Набор реагентов для определения активности аланинаминотрансферазы динитрофенилгидразиновым методом по конечной точке в сыворотке крови (АЛТ КТ ДДС) _x000D_ по ТУ 9398-008-48813770-2016 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- «УТВЕРЖДАЮ» Г енеральный директор по применению Набора реагентов для определения активности аланинаминотрансферазы динитрофенилгидразиновым методом по конечной точке в сыворотке крови (АЛТ КТ ДДС) РУ №ФСР 2011/10443 НАЗНАЧЕНИЕ Набор предназначен для количественного определения активности аланинаминотрансферазы (АЛТ) в сыворотке крови по конечной точке в клинико-диагностических и биохимических лаборато риях и научно-исследовательской практике. Набор реагентов (АЛТ КТ ДДС) должен использоваться квалифицированным персоналом в области клинической лабораторной диагностики. Количество определений зависит от объема фасовки и используемого биохимического анали затора. МЕТОД Метод Райтмана-Френкеля по конечной точке. ПРИНЦИП МЕТОДА В основе определения активности АЛТ с динитрофенилгидразином лежит метод Райтмана- Френкеля. Аланинаминотрансфераза в присутствии а-кетоглутарата катализирует реакцию переами- нирования Е-аланина с образованием пирувата. АЛТ а-кетоглутарат + Е-аланин -> Е-глутамат + пируват Пируват с 2,4-динитрофенилгидразином в щелочной среде образует окрашенный гидразон, ин тенсивность окраски которого прямо пропорциональна активности АЛТ и измеряется фотометриче ски при длине волны 505 (500-560) нм. СОСТАВ НАБОРА Реагент 1: буферно-субстратный раствор, pH 7,4, содержащий Е-аланин, >100 ммоль/л; а- кетоглутаровая кислота, 2,0 ммоль/л; азид натрия, 0,095% - 1 флакон (100 мл), 2 флакона (по 100 мл), 2 флакона (по 90 мл) или 1 флакон (1000 мл). Реагент 2: раствор, содержащий 2,4-динитрофенилгидразин, 0,9 ммоль/л, соляную кислоту, 1,0 моль/л - 1 флакон (100 мл), 2 флакона (по 100 мл), 2 флакона (по 90 мл) или 1 флакон (1000 мл). Реагент 3: концентрированный раствор гидроокиси натрия, 4,0 моль/л - 1 флакон (100 мл), 2 флакона (по 100 мл), 2 флакона (по 90 мл) или 1 флакон (1000 мл). Калибратор: калибровочный раствор пирувата натрия, 1,0 ммоль/л; азид натрия, 0,095% -1 флакон (3,0 мл), 2 флакона (по 3,0 мл), 10 флаконов (по 3,0 мл), 3 флакона (по 10 мл). --- стр. 2 --- с . АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ • Линейность в диапазоне от 4,0 до 70 Е/л. • Отклонение от линейности не превышает 7%. • Чувствительность - не более 3,0 Е/л • Коэффициент вариации - не более 7%. При активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови выше 70 Е/л анализируемую пробу следует развести физиологическим раствором (0,9% КаС1) в 4 раза, повторить анализ и полу ченный результат умножить на 4. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА Для внутреннего контроля качества с каждой серией образцов проводите измерения контроль ных сывороток, аттестованных данным методом. Калибровку рекомендуется проводить в следуюш;их случаях: при нестабильности результатов контроля качества, в случае выхода значений контроля качества за пределы установленных диапазо нов для используемого лота контрольного материала, при использовании нового набора. НОРМАЛЬНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ В сыворотке крови (В.С. Камышников, 2014): Дети: До 1 мес. 1 - 12 мес. 1-16 лет до 32 Е/л до 36 Е/л до 21 Е/л Взрослые: Мужчины Женщины до 22 Е/л до 17 Е/л Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных величин для обследуемого контингента людей. ОБРАЗЦЫ Негемолизированная сыворотка крови человека. Сыворотку крови следует отделить от фор менных элементов крови не позднее, чем через 1 час после забора крови. Стабильность: 3 дня при 15-25°С 7 дней при 2-8°С 7 дней при -20°С Загрязненные образцы хранению не подлежат. Замораживать образцы можно не более одного раза! МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Потенциальный риск применения набора - класс 2а (Приказ Минздрава РФ от 06.06.2012 № 4н). В Реагенте 1 и калибраторе содержится токсичный компонент - азид натрия, реагент 2 содержит соляную кислоту, реагент 3 - гидроокись натрия. При работе с ними следует соблюдать осторожность и не допускать попадания на кожу и слизистые; при попадании немедленно промыть пораженное место --- стр. 3 --- .1хгим количеством проточной воды, при проглатывании следует выпить 0,5 л теплой воды и вы- ^0 Т Ь рвоту. у Меры предосторожности - соблюдение «Правил устройства, техники безопасности, производст венной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отде лениях, отделах) санитарно-эпидемиологических з^реждений системы Министерства здравоохране ния» (Москва, 1981 г.). При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные дли тельное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ Реагенты 1, 2 и Калибратор готовы к использованию. Приготовление щелочного раствора. В мерную колбу вместимостью 1000 мл внести 100 мл реагента 3, довести объем до метки дис тиллированной водой и перемешать. Щелочной раствор можно хранить при температуре 2-25°С в течение всего срока годности на бора при условии достаточной герметичности флакона. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА Компоненты реакционной смеси отбирать в количествах, указанных в таблице 1. Таблица 1 Отмерить, мл Контрольная (холостая) проба Контрольная проба на сыворотку Опытная проба Реагент 1 0,25 0,25 0,25 Инкубировать при температуре 37°С в течение 5 минут, добавить Сыворотка крови - - 0,05 Вода дистиллированная 0,05 - - Перемешать и инкубировать при температуре 37°С точно 30 минут, добавить Реагент 2 0,25 0,25 0,25 Сыворотка крови - 0,05 - Перемешать и вьщержать пж комнатной температуре (15-25°С) в течение 20 минут, добавить Щелочной раствор 2,5 2,5 2,5 Пробы тщательно перемешать и выдержать при комнатной температуре в течение 5 минут. Измерить оптические плотности опытной пробы (Ai) и контрольной пробы на сыворотку (Аг) против контрольной (холостой) пробы в кювете с длиной оптического пути 10 мм при длине волны 505 (500- 560) нм. Окраска растворов стабильна в течение 30 минут. Для определения активности АЛТ использовать разность оптических плотностей (А) опытной пробы и контрольной пробы на сыворотку: А = Ai - Аг. Примечание. Количество реагентов и анализируемых образцов в зависимости от объема исполъзуемой кюветы может бытъ пропорционально изменено (соотношение реагент 1: реагент 2: сы воротка крови: щелочной раствор составляет 5:1:5:50). РАСЧЕТЫ Расчет активности аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови произвести по калибровочному графику. Компоненты реакционной смеси для построения калибровочного графика