Набор реагентов и расходных материалов для определения in vitro функциональности альбумина в сыворотке крови методом спинового зонда «MMS-kit-SA01» — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 2 ---
Данные для идентиф икации набора реагентов находятся на этикетке, нанесенной
н а его упаковку, и содержат;
• Знак IVD СЕ m arking;
• Наименование и адрес изготовителя Medlnnovation GmbH;
• Наименование набора “ MMS-kit-SA01”;
• Указание на использование только для лабораторных исследований: Only
for laboratory use In vitro
• Код партии Lot XXX, где XXX - комбинация циф р и б укв ;
• Срок годности набора в формате ГГГГ-ММ (год-месяц);
• Указания п о условиям хранения и транспортировки.
Изготовитель набора реагентов: Medlnnovation GmbH.
Адрес: Nonnendammallee 42-43, 13599 B erlin, Germany.
Сервис-центр: ESR-Analyselabor, Freiheitstrasse 124/126, 15745 W ildau, Germany
Copyright © 2007, M edlnnovation GmbH
Bee права защищены
Версия от 16.04.2007
--- стр. 3 ---
СОДЕРЖАНИЕ
1. НАЗНАЧЕНИЕ.....................................................................................................4
2. ПРИНЦИП МЕТОДА............................................................................................ 5
3. СОСТАВ НАБОРА............................................................................................... 5
3.1 Срок годности................................................................................................ 7
3.2 Условия и сроки хранения набора при транспортировке в первичном
контейнере
..........................................................................................................7
3.3 Условия хранения набора реагентов после вскрытия первичного
контейнера...........................................................................................................7
3.4 Условия и сроки хранения реагентов после вскрытия пробирок с
растворами спинового зонда.............................................................................7
4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА..............................................7
4.1 Специфичность..............................................................................................7
4.2 Воспроизводимость......................................................................................7
4.3 Линейность............................................................
........................................7
4.4 Нормальные величины................................................................................8
5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ...........................................................................8
6. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ...................................................................... 8
7. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ...........................................................................8
8. ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА......................................................9
9. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА.................................................................................... 9
10. РАСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТА АНАЛИЗА.................................................................. 10
11. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА РЕАГЕНТОВ И МЕРЫ, ПРИНИМАЕМЫЕ ПРИ
ОБНАРУЖЕНИИ ИЗМЕНЕНИЙ..............................................................................10
--- стр. 4 ---
1 . Н а з н а ч е н и е
1.1. Набор реагентов “ MMS-kit-SA01” предназначен для определения
ф ункциональности альбумина в образцах сы воротки и EDTA-плазмы кр о в и
человека методом спинового зонда (MMS-исследование) на лабораторном
анализаторе электронного парамагнитного резонанса типа
“ ESR-Analysator MMS 01-08” .
1.2. Сы вороточны й альбумин - основной транспортны й белок крови, главной
физиологической ф ункцией которого является транспорт жирны х кислот,
связы вание эндотоксинов и и х эвакуация к гепатоцитам. Альбумин обеспечивает
также перенос билирубина и многих других метаболитов.
В процессе транспорта молекулы альбумина различны м образом реагируют с
переносимы ми жирны ми кислотами, обеспечивая сначала и х эф ф ективную
сорбцию и связы вание п р и загрузке, а затем - эф ф ективную диссоциацию п р и
передаче клеткам-мишеням. Изменчивость связы ваю щ их свойств альбумина в
процессе tpancnopTa метаболитов обеспечивается за счет конф ормационной
подвижности этого белка и аллостерических взаимодействий между его
различны м |и центрами связы вания.
В крови молекулы альбумина частично загружены переносимы ми метаболитами,
состав и количество которы х зависят от состояния организма и изменяю тся п р и
развитии патологических процессов, что отражается на способности альбумина
вы полнять транспортные операции с жирны ми кислотами (его ф ункциональности),
и влияет н^ 1 конф ормацию белка.
1.3. Метод оценки показателей функциональности сы вороточного альбумина
может бы ть использован в стационаре и пр и диагностических обследованиях с
целью :
-диагностики и мониторинга нарушений транспортной системы крови п р и
интоксикации:
-диагностики роста злокачественных новообразований (по вы явлению
специфического нарушения конформации молекул альбумина, вы зы ваемого
метаболитами злокачественного роста);
- мониторинга течения онкологических заболеваний.
1.4. Набор рассчитан на проведение анализа 75 проб.
1.5. Набор реагентов применяется в медицинских лабораторных исследованиях
(in vitro диагностика).
1.6. Набор реагентов предназначен для качественного анализа - определения
показателей ф ункциональности сы вороточного альбумина.
--- стр. 5 ---
2 . П р и н ц и п м е т о д а
Определение показателей функциональности сы вороточного альбумина с
помощ ью набора реагентов “ MMS-kit-SA01“ основано на методе спиновы х зондов,
теория й методики применения которого описаны в следующих книгах: 1 ) М ет о д
сп и н о вы х м ет ок в м о л екул ярн ой би ол оги и . Л и х т ен ш т ей н Г .И . М ., “ Н а ук а ‘ \ 1 9 7 4 ;
2 ) М ет од сп и нового зо н да. К узн ец ов А .Н .. М ., “ Н а у к а " , 1 9 7 6 ; 3 ) М ет о д с п и н о вы х
м ет о к . П о д ред. Л . Б ерли н ера. М . " М и р “ , 1 9 7 9 ).
Метод определения показателей ф ункциональности сы вороточного альбумина
соответствует Европейскому Патенту ЕР 1269213 и Патенту России RU 2275648, и
состоит в следующем:
о в исследуемой пробе индуцирую т целенаправленные конф ормационны е
изменения молекул альбумина, для чего к трем аликвотам про бы
добавляют три различны х концентрации связы ваю щ егося с альбумином
спинового зонда и дополнительно три различны х концентрации этанола,
о Из спектров электронного парамагнитного резонанса (ЭПР) аликвот со
спиновы м зондом и этанолом, на основе компью терной имитации и ф итинга
спектров ЭПР, определяют степень изменения параметров связы вания
спинового зонда в центрах связы вания альбумина в зависимости от
концентрации спинового зонда и концентрации этанола,
о Изменения транспортных свойств альбумина рассчиты ваю т на основе
изменений значений параметров связы вания спинового зонда в
зависимости от концентрации спинового зонда и этанола.
Для исследования берут три аликвоты образца сы воротки, которы е смешивают с
различны ми п о концентрации этанольны ми растворами спин-меченой жирной
кислоты (16-доксил-стеариновая кислота). Затем аликвоты инкубирую т для
прохождения реакции связы вания спинового зонда центрами связы вания
альбумина. После инкубации аликвоты набирают в стеклянные капилляры ,
которы е последовательно исследую т на анализаторе “ ESR-Analysator MMS OI
O S " .
Анализатор регистрирует ЭПР-спектры спинового зонда в каждом капилляре,
вы полняет расчет параметров каждого спектра, и и з и х совокупности
рассчитывает показатели функциональности альбумина в отношении жирны х
кислот: рвязы ваю щ ую способность (BE), транспортную эф ф ективность (RTQ),
детоксификационную способность (DTE), а также показатель нативности
конформации белка (DR).
Величины показателей ф ункциональности альбумина вы ражаю тся в процентах к
среднему значению норм ы у взрослого человека, показатель нативности
конформации выражается в условны х единицах.
3 . С о с т а в н а б о р а
Комплектность набора реагентов указана в таблицах 1 - 3.
Набор содержит компоненты , различающиеся п о условиям хранения, которы е
уложены в две упаковки. На упаковках нанесены идентификационная маркировка
и указания п о условиям хранения.
Набор не содержит токсичны х, возгораемы х и других опасны х веществ.
--- стр. 6 ---
Таблица 1. Комплектность набора реагентов
Обозначение
(маркировка) Наименование Количество,
ш т. Примечания
MMS-kit-SA01-R1 Комплект растворов 1 В составе
согласно
таблице 2
MMS-kit-SA01-R2 Комплект для проведения
анализа
1 В составе
согласно
таблице 3
Инструкция по применению 1
Паспорт на набор реагентов 1
MMS-kit-SA01 Упаковка 1
Таблица 2. Состав комплекта растворов MMS-kit-SA01-R1
Маркировка Состав Концентрация,
ммоль/л
Объем,
м л
Количество,
ш т.
S 1 (желтая
этикетка)
Раствор спинового
зонда 16-доксил*
стеариновая кислота в
этаноле (в пробирке)
3,5 0,35 3
S2 (синяя
этикетка)
Раствор спинового
зонда 16-доксил-
стеариновая кислота в
этаноле (в пробирке)
5,8 0,4 3
S3 (красная
этикетка)
Раствор спинового
зонда 16-доксил-
стеариновая кислота в
этаноле (в пробирке)
7,5 0,45 3
MMS-kit-
SA01-R1
Упаковка 1
Таблица 3. Состав комплекта MMS-kit-SA01-R2 для проведения анализа
Маркировку Наименование Количество,
ш т.
К 1 96-луночны й микро-планшет для
инкубирования проб
3
К2 Кры ш ка для планшета 1
КЗ Стеклянные капилляры в упаковке (длина
125 м м , калиброванны й объем 40 м кл)
250
К4 Резиновая пробка для капилляров 3
К5 Замазка для закупоривания капилляров, н а
подложке
1
Кб Пленка лабораторная для закры тия лунок
планшета п р и инкубации, 50x10 с м ^
1
MMS-kit-SA01-R2 Упаковка 1
--- стр. 7 ---
3.1 С рок год н ост и
Срок годности набора составляет 2 года от даты производства.
Предельны й срок хранения указан на упаковке.
3.2 Условия и сроки хранения н абора при т р ан сп орт и ров к е в первичном
контейнере
При транспортировке допускается хранение набора в первичной упаковке п р и
температуре не вы ш е 25°С в течение не более 7 дней.
3.3 Условия хранения н абора реаген т ов после вскры тия первичного
контейнера
Первичны й контейнер (транспортная упаковка) с набором реагентов содержит две
упаковки, в которы е уложены компоненты набора.
Упаковка меньшего размера с маркировкой MMS-kit-SA01-R1 должна храниться
п р и температуре минус 18 или ниже.
Упаковка с маркировкой MMS-kit-SA01-R2 содержит компоненты , которы е н е
требуют специальны х условий хранения и могут храниться в обы чны х
лабораторных помещениях пр и температуре от 5 до 25 ‘ ’С .
При хранении не допускается воздействие влаги и едких веществ (кислот,
щелочей, органических растворителей и т.п.) или и х паров на компоненты набора
и и х упаковку.
3.4 Условия и сроки хранения реаген т ов после вскры тия пробирок с
р а ст в о р а м и спинового зонда
Пробирки с растворами S1, S2 и S3 должны храниться п р и температуре не вы ш е
4 °С в течение не более 2 месяцев после первого вскры тия.
4 . А н а л и т и ч е с к и е х а р а к т е р и с т и к и н а б о р а
4.1 Спец иф ичность
Не менее 90% спинового зонда 16-доксил-стеариновая кислота связы вается с
альбумином в образцах сы воротки здоровы х лиц, пр и концентрации альбумина
больше 40 г/л.
4.2 В осп рои звод и м ост ь
Коэффициенты вариации результатов определения показателей в одном и том же
образце: для BE - не более 7%, RTQ - 7%, DTE - 10% .
Вариаций результатов определения показателя DR не превышает 0,5 единиц.
4.3 Линей ность
Зависимость показателя BE в растворах альбумина пр и разведении и х
ф изиологическим раствором (0,9% NaCI) имеет линейны й характер в диапазоне
концентраций альбумина от 20 до 60 г/л .
--- стр. 8 ---
4.4 Нормальные величины
Нормальные величины показателей функциональности альбумина в сы воротке
(EDTA-плазме) крови взрослого человека измеряли у 39 здоровы х мужчин и 4 1
здоровы х небеременных женщин. Диапазоны измеренны х значений показателей
составили:
- B E от 65 до 135% (среднее значение 100%);
- RTQ от 60 до 100% (среднее значение 82%);
- DTE от 40 % до 175% (среднее значение 100%);
- DR от 1,0 до 5,5 (среднее значение 3).
Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон нормальны х величин у
обследуемого контингента.
5 . М е р ы П р е д о с т о р о ж н о с т и
При работе с данным набором необходимо соблю дать правила безопасности,
рекомендуемые при работе с кровью и ее компонентами в кпинико-
диагностиЧеских лабораториях лечебных учреждений.
П ри pa6oVe с набором следует надевать одноразовы е пластиковы е ил и
резиновы е перчатки, так как образцы крови человека являю тся потенциально
опасны м инф ицированны м материалом, способны м длительно сохранять и
передавать возбудители вирусны х инф екций.
Все компоненты набора в используемы х концентрациях являю тся нетоксичны ми.
6 . О б о р у д о в а н и е и м а т е р и а л ы
Для вы полнения анализа необходимо следующее оборудование:
• Анализатор электронного парамагнитного резонанса лабораторны й типа
“ ESR-Analysator MMS 01-08”
• Пипетка, позволяю щ ая отбирать объем жидкости 40 м кл для наполнения
капилляров, с наконечником для микропипетки с резиновой трубкой (из
комплекта принадлежностей анализатора)
• Центрифуга лабораторная на 1000 -1500 g
• Планшетный шейкер с терморегуляцией (37 “ С)
• Пробирки для сы воротки (вместимостью 2 - 5 м л, например S-Monovette®)
• Пипетки позволяю щие дозировать объемы жидкости 10, 12, 14 и 50 м кл, со
сменны1\^ и наконечниками
• Подставка для капилляров.
7 . А н а л и з и р у е м ы е о б р а з ц ы
С помощ ью набора реагентов “ MMS-kit-SA01“ исследую т нативны е и л и
размороженные после замораживания образцы сы воротки либо ЭДТА-плазмы
крови (0,2 мл).
Забор проб цельной крови следует производить путем обы чной венопункции в
объеме 3 - 5 м л.
Цельную кровь набирают в пробирки и центриф угирую т в течение 10 минут
пр и 1000-1600 д . Затем сы воротку отбирают в пробирки, обращая внимание на ее
гомогенность. При негомогенности сы воротки центриф угирование следует
повторить.
Не рекомендуется использовать вакуумны е системы забора крови, например,
типа Vacutdiner®.
Сы воротку до момента проведения исследования можно хранить максимально в
течение 5 дней при 4 °С, либо максимально в течение 6 месяцев п р и температуре
не вы ш е минус 30 °С.
8
--- стр. 9 ---
Размораживать пробирки с замороженной сы вороткой необходимо бы стро, в воде
пр и температуре 37 °С, после размораживания исследование должно б ы ть
проведено не более чем в течение 2 часов.
Повторное замораживание-размораживание образцов сы воротки или плазм ы н е
допускается.
8 . П о д г о т о в к а р е а г е н т о в д л я а н а л и з а
Перед вскры тием пробирки с реактивами S1, S2 и S3 необходимо вы держать п р и
комнатной температуре (18-25 °С) не менее 60 минут.
В случае длительного хранения набора до использования (более 3 месяцев),
вы полнить проверку концентрации спинового зонда в пробирках S1, S2 и S3 н а
анализаторе “ ESR-Analysator MMS 01-08” (см . Инструкцию п о эксплуатации
лабораторного анализатора “ ESR-Analysator MMS 01-08” ).
9 . П р о в е д е н и е а н а л и з а
9.1. Анализ должен проводиться в лабораторных условиях, при температуре в
помещении не вы ш е 25 °С.
9.2. Составить протокол маркировки лунок планшета и ячеек подставки для
капииляров в соответствии с кодами образцов и аликвот (по три аликвоты А , В , С
для каждого образца).
9.3. Раскапать образцы сы воротки и реактивы в лунки планшета согласно
следующей схеме:
Код
аликвоты
(не путать с кодом лунки
нанесенным на планшет)
Объем
сы воротки
(мкл)
Раствор
спинового
зонда-
Объем
спинового зонда
(мкл)
А 50 31 10
В 50 S2 12
С 50 S3 14
Допускается пипетирование и инкубирование аликвот одновременно нескольких
образцов.
В о избежание чрезмерного испарения этанола и з лунок планшета, рекомендуется
следующее:
• Начинайте пипетирование раствора спинового зонда только после того, как
все запланированные к измерению образцы сы воротки раскапаны в лунки.
• Пипётируйте раствор спинового зонда сначала в о все лунки, содержащие
аликвоты “ А ", затем аликвоты “ В” , затем аликвоты “ С” .
• Раскапывайте одновременно не более 8 образцов, чтобы затем раскапать
растворы спинового зонда в о все аликвоты не более чем за 3 минуты .
• В лю бом случае, не пипетируйте более 8 образцов (24 лунки) одновременно.
• Пер^д шейкированием, сначала плотно закройте заполненные лунки
планшета парафилмом, а затем накройте планшет кры ш кой.
9.4. Поместить планшет в шейкер и инкубировать образцы при температуре 37 X
пр и частоте встряхивания 5 - 8 Гц в течениеЮ м инут.
9.5. Подготовка капилляров
Из каждой лунки планшета набрать в отдельны й стеклянны й капилляр 40 м кл
содержимого, используя пипетку с наконечником с резиновой трубкой. Для этого
соединить верхню ю часть капилляра с наконечником, вставить ниж ню ю часть
капилляра в лунку планшета и произвести забор содержимого лунки.
--- стр. 10 ---
Держа капилляр горизонтально, отсоединить наконечник, затем, изменяя угол
наклона капилляра, расположить жидкость в капилляре согласно рис. 1 и
запечатать капилляр в его верхней части с помощ ью замазки.
Замазка
Жидкий Образец
Не менее 50 мм
Пробка
н и з К апилляр в е р х
Рис.1. Позиция исследуемого жидкого образца в стеклянном капилляре
П ри наполнении капилляра удостовериться, что:
- в жидкости отсутствую т пузы рьки:
> жидкий образец занимает не менее 50 м м длины капилляра и располагается н а
расстоянии 5 - 10 м м от нижнего конца капилляра (рис.1). Последнее
обеспечивает необходимы й резерв длины для небольших перемещений
жидкости в закупоренном капилляре, что важно для предотвращения
вы текания содержимого п р и последующих действиях;
- замазка надежно закупоривает капилляр, что предотвращает вы текание
содержимого капилляра.
9.6. Поместить капилляр вертикально, запечатанным воском концом вверх, в
ячейку подставки для капилляров, в соответствии с кодом образца и кодом
аликвоты .
Содержимое всех лунок должно быть забрано в капилляры до начала
измерений.
Для предотвращения ошибок помещайте капилляры в ячейки подставки
строго в соответствии с маркировкой.
9.7. Заф иксировать капилляр в резиновой пробке, как показано на Рис. 1 .
9.8. Провести измерения подготовленны х капилляров на анализаторе
“ ESR-Analysator MMS 01-08” {см . Инструкцию п о эксплуатации анализатора).
1 0. Р а с ч е т р е з у л ь т а т а а н а л и з а
Расчет результата анализа вы полняется программой, управляющей работой
лабораторного анализатора “ ESR-Analysator MMS 01-08”, автоматически, п о
завершению измерений трех капилляров. Результаты анализа автоматически
вы водятся на экран монитора персонального компью тера, записы ваю тся на его
диск, и могут бы ть распечатаны на принтер пр и вы боре оператором
соответствующей опции в окне вы вода результатов.
1 1. К о н т р о л ь к а ч е с т в а р е а г е н т о в и м е р ы , п р и н и м а е м ы е п р и
о б н а р у ж е н и и и з м е н е н и й
Рекомендуется использовать реагенты в течение 3 дней после первого вскры тия
пробирок.
После первого вскры тия растворы следует хранить в холодильнике п р и
температуре не вы ш е 4
Если срок хранения после первого вскры тия реагентов превышает 2 недели,
перед использованием необходимо проверить концентрацию растворов спинового
10
--- стр. 11 ---
зонда на анализаторе “ ESR-Analysator MMS 01-08” {см . Инструкцию п о
эксплуатации анализатора). В случае несоответствия измеренны х концентраций
значениям, указанны м в настоящей инструкции, использование реагентов н е
допускается.
11