Набор реагентов для определения ДНК цитомегаловируса методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (РеалБест ДНК ЦМВ) по ТУ 9398-219-23548172-2009 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- % УТ ВЕРЖ Д ЕН А «У Т ВЕРЖ Д А Ю » Приказом Росздравнадзора Ген^;^^55®]^Д!Цректор от__200_ г. №__________ J Z ~ У / ^ г'^' ^У^^инов 2009 г. И Н С Т Р У К Ц И Я по применению набора реагентов для определения Д Н К цитомегаловируса методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «РеалБест Д Н К Ц М В» (комплект 2) 1. Н А З Н А Ч Е Н И Е Набор реагентов «РеалБест Д Н К Ц М В » предназначен для определения Д Н К цитомега ловируса (Ц М В ) методом полимеразной цепной реакции (П Ц Р ) с гибридизационно- флуоресцентной детекцией продуктов П Ц Р в режиме реального времени. Комплект 2 предназначен для применения с регистрирующими амплификаторами как планшетного («iQ iC ycler», «iQ5 iC ycler», «C FX96» (фирма Bio-Rad, С Ш А ), ДТ-96 (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия)), так и роторного («Rotor-Gene 3000» и «Rotor-Gene 6000» (фирма Corbett Research, Австралия)) типа или их аналогами. Набор реагентов «РеалБест Д Н К Ц М В » может быть применен в клинической практике для анализа клинического материала (соскобы из цервикального канала, уретры, слюна, мо ча, ликвор). Выделение Д Н К цитомегаловируса (Ц М В ) из клинического материала проводится с по мощью наборов «РеалБест ДНК-экспресс», «РеалБест ДНК-экстракция 1» или «РеалБест экстракция 100». Набор рассчитан на проведение анализа 100 образцов, вклю чая контрольные образцы. 2. Х А Р А К Т Е Р И С Т И К А Н А Б О Р А 2.1. Принцип метода. Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного фрагмен та Д Н К, заключающегося в повторяющихся циклах: температурная денатурация, отжиг Инструкция составлена сотрудниками ЗАО «Вектор-Бест»: Директором по производству Ткачевым В.К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А.В. й --- стр. 2 --- % праймеров с комлементарными последовательностями, достройка полиную1еотидных после довательностей с этих праймеров Taq ДНК-полимеразой. В основе используемого метода регистрации лежит измерение сигналов флуоресценции в каждом цикле П Ц Р. Увеличение сигналов флуоресценции происходит благодаря использо ванию специфичного для данного участка Д Н К Ц М В гибридизационного ДНК-зонда, кото рый в ходе реакции связывается с одной из цепей Д Н К, обеспечивая также дополнительную специфичность метода. ДНК-зонд содержит на 5’ конце флуоресцентный краситель, а на 3’ конце - гаситель флуоресценции, значительно снижающий интенсивность флуоресценции. В ходе полимеразного синтеза комплементарной цепи, благодаря 5’-3’ нуклеазной активности Taq ДНК-полимеразы, зонд расщепляется с 5’ конца и происходит разобщение красителя и гасителя, приводящее по мере накопления продукта реакции к возрастанию сигнала флуо ресценции. При этом измеряемая интенсивность флуоресценции зависит от количества образовав шихся специфических ампликонов и динамика нарастания флуоресценции определяется ис ходным количеством бактериальной Д Н К в образце. Достоверность анализа контролируется по наличию положительного результата в образ це П КО , который подвергается процедуре вьщеления Д Н К вместе с анализируемыми био пробами. У чет эффективности вьщеления Д Н К из образцов обеспечивается вьщелением Д Н К Ц М В из клинических проб совместно с предварительно внесенным внутренним контроль ным образцом (В К О ). 2.2. Состав набора: - Положительный контрольный образец универсальный (П К О ) - на основе плазмидной Д Н К со встройкой фрагментов Д Н К возбудителей инфекций - 1 флакон (1 мл); - Реакционная смесь для П Ц Р (P C ), лиофилизированная - 10 пробирок; - Раствор для восстановления (Р В ) - 2 флакона (по 2 мл); Вигшание! П К О должен пройти процедуру выделения Д Н К с помощью наборов «Реал- Б е с т ДНК-экспресс», «Реал Б ест Д НК-экстракция 1» или «Реал Б ест экстракция 100» со гласно инструкции к со о тветствую щ ем у набору. 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1. Чувствительность - определение 100 копий Д Н К Ц М В в пробе - 100 % . 3.2. Специфичность определения Д Н К Ц М В (по стандартной панели предприятия отри цательных ДНК-экстрактов) - 100 % . 