Набор реагентов для выявления антител к индивидуальным белкам вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1) и типа 2 (ВИЧ-2) методом иммунного блота в сыворотке или плазме крови человека (МПБА-Блот-ВИЧ-1, ВИЧ-2) по ТУ 9398-001-00899696-2010 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- Утверждена Приказом Росздравнадзора № _____________________ От« » 2010 г. Генеральный директор «МГТБЛ^иагаостика» « У Т В Е Р Ж Д А Ю » . >^ади Мобархан 2010 г . ИНСТРУКЦИЯ по применению Набора реагентов для выявления антител к индивидуальным белкам вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1) и типа 2 (ВИЧ-2) методом иммунного блота в сыворотке или плазме крови человека ( М П Б А - Б л о т - В И Ч - 1 , В И Ч - 2 ) 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор «МПБА-Блот-ВИЧ-1, ВИЧ-2» предназначен для подтверждения вы яв ления антител к индивидуальным белкам (антигенам) ВИЧ-1 и/или ВИЧ-1 ф.О, и/или ВИЧ-2 в сыворотке или плазме крови человека методом иммунного блота. Набор рассчитан на проведение 18 исследований, включая анализ 1 5 неиз вестных образцов, 2 положительных контрольных образцов и 1 отрицательного кон трольного образца. Набор предназначен только для диагностики ин витро. 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2Л. ПРИНЦИП М ЕТОДА На нитроцеллюлозных стрипах в зависимости от молекулярного веса, сорби рованы белки ВИЧ-1, которые получены из инактивированного лизата вируса, и синтетический пептид BPi4-2. На каждый стрип нанесен дополнительный внутрен ний контроль - анти IgG человека, который служит доказательством контакта иссле дуемой сыворотки (плазмы) крови человека со стрипом и правильного соблюдения этапов процедуры анализа. Каждый нитроцеллюлозный стрип инкубируется с разведенной исследуемой сывороткой или плазмой крови человека, или с контрольными образцами, входящи ми в состав набора. Антитела, специфические к белкам (антигенам) ВИЧ-1 или к белку ВИЧ-2, если они присутствуют в анализируемом образце крови, будут связы ваться с определенной областью на стрипе, соответствующей этим антигенам. --- стр. 2 --- Антитела, специфически связавшиеся с антигенами ВИЧ, нанесенными на стрип, проявляются после взаимодействия с конъюгатом и затем - с субстратом (ок рашивающим раствором), после чего на стрипе появляются окрашенные с различ ной интенсивностью полосы. 2.2.СОСТАВ НАБОРА В состав набора реагентов входят: - нитроцеллюлозные стрипы с сорбированными на них индивидуальными бел ками ВИЧ-1 (gpl60, gpl20, р66, р55, р51, gp41, р31, р24, р17) и нанесенным синте тическим пептидом ВИЧ-2, аналогом белка gp36, и анти-IgG человека (внутренний контроль) - 18 ш т. -К- (контрольная отрицательная сыворотка) - сыворотка крови человека, не содержащая антитела к ВИЧ-1, 2, ВГС, антиген В Р Т Ч , HBsAg - 1 пробирка (0,08 мл). -К+сл (контрольная слабоположительная сыворотка) - сыворотка крови чело века, содержащая антитела к ВИЧ-1 (титр не более 1:200), не содержащая HBsAg, антиген В Р 1Ч и антитела к ВГС. - 1 пробирка (0,08 мл). -К+ (контрольная положительная сыворотка) - сыворотка крови человека со держащая антитела к ВИЧ-1, 2 (титр не менее 1:10000), не содержащая HBsAg, ан тиген ВИЧ, антитела к ВГС. - 1 пробирка (0,08 мл). -конъюгат (козьи антитела к IgG человека, конъюгированные со щелочной фосфатазой) содержащий натрия азид -1 пробирка (0,06 мл). - субстрат (окрашивающий раствор) - раствор 5-бром-4-фторо-индол ил- фосфата (BCIP) и нитросинего тетразолия (NBT). -1 флакон (50 мл). - (ПР) (х20) - промывочный раствор, концентрат х20,содержащий тимеросал - 1 флакон (70 мл). - (РРОК) (х10) - буфер для разведения образцов и конъюгата, концентрат х10- 1 флакон (10 мл). -порошок для иммунного блоттинга (обезжиренное сухое молоко) - 5 упако вок (по 1,0 г). -планшет с крыш кой для постановки реакции - 2 ш т. -пинцет пластмассовый - 1 ш т. 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ При использовании в качестве исследуемого образца К+ ( контрольная поло жительная сыворотка) на стрипе должны быть видны полосы, соответствующие расположению белков: р17, р24, р31, gp41, р51, р55, р66, gpl20/gpl60 и полоса внутреннего контроля. При использовании в качестве исследуемого образца К+сл (контрольная сла боположительная сыворотка) на стрипе должны быть видны полосы соответст вующие расположению белков: р24и/или gp41n gpl20/gpl60 и полоса внутреннего контроля. При использовании в качестве исследуемого образца К- (контрольная отрица тельная сыворотка) на стрипе должна быть видна только полоса внутреннего кон троля. --- стр. 3 --- 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 3. 4.2. Входящие в состав набора контрольные образцы инактивированы, одна ко исследуемые образцы сыворотки и плазмы крови людей, а также сточные раство ры , оборудование и материалы, находящиеся в контакте с ними, представляют собой потенциально инфицированный материал, поэтому при работе следует использо вать резиновые или пластиковые одноразовые перчатки, а для дозирования жидко стей - одноразовые пластиковые наконечники. 4.3. Оборудование, находившееся в контакте с биологическими образцами и реагентами, следует дезинфицировать до и после работы с использованием дезин фицирующих растворов и 70% этилового спирта. 5.4. Все сточные растворы, а также использованный загрязненный материал следует обрабатывать дезинфицирующим средством, например, 6% раствором пере киси водорода в течение 4 ч . 4.5. При работе с набором следует соблюдать «Правила устройства, техники ф безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и лич ной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно- эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР», (М осква, 1981г.) 5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ 1 . Центрифуга 3000 об/мин 2. Качающаяся платформа (встряхиватель) 3. Дозаторы (пипетки) для внесения жидкостей с переменным объемом: от 10 мкл до 100 мкл, от 100 мкл до 1,0 мл и 1,0 мл до 5,0 мл 4. Мерный стакан или цилиндр емкостью от 50 до 1000 мл, ванночки для реа гентов 5. Резиновые перчатки ф 6. Контейнеры для сброса зараженных твердых отходов и слива зараженных жидкостей 7. Дистиллированная или деионизированная вода 8. Спирт этиловый 9. Фильтровальная бумага 6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ Негемогенизированная сыворотка или плазма крови человека. о Образцы крови можно хранить при температуре 2-8 С не более 72 ч или в за- мороженном виде при температуре минус 18-20 С не более 3 месяцев. Повторное замораживание не допускается. ВНИМАНИЕ! Каждый образец сыворотки или плазмы крови необходимо от бирать новым наконечником! --- стр. 5 --- 8.1.8. Каждый стрип отмыть 3 раза добавляя в каждую ячейку по 2,0 мл рабо чего промывочного раствора (п. 7,1), каждый раз инкубировать по 5 мин при ком натной температуре на встряхивателе. 8.1.9. В каждую ячейку добавить по 2,0 мл рабочего раствора конъюгата (п. 7.4). Планшет закрыть крыш кой и инкубировать в течение 30 мин при комнат ной температуре на встряхивателе. 8.1.10. После окончания инкубации удалить раствор из ячеек. Провести ста дию отмывки так, как это указано в п. 8.1.8. 8.1.11. В каждую ячейку добавить по 2,0 мл рабочего раствора субстрата (п. 7.5). Планшет закрыть крышкой и инкубировать в течение 15 мин при комнатной температуре на встряхивателе. 8.1.12. После окончания инкубации удалить раствор из ячеек. Промыть каж дый стрип не менее трех раз в 2,0 мл дистиллированной водой для остановки ре акции (на этом этапе результатом недостаточной промывки может являться появле ние темного фона на стрипах). 8.1.13. Используя пинцет, осторожно извлечь из ячеек стрипы и разместить их на листе фильтровальной бумаги. Накрыть другим листом фильтровальной бумаги и высуш ить. Поместить стрипы на белую бумагу (не использовать фильтровальную бумагу) и провести анализ полученных результатов. Последующее хранение стрипов долж но осуществляться в темноте. 8,2. Вариант № 2 - длительность анализа 2,5-3 ч . 8.2.1. С помощью пинцета осторожно поместить необходимое количество стрипов в ячейки планшета, стороной с номером вверх. 8.2.2. В каждую ячейку добавить по 2 мл рабочего промывочного раствора (п. 7.1). 8.2.3. Инкубировать стрипы 5 мин при комнатной температуре на встряхива теле (12-16 качаний в мин). Удалить промывочный рабочий раствор, полностью осушая содержимое каждой ячейки, используя для этого автоматическую пипетку или вакуумный насос. 8.2.4. В каждую ячейку добавить по 2 мл буфера для блоттинга (п. 7.3). 8.2.5. В соответствующие ячейки добавить по 20 мкл исследуемой сыворотки (плазмы) крови человека или контрольных образцов, исключая попадание на стри пы , и сразу аккуратно перемешать. В каждое тестирование обязательно включать контроли (положительный, сла боположительный и отрицательный). 8.2.6. Закрыть планшет крыш кой и инкубировать его в течение 1 ч при ком натной температуре на встряхивателе. 8.2.7. Осторожно снять крыш ку, избегая перемешивания образцов. Удалить раствор из инкубационных ячеек. Обязательно проводить смену наконечника при переходе от одной ячейки к другой для предотвращения контаминации. 8.2.8. Каждый стрип промыть 3 раза, используя по 2 мл рабочего промывочно го раствора (п. 7.1) с инкубациями между промывками в течение 5 мин на встряхи вателе. --- стр. 6 --- # 8.2.9. в каждую ячейку добавить по 2 мл рабочего раствора конъюгата (п. 7.4). Планшет закры ть крышкой и инкубировать в течение 1 ч при комнатной температу ре на встряхивателе. 8.2.10. После окончания инкубации, удалить раствор из ячеек. Провести ста дию отмывки, аналогично п. 8.2.8. 8.2.11. В каждую ячейку добавить по 2 мл субстрата (п. 7.5). Планшет закры ть кры ш кой и инкубировать в течение 15 мин при комнатной температуре на встряхи вателе. 8.2.12. После окончания инкубации, удалить раствор из ячеек. Промыть каж дый стрип три раза в 2 мл дистиллированной водой для остановки реакции (на этом этапе результатом недостаточной промывки может являться появление темного фо на на стрипе). 8.2.13. Используя пинцет, осторожно извлечь из ячеек и разместить стрипы на фильтровальной бумаге. Накрыть сверху другим листом фильтровальной бумаги и высуш ить. Поместить стрипы на белую бумагу (не использовать фильтровальную бумагу) и провести анализ полученных результатов. Хранить стрипы в темноте. Таблица 1 О бъемы реагентов, необходимы е для постановки иммунного блоттинга в зависимости от используемого количества стрипов. Количество используемых стрипов Реагенты 3 6 9 15 18 Рабочий раствор ПР, мл 60 100 140 240 280 Буфер для блоттинга, мл 20 40 60 80 100 Коньюгат, м кл 10 20 20 30 40 Субстрат, мл 10 20 20 30 40 Порошок для блотинга, уп. 1 2 3 4 5 Объективные результаты анализа гарантируются при выполнении следую щих условий: - хранение всех реагентов набора осуществлять при температуре от 2 до 8 °С в герметично укупоренном виде; - не использовать реагенты с истекшим сроком годности; - не использовать реагенты из наборов разных серий; - не использовать реагенты набора при отсутствии на их упаковке соответст вующей маркировки; - использовать реагенты, входящие только в данный комплект. 8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ Регистрация результатов проводится визуально. Необходимо включать К-, К+, К+сл в каждое исследование не зависимо от ко личества тестируемых образцов. --- стр. 7 --- Д л я того чтобы полученны е результаты мож но бы ло сч и тать достоверны м и, необходимо вы полнение ряда условий: 1 . К -: н а стрипе с отрицательны м контролем не должно бы ть окраш енны х по лос, к ром е полосы анти-IgG . 2 . К + : на стрипе с полож ительны м контролем долж ны п рояви ться полосы со ответствую щ ие сорбированны м н а стрипе антигенам В И Ч -1: р17, р24, р31, gp41, р51, р55, р66, gpl20 и gpl60. П ри отсутствии полосы р17 результаты считаю тся дос товерн ы м и . К ром е того, возмож но появление полос, характерны х для core ан ти генов (р39, р42), располож енны х рядом с зоной разм ещ ения полосы gp41. Важ но н е перепу т а т ь эти полосы с полосой gp41 (поверхностны м антигеном ). А н ти гены gp41, gpl20, gpl60 м огут п р оя вл я ться диф ф узны м и (разм ы ты м и ) полосам и. Д олж на п роявиться полоса, соответствую щ ая нанесенному н а стрип пептиду В И Ч -2. 3 . К +сл: слабополож ительны й к он трол ь необходим дл я определения чувствительности набора. Н а стрипе с к он трольн ы м слабополож ительны м образцом долж ны п роявиться полосы р24 и/или gp41 и gpl20/gpl60. М огут п роявиться другие сопутствую щ ие слабы е п олосы . И нтенсив н ость ок р аш и ван и я полос - слабая. 4 . Н а всех стрипах, куда вносились образцы сы вороток (п лазм ы ) и л и к он трол ей , долж на присутствовать ч етк ая полоса ан ти -IgG - ч ел овек а (внутренний к онтроль внесения сы воротки), к оторая позволяет судить о п р ави л ьн ом соблю дении протокола ан али за. 9 . УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ РЕАКЦИИ Н аличие и л и отсутствие ан ти тел к антигенам В И Ч -1 и В И Ч -2 в исследуемом образце определяю т сравнением каж дого нитроцеллю лозного стрипа с п ар ал л ел ьн о п оставленны м и стрипам и контролей (полож ительного, слабополож ительного и отрицательного). Внимание: П ронум ерованны й конец стрипа долж ен располагаться снизу, то есть полосы gpl20/gpl60 будут располож ены н а противополож ном к он ц е стр и п а. О сновные антигены ВИ Ч-1 М О Г У Т бы ть идентифицированы как; G AG P O L ENV А н т и ге н ы ядраЭ нд о н укл е азн ы е полим еразны е а н ти ге н ыП о в е р х н о с тн ы е а н ти ге н ы р 1 7 ,р 2 4 ,р 5 5 р 3 1 , р 5 1 , р 6 6 g p 4 1 , g p l i o , g p l6 0 В процессе интерпретации результатов тестирований необходимо в ы п ол н и ть следую щ ие условия: 1 . У бедