Набор реагентов для определения лекарственной устойчивости микобактерий туберкулезного комплекса к рифампицину и изониазиду методом полимеразной цепной реакции в реальном времени «Амплитуб-МЛУ-РВ» по ТУ 9398-002-46395995-2008 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас 2 закупки, где это изделие полностью проходит по требованиям хотя бы в одной позиции.
| Закупка | Окончание подачи | Нач. цена |
|---|---|---|
| Поставка расходных медицинских материалов для анализатора Xirill L 1000F, используемого заказчиком
№ 0387200004926000175 · КАЗЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ХАНТЫ-МАНСИЙСКОГО АВТОНОМНОГО ОКРУГА - ЮГРЫ "ХАНТЫ-МАНСИЙСКИЙ КЛИНИЧЕСКИЙ ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНЫЙ ДИСПАНСЕР" · Ханты-Мансийский автономный округ — Югра |
10.11.2026 | 4 435 783 ₽ |
| Поставка реагентов для определения Mycobacterium tuberculosis в режиме реального времени
№ 0361200015026004666 · ГОСУДАРСТВЕННОЕ КАЗЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ "САХАЛИНСКИЙ ОБЛАСТНОЙ ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНЫЙ ДИСПАНСЕР" · Сахалинская область |
10.11.2026 | 462 616 ₽ |
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 11 --- 7. А Н А Л И З И Р У Е М Ы Е М У Т А Ц И И Гены, кодоны, замены, тестируемые с помощью набора, представлены в табл. 1. Таблица 1. кодоны 531 526 516 533 k a tG 2 > \ S in h A 209 Замены Число пробирок в П Ц Р-РВ гроВ (рифампицин) 2 замены S e r- L e u T C G - T T G S e r- T rp T C G - T G G 6 замен His - Туг С А С - ТА С His - Asp С А С - G AC H is - L e u C A C - C T C His - Arg C A C - C G C His - Asn C A C - AAC His - Pro C A C - C C C 2 замены A sp - V a l G A C - G T C Asp - T yr G A C - TA C 1 замена Leu - Pro C T G - C C G 1 комплект № 2 комплекты №3,4 1 комплект № 5 1 комплект № 6 katG и inhA (изониазид) 3 замены Ser-T h r A G C - A C C Ser-Asn A G C - A A C Ser - Thr AGC - АСА 1 замена C209T 1 комплект № 7 1 комплект № 8 8. А Н А Л И З И Р У Е М Ы Е О Б Р А З Ц Ы Для анализа на лекарственную устойчивость допускаются образцы культур микобактерий туберкулезного комплекса с содержанием 10 и выше клеток в 5 мкл образца Д Н К, а также клинические образцы (мокроты и пр.) с содержанием клеток микобактерий туберкулеза 5x10^ и выше в 5 мкл образца Д Н К. Пробоподготовка образцов осуществляется с помощью комплекта № 1 для выделения Д Н К набора реагентов «Ам плиТуб-РВ» (ЗА О «Синтол») в зависимости от вида образца в соответствии с инструкцией к набору. Все выделенные образцы анализируются с помощью комплекта № 2 для проведения 1 0 --- стр. 12 --- ПЦР-РВ набора реагентов «АмплиТуб-РВ» для обнаружения и количественного определения ДНК М БТ методом ПЦР-РВ «АмплиТуб-РВ» (ЗАО «Синтол») с целью идентификации и дифференциации по количественному содержанию клеток микобактерий туберкулеза. Отобранные по количественному критерию образцы можно использовать для анализа на лекарственную устойчивость к рифампицину и изониазиду набором «Ампли Туб-МЛУ-РВ». Образцы культур с содержанием клеток микобактерий туберкулеза 1 0 "^ и выше в 5 мкл образца ДНК анализируют на лекарственную устойчивость с помощью комплектов № 2 - 8 (без проведения мультиплексной ПЦР-РВ комплектом № 1), а культуры с содержанием клеток микобактерий туберкулеза 1 0 "^ - 10^ в 5 мкл образца Д НК и все образцы мокроты с содержанием клеток микобактерий туберкулеза 5x10 и выше в 5 мкл образца ДНК анализируют с помощью комплектов № 1 - 8 (с проведением предварительно мультиплексной ПЦР-РВ для накопления специфических фрагментов генов фоВ, katG и inhA микобактерий туберкулезного комплекса). 9. П Р О В Е Д Е Н И Е А Н А Л И ЗА Перед началом работы с набором реагентов «АмплиТуб-МЛУ-РВ» необ ходимо создать в программе прибора протоколы, устанавливающие темпера турные режимы и необходимые красители, настроить параметры программы Excel и упорядочить файлы. Подробный порядок р аб о ты на приборе АНК-32 (Россия) и создание протоколов в программе прибора изложен в прш ожении 1. Организация о т четных файлов и анализ р езул ьтато в исследования в программе Excel с помо щью специального шаблона для автом атической обработки данных описан в приложении 2. 9.1. Этапы анализа. Анализ определения лекарственной устойчивости набором «АмплиТуб- М ЛУ-РВ» включает три этапа: — проведение мультиплексной ПЦР-РВ с помощью комплекта № 1; 1 1 --- стр. 13 --- — определение лекарственной устойчивости образцов к рифампицину с по мощью комплектов № 2-6; — определение лекарственной устойчивости образцов к изониазиду с помо щью комплектов № 7-8. На первом этапе с помощью комплекта реагентов № 1 проводится муль типлексная ПЦР-РВ с целью накопления специфических фрагментов генов гроВ, katG и inhA, в которых могут содержаться мутации, ассоциирующиеся с лекарственной устойчивостью к рифампицину и изониазиду. Второй этап анализа включает определение лекарственной устойчиво сти образцов к рифампицину (комплекты № 2 - 6). Все комплекты подразуме вают обнаружение конкретных мутаций в определенных кодонах (531, 526, 516, 533) гена гроВ, ассоциирующихся с устойчивостью к рифампицину. Для анали за были выбраны 1 1 мутаций, наиболее часто встречающиеся и обеспечиваю щие диагностическую чувствительность 90-100%. Температурные режимы ПЦР-РВ для комплектов № 2 - 6 одинаковы, что позволяет работать с комплектами как последовательно, так и параллельно, в зависимости от количества исследуемых образцов. Последовательность (нуме рация) комплектов определена в соответствии с вероятностью обнаружения мутаций, т.е. мутации в 531 кодоне гроВ гена чаще встречаются, чем в 526 или 516 кодонах. Таким образом, при большом числе образцов и/или последова тельной работе с комплектами мы рекомендуем соблюдать их последователь ность. Это, во-первых, упростит постановку и интерпретацию результатов ПЦР-РВ, и, во-вторых, уменьшит расход реагентов и время анализа на лекарст венную устойчивость. Третий этап анализа - определение лекарственной устойчивости к изо ниазиду (комплекты № 7 - 8). Комплект № 7 позволяет обнаруживать мутации в 315 кодоне katG гена, а комплект № 8 - замену С209Т в регуляторном регио не inhA гена. Рекомендуется проводить последовательный анализ образцов на антибио- тикоустойчивость согласно представленному ниже алгоритму: для всех образ- 12 --- стр. 15 --- Анализ с помощью комплектов № 1-8 набора «АмплиТуб-МЛУ- РВ» вклю чает в себя: 1 . Подготовку к проведению реакции ПЦР-РВ. 2. Проведение реакции ПЦР-РВ. 3. Учет и обработку результатов с помощью программы Excel. 4. Анализ результатов и выводы. 9.2. Подготовка к проведению реакции ПЦ Р-РВ. Подготовка к проведению реакции ПЦР-РВ для всех комплектов набора одинакова. В каждую постановку обязательно включают положительные (П КО ) и отрицательные (О КО ) контрольные образцы ПЦР. При параллельном использовании комплектов включение в постановку всех входящих в комплект П К О обязательна, если в данной постановке используется этот комплект! Реакцию с каждым исследуемым образцом (И О ) рекомендуется ставить в двух повторах. 1 . Взять необходимое количество пробирок с реакционной смесью комплекта для амплификации из расчета 2*N+K (если исследуемые образцы ставятся в двух повторах) или N+K (если исследуемые образцы ставятся однократно), где N - количество исследуемых образцов, а К - количество контрольных образцов в данном комплекте. Не допускать размораживания и повторного замораживания оставшихся пробирок со смесью. 2. После размораживания реакционной смеси, центрифугировать пробирки 30- 60 секунд (скорость вращения ротора более 4000 об./мин. или 2500g). Для этого воспользоваться либо ротором для пробирок 0,2 мл, либо адаптерами к стандартному ротору для пробирок 2,0 мл. 14 --- стр. 16 --- 3. Поместить пробирки с реакционной смесью в штатив. Маркировать пробирки в соответствии с протоколом исследования в верхней части стенки пробирки. Примечание Запрещается наносить маркировку на крышку пробирок. 4. Положительные и отрицательные контрольные образцы ПЦР и исследуемые образцы разморозить, перемешать на встряхивателе (вортексе) и центрифугировать. 5. Внести в пробирки по 5 мкл отрицательных контрольных образцов, исследуемых образцов и, в последнюю очередь, положительных контрольных образцов Д НК М БТ в соответствии с маркировкой, используя наконечники с аэрозольным барьером, перемешать на встряхивателе и центрифугировать. 6. Поместить пробирки в прибор в соответствии с протоколом исследования. А. М ультиплексная П Ц Р-РВ (Ком плект № 1 «M ulti») Проведение мультиплексной ПЦР-РВ - комплект № 1 «Multi» - первый этап анализа образцов, содержащих микобактерии туберкулезного комплекса и отобранных по количественному содержанию клеток М БТ (см. п. «Анализи руемые образцы»). С целью предотвращения контаминации режим амплификации мультип лексной ПЦР-РВ специально включает только 20 циклов, когда рост флуорес ценции обычно еще не регистрируется прибором. Поэтому П К О -multi является только внешним контролем работы реагентов. Пробирка с П КО -multi после окончания реакции амплификации выбрасывается. Исследуемые образцы после постановки мультиплексной ПЦР-РВ разводят в тех же пробирках в 5 раз деио низированной водой. П о л у ч е н н а я см есь я в л я е т с я и с х о д н о й д ля д а л ь н е й ш е й п о с т а н о в к и всех р е а к ц и й П Ц Р - Р В с п о м о щ ь ю к о м п л е к т о в М 2 - 8 ! Рекомендуется использовать следующий порядок образцов в комплекте № 1 «Multi»: 15 --- стр. 17 --- № ячейки Образец 1 ПКО-multi 2 ОКО 3 исследуе1иый образец 1 4 исследуемый образец 2 5 исследуемый образец 3 32 исследуемый образец / V Б. Определение усто й чи во сти к рифампицину (комплекты Nq 2-6 «гроВ») Для корректной работы шаблонов для автоматической обработки результа тов необходимо использовать следующий порядок образцов: в комплекте № 2 «гроВ 531»: М > ячейки Образец 1 ПКО-гроВ 2 HKOl-Alml 3 ПК02-А1т1 4 ПК01-А1т2 5 ПК02-А1т2 6 ОКО 7 исследуемый образец 1 8 исследуемый образец 1 9 исследуемый образец 2 1 0 исследуемый образец 2 3 1 исследуемый образец N 32 исследуемый образец N в комплекте Nq 3 «гроВ 526-1»: № ячейки Образец 1 ПКО-гроВ 2 ПК01-А1тЗ 3 ПК02-А1тЗ 4 ПК01-А1т4 5 ПК02-А1т4 6 ПК01-А1т5 7 ПК02-А1т5 8 ОКО 9 исследуемый образец 1 1 0 исследуемый образец 1 1 1 исследуемый образец 2 1 2 исследуемый образец 2 3 1 исследуемый образец N 32 исследуемый образец / V в комплекте Nq 4 «гроВ 526-2»: М ячейки Образец 1 ПКО-гроВ 2 ПК01-А1т6 3 ПК02-А1т6 16 --- стр. 18 --- 4 ПК01-А1т7 5 ПК02-А1т7 6 ПК01-А1т8 7 ПК02-А1т8 8 ОКО 9 исследуемый образец 1 1 0 исследуемый образец 1 1 1 исследуемый образец 2 1 2 исследуемый образец 2 3 1 исследуемый образец N 32 исследуемый образец N 6 комплекте Nq 5 «гроВ 516»: М яче й к и Образец 1 ПКО-гроВ 2 ПК01-А1т9 3 ПК02-А1т9 4 ПК01-А1тЮ 5 ПК02-А1тЮ 6 ОКО 7 исследуемый образец 1 8 исследуемый образец 1 9 исследуемый образец 2 1 0 исследуемый образец 2 3 1 исследуемый образец N 32 исследуемый образец N в комплекте М б «гроВ 533»: № ячейки Образец 1 ПКО-гроВ 2 ПК01-А1т11 3 ПК02-А1т11 4 ОКО 5 исследуемый образец 1 6 исследуемый образец 1 7 исследуемый образец 2 8 исследуемый образец 2 • . . 3 1 исследуемый образец N 32 исследуемый образец N В, Определение усто й чи во сти к изониазиду (комплекты Nq 7-8 «katG», «inh») Рекомендуется использовать следующий порядок образцов в комплекте № 7 «katG 315»: № ячейки Образец 1 ПКО-katG 2 nK01-katGAIml2 3 nK02-katGAIml2 4 nK01-katGAIml3 5 nK02-katGAIml3 6 nK01-katGAIml4 7 nK02-katGAIml4 17 --- стр. 19 --- 8 ОКО 9 исследуемый образец 1 1 0 исследуемый образец 1 1 1 исследуемый образец 2 1 2 исследуемый образец 2 3 1 исследуемый образец N 32 исследуемый образец / V в комплекте Nq 8 «inhA»: ЛЬ ячейки Образец 1 ПКО-inhA 2 nK01-inhAAIml5 3 nK02-inhAAIml5 4 ОКО 5 исследуемый образец 1 6 исследуемый образец 1 7 исследуемый образец 2 8 исследуемый образец 2 3 1 исследуемый образец N 32 исследуемый образец N 9.3. Проведение реакции П Ц Р-РВ Реакцию ПЦР-РВ проводят согласно инструкции по эксплуатации прибора АНК-32, АНК-64 или АНК-96. 1) Включают прибор в соответствии с инструкцией по эксплуатации. 2) Запускают программу «AHK32.exe». 3) Выбирают режим работы «Циклический». 4) В окне «Циклический» вводят параметры температурно-временного режима амплификации согласно таблицам 2 - 4 и вводят красители (FA M , JO E/R 6 G , R O X , Су5) согласно таблице 5. При одновременном использовании комплектов № 2 - 6 или комплектов № 7 - 8 рекомендуется сразу включать красители по всем четырем каналам. Таблица 2 - Температурно-временной режим амплификации для комплекта №1 (мультиплексная ПЦР-РВ) № п/п Температурно-временной режим Число циклов 1 95 °С - 5 мин 1 2 66 °С - 50 с 203 95 °С - 20 с 18 --- стр. 20 --- Таблица 3 - Температурно-временной режим амплификации для комплектов №2 - 6 (определение устойчивости к рифампицину) № п/п Температурно-временной режим Число циклов 1 95 °С - 5 мин 1 2 58 Т - 50 с 40 3 95 Т - 20 с Таблица 4 - Температурно-временной режим амплификации для комплектов №7 - 8 (определение устойчивости к изониазиду) № п/п Температурно-временной режим Число циклов 1 95 °С - 5 мин 1 2 62 °С - 50 с 403 95 °С - 20 с Таблица 5 - Красители, вводимые для комплектов № 1 - 8 № комплекта Красители Выявление 1 FA M , R6G, R O XСпецифические фрагменты генов фоВ, katG и inhA. 2 FA M , JO E , Су5 Специфические фрагменты гена ф оВ с за менами в 531 кодоне. 3 FA M , JO E , R O X , Су5 Специфические фрагменты гена ф оВ с за менами в 526 кодоне. 4 FA M , JO E , R O X , Cy5 Специфические фрагменты гена ф оВ с за менами в 526 кодоне. 5 JO E , R O X , Cy5Специфические фрагменты гена ф оВ с за менами в 516 кодоне. 6 R O X , Cy5 Специфические фрагменты гена фоВ с за меной в 533 кодоне. 7 FA M , JO E , R O X , Cy5 Специфические фрагменты гена katG с за менами в 315 кодоне. 8 FA M , R6G Специфические фрагменты гена inhA с за меной в С209Т. 5) Вводят сведения об образцах по соответствующему красителю. Нажимают «О К» в «Сведениях об образцах». 19 --- стр. 28 --- Рекламации на качество наборов направлять в Ф Г У Н Государственный НИИ стандартизации и контроля медицинских и иммунологических препаратов (ГИ С К ) им. Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора по адресу: 119002, Москва, пер. Сивцев Вражек, 41, тел. (495) 241-39-22 и на предприятие-изготовитель ЗАО «Синтол» по адресу: 127550, Москва, Тимирязевская ул., 42, тел. (495) 506-79- 97. Генеральный директор Предприятия-изготовителя ЗАО «Синтол» Руководитель Государственных испытаний зав. лаб. микобактериальных препаратов ) Д.Т.Леви 27 --- стр. 29 --- Порядок работы, учета и интерпретации результатов анализа на приборе АНК-32 (Россия) Подготовка к работе В случае первого использования прибора АНК-32 или переустановки программы не обходимо создать 5 новых протоколов - «M ulti», «Риф -гроВ531,516», «Риф -гроВ526», «Риф -гроВ533» и «Изониазид». Создание протокола «МиШ» 1. Открыть программу «ПЦР» для прибора АНК-32. 2. Выбрать Режим работы Циклический. Приюжение 1 rl|Ш lpaм»мдлнПЦP(32)S•^100610[iiмyямция] 1 Файл Вид Режимы работы Настройки Окно Справка 5 , i Просмотр Прием ^ О Данных Изотерм«еский ^ /цж ян чвсы й 4 , Ночной * Актиовция овжми Плавление режим ■7 3. В появившемся окне в соответствии с инструкцией к прибору задать программу ампли- фикатора со следующими параметрами: Номер ступе ни Температура Время Кол-во цик лов Метки циклов 1 95 300 1 2 66 50 20 Начало 3 95 20 20 Конец ((и н л и че гки й Н о м е рТ е м п е р а т у р а В р е м я (С о / и ч е с т в о М е т к ис т у п е н и (г р а а у с ы ) (с е к у н д ы ) и и к л о в ц и к л о в 1 ' 9 5 .0 3 0 0 1 2 £ 6 0 5 0 Л Н а ч а л о В |б6 0 Ы J J - вр ем я------- |5 0 И ] i ] A o tfa B v frb 1 З а м е ти тьИ д в <1и т ь 1 В ста ви ть К о н е ц У е тв н о е ш ь п а р а м е т р ы ц и н л э е Р е а а к ти р о в в ть т а б / м ц у С о к р а м и т ь З а г р у зи т ь Kpacurertt J С г а р т З о ф ы тъ 4. Нажать клавишу «Красители», выбрать в появившемся окне красители FA M , R O X и R6G и нажать «ОК». О К_1 1 ; ' orjyj ij 28 --- стр. 30 --- 5. Нажать клавишу «Сведения об образцах ,..в появившемся окне выбрать краситель FAM и, пользуясь инструкцией к прибору, ввести следующие сведения об образцах: Лунка № 1: П К О -multi Лунка № 2: О КО С в е д е н и и о б о6|1<15Ц<1к п о к р а с и т е л я м F A M IR 6 G I R O X I ш ш ш ж ■ш ■ш К о п и р о в а т ь ] В сга е чть | О ч и с т и т ь | О К Отмена Нажать клавишу «ОК». 6. Нажать клавишу «Сохранить». В появившемся окне «Сохранить метод Циклический» нажать клавишу «Создать пользователя», ввести название папки «Анализ МБТ», и нажать «ОК»: С о х р а н и ть и етсд Ц м ш и ч е ск и А I ^ J В с е го п о л ь з о е г г т е л е й В се го дать» у п о л ь зо в а т е л я Если указанная папка уже сушествует, выбрать ее шелчком мыши. Нажать клавишу «Сохранить», ввести название протокола «M ulti» и нажать «ОК»: ' м е т о д Ц и и к и ч е с к р ^ Всего п ол ьзо м гелей | 2 ~ | Всего д а н к ы х а п о л ьзо ва те л я. [ 2 О б щ и й М Б Т Т е ст |ввид названия Д л и н а н е м е н ьш е 5 си м в о л о в |М и « 1 О К 1 О тм е н а Т е к у щ и й 0 6 2 6 2 1 3 2 1 9 m td X j С о зд а ть п о л ьзо о а те л я | Ы яаяи ть | ^ ^ С о х р а н и т^ За1ф ы п > | 29 --- стр. 31 --- 7. При дальнейшей работе использовать созданный метод. Создание протоколов «Риф-гроВ531,51б», «Риф-гроВ526», «Риф-гроВ533» 1. Открыть программу «ПЦР» для прибора АНК-32. 2. Выбрать Режим работы Циклический. 3. В появившемся окне в соответствии с инструкцией к прибору задать программу ампли- фикатора со следующими параметрами: Номер ступе ни Температура Время Кол-во цик лов М етки циклов 1 95 180 1 2 58 50 40 Начало 3 95 20 40 Конец 4. Нажать клавишу «Красители»^ выбрать в появившемся окне красители: - R O X, R6G /JO E и Су5 - для комплектов № 2 (фоВЗЗ 1), № 5 (ф оВ516) - РА М , R O X , R6G /JO E и Су5 - для комплектов № 3-4 (фоВ526) - R O X и Су5 - для комплекта № 6 (гроВЗЗЗ) и нажать «ОК». 5. Нажать клавишу «Сохранить». В появившемся окне «Сохранить метод Циклический» нажать клавишу «Создать пользователя», ввести название папки «Анализ МБТ», и нажать «ОК»: Если указанная папка уже существует, выбрать ее щелчком мыши. Нажать клавишу «Сохранить», ввести название протокола «Риф-гроВ531,516» (или «Риф- гроВ526», «Риф-гроВ533») и нажать «ОК»: 6. При дальнейшей работе использовать созданные протоколы. Создание протокола «Изониазид» 1. Открыть программу «ПЦР» для прибора АНК-32. 2. Выбрать Режим работы Циклический. 3. В появившемся окне в соответствии с инструкцией к прибору задать программу ампли- фикатора со следующими параметрами: Номер ступе ни Температура Время Кол-во цик лов М етки циклов 1 95 180 1 2 62 50 40 Начало 3 95 20 40 Конец 4. Нажать клавишу «Красители», выбрать в появившемся окне красители FA M , R O X, R6G /JO E и С у5 и нажать «ОК». 5. Нажать клавишу «Сохранить». В появившемся окне «Сохранить метод Циклический» нажать клавишу «Создать пользователя», ввести название папки «Анализ МБТ», и нажать «ОК»: Если указанная папка уже существует, выбрать ее щелчком мыши. Нажать клавишу «Сохранить», ввести название протокола «Изониазид» и нажать «ОК»: 6. При дальнейшей работе использовать созданный метод. 30 --- стр. 32 --- Проведение ПЦР-РВ А. М ультиплексная П Ц Р-РВ (Ком плект № 1 «M ulti») 1. Включить прибор в соответствии с инструкцией по эксплуатации. 2. Запустить программу «ПЦР» для прибора АНК-32. 3. Выбрать режим работы «Циклический», нажать клавишу «Загрузить» ГЦ)ог pdMMd д л м ПЦР (3 2 ) S b 1 OUb I U[ Э м уляц и я] Флйл Вид Режимы работы Настройки Окно Справка SQ Прием I f Просмотр Данных Изотерммеский у/ш км ы е а /л Л ----------------------------------------------- кП л а в л е н и еА к т м в а ц и яНомной режим 1 Ц и к л и ч е с к и мШШк Jp J> Н о м е р [ Т е л в те р в т*»В р в м яК о л и ч е с т в оМ е т к ис т ^ ^ п е н и1 (г р а в !)с ы | (с е к !)н а ы ) ц и к л о в ц м к л о е 1 5 0 0 8 0 1 2 9 5 .0 6 0 0 1 3 6 0 0 5 0 4 0 Н а ч а л о 4 3 5 .0 2 0 4 0 К о н е ц Г Т е м п е р а т д е в---- |5 0 0 Ы J А - В р е м я------- и L iJJ J Д о б а в и т ь 1 З а м е н и т ьУ д а л и т ь [ В с т а в и ть | У с т а н о в и т ь п а р а м е т р ы ц и к л о в Р в п а к ш р о в а гь т а б п ш и С о х р а н и т ь К р а с и т е л и . [З е гр зж гь C r e jir Соеаекия вб о4рззцэк . З а к р ы т ь 4. Выбрать папку «Анализ М БТ»» и протокол «M ulti» и нажать клавишу «Загрузить». З а гр узи ть м етод Ц и к л и ч е с к и й Всего пользователей: Общий SNP-SCREEN-ABO А Н а п и ;- Ь .^ Б Т Удалить пользователя Всего данных у пользователя; МБТ Калибровка МБТтест РиФ-гроВ531,516 РиФ-гроВ526 РиФ-гро8533 Изониазид Т екуший: 2008 12 08 18 13 16.m td Удалить Загрузить 5. В появившемся окне «Красители» проверить установку красителей FA M , R O X и R6Gn нажать «ОК». 6. Начать работу прибора нажатием кнопки «Старт». 7. После загрузки и начала работы прибора в окне «Прием данных» нажать клавишу «Об разцы». В появившемся окне выбрать краситель FA M , перейти на лунку № 3 и последо вательно внести названия образцов. 31 --- стр. 38 --- 1. После завершения реакции, нажать клавишу «Просмотр». 2. Проверить в «Настройки» «Расчет» расчетные коэффициенты для соответствующего комплекта, прилагаемые на вкладыше к каждому комплекту. 3. Выбрать файл, содержащий данные работы прибора, щелчком левой кнопки мыши. 4. В меню «Как считать» выбрать «Автомат». 5. Нажать клавишу «Расчет». Появится окно «Общий расчет» с рассчитанными пороговы ми циклами. В этом окне нажать клавишу «Сохранить», выбрать «Рабочий стол» «Анализ М Б Т » — > «М БТ-М Л У» — > «Данные» «Год» — > «Месяц», в поле «Имя файла» ввести на звание в форме «год.месяц.число-katG». Нажать «Сохранить». Нажать клавишу «Закрыть» в окне «Общий расчет». 6. Закрыть или свернуть программу «ПЦР». Примеры кинетических кривых Пример кинетических кривых определения усто й чи во сти к изониазиду (ген katG 315 кодон). канал FA M (мутация A lm l2 - Ser-Thr2) канал JO E (мутация Alm l3 - Ser-Thrl) Расчет значений порогового цикла канал R O X (мутация A lm l4 - Ser-Asn) канал Су5 (зонд) 37 --- стр. 39 --- Приложение 2 Организация отчетных файлов Рекомендуется следующая организация отчетных файлов на компьютере: 1. Создать на Рабочем столе (или другом удобном месте) папку «М БТ». 2. Внутри папки «М БТ» создать 2 папки с названиями «Ш аблоны» и «Отчеты». 3. В папку «Ш аблон» скопировать шаблон для обработки результатов анализа с CD- диска, который прилагается к набору реагентов. 4. Внутри папки «О тчеты» создать папки по годам и, если требуется, по месяцам. Настройка параметров программы «Excel» Для обработки результатов реакции необходимо, чтобы на компьютере была установлена программа Microsoft Excel из пакета Microsoft Office. Для корректной р аб о ты шаблона для автом атической обработки р езультато в необходи мо, чтобы в программе Excel в качестве разделителя целой и дробной части была устан о в лена запятая. Данная операция выполняется один раз. Если Вы у ж е выполняли э т у опера цию для это й или других тест-си стем , э т о т пун кт следует пропустить. Открыть программу Excel. Н а ж а т ь : Пуск Программы — > ■ M icrosoft Office Excel В программе Excel выбрать вкладку «Сервис»^ затем «П арам етры »: ( ф айл Омвкв Вствака Фосоат Выбрать закладку «Международные» и в разделе «Числа» укажите: Разделитель целой и дробной части « , » Разделитель разрядов - пробел: Вид I Вычююм I Правка | Обшж | Переход | Слнскм | Дпаграми | Цвет Междуиароджл | Сохранение | Провеска оии&ж | Орфография | Беххтаоюсть Числа Еаэдеттель целой и дробной часп(|! J V ^слользоеатъ снстеите раздвпитеУИ Р2>деттель paipi |7 Преобрамеам Aj/tettet Направление текста------------ Направлеше по умзлчанмо С справа налево Р савва направо 1~ Проспатр<«атъ текущий лист справа налево Переивщение курсора ( f лосическое С 4»^«ео:ое Г йтображать управлянлцие хаки 38 --- стр. 40 --- Обработка результатов в программе Excel Результаты анализа исследуемых образцов принимаются только при выполнении ВСЕХ вышеперечисленных условий для контрольных образцов (см. п. 8 основной инструкции). А. М ул ьти те ксн ая П Ц Р-РВ (Ком плект № 1 «M ulti») Так как реакция «M ulti» является прохмежуточной и служит только для накопления специфических фрагментов, результаты данной реакции не обрабатываются в программе Excel с помощью специального шаблона, а оцениваются по автоматическому расчету поро говых циклов в программе прибора. Реакция считается успешной, а результаты достоверны ми, если соблюдены все условия анализа для контрольных образцов. Н аж ать клавиш у « О К ». 1. 2. Б. Определение усто й чи во сти к рифампицину (комплекты JVg 2-6 «гроВ») Открыть шаблон «Рифампицин». Для этого выбрать Рабочий стол -> М Б Т Ш аблоны Рифампицин.хк. Нажать «Не отклю чать макросы». Шаблон состоит из нескольких листов. Названия листов соответствуют определенным комплектам (фоВ531 - № 2, фоВ526(1) - № 3, фоВ526(2) - № 4, фоВ516- № 5, фоВЗЗЗ - № 6). На листе «О тчет» автоматически собираются все данные из листов по каждому комплекту. Лист «Сортировка» служит для окончательной сортировки всех исследуемых образцов, содержащихся в шаблоне. Чтобы обработать результаты определенной постановки, необходимо открыть в шаблоне соответствующий лист (фоВ531, фоВ526(1), фоВ526(2), фоВ516, фоВЗЗЗ). 4 3 4 4 4 5 N i ► ► l ^ Im port ' 'pobs; fOT4gT / Сортировка / 3. Ввести в соответствующие ячейки дату, имя оператора, название исходного файла (в программе «ПЦР»), серийный номер набора. В С D Е F G Н "АмплиТуб-МЛУ-РВ" /роб ген 531 кодон качественный 19.12.2008 Импорт данных _________ ашко 14_29_56 [50608-01 Тест-система: Тип анализа: Дата: Оператор: 1'ЖЗФайл: 4. Импортировать в шаблон рассчитанные значения пороговых циклов. Для этого нажать клавишу «Импорт данных», выбрать папку Рабочий стол-^ М Б Т -> Данные -> Год -> Месяц — > ■ «название_файла». Нажать «Открыть» и «Готово». • В столбце «Название» отражены названия контрольных и исследуемых образцов ; • В столбце «Зонд/МБТ» отражены пороговые циклы по каналу Су5 и результаты по об наружению микобактерий туберкулезного комплекса в контрольных и исследуемых об разцах; 39