Набор реагентов для выявления антител к Treponema pallidum методом иммунофлюоресценции (ЛюмиБест антипаллидум) по ТУ 9398-339-23548172-2012 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДЕНА
П риказом Росздравнадзора
от 2012 г. №
«УТВЕРЖДАЮ»
Г енеральный директор
Вектор-Бест»
М.Д. Хусаинов
2012 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для выявления антител к Treponem a pallidum
методом иммунофлюоресценции
«ЛюмиБест антипаллидум»
комплект 1
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор предназначен для вы явления антител к антигенам Treponema pallidum в сы
воротке крови и спинномозговой жидкости (ликворе) человека в реакции иммунофлюорес
ценции (РИФ-абс и/или Р И Ф гоо и РИФц, соответственно).
1.2. Набор рассчитан на проведение 100 анализов, включая контроли.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. Принцип действия
Принцип определения основан на методе непрямой иммунофлюоресценции: специ
фические антитела, присутствующие в сыворотке крови больных сифилисом или спинномоз
говой жидкости больных с нейросифилисом, связываются с антигеном, фиксированным на
стекле, и выявляются с помощью люминесцентного микроскопа при добавлении антивидо-
вой сыворотки, меченной флюорохромом - флюоресцеин-5-изотиоцианатом (Ф ИТЦ).
Для снятия неспецифического свечения трепонем при постановке реакции использу
ется связйвание групповых антител сорбентом - солевым экстрактом из культуральны х
бледных трепонем (щтаммы V, VII, V III, IX и Рейтера), обработанных ультразвуком.
2.2. Состав набора:
Набор содержит все необходимые для проведения анализа реагенты, кроме дистилли
рованной воды и химически чистого ацетона:
- антиген - лиофилизированная взвесь патогенных бледных трепонем ш тамма Ни-
И нст рукция сост авлена сот рудникам и ЗА О «Вект ор-Бест »: директ ором по производ
ст ву В.К. Ткачевы м и начальником от деления Т.Г. В ят киной
-У/
--- стр. 2 ---
кольса- 1 фл. или 2 фл.;
- положительный контрольный образец (К ^) - лиофилизированная сы воротка крови
больных с клинически установленным диагнозом, содержащая антитела к антигенам
Treponema pallidum (при исследовании дает свечение 4+), инактивированная прогреванием -
1 ф л.;
- слабоположительный контрольный образец {\Сстб) - лиофилизированная сы воротка
крови больных с клинически установленным диагнозом, содержащая антитела к антигенам
Treponema pallidum (при исследовании дает слабую степень свечения антигена на 2+), инакти
вированная прогреванием - 1 ф л.;
- отрицательный контрольный образец ( К ”) - лиофилизированная сыворотка крови здо
ровых доноров, не содержащая антитела к антигенам Treponem a pallidum , ВГС, ВИЧ-1,2, ан
тигена р24 ВИЧ-1 и HBsAg (при исследовании не дает свечения или дает свечение на 1+),
инактивированная прогреванием - 1 ф л.;
- конъюгат - меченные флюорохромом (флюоресцеин-5-изотиоцианатом, Ф ИТЦ) козьи
антитела к IgG человека, лиофилизированные - 1 фл.;
- физиологический раствор (ФР) - 1 фл., 7,0 м л;
- сорбент - лиофилизированный поливалентный солевой экстракт антигенов из культу
ральны х бледных трепонем щтаммов V, VII, V III, IX и Рейтера, дезинтегрированных ультра
звуком - 1 фл.;
25-кратный концентрат фосфатного буферного раствора (ФБх25) - 4 фл. по 28,0 м л.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Результат качественного определения набором антител к антигенам Treponema
pallidum должен соответствовать требованиям СПП+ (per. № 05-2-77): чувствительность по
антителам к антигенам Treponema pallidum - 100% .
3.2. Результат качественного определения набором антител к антигенам Treponema
pallidum должен соответствовать требованиям СПП- (per. № 05-2-79): специфичность по анти-
телам к антигенам Treponem a pallidum - 100% .
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Потенциальный риск применения набора - класс 26
П ри подготовке реагентов набора и исследуемых образцов, а также при постановке
реакции иммунофлюоресценции следует соблюдать меры предосторожности, принятые при
работе с потенциально инфекционным материалом:
--- стр. 3 ---
- работать в резиновых перчатках;
- не пипетировать растворы ртом;
- все использованные материалы подвергать обработке дезинфицирующим раствором
(например, 6% раствором перекиси водорода или 3% раствором хлорамина не менее 6 ч).
Для приготовления растворов и проведения анализа следует использовать чистую
мерную посуду и автоматические пипетки с погрешностью измерения объёмов не более 5 % .
Проведение реакции иммунофлюоресценции не требует соблюдения условий сте
рильности. Предметные стекла и всю посуду, контактирующую с антигеном, необходимо
инактивировать без применения дезинфицирующих средств (прокипятить в мы льном рас
творе в течение 30 мин).
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ,
НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ:
- Люминесцентный микроскоп с ртутно-кварцевой лампой и иммерсионной системой,
окуляром 4х или 5х, системой фильтров, обеспечивающей измерение свечения Ф ИТЦ (воз
буждающий свет с длиной волны 490 нм и эмиссией 520 нм);
-термостат, поддерживающий температуру (37±1) °С ;
- холодильник бытовой;
- плитка электрическая;
- пипетки полуавтоматические одноканальные с переменным или фиксированным
объёмом со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объёмы жидкости от 5 до
5000 м кл;
- пипетка полуавтоматическая многоканальная со сменными наконечниками, позво
ляющ ая отбирать объёмы жидкостей от 5 до 350 м кл;
- перчатки резиновые хирургические;
- предметное стекло;
- бумага фильтровальная лабораторная;
- цилиндр мерный 2-го класса точности вместимостью 100 мл;
- цилиндр мерный вместимостью 1 О О О м л;
- пробирки стеклянные (или полиэтиленовые микропробирки типа «Eppendorf» или
полистироловые разборные планшеты);
- вода очищенная;
- ацетон;
- 6% раствор перекиси водорода.
--- стр. 4 ---
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Для исследования не пригодны желтушные, хилезные и резко гемолизированные об
разцы сыворотки крови или спинномозговой жидкости, а также образцы с признаками мик
робной контаминации. Желательно использовать для анализа свежеотобранные образцы.
Допускается использование образцов, хранившихся при температуре (2-8) °С не более
5 суток, либо при температуре минус 20 °С не более 1 мес. С ы ворот ки перед исследованием
инакт ивироват ь прогреванием при 56°С в т ечение 30 мин, спинном озговую ж идкост ь не
инактивировать.
1. ПРОВЕДЕНИЕ РЕАКЦИИ ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНЦИИ
(РИФабс, РИФц, РИФ200)
7.1. Перед постановкой реакции все компоненты набора необходимо вьщ ержать не
менее 30 мин при температуре (18-25) °С.
7.2. Подготовка предметных стекол
При проведении реакции иммунофлюоресценции использовать предметные стекла,
которые в состав набора не входят. Это могут быть специальные предметные стекла для РИ Ф
с обозначенными «лунками» для нанесения препаратов и гидрофобным покрытием вне «лу
нок» или обычные предметные стекла для микроскопирования, на обратной стороне которых
стеклорезом обозначены кружки диаметром 0,7 см.
Предметные стекла должны быть предварительно подготовлены: чисто вы м ы ты ,
высушены и обезжирены в 96% этиловом спирте в течение 2 суток. Обезжиренные стекла
хранить в 96% этиловом спирте или вытерты ми досуха в защищенном от пы ли месте.
7.3. Приготовление растворов и реагентов
7.3.1. Антиген
Во флакон с антигеном добавить______мкл' дистиллированной воды и тщательно
взболтать до полного растворения лиофилизированного содержимого. Восстановленную
взвесь антигена выдержать в течение 1 ч при комнатной температуре (от 18 до 25 °С), затем
тщательно ресуспендировать, используя пипетку или пропуская несколько раз через ш приц с
тонкой иглой.
Из свежеприготовленной взвеси антигена готовят препараты на предметных стеклах
(до 10 препаратов на стекло). Для этого на обезжиренные предметные стекла нанести по
' Объем добавляемой дистиллированной воды подбирается производителем для каждой серии набо
ра.
4
--- стр. 5 ---
10 мкл разведённого антигена на «лунку» и равномерно распределить его в пределах круж ка.
Стекла высушить на воздухе и зафиксировать в течение 1 0 мин в химически чистом ацетоне.
Хранение: стёкла с фиксированным на них антигеном хранить при минус (12-18) °С
до 1 мес (в морозильной камере холодильника), проложив их фильтровальной бумагой и
поместив в полиэтиленовый пакет.
Восстановленная взвесь антигена хранению не подлежит.
7.3.2. Раствор № 1 (для промывки стекол и приготовления раствора сорбента в рабо
чем разведении).
Концентрат фосфатного буферного раствора (ФБх25) тщательно взболтать. П ри вы
падении осадка солей концентрат прогреть перед разведением при температуре (30-40) °С до
полного растворения осадка.
Содержимое флакона с концентратом фосфатного буферного раствора развести до 700
м л дистиллированной водой (в случае дробного использования к 10 мл концентрата добавить
240 мл дистиллированной воды).
Хранение: вскрытый флакон с концентратом хранить при (2-8) °С в течение 1 мес;
раствор № 1 - при (18-25) °С до 1 недели.
7.3.3. Контрольные образцы
Контрольные образцы (К ^, К^слаб. и К “ ) растворить добавлением во флаконы по 0,3 м л
дистиллированной воды.
Хранение: Приготовленные растворы контрольных образцов хранить при температуре
(2-8) °С до 1мес.
7.3.4. Растворы сорбента
Для получения раствора сорбента в предварительном разведении содержимое флакона
с сорбентом растворить в 5,0 мл Ф Р, тщательно перемешать.
Раствор сорбента в рабочем разведении готовить непосредственно перед использова
нием. Для проведения 10 анализов смешать____м к л ^ раствора сорбента в предварительном
разведении с 1,0 мл раствора № 1 .
Хранение: раствор сорбента в предварительном разведении хранить при (2-8) °С до
1 мес; раствор сорбента в рабочем разведении хранению не подлежит.
7.3.5. Растворы конъюгата
^ Объем раствора сорбента в предварительном разведении в расчете на 10 анализов подбирается
производителем для каждой серии набора.
5
--- стр. 9 ---
ч
--- стр. 10 ---
УТВЕРЖДЕНА
Приказом Росздравнадзора
от 2012 г. №
«УТВЕРЖДАЮ»
Г енеральный директор
^ектор-Бест»
1.Д . Хусаинов
' 2012 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для выявления антител к Treponem a pallidum
методом иммунофлюоресценции
«ЛюмиБест антипаллидум»
комплект 2
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор предназначен для выявления антител к антигенам Treponema pallidum в сы
воротке крови и спинномозговой жидкости (ликворе) человека в реакции иммунофлюорес
ценции (РИФ-абс и/или РИФ200 и РИФц, соответственно).
1.2. Набор рассчитан на проведение 80 анализов, включая контроли.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. Принцип действия
Принцип определения основан на методе непрямой иммунофлюоресценции: специ
фические антитела, присутствующие в сыворотке крови больных сифилисом или спинномоз
говой жидкости больных с нейросифилисом, связываются с антигеном, фиксированным на
стекле, и выявляются с помощью люминесцентного микроскопа при добавлении антивидо-
вой сыворотки, меченной флюорохромом - флюоресцеин-5-изотиоцианатом (Ф ИТЦ).
Для снятия неспецифического свечения трепонем при постановке реакции использу
ется связывание групповых антител сорбентом - солевым экстрактом из культуральны х
бледных трепонем (штаммы V, VII, VIII, IX и Рейтера), обработанных ультразвуком.
2.2. Состав набора:
Набор содержит все необходимые для проведения анализа реагенты, кроме дистилли-
И нст рукция сост авлена сот рудникам и ЗА О «Вект ор-Бест »: директ ором по производ
ст ву В. К. Ткачевым и начальником от деления Т.Г. В ят киной
--- стр. 11 ---
рованной воды :
- антиген - взвесь патогенных бледных трепонем штамма Никольса, инактивированная
прогреванием, нанесенная на лунки 8-луночного предметного стекла, фиксированная ацето
ном - 10 ш т.;
- положительный контрольный образец (К ^) - лиофилизированная сы воротка крови
больных с клинически установленным диагнозом, содержащая антитела к антигенам
Treponema pallidum (при исследовании дает свечение 4+), инактивированная прогреванием -
1 ф л.;
- слабоположительный контрольный образец (К^слаб.) - лиофилизированная сы воротка
крови больных с клинически установленным диагнозом, содержащая антитела к антигенам
Treponema pallidum (при исследовании дает слабую степень свечения антигена на 2+), инакти
вированная прогреванием - 1 ф л.;
- отрицательный контрольный образец ( К “) - лиофилизированная сыворотка крови здо
ровых доноров, не содержащая антител к антигенам Treponem a pallidum , ВГС, ВИЧ-1,2, ан
тигена р24 ВИЧ-1 и HBsAg (при исследовании не дает свечения или дает свечение на 1+),
инактивированная прогреванием - 1 ф л.;
- конъюгат - меченные флюорохромом (флюоресцеин-5-изотиоцианатом, Ф ИТЦ) козьи
антитела к IgG человека, лиофилизированные - 1 фл.;
- физиологический раствор (ФР) - по 1 фл., 7,0 м л;
- сорбент - лиофилизированный поливалентный солевой экстракт антигенов из культу
ральны х бледных трепонем штаммов V, VII, V III, IX и Рейтера, дезинтегрированных ультра
звуком - 1 фл.;
- 25-кратный концентрат фосфатного буферного раствора (ФБх25) - 4 фл. по 28,0 м л.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Результат качественного определения набором антител к антигенам Treponema
pallidum должен соответствовать требованиям СПП+ (per. № 05-2-77): чувствительность по
антителам к антигенам Treponema pallidum - 100% .
3.2. Результат качественного определения набором антител к антигенам Treponema
pallidum должен соответствовать требованиям СПИ- (per. № 05-2-79): специфичность по анти
телам к антигенам Treponem a pallidum - 100% .
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Потенциальный риск применения набора - класс 26
--- стр. 12 ---
П ри подготовке реагентов набора и исследуемых образцов, а также при постановке
реакции иммунофлюоресценции следует соблюдать меры предосторожности, приняты е при
работе с потенциально инфекционным материалом;
- работать в резиновых перчатках;
- не пипетировать растворы ртом;
- все использованные материалы подвергать обработке дезинфицирующим раствором
(например, 6% раствором перекиси водорода или 3% раствором хлорамина не менее 6 ч).
Для приготовления растворов и проведения анализа следует использовать чистую
мерную посуду и автоматические пипетки с погрешностью измерения объёмов не более 5 % .
Проведение реакции иммунофлюоресценции не требует соблюдения условий сте
рильности. Все использованные материалы дезинфицировать в соответствии с требованиями
СП 1.3.2322-08 и МУ-287-113-00.
I
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ,
НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ:
- Люминесцентный микроскоп с ртутно-кварцевой лампой и иммерсионной системой,
окуляром 4х или 5х, системой фильтров, обеспечивающей измерение свечения Ф ИТЦ (воз
буждающий свет с длиной волны 490 нм и эмиссией 520 нм);
-термостат, поддерживающий температуру (37±1) °С;
- холодильник бытовой;
- плитка электрическая;
- пипетки полуавтоматические одноканальные с переменным или фиксированным
объёмом со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объёмы жидкости от 5 до
^ 5000 м кл;
- пипетка полуавтоматическая многоканальная со сменными наконечниками, позво
ляющ ая отбирать объёмы жидкостей от 5 до 350 м кл;
- перчатки резиновые хирургические;
- бумага фильтровальная лабораторная;
- цилиндр мерный 2-го класса точности вместимостью 100 м л;
- цилиндр мерный вместимостью 1 О О О м л;
- пробирки стеклянные (или полиэтиленовые микропробирки типа «Eppendorf» или
полистироловые разборные планщеты);
- вода очищенная;
- ацетон;
- 6% раствор перекиси водорода.
--- стр. 17 ---
ч
п р о ш н у р о в а н о , п р о н у м е р о в а н о
и с к р е п л е н о п е ч а т ь ю
--- стр. 18 ---
УТВЕРЖДЕНА
Приказом Росздравнадзора
от 2012 г. №
«УТВЕРЖДАЮ»
Генеральный директор
^ктор-Бест»
1.Д . Хусаинов
2012 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для выявления антител к Treponem a pallidum
методом иммунофлюоресценции
«ЛюмиБест антипаллидум»
комплект 1
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор предназначен для вы явления антител к антигенам Treponem a pallidum в сы
воротке крови и спинномозговой жидкости (ликворе) человека в реакции иммунофлюорес
ценции (РИФ-абс и/или РИФ200 и РИФц, соответственно).
1.2. Набор рассчитан на проведение 100 анализов, включая контроли.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. Принцип действия
Принцип определения основан на методе непрямой иммунофлюоресценции; специ
фические антитела, присутствующие в сыворотке крови больных сифилисом или спинномоз
говой жидкости больных с нейросифилисом, связываются с антигеном, фиксированным на
стекле, и вы являются с помощью люминесцентного микроскопа при добавлении антивидо-
вой сыворотки, меченной флюорохромом - флюоресцеин-5-изотиоцианатом (Ф ИТЦ).
Для снятия неспецифического свечения трепонем при постановке реакции использу
ется связывание групповых антител сорбентом - солевым экстрактом из культуральны х
бледных трепонем (щтаммы V, VII, V III, IX и Рейтера), обработанных ультразвуком.
2.2. Состав набора:
Набор содержит все необходимые для проведения анализа реагенты, кроме дистилли
рованной воды и химически чистого ацетона:
- антиген - лиофилизированная взвесь патогенных бледных трепонем ш тамма Ни-
И нст рукция сост авлена сот рудникам и ЗА О «Вект ор-Бест »: директ ором по производ
ст ву В.К. Ткачевым и начальником от деления Т.Г. В ят киной
--- стр. 19 ---
кольса- 1 фл. или 2 фл.;
- положительный контрольный образец ( К " ^ ) - лиофилизированная сы воротка крови
больных с клинически установленным диагнозом, содержащая антитела к антигенам
Treponema pallidum (при исследовании дает свечение 4+), инактивированная прогреванием -
1 ф л.;
- слабоположительный контрольный образец (К ^ с л а б .) - лиофилизированная сы воротка
крови больных с клинически установленным диагнозом, содержащая антитела к антигенам
Treponema pallidum (при исследовании дает слабую степень свечения антигена на 2+), инакти
вированная прогреванием - 1 ф л.;
- отрицательный контрольный образец (К’) - лиофилизированная сыворотка крови здо
ровы х доноров, не содержащая антитела к антигенам Treponem a pallidum , ВГС, ВИЧ-1,2, ан
тигена р24 ВИЧ-1 и HBsAg (при исследовании не дает свечения или дает свечение на 1+),
инактивированная прогреванием - 1 фл.;
- конъюгат - меченные флюорохромом (флюоресцеин-5-изотиоцианатом, Ф ИТЦ) козьи
антитела к IgG человека, лиофилизированные - 1 ф л.;
- физиологический раствор (ФР) - 1 фл., 7,0 м л;
- сорбент - лиофилизированный поливалентный солевой экстракт антигенов из культу
ральны х бледных трепонем штаммов V, VII, VIII, IX и Рейтера, дезинтегрированных ультра
звуком - 1 фл.;
- 25-кратный концентрат фосфатного буферного раствора (ФБх25) - 4 фл. по 28,0 м л.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Результат качественного определения набором антител к антигенам Treponema
pallidum должен соответствовать требованиям СПП+ (per. № 05-2-77): чувствительность по
антителам к антигенам Treponema pallidum - 100% .
3.2. Результат качественного определения набором антител к антигенам Treponema
pallidum должен соответствовать требованиям СПП- (per. № 05-2-79): специфичность по анти-
телам к антигенам Treponem a pallidum - 100% .
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Потенциальный риск применения набора - класс 26
При подготовке реагентов набора и исследуемых образцов, а также при постановке
реакции иммунофлюоресценции следует соблюдать меры предосторожности, приняты е при
работе с потенциально инфекционным материалом:
--- стр. 20 ---
- работать в резиновых перчатках;
- не пипетировать растворы ртом;
- все использованные материалы подвергать обработке дезинфицирующим раствором
(например, 6% раствором перекиси водорода или 3% раствором хлорамина не менее 6 ч).
Для приготовления растворов и проведения анализа следует использовать чистую
мерную посуду и автоматические пипетки с погрешностью измерения объёмов не более 5 % .
Проведение реакции иммунофлюоресценции не требует соблюдения условий сте
рильности. Предметные стекла и всю посуду, контактирующую с антигеном, необходимо
инактивировать без применения дезинфицирующих средств (прокипятить в мы льном рас
творе в течение 30 мин).
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ,
НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ:
- Люминесцентный микроскоп с ртутно-кварцевой лампой и иммерсионной системой,
окуляром 4х или 5х, системой фильтров, обеспечивающей измерение свечения Ф ИТЦ (воз
буждающий свет с длиной волны 490 нм и эмиссией 520 нм);
-термостат, поддерживающий температуру (37±1) °С ;
- холодильник бытовой;
- плитка электрическая;
- пипетки полуавтоматические одноканальные с переменным или фиксированным
объёмом со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объёмы жидкости от 5 до
5000 м кл;
- пипетка полуавтоматическая многоканальная со сменными наконечниками, позво
ляющ ая отбирать объёмы жидкостей от 5 до 350 м кл;
- перчатки резиновые хирургические;
- предметное стекло;
- бумага фильтровальная лабораторная;
*
- цилиндр мерный 2-го класса точности вместимостью 100 м л;
- цилиндр мерный вместимостью 1000 м л;
- пробирки стеклянные (или полиэтиленовые микропробирки типа «Eppendorf» или
полистироловые разборные планшеты);
- вода очищенная;
- ацетон;
- 6% раствор перекиси водорода.
--- стр. 21 ---
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Для исследования не пригодны желтушные, хилезные и резко гемолизированные об
разцы сыворотки крови или спинномозговой жидкости, а также образцы с признаками мик
робной контаминации. Желательно использовать для анализа свежеотобранные образцы.
Допускается использование образцов, хранившихся при температуре (2-8) °С не более
5 суток, либо при температуре минус 20 °С не более 1 мес. С ы ворот ки перед исследованием
инакт ивироват ь прогреванием при 56°С в т ечение 30 мин, спинном озговую ж идкост ь не
инактивировать.
7. ПРОВЕДЕНИЕ РЕАКЦИИ ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНЦИИ
(РИФабс, РИФц, РИ Ф гоо)
7.1. Перед постановкой реакции все компоненты набора необходимо вы держать не
менее 30 мин при температуре (18-25) °С.
7.2. Подготовка предметных стекол
П ри проведении реакции иммунофлюоресценции использовать предметные стекла,
которые в состав набора не входят. Это могут быть специальные предметные стекла для РИ Ф
с обозначенными «лунками» для нанесения препаратов и гидрофобным покрытием вне «лу
нок» или обычные предметные стекла для микроскопирования, на обратной стороне которых
стеклорезом обозначены кружки диаметром 0,7 см.
Предметные стекла должны быть предварительно подготовлены: чисто вы м ы ты ,
высуш ены и обезжирены в 96% этиловом спирте в течение 2 суток. Обезжиренные стекла
хранить в 96% этиловом спирте или вытерты ми досуха в защищенном от пы ли месте.
7.3. Приготовление растворов и реагентов
7.3.1. Антиген
Во флакон с антигеном добавить______мкл' дистиллированной воды и тщательно
взболтать до полного растворения лиофилизированного содержимого. Восстановленную
взвесь антигена вьщ ержать в течение 1 ч при комнатной температуре (от 18 до 25 °С), затем
А
тщ ательно ресуспендировать, используя пипетку или пропуская несколько раз через ш приц с
тонкой иглой.
Из свежеприготовленной взвеси антигена готовят препараты на предметных стеклах
(до 10 препаратов на стекло). Для этого на обезжиренные предметные стекла нанести по
' Объем добавляемой дистиллированной воды подбирается производителем для каждой серии набо
ра.
4
6//
--- стр. 22 ---
10 м кл разведённого антигена на «лунку» и равномерно распределить его в пределах круж ка.
Стекла высушить на воздухе и зафиксировать в течение 10 мин в химически чистом ацетоне.
Хранение: стёкла с фиксированным на них антигеном хранить при минус (12-18) °С
до 1 мес (в морозильной камере холодильника), проложив их фильтровальной бумагой и
поместив в полиэтиленовый пакет.
Восстановленная взвесь антигена хранению не подлежит.
7.3.2. Раствор № 1 (для промывки стекол и приготовления раствора сорбента в рабо
чем разведении).
Концентрат фосфатного буферного раствора (ФБх25) тщательно взболтать. П ри вы
падении осадка солей концентрат прогреть перед разведением при температуре (30-40) °С до
полного растворения осадка.
Содержимое флакона с концентратом фосфатного буферного раствора развести до 700
мл дистиллированной водой (в случае дробного использования к 10 мл концентрата добавить
240 м л дистиллированной воды).
Хранение: вскрытый флакон с концентратом хранить при (2-8) °С в течение 1 мес;
раствор № 1 - при (18-25) °С до 1 недели.
7.3.3. Контрольные образцы
Контрольные образцы (К ^, \Сслаб. и К“ ) растворить добавлением во флаконы по 0,3 м л
дистиллированной воды.
Хранение: Приготовленные растворы контрольных образцов хранить при температуре
(2-8) °С до 1мес.
7.3.4. Растворы сорбента
Для получения раствора сорбента в предварительном разведении содержимое флакона
с сорбентом растворить в 5,0 мл Ф Р, тщательно перемешать.
Раствор сорбента в рабочем разведении готовить непосредственно перед использова-
_м к л ^ раствора сорбента в предварительномнием. Для проведения 10 анализов смешать_
разведении с 1,0 мл раствора № 1 .
Хранение: раствор сорбента в предварительном разведении хранить при (2-8) °С до
1 мес; раствор сорбента в рабочем разведении хранению не подлежит.
7.3.5. Растворы конъюгата
^ Объем раствора сорбента в предварительном разведении в расчете на 10 анализов подбирается
производителем для каждой серии набора.
--- стр. 26 ---
ч
l A )
--- стр. 27 ---
УТВЕРЖДЕНА
Приказом Росздравнадзора
от 2012 г. №
«УТВЕРЖДАЮ»
Г енеральный директор
ектор-Бест»
Хусаинов
W 2012 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для выявления антител к Treponem a pallidum
методом иммунофлюоресценции
«ЛюмиБест антипаллидум»
комплект 2
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор предназначен для выявления антител к антигенам Treponema pallidum в сы
воротке крови и спинномозговой жидкости (ликворе) человека в реакции иммунофлюорес
ценции (РИФ-абс и/или Р И Ф гоо и РИФц, соответственно).
1.2. Набор рассчитан на проведение 80 анализов, включая контроли.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. Принцип действия
Принцип определения основан на методе непрямой иммунофлюоресценции: специ
фические антитела, присутствующие в сыворотке крови больных сифилисом или спинномоз
говой жидкости больных с нейросифилисом, связываются с антигеном, фиксированным на
стекле, и вы являются с помощью люминесцентного микроскопа при добавлении антивидо-
вой сыворотки, меченной флюорохромом - флюоресцеин-5-изотиоцианатом (Ф ИТЦ).
Для снятия неспецифического свечения трепонем при постановке реакции использу
ется связывание групповых антител сорбентом - солевым экстрактом из культуральны х
бледных трепонем (штаммы V, VII, V III, IX и Рейтера), обработанных ультразвуком.
2.2. Состав набора:
Набор содержит все необходимые для проведения анализа реагенты, кроме дистилли-
И нст рукция сост авлена сот рудникам и ЗА О «Вект ор-Бест »: директ ором по производ
ст ву В .К Ткачевы м и н а ч т ьн и к о м от деления Т.Г. В ят киной
J .
--- стр. 28 ---
рованной воды :
- антиген - взвесь патогенных бледных трепонем штамма Никольса, инактивированная
прогреванием, нанесенная на лунки 8-луночного предметного стекла, фиксированная ацето
ном - 10 ш т.;
- положительный контрольный образец (К ^) - лиофилизированная сы воротка крови
больных с клинически установленным диагнозом, содержащая антитела к антигенам
Treponema pallidum (при исследовании дает свечение 4+), инактивированная прогреванием -
1 ф л.;
- слабоположительный контрольный образец слаб) - лиофилизированная сы воротка
крови больных с клинически установленным диагнозом, содержащая антитела к антигенам
Treponema pallidum (при исследовании дает слабую степень свечения антигена на 2+), инакти
вированная прогреванием - 1 ф л.;
отрицательный контрольный образец (К” ) - лиофилизированная сыворотка крови здо
ровых доноров, не содержащая антител к антигенам Treponem a pallidum , ВГС, ВИЧ-1,2, ан
тигена р24 ВИЧ-1 и HBsAg (при исследовании не дает свечения или дает свечение на 1+),
инактивированная прогреванием - 1 фл.;
- конъюгат - меченные флюорохромом (флюоресцеин-5-изотиоцианатом, Ф ИТЦ) козьи
антитела к IgG человека, лиофилизированные - 1 фл.;
- физиологический раствор (ФР) - по 1 фл., 7,0 м л;
- сорбент - лиофилизированный поливалентный солевой экстракт антигенов из культу
ральных бледных трепонем штаммов V, V II, V III, IX и Рейтера, дезинтегрированных ультра
звуком - 1 фл.;
- 25-кратный концентрат фосфатного буферного раствора (ФБх25) - 4 фл. по 28,0 м л.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Результат качественного определения набором антител к антигенам Treponema
pallidum должен соответствовать требованиям СПП+ (per. № 05-2-77): чувствительность по
антителам'к антигенам Treponema pallidum - 100% .
3.2. Результат качественного определения набором антител к антигенам Treponema
pallidum должен соответствовать требованиям СПП- (per. № 05-2-79): специфичность по анти
телам к антигенам Treponem a pallidum - 100% .
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Потенциальный риск применения набора - класс 26
--- стр. 29 ---
П ри подготовке реагентов набора и исследуемых образцов, а также при постановке
реакции иммунофлюоресценции следует соблюдать меры предосторожности, принятые при
работе с потенциально инфекционным материалом:
- работать в резиновых перчатках;
- не пипетировать растворы ртом;
- все использованные материалы подвергать обработке дезинфицирующим раствором
(например, 6% раствором перекиси водорода или 3% раствором хлорамина не менее 6 ч).
Для приготовления растворов и проведения анализа следует использовать чистую
мерную посуду и автоматические пипетки с погрешностью измерения объёмов не более 5% .
Проведение реакции иммунофлюоресценции не требует соблюдения условий сте
рильности. Все использованные материалы дезинфицировать в соответствии с требованиями
СП 1.3.2322-08 и МУ-287-113-00.
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ,
НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ:
- Люминесцентный микроскоп с ртутно-кварцевой лампой и иммерсионной системой,
окуляром 4х или 5х, системой фильтров, обеспечивающей измерение свечения Ф ИТЦ (воз
буждающий свет с длиной волны 490 нм и эмиссией 520 нм);
- термостат, поддерживающий температуру (37±1) °С;
- холодильник бытовой;
- плитка электрическая;
- пипетки полуавтоматические одноканальные с переменным или фиксированным
объёмом со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объёмы жидкости от 5 до
5000 м кл;
- пипетка полуавтоматическая многоканальная со сменными наконечниками, позво
ляющ ая отбирать объёмы жидкостей от 5 до 350 м кл;
- перчатки резиновые хирургические;
- бумага фильтровальная лабораторная;
- цилиндр мерный 2-го класса точности вместимостью 100 м л;
- цилиндр мерный вместимостью 1000 м л;
- пробирки стеклянные (или полиэтиленовые микропробирки типа «Eppendorf» или
полистироловые разборные планшеты);
- вода очищенная;
- ацетон;
- 6% раствор перекиси водорода.