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (ГО С Т Р 51609-2000). --- стр. 3 --- % 4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III- IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». 4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы вьщеления Д Н К/РН К и постановки П Ц Р согласно М У 1.3. 1888-04 «Организация работы при исследовании методом П Ц Р материала, инфицированного патогенными биологическими агентами III- IV групп патогенности». 4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки. 4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором пипеток пере менного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. Запре щается их перемещение между рабочими местами. 4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов П Ц Р в режиме ре ального времени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для пипеток. 4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении разных образцов. 4.8. После окончания работ для предотвращения контаминации рабочие поверхности ла минарных боксов и лабораторных столов следует подвергнуть действию бактерицидных У Ф ламп в течение 1 часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами де зинфицирующими средствами (такими, как: 0,2% раствор ДП-2Т; 1-3% раствор «Диабак»; 0,5% раствор «Лизафин»; 0,5-1% раствор «М истраль»). 4.9. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфицирую щими средствами с последующей утилизацией. 5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ - амплификатор с флуоресцентной детекцией в реальном времени роторного типа: «Rotor-Gene 3000/6000» (фирма Corbet Research, Австралия); или - амплификатор с флуоресцентной детекцией в реальном времени планшетного типа: «iQ iCycler», «iQ5 iC ycler», «С РХ9 6» (фирма Bio-Rad, С Ш А ), ДТ-96 (О О О «НП О ДНК- Технология», Россия) или их аналог; - ламинарный бокс П-го класса биологической защиты, предназначенный для работы с инфекционным материалом (фирма «Ламинарные системы», Россия); - холодильник бытовой, поддерживающий температуру от 2 до 8 °С ; - микроцентрифуга типа «Eppendorf M iniSpin» (фирма Eppendorf, Германия); --- стр. 9 --- УТ ВЕРЖ Д ЕН А Приказом Росздравнадзора от 200 г. № «У ТВЕРЖ Д А Ю » [ьный директор гор-Бест» М.Д. Хусаинов V / 2009 г. И Н С Т Р У К ] по применению набора реагентов для определения Д Н К цитомегаловируса методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «РеалБест Д Н К Ц М В» (комплект 2) 1. Н А З Н А Ч Е Н И Е Набор реагентов «РеалБест Д Н К Ц М В » предназначен для определения Д Н К цитомега ловируса (Ц М В ) методом полимеразной цепной реакции (П Ц Р ) с гибридизационно- флуоресцентной детекцией продуктов П Ц Р в режиме реального времени. Комплект 2 предназначен для применения с регистрирующими амплификаторами как планшетного («iQ iC ycler», «iQ5 iC ycler», «С РХ96» (фирма Bio-Rad, С Ш А ), ДТ-96 (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия)), так и роторного («Rotor-Gene 3000» и «Rotor-Gene 6000» (фирма Corbett Research, Австралия)) типа или их аналогами. Набор реагентов «РеалБест Д Н К Ц М В » может быть применен в клинической практике для анализа клинического материала (соскобы из цервикального канала, уретры, слюна, мо ча, ликвор). Выделение Д Н К цитомегаловируса (Ц М В ) из клинического материала проводится с по мощью наборов «РеалБест ДНК-экспресс», «РеалБест ДНК-экстракция 1» или «РеалБест экстракция 100». Набор рассчитан на проведение анализа 100 образцов, вклю чая контрольные образцы. 2. Х А Р А К Т Е Р И С Т И К А Н А Б О Р А 2.1. Принцип метода. Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного фрагмен та Д Н К, заключающегося в повторяющихся циклах: температурная денатурация, отжиг Инструкция составлена сотрудниками ЗАО «Вектор-Бест»: Директором по производству Ткачевым В. К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А. В. --- стр. 10 --- праймеров с комлементарными последовательностями, достройка полинуклеотидных после довательностей с этих праймеров Taq ДНК-полимеразой. В основе используемого метода регистрации лежит измерение сигналов флуоресценции в каждом цикле П Ц Р. Увеличение сигналов флуоресценции происходит благодаря использо ванию специфичного для данного участка Д Н К Ц М В гибридизационного ДНК-зонда, кото рый в ходе реакции связывается с одной из цепей Д Н К, обеспечивая также дополнительную специфичность метода. ДНК-зонд содержит на 5’ конце флуоресцентный краситель, а на 3’ конце - гаситель флуоресценции, значительно снижающий интенсивность флуоресценции. В ходе полимеразного синтеза комплементарной цепи, благодаря 5’-3’ нуклеазной активности Taq ДНК-полимеразы, зонд расщепляется с 5’ конца и происходит разобщение красителя и гасителя, приводящее по мере накопления продукта реакции к возрастанию сигнала флуо ресценции. При этом измеряемая интенсивность флуоресценции зависит от количества образовав шихся специфических ампликонов и динамика нарастания флуоресценции определяется ис ходным количеством бактериальной Д Н К в образце. Достоверность анализа контролируется по наличию положительного результата в образ це П КО , который подвергается процедуре выделения Д Н К вместе с анализируемыми био пробами. Учет эффективности вьщеления Д Н К из образцов обеспечивается вьщелением Д Н К Ц М В из клинических проб совместно с предварительно внесенным внутренним контроль ным образцом (В К О ). 2.2. Состав набора: - Положительный контрольный образец универсальный (П К О ) - на основе плазмидной Д Н К со встройкой фрагментов Д Н К возбудителей инфекций - 1 флакон (1 мл); - Реакционная смесь для П Ц Р (P C ), лиофилизированная - 10 пробирок; - Раствор для восстановления (Р В ) - 2 флакона (по 2 мл); Внимание! П К О должен пройти процедуру выделения Д Н К с помощью наборов «Реал- Б е с т ДНК-экспресс», «Реал Б ест Д НК-экстракция 1» или «Реал Б ест экстракция 100» со гласно инструкции к соответствую щ ем у набору. 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1. Чувствительность - определение 100 копий Д Н К Ц М В в пробе - 100 % . 3.2. Специфичность определения Д Н К Ц М В (по стандартной панели предприятия отри цательных ДНК-экстрактов) - 100 % . 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (ГО С Т Р 51609-2000). --- стр. 11 --- 4.2. При работе с набором следует соблюдать С П 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III- IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». 4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы вьщеления Д Н К/РН К и постановки П Ц Р согласно М У 1.3. 1888-04 «Организация работы при исследовании методом П Ц Р материала, инфицированного патогенными биологическими агентами III- IV групп патогенности». 4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки. 4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором пипеток пере менного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. Запре щается их перемещение между рабочими местами. 4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов П Ц Р в режиме ре ального времени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для пипеток. 4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении разных образцов. 4.8. После окончания работ для предотвращения контаминации рабочие поверхности ла минарных боксов и лабораторных столов следует подвергнуть действию бактерицидных У Ф ламп в течение 1 часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами де зинфицирующими средствами (такими, как: 0,2% раствор ДП-2Т; 1-3% раствор «Диабак»; 0,5% раствор «Лизафин»; 0,5-1% раствор «М истраль»). 4.9. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфицирую щими средствами с последующей утилизацией. 5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ - амплификатор с флуоресцентной детекцией в реальном времени роторного типа: «Rotor-Gene 3000/6000» (фирма Corbet Research, Австралия); или - амплификатор с флуоресцентной детекцией в реальном времени планшетного типа: «iQ iC ycler», «iQ5 iC ycler», «С РХ 96» (фирма Bio-Rad, С Ш А ), ДТ-96 (О О О «НПО ДНК- Технология», Россия) или их аналог; - ламинарный бокс П-го класса биологической защиты, предназначенный для работы с инфекционным материалом (фирма «Ламинарные системы», Россия); - холодильник бытовой, поддерживающий температуру от 2 до 8 °С ; - микроцентрифуга типа «Eppendorf M iniSpin» (фирма Eppendorf, Германия);