла {Ct) по какому-либо из указанных каналов для 
флуорофоров (см. табл. 14) отсутствует или превышает граничное значение. 
Необходимо повторить амплификацию и детекцию для всех образцов.
6. При проведении количественного ПЦР-исследования показатель эффективности Е 
при построении калибровочной прямой менее 80 % или более 120 %. Необходимо 
проверить правильность заданных концентраций ДНК-калибраторов в 
соответствии с вкладышем к набору реагентов и правильность выбранного уровня 
пороговой линии. Если при правильно заданных концентрациях ДНК-калибраторов 
и уровне пороговой линии показатель эффективности не укладывается в 
требуемый диапазон, следует повторить амплификацию и детекцию для всех 
образцов.
7. Для исследуемого образца определено значение порогового цикла, при этом на 
графике флуоресценции отсутствует участок характерного экспоненциального 
подъема (график представляет собой приблизительно прямую линию). 
Необходимо проверить правильность выбранного уровня пороговой линии или 
параметров расчета базовой линии. Если результат получен при правильном 
уровне пороговой линии (базовой линии), требуется повторно провести 
амплификацию и детекцию для этого образца.
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 1, КАЧЕСТВЕННЫЙ И КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
стр. 33 из 73


--- стр. 34 ---
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ 2 и 3. КАЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ 2 и 3 («ПЦР-комплект» вариант FEP-100- 
0,2 или FEP-100-0,5)
СОСТАВ
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FEP-100-0,2 или FEP-100-0,5 для
амплификации фрагментов ДНК Т . vaginalis, N. gonorrhoeae  и С. trachomatis с 
гибридизационно-флуоресцентной детекцией «по конечной точке» позволяет 
проводить ПЦР-исследование в качественном формате. Комплект реагентов 
включает:
Реагент Описание Объем,
мл Количество
ПЦР-смесь Т . vaginalis /
N . gonorrhoeae / С. trachomatis
раскапана под воск
Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,01
110 пробирок 
объемом 0,2 
или 0,5 мл
ПЦР-буфер-К Прозрачная жидкость 
красного цвета 1,1 1  пробирка
ПЦР-буфер-А-Фон^® Прозрачная жидкость 
красного цвета 0,6 1  пробирка
К2 complex Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,2 1  пробирка
К- Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,2 1  пробирка
Минеральное масло для ПЦР^^’ Бесцветная вязкая 
жидкость 4,0 1  флакон
Комплект реагентов рассчитан на проведение 110 реакций амплификации, 
включая контроли и фоновые образцы.
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ ПО «КОНЕЧНОЙ ТОЧКЕ»
Для внесения в пробирки реагентов, проб ДНК и контрольных образцов  
используются одноразовые наконечники с фильтрами.
А. Подготовка пробирок для амплификации
Общий объем реакционной смеси - 30 мкл, включая объем пробы ДНК -  
10 мкл.
1. Отобрать необходимое количество пробирок с ПЦР-смесью Т . vaginalis / 
N. gonorrhoeae  / С. trachomatis  для амплификации ДНК исследуемых и 
контрольных образцов (количество контрольных образцов см. в п. 6), а также двух 
образцов «Фон». Убедиться, что воск полностью покрывает раствор на дне 
пробирок. В противном случае, не использовать данные пробирки.
1 6Реагент используется при исследовании проб ДНК, экстрагированных с помощью комплектов для 
экстракции «АмплиПрайм ДНК-сорб-АМ» и «АмплиПрайм® МАГНО-сорб-УРО».
Реагент используется при применении амплификаторов без термостатируемой крышки (например, 
«Терцик», ООО «НПО ДНК-Технология»).
Реагент входит только в состав «ПЦР-комплекта» вариант FEP-100-0,5.
стр. 34 из 73


--- стр. 47 ---
ВНИМАНИЕ! Подробную информацию по расчету значения «число ГЭ ДНК человека 
в 1 мл» смотрите в инструкции по применению набора реагентов для количественного 
определения ДНК человека.
Результат количественного ПЦР-исследования считать достоверным, если  
получены правильные результаты для контролей этапов экстракции и  
амплификации ДНК в соответствии с табл. 25 и вкладышем, прилагаемым к  
набору реагентов.
Таблица 25
Результаты для контролей различных этапов 
количественного ПЦР-исследования
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 4. КАЧЕСТВЕННЫЙ И КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
Контроль
Контролируемый 
этап ПЦР- 
исследования
Значение порогового 
флуорос
цикла по каналу для 
)ора {Ct)
РАМ JOE ROX Су5
ОК Экстракция ДНК отсутствует отсутствует отсутствует
определено
меньше
граничного
К- ПЦР отсутствует отсутствует отсутствует отсутствует
К1 ПЦР определено определено определено определено
К2 ПЦР
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля ПЦР (К+) значение порогового цикла (Cf) по любому 
из указанных каналов для флуорофоров (см. табл. 23) отсутствует или превышает 
граничное значение. Необходимо повторить амплификацию и детекцию для всех 
образцов.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК):
а) по каналам для флуорофоров РАМ и/или JOE и/или ROX определено 
значение порогового цикла (Cf). Вероятна контаминация лаборатории 
продуктами амплификации или контаминация реагентов, исследуемых 
образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо предпринять 
меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить ПЦР- 
исследование для всех образцов, в которых обнаружена ДНК анализируемых 
микроорганизмов, начиная с этапа экстракции ДНК.
б) по каналу для флуорофора Суб значение порогового цикла (Cf) отсутствует 
или определено больше граничного. Это означает, что ОК не выполнил 
функцию контроля контаминации. Требуется повторное ПЦР-исследование
стр. 47 из 73


--- стр. 48 ---
для всех образцов, в которых обнаружена ДНК анализируемых 
микроорганизмов, начиная с этапа экстракции.
3. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для флуорофоров РАМ и/или 
JOE и/или ROX определено значение порогового цикла (Cf). Вероятна 
контаминация лаборатории продуктами амплификации или контаминация 
реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. 
Необходимо предпринять меры по выявлению и ликвидации источника 
контаминации и повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в 
которых обнаружена ДНК анализируемых микроорганизмов и/или ВКО.
4. При проведении количественного ПЦР-исследования для ДНК-калибратора К1 
отсутствует значение порогового цикла (Cf) по какому-либо из указанных каналов 
для флуорофоров (см. табл. 25). Необходимо повторить амплификацию и 
детекцию для всех образцов.
5. При проведении количественного ПЦР-исследования для ДНК-калибратора К2 
значение порогового цикла (Cf) по какому-либо из указанных каналов для 
флуорофоров (см. табл. 25) отсутствует или превышает граничное значение. 
Необходимо повторить амплификацию и детекцию для всех образцов.
6. При проведении количественного ПЦР-исследования показатель эффективности Е 
при построении калибровочной прямой менее 80 % или более 120 %. Необходимо 
проверить правильность заданных концентраций ДНК-калибраторов в 
соответствии с вкладышем к набору реагентов и правильность выбранного уровня 
пороговой линии. Если при правильно заданных концентрациях ДНК-калибраторов 
и уровне пороговой линии показатель эффективности не укладывается в 
требуемый диапазон, следует повторить амплификацию и детекцию для всех 
образцов.
7. Для исследуемого образца определено значение порогового цикла, при этом на 
графике флуоресценции отсутствует участок характерного экспоненциального 
подъема (график представляет собой приблизительно прямую линию). 
Необходимо проверить правильность выбранного уровня пороговой линии или 
параметров расчета базовой линии. Если результат получен при правильном 
уровне пороговой линии (базовой линии), требуется повторно провести 
амплификацию и детекцию для этого образца.
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 4. КАЧЕСТВЕННЫЙ И КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
стр. 48 из 73


--- стр. 49 ---
§ ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 5. КАЧЕСТВЕННЫЙ И КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 5 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L)
СОСТАВ
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-L для амплификации 
фрагментов ДНК Т . vaginalis, N. gonorrhoeae и С. trachomatis с гибридизационно- 
флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» позволяет проводить 
ПЦР-исследование в качественном и количественном формате. Комплект реагентов 
включает:
Реагент Описание Объем, мл Количество
ПЦР-смесь Т . vaginalis/ 
N . gonorrhoeae /
С. trachomatis-Lyo
Порошок белого цвета -
96 пробирок 
объемом 0,2 мл 
или 96-луночный 
планшет для ПЦР
К1 complex Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,5 1  пробирка
К2 complex Прозрачная бесцветная 
жидкость 0.5 1  пробирка
К- Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,5 1  пробирка
Буфер для элюции В Прозрачная бесцветная 
жидкость 1,2 8 пробирок
Комплект реагентов рассчитан на проведение 96 реакций амплификации, 
включая контроли.
К набору реагентов прилагается диск, содержащий руководство оператора  
и программное обеспечение версии 1.0 в формате Microsoft Excel для  
автоматической обработки исходных данных и получения результатов.
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»
Для внесения в пробирки реагентов, проб ДНК и контрольных образцов  
используются одноразовые наконечники с фильтрами.
А. Подготовка пробирок для амплификации
Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, включая объем пробы ДНК -  
25 мкл.
1. Отобрать необходимое количество пробирок или достать 96-луночный планшет 
для амплификации с готовой лиофилизированной реакционной ПЦР-смесью 
Т . vaginalis /  N. gonorrhoeae  / С. trachomatis-Lyo  для амплификации ДНК 
исследуемых и контрольных образцов (количество контрольных образцов см. в 
п. 3).
2. В подготовленные пробирки или лунки планшета внести по 25 мкл проб ДНК, 
полученных в результате экстракции из исследуемых образцов.
стр. 49 из 73


--- стр. 56 ---
Таблица 32
Результаты для контролей различных этапов 
количественного ПЦР-исследования
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 5. КАЧЕСТВЕННЫЙ И КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
Контроль
Контролируемый 
этап ПЦР- 
исследования
Значение порогового 
флуорос
цикла по каналу для 
)ора (Cf)
РАМ JOE ROX Суб
ОК Экстракция ДНК отсутствует отсутствует отсутствует
определено
меньше
граничного
К- ПЦР отсутствует отсутствует отсутствует отсутствует
К1 ПЦР определено определено определено определено
К2 ПЦР
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля ПЦР (К+) значение порогового цикла (Cf) по любому 
из указанных каналов для флуорофоров (см. табл. 30) отсутствует или превышает 
граничное значение. Необходимо повторить амплификацию и детекцию для всех 
образцов.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК):
а) по каналам для флуорофоров РАМ и/или JOE и/или ROX определено 
значение порогового цикла (Cf). Вероятна контаминация лаборатории 
продуктами амплификации или контаминация реагентов, исследуемых 
образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо предпринять 
меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить ПЦР- 
исследование для всех образцов, в которых обнаружена ДНК анализируемых 
микроорганизмов, начиная с этапа экстракции ДНК;
б) по каналу для флуорофора Суб значение порогового цикла (Cf) отсутствует 
или определено больше граничного. Это означает, что ОК не выполнил 
функцию контроля контаминации. Требуется повторное ПЦР-исследование 
для всех образцов, в которых обнаружена ДНК анализируемых 
микроорганизмов, начиная с этапа экстракции ДНК.
3. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для флуорофоров РАМ и/или 
JOE и/или ROX определено значение порогового цикла (Cf). Вероятна 
контаминация лаборатории продуктами амплификации или контаминация 
реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. 
Необходимо предпринять меры по выявлению и ликвидации источника
стр. 56 из 73


--- стр. 57 ---
контаминации и повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в 
которых обнаружена ДНК анализируемых микроорганизмов.
4. При проведении количественного ПЦР-исследования для ДНК-калибратора К1 
отсутствует значение порогового цикла (Ct) по какому-либо из указанных каналов 
для флуорофоров (см. табл. 32). Необходимо повторить амплификацию и 
детекцию для всех образцов.
5. При проведении количественного ПЦР-исследования для ДНК-калибратора К2 
значение порогового цикла (Ct) по какому-либо из указанных каналов для 
флуорофоров (см. табл. 32) отсутствует или превышает граничное значение. 
Необходимо повторить амплификацию и детекцию для всех образцов.
6. При проведении количественного ПЦР-исследования показатель эффективности Е 
при построении калибровочной прямой менее 80 % или более 120 %. Необходимо 
проверить правильность заданных концентраций ДНК-калибраторов в 
соответствии с вкладышем к набору реагентов и правильность выбранного уровня 
пороговой линии. Если при правильно заданных концентрациях ДНК-калибраторов 
и уровне пороговой линии показатель эффективности не укладывается в 
требуемый диапазон, следует повторить амплификацию и детекцию для всех 
образцов.
7. Для исследуемого образца определено значение порогового цикла, при этом на 
графике флуоресценции отсутствует участок характерного экспоненциального 
подъема (график представляет собой приблизительно прямую линию). 
Необходимо проверить правильность выбранного уровня пороговой линии или 
параметров расчета базовой линии. Если результат получен при правильном 
уровне пороговой линии (базовой линии), требуется повторно провести 
амплификацию и детекцию для этого образца.
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 5. КАЧЕСТВЕННЫЙ И КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
стр. 57 из 73


--- стр. 58 ---
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 6 (комплекты реагентов «АмплиПрайм® 
МАГНО-сорб-УРО» и «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 FN»)
СОСТАВ
Комплект реагентов «АмплиПрайм® МАГНО-сорб-УРО» вариант 100С - комплект 
реагентов для экстракции ДНК из биологического материала -  включает:
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 6. КАЧЕСТВЕННЫЙ И КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
Реагент Описание Объем, мл Количество
Лизирующий раствор 
МАГНО-сорб
Прозрачная бесцветная 
жидкость^® 50 1  флакон
Компонент А-1 Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,6 2 пробирки
Раствор для отмывки 7 Прозрачная бесцветная 
жидкость 20 1  флакон
Магнетизированная
силика Суспензия черного цвета 0,6 2 пробирки
Буфер для элюции В Прозрачная бесцветная 
жидкость 1,2 13 пробирок
BKO-FL Прозрачная бесцветная 
жидкость 1,0 2 пробирки
ОКО Прозрачная бесцветная 
жидкость 1,2 2 пробирки
Комллект реагентов вариант ЮОС рассчитан на экстракцию ДНК из 100 проб, 
включая контроли.
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 FN для амплификации 
фрагментов ДНК Т . vaginalis, N. gonorrhoeae и С. trachomatis с гибридизационно- 
флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» позволяет проводить 
ПЦР-исследование в качественном и количественном формате. Комплект реагентов 
включает:
Реагент Описание Объем, мл Количество
ПЦР-смесь Т . vaginalis/
N . gonorrhoeae /  С . trachomatis
Прозрачная бесцветная 
жидкость 1,2 1  пробирка
ПЦР-буфер-Н Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,6 1  пробирка
К1 complex Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,2 1  пробирка
К2 complex Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,2 1  пробирка
К- Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,2 1  пробирка
Комплект реагентов рассчитан на проведение 110 реакций амплификации, 
включая контроли.
35
При хранении лизирующего раствора МАГНО-сорб при температуре ниже 20 °С возможно 
образование осадка в виде кристаллов.
стр. 58 из 73


--- стр. 66 ---
граничное значение. Необходимо повторить амплификацию и детекцию для всех 
образцов.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК):
а) по каналам для флуорофоров РАМ и/или JOE и/или ROX определено 
значение порогового цикла (Cf). Вероятна контаминация лаборатории 
продуктами амплификации или контаминация реагентов, исследуемых 
образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо предпринять 
меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить ПЦР- 
исследование для всех образцов, в которых обнаружена ДНК анализируемых 
микроорганизмов, начиная с этапа экстракции ДНК;
б) по каналу для флуорофора Су5 значение порогового цикла (Ct) отсутствует 
или определено больше граничного. Это означает, что ОК не выполнил 
функцию контроля контаминации. Требуется повторное ПЦР-исследование 
для всех образцов, в которых обнаружена ДНК анализируемых 
микроорганизмов, начиная с этапа экстракции.
3. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для флуорофоров РАМ и/или 
JOE и/или ROX определено значение порогового цикла (С/). Вероятна 
контаминация лаборатории продуктами амплификации или контаминация 
реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. 
Необходимо предпринять меры по выявлению и ликвидации источника 
контаминации и повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в 
которых обнаружена ДНК анализируемых микроорганизмов.
4. При проведении количественного ПЦР-исследования для ДНК-калибратора К1 
отсутствует значение порогового цикла {Cf) по какому-либо из указанных каналов 
для флуорофоров (см. табл. 39). Необходимо повторить амплификацию и 
детекцию для всех образцов.
5. При проведении количественного ПЦР-исследования для ДНК-калибратора К2 
значение порогового цикла (Cf) по какому-либо из указанных каналов для 
флуорофоров (см. табл. 39) отсутствует или превышает граничное значение. 
Необходимо повторить амплификацию и детекцию для всех образцов.
6. При проведении количественного ПЦР-исследования показатель эффективности Е 
при построении калибровочной прямой менее 80 % или более 120 %. Необходимо 
проверить правильность заданных концентраций ДНК-калибраторов в 
соответствии с вкладышем к набору реагентов и правильность выбранного уровня 
пороговой линии. Если при правильно заданных концентрациях ДНК-калибраторов
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 6. КАЧЕСТВЕННЫЙ И КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
стр. 66 из 73


--- стр. 67 ---
7
и уровне пороговой линии показатель эффективности не укладывается в 
требуемый диапазон, следует повторить амплификацию и детекцию для всех 
образцов.
7. Для исследуемого образца определено значение порогового цикла, при этом на 
графике флуоресценции отсутствует участок характерного экспоненциального 
подъема (график представляет собой приблизительно прямую линию). 
Необходимо проверить правильность выбранного уровня пороговой линии или 
параметров расчета базовой линии. Если результат получен при правильном 
уровне пороговой линии (базовой линии), требуется повторно провести 
амплификацию и детекцию для этого образца.
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 6. КАЧЕСТВЕННЫЙ И КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
стр. 67 из 73


--- стр. 68 ---
СРОК г о д н о с т и . УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и  ХРАНЕНИЯ 
Срок годности. 12 мес. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению не 
подлежит. Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку годности, 
указанному на этикетках для невскрытых реагентов.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до 
8 °С не более 5 сут. Долускается транспортирование при температуре от 2 до 25 °С 
не более 3 сут. Комплект реагентов «АмплиПрайм® МАГНО-сорб-УРО» и «ПЦР- 
комплект» вариант FRT-100, вариант FEP-100-0,2, вариант FEP-100-0,5 и вариант 
FRT-100 FN лри получении разукомплектовать в соответствии с указанными 
температурами хранения.
Хранение.
Форма комплектации 1. Комллект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 
хранить при температуре от 2 до 8 °С, кроме ПЦР-буфера-К. ПЦР-буфер-К хранить 
при температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-смесь Т . vaginalis/
N . gonorrhoeae/С . trachomatis хранить в защищенном от света месте.
Форма комплектации 2. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FEP-100-0,2 
хранить при температуре от 2 до 8 °С, кроме ПЦР-буфера-К. ПЦР-буфер-К хранить 
при температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-смесь Т . vaginalis/
N . gonorrhoeae /  С . trachomatis хранить в защищенном от света месте.
Форма комплектации 3. Комплект реагентов «ПЦР-комллект» вариант FEP-100-0,5 
хранить при температуре от 2 до 8 °С, кроме ПЦР-буфера-К. ПЦР-буфер-К хранить 
при температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-смесь Т . vaginalis/
N . gonorrhoeae /  С . trachomatis хранть в защищенном от света месте.
Форма комплектации 4. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 FN 
хранить при температуре от 2 до 8 °С, кроме ПЦР-буфера-Н. ПЦР-буфер-Н хранить 
при температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-смесь Т . vaginalis/ 
N. gonorrhoeae /  С . trachomatis хранить в защищенном от света месте.
Форма комплектации 5. Комплект реагентов «ПЦР-комллект» вариант FRT-L хранит ь 
при температуре от 2 до 8 °С. ПЦР-смесь Т . vaginalis/N. gonorrhoeae /
С . trachomatis-Lyo хранить в пакетах с влагопоглотителем в защищенном от света 
месте.
Форма комплектации 6. Комллект реагентов «АмллиПрайм® МАГН10-сорб-УРО» 
хранить при температуре от 2 до 25 °С, кроме BKO-FL. BKO-FL хранить при 
температуре от 2 до 8 °С. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 FN 
хранить при температ уре о т  2 до 8 °С , кроме ПЦР-буфера-Н. ПЦР-буфер-Н хранить
с т р . 68 из 73


--- стр. 69 ---
% #
при температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-смесь Т . vaginalis/ 
N . gonorrhoeae /  С . trachomatis хранить в защищенном от света месте.
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ПРОИЗВОДИТЕЛЯ
Производитель гарантирует соответствие основных параметров и характеристик 
набора реагентов, требованиям, указанным в технической и эксплуатационной 
документации, в течение указанного срока годности при соблюдении всех условий 
транспортирования, хранения и применения.
Рекламации на качество набора реагентов «АмплиПрайм® TV/NG/CT» направлять 
в адрес производителя ООО «НекстБио» (111394 г. Москва, ул. Полимерная, 8 
стр. 2) в отдел по работе с рекламациями (тел. (495) 620-08-73, e-mail: 
info@nextbio.ru).
При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по применению 
набора реагентов, нежелательных реакций при его использовании, фактов и 
обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских 
работников при применении и эксплуатации набора реагентов, рекомендуется 
направить сообщение в отдел по работе с рекламациями по адресу, указанному 
выше, и в уполномоченную государственную регулирующую организацию (в РФ - 
Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения) в соответствии с 
действующим законодательством.
Согласовано:
Главный врач
ФГБУЗ ГЦГ и Э ФМБА России С.А. Богдан
стр. 69 из 73


--- стр. 70 ---
символы, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ
REF
LOT
IVD
VER
I
ы Л
I
1
Номер в каталоге V
Максимальное 
число тестов
Код партии Использовать до
Изделие для in vitro 
диагностики т
Обратитесь к 
руководству по 
эксплуатации
Дата изменения
Не допускать 
попадания 
солнечного света
Ограничение
температуры Дата изготовления
Производитель
f
Беречь от влаги
Хрупкое. Осторожно tt Верх
стр. 70 из 73


--- стр. 72 ---
— г
11. Добавить в пробирки по 200 мкл раствора для отмывки 7, плотно закрыть 
крышки.
12. Смыть магнетизированную силику перемешиванием на вортексе, затем осадить 
капли на вортексе.
13. Переставить пробирки в обычный штатив, открыть крышки и переставить в 
магнитный штатив на 1 мин.
14. Отобрать надосадочную жидкость, аналогично п. 10. Перенести пробирки в 
обычный штатив.
15. Высушить магнетизированную силику, оставив пробирки с открытыми крышками 
на магнитном штативе в течение 10 мин.
16. Добавить в пробирки по 100 мкл буфера для элюции В, перемешать на 
вортексе.
ВНИМАНИЕ! В случае проведения амплификации с использованием «ПЦР- 
комплекта» вариант FRT-L необходимо проводить элюцию ДНК в 250 мкл буфера 
для элюции в .
17. Поместить пробирки в термостат с температурой 60° С на 5 мин.
18. Осадить капли на вортексе и переставить пробирки в магнитный штатив на 
2 мин. Надосадочная жидкость содержит очищенную ДНК. Пробы готовы к 
постановке ПЦР.
ВНИМАНИЕ! Отбор очищенных ДНК для проведения ПЦР осуществляется без 
снятия пробирок с магнитного штатива.
Очищенная ДНК может храниться при температуре от 2 до 8 °С в течение недели, 
при температуре от минус 24 до минус 16 °С в течение 6 мес и при температуре не 
выше минус 68 °С в течение года. Для этого необходимо, не захватывая 
магнетизированную силику, перенести надосадочную жидкость в стерильную 
пробирку.
стр. 72 из 73


--- стр. 73 ---
Лист вносимых изменений
Редакция Место внесения 
изменений Суть вносимых изменений
29.09.15
По тексту Исправлены опечатки
Дополнительные 
материалы и 
оборудование
Уточнено, что комплект расходных материалов для 
автоматической станции для экстракции НК должен 
соответствовать инструкции Производителя
Меры предосторожности
Дополнены сведения об описание утилизации или 
уничтожения упаковки, биологического материала, 
включая материалы, инструменты и предметы, 
загрязненные биологическим материалом с 
отдельным описанием правил
Диагностические
характеристики
Изменены значения диагностических характеристик 
(специфичности и чувствительности) на значения, 
полученные в результате клинико-лабораторных 
испытаний, с доверительной вероятностью 95%
стр. 73 из 73


--- стр. 74 ---


--- стр. 78 ---
Рис.1.
Данные прибора
3|ииение Ct
NK Образец Green Yellow Orange Red Globin
ГАМ HEX/JOE Rox Су5
Т.*. N * сд. вко Globin
1 1 25 30 33 35
2 2 25 25 25 25
3 3 25 30 33
4 4 30 33
5 5 20 33
Б 6 15 30 33
По окончанию размещения исходных данных и их обозначения произвести 
расчет путем нажатия кнопки «Рассчитать».
□01.0, используя исходные данные, проводит автоматическое построение 
калибровочных линий и расчет концентрации специфических мишеней. Программа 
автоматически проводит сверку полученных значений контрольных образцов с 
заданным диапазоном согласно инструкции к набору реагентов.
УСЛОВИЯ ВЫПОЛНЕНИЯ АВТОМАТИЧЕСКОЙ ОБРАБОТКИ ИСХОДНЫХ  
ДАННЫХ И ПОЛУЧЕНИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Для автоматической обработки исходных данных и получения достоверных 
результатов необходимо соблюдать следующие условия:
1) Заполнение таблицы «Данные с прибора» (см. рис.1) должно проводиться без 
ошибок, с соответствующим обозначением контрольных образцов.
2) Поле «Вкладыш к набору реагентов» должно быть заполнено в строгом 
соответствии с вкладышем к используемой серии набора реагентов.
3) Необходимо убедиться, что система безопасности Microsoft Excel позволяет 
использовать макросы. В меню Сервис>Макрос>Безопасность установите 
«Средний уровень защиты».
стр. 4 из 8


--- стр. 79 ---
ИЗОБРАЖЕНИЯ НА ЭКРАНЕ МОНИТОРА КОМПЬЮТЕРА ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ 
ПРОГРАМНОГО ОБЕСПЕЧЕНИЯ
ПОЮ и руководство оператора по применению представлены пользователю 
на диске (оптическом носителе -  mini CD).
Внешний вид:
Параметры
П о а м ш п
И нф ормация о постановке
Ла^з гсс'*а-овм.г
Oreca-ct iTUP
Сериа ’'збсса 11«агегтм1
Серия набора реагетттов для количесгаеппого 
отелелепма QMK человека
_____________________DEsSse _____________________
Вкладыш к набору реагентов
Зиамеииа аонцентрвцнй калибраторов, ГЭ/мл
Green Yellow Огапве Red Globin
РАМ НЕХ/Ю Е Rox CyS
К1
К2
Грамиииые aiHMeiaia пороголого цикла (Ct)
Green
РАМ
Yellow
НЕХ/Ю Е
Orange
Rox
Red
Су5
К2,К+
OK
Исследу&ма1«
обоаэц»
Д о п у с т и и л ы е  з н а ч е н и я  ю м щ е м т р а ц и й
Минимальные значения количества клеток в 1мл
Калибровка
Калмбрчм
Green
М М
Рмулмтатм 1И 11н6ромсм
Yeiom
н в у ю е
Отпде
Яох
6 к > Ы п
Коэффициент корреляции R*2
Эффективность Е
Статус калибровки
Данные прибора
Данные прибора
Знамение Ct
N> Образец Green Yellow Orange Red Globin
РАМ НЕХ/Ю Е Rox CyS
Тл. Me. C.t. BKO Globin
1 1
2 2
3 3
4 ...
стр. 5 из 8


--- стр. 80 ---
Результаты
Результаты
Концентрации (ГЭ ДНК/ыл) Концентрации (ГЭ 
AHK/10*5iuieTO«) мсимю 
няспю м 
че/ювемав 1 
мл
с т а т у сGreen
FAM
T.V.
Yellow
НЕХ/Ю Е
К *
Orange
Rax
C t.
Globin
Globin
Green
FAM
T.V.
Yellow
HEX/JOE
N i.
Orange
Rox
C t.
Кнопки управления
О чм стить исхо д ны е да1и<ыв О чисти ть рассче тн ы е д а н т м О чи сти ть сахр аи е и ную  калибровку
ВЫПОЛНЕНИЕ АВТОМАТИЧЕСКОМ ОБРАБОТКИ ИСХОДНЫХ ДАННЫХ И  
ПОЛУЧЕНИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
1. Проверить, что система безопасности Microsoft Excel позволяет использовать 
макросы.
Для Microsoft Excel 2003 следует выполнить следующие действия: во вкладке 
Меню выбрать «Сервис» > «Макрос» > «Безопасность» и установить Средний 
уровень защиты.
2. Открыть файл с ПОЮ, принять включение макросов.
3. Заполнить таблицу «Граничные значения порогового цикла (Ct)» путем 
копирования данных непосредственно из программного обеспечения прибора, 
либо из файла экспорта данных в Microsoft Excel. Значения пороговых циклов 
прописать для соответствующих каналов амплификации, приведенных в 
таблице.
4. Внести или вставить обозначения исследуемых образцов в столбец 
«Образец» поля «Данные прибора».
5. Обозначить образцы, соответствующие калибраторам, строго как К1, К2. Язык 
и регистр букв значения не имеет.
6. Ввести информацию о постановке.
7. Сохранить файл под другим именем.
8. Нажать клавишу «Рассчитать»
В файле будут отражены полученные калибровочные линии, расчетные 
данные, результаты (наличие/отсутствие возбудителя) и статус валидности 
образца, определяющийся количеством клеток человека.
9. Проверить, что калибровка проведена успешно.
стр. 6 из 8


--- стр. 81 ---
10. Просмотреть статус образцов, особое внимание обратить на контрольные 
образцы.
ВНИМАНИЕ! Программное обеспечение автоматически проверяет наличие 
контрольных образцов и калибраторов в постановке. В случае отсутствия 
калибратора К1 и сохраненных данных предыдущей калибровки, система проведет 
анализ постановки в качественном формате. При наличии данных для 
калибраторов К1 и К2 расчет постановки проводится в количественном формате.
СООБЩЕНИЯ ОПЕРАТОРУ 
Результаты
Результаты анализа выдаются в следующем виде:
Коицентраци» ДНК/мя) Коиц^мрацим (ГЭ 
ДНК/ШЧшккж) к о л - в с 
к л е т о к 
ч е л о в е к а  в  1 
мл
ш а т ^Green
FAM
Т.¥.
Yellow
НЕХ/Ю Е
It*.
Orange
Rox
CX
Globin
Globln
Green
FAM
Тл.
Yellow
HEVJOE
N*.
Orange
Rox
CX
1Д+04 <2,E«J3 <2.E« )3 Обнаружено ДНК: T.w., Ng., CX
1,Е-Ю4 1,E«J4 1,E«M Обнаружено ДНК: T.v., Ng., C.t.
1.Е-Ю4 <2,E«J 3 Обнаружено ДНК: T.v., Ng.
<2,Е+Ш Обнаружено ДНК: Ng.
б,Е-Ю5 Обнаружено ДНК: T.v.
>1,Е+07 <2Д«)3 Обнаружено ДНК: T.v., С.С
В столбце «статус» выводятся результаты анализа в качественном формате. 
В случае, если образец не укладывается в заданные критерии валидности, его 
статус выдается как «Невалидный». Необходим повторный анализ данного 
образца.
В столбце «Концентрация (ГЭ ДНК/мл)» выводятся количественные 
результаты для каждого выявляемого возбудителя. В случае, если для образца 
получен результат более или менее линейного диапазона измерения, 
количественные данные представляются в виде «> линейного диапазона» и 
«< линейного диапазона» соответственно. В случае отсутствия возбудителя в 
образце соответствующее поле в таблице результатов остается пустым.
При использовании набора реагентов для количественного определения ДНК 
человека, возможен вывод количественных результатов с нормировкой на 
количество клеток человека в столбце «Концентрация (ГЭ ДНК/10''5 клеток)».
стр. 7 из 8


--- стр. 82 ---
Интерпретация контрольных образцов.
В случае успешного прохождения контрольных образцов, в столбце статус 
выдается сообщение «Ок». Если контрольный образец не укладывается в заданные 
критерии, статус меняется на «Сбой!».
При проведении количественного анализа дополнительно проверяются 
параметры построения калибровочных прямых по каждому каналу флуоресцентной 
детекции. Статус калибровки «Ок» соответствует успешному построению 
калибровочной прямой, статус «Сбой!» означает, что калибровочная прямая не 
может быть построена по данному каналу, возможен только качественный анализ 
результатов.
Кали€рорка
Результаты  калибровки
вгееп
FAM
Yellow
HEX/JOe
O range
Лох
6!оЫ п
Коэффициент корреляции RA2
1 1 1
Эффективность Е
1Д544М7 1,1544347 1,15443469
Статус калибровки
oil Ok Ok
Дополнительные сообщения
В случае если данных для количественного расчета постановки недостаточно 
(например, отсутствуют калибраторы), программное обеспечение выдает 
следующие сообщение:
\г .-Ш 4Miaosoft Excel
В иассихе даиных калибровка не валидна|, будет проиаец||ена попытка 
расчета данных по сохраненным значениям калибровки.
ОК ]
Если предыдущая постановка набора реагентов данной серии содержала 
необходимые калибраторы и контроли, и была проведена успешная калибровка, 
система автоматически использует параметры калибровки предыдущей постановки 
для количественного расчета текущей. В случае если системе не удается найти 
данные предыдущей успешной калибровки, возможен анализ результатов только в 
качественном формате, выдается следующее сообщение:
Microsoft btcgl
Сбой калибровки, будет произведена попытка качественного расчета данных 
(Globin не рассматривается).
ОК
стр. 8 из 8


--- стр. 83 ---
Пронумеровано, прошито и скреплено
^ _лист (аУов)
Общества с ограниченной 
" тветствещйУ5^Я)й. «НекстБио» -
ктор Управляющей
8К»
,Л. Симачева