Реагенты диагностические вспомогательные in vitro для иммуноцитохимии — инструкция и характеристики

РУ: ФСЗ 2008/02512 от 22.08.2008 · класс риска 1

Производитель: "Диагностик БиоСистемс, Инк." (Соединенные Штаты)

Вид изделия: Моющий/чистящий раствор ИВД, для ручного оборудования · Каппа/лямбда легкие цепи иммуноглобулинов ИВД, антитела · Фибриноген (фактор I) ИВД, антитела

В госконтрактах 44-ФЗ: 72 контракта, медианная цена за единицу 68 670 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 7 ---
Инструкция к блокиратору 
неспецифического осадка; Background
Blocker (IX)
(Блокирующий реагент для положительно заряженных тканей и поверхностей)
Номер по каталогу: К 023
Емкость: 100 мл
Использование по 
назначению:
Введение:
Хранение:
Данный продукт предназначен для блокирования 
неспецифичного фонового окрашивания, наблюдаемого в 
течение иммуноокрашивания.
Background Blocker (фоновый блокатор) - уникальный не 
содержащий иммунной сыворотки раствор, используемый 
для снижения неспецифичного фонового окрашивания, 
наблюдаемого в процессе выполнения иммуноокрашивания. 
Background Blocker - универсальный блокирующий агент, т.к. 
снимает необходимость соблюдения соответствия вида со 
связующим антителом. Данный блокирующий агент
превосходит растворы, содержащие иммунную сыворотку. 
Background Blocker может использоваться для
иммуноферментного твердофазного анализа (ELISA) и 
методик вестерн-блоттинга, помимо иммуногистохимии.
Хранить охлажденным.
Методика использования: 1. Депарафинировать и смочить водой предметные стекла.
2. По желанию заблокировать активность пероксидазы 
водорода.
3. Отмыть фрагменты тканей в промывочным буфере.
4. Нанести несколько капель Background Blocker, чтобы 
полностью покрыть фрагменты тканей. Инкубировать в 
течение 20-40 мин. при комнатной температуре.
5. Удалить избыток Background Blocker и нанести первичные 
антитела, не моя предметные стекла.
Компания DBS не несет ответственность за нарушение патентного права или другие нарушения, которые могут  
иметь место в процессе применения данного препарата.
DBS


--- стр. 8 ---
Инструкция к раствору пепсина; Solution
Pepsin
Стабилизированный раствор пепсина
Номер по каталогу: К 009
Емкость: 50 мл
Использование по
назначению: Данный продукт предназначен для демаскирования
иммунореактивных участков, видоизмененных фиксацией или 
заливочной средой.
Введение: Фиксация -  один из самых критических аспектов
иммуноокрашивания. Если антиген должным образом не 
зафиксирован, он будет вымыт из образца. С другой стороны, 
сверхпрочное связывание может вызвать серьезные 
проблемы, типа маскировки или денатурации антигена. 
Формальдегид является, вероятно, наилучшим 
распространенным фиксативом из-за своих свойств вступать 
в перекрестное сшивание. Длина фиксации является очень 
важной для предотвращения маскировки антигена. 
Иммуноглобулины особенно восприимчивы к сверхпрочному 
связыванию с формалином. В таких случаях, требуется 
обработка протеолитическим ферментом, чтобы расщепить 
лишние альдегидные связи и экспонировать антиген.
Хранение: Хранить охлажденным. Не использовать по истечении срока
хранения, указанного на флаконе.
Проведение разложения:
1. Депарафинировать образцы тканей и перенести их в буфер.
2. Удалить излишки буфера со стекла, не допуская подсыхания 
образца ткани.
3. В зависимости от размера фрагмента ткани, добавить 1 или 
2 капли раствора пепсина.
4. Инкубировать стекла в течение 20-40 мин. при 37^С.
5. Отмыть стекла в промывочным буфере и перейти к 
иммуноокрашиванию.
Компания DBS не несет ответственность за нарушение патентного права или другие нарушения, которые могут  
иметь место в процессе применения данного препарата.
DBS 1020 Serpentine Lane, # 114, Pleasanton, CA 94566 Тел.: 925 484 3350, Ф,
Веб-сайт: www.dbiosvs.com e-mail: customersui
Л.
5dbiosys.com


--- стр. 9 ---
Инструкция к разбавителю первичных  
антител; Primary antibody diluent
(с восстановителем)
Номер по каталогу: К 004
Использование по
назначению: Этот продукт может использоваться в качестве разбавителя
для приготовления как растворов с первичными антителами, 
так и негативных контрольных проб. Этот разбавитель может 
использоваться с любыми первичными антителами, 
независимо от источника их происхождения. Разбавитель 
первичных антител разработан специально для
стабилизации первичных антител, а также для
восстановления неспецифического фонового окрашивания, 
наблюдаемого в течение иммуноокрашивания.
Введение: Для получения оптимального окрашивания крайне важно
правильное проведение разбавления и выбор 
соответствующего разбавителя. Ионная сила, pH фактор 
среды и наличие или отсутствие детергентов могут повлиять 
на как на процесс связывания, так и на устойчивость 
первичных антител. Оптимальный уровень кислотности, 
наряду с присутствием стабилизирующих протеинов в 
разбавителе первичных антител, гарантирует их 
максимальную стабильность. Наш разбавитель первичных 
антител содержит оптимальные концентрации хлорида 
натрия и детергентов для предотвращения образования 
неспецифических связываний и, соответственно, обеспечения 
лучшего проникновения первичных антител. Разбавитель 
первичных антител специально разработан для разбавления 
первичных антител в иммуногистохимии.
Форма выпуска: 
Хранение:
Подготовка реагента:
Методика применения:
250 мл готового к использованию буферного раствора. 
Хранить при 2-8°С.
Довести разбавитель до комнатной температуры и 
тщательно перемешать перед использованием. Дальнейшей 
подготовки не требуется.
i) Налить разбавитель в чистую стеклянную емкость.
ii) Добавить концентрированные первичные антитела 
непосредственно в разбавитель и тщательно перемешать.
ii) Разбавленные антитела готовы к использованию и 
должны храниться при 2-8°С для последующего 
применения.
Избегать попадания на одежду, кожу или в глаза. При 
случайном контакте промыть большим количеством воды. Не 
отмеривать ртом. Следуйте местным инструкциям для 
утилизации.
Компания DBS не несет ответственность за нарушение патентного права или другие нарушения, которые могут  
иметь место в процессе применения данного препарата.
1020 Serpentine Lane, # 114, Pleasanton, СА 94566 Тел.: 925 484 3350,  <
Веб-сайт: www.dbiosvs.com e-mail: customersu
Меры предосторожности:
DBS


--- стр. 19 ---
Инструкция к иммуноглобулину Е - ФИТЦ;
IgE-FITC
Католожный номер: 
Иммуноген:
Состав:
Титр/Рабочее разведение:
Протокол окраски:
Специфичность:
Условия хранения:
F 011
IgE выделеный из человеческой сыворотки пациента с IgE - 
миеломой.
Очищенная фракция иммуноглобулина кроличьей 
антисыворотки, конъюгированной с изомером 1 
изотиоцианата флуоресцина, содержащего азид натрия в 
качестве консерванта.
Эти антитела могут быть разведены до титра 1:10-1:20 для 
иммунофлюоресцирующей техники. Тем не менее, завися от 
условий использования окрашивания, мы предлагаем 
конечное разведение определить использующему.
Мы предлагаем инкубационный период 30-60 минут при 
комнатной температуре. Тем не менее, в зависимости от 
условий связывания оптимальное инкубационное состояние 
может быть определено использующим.
Эти антитела реагируют с эпсилон цепью человеческого IgE. 
Следы контаминирующих антител были устранены 
твердофазной абсорбцией на белках человеческой плазмы. 
Эти антитела хорошо подходят для окрашивания среза ткани, 
но также могут применяться в других целях.
Хранить антитела в тёмном месте при температуре 2 -  8 С. 
Не использовать после истечения срока, указанного на 
упаковке.
DBS will not be held responsible for patent infringement or other violation that may occur with the use of our product.
DBS 1020 Serpentine Lane, # 114, Pleasanton, CA 94566 Tel: 925 484  ;
Website: www.dbiosvs.com e-mail: customersupportfcbdbios
J


--- стр. 20 ---
Инструкция к фосфатному буферу в 
таблетках, 100 таб/уп.; PBS Tablets, 100
tablets
1родукт: Солевые таблетки для фосфатного буфера
1омер по каталогу: DMR Е404-01
внешний вид: Белые вогнутые таблетки
Спецификация: Растворите 1 таблетку в 100 мл деионизиованной воды. pH
фактор конечного раствора будет 7,4+/- 0,1.
Раствор содержит:
Хлорид натрия 81,1%
Фосфат натрия 14,0%
Хлорид калия 2,0%
Фосфат калия 2,9%
ранение: Хранить при комнатной температуре. Хранить в защищенном
от влаги и света месте.
1еры предосторожности: Предназначено только для лабораторного и последующего
производственного использования. Не предназначено для 
хозяйственных целей. Избегать контакта с кожей.
Фмпания DBS не несет ответственность за нарушение патентного права или другие нарушения, которые могут  
иметь место в процессе применения данного препарата.
)BS 1020 Serpentine Lane, # 114, Pleasanton, CA 94566 Тел.: 925 484 3350, Факс: 925 484 3390
Веб-сайт: www.dbiosvs. com e-mail: customersupport@dbiosys.com


--- стр. 21 ---
Инструкция к цитратному буферу pH 6.0 х
10 концентрированный; 10 X Citrate buffer,
рНб.О
Номер по каталогу: К 035
Использование по
назначению: Восстановить скрытые антигены виду их чрезмерно прочного
поперечного молекулярного связывания в фиксаторах типа 
формалина.
Введение:
Форма выпуска:
Хранение:
Приготовление препаратов:
Для выполнения иммуноокрашивания образцы тканей должны 
быть закреплены соответствующим фиксирующим раствором. 
Цель такой фиксации состоит в предохранении ткани от автолиза, 
сохранении ее структуры и иммобилизации антигенов. Однако это 
требует жесткого обращения с антигенами. В результате антигены 
претерпевают химическое изменение своих первичных, вторичных 
и третичных структур. Из-за изменений в протеиносодержащих 
антигенных детерминантах или в соседних протеинах места 
скоплений антигенов могут быть скрыты. В прошлом для 
восстановления скрытых антигенов использовалась 
ферментативная обработка протеолитическими ферментами, т.е. 
пепсином, трипсином или проназой. В работе Shi и др. (1991) 
приводятся сведения, что обработка фрагмента ткани раствором 
тяжелых металлов в микроволновой печи может значительно 
восстановить скрытые антигены. Однако тяжелые металлы в 
растворе увеличивают риск воздействия свинца на персонал 
лаборатории. Чтобы решить эту проблему, мы разработали новый 
таблетированный раствор для выявления скрытых антигенов, не 
содержащий тяжелых металлов. Использование этого раствора 
для выявления скрытых антигенов может предотвратить риск 
ненужной экспозиции персонала лаборатории, а также решить 
проблемы перемещения и утилизации.
10Х буферный раствор соли лимонной кислоты, pH фактор 6.0. 
Хранить при комнатной температуре.
Растворение одной часть буфера девятью частями 
дистиллированной воды.
Методика проведения: 1. Депарафинировать и перенести образцы ткани в буфер.
2. Заполнить пластмассовую банку (coplin jar) раствором для 
выявления скрытых антигенов.
3. Поместить банку в пропариватель или на водяную баню.
4. Предварительно разогреть пропариватель или водяную баню, 
содержащую банки, до 95-100 С.
5. Поместить депарафинированные предметные стекла (1-3 
стекла/банку) в банку и инкубировать в течение 20-40 мин. 
(оптимальное время инкубации должно быть определено конечным 
пользователем).
6. Вынуть банки из водяной бани и дать предметным стеклам 
остыть в течение 20 мин. до комнатной температуры.
7. Отмыть предметные стекла в деионизированной воде, а затем в 
промывочном буфере и перейти к иммуноокрашиванию.
Ссылка: Shi et al. J Histochem Cytochem 39: 741, 1991.
Компания DBS не несет ответственность за нарушение патентного права или другие нарушения, которые могут  
иметь место в процессе применения данного препарата.


--- стр. 60 ---
Инструкция к Фаст ред таблеткам, 20 
таблеток; Fast Red Tablets, 20 tablets
Продукт: таблетки быстрого красного TR солевые
(аталожный номер: DMR 0440Т
Назначение:
Использование:
Условия хранения:
Таблетки Быстрого красного используются как хромоген для 
иммуногистохимических систем на щелочной фосфатазе 
(ALP). ALP гидролизует эфиры фосфата нафтола на 
фенольные составляющие и фосфаты. Фенолы 
взаимодействуют с бесцветными солями диазониума с 
образованием нерастворимого цветного азокрасителя. 
Быстрый красный образует конечный продукт красного цвета.
1) Вынуть таблетки с контейнером из холодильника и 
оставить при комнатной температуре на 10-15 минут.
2) Взять 4,75 мл дистилированной воды. Добавить 250 рл 
буфера и смешать.
3) добавить 1 таблетку к 5 мл буфера. Дождаться 
растворения таблетки.
4) добавить 50 цл нафтола AS-MX и смешать.
Хранить охлажденным. В сухом месте. Перед 
использованием нагреть до комнатной температуры.
Меры предосторожности: Применять только в лобораторных условиях. Обладает 
щовитым и канцерогенным действием. Избегать контакта с кожей. Использовать только с 
адекватной вентиляцией.
)BS will not be held responsible for patent infringement or other violation that may occur with the use of our product.
1020 Serpentine Lane, # 114, Pleasanton, CA 94566 Tel: 925 484 3350, Fax: 925 484 3390
Website: www.dbiosvs.com e-mail: customersupport@dbiosys.com
DBS


--- стр. 61 ---
Инструкция к ДАБ хромогенный субстрат
набору (20 таблеток); DAB
Chromogen/substrate kit 20 tab
Номер по каталогу: 
Использование по 
назначению:
Введение:
Принцип:
Компоненты:
Хранение комплекта: 
Рабочий раствор:*
К 001
Использовать как субстрат/хромоген в ассоциированных с пероксидазой 
системах иммуноокрашивания.
Хромоген DAB особенно подходит для проведения окрашивания 
иммунопероксидазой. Его хорошо приняли патологи ввиду лучших 
характеристик по сравнению с амино этилом карбазолом (АЭК). DAB 
чувствительнее и дает более прозрачный фон по сравнению с АЭК. 
Образцы, окрашенные DAB, можно дегидратировать в этаноле и очистить в 
ксилоле, а также поместить на предметное стекло для регулярных 
гистологических срезов. Однако ввиду его канцерогенной природы 
некоторые лаборатории избегают использовать порошок DAB. Для 
решения этой проблемы нами разработан DAB в таблетированной форме 
для минимизации экспозиции лабораторного персонала частичкам DAB. 
Пероксидаза вступает в реакцию разложения с субстратом Н 2 О2 , который, 
в свою очередь, реагирует с DAB с осаждением последнего на участках 
позитивного обнаружения с темно коричневым.
i) 20 таблеток концентрированного буферного раствора хромогена DAB.
ii) 1  мл 3% субстрата Н2 О2 .
Хранить при 4 - 8° С.
i) Набрать в пробирку 5 мл дистиллированной или де-ионизированной 
воды.
ii) Добавить одну таблетку DAB. Оставить на 1  мин., встряхивать пробирку 
до растворения.
iii) Добавить 1  каплю капли раствора 3% субстрата Н2 О2 и перемешать.
* Рабочий раствор хромогена стабилен в течение 2 часов. Любой раствор, не использованный 
в течение этого периода, нужно вылить.
Методика проведения: i) После инкубации образцов тканей с пероксидазой тщательно отмыть их
в буфере.
ii) Удалить излишки буферного раствора со стекла и накапать рабочий 
раствор DAB, чтобы он покрывал все образцы тканей.
iii) Инкубировать 2-5' при NT. Для получения лучших результатов, 
рассмотреть под микроскопом до появления сигнала. После получения 
желаемого сигнала для шумового коэффициента остановить реакцию, 
сполоснув стекла промывочным буферным раствором.
O tC T tA
BlQ lY V EO )*£Y jj>t£N V S
Меры
зредосторожности: DAB классифицируется как потенциальный канцероген и при попадании на
кожу может вызывать раздражение. Избегать попадания на одежду и 
незащищенную кожу. При случайном контакте промыть большим 
количеством воды. Следуйте местным инструкциям для утилизации.
Компания DBS не несет ответственность за нарушение патентного права или другие нарушения, которые могут  
иметь место в процессе применения данного i
DBS 1020 Serpentine Lane, # 114, Pleasanton, CA 94566
Веб-сайт: www.dbiosvs.com  e-i
484 3390 
dbiosys.com


--- стр. 62 ---
Инструкция к АЕК хромогенный субстрат
набору; АЕС Chromogen/substrate kit
Номер по каталогу: 
Использование по 
назначению:
Введение:
Принцип:
Компоненты:
Хранение комплекта: 
Рабочий раствор:*
К 003
Использовать как субстрат/хромоген в ассоциированных с пероксидазой 
системах иммуноокрашивания.
Несмотря на то, что DAB намного более чувствительный хромоген по 
сравнению с карбазолом (амино этилом карбазолом (АЭК)), ввиду его 
канцерогенной природы, некоторые лаборатории избегают использовать 
DAB. Для решения этой проблемы нами разработан хромоген АЭК в 
жидкой форме. Хромоген АЭК особенно подходит для проведения 
окрашивания иммунопероксидазой. Его хорошо приняли патологи ввиду 
относительно малой токсичности по сравнению с DAB. Он дает 
окрашивание в красный цвет конечного продукта на участках позитивного 
обнаружения, что дает резкий контраст при контрастном синем 
окрашивании. Образцы, окрашенные АЭК, не дегидратируются в этаноле, 
и, следовательно, должны помещаться в гистологическую среду на водной 
основе типа среды С/С (Номер по каталогу К 002).
Пероксидаза вступает в реакцию разложения с субстратом Н 2 С>2 , который, 
в свою очередь, реагирует с АЭК с осаждением последнего на участках 
позитивного обнаружения и приданием красно коричневого окрашивания 
конечному продукту.
i) 3 мл концентрированного буферного раствора.
i) 3 мл концентрированного хромогена АЭК.
ii) 3 мл 3% субстрата Н 2 О2 .
Хранить при 2 - 8° С.
i) Набрать в пробирку 5 мл дистиллированной или де-ионизированной 
воды.
ii) Добавить две капли концентрированного буферного раствора и 
перемешать.
iii) Добавить две капли концентрированного хромогена АЭК и перемешать,
iii) Добавить две капли раствора 3% субстрата Н 2 О2 и перемешать.
* Рабочий раствор хромогена стабилен в течение 6 часов. Любой раствор, не использованный 
в течение этого периода, нужно вылить.
Летодика проведения: i) После инкубации образцов тканей с пероксидазой, тщательно отмойте
их в буфере.
ii) Удалить излишки буферного раствора со стекла и накапать рабочий 
раствор АЭК, чтобы он покрывал все образцы тканей.
iii) Инкубировать 10-20' при NT. Для получения лучших результатов, 
рассмотреть под микроскопом до появления сигнала. После получения 
желаемого сигнала для шумового коэффициента остановить реакцию, 
сполоснув стекла промывочным буферным раствором.
1еры
редосторожности: Раствор АЭК при попадании на кожу вызывает раздражение. Избегать
попадания на одежду и незащищенную кожу. При случайном контакте 
промыть большим количеством воды. Следуйте местным инструкциям 
для утилизации.
Компания DBS не несет ответственность за нарушение патентного права или другие нарушения, которые могут  
иметь место в процессе применения данного препарата.
//-’/ ,,-млелМКАЛ \ ?  \\
Г) D C
^  L J  \ J  1020 Serpentine Lane, # 114, Pleasanton, CA 94566 Тел.: 925 484 3350, Факс: 925 484 3390
Веб-сайт: www.dbiosvs.com e-mail: customersupport@dbiosys.com


--- стр. 63 ---
Инструкция к БСИП/НБТ хромогенный
субстрат набору; BCIP/NBT
Chromogen/substrate kit
Номер по каталогу: 
Использование по 
назначению:
Введение:
Принцип:
Компоненты: 
Хранение комплекта:
Методика
использования:
Меры
предосторожности:
К 006
Использовать как субстрат/хромоген в ассоциированных со щелочной 
фосфатазой системах иммуноокрашивания.
Щелочная фосфатаза, фермент, полученный из бычьей кишечной слизистой 
оболочки, часто используется как маркер при гибридизации in situ,  в 
иммуногистохимии, южной и северной гибридизации и секвенировании 
ДНК. Обнаружение этого фермента требует использования нерастворимого 
окрашенного субстрата. DBS вводит новый стабильный раствор BCIP/NBT 
в готовой к использованию форме. Он дает конечный продукт, окрашенный 
в синий цвет на участках положительного обнаружения, который хорошо 
контрастирует с красным ядерным противоположно направленным 
быстрым окрашиванием. Образцы, окрашенные BCIP/NBT, не 
дегидратируются в этаноле, и, следовательно, должны помещаться в 
гистологическую среду на водной основе типа среды С/С (Номер по 
каталогу К 002).
Щелочная фосфатаза отщепляет фосфатную группу от BCIP, чтобы создать 
осадительную индоксиловую группу. Эта группа затем димеризуется с 
восстановлением NBT и темно-синим нерастворимым конечным продуктом 
формазаном.
15 мл стабильного готового к использованию раствора.
Хранить при 2 - 8° С. Не использовать по истечении срока хранения, 
указанного на флаконе.
i) После инкубации образцов тканей со щелочной фосфатазой, тщательно 
отмыть их в буфере.
ii) Удалить излишки буферного раствора со стекла и накапать достаточное 
количество раствора BCIP/NBT, чтобы он покрывал все фрагменты 
тканей.
iii) Инкубировать 10-30' при NT. Для получения лучших результатов, 
рассмотреть под микроскопом до появления сигнала. После получения 
желаемого сигнала для шумового коэффициента остановить реакцию, 
сполоснув стекла промывочным буферным раствором.
Ядовит. При попадании внутрь вызывает серьезные повреждения или 
смерть. Избегать попадания на одежду и незащищенную кожу. При 
случайном контакте промыть большим количеством проточной 
водопроводной воды. Следуйте местным инструкциям для утилизации.
Компания DBS не несет ответственность за нарушение патентного права или другие нарушения, которые могут
DBS
иметь место в процессе применения данного препарата.
1020 Serpentine Lane, # 114, Pleasanton, CA 94566 Тел.: 925 484 3350, Факс: 925 484 3390  
Веб-сайт: www.dbiosvs.com e-mail: customersupport@dbiosys.com
SYSTEMSIW


--- стр. 64 ---
Инструкция к жидкому ДАБ; Liquid DAB
Жидкая форма
1омер по каталогу: К 007
{спользование по
[азначению: Использовать как субстрат/хромоген в ассоциированных с пероксидазой
системах иммуноокрашивания.
!ведение: Хромоген DAB особенно подходит для проведения окрашивания
иммунопероксидазой. Его хорошо приняли патологи ввиду лучших 
характеристик по сравнению с амино этилом карбазолом (АЭК). DAB 
чувствительнее и дает более прозрачный фон по сравнению с АЭК. 
Образцы, окрашенные DAB, можно дегидратировать в этаноле и очистить в 
ксилоле, а также поместить на предметное стекло для регулярных 
гистологических срезов. Однако, ввиду его канцерогенной природы, 
некоторые лаборатории избегают использовать порошок DAB. Для 
решения этой проблемы нами разработан DAB в жидкой форме для 
минимизации экспозиции лабораторного персонала частичкам DAB.
[ринцип: Пероксидаза вступает в реакцию разложения с субстратом Н 2 С >2, который,
в свою очередь, реагирует с DAB с осаждением последнего на участках 
позитивного обнаружения с темно коричневым.
компоненты: i) 10 мл концентрированного буферного раствора хромогена DAB.
ii) 200 мл буферсодержащего субстрата.
iii) 1  пустой флакон для смешивания.
[ранение комплекта: Хранить при 2-8° С. Каждый компонент стабилен 12 месяцев от даты 
выработки.
абочий раствор:* Налить 1  мл буферсодержащего субстрата во флакон для смешивания.
Добавить 50 мкл (2 капли) концентрированного DAB. Закупорить и 
перемешать.
* Рабочий раствор хромогена стабилен в течение 6 часов. Любой раствор, не использованный 
в течение этого периода, нужно вылить.
1етодика проведения: i) После инкубации образцов тканей с пероксидазой тщательно отмыть их
в буфере.
ii) Удалить излишки буферного раствора со стекла и накапать рабочий 
раствор DAB, чтобы он покрывал все образцы тканей.
iii) Инкубировать 5-15 мин. при NT. Для получения лучших результатов, 
рассмотреть под микроскопом до появления сигнала. После получения 
желаемого сигнала для шумового коэффициента остановить реакцию, 
сполоснув стекла промывочным буферным раствором.
1еры
редосторожности: DAB классифицируется как потенциальный канцероген и при попадании на
кожу может вызывать раздражение. Избегать попадания на одежду и 
незащищенную кожу. При случайном контакте промыть большим 
количеством воды. Следуйте местным инструкциям для утилизации.
Компания DBS не несет ответственность за нарушение патентного права или другие нарушения, которые могут
иметь место в
DBS
процессе применения данного npenaf
1020 Serpentine Lane, # 114, Pleasanton, CA 94566 Тел.: 925 484 3350, Факс: 925 484 3390  
Веб-сайт: www.dbiosvs.com e-mail: customersupport@dbiosys.com
Is


--- стр. 65 ---
нструкция к СС - среде для заключения;
CC/Mount
Водная постоянная монтирующая гистологическая среда
лер по каталогу: К 002
гость: 30 мл
юльзование по 
начению: Этот продукт предназначен для постоянного монтирования 
образцов тканей, окрашенных системами на основе 
пероксидазы и щелочной фосфатазы, так же как различными 
флуоресцентными красителями.
эдение: АЭК (АЕС) и Fast Red -  самые широко распространенные 
хромогены для системам иммуноокрашивания на основе 
пероксидазы и щелочной фосфатазы соответственно. 
Однако стекла, окрашенные этими хромогенами, не могут 
постоянно храниться вследствие нехватки постоянной 
водной гистологической среды с высоким показателем 
преломления, CC/Mount была разработана для 
нивелирования этих ограничений. CC/Mount - водная 
гистологическая среда с очень высоким показателем 
преломления, которая при использовании с окрашенными 
фрагментами тканей может сохранить их образцы постоянно 
без выцветания хромогенов. Из-за очень высокого 
показателя преломления CC/Mount, ткани, помещенные в эту 
среду, выглядят как дегидратированные образцы. С 
CC/Mount никаких покровных стекол не требуется. Однако 
если требуется наложение покровного стекла, высушенная 
CC/Mount может быть повторно монтирована с 
использованием гистологической среды на органической 
основе. CC/Mount обладает многочисленными 
преимуществами: никаких покровных стекол, никакого 
экспонирования органическим парам, постоянное хранение 
стекол и с высокое разрешение образцов тканей. CC/Mount -  
совместима с такими хромогенами, АЕС, DAB, Fast Red, 
BCIP/NBT, BCIP/INT и флуоресцентными красками типа FITC 
и фикобилипротеинами. Высокий pH фактор CC/Mount 
гарантирует увеличенную стабильность флюоресценции.
анение: Хранить при комнатной температуре. Не хранить в 
холодильнике.
, ‘ тодика проведения монтирования:
1. Снимите красный колпачок с культурального флакона и
срежьте кончик острым лезвием или ножницами. Это 
поможет равномерно нанести CC/Mount и предотвратит 
образование крошечных пузырьков из-за сжатия.
2. Поместите перевернутый культуральный флакон в контейнер 
перед использованием CC/Mount. Это поможет очистить 
CC/Mount от крошечных пузырьков.
VsOV


--- стр. 98 ---
го первичного антитела, используйте буфер, в котором первичное антитело было растворено. 
1ьзуют ткань, в которой точно не содержится желательный антиген.
)бируйте первичное антитело с соответствующим антигеном и используйте это вместо первичного 
а.
эл окраски:
Наг 1. Удаление парафина: Депарафинизация секции ткани согласно установленному 
в вашей лаборатории и перенос ткани в отмывочный буфер.
Наг 2. Блокирование эндогенной щелочной фосфатазы. Добавьте достаточное количество 
опель блокиратора, чтобы закрыть ткань. Инкубируйте в течение 5 минут при комнатной 
гемпературе. Используйте 0,3% Н 2О2 для замороженных срезов ткани, мазков клеток и взвеси 
слеток.
Наг 3. Отмывка: удалите избыток реактива. Прополощите отмывочным буфером три раза по 1 
ождый раз. Удалите избыток буфера и тщательно вытрите стекло вокруг ткани, чтобы удалить 
буфера со стекла, оставляя ткань влажной, 
ол иммуноокраски:
гокол рекомендуется для оптимально фиксированных тканей с избыточным содержанием антигенов в 
ля высоко аффинных первичных антител.
liar 1. Первичное антитело: Добавьте достаточное количество капель первичного антитела, чтобы закрыть 
срез. Инкубируйте 10 минут при комнатной температуре. Вымойте, и вытрите стекла как описано выше. 
Даг 2. Соединяющий реактив: Добавьте достаточное количество капель соединяющего реактива, чтобы 
;рез ткани. Инкубируйте в течение 10 минут при комнатной температуре. Вымойте стекла как описано
ДагЗ. Индикаторный реактив: Примените достаточное количество капель индикаторного реактива, чтобы 
-каневой срез. Инкубируйте в течение 10 минут при комнатной тепературе. Вымойте срезы как описано
Даг 4. Субстрат/Хромоген: Примените раствор хромогена в течение 10-20 минут при комнатной 
■уре для окрашивания. Для достижения лучших результатов, смотрите в микроскоп за развитием 
ания. После того, как желательная окраска достигнута, остановите реакцию, моя срез в промывочном 
Обратите внимание на время, и следите за этим в течение последующих инкубаций, 
кол иммуноокраски:
этокол рекомендуется для менее оптимально фиксированных тканей с низкой антигенной 
тью в ткани и для низкоаффинных первичных антител.
Даг 1: Первичное антитело: Добавьте достаточное количество капель первичного антитела, чтобы 
гканевой срез. Инкубируйте согласно рекомендуемым условиям изготовления. Вымойте, и
срезы как описано выше.
Даг 2: Соединяющий реактив: Добавьте достаточное количество капель соединяющего реактива, чтобы 
:рез ткани. Инкубируйте в течение 20 минут при комнатной температуре. Вымойте срезы как описано выше. 
Даг 3. Индикаторный реактив: Примените достаточное количество капель индикаторного реактива, чтобы 
гканевой срез. Инкубируйте в течение 20 минут при комнатной температуре. Вымойте срезы как описано
Даг 4. . Субстрат/Хромоген: Примените раствор хромогена в течение 5-15 минут при комнатной 
■уре для окрашивания. Для достижения лучших результатов, смотрите в микроскоп за развитием окраски, 
го, как желательная окраска достигнута, остановите реакцию, моя срез в промывочном буфере. Обратите 
з на время, и следите за этим в течение последующих инкубаций.
Даг 5. Вымойте срезы и окрасьте их достаточным количеством краски. Наблюдайте за 
энием окраски под микроскопом.
: Bayer et al., Method Enzymol. 62, 308 (1979).
Chaiet & Wolf, Arch. Biochem. Biophys. 106, 1 (1964).
Giorno, Diag. Immuno. 2, 161 (1984).
Hsu et al., J Histo. Cyto. 29, 577 (1981).
Nadji & Morales, Anat. pathol. 14, 767 (1983).
Nagle et al. J Histo. Chem. 31, 1010 (1983).
Larsson, Applied Immunohistochem. 1,2, (1993).
Petrusz & Ordronneau, In Polak & Van noorden eds., Immunocytochemistry:
Practical applications in pathology and biology. Bristol wright- PSG, 212, (1983).
3t be held responsible for patent infringement or other violation that may occur with the use of our product.
1020 Serpentine Lane, # 114, Pleasanton, CA 94566 Tel: 925 484 3350, Fax: 925 484 3390
Website: www.dbiosvs.com e-mail: customersupport@dbiosys.com
Y P \  SYST EM S L id
\ l\ \


--- стр. 99 ---
Инструкция к системе детекции: 
пероксидазный кроличий набор (АЕК);  
Peroxidase rabbit kit (АЕС)
азначение: Этот комплект разработан для иммуногистохимической маркировки 
1ецифичных первичных антител в тканевом срезе. Иммуногстохимический протокол, 
эдержащийся в этой брошюре, только руководство. В зависимости от условий фиксации 
:ани, первичных антител, опыта работы, мы поддерживаем индивидуальные 
абораторные испытания для уточнения собственного протокола. Эти реагенты были 
эотестированы с проверкой качества при использовании тканевого среза, тем не менее, 
ни могут быть использованы для клеточных мазков и взвеси клеток. Количество реагентов 
наборе обеспечивает проведение от 50 до 100 тестов.
ринцип теста: : Высокий аффинитет нековалентного взаимодействия между биотином 
стрептавидином ( 1* 1015) формирует базис для этого иммуноокрашивания. Требуется 
эразование необратимых и специфических связей между биологическими 
акромолекулами. Иммуногистохимическое применение взаимодействия между авидином и 
потином представлено в книге Bayer et al. (1979), где описана техника для создания 
стивных соединений биотинила, таких как биотин-1М-гидроксисукцинимид и гидразин 
ютина для их конъюгирования с различными органическими соединениями, включая 
лмукоглобулины и пероксидазу хрена (HRP). Стрептавидин (SA) - это тетрамерный протеин 
олярный вес 4*15,000), выделенный из actinobacterium Streptomyces (Chaiet & wolf, 1964). 
грептавидин может связывать до четырёх молекул биотина. Стрептавидин даёт 
>евосходные результаты в сравнение с авидином, потому что его изоэлектрическая точка 
1изка к нейтральной pH, в то время как авидин положительно заряжен при 
изиологической pH. Стрептавидин не содержит боковых цепочек карбогидрата, в то время 
к авидин включает 70% карбогидрата. По этой причине Стрептавидин не имеет 
нденции к неспецифическому связыванию. Первичные антитела связывают антигены- 
гшени в тканевом срезе. Конъюгированные вторичные антитела специфически 
язываются с этими рецепторами антител. Биотин-конъюгированные вторичные антитела, 
;вою очередь, маркируются конъюгированным со стрептовидином энзимом и могут быть 
зуализированы соответствующим субстратом/хромогеном. 
ведение: Иммунопероксидазные техники быстро распространяются и в практике 
танатомии подвергаются революционному изменению, начиная с развития этих процедур 
adji & Morales, 1983). Благодаря их многосторонности, чувствительности и специфичности, 
!мунопероксидазное окрашивание всегда даёт лучшее окрашивание при наличии 
дходящих антител. С всё увеличивающимся числом антител против клеточных антигенов, 
1мунопероксидазные методы теперь дают мощное средство для решения широкого 
ектра диагностических патологий. Все иммуногистохимические методы требуют наличия 
ределенного антитела для соединения с клеточным антигеном. В то же самое время 
зствительность иммунопероксидазных методов является самым важным в широком 
знообразии определения локализации специфических антигенов. Различные 
:ледователи (Petrusz et al., 1983; Nagle et al. 1983; Giorno et al., 1984) показали, что прямая SA- 
P техника конъюгации является от 4 до 8 раз более чувствительной чем, авидин- 
тиновый комплекс, описанный Hsu et al. (1981). Наш комплект основан на прямой SA- 
3 технологии конъюгации. Соединяющий реактив - биотинированный анти-кроличий 
понент, что дает возможность маркировки первичных антител, выделенных из кролика. 
1ктивы:
тыль: Реагент пероксидазы: прозрачный раствор. 10 мл раствора 3% перекиси
водорода (Н 2О2) в воде для блокировки активности эндогенной пероксидазы. 
гыль: Связывающий реактив: Желтый раствор. 10 мл раствора биотинированных
анти-кроличьих иммуноглобулинов.
ъть: Индикаторный реактив: Красный раствор. 10 мл раствора конъюгированной
стрептавидин-пероксидазы хрена.
\ \ ° \  SYSTEM S Ltd  JS/J


--- стр. 100 ---
ss
№
Детекторный реактив: Буфер: 1.5 мл концентрированного буфера.
Хромоген: 1.5 мл концентрированного АЕС хромогена. 
Субстрат: 1.5 мл 3% раствора перекиси водорода .
Меры предосторожности:
I) АЕС, классифицировалось как возможное канцерогенное
вещество и может быть причиной раздражения кожи после 
контакта. Избегайте контакта с одеждой и незащищённой 
кожей. В случае контакта, немедленно промойте большим 
количеством воды.
II) Несколько из реактивов в этом комплекте содержат азид 
натрия. Следуйте инструкции вашего предприятия. Если 
располагался в раковине, смойте струей воды в трубу, для 
избежания контакта азида натрия с трубой канализации.
III) Если вы начали процесс иммуноокрашивания, не 
позволяйте секциям ткани высохнуть, потому что это может 
привести к нежелательному фону и артефактам.
IV) Интерпретация данных результатов будет ответственностью 
пользующегося.
/словия хранения: Все реагенты должны храниться при температуре 2-8 С. Не 
замораживать.
Гребуемый материал не входящий в состав комплекта:
Ксилен или депарафинизирующий раствор 
Спирт
Дистиллированная или деионизированная вода 
Краска
Моющий буфер (Кат # К 005)
Монтирующая среда (Кат # К 002)
Духовка или инкубатор 
Фляги для окраски 
Стекла 
Микроскоп 
Алмазный карандаш 
Подушечки Абсорбента 
Первичные антитела 
Подготовка Экземпляра:
4ель иммуогистохимии состоит в том, чтобы локализовать, идентифицировать и, когда это 
юзможно, количественно определить элементы клетки и ткани. Оптимальная фиксация 
жани - ключ к хорошему иммуноокрашиванию. Успешное иммуноокрашивание зависит от 
■очного сохранения эпитопов, разыскиваемых в его структурном контексте. Мы 
эекомендуем нашим пользователям прочитать превосходную статью относительно 
юдготовки ткани Larsson (1993), чтобы понять потребность и важность оптимальной 
фиксации ткани.
Подготовка реагентов:
За исключением хромогена, все реагенты в этом комплекте готовы к использованию 
Подготовка Субстрата/Хромогена:
1) Добавьте 5 мл деионизированной или дистиллированной воды в испытательную 
ёмкость.
2) Добавьте 2 капли концентрированного буфера и перемешайте.
3) Добавьте 2 капли АЕС в растворённый буфер и перемешайте.
4) Добавьте 2 капли Н202 и перемешайте.
Этот хромоген устойчив по крайней мере 2 часа. Любой раствор, не используемый в 
ечение этого периода должен быть уничтожен 
Положительный и отрицательный контроль:
S V c -t
С\о>


--- стр. 101 ---
ждая реакция иммуноокрашивания должена включить известный положительный и 
отрицательный контроль, чтобы проверить надлежащее функционирование 
окрашивающей системы, также как и для интерпретации верных результатов.
тожительный контроль: ткань которая содержит желательный антиген, и дала 
положительное окрашивание в прошлом.
рицательный контроль: Один из нижепредложеного варианта должен использоваться в 
качестве отрицательного контроля:
Зместо первичного антитела, используйте нормальную неиммунную сыворотку от той же 
самой разновидности животного, из которого первичное антитело было взято. 
Вместо первичного антитела, используйте буфер, в котором первичное антитело было 
растворено.
Используют ткань, в которой точно не содержится желательный антиген.
Адсорбируйте первичное антитело с соответствующим антигеном и используйте это 
вместо первичного антитела, 
ютокол окраски:
Шаг 1. Удаление парафина: Депарафинизация секции ткани согласно 
установленному порядку в вашей лаборатории и перенос ткани в отмывочный
фер.
Шаг 2. Блокирование эндогенной щелочной фосфатазы. Добавьте достаточное
количество капель блокиратора, чтобы закрыть ткань. Инкубируйте в течение 5
минут при комнатной температуре. Используйте 0,3% Н202 для замороженных
срезов ткани, мазков клеток и взвеси клеток.
Шаг 3. Отмывка: удалите избыток реактива. Прополощите отмывочным буфером 
1 раза по 1 минуте каждый раз. Удалите избыток буфера и тщательно вытрите стекло 
круг ткани, чтобы удалить избыток буфера со стекла, оставляя ткань влажной, 
ротокол иммуноокраски:
эт протокол рекомендуется для оптимально фиксированных тканей с избыточным содержанием 
■игенов в ткани и для высоко аффинных первичных антител.
Шаг 1. Первичное антитело: Добавьте достаточное количество капель первичного антитела, 
>бы закрыть тканевой срез. Инкубируйте 10 минут при комнатной температуре. Вымойте, и 
грите стекла как описано выше.
Шаг 2. Соединяющий реактив: Добавьте достаточное количество капель соединяющего 
актива, чтобы закрыть срез ткани. Инкубируйте в течение 10 минут при комнатной температуре, 
мойте стекла как описано выше.
Шаг 3. Шаг 3. Индикаторный реактив: Примените достаточное количество капель 
щкаторного реактива, чтобы закрыть тканевой срез. Инкубируйте в течение 10 минут при 
шатной температуре. Вымойте срезы как описано выше.
Шаг 4. Субстрат/Хромоген: Примените раствор хромогена в течение 10-20 минут при 
шатной температуре для окрашивания. Для достижения лучших результатов, смотрите в 
;роскоп за развитием окрашивания. После того, как желательная окраска достигнута, остановите 
1кцию, моя срез в промывочном буфере. Обратите внимание на время, и следите за этим в 
ение последующих инкубаций, 
ротокол иммуноокраски:
эт протокол рекомендуется для менее оптимально фиксированных тканей с низкой 
-игенной плотностью в ткани и для низкоаффинных первичных антител.
Шаг 1: Первичное антитело: Добавьте достаточное количество капель первичного 
итела, чтобы закрыть тканевой срез. Инкубируйте согласно рекомендуемым условиям 
этовления. Вымойте, и вытрите срезы как описано выше.
Шаг 2: Соединяющий реактив: Добавьте достаточное количество капель соединяющего 
1ктива, чтобы закрыть срез ткани. Инкубируйте в течение 20 минут при комнатной температуре, 
мойте срезы как описано выше.
Шаг 3. Индикаторный реактив: Примените достаточное количество капель индикаторного 
1ктива, чтобы закрыть тканевой срез. Инкубируйте в течение 20 минут при комнатной
тературе. Вымойте срезы как описано выше. Ltd
> в т Г :Го'
*


--- стр. 102 ---
Инструкция к системе детекции: 
пероксидазный мышиный и кроличий  
набор (ДАБ таблетки); Peroxidase mouse &  
rabbit kit (DAB tablets)
Назначение: Этот комплект разработан для иммуногистохимической маркировки 
специфичных первичных антител в тканевом срезе. Иммуногстохимический протокол, 
содержащийся в этой брошюре, только руководство. В зависимости от условий фиксации 
гкани, первичных антител, опыта работы, мы поддерживаем индивидуальные 
лабораторные испытания для уточнения собственного протокола. Эти реагенты были 
протестированы с проверкой качества при использовании тканевого среза, тем не менее, 
эни могут быть использованы для клеточных мазков и взвеси клеток. Количество реагентов 
з наборе обеспечивает проведение от 50 до 100 тестов.
Принцип теста: Высокий аффинитет нековалентного взаимодействия между биотином и 
стрептавидином ( 1* 1015) формирует базис для этого иммуноокрашивания. Требуется 
эбразование необратимых и специфических связей между биологическими 
макромолекулами. Иммуногистохимическое применение взаимодействия между авидином и 
Зиотином представлено в книге Bayer et al. (1979), где описана техника для создания 
активных соединений биотинила, таких как биотин-Ы-гидроксисукцинимид и гидразин 
Зиотина для их конъюгирования с различными органическими соединениями, включая 
шмуноглобулины и пероксидазу хрена (HRP). Стрептавидин (SA) - это тетрамерный протеин 
молярный вес 4*15,000), выделенный из actinobacterium Streptomyces авидином.(Chaiet & wolf,
1964). Стрептавидин может связывать до четырёх молекул биотина. Стрептавидин даёт 
аревосходные результаты в сравнение с авидином, потому что его изоэлектрическая точка 
злизка к нейтральной pH, в то время как авидин положительно заряжен при 
физиологической pH. Стрептавидин не содержит боковых цепочек карбогидрата, в то время 
:ак авидин включает 70% карбогидрата. По этой причине Стрептавидин не имеет 
■енденции к неспецифическому связыванию. Первичные антитела связывают антигены- 
мишени в тканевом срезе. Конъюгированные вторичные антитела специфически 
:вязываются с этими рецепторами антител. Биотин-конъюгированные вторичные антитела,
I свою очередь, маркируются конъюгированным со стрептовидином энзимом и могут быть 
(изуализированы соответствующим субстратом/хромогеном.
Введение:
1ммунопероксидазные техники быстро распространяются и в практике патанатомии 
юдвергаются революционному изменению, начиная с развития этих процедур (Nadji & 
4orales, 1983). Благодаря их многосторонности, чувствительности и специфичности, 
1Ммунопероксидазное окрашивание всегда даёт лучшее окрашивание при наличии 
юдходящих антител. С всё увеличивающимся числом антител против клеточных антигенов, 
1ммунопероксидазные методы теперь дают мощное средство для решения широкого 
:пектра диагностических патологий. Все иммуногистохимические методы требуют наличия 
тределенного антитела для соединения с клеточным антигеном. В то же самое время 
|увствительность иммунопероксидазных методов является самым важным в широком 
>азнообразии определения локализации специфических антигенов. Различные 
юследователи (Petrusz et al., 1983; Nagle et al. 1983; Giorno et al., 1984) показали, что прямая SA- 
1RP техника конъюгации является от 4 до 8 раз более чувствительной чем, авидин- 
(иотиновый комплекс, описанный Hsu et al. (1981). Наш комплект основан на прямой SA- 
1RP технологии конъюгации. Соединяющий реактив - биотинированный анти-мышиный 
омпонент, что дает возможность маркировки первичных антител, выделенных из мыши, 
э be so labeled that they can be easily seen when attached to cellular antigens. At the same time the 
ensitivity of the immunoperoxidase techniques are central to wide variety of specific antigen localization. 
Various investigators (Petrusz et al., 1983; Nagle et al. 1983; Giorno et al., 1984) have shown that direct 
SA-HRP conjugate technique is 4 to 8 times more sensitive than, avidin-biotin complex described by Hsu et


--- стр. 103 ---
il. (1981). Our kit is based on direct SA-HRP conjugate technology. The linker reagent is a cocktail of
>iotinylated anti-mouse and anti-rabbit, and thus capable of labeling primary antibodies raised in mouse
ind rabbit simultaneously.
эеактивы:
I бутыль: Реагент пероксидазы: чистый раствор. 10 мл раствора 3% перекиси
водорода (Н202) в воде для блокировки активности эндогенной пероксидазы.
Субстрат: 1 мл 3% раствора Н202.
Леры предосторожности:
вещество и может быть причиной раздражения кожи после 
контакта. Избегайте контакта с одеждой и незащищённой 
кожей. В случае контакта, немедленно промойте большим 
количеством воды.
натрия. Следуйте инструкции вашего предприятия. Если 
располагался в раковине, смойте струей воды в трубу, для 
избежания контакта азида натрия с трубой канализации.
III) Если вы начали процесс иммуноокрашивания, не 
позволяйте секциям ткани высохнуть, потому что это может 
привести к нежелательному фону и артефактам.
IV) Интерпретация данных результатов будет ответственностью 
пользующегося.
'словия хранения: Все реагенты должны храниться при температуре 2-8 С. Не 
замораживать.
'ребуемый материал не входящий в состав комплекта:
Ксилен или депарафинизирующий раствор 
Спирт
Дистиллированная или деионизированная вода 
Краска
Моющий буфер (Кат # К 005)
Монтирующая среда (Кат # К 002)
Духовка или инкубатор 
Фляги для окраски 
Стекла 
Микроскоп 
Алмазный карандаш 
Подушечки Абсорбента 
Первичные антитела 
Absorbent pads 
Primary antibodies
1одготовка Экземпляра:
Дель иммуогистохимии состоит в том, чтобы локализовать, идентифицировать и, когда это 
юзможно, количественно определить элементы клетки и ткани. Оптимальная фиксация 
кани - ключ к хорошему иммуноокрашиванию. Успешное иммуноокрашивание зависит от 
очного сохранения эпитопов, разыскиваемых в его структурном контексте. Мы 
юкомендуем нашим пользователям прочитать п п р я п г .х п л н \ /ю  г т я т ь ю  п т н п г .м т я п ь н п
! бутыль: Связывающий реактив: Желтый раствор. 10 мл раствора биотинированных
анти-мышиных и анти-кроличьих иммуноглобулинов.
I бутыль: Индикаторный реактив: Красный раствор. 10 мл раствора конъюгированной
стрептавидин-пероксидазы хрена.
Детекторный реактив: Хромоген: 10 таблеток диаминобензидина (DAB) с буфером.
I) DAB классифицировалось как возможное канцерогенное
II) Несколько из реактивов в этом комплекте содержат азид
5а исключением хромогена, все реагенты в эл
юдготовки ткани Larsson (1993), чтобы понять 
фиксации ткани.
Подготовка реагентов:


--- стр. 112 ---
otocol is recommended for optimally fixed tissues with abundant antigens in the tissue and for high
primary antibodies.
Primary antibody: Apply enough drops of primary antibody to cover the tissue 
section. Incubate according to the manufacture's recommended conditions.
Wash and wipe slides as described above.
Linker reagent: Apply enough drops of linker reagent to cover the tissue section.
Incubate for 10 min at room temperate. Wash slides as described previously.
I Tracer Reagent: Apply enough drops of tracer reagent to cover the tissue
section. Incubate for 10 min at room temperature. Wash slides as described previously.
J Substrate/Chromogen: Apply working chromogen solution for 5-8 min at room
temperature for color development. For the best results, look under the 
microscope for the signal development. Once desired signal to noise ratio is 
achieved, stop the reaction by washing the slide in the wash buffer. Note the 
development time and follow it during the subsequent incubations.
>токол иммуноокраски:
протокол рекомендуется для менее оптимально фиксированных тканей с низкой 
енной плотностью в ткани и для низкоаффинных первичных антител.
Шаг 1: Первичное антитело: Добавьте достаточное количество капель первичного 
ела, чтобы закрыть тканевой срез. Инкубируйте согласно рекомендуемым условиям 
эвления. Вымойте, и вытрите срезы как описано выше.
Шаг 2: Соединяющий реактив: Добавьте достаточное количество капель соединяющего 
ива, чтобы закрыть срез ткани. Инкубируйте в течение 20 минут при комнатной температуре. 
)йте срезы как описано выше.
Шаг 3. Индикаторный реактив: Примените достаточное количество капель индикаторного 
гива, чтобы закрыть тканевой срез. Инкубируйте в течение 20 минут при комнатной 
ературе. Вымойте срезы как описано выше.
Шаг 4. . Субстрат/Хромоген: Примените раствор хромогена в течение 2-5 минут при 
атной температуре для окрашивания. Для достижения лучших результатов, смотрите в 
оскоп за развитием окраски. После того, как желательная окраска достигнута, остановите 
цию, моя срез в промывочном буфере. Обратите внимание на время, и следите за этим в 
ние последующих инкубаций.
Шаг 5. Вымойте срезы и окрасьте их достаточным количеством краски. Наблюдайте 
акреплением окраски под микроскопом, 
тки: Bayer et al., Method Enzymol. 62, 308 (1979).
Chaiet & Wolf, Arch. Biochem. Biophys. 106, 1 (1964).
Giorno, Diag. Immuno. 2, 161 (1984).
Hsu et al., J Histo. Cyto. 29, 577 (1981).
Nadji & Morales, Anat. pathol. 14, 767 (1983).
Nagle et al. J Histo. Chem. 31, 1010 (1983).
Larsson, Applied Immunohistochem. 1,2, (1993).
Petrusz & Ordronneau, In Polak & Van noorden eds., Immunocytochemistry: 
Practical applications in pathology and biology. Bristol wright-PSG, 212, (1983).
; will not be held responsible for patent infringement or other violation that may occur with the use of our product.
^ B S  1020 Serpentine Lane, # 114, Pleasanton, CA 94566 Tel: 925 484 3350, Fax: 925 484 3390
Website: www.dbiosvs.com e-mail: customersupport@dbiosys.com


--- стр. 113 ---
Инструкция к системе детекции: 
пероксидазный мышиный набор (ДАБ  
таблетки); Peroxidase mouse kit (DAB
tablets)
Назначение: Этот комплект разработан для иммуногистохимической маркировки 
:пецифичных первичных антител в тканевом срезе. Иммуногистохимический протокол, 
;одержащийся в этой брошюре, только руководство. В зависимости от условий связывания 
■канью, использующихся первичных антител, мы поддерживаем индивидуальные 
вменения для уточнения собственного протокола. Эти реагенты были протестированы и 
:ачество проверено с использованием тканевого среза, тем не менее, они могут быть 
точнены для клеточных мазков и для взвеси клеток. Количество реагентов обеспечивает 
фоведение от 50 до 100 тестов.
Тринцип теста: Высокий аффинитет нековалентного взаимодействия между биотином и 
трептавидином ( 1* 1015) формирует базис для этого иммуноокрашивания. Требуется 
>бразование необратимых и специфических связей между биологическими 
1акромолекулами. Иммуногистохимическое применение взаимодействия между авидином и 
1Иотином представлено в книге Bayer et al. (1979), где описана техника для создания 
наивных соединений биотинила, таких как биотин-1М-гидроксисукцинимид и гидразин 
|Иотина для их конъюгирования с различными органическими соединениями, включая 
ммуноглобулины и пероксидазу хрена (HRP). Стрептавидин (SA) - это тетрамерный протеин 
полярный вес 4*15,000), выделенный из actinobacterium Streptomyces авидином.(Chaiet & wolf,
964). Стрептавидин может связывать до четырёх молекул биотина. Стрептавидин даёт 
ревосходные результаты в сравнение с авидином, потому что его изоэлектрическая точка 
лизка к нейтральной pH, в то время как авидин положительно заряжен при 
зизиологической pH. Стрептавидин не содержит боковых цепочек карбогидрата, в то время 
ак авидин включает 70% карбогидрата. По этой причине Стрептавидин не имеет 
энденции к неспецифическому связыванию. Первичные антитела связывают антигены- 
ишени в тканевом срезе. Конъюгированные вторичные антитела специфически 
зязываются с этими рецепторами антител. Биотин-конъюгированные вторичные антитела, 
свою очередь, маркируются конъюгированным со стрептовидином энзимом и могут быть 
/дуализированы соответствующим субстратом/хромогеном.
ведение: Иммунопероксидазные техники быстро распространяются и в практике 
зтанатомии подвергаются революционному изменению, начиная с развития этих процедур 
ladji & Morales, 1983). Благодаря их многосторонности, чувствительности и специфичности, 
имунопероксидазное окрашивание всегда даёт лучшее окрашивание при наличии 
здходящих антител. С всё увеличивающимся числом антител против клеточных антигенов, 
лмунопероксидазные методы теперь дают мощное средство для решения широкого 
юктра диагностических патологий. Все иммуногистохимические методы требуют наличия 
феделенного антитела для соединения с клеточным антигеном. В то же самое время 
’вствительность иммунопероксидазных методов является самым важным в широком 
)знообразии определения локализации специфических антигенов. Различные 
юледователи (Petrusz et al., 1983; Nagle et al. 1983; Giorno et al., 1984) показали, что прямая SA- 
RP техника конъюгации является от 4 до 8 раз более чувствительной чем, авидин- 
ютиновый комплекс, описанный Hsu et al. (1981). Наш комплект основан на прямой SA- 
RP технологии конъюгации. Соединяющий реактив -  биотинированный анти-мышиный 
мпонент, что дает возможность маркировки первичных антител, выделенных из мыши.
зактивы:


--- стр. 114 ---
ж
I бутыль: Реагент пероксидазы: прозрачный раствор. 10 мл раствора 3% перекиси
водорода (Н2С> 2) в воде для блокировки активности эндогенной пероксидазы.
’ бутыль: Связывающий реактив: Желтый раствор. 10 мл раствора
биотинилированных анти-мышиных иммуноглобулинов.
! бутыль: Индикаторный реактив: Красный раствор. 10 мл раствора конъюгированной
стрептавидин-пероксидазы хрена.
Детекторный реактив:
Хромоген: 10 таблеток диаминобензидина (DAB) с буфером 
Субстрат: 1 ml 3% раствора перекиси водорода 
Леры предосторожности:
I) DAB классифицировалось как возможное канцерогенное 
вещество и может быть причиной раздражения кожи после 
контакта. Избегайте контакта с одеждой и незащищённой 
кожей. В случае контакта, немедленно промойте большим 
количеством воды.
II) Несколько из реактивов в этом комплекте содержат азид 
натрия. Следуйте инструкции вашего предприятия. Если 
располагался в раковине, смойте струей воды в трубу, для 
избежания контакта азида натрия с трубой канализации.
III) Если вы начали процесс иммуноокрашивания, не 
позволяйте секциям ткани высохнуть, потому что это может 
привести к нежелательному фону и артефактам.
IV) Интерпретация данных результатов будет 
ответственностью пользующегося.
Условия хранения: Все реагенты должны храниться при температуре 2-8 С. Не 
замораживать.
Требуемый материал не входящий в состав комплекта:
Ксилол или депарафинизирующий раствор 
Спирт
Дистиллированная или деионизированная вода 
Краска
Моющий буфер (Кат # К 005)
Монтирующая среда (Кат # К 002)
Духовка или инкубатор 
Фляги для окраски 
Стекла 
Микроскоп 
Алмазный карандаш 
Подушечки Абсорбента 
Первичные антитела
Подготовка Экземпляра:
Цель иммуогистохимии состоит в том, чтобы локализовать, идентифицировать и, когда это 
возможно, количественно определить элементы клетки и ткани. Оптимальная фиксация 
ткани - ключ к хорошему иммуноокрашиванию. Успешное иммуноокрашивание зависит от 
точного сохранения эпитопов, разыскиваемых в его структурном контексте. Мы 
рекомендуем нашим пользователям прочитать превосходную статью относительно
/ 1 7


--- стр. 134 ---
Liar 4. Субстрат/Хромоген: Примените раствор хромогена в течение 5-8 минут при комнатной 
емпературе для окрашивания. Для достижения лучших результатов, смотрите в микроскоп за 
>азвитием окрашивания. После того, как желательная окраска достигнута, остановите реакцию, моя 
:рез в промывочном буфере. Обратите внимание на время, и следите за этим в течение 
юследующих инкубаций.
!  протокол иммуноокраски:
Этот протокол рекомендуется для менее оптимально фиксированных тканей с низкой 
штигенной плотностью в ткани и для низкоаффинных первичных антител.
Liar 1: Первичное антитело: Добавьте достаточное количество капель первичного антитела, чтобы 
акрыть тканевой срез. Инкубируйте согласно рекомендуемым условиям изготовления.
!ымойте, и вытрите срезы как описано выше.
Uar 2: Соединяющий реактив: Добавьте достаточное количество капель соединяющего реактива, 
:тобы закрыть срез ткани. Инкубируйте в течение 20 минут при комнатной температуре. Вымойте 
;резы как описано выше.
Uar 3. Индикаторный реактив: Примените достаточное количество капель индикаторного реактива, 
тобы закрыть тканевой срез. Инкубируйте в течение 20 минут при комнатной температуре. Вымойте 
резы как описано выше.
Uar 4. . Субстрат/Хромоген: Примените раствор хромогена в течение 2-5 минут при комнатной 
емпературе для окрашивания. Для достижения лучших результатов, смотрите в микроскоп за 
1азвитием окраски. После того, как желательная окраска достигнута, остановите реакцию, моя срез 
i промывочном буфере. Обратите внимание на время, и следите за этим в течение последующих 
1нкубаций.
Uar 5. Вымойте срезы и окрасьте их достаточным количеством краски. Наблюдайте за 
акреплением окраски под микроскопом.
Liar 3. Шаг 3. Индикаторный реактив: Примените достаточное количество капель индикаторного
юактива, чтобы закрыть тканевой срез. Инкубируйте в течение 10 минут при комнатной
емпературе. Вымойте срезы как описано выше.
Ссылки: Bayer et al., Method Enzymol. 62, 308 (1979).
Chaiet & Wolf, Arch. Biochem. Biophys. 106, 1 (1964).
Giorno, Diag. Immuno. 2, 161 (1984).
Hsu et al., J Histo. Cyto. 29, 577 (1981).
Nadji & Morales, Anat. pathol. 14, 767 (1983).
Nagle et al. J Histo. Chem. 31, 1010 (1983).
Larsson, Applied Immunohistochem. 1, 2, (1993).
Petrusz & Ordronneau, In Polak & Van noorden eds., Immunocytochemistry:  
Practical applications in pathology and biology. Bristol wright-PSG, 212, (1983).
IBS will not be held responsible for patent infringement or other violation that may occur with the use of our product.
DBS
ш
1020 Serpentine Lane, # 114, Pleasanton, CA 94566 Tel: 925 484 3350, Fax: 925 484 3390
Website: www.dbiosvs.com e-mail: customersupport@dbiosys.com
Ш С "
BIOME& c a i


--- стр. 135 ---
Инструкция к системе детекции: 
пероксидазный кроличий набор (ДАБ  
таблетки); Peroxidase rabbit kit (DAB
tablets)
Назначение:
Этот комплект разработан для иммуногистохимической маркировки специфичных 
первичных антител в тканевом срезе. Иммуногистохимический протокол, содержащийся в 
этой брошюре, только руководство. В зависимости от условий фиксации ткани, первичных 
антител, опыта работы, мы поддерживаем индивидуальные лабораторные испытания для 
уточнения собственного протокола. Эти реагенты были протестированы с проверкой 
качества при использовании тканевого среза, тем не менее, они могут быть использованы 
для клеточных мазков и взвеси клеток. Количество реагентов в наборе обеспечивает 
проведение от 50 до 100 тестов.
Принцип теста: Высокий аффинитет нековалентного взаимодействия между биотином и 
стрептавидином ( 1* 1015) формирует базис для этого иммуноокрашивания. Требуется 
образование необратимых и специфических связей между биологическими 
макромолекулами. Иммуногистохимическое применение взаимодействия между авидином и 
биотином представлено в книге Bayer et al. (1979), где описана техника для создания 
активных соединений биотинила, таких как биотин-Ы-гидроксисукцинимид и гидразин 
биотина для их конъюгирования с различными органическими соединениями, включая 
иммуноглобулины и пероксидазу хрена (HRP). Стрептавидин (SA) - это тетрамерный протеин 
(молярный вес 4*15,000), выделенный из actinobacterium Streptomyces (Chaiet & wolf, 1964). 
Стрептавидин может связывать до четырёх молекул биотина. Стрептавидин даёт 
превосходные результаты в сравнение с авидином, потому что его изоэлектрическая точка 
близка к нейтральной pH, в то время как авидин положительно заряжен при 
физиологической pH. Стрептавидин не содержит боковых цепочек карбогидрата, в то время 
как авидин включает 70% карбогидрата. По этой причине Стрептавидин не имеет 
тенденции к неспецифическому связыванию. Первичные антитела связывают антигены- 
мишени в тканевом срезе. Конъюгированные вторичные антитела специфически 
связываются с этими рецепторами антител. Биотин-конъюгированные вторичные антитела, 
в свою очередь, маркируются конъюгированным со стрептовидином энзимом и могут быть 
визуализированы соответствующим субстратом/хромогеном.
Введение:
Иммунопероксидазные техники быстро распространяются и в практике патанатомии 
подвергаются революционному изменению, начиная с развития этих процедур (Nadji & 
Morales, 1983). Благодаря их многосторонности, чувствительности и специфичности, 
иммунопероксидазное окрашивание всегда даёт лучшее окрашивание при наличии 
подходящих антител. С всё увеличивающимся числом антител против клеточных антигенов, 
иммунопероксидазные методы теперь дают мощное средство для решения широкого 
спектра диагностических патологий. Все иммуногистохимические методы требуют наличия 
определенного антитела для соединения с клеточным антигеном. В то же самое время 
чувствительность иммунопероксидазных методов является самым важным в широком 
разнообразии определения локализации специфических антигенов. Различные 
исследователи (Petrusz et al., 1983; Nagle et al. 1983; Giorno et al., 1984) показали, что прямая SA- 
HRP техника конъюгации является от 4 до 8 раз более чувствительной чем, авидин- 
биотиновый комплекс, описанный Hsu et al. (1981). Наш комплект основан на прямой SA- 
HRP технологии конъюгации. Соединяющий реактив - биотинированный анти-кроличий 
компонент, что дает возможность маркировки первичных антител, выделенных из кролика.


--- стр. 136 ---
■ч
Инструкция к системе детекции: 
пероксидазный кроличий набор (ДАБ  
таблетки); Peroxidase rabbit kit (DAB
tablets)
Назначение:
Этот комплект разработан для иммуногистохимической маркировки специфичных 
первичных антител в тканевом срезе. Иммуногистохимический протокол, содержащийся в 
этой брошюре, только руководство. В зависимости от условий фиксации ткани, первичных 
антител, опыта работы, мы поддерживаем индивидуальные лабораторные испытания для 
уточнения собственного протокола. Эти реагенты были протестированы с проверкой 
качества при использовании тканевого среза, тем не менее, они могут быть использованы 
для клеточных мазков и взвеси клеток. Количество реагентов в наборе обеспечивает 
проведение от 50 до 100 тестов.
Принцип теста: Высокий аффинитет нековалентного взаимодействия между биотином и 
стрептавидином ( 1* 1015) формирует базис для этого иммуноокрашивания. Требуется 
образование необратимых и специфических связей между биологическими 
макромолекулами. Иммуногистохимическое применение взаимодействия между авидином и 
биотином представлено в книге Bayer et al. (1979), где описана техника для создания 
активных соединений биотинила, таких как биотин-М-гидроксисукцинимид и гидразин 
биотина для их конъюгирования с различными органическими соединениями, включая 
иммуноглобулины и пероксидазу хрена (HRP). Стрептавидин (SA) - это тетрамерный протеин 
(молярный вес 4*15,000), выделенный из actinobacterium Streptomyces (Chaiet& wolf, 1964). 
Стрептавидин может связывать до четырёх молекул биотина. Стрептавидин даёт 
превосходные результаты в сравнение с авидином, потому что его изоэлектрическая точка 
близка к нейтральной pH, в то время как авидин положительно заряжен при 
физиологической pH. Стрептавидин не содержит боковых цепочек карбогидрата, в то время 
как авидин включает 70% карбогидрата. По этой причине Стрептавидин не имеет 
тенденции к неспецифическому связыванию. Первичные антитела связывают антигены- 
мишени в тканевом срезе. Конъюгированные вторичные антитела специфически 
связываются с этими рецепторами антител. Биотин-конъюгированные вторичные антитела, 
в свою очередь, маркируются конъюгированным со стрептовидином энзимом и могут быть 
визуализированы соответствующим субстратом/хромогеном.
Введение:
Иммунопероксидазные техники быстро распространяются и в практике патанатомии 
подвергаются революционному изменению, начиная с развития этих процедур (Nadji & 
Morales, 1983). Благодаря их многосторонности, чувствительности и специфичности, 
иммунопероксидазное окрашивание всегда даёт лучшее окрашивание при наличии 
подходящих антител. С всё увеличивающимся числом антител против клеточных антигенов, 
иммунопероксидазные методы теперь дают мощное средство для решения широкого 
спектра диагностических патологий. Все иммуногистохимические методы требуют наличия 
определенного антитела для соединения с клеточным антигеном. В то же самое время 
чувствительность иммунопероксидазных методов является самым важным в широком 
разнообразии определения локализации специфических антигенов. Различные 
исследователи (Petrusz et al., 1983; Nagle et al. 1983; Giorno et al., 1984) показали, что прямая SA- 
HRP техника конъюгации является от 4 до 8 раз более чувствительной чем, авидин- 
биотиновый комплекс, описанный Hsu et al. (1981). Наш комплект основан на прямой SA- 
HRP технологии конъюгации. Соединяющий реактив -  биотинированный анти-кроличий 
компонент, что дает возможность маркировки первичных антител, выделенных из кролика.
,


--- стр. 137 ---
( a
Инструкция к системе детекции: 
пероксидазный кроличий набор (ДАБ  
таблетки); Peroxidase rabbit kit (DAB
tablets)
Назначение:
Этот комплект разработан для иммуногистохимической маркировки специфичных 
первичных антител в тканевом срезе. Иммуногистохимический протокол, содержащийся в 
этой брошюре, только руководство. В зависимости от условий фиксации ткани, первичных 
антител, опыта работы, мы поддерживаем индивидуальные лабораторные испытания для 
уточнения собственного протокола. Эти реагенты были протестированы с проверкой 
качества при использовании тканевого среза, тем не менее, они могут быть использованы 
для клеточных мазков и взвеси клеток. Количество реагентов в наборе обеспечивает 
проведение от 50 до 100 тестов.
Принцип теста: Высокий аффинитет нековалентного взаимодействия между биотином и 
стрептавидином ( 1* 1015) формирует базис для этого иммуноокрашивания. Требуется 
образование необратимых и специфических связей между биологическими 
макромолекулами. Иммуногистохимическое применение взаимодействия между авидином и 
биотином представлено в книге Bayer et al. (1979), где описана техника для создания 
активных соединений биотинила, таких как биотин-Ы-гидроксисукцинимид и гидразин 
биотина для их конъюгирования с различными органическими соединениями, включая 
иммуноглобулины и пероксидазу хрена (HRP). Стрептавидин (SA) - это тетрамерный протеин 
(молярный вес 4*15,000), выделенный из actinobacterium Streptomyces (Chaiet & wolf, 1964). 
Стрептавидин может связывать до четырёх молекул биотина. Стрептавидин даёт 
превосходные результаты в сравнение с авидином, потому что его изоэлектрическая точка 
близка к нейтральной pH, в то время как авидин положительно заряжен при 
физиологической pH. Стрептавидин не содержит боковых цепочек карбогидрата, в то время 
как авидин включает 70% карбогидрата. По этой причине Стрептавидин не имеет 
тенденции к неспецифическому связыванию. Первичные антитела связывают антигены- 
мишени в тканевом срезе. Конъюгированные вторичные антитела специфически 
связываются с этими рецепторами антител. Биотин-конъюгированные вторичные антитела, 
в свою очередь, маркируются конъюгированным со стрептовидином энзимом и могут быть 
визуализированы соответствующим субстратом/хромогеном.
Введение:
Иммунопероксидазные техники быстро распространяются и в практике патанатомии 
подвергаются революционному изменению, начиная с развития этих процедур (Nadji & 
Morales, 1983). Благодаря их многосторонности, чувствительности и специфичности, 
иммунопероксидазное окрашивание всегда даёт лучшее окрашивание при наличии 
подходящих антител. С всё увеличивающимся числом антител против клеточных антигенов, 
иммунопероксидазные методы теперь дают мощное средство для решения широкого 
спектра диагностических патологий. Все иммуногистохимические методы требуют наличия 
определенного антитела для соединения с клеточным антигеном. В то же самое время 
чувствительность иммунопероксидазных методов является самым важным в широком 
разнообразии определения локализации специфических антигенов. Различные 
исследователи (Petrusz et al., 1983; Nagle et al. 1983; Giorno et al., 1984) показали, что прямая SA- 
HRP техника конъюгации является от 4 до 8 раз более чувствительной чем, авидин- 
биотиновый комплекс, описанный Hsu et al. (1981). Наш комплект основан на прямой SA- 
HRP технологии конъюгации. Соединяющий реактив -  биотинированный анти-кроличий 
компонент, что дает возможность маркировки первичных антител, выделенных из кролика.


--- стр. 138 ---
3 бутыль: Индикаторный реактив: Красный раствор. 10 мл раствора конъюгированной
стрептавидин-пероксидазы хрена.
Детекторный реактив:
Меры предосторожности:
1) 1 мл концентрированного раствора хромогена DAB.
2) 15 мл буфера, содержащего субстрат.
3) Один пустой пузырёк.
I)
IV)
Условия хранения:
DAB классифицировалось как возможное канцерогенное 
вещество и может быть причиной раздражения кожи после 
контакта. Избегайте контакта с одеждой и незащищённой 
кожей. В случае контакта, немедленно промойте большим 
количеством воды.
Несколько из реактивов в этом комплекте содержат азид 
натрия. Следуйте инструкции вашего предприятия. Если 
располагался в раковине, смойте струей воды в трубу, для 
избежания контакта азида натрия с трубой канализации. 
Если вы начали процесс иммуноокрашивания, не 
позволяйте секциям ткани высохнуть, потому что это может 
привести к нежелательному фону и артефактам. 
Интерпретация данных результатов будет ответственностью 
пользующегося.
Все реагенты должны храниться при температуре 2-8 С. Не 
замораживать.
Требуемый материал не входящий в состав комплекта:
Ксилен или депарафинизирующий раствор 
Спирт
Дистиллированная или деионизированная вода 
Краска
Моющий буфер (Кат # К 005)
Монтирующая среда (Кат # К 002)
Духовка или инкубатор 
Фляги для окраски 
Стекла 
Микроскоп 
Алмазный карандаш 
Подушечки Абсорбента 
Первичные антитела 
Подготовка Экземпляра:
Цель иммуогистохимии состоит в том, чтобы локализовать, идентифицировать и, когда это 
возможно, количественно определить элементы клетки и ткани. Оптимальная фиксация 
ткани - ключ к хорошему иммуноокрашиванию. Успешное иммуноокрашивание зависит от 
точного сохранения эпитопов, разыскиваемых в его структурном контексте. Мы 
рекомендуем нашим пользователям прочитать превосходную статью относительно 
подготовки ткани Larsson (1993), чтобы понять потребность и важность оптимальной 
фиксации ткани.
Подготовка реагентов:
За исключением хромогена, все реагенты в этом комплекте готовы к использованию 
Подготовка Субстрата/Хромогена:
1) Переместите 1 мл буфера в пустой пузырёк.
2) Добавьте 2 капли (50 рл) концентрированного DAB. Замените наконечник и 
перемешайте.
Этот хромоген устойчив в течении 6 часов. Любой раствор, не используемый в течение 
этого периода должен быть уничтожен 
Положительный и отрицательный контроль:
* \  i f - t


--- стр. 140 ---
Шаг 3. Индикаторный реактив: Примените достаточное количество капель индикаторного 
реактива, чтобы закрыть тканевой срез. Инкубируйте в течение 20 минут при комнатной 
температуре. Вымойте срезы как описано выше.
Шаг 4. . Субстрат/Хромоген: Примените раствор хромогена в течение 2-5 минут при 
комнатной температуре для окрашивания. Для достижения лучших результатов, смотрите в 
микроскоп за развитием окраски. После того, как желательная окраска достигнута, остановите 
реакцию, моя срез в промывочном буфере. Обратите внимание на время, и следите за этим в 
течение последующих инкубаций.
Шаг 5. Вымойте срезы и окрасьте их достаточным количеством краски. Наблюдайте 
за закреплением окраски под микроскопом.
Ссылки: Bayer et al., Method Enzymol. 62, 308 (1979).
Chaiet& Wolf, Arch. Biochem. Biophys. 106, 1 (1964).
Giorno, Diag. Immuno. 2, 161 (1984).
Hsu et al., J Histo. Cyto. 29, 577 (1981).
Nadji & Morales, Anat. pathol. 14, 767 (1983).
Nagle et al. J Histo. Chem. 31, 1010 (1983).
Larsson, Applied Immunohistochem. 1, 2, (1993).
Petrusz & Ordronneau, In Polak & Van noorden eds., Immunocytochemistry: 
Practical applications in pathology and biology. Bristol wright-PSG, 212, (1983).
DBS will not be held responsible for patent infringement or other violation that may occur with the use of our product.
DBS 1020 Serpentine Lane, # 114, Pleasanton, CA 94566 Tel: 925 484 3350, Fax: 925 484 3390
Website: www.dbiosvs.com e-mail: customersupport@dbiosys.com


--- стр. 141 ---
Инструкция к системе детекции: 
пероксидазный кроличий набор (ДАБ  
жидкий); Peoxidase rabbit kit (DAB liquid)
азначение: Этот комплект разработан для иммуногистохимической маркировки 
юцифичных первичных антител в тканевом срезе. Иммуногстохимический протокол, 
держащийся в этой брошюре, только руководство. В зависимости от условий фиксации 
ани, первичных антител, опыта работы, мы поддерживаем индивидуальные 
абораторные испытания для уточнения собственного протокола. Эти реагенты были 
ютестированы с проверкой качества при использовании тканевого среза, тем не менее,
<и могут быть использованы для клеточных мазков и взвеси клеток. Количество реагентов 
наборе обеспечивает проведение от 50 до 100 тестов.
ринцип теста: Высокий аффинитет нековалентного взаимодействия между биотином и 
рептавидином ( 1* 1015) формирует базис для этого иммуноокрашивания. Требуется 
аразование необратимых и специфических связей между биологическими 
акромолекулами. Иммуногистохимическое применение взаимодействия между авидином и 
ютином представлено в книге Bayer et al. (1979), где описана техника для создания 
тивных соединений биотинила, таких как биотин-1\1-гидроксисукцинимид и гидразин 
ютина для их конъюгирования с различными органическими соединениями, включая 
лмуноглобулины и пероксидазу хрена (HRP). Стрептавидин (SA) - это тетрамерный протеин 
олярный вес 4*15,000), выделенный из actinobacterium Streptomyces авидином.(Chaiet & wolf,
64). Стрептавидин может связывать до четырёх молекул биотина. Стрептавидин даёт 
>евосходные результаты в сравнение с авидином, потому что его изоэлектрическая точка 
шзка к нейтральной pH, в то время как авидин положительно заряжен при 
изиологической pH. Стрептавидин не содержит боковых цепочек карбогидрата, в то время 
к авидин включает 70% карбогидрата. По этой причине Стрептавидин не имеет 
нденции к неспецифическому связыванию. Первичные антитела связывают антигены- 
1шени в тканевом срезе. Конъюгированные вторичные антитела специфически 
язываются с этими рецепторами антител. Биотин-конъюгированные вторичные антитела, 
звою очередь, маркируются конъюгированным со стрептовидином энзимом и могут быть 
1зуализированы соответствующим субстратом/хромогеном. 
зедение: Иммунопероксидазные техники быстро распространяются и в практике 
гганатомии подвергаются революционному изменению, начиная с развития этих процедур 
adji & Morales, 1983). Благодаря их многосторонности, чувствительности и специфичности, 
шунопероксидазное окрашивание всегда даёт лучшее окрашивание при наличии 
дходящих антител. С всё увеличивающимся числом антител против клеточных антигенов, 
шунопероксидазные методы теперь дают мощное средство для решения широкого 
ектра диагностических патологий. Все иммуногистохимические методы требуют наличия 
ределенного антитела для соединения с клеточным антигеном. В то же самое время 
вствительность иммунопероксидазных методов является самым важным в широком 
энообразии определения локализации специфических антигенов. Различные 
следователи (Petrusz et al., 1983; Nagle et al. 1983; Giorno et al., 1984) показали, что прямая SA- 
техника конъюгации является от 4 до 8 раз более чувствительной чем, авидин- 
ютиновый комплекс, описанный Hsu et al. (1981). Наш комплект основан на прямой SA- 
RP технологии конъюгации. Соединяющий реактив - биотинированный анти-кроличий 
мпонент, что дает возможность маркировки первичных антител, выделенных из кролика, 
зактивы:
эутыль: Реагент пероксидазы: чистый раствор. 10 мл раствора 3% перекиси


--- стр. 142 ---
3 бутыль: Индикаторный реактив: Красный раствор. 10 мл раствора конъюгированной
стрептавидин-пероксидазы хрена.
Детекторный реактив: 1) 1 мл концентрированного раствора хромогена DAB.
2) 15 мл буфера, содержащего субстрат.
3) Один пустой пузырёк.
Меры предосторожности:
I) DAB классифицировалось как возможное канцерогенное 
вещество и может быть причиной раздражения кожи после 
контакта. Избегайте контакта с одеждой и незащищённой 
кожей. В случае контакта, немедленно промойте большим 
количеством воды.
II) Несколько из реактивов в этом комплекте содержат азид 
натрия. Следуйте инструкции вашего предприятия. Если 
располагался в раковине, смойте струей воды в трубу, для 
избежания контакта азида натрия с трубой канализации.
III) Если вы начали процесс иммуноокрашивания, не 
позволяйте секциям ткани высохнуть, потому что это может 
привести к нежелательному фону и артефактам.
IV) Интерпретация данных результатов будет ответственностью 
пользующегося.
Условия хранения: Все реагенты должны храниться при температуре 2-8 С. Не 
замораживать.
Требуемый материал не входящий в состав комплекта:
Ксилол или депарафинизирующий раствор 
Спирт
Дистиллированная или деионизированная вода 
Краска
Моющий буфер (Кат # К 005)
Монтирующая среда (Кат # К 002)
Духовка или инкубатор 
Фляги для окраски 
Стекла 
Микроскоп 
Алмазный карандаш 
Подушечки Абсорбента 
Первичные антитела 
Подготовка Экземпляра:
Цель иммуогистохимии состоит в том, чтобы локализовать, идентифицировать и, когда это 
возможно, количественно определить элементы клетки и ткани. Оптимальная фиксация 
гкани - ключ к хорошему иммуноокрашиванию. Успешное иммуноокрашивание зависит от 
точного сохранения эпитопов, разыскиваемых в его структурном контексте. Мы 
рекомендуем нашим пользователям прочитать превосходную статью относительно 
подготовки ткани Larsson (1993), чтобы понять потребность и важность оптимальной 
фиксации ткани.
Подготовка реагентов:
За исключением хромогена, все реагенты в этом комплекте готовы к использованию 
Подготовка Субстрата/Хромогена:
1) Переместите 1 мл буфера из набора в смешивающий пузырёк.
2) Добавьте 2 капли (50 рл) концентрированного DAB. Замените наконечник и 
перемешайте.
Этот хромоген устойчив в течении 6 часов. Любой раствор, не используемый в течение 
этого периода должен быть уничтожен
Положительный и отрицательный контроль:


--- стр. 147 ---
ioo
Шаг 5. Вымойте срезы и окрасьте их достаточным количеством краски. Наблюдайте 
за закреплением окраски под микроскопом.
Ссылки: Bayer et al., Method Enzymol. 62, 308 (1979).
Chaiet& Wolf, Arch. Biochem. Biophys. 106, 1 (1964).
Giorno, Diag. Immuno. 2, 161 (1984).
Hsu et al., J Histo. Cyto. 29, 577 (1981).
Nadji & Morales, Anat. pathol. 14, 767 (1983).
Nagle et al. J Histo. Chem. 31, 1010 (1983).
Larsson, Applied Immunohistochem. 1, 2, (1993).
Petrusz & Ordronneau, In Polak & Van noorden eds., Immunocytochemistry: 
Practical applications in pathology and biology. Bristol wright-PSG, 212, (1983).
DBS will not be held responsible for patent infringement or other violation that may occur with the use of our product.
DBS 1020 Serpentine Lane, # 114, Pleasanton, CA 94566 Tel: 925 484 3350, Fax: 925 484 3390


--- стр. 148 ---
Инструкция к системе детекции: 
пероксидазный мышиный набор; 
Peroxidase mouse kit
Назначение: Этот комплект разработан для иммуногистохимической маркировки 
специфичных первичных антител в тканевом срезе. Иммуногистохимический протокол 
содержащийся в этой брошюре только руководство. В зависимости от условий связывания 
тканью, использующихся первичных антител, мы поддерживаем индивидуальные 
изменения для уточнения собственного протокола. Эти реагенты были протестированы и 
качество проверено с использованием тканевого среза, тем не менее, они могут быть 
уточнены для клеточных мазков и для взвеси клеток. Количество реагентов обеспечивает 
проведение от 500 до 1000 тестов.
Принцип теста: Высокий аффинитет нековалентного взаимодействия между биотином и 
стрептавидином ( 1* 1015) формирует базис для этого иммуноокрашивания. Требуется 
образование необратимых и специфических связей между биологическими 
макромолекулами. Иммуногистохимическое применение взаимодействия между авидином и 
биотином представлено в книге Bayer et al. (1979), где описана техника для создания 
активных соединений биотинила, таких как биотин-Ы-гидроксисукцинимид и гидразин 
биотина для их конъюгирования с различными органическими соединениями, включая 
иммуноглобулины и пероксидазу хрена (HRP). Стрептавидин (SA) - это тетрамерный протеин 
(молярный вес 4*15,000), выделенный из actinobacterium Streptomyces авидином.(Chaiet & wolf,
1964). Стрептавидин может связывать до четырёх молекул биотина. Стрептавидин даёт 
превосходные результаты в сравнение с авидином, потому что его изоэлектрическая точка 
близка к нейтральной pH, в то время как авидин положительно заряжен при 
физиологической pH. Стрептавидин не содержит боковых цепочек карбогидрата, в то время 
как авидин включает 70% карбогидрата. По этой причине Стрептавидин не имеет 
тенденции к неспецифическому связыванию. Первичные антитела связывают антигены- 
мишени в тканевом срезе. Конъюгированные вторичные антитела специфически 
связываются с этими рецепторами антител. Биотин-конъюгированные вторичные антитела, 
в свою очередь, маркируются конъюгированным со стрептовидином энзимом и могут быть 
визуализированы соответствующим субстратом/хромогеном.
Введение: Иммунопероксидазные техники быстро распространяются и в практике 
патанатомии подвергаются революционному изменению, начиная с развития этих процедур 
(Nadji & Morales, 1983). Благодаря их многосторонности, чувствительности и специфичности, 
иммунопероксидазное окрашивание всегда даёт лучшее окрашивание при наличии 
подходящих антител. С всё увеличивающимся числом антител против клеточных антигенов, 
иммунопероксидазные методы теперь дают мощное средство для решения широкого 
спектра диагностических патологий. Все иммуногистохимические методы требуют наличия 
определенного антитела для соединения с клеточным антигеном. В то же самое время 
чувствительность иммунопероксидазных методов является самым важным в широком 
разнообразии определения локализации специфических антигенов. Различные 
исследователи (Petrusz et al., 1983; Nagle et al. 1983; Giorno et al., 1984) показали, что прямая SA- 
HRP техника конъюгации является от 4 до 8 раз более чувствительной чем, авидин- 
биотиновый комплекс, описанный Hsu et al. (1981). Наш комплект основан на прямой SA- 
HRP технологии конъюгации. Соединяющий реактив — биотинированный анти-мышиный 
компонент, что дает возможность маркировки первичных антител, выделенных из мыши. 
Introduction:
Реактивы:
1 бутыль; Связывающий реактив: Желтый раствор. 100 мл раствора 
биотинилированных анти-мышиных иммуноглобулинов.


--- стр. 149 ---
2 бутыль: Индикаторный реактив: Красный раствор. 100 мл раствора конъюгированной
стрептавидин-пероксидазы хрена.
Меры предосторожности:
I) Несколько из реактивов в этом комплекте содержат азид 
натрия. Следуйте инструкции вашего предприятия. Если 
располагался в раковине, смойте струей воды в трубу, для 
избежания контакта азида натрия с трубой канализации.
II) Если вы начали процесс иммуноокрашивания, не 
позволяйте секциям ткани высохнуть, потому что это может 
привести к нежелательному фону и артефактам.
III) Интерпретация данных результатов будет 
ответственностью пользующегося.
Условия хранения: Все реагенты должны храниться при температуре 2-8 С. Не 
1амораживать.
'ребуемый материал не входящий в состав комплекта:
Ксилол или депарафинизирующий раствор 
Спирт
Дистиллированная или деионизированная вода 
Краска
Моющий буфер (Кат # К 005)
Монтирующая среда (Кат # К 002)
Духовка или инкубатор 
Фляги для окраски 
Стекла 
Микроскоп 
Алмазный карандаш 
Подушечки Абсорбента 
Первичные антитела
1одготовка Экземпляра:
,ель иммуогистохимии состоит в том, чтобы локализовать, идентифицировать и, когда это 
озможно, количественно определить элементы клетки и ткани. Оптимальная фиксация 
они - ключ к хорошему иммуноокрашиванию. Успешное иммуноокрашивание зависит от 
энного сохранения эпитопов, разыскиваемых в его структурном контексте. Мы 
экомендуем нашим пользователям прочитать превосходную статью относительно 
эдготовки ткани Larsson (1993), чтобы понять потребность и важность оптимальной 
!иксации ткани.
одготовка реагентов:
а исключением хромогена, все реагенты в этом комплекте готовы к использованию.
одготовка Субстрата/Хромогена: (DAB, Cat # К 001):
1) Добавьте 5 мл деионизированной или дистиллированной воды в испытательную 
ёмкость.
2) Добавьте одну таблетку DAB в воду. Подождите в течение минуты и затем 
эремешайте на шейкере или вортексе, чтобы растворить таблетку 2
3) Добавьте 1 каплю Н2С > 2 и перемешайте.
/• ' J / ' "
гот хромоген устойчив в течении 2 часов. Любой раствор, не используемый в течение
ого периода должен быть уничтожен.
эдготовка Субстрата/Хромогена: (АЕС, Cat # К 003):


--- стр. 151 ---
развитием окрашивания. После того, как желательная окраска достигнута, остановите реакцию, моя 
срез в промывочном буфере. Обратите внимание на время, и следите за этим в течение 
последующих инкубаций.
2 протокол иммуноокраски:
Этот протокол рекомендуется для менее оптимально фиксированных тканей с низкой 
антигенной плотностью в ткани и для низкоаффинных первичных антител.
Шаг 1: Первичное антитело: Добавьте достаточное количество капель первичного антитела, чтобы 
закрыть тканевой срез. Инкубируйте согласно рекомендуемым условиям изготовления.
Вымойте, и вытрите срезы как описано выше.
Шаг 2: Соединяющий реактив: Добавьте достаточное количество капель соединяющего реактива, 
чтобы закрыть срез ткани. Инкубируйте в течение 20 минут при комнатной температуре. Вымойте 
срезы как описано выше.
Шаг 3. Индикаторный реактив: Примените достаточное количество капель индикаторного реактива, 
чтобы закрыть тканевой срез. Инкубируйте в течение 20 минут при комнатной температуре. Вымойте 
срезы как описано выше.
Шаг 4. . Субстрат/Хромоген: Примените раствор хромогена в течение 2-5 минут при комнатной 
температуре для окрашивания. Для достижения лучших результатов, смотрите в микроскоп за 
развитием окраски. После того, как желательная окраска достигнута, остановите реакцию, моя срез 
в промывочном буфере. Обратите внимание на время, и следите за этим в течение последующих 
инкубаций.
Шаг 5. Вымойте срезы и окрасьте их достаточным количеством краски. Наблюдайте за 
закреплением окраски под микроскопом.
Сылки: Bayer etal., Method Enzymol. 62, 308 (1979).
Chaiet & Wolf, Arch. Biochem. Biophys. 106, 1 (1964).
Giorno, Diag. Immuno. 2, 161 (1984).
Hsu et al., J Histo. Cyto. 29, 577 (1981).
Nadji & Morales, Anat. pathol. 14, 767 (1983).
Nagle et al. J Histo. Chem. 31, 1010 (1983).
Larsson, Applied Immunohistochem. 1, 2, (1993).
Petrusz & Ordronneau, In Polak & Van noorden eds., Immunocytochemistry:  
Practical applications in pathology and biology. Bristol wright-PSG, 212, (1983).
OBS will not be held responsible for patent infringement or other violation that may occur with the use of our product.
DBS 1020 Serpentine Lane, # 114, Pleasanton, CA 94566 Tel: 925 484 3350, Fax: 925 484 3390
Website: www.dbiosvs.com e-mail: customersupport@dbiosys.com


--- стр. 152 ---
Инструкция к системе детекции: 
пероксидазный кроличий набор; 
Peoxidase rabbit kit
Назначение:
Этот комплект разработан для иммуногистохимической маркировки специфичных 
гервичных антител в тканевом срезе. Иммуногстохимический протокол, содержащийся в 
этой брошюре, только руководство. В зависимости от условий фиксации ткани, первичных 
антител, опыта работы, мы поддерживаем индивидуальные лабораторные испытания для 
ггочнения собственного протокола. Эти реагенты были протестированы с проверкой 
;ачества при использовании тканевого среза, тем не менее, они могут быть использованы 
уая клеточных мазков и взвеси клеток. Количество реагентов в наборе обеспечивает 
доведение от 500 до 1000 тестов.
Иринцип теста: Высокий аффинитет нековалентного взаимодействия между биотином и 
ггрептавидином ( 1* 1015) формирует базис для этого иммуноокрашивания. Требуется 
эбразование необратимых и специфических связей между биологическими 
лакромолекулами. Иммуногистохимическое применение взаимодействия между авидином и 
Зиотином представлено в книге Bayer et al. (1979), где описана техника для создания 
эктивных соединений биотинила, таких как биотин-Ы-гидроксисукцинимид и гидразин 
эиотина для их конъюгирования с различными органическими соединениями, включая 
шмуноглобулины и пероксидазу хрена (HRP). Стрептавидин (SA) - это тетрамерный протеин 
молярный вес 4*15,000), выделенный из actinobacterium Streptomyces (Chaiet & wolf, 1964). 
Зтрептавидин может связывать до четырёх молекул биотина. Стрептавидин даёт 
1ревосходные результаты в сравнение с авидином, потому что его изоэлектрическая точка 
элизка к нейтральной pH, в то время как авидин положительно заряжен при 
(эизиологической pH. Стрептавидин не содержит боковых цепочек карбогидрата, в то время 
;ак авидин включает 70% карбогидрата. По этой причине Стрептавидин не имеет 
•енденции к неспецифическому связыванию. Первичные антитела связывают антигены- 
лишени в тканевом срезе. Конъюгированные вторичные антитела специфически 
:вязываются с этими рецепторами антител. Биотин-конъюгированные вторичные антитела,
I свою очередь, маркируются конъюгированным со стрептовидином энзимом и могут быть 
1изуализированы соответствующим субстратом/хромогеном.
введение:
1ммунопероксидазные техники быстро распространяются и в практике патанатомии 
юдвергаются революционному изменению, начиная с развития этих процедур (Nadji & 
Morales, 1983). Благодаря их многосторонности, чувствительности и специфичности, 
1Ммунопероксидазное окрашивание всегда даёт лучшее окрашивание при наличии 
юдходящих антител. С всё увеличивающимся числом антител против клеточных антигенов, 
1ммунопероксидазные методы теперь дают мощное средство для решения широкого 
;пектра диагностических патологий. Все иммуногистохимические методы требуют наличия 
шределенного антитела для соединения с клеточным антигеном. В то же самое время 
|увствительность иммунопероксидазных методов является самым важным в широком 
>азнообразии определения локализации специфических антигенов. Различные 
юследователи (Petrusz et al., 1983; Nagle et al. 1983; Giorno et al., 1984) показали, что прямая SA- 
1RP техника конъюгации является от 4 до 8 раз более чувствительной чем, авидин- 
1ИОтиновый комплекс, описанный Hsu et al. (1981). Наш комплект основан на прямой SA- 
1RP технологии конъюгации. Соединяющий реактив - биотинированный анти-кроличик 
омпонент, что дает возможность маркировки первичных антител, выделенных из кролик 
’еактивы:
\\°' ‘/,5М F 0#сд £


--- стр. 153 ---
1
1 бутыль: Связывающий реактив: Желтый раствор. 100 мл раствора
биотинилированных анти-крысиных иммуноглобулинов.
2 бутыль: Индикаторный реактив: Красный раствор. 100 мл раствора конъюгированной
стрептавидин-пероксидазы хрена.
Меры предосторожности:
I) Несколько из реактивов в этом комплекте содержат азид 
натрия. Следуйте инструкции вашего предприятия. Если 
располагался в раковине, смойте струей воды в трубу, для 
избежания контакта азида натрия с трубой канализации.
II) Если вы начали процесс иммуноокрашивания, не 
позволяйте секциям ткани высохнуть, потому что это может 
привести к нежелательному фону и артефактам.
III) Интерпретация данных результатов будет 
ответственностью пользующегося.
Условия хранения: Все реагенты должны храниться при температуре 2-8 С. Не 
замораживать.
Требуемый материал не входящий в состав комплекта:
Ксилол или депарафинизирующий раствор 
Спирт
Дистиллированная или деионизированная вода 
Краска
Моющий буфер (Кат # К 005)
Монтирующая среда (Кат # К 002)
Духовка или инкубатор 
Фляги для окраски 
Стекла 
Микроскоп 
Алмазный карандаш 
Подушечки Абсорбента 
Первичные антитела
Подготовка Экземпляра:
Цель иммуногистохимии состоит в том, чтобы локализовать, идентифицировать и, когда это 
возможно, количественно определить элементы клетки и ткани. Оптимальная фиксация 
ткани - ключ к хорошему иммуноокрашиванию. Успешное иммуноокрашивание зависит от 
точного сохранения эпитопов, разыскиваемых в его структурном контексте. Мы 
рекомендуем нашим пользователям прочитать превосходную статью относительно 
подготовки ткани Larsson (1993), чтобы понять потребность и важность оптимальной 
фиксации ткани.
Подготовка реагентов:
За исключением хромогена, все реагенты в этом комплекте готовы к использованию. 
Подготовка Субстрата/Хромогена: (DAB, Cat # К 001):
1) Добавьте 5 мл деионизированной или дистиллированной воды в испытательную 
ёмкость.
2) Добавьте одну таблетку DAB в воду. Подождите в течение минуты и затем
3) Добавьте 1 каплю Н202 и перемешайте.


--- стр. 154 ---
Этот хромоген устойчив в течении 2 часов. Любой раствор, не используемый в течение 
этого периода должен быть уничтожен.
Подготовка Субстрата/Хромогена: (АЕС, Cat # К 003):
1) Добавьте 5 мл деионизированной или дистиллированной воды в испытательную 
ёмкость.
2) Добавьте 2 капли концентрированного буфера и перемешайте.
3) Добавьте 2 капли АЕС в растворённый буфер и перемешайте.
4) Добавьте 2 капли Н202 и перемешайте.
Положительный и отрицательный контроль:
Каждая реакция иммуноокрашивания должна включить известный положительный и 
отрицательный контроль, чтобы проверить надлежащее функционирование окрашивающей 
системы, также как и для интерпретации верных результатов.
Положительный контроль: ткань которая содержит желательный антиген, и дала 
положительное окрашивание в прошлом.
Отрицательный контроль: Один из нижепредложеного варианта должен использоваться в 
качестве отрицательного контроля:
1) Вместо первичного антитела, используйте нормальную неиммунную сыворотку от той же 
самой разновидности животного, из которого первичное антитело было взято.
2) Вместо первичного антитела, используйте буфер, в котором первичное антитело было 
растворено.
3) Используют ткань, в которой точно не содержится желательный антиген.
4) Адсорбируйте первичное антитело с соответствующим антигеном и используйте это 
вместо первичного антитела.
Протокол окраски:
Шаг 1. Удаление парафина: Депарафинизация секции ткани согласно
установленному порядку в вашей лаборатории и перенос ткани в отмывочный
буфер.
Шаг 2. Блокирование эндогенной щелочной фосфатазы. Добавьте достаточное количество 
капель блокиратора, чтобы закрыть ткань. Инкубируйте в течение 5 минут при 
комнатной температуре. Используйте 0,3% Н202 для замороженных срезов ткани, 
мазков клеток и взвеси клеток.
liar 3. Отмывка: удалите избыток реактива. Прополощите отмывочным буфером три раза 
ю 1 минуте каждый раз. Удалите избыток буфера и тщательно вытрите стекло вокруг ткани, 
1тобы удалить избыток буфера со стекла, оставляя ткань влажной.
I протокол иммуноокраски:
Этот протокол рекомендуется для оптимально фиксированных тканей с избыточным содержанием 
антигенов в ткани и для высоко аффинных первичных антител.
Шаг 1. Первичное антитело: Добавьте достаточное количество капель первичного антитела, чтобы 
закрыть тканевой срез. Инкубируйте 10 минут при комнатной температуре. Вымойте, и вытрите 
стекла как описано выше.
Шаг 2. Соединяющий реактив: Добавьте достаточное количество капель соединяющего реактива, 
чтобы закрыть срез ткани. Инкубируйте в течение 10 минут при комнатной температуре. Вымойте 
стекла как описано выше.


--- стр. 155 ---
-
Инструкция к системе детекции: щелочная  
фосфатаза, мышиный набор (Фаст ред); 
Aik. Phos. mouse kit (Fast red)
Назначение: Этот комплект разработан для иммуногистохимической маркировки 
специфичных первичных антител в тканевом срезе. Иммуногистохимический протокол 
содержащийся в этой брошюре только руководство. В зависимости от условий связывания 
тканью, использующихся первичных антител, мы поддерживаем индивидуальные 
изменения для уточнения собственного протокола. Эти реагенты были протестированы и 
качество проверено с использованием тканевого среза, тем не менее, они могут быть 
уточнены для клеточных мазков и для взвеси клеток. Количество реагентов обеспечивает 
проведение от 50 до 100 тестов.
Принцип теста: Высокий аффинитет нековалентного взаимодействия между биотином и 
стрептавидином (1* 1015) формирует базис для этого иммуноокрашивания. Требуется 
образование необратимых и специфических связей между биологическими 
макромолекулами. Иммуногистохимическое применение взаимодействия между авидином и 
биотином представлено в книге Bayer et al. (1979), где описана техника для создания 
активных соединений биотинила, таких как биотин-1М-гидроксисукцинимид и гидразин 
биотина для их конъюгирования с различными органическими соединениями, включая 
иммуноглобулины и пероксидазу хрена (HRP). Стрептавидин (SA) - это тетрамерный протеин 
(молярный вес 4*15,000), выделенный из actinobacterium Streptomyces авидином.(Chaiet & wolf,
1964). Стрептавидин может связывать до четырёх молекул биотина. Стрептавидин даёт 
превосходные результаты в сравнение с авидином, потому что его изоэлектрическая точка 
близка к нейтральной pH, в то время как авидин положительно заряжен при 
физиологической pH. Стрептавидин не содержит боковых цепочек карбогидрата, в то время 
как авидин включает 70% карбогидрата. По этой причине Стрептавидин не имеет 
тенденции к неспецифическому связыванию. Первичные антитела связывают антигены- 
мишени в тканевом срезе. Конъюгированные вторичные антитела специфически 
связываются с этими рецепторами антител. Биотин-конъюгированные вторичные антитела, 
в свою очередь, маркируются конъюгированным со стрептовидином энзимом и могут быть 
визуализированы соответствующим субстратом/хромогеном.
Введение: Иммунопероксидазные техники быстро распространяются и в практике 
патанатомии подвергаются революционному изменению, начиная с развития этих процедур 
(Nadji & Morales, 1983). Благодаря их многосторонности, чувствительности и специфичности, 
иммунопероксидазное окрашивание всегда даёт лучшее окрашивание при наличии 
подходящих антител. С всё увеличивающимся числом антител против клеточных антигенов, 
иммунопероксидазные методы теперь дают мощное средство для решения широкого 
спектра диагностических патологий. Все иммуногистохимические методы требуют наличия 
определенного антитела для соединения с клеточным антигеном. В то же самое время 
чувствительность иммунопероксидазных методов является самым важным в широком 
разнообразии определения локализации специфических антигенов.
Щелочная фосфатаза, содержащаяся в комплекте, имеют особую ценность для 
окрашивания тканей, имеющих высокую активность эндогенных пероксидаз. Щелочная 
фосфатаза не затрагивается эндогенными пероксидазами и поэтому даёт болей чистую 
фоновую окраску. Наш комплект основан на прямой SA-ALP сопряженной технологии. 
Связывающий реактив антимышиный и, таким образом, пригоден к маркировке первичных 
антител мыши.
Реактивы:
1 бутыль: Усилитель щелочной фосфатазы. 10 мл раствора, усиливающего
интенсивность сигнала.
2 бутыль: Связывающий Реактив: Желтый раствор. 10 мл раствора биотинированных
анти-мышиных иммуноглобулинов.
А


--- стр. 156 ---
1
3 бутыль: Индикаторный реактив: Красный раствор. 10 мл раствора конъюгированной
стрептавидин-щелочной фосфатазы.
Детекторный реактив: Буфер: 2.5 мл концентрированного буфера.
Хромоген: 10 таблеток быстрого красного TR хромогена. 
Субстрат: 0.5 мл раствора субстрата.
Меры предосторожности:
I) Несколько из реактивов в этом комплекте содержат азид 
натрия. Следуйте инструкции вашего предприятия. Если 
располагался в раковине, смойте струей воды в трубу, для 
избежания контакта азида натрия с трубой канализации.
II) Если вы начали процесс иммуноокрашивания, не 
позволяйте секциям ткани высохнуть, потому что это может 
привести к нежелательному фону и артефактам.
III) Интерпретация данных результатов будет ответственностью 
пользующегося.
/словия хранения: Все реагенты должны храниться при температуре 2-8 С. Не 
замораживать.
Storage: All the reagents should be stored at 2-8° c. Do not freeze.
Гребуемый материал не входящий в состав комплекта::
Ксилен или депарафинизирующий раствор 
Спирт
Дистиллированная или деионизированная вода 
Краска
Моющий буфер (Кат # К 005)
Монтирующая среда (Кат # К 002)
Духовка или инкубатор 
Фляги для окраски 
Стекла 
Микроскоп 
Алмазный карандаш 
Подушечки Абсорбента 
Первичные антитела 
1одготовка Экземпляра:
4ель иммуогистохимии состоит в том, чтобы локализовать, идентифицировать и, когда это 
юзможно, количественно определить элементы клетки и ткани. Оптимальная фиксация 
кани - ключ к хорошему иммуноокрашиванию. Успешное иммуноокрашивание зависит от 
очного сохранения эпитопов, разыскиваемых в его структурном контексте. Мы 
юкомендуем нашим пользователям прочитать превосходную статью относительно 
юдготовки ткани Larsson (1993), чтобы понять потребность и важность оптимальной 
фиксации ткани.
1одготовка реагентов:
1а исключением хромогена, все реагенты в этом комплекте готовы к использованию. 
1одготовка Субстрата/Хромогена:
1) Добавьте 5 мл деионизированной или дистиллированной воды в ёмкость.
2) Добавьте 5 капель сконцентрированного буфера и перемешайте.
3) Добавьте одну таблетку Быстрого Красного к воде. Подождите в течение минуты 
и затем используйте шейкер или вортекс, чтобы растворить таблетку.
4) Добавьте 1 каплю субстрата и перемешайте.
Этот хромоген устойчив по крайней мере 1 час. Любой раствор, не используемый в течение 
того периода, должен быть уничтожен.
Положительный и отрицательный контроль: 
каждая реакция иммуноокрашивания должена включить известный положительный и 
трицательный контроль, чтобы проверить надлежащее функционирование окрашивающей 
истемы, также как и для интерпретации верных результатов.
А


--- стр. 158 ---
Шаг 5. Вымойте срезы и окрасьте их достаточным количеством краски. Наблюдайте 
за закреплением окраски под микроскопом.
Усиление окрашивания:
Если дополнительный сигнал желателен, обработайте срез ткани усилителем 
щелочной фосфатазы в течение 1 минуты после шага III. Высушите избыток усилителя и 
добавьте раствор субстрата/хромогена без промывки.
Ссылки: Bayer et al., Method Enzymol. 62, 308 (1979).
Chaiet& Wolf, Arch. Biochem. Biophys. 106, 1 (1964).
Giorno, Diag. Immuno. 2, 161 (1984).
Hsu et al., J Histo. Cyto. 29, 577 (1981).
Nadji & Morales, Anat. pathol. 14, 767 (1983).
Nagle et al. J Histo. Chem. 31, 1010 (1983).
Larsson, Applied Immunohistochem. 1,2, (1993).
Petrusz & Ordronneau, In Polak & Van noorden eds., Immunocytochemistry: 
Practical applications in pathology and biology. Bristol wright-PSG, 212, (1983).
DBS will not be held responsible for patent infringement or other violation that may occur with the use of our product.
DBS 1020 Serpentine Lane, # 114, Pleasanton, CA 94566  I
Website: www.dbiosvs.com e


--- стр. 159 ---
Инструкция к системе детекции: щелочная
фосфатаза, кроличий набор (Фаст ред);
Aik. Phos. Rabbit kit (Fast red)
Назначение: Этот комплект разработан для иммуногистохимической маркировки 
специфичных первичных антител в тканевом срезе. Иммуногистохимический протокол, 
содержащийся в этой брошюре только руководство. В зависимости от условий фиксации 
ткани, первичных антител и навыков работы, мы поддерживаем лаборатории в уточнении 
собственного протокола. Эти реагенты были протестированы с проверкой качества на 
тканевых срезах, тем не менее, они могут быть оптимизированы для клеточных мазков и 
цитологической взвеси. Предлагаемое количество реагентов обеспечивает проведение от 
50 до 100 тестов.
Принцип теста Высокий аффинитет нековалентного взаимодействия между биотином и 
стрептавидином ( 1* 1015) формирует базис для этого иммуноокрашивания. Требуется 
образование необратимых и специфических связей между биологическими 
макромолекулами. Иммуногистохимическое применение взаимодействия между авидином и 
биотином представлено в книге Bayer et al. (1979), где описана техника для создания 
активных соединений биотинила, таких как биотин-!М-гидроксисукцинимид и гидразин 
биотина для их конъюгирования с различными органическими соединениями, включая 
иммуноглобулины и пероксидазу хрена (HRP). Стрептавидин (SA) - это тетрамерный протеин 
(молярный вес 4*15,000), выделенный из actinobacterium Streptomyces авидином.(Chaiet & wolf,
1964). Стрептавидин может связывать до четырёх молекул биотина. Стрептавидин даёт 
превосходные результаты в сравнение с авидином, потому что его изоэлектрическая точка 
близка к нейтральной pH, в то время как авидин положительно заряжен при 
физиологической pH. Стрептавидин не содержит боковых цепочек карбогидрата, в то время 
как авидин включает 70% карбогидрата. По этой причине Стрептавидин не имеет 
генденции к неспецифическому связыванию. Первичные антитела связывают антигены- 
мишени в тканевом срезе. Конъюгированные вторичные антитела специфически 
звязываются с этими рецепторами антител. Биотин-конъюгированные вторичные антитела, 
з свою очередь, маркируются конъюгированным со стрептовидином энзимом и могут быть 
визуализированы соответствующим субстратом/хромогеном.
Введение: Иммунопероксидазные техники быстро распространяются и в практике 
1атанатомии подвергаются революционному изменению, начиная с развития этих процедур 
(Nadji & Morales, 1983). Благодаря их многосторонности, чувствительности и специфичности, 
лммунопероксидазное окрашивание всегда даёт лучшее окрашивание при наличии 
подходящих антител. С всё увеличивающимся числом антител против клеточных антигенов, 
иммунопероксидазные методы теперь дают мощное средство для решения широкого 
зпектра диагностических патологий. Все иммуногистохимические методы требуют наличия 
эпределенного антитела для соединения с клеточным антигеном. В то же самое время 
пувствительность иммунопероксидазных методов является самым важным в широком 
эазнообразии определения локализации специфических антигенов.
Цепочная фосфатаза, содержащаяся в комплекте, имеют особую ценность для 
экрашивания тканей, имеющих высокую активность эндогенных пероксидаз. Щелочная 
фосфатаза не затрагивается эндогенными пероксидазами и поэтому даёт болей чистую 
фоновую окраску. Наш комплект основан на прямой SA-ALP сопряженной технологии. 
Связывающий реактив - коктейль из биотинированных анти-кроличьих реагентов, и таким 
эбразом способен к маркировке первичных антител кролика. 
эеактивы:
1  бутыль: Усилитель щелочной фосфатазы. 10 мл раствора, усиливающего
интенсивность сигнала.
I бутыль: Связывающий Реактив: Желтый раствор. 10 мл раствора биотинированных
анти-кроличьих иммуноглобулинов.


--- стр. 160 ---
%ч
3 бутыль: Индикаторный реактив: Красный раствор. 10 мл раствора конъюгата
стрептавидин-щелочная фосфатаза.
Детекторный реактив: Буфер: 2.5 мл сконцентрированного буфера.
Хромоген: 10 таблеток быстрого красного TR хромогена. 
Субстрат: 0.5 мл раствора субстрата.
Меры предосторожности:
I) Несколько из реактивов в этом комплекте содержат азид 
натрия. Следуйте инструкции вашего предприятия. Если 
располагался в раковине, смойте струей воды в трубу, для 
избежания контакта азида натрия с трубой канализации.
II) Если вы начали процесс иммуноокрашивания, не позволяйте 
секциям ткани высохнуть, потому что это может привести к 
нежелательному фону и артефактам.
III) Интерпретация данных результатов будет ответственностью 
пользующегося.
Условия хранения: Все реагенты должны храниться при температуре 2-8 С. Не 
замораживать.
Требуемый материал не входящий в состав комплекта::
Ксилен или депарафинизирующий раствор 
Спирт
Дистиллированная или деионизированная вода 
Краска
Моющий буфер (Кат # К 005)
Монтирующая среда (Кат # К 002)
Духовка или инкубатор 
Фляги для окраски 
Стекла 
Микроскоп 
Алмазный карандаш 
Подушечки Абсорбента 
Первичные антитела 
Подготовка Экземпляра:
Цель иммуогистохимии состоит в том, чтобы локализовать, идентифицировать и, когда это 
возможно, количественно определить элементы клетки и ткани. Оптимальная фиксация 
ткани - ключ к хорошему иммуноокрашиванию. Успешное иммуноокрашивание зависит от 
точного сохранения эпитопов, разыскиваемых в его структурном контексте. Мы 
рекомендуем нашим пользователям прочитать превосходную статью относительно 
подготовки ткани Larsson (1993), чтобы понять потребность и важность оптимальной 
фиксации ткани.
Подготовка реагентов:
За исключением хромогена, все реагенты в этом комплекте готовы к использованию. 
Подготовка Субстрата/Хромогена:
1) Добавьте 5 мл деионизированной или дистиллированной воды в ёмкость.
2) Добавьте 5 капель сконцентрированного буфера и перемешайте.
3) Добавьте одну таблетку Быстрого Красного к воде. Подождите в течение минуты 
и затем используйте шейкер или вортекс, чтобы растворить таблетку.
4) Добавьте 1 каплю субстрата и перемешайте.
Этот хромоген устойчив в течении 1 часа. Любой раствор, не используемый в течение этого 
периода, должен быть уничтожен.
Положительный и отрицательный контроль:
Каждая реакция иммуноокрашивания должена включить известный положительный и 
отрицательный контроль, чтобы проверить надлежащее функционирование окрашивающей 
системы, также как и для интерпретации верных результатов.
Ч\*\ А //


--- стр. 165 ---
Усиление окрашивания:
Если дополнительный сигнал желателен, поместите срезы ткани в усилитель щелочной 
фосфатазы на 1 минуту после шага III. Высушите избыток усилителя и добавьте раствор 
субстрата/хромогена без промывки.
Ссылки: Bayer et al., Method Enzymol. 62, 308 (1979).
Chaiet & Wolf, Arch. Biochem. Biophys. 106, 1 (1964).
Giorno, Diag. Immuno. 2, 161 (1984).
Hsu et al„ J Histo. Cyto. 29, 577 (1981).
Nadji & Morales, Anat. pathol. 14, 767 (1983).
Nagle et al. J Histo. Chem. 31, 1010 (1983).
Larsson, Applied Immunohistochem. 1,2, (1993).
Petrusz & Ordronneau, In Polak & Van noorden eds., Immunocytochemistry: 
Practical applications in pathology and biology. Bristol wright-PSG, 212, (1983).
DBS will not be held responsible for patent infringement or other violation that may occur with the use of our product.


--- стр. 166 ---
у м
Инструкция к системе детекции: щелочная  
фосфатаза, мышиный и кроличий 
окрашивающий набор; Aik. Phos. mouse &
rabbit staining kit
Назначение:
Этот комплект разработан для иммуногистохимической маркировки специфичных 
первичных антител в тканевом срезе. Иммуногистохимический протокол, содержащийся в 
этой брошюре только руководство. В зависимости от условий фиксации ткани, первичных 
антител и навыков работы, мы поддерживаем лаборатории в уточнении собственного 
протокола. Эти реагенты были протестированы с проверкой качества на тканевых срезах, 
тем не менее, они могут быть оптимизированы для клеточных мазков и цитологической 
взвеси. Предлагаемое количество реагентов обеспечивает проведение от 500 до 1000 
тестов.
Принцип теста:
Высокий аффинитет нековалентного взаимодействия между биотином и стрептавидином ( 
1* 1015) формирует базис для этого иммуноокрашивания. Требуется образование 
необратимых и специфических связей между биологическими макромолекулами. 
Иммуногистохимическое применение взаимодействия между авидином и биотином 
представлено в книге Bayer et al. (1979), где описана техника для создания активных 
соединений биотинила, таких как биотин-Ы-гидроксисукцинимид и гидразин биотина для их 
конъюгирования с различными органическими соединениями, включая иммуноглобулины и 
пероксидазу хрена (HRP). Стрептавидин (SA) - это тетрамерный протеин (молярный вес 4*15,000), 
выделенный из actinobacterium Streptomyces авидином.(Chaiet & wolf, 1964). Стрептавидин может 
связывать до четырёх молекул биотина. Стрептавидин даёт превосходные результаты в 
сравнение с авидином, потому что его изоэлектрическая точка близка к нейтральной pH, в 
то время как авидин положительно заряжен при физиологической pH. Стрептавидин не 
содержит боковых цепочек карбогидрата, в то время как авидин включает 70% 
карбогидрата. По этой причине Стрептавидин не имеет тенденции к неспецифическому 
связыванию. Первичные антитела связывают антигены-мишени в тканевом срезе. 
Конъюгированные вторичные антитела специфически связываются с этими рецепторами 
антител. Биотин-конъюгированные вторичные антитела, в свою очередь, маркируются 
конъюгированным со стрептовидином энзимом и могут быть визуализированы 
соответствующим субстратом/хромогеном.
Введение:
Иммунопероксидазные техники быстро распространяются и в практике патанатомии 
подвергаются революционному изменению, начиная с развития этих процедур (Nadji & 
Morales, 1983). Благодаря их многосторонности, чувствительности и специфичности, 
иммунопероксидазное окрашивание всегда даёт лучшее окрашивание при наличии 
подходящих антител. С всё увеличивающимся числом антител против клеточных антигенов, 
иммунопероксидазные методы теперь дают мощное средство для решения широкого 
спектра диагностических патологий. Все иммуногистохимические методы требуют наличия 
определенного антитела для соединения с клеточным антигеном. В то же самое время 
чувствительность иммунопероксидазных методов является самым важным в широком 
разнообразии определения локализации специфических антигенов.
Щелочная фосфатаза, содержащаяся в комплекте, имеют особую ценность для 
окрашивания тканей, имеющих высокую активность эндогенных пероксидаз. Щелочная 
фосфатаза не затрагивается эндогенными пероксидазами и поэтому даёт болей чистую 
фоновую окраску. Наш комплект основан на прямой SA-ALP сопряженной технологии.
т ъ
Л


--- стр. 167 ---
Связывающий реактив - коктейль из биотинированных анти-мышиных и анти-кроличьих 
реагентов, и таким образом способен к маркировке первичных антител мыши и кролика 
одновременно.
Реактивы:
1 бутыль: Связывающий Реактив: Желтый раствор. 100 ml раствора биотинированных
анти-мышиных и анти-кроличьих иммуноглобулинов.
2 бутыль: Индикаторный реактив: Красный раствор. 100 ml раствора конъюгированной
стрептавидин-щелочной фосфатазы.
Меры предосторожности:
I ) Несколько из реактивов в этом комплекте содержат азид 
натрия. Следуйте инструкции вашего предприятия. Если 
располагался в раковине, смойте струей воды в трубу, для 
избежания контакта азида натрия с трубой канализации.
I I ) Если вы начали процесс иммуноокрашивания, не позволяйте 
секциям ткани высохнуть, потому что это может привести к 
нежелательному фону и артефактам.
III) Интерпретация данных результатов будет ответственностью 
пользующего.
Условия хранения: Все реагенты должны храниться при температуре 2-8 С. Не 
замораживать.
Требуемый материал не входящий в состав комплекта:
Ксилен или депарафинизирующий раствор 
Спирт
Дистиллированная или деионизированная вода 
Краска
Моющий буфер (Кат # К 005)
Монтирующая среда (Кат # К 002)
Духовка или инкубатор 
Фляги для окраски 
Стекла 
Микроскоп 
Алмазный карандаш 
Подушечки Абсорбента 
Первичные антитела
Субстрат хромогена (кат. # К 001, К 003, К 007)
Подготовка Экземпляра:
Цель иммуогистохимии состоит в том, чтобы локализовать, идентифицировать и, когда это 
возможно, количественно определить элементы клетки и ткани. Оптимальная фиксация 
ткани - ключ к хорошему иммуноокрашиванию. Успешное иммуноокрашивание зависит от 
точного сохранения эпитопов, разыскиваемых в его структурном контексте. Мы 
рекомендуем нашим пользователям прочитать превосходную статью относительно 
подготовки ткани Larsson (1993), чтобы понять потребность и важность оптимальной 
фиксации ткани.
Подготовка реагентов:
За исключением хромогена, все реагенты в этом комплекте готовы к использованию 
Положительный и отрицательный контроль:
Каждая реакция иммуноокрашивания должена включить известный положительный и 
отрицательный контроль, чтобы проверить надлежащее функционирование окрашивающей 
системы, также как и для интерпретации верных результатов.
Положительный контроль: ткань которая содержит желательный антиген, и дала 
положительное окрашивание в прошлом.
I


--- стр. 168 ---
я ?
Отрицательный контроль: Один из нижепредложеного варианта должен использоваться в 
качестве отрицательного контроля:
1) Вместо первичного антитела, используйте нормальную неиммунную сыворотку от 
той же самой разновидности животного, из которого первичное антитело было взято.
2) Вместо первичного антитела, используйте буфер, в котором первичное антитело 
было растворено.
3) Используют ткань, в которой точно не содержится желательный антиген.
4) Адсорбируйте первичное антитело с соответствующим антигеном и используйте 
это вместо первичного антитела.
Протокол окраски:
Шаг 1. Удаление парафина: Депарафинизация секции ткани согласно 
установленному порядку в вашей лаборатории и перенос ткани в отмывочный буфер. 
Шаг 2. Блокирование эндогенной щелочной фосфатазы. Это - необязательный шаг 
и должен быть выполнен только, если ткань содержит большое количество эндогенный 
щелочной фосфатазы. Добавьте достаточное количество капель блокиратора, чтобы 
закрыть ткань. Инкубируйте в течение 5-10 минут при комнатной температуре.
ШагЗ. Отмывка: удалите избыток реактива. Прополощите отмывочным буфером три 
раза по 1 минуте каждый раз. Удалите избыток буфера и тщательно вытрите стекло вокруг 
ткани, чтобы удалить избыток буфера со стекла, оставляя ткань влажной.
1  протокол иммуноокраски:
Этот протокол рекомендуется для оптимально фиксированных тканей с избыточным содержанием 
антигенов в ткани и для высоко аффинных первичных антител.
Шаг 1. Первичное антитело: Добавьте достаточное количество капель первичного антитела, 
чтобы закрыть тканевой срез. Инкубируйте 10 минут при комнатной температуре. Вымойте, и 
вытрите стекла как описано выше.
Шаг 2. Соединяющий реактив: Добавьте достаточное количество капель соединяющего 
реактива, чтобы закрыть срез ткани. Инкубируйте в течение 10 минут при комнатной температуре. 
Вымойте стекла как описано выше.
ШагЗ. . Индикаторный реактив: Примените достаточное количество капель индикаторного 
реактива, чтобы закрыть тканевой срез. Инкубируйте в течение 10 минут при комнатной 
температуре. Вымойте срезы как описано выше.
Шаг 4. Примените раствор хромогена в течение 5-10 минут при комнатной температуре для 
окрашивания. Для достижения лучших результатов, смотрите в микроскоп за развитием 
окрашивания. После того, как желательная окраска достигнута, остановите реакцию, моя срез в 
промывочном буфере. Обратите внимание на время, и следите за этим в течение последующих 
инкубаций.
2 протокол иммуноокраски:
Этот протокол рекомендуется для менее оптимально фиксированных тканей с низкой 
антигенной плотностью в ткани и для низкоаффинных первичных антител.
Шаг 1: Первичное антитело: Добавьте достаточное количество капель первичного 
антитела, чтобы закрыть тканевой срез. Инкубируйте согласно рекомендуемым условиям 
изготовления. Вымойте, и вытрите срезы как описано выше.
Шаг 2: Соединяющий реактив: Добавьте достаточное количество капель соединяющего 
реактива, чтобы закрыть срез ткани. Инкубируйте в течение 20 минут при комнатной температуре. 
Вымойте срезы как описано выше.
Шаг 3. . Индикаторный реактив: Примените достаточное количество капель индикаторного 
реактива, чтобы закрыть тканевой срез. Инкубируйте в течение 20 минут при комнатной 
температуре. Вымойте срезы как описано выше.
Шаг 4. . Субстрат/Хромоген: Примените раствор хромогена в течение 5-10 минут при 
комнатной температуре для окрашивания. Для достижения лучших результатов, смотрите в 
микроскоп за развитием окраски. После того, как желательная окраска достигнута, остановите 
эеакцию, моя срез в промывочном буфере. Обратите внимание на время, и следите за этим в 
гечение последующих инкубаций.
Шаг 5. Вымойте срезы и окрасьте их достаточным количеством краски. Наблюдайте 
ia закреплением окраски под микроскопом.
Усиление окрашивания:
-ели дополнительный сигнал желателен, обработайте срез ткани усилителем щелочной 
эосфатазы кат. # К 011 до развития окраски.
Ссылки: Bayer et al., Method Enzymol. 62, 308 (1979).


--- стр. 169 ---
Инструкция к системе детекции: щелочная
фосфатаза, кроличий окрашивающий
набор; Aik. Phos. Rabbit staining kit
Назначение:
Этот комплект разработан для иммуногистохимической маркировки специфичных 
первичных антител в тканевом срезе. Иммуногистохимический протокол, содержащийся в 
этой брошюре только руководство. В зависимости от условий фиксации ткани, первичных 
антител и навыков работы, мы поддерживаем лаборатории в уточнении собственного 
протокола. Эти реагенты были протестированы с проверкой качества на тканевых срезах, 
тем не менее, они могут быть оптимизированы для клеточных мазков и цитологической 
взвеси. Предлагаемое количество реагентов обеспечивает проведение от 500 до 1000 
тестов.
Принцип теста:
Высокий аффинитет нековалентного взаимодействия между биотином и стрептавидином 
(1* 1015) формирует базис для этого иммуноокрашивания. Требуется образование 
необратимых и специфических связей между биологическими макромолекулами. 
Иммуногистохимическое применение взаимодействия между авидином и биотином 
представлено в книге Bayer et al. (1979), где описана техника для создания активных 
соединений биотинила, таких как биотин-(М-гидроксисукцинимид и гидразин биотина для их 
«энъюгирования с различными органическими соединениями, включая иммуноглобулины и 
пероксидазу хрена (HRP). Стрептавидин (SA) - это тетрамерный протеин (молярный вес 4*15,000), 
зыделенный из actinobacterium Streptomyces авидином.(Chaiet & wolf, 1964). Стрептавидин может 
связывать до четырёх молекул биотина. Стрептавидин даёт превосходные результаты в 
сравнение с авидином, потому что его изоэлектрическая точка близка к нейтральной pH, в 
го время как авидин положительно заряжен при физиологической pH. Стрептавидин не 
содержит боковых цепочек карбогидрата, в то время как авидин включает 70% 
сарбогидрата. По этой причине Стрептавидин не имеет тенденции к неспецифическому 
связыванию. Первичные антитела связывают антигены-мишени в тканевом срезе, 
(онъюгированные вторичные антитела специфически связываются с этими рецепторами 
антител. Биотин-конъюгированные вторичные антитела, в свою очередь, маркируются 
юнъюгированным со стрептовидином энзимом и могут быть визуализированы 
соответствующим субстратом/хромогеном.
Зведение:
1ммунопероксидазные техники быстро распространяются и в практике патанатомии 
юдвергаются революционному изменению, начиная с развития этих процедур (Nadji & 
dorales, 1983). Благодаря их многосторонности, чувствительности и специфичности, 
1ммунопероксидазное окрашивание всегда даёт лучшее окрашивание при наличии 
юдходящих антител. С всё увеличивающимся числом антител против клеточных антигенов, 
1ммунопероксидазные методы теперь дают мощное средство для решения широкого 
спектра диагностических патологий. Все иммуногистохимические методы требуют наличия 
тределенного антитела для соединения с клеточным антигеном. В то же самое время 
|увствительность иммунопероксидазных методов является самым важным в широком 
>азнообразии определения локализации специфических антигенов.
Цепочная фосфатаза, содержащаяся в комплекте, имеют особую ценность для 
1крашивания тканей, имеющих высокую активность эндогенных пероксидаз. Щелочная 
эосфатаза не затрагивается эндогенными пероксидазами и поэтому даёт болей чистую 
зоновую окраску. Наш комплект основан на прямой SA-ALP сопряженной технологии.
S ГИСТ ЕМС" 5 1
BI
S4


--- стр. 170 ---
Связывающий реактив - коктейль из биотинированных анти-кроличьих реагентов, и таким 
образом способен к маркировке первичных антител кролика.
Реактивы:
1 бутыль: Связывающий Реактив: Желтый раствор. 100 мл раствора
биотинилированных анти-кроличьих иммуноглобулинов.
2 бутыль: Индикаторный реактив: Красный раствор. 100 мл раствора конъюгированной
стрептавидин-щелочной фосфатазы.
Меры предосторожности:
I) Несколько из реактивов в этом комплекте содержат азид 
натрия. Следуйте инструкции вашего предприятия. Если 
располагался в раковине, смойте струей воды в трубу, для 
избежания контакта азида натрия с трубой канализации.
II) Если вы начали процесс иммуноокрашивания, не позволяйте 
секциям ткани высохнуть, потому что это может привести к 
нежелательному фону и артефактам.
III) Интерпретация данных результатов будет ответственностью 
пользующего.
Условия хранения: Все реагенты должны храниться при температуре 2-8 С. Не 
замораживать.
Требуемый материал не входящий в состав комплекта::
Ксилол или депарафинизирующий раствор 
Спирт
Дистиллированная или деионизированная вода 
Краска
Моющий буфер (Кат # К 005)
Монтирующая среда (Кат # К 002)
Духовка или инкубатор 
Фляги для окраски 
Стекла 
Микроскоп 
Алмазный карандаш 
Подушечки Абсорбента 
Первичные антитела
Субстрат хромогена (кат. # К 001, К 003, К 007)
Подготовка Экземпляра:
Цель иммуогистохимии состоит в том, чтобы локализовать, идентифицировать и, когда это 
возможно, количественно определить элементы клетки и ткани. Оптимальная фиксация 
ткани - ключ к хорошему иммуноокрашиванию. Успешное иммуноокрашивание зависит от 
точного сохранения эпитопов, разыскиваемых в его структурном контексте. Мы 
рекомендуем нашим пользователям прочитать превосходную статью относительно 
подготовки ткани Larsson (1993), чтобы понять потребность и важность оптимальной 
фиксации ткани.
Подготовка реагентов: “Б ^ О М Ш 1 К л  л
|||/ системе" Jill
За исключением хромогена, все реагенты в этом комплекте готовы к использованию.
V, VbVSTt'MS Ltd Ji/J ■ х / 1/ * /
ф у У


--- стр. 171 ---
Положительный и отрицательный контроль:
Каждая реакция иммуноокрашивания должена включить известный положительный и 
отрицательный контроль, чтобы проверить надлежащее функционирование окрашивающей 
системы, также как и для интерпретации верных результатов.
Положительный контроль: ткань которая содержит желательный антиген, и дала
Отрицательный контроль: Один из нижепредложеного варианта должен использоваться в 
качестве отрицательного контроля:
1) Вместо первичного антитела, используйте нормальную неиммунную сыворотку от той же 
самой разновидности животного, из которого первичное антитело было взято.
2) Вместо первичного антитела, используйте буфер, в котором первичное антитело было 
растворено.
3) Используют ткань, в которой точно не содержится желательный антиген.
4) Адсорбируйте первичное антитело с соответствующим антигеном и используйте это 
вместо первичного антитела.
Протокол окраски:
Шаг 1. Удаление парафина: Депарафинизация секции ткани согласно
установленному порядку в вашей лаборатории и перенос ткани в отмывочный
буфер.
Шаг 2. Блокирование эндогенной щелочной фосфатазы. Это - необязательный шаг и 
должен быть выполнен только, если ткань содержит большое количество эндогенный 
щелочной фосфатазы. Добавьте достаточное количество капель блокиратора, чтобы 
закрыть ткань. Инкубируйте в течение 5-10 минут при комнатной температуре.
ШагЗ. Отмывка: удалите избыток реактива. Прополощите отмывочным буфером три раза 
по 1 минуте каждый раз. Удалите избыток буфера и тщательно вытрите стекло вокруг ткани, 
чтобы удалить избыток буфера со стекла, оставляя ткань влажной.
1 протокол иммуноокраски:
Этот протокол рекомендуется для оптимально фиксированных тканей с избыточным содержанием 
антигенов в ткани и для высоко аффинных первичных антител.
Шаг 1. Первичное антитело: Добавьте достаточное количество капель первичного антитела, чтобы 
закрыть тканевой срез. Инкубируйте 10 минут при комнатной температуре. Вымойте, и вытрите 
стекла как описано выше.
Шаг 2. Соединяющий реактив: Добавьте достаточное количество капель соединяющего реактива, 
чтобы закрыть срез ткани. Инкубируйте в течение 10 минут при комнатной температуре. Вымойте 
стекла как описано выше.
ШагЗ. . Индикаторный реактив: Примените достаточное количество капель индикаторного реактива, 
чтобы закрыть тканевой срез. Инкубируйте в течение 10 минут при комнатной температуре. Вымойте 
срезы как описано выше.
Шаг 4. Примените раствор хромогена в течение 5-10 минут при комнатной температуре для 
окрашивания. Для достижения лучших результатов, смотрите в микроскоп за развитием
положительное окрашивание в прошлом.


--- стр. 175 ---
w
реакцию, моя срез в промывочном буфере. Обратите внимание на время, и следите за этим в 
течение последующих инкубаций.
Шаг 5. Вымойте срезы и окрасьте их достаточным количеством краски. Наблюдайте 
за закреплением окраски под микроскопом.
Ссылки: Bayer et al., Method Enzymol. 62, 308 (1979).
Chaiet & Wolf, Arch. Biochem. Biophys. 106, 1 (1964).
Giorno, Diag. Immuno. 2, 161 (1984).
Hsu et al., J Histo. Cyto. 29, 577 (1981).
Nadji & Morales, Anat. pathol. 14, 767 (1983).
Nagle et al. J Histo. Chem. 31, 1010 (1983).
Larsson, Applied Immunohistochem. 1, 2, (1993).
Petrusz & Ordronneau, In Polak & Van noorden eds., Immunocytochemistry: 
Practical applications in pathology and biology. Bristol wright-PSG, 212, (1983).
DBS will not be held responsible for patent infringement or other violation that may occur with the use of our product.


--- стр. 176 ---
Инструкция к системе детекции: 
концентрированные вторичные 
биотинилированные антикроличьи 
антитела, концентрированный комплекс  
стрептавидин-пероксидаза хрена; Anti
rabbit (HRP)
Назначение: Этот комплект разработан для иммуногистохимической маркировки 
специфичных первичных антител в тканевом срезе. Иммуногистохимический протокол, 
содержащийся в этой брошюре, только руководство. В зависимости от условий фиксации 
ткани, первичных антител и опыта работы, мы поддерживаем работу лабораторий для 
уточнения собственного протокола. Эти реагенты были протестированы с проверкой 
качества на тканевом срезе, тем не менее, они могут использоваться для клеточных мазков 
и взвеси ткани. Предлагаемое количество реагентов обеспечивает проведение от 2000 до 
5000 тестов.
Принцип теста: Высокий аффинитет нековалентного взаимодействия между биотином и 
стрептавидином (1* 1015) формирует базис для этого иммуноокрашивания. Требуется 
образование необратимых и специфических связей между биологическими 
макромолекулами. Иммуногистохимическое применение взаимодействия между авидином и 
биотином представлено в книге Bayer et al. (1979), где описана техника для создания 
активных соединений биотинила, таких как биотин-Ы-гидроксисукцинимид и гидразин 
биотина для их конъюгирования с различными органическими соединениями, включая 
иммуноглобулины и пероксидазу хрена (HRP). Стрептавидин (SA) - это тетрамерный протеин 
(молярный вес 4*15,000), выделенный из actinobacterium Streptomyces avidinii.(Chaiet & wolf, 1964). 
Стрептавидин может связывать до четырёх молекул биотина. Стрептавидин даёт 
превосходные результаты в сравнение с авидином, потому что его изоэлектрическая точка 
близка к нейтральной pH, в то время как авидин положительно заряжен при 
физиологической pH. Стрептавидин не содержит боковых цепочек карбогидрата, в то время 
как авидин включает 70% карбогидрата. По этой причине Стрептавидин не имеет 
тенденции к неспецифическому связыванию. Первичные антитела связывают антигены- 
мишени в тканевом срезе. Конъюгированные вторичные антитела специфически 
связываются с этими рецепторами антител. Биотин-конъюгированные вторичные антитела, 
в свою очередь, маркируются конъюгированным со стрептовидином энзимом и могут быть 
визуализированы соответствующим субстратом/хромогеном.
Введение: Иммунопероксидазные техники быстро распространяются и в практике 
патанатомии подвергаются революционному изменению, начиная с развития этих процедур 
(Nadji & Morales, 1983). Благодаря их многосторонности, чувствительности и специфичности, 
иммунопероксидазное окрашивание всегда даёт лучшее окрашивание при наличии 
подходящих антител. С всё увеличивающимся числом антител против клеточных антигенов, 
иммунопероксидазные методы теперь дают мощное средство для решения широкого 
спектра диагностических патологий. Все иммуногистохимические методы требуют наличия 
определенного антитела для соединения с клеточным антигеном. В то же самое время 
чувствительность иммунопероксидазных методов является самым важным в широком 
разнообразии определения локализации специфических антигенов.
Различные исследователи (Petrusz et al., 1983; Nagle et al. 1983; Giorno et al., 1984) показали, что 
прямая SA-HRP конъюгированная техника является от 4 до 8 раз более чувствительной, 
чем авидин-биотиновый комплекс, описанный Hsu et al. (1981). Наш комплект основан на 
прямой SA-HRP конъюгированной технологии. Соединяющий реактив -


--- стр. 177 ---
2 3 0
биотинилированный анти-кроличий козий компонент, способный к маркировке первичных 
антител, выделенных из кролика.
Реактивы:
1 бутыль: Соединяющий реактив: 1 мл раствора биотинилированного анти-
кроличьего иммуноглобулина.
2 бутыль: Индикаторный реактив: 1 мл раствора конъюгата стрептовидин-
пероксидаза хрена.
Меры предосторожности:
I) DAB, классифицировалось как возможное канцерогенное 
вещество и может быть причиной раздражения кожи после 
контакта. Избегайте контакта с одеждой и незащищённой 
кожей. В случае контакта, немедленно промойте большим 
количеством воды.
II) Несколько из реактивов в этом комплекте содержат азид 
натрия. Следуйте инструкции вашего предприятия. Если 
располагался в раковине, смойте водой в трубу, для 
избежания контакта азида натрия с водопроводной 
системой.
III) Если вы начали процесс иммуноокрашивания, не позволяйте 
секциям ткани высохнуть, потому что это может привести к 
нежелательному фону и артефактам.
Ш) Интерпретация данных результатов будет ответственностью
пользующего.
Условия хранения: Все реагенты должны храниться при температуре 2-8 С. Не 
замораживать.
Требуемый материал не входящий в состав комплекта:
Ксилол или депарафинизирующий раствор 
Абсолютный спирт
Дистиллированная или деионизированная вода 
Краска
Моющий буфер (Кат # К 005)
Монтирующая среда (Кат # К 002)
Духовка или инкубатор 
Фляги для окраски 
Стекла 
Микроскоп 
Алмазный карандаш 
Подушечки Абсорбента 
Первичные антитела 
Перекись водорода
Субстрат хромогена (каталог # К 001, К 003, К 007)
Подготовка Экземпляра:
Цель иммуогистохимии состоит в том, чтобы локализовать, идентифицировать и, когда это 
возможно, количественно определить элементы клетки и ткани. Оптимальная фиксация 
ткани - ключ к хорошему иммуноокрашиванию. Успешное иммуноокрашивание зависит от 
точного сохранения эпитопов, разыскиваемых в его структурном контексте. Мы 
рекомендуем нашим пользователям прочитать превосходную статью относительно 
подготовки ткани Larsson (1993), чтобы понять потребность и важность оптимальной 
фиксации ткани.
\V ? \ /£


--- стр. 178 ---
Подготовка Реактивов:
1 бутыль: Соединяющий реактив: Растворите соединяющий реактив от 1:100 до 1:200 в
растворителе вторичных антител кат. # 022.
2бутыль: Индикаторный реактив: Растворите индикаторный реактив от 1:100 до 1:200 в
растворителе II пероксидазы 2. Кат. # К 020.
Эти диапазоны растворения - только рекомендации. В зависимости от ткани, первичного антитела и 
других условий иммуноокрашивания, мы рекомендуем, чтобы пользователи оптимизировали их 
собственные концентрации.
Положительный и отрицательный контроль:
Каждая реакция иммуноокрашивания должена включить известный положительный и 
отрицательный контроль, чтобы проверить надлежащее функционирование окрашивающей 
системы, также как и для интерпретации верных результатов.
Положительный контроль: ткань которая содержит желательный антиген, и дала 
положительное окрашивание в прошлом.
Отрицательный контроль: Один из нижепредложеного варианта должен использоваться в 
качестве отрицательного контроля:
1) Вместо первичного антитела, используйте нормальную неиммунную сыворотку от той же 
самой разновидности животного, из которого первичное антитело было взято.
2) Вместо первичного антитела, используйте буфер, в котором первичное антитело было 
растворено.
3) Используют ткань, в которой точно не содержится желательный антиген.
4) Адсорбируйте первичное антитело с соответствующим антигеном и используйте это 
вместо первичного антитела.
Протокол окраски:
Шаг 1. Удаление парафина: Депарафинизация секции ткани согласно
установленному порядку в вашей лаборатории и перенос ткани в отмывочный
буфер.
Шаг 2. Блокирование эндогенной щелочной фосфатазы. Добавьте достаточное 
количество капель блокиратора, чтобы закрыть ткань. Инкубируйте в течение 5 
минут при комнатной температуре. Используйте 0,3% Н2С > 2 для замороженных 
срезов ткани, мазков клеток и взвеси клеток.
Шаг 3. Отмывка: удалите избыток реактива. Прополощите отмывочным буфером три раза 
по 1 минуте каждый раз. Удалите избыток буфера и тщательно вытрите стекло вокруг ткани, 
чтобы удалить избыток буфера со стекла, оставляя ткань влажной.
1 протокол иммуноокраски:
Этот протокол рекомендуется для оптимально фиксированных тканей с избыточным содержанием 
антигенов в ткани и для высоко аффинных первичных антител.
Шаг 1. Первичное антитело: Добавьте достаточное количество капель первичного антитела, 
чтобы закрыть тканевой срез. Инкубируйте 10 минут при комнатной температуре. Вымойте, и 
вытрите стекла как описано выше.
Шаг 2. Соединяющий реактив: Добавьте достаточное количество капель соединяющего 
реактива, чтобы закрыть срез ткани. Инкубируйте в течение 10 минут при комнатной температуре. 
Вымойте стекла как описано выше.
Шаг 3. Шаг 3. Индикаторный реактив: Примените достаточное количество капель 
индикаторного реактива, чтобы закрыть тканевой срез. Инкубируйте в течение 10 минут при 
комнатной температуре. Вымойте срезы как описано выше.
Шаг 4. Субстрат/Хромоген: Примените раствор хромогена в течение 10-20 минут при 
комнатной температуре для окрашивания. Для достижения лучших результатов, смотрите в 
микроскоп за развитием окрашивания. После того, как желательная окраска достигнута, остановите


--- стр. 179 ---
Инструкция к системе детекции: 
концентрированные вторичные 
биотинилированные антимышиные  
антитела, концентрированный комплекс  
стрептавидин-щелочная фосфатаза; Anti
mouse (ALP)
Назначение: Этот комплект разработан для иммуногистохимической маркировки 
специфичных первичных антител в тканевом срезе. Иммуногистохимический протокол, 
содержащийся в этой брошюре, только руководство. В зависимости от условий фиксации 
ткани, первичных антител и опыта работы, мы поддерживаем работу лабораторий для 
уточнения собственного протокола. Эти реагенты были протестированы с проверкой 
качества на тканевом срезе, тем не менее, они могут использоваться для клеточных мазков 
и взвеси ткани. Предлагаемое количество реагентов обеспечивает проведение от 500 до 
1000 тестов.
Принцип теста: Высокий аффинитет нековалентного взаимодействия между биотином и 
стрептавидином ( 1* 1015) формирует базис для этого иммуноокрашивания. Требуется 
образование необратимых и специфических связей между биологическими 
макромолекулами. Иммуногистохимическое применение взаимодействия между авидином и 
биотином представлено в книге Bayer et al. (1979), где описана техника для создания 
активных соединений биотинила, таких как биотин-1М-гидроксисукцинимид и гидразин 
биотина для их конъюгирования с различными органическими соединениями, включая 
иммуноглобулины и пероксидазу хрена (HRP). Стрептавидин (SA) - это тетрамерный протеин 
(молярный вес 4*15,000), выделенный из actinobacterium Streptomyces avidinii.(Chaiet & wolf, 1964). 
Стрептавидин может связывать до четырёх молекул биотина. Стрептавидин даёт 
превосходные результаты в сравнение с авидином, потому что его изоэлектрическая точка 
близка к нейтральной pH, в то время как авидин положительно заряжен при 
физиологической pH. Стрептавидин не содержит боковых цепочек карбогидрата, в то время 
как авидин включает 70% карбогидрата. По этой причине Стрептавидин не имеет 
тенденции к неспецифическому связыванию. Первичные антитела связывают антигены- 
мишени в тканевом срезе. Конъюгированные вторичные антитела специфически 
связываются с этими рецепторами антител. Биотин-конъюгированные вторичные антитела, 
в свою очередь, маркируются конъюгированным со стрептовидином энзимом и могут быть 
визуализированы соответствующим субстратом/хромогеном.
Введение: Иммунопероксидазные техники быстро распространяются и в практике 
патанатомии подвергаются революционному изменению, начиная с развития этих процедур 
(Nadji & Morales, 1983). Благодаря их многосторонности, чувствительности и специфичности, 
иммунопероксидазное окрашивание всегда даёт лучшее окрашивание при наличии 
подходящих антител. С всё увеличивающимся числом антител против клеточных антигенов, 
иммунопероксидазные методы теперь дают мощное средство для решения широкого 
спектра диагностических патологий. Все иммуногистохимические методы требуют наличия 
определенного антитела для соединения с клеточным антигеном. В то же самое время 
чувствительность иммунопероксидазных методов является самым важным в широком 
разнообразии определения локализации специфических антигенов.
Щелочная фосфатаза, содержащаяся в комплекте, имеют особую ценность для 
окрашивания тканей, имеющих высокую активность эндогенных пероксидаз. Щелочная 
фосфатаза не затрагивается эндогенными пероксидазами и поэтому даёт болей чистую 
фоновую окраску. Наш комплект основан на прямой SA-ALP сопряженной технологии.


--- стр. 180 ---
Связывающий биотинилированный реактив антимышиный и, таким образом, пригоден к 
маркировке первичных антител мыши.
Реактивы:
1  бутыль: Связывающий реактив: 1ml раствора биотинированных анти-мышиных
иммуноглобулинов.
2 бутыль: Индикаторный реактив: 1  ml раствора конъюгированной стрептавидин-
щелочной фосфатазы.
Меры предосторожности:
I) Несколько из реактивов в этом комплекте содержат азид 
натрия. Следуйте инструкции вашего предприятия. Если 
располагался в раковине, смойте водой в трубу, для 
избежания контакта азида натрия с водопроводной 
системой.
II) Если вы начали процесс иммуноокрашивания, не позволяйте 
секциям ткани высохнуть, потому что это может привести к 
нежелательному фону и артефактам.
iii) Интерпретация данных результатов будет ответственностью 
пользующего.
Условия хранения: Все реагенты должны храниться при температуре 2-8 С. Не 
замораживать.
Требуемый материал не входящий в состав комплекта:
Ксилол или депарафинизирующий раствор 
Абсолютный спирт
Дистиллированная или деионизированная вода 
Краска
Моющий буфер (Кат # К 005)
Монтирующая среда (Кат # К 002)
Духовка или инкубатор 
Фляги для окраски 
Стекла 
Микроскоп 
Алмазный карандаш 
Подушечки Абсорбента 
Первичные антитела 
Перекись водорода
Субстрат хромогена (каталог # К 001, К 003, К 007)
Подготовка Экземпляра:
Цель иммуогистохимии состоит в том, чтобы локализовать, идентифицировать и, когда это 
возможно, количественно определить элементы клетки и ткани. Оптимальная фиксация 
ткани - ключ к хорошему иммуноокрашиванию. Успешное иммуноокрашивание зависит от 
точного сохранения эпитопов, разыскиваемых в его структурном контексте. Мы 
рекомендуем нашим пользователям прочитать превосходную статью относительно 
подготовки ткани Larsson (1993), чтобы понять потребность и важность оптимальной 
фиксации ткани.
\У^\ *•$  I 'J /о/


--- стр. 181 ---
Подготовка
1 бутыль
2 бутыль
Эти диапазоны 
других условий 
собственные концентрации.
Положительный и отрицательный контроль:
Каждая реакция иммуноокрашивания должена включить известный положительный и 
отрицательный контроль, чтобы проверить надлежащее функционирование окрашивающей 
системы, также как и для интерпретации верных результатов.
Положительный контроль: ткань которая содержит желательный антиген, и дала 
положительное окрашивание в прошлом.
Отрицательный контроль: Один из нижепредложеного варианта должен использоваться в 
качестве отрицательного контроля:
1) Вместо первичного антитела, используйте нормальную неиммунную сыворотку от той же 
самой разновидности животного, из которого первичное антитело было взято.
2) Вместо первичного антитела, используйте буфер, в котором первичное антитело было 
растворено.
3) Используют ткань, в которой точно не содержится желательный антиген.
4) Адсорбируйте первичное антитело с соответствующим антигеном и используйте это 
вместо первичного антитела.
Протокол окраски:
Шаг 1. Удаление парафина: Депарафинизация секции ткани согласно 
установленному порядку в вашей лаборатории и перенос ткани в отмывочный
буфер.
Шаг 2. Блокирование эндогенной щелочной фосфатазы. Добавьте достаточное 
количество капель блокиратора, чтобы закрыть ткань. Инкубируйте в течение 5 
минут при комнатной температуре. Используйте 0,3% Н2С > 2 для замороженных 
срезов ткани, мазков клеток и взвеси клеток.
Шаг 3. Отмывка: удалите избыток реактива. Прополощите отмывочным буфером 
три раза по 1 минуте каждый раз. Удалите избыток буфера и тщательно вытрите стекло 
вокруг ткани, чтобы удалить избыток буфера со стекла, оставляя ткань влажной.
1 протокол иммуноокраски:
Этот протокол рекомендуется для оптимально фиксированных тканей с избыточным содержанием 
антигенов в ткани и для высоко аффинных первичных антител.
Шаг 1. Первичное антитело: Добавьте достаточное количество капель первичного антитела, 
чтобы закрыть тканевой срез. Инкубируйте 10 минут при комнатной температуре. Вымойте, и 
вытрите стекла как описано выше.
Шаг 2. Соединяющий реактив: Добавьте достаточное количество капель соединяющего 
реактива, чтобы закрыть срез ткани. Инкубируйте в течение 10 минут при комнатной температуре. 
Вымойте стекла как описано выше.
Шаг 3. Шаг 3. Индикаторный реактив: Примените достаточное количество капель 
индикаторного реактива, чтобы закрыть тканевой срез. Инкубируйте в течение 10 минут при 
комнатной температуре. Вымойте срезы как описано выше.
Шаг 4. Субстрат/Хромоген: Примените раствор хромогена в течение 10-20 минут при 
комнатной температуре для окрашивания. Для достижения лучших результатов, смотрите в 
микроскоп за развитием окрашивания. После того, как желательная окраска достигнута, остановите 
реакцию, моя срез в промывочном буфере. Обратите внимание на время, и следите за этим в 
течение последующих инкубаций.
2 протокол иммуноокраски:
реагента:
Связывающий реактив: растворить связывающий реактив 1:100 до 1:200 в 
растворителе вторичных антител кат. # 022 
Индикаторный реактив: растворить индикаторный реактив 1:100 до 1:200 в 
растворителе щелочной фосфотазы. кат. # К 028.
растворения - только рекомендации. В зависимости от ткани, первичного антитела и 
иммуноокрашивания, мы рекомендуем, чтобы пользователи оптимизировали их


--- стр. 182 ---
Этот протокол рекомендуется для менее оптимально фиксированных тканей с низкой 
антигенной плотностью в ткани и для низкоаффинных первичных антител.
Шаг 1. Первичное антитело: Добавьте достаточное количество капель первичного 
антитела, чтобы закрыть тканевой срез. Инкубируйте согласно рекомендуемым условиям 
изготовления. Вымойте, и вытрите срезы как описано выше.
Шаг 2. Соединяющий реактив: Добавьте достаточное количество капель соединяющего 
реактива, чтобы закрыть срез ткани. Инкубируйте в течение 20 минут при комнатной температуре. 
Вымойте срезы как описано выше.
Шаг 3. Индикаторный реактив: Примените достаточное количество капель индикаторного 
реактива, чтобы закрыть тканевой срез. Инкубируйте в течение 20 минут при комнатной 
температуре. Вымойте срезы как описано выше.
Шаг 4. Субстрат/Хромоген: Примените раствор хромогена в течение 2-5 минут при 
комнатной температуре для окрашивания. Для достижения лучших результатов, смотрите в 
микроскоп за развитием окраски. После того, как желательная окраска достигнута, остановите 
реакцию, моя срез в промывочном буфере. Обратите внимание на время, и следите за этим в 
течение последующих инкубаций.
Шаг 5. Вымойте срезы и окрасьте их достаточным количеством краски. Наблюдайте 
за закреплением окраски под микроскопом.
Усиление окрашивания:
Если дополнительный сигнал желателен, обработайте срезы ткани усилителем щелочной 
фосфатазы в течение 1 минуты после шага III. Высушите избыток усилителя и добавьте 
раствор субстрата/хромогена без промывки.
СЫ ПКИ! Bayer etal., Method Enzymol. 62, 308 (1979).
Chaiet & Wolf, Arch. Biochem. Biophys. 106, 1 (1964).
Giorno, Diag. Immuno. 2, 161 (1984).
Hsu et al., J Histo. Cyto. 29, 577 (1981).
Nadji & Morales, Anat. pathol. 14, 767 (1983).
Nagle et al. J Histo. Chem. 31, 1010 (1983).
Larsson, Applied Immunohistochem. 1, 2, (1993).
Petrusz & Ordronneau, In Polak & Van noorden eds., Immunocytochemistry:
Practical applications in pathology and biology. Bristol wright-PSG, 212, (1983).
References : Bayer et al., Method Enzymol. 62, 308 (1979).
Chaiet & Wolf, Arch. Biochem. Biophys. 106, 1 (1964).
Giorno, Diag. Immuno. 2, 161 (1984).
Hsu et al., J Histo. Cyto. 29, 577 (1981).
Nadji & Morales, Anat. pathol. 14, 767 (1983).
Nagle et al. J Histo. Chem. 31, 1010 (1983).
Larsson, Applied Immunohistochem. 1,2, (1993).
Petrusz & Ordronneau, In Polak & Van noorden eds., Immunocytochemistry:  
Practical applications in pathology and biology. Bristol wright-PSG, 212, (1983).
DBS will not be held responsible for patent infringement or other violation that may occur with the use of our product.
DBS 1020 Serpentine Lane, # 114, Pleasanton, CA 94566 Tel: 925 484 3350, Fax: 925 484 3390
Website: www.dbiosvs.com e-mail: customersupport@dbiosys.com


--- стр. 183 ---
L
Инструкция к системе детекции: 
концентрированные вторичные 
биотинилированные антикроличьи 
антитела, концентрированный комплекс  
стрептавидин-щелочная фосфатаза; Anti
rabbit (ALP)
Назначение: Этот комплект разработан для иммуногистохимической маркировки 
специфичных первичных антител в тканевом срезе. Иммуногстохимический протокол, 
содержащийся в этой брошюре, только руководство. В зависимости от условий фиксации 
ткани, первичных антител, опыта работы, мы поддерживаем индивидуальные 
лабораторные испытания для уточнения собственного протокола. Эти реагенты были 
протестированы с проверкой качества при использовании тканевого среза, тем не менее, 
они могут быть использованы для клеточных мазков и взвеси клеток. Количество реагентов 
в наборе обеспечивает проведение от 500 до 1000 тестов.
Принцип теста: Высокий аффинитет нековалентного взаимодействия между биотином и 
стрептавидином ( 1* 1015) формирует базис для этого иммуноокрашивания. Требуется 
образование необратимых и специфических связей между биологическими 
макромолекулами. Иммуногистохимическое применение взаимодействия между авидином и 
биотином представлено в книге Bayer et al. (1979), где описана техника для создания 
активных соединений биотинила, таких как биотин-[М-гидроксисукцинимид и гидразин 
биотина для их конъюгирования с различными органическими соединениями, включая 
иммуноглобулины и пероксидазу хрена (HRP). Стрептавидин (SA) - это тетрамерный протеин 
(молярный вес 4*15,000), выделенный из actinobacterium Streptomyces авидином.(Chaiet & wolf,
1964). Стрептавидин может связывать до четырёх молекул биотина. Стрептавидин даёт 
превосходные результаты в сравнение с авидином, потому что его изоэлектрическая точка 
близка к нейтральной pH, в то время как авидин положительно заряжен при 
физиологической pH. Стрептавидин не содержит боковых цепочек карбогидрата, в то время 
как авидин включает 70% карбогидрата. По этой причине Стрептавидин не имеет 
тенденции к неспецифическому связыванию. Первичные антитела связывают антигены- 
мишени в тканевом срезе. Конъюгированные вторичные антитела специфически 
связываются с этими рецепторами антител. Биотин-конъюгированные вторичные антитела, 
в свою очередь, маркируются конъюгированным со стрептовидином энзимом и могут быть 
визуализированы соответствующим субстратом/хромогеном.
Введение: Иммунопероксидазные техники быстро распространяются и в практике 
патанатомии подвергаются революционному изменению, начиная с развития этих процедур 
(Nadji & Morales, 1983). Благодаря их многосторонности, чувствительности и специфичности, 
иммунопероксидазное окрашивание всегда даёт лучшее окрашивание при наличии 
подходящих антител. С всё увеличивающимся числом антител против клеточных антигенов, 
иммунопероксидазные методы теперь дают мощное средство для решения широкого 
спектра диагностических патологий. Все иммуногистохимические методы требуют наличия 
определенного антитела для соединения с клеточным антигеном. В то же самое время 
чувствительность иммунопероксидазных методов является самым важным в широком 
разнообразии определения локализации специфических антигенов. Различные 
исследователи (Petrusz et al., 1983; Nagle et al. 1983; Giorno et al., 1984) показали, что прямая SA- 
ALP техника конъюгации является от 4 до 8 раз более чувствительной чем, авидин- 
биотиновый комплекс, описанный Hsu et al. (1981). Наш комплект основан на прямой SA-ALP
К  5


--- стр. 184 ---
т
технологии конъюгации. Соединяющий реактив - биотинированный анти-кроличий 
компонент, что дает возможность маркировки первичных антител, выделенных из кролика.
Реактивы:
1  бутыль: Связывающий реактив: 1мл раствора биотинированных анти-кроличьих 
иммуноглобулинов.
2 бутыль: Индикаторный реактив: 1  мл раствора конъюгированной стрептавидин-
щелочной фосфатазы.
Меры предосторожности:
I) Несколько из реактивов в этом комплекте содержат азид 
натрия. Следуйте инструкции вашего предприятия. Если 
располагался в раковине, смойте водой в трубу, для 
избежания контакта азида натрия с водопроводной 
системой.
II) Если вы начали процесс иммуноокрашивания, не позволяйте 
секциям ткани высохнуть, потому что это может привести к 
нежелательному фону и артефактам.
iii) Интерпретация данных результатов будет ответственностью 
пользующегося.
Условия хранения: Все реагенты должны храниться при температуре 2-8 С. Не 
замораживать.
Требуемый материал не входящий в состав комплекта:
Ксилол или депарафинизирующий раствор 
Спирт
Дистиллированная или деионизированная вода 
Краска
Моющий буфер (Кат # К 005)
Монтирующая среда (Кат # К 002)
Духовка или инкубатор 
Фляги для окраски 
Стекла 
Микроскоп 
Алмазный карандаш 
Подушечки Абсорбента 
Первичные антитела 
Перекись водорода
Субстрат хромогена (кат.# К 001, К 003, К 007) 
Подготовка Экземпляра:
Цель иммуогистохимии состоит в том, чтобы локализовать, идентифицировать и, когда это 
возможно, количественно определить элементы клетки и ткани. Оптимальная фиксация 
ткани - ключ к хорошему иммуноокрашиванию. Успешное иммуноокрашивание зависит от 
точного сохранения эпитопов, разыскиваемых в его структурном контексте. Мы 
рекомендуем нашим пользователям прочитать превосходную статью относительно 
подготовки ткани Larsson (1993), чтобы понять потребность и важность оптимальной 
фиксации ткани.
Подготовка реагента:


--- стр. 185 ---
1 бутыль Связывающий реактив: растворить связывающий реактив 1:100 до 1:200 в
растворителе вторичных антител кат. # 022
2 бутыль Индикаторный реактив: растворить индикаторный реактив 1:100 до 1:200 в
растворителе щелочной фосфотазы кат. # К 028.
Эти диапазоны растворения - только рекомендации. В зависимости от ткани, первичного антитела и 
других условий иммуноокрашивания, мы рекомендуем, чтобы пользователи оптимизировали их 
собственные концентрации.
Положительный и отрицательный контроль:
Каждая реакция иммуноокрашивания должена включить известный положительный и 
отрицательный контроль, чтобы проверить надлежащее функционирование окрашивающей 
системы, также как и для интерпретации верных результатов.
Положительный контроль: ткань которая содержит желательный антиген, и дала 
положительное окрашивание в прошлом.
Отрицательный контроль: Один из нижепредложеного варианта должен использоваться в 
качестве отрицательного контроля:
1) Вместо первичного антитела, используйте нормальную неиммунную сыворотку от той же 
самой разновидности животного, из которого первичное антитело было взято.
2) Вместо первичного антитела, используйте буфер, в котором первичное антитело было 
растворено.
3) Используют ткань, в которой точно не содержится желательный антиген.
4) Адсорбируйте первичное антитело с соответствующим антигеном и используйте это 
вместо первичного антитела.
Протокол окраски:
Шаг 1. Удаление парафина: Депарафинизация секции ткани согласно установленному 
порядку в вашей лаборатории и перенос ткани в отмывочный буфер.
Шаг 2. Блокирование эндогенной щелочной фосфатазы. Добавьте достаточное количество 
капель блокиратора, чтобы закрыть ткань. Инкубируйте в течение 5 минут при 
комнатной температуре. Используйте 0,3% Н 2О2 для замороженных срезов ткани, 
мазков клеток и взвеси клеток.
Шаг 3. Отмывка: удалите избыток реактива. Прополощите отмывочным буфером 
три раза по 1 минуте каждый раз. Удалите избыток буфера и тщательно вытрите стекло 
вокруг ткани, чтобы удалить избыток буфера со стекла, оставляя ткань влажной.
1 протокол иммуноокраски:
Этот протокол рекомендуется для оптимально фиксированных тканей с избыточным содержанием 
антигенов в ткани и для высоко аффинных первичных антител.
Шаг 1. Первичное антитело: Добавьте достаточное количество капель первичного антитела, 
чтобы закрыть тканевой срез. Инкубируйте 10 минут при комнатной температуре. Вымойте, и 
вытрите стекла как описано выше.
Шаг 2. Соединяющий реактив: Добавьте достаточное количество капель соединяющего 
реактива, чтобы закрыть срез ткани. Инкубируйте в течение 10 минут при комнатной температуре. 
Вымойте стекла как описано выше.
ШагЗ. ШагЗ. Индикаторный реактив: Примените достаточное количество капель 
индикаторного реактива, чтобы закрыть тканевой срез. Инкубируйте в течение 10 минут при 
комнатной температуре. Вымойте срезы как описано выше.
Шаг 4. Субстрат/Хромоген: Примените раствор хромогена в течение 10-20 минут при 
комнатной температуре для окрашивания. Для достижения лучших результатов, смотрите в 
микроскоп за развитием окрашивания. После того, как желательная окраска достигнута, остановите 
реакцию, моя срез в промывочном буфере. Обратите внимание на время, и следите за этим в 
течение последующих инкубаций.
2 протокол иммуноокраски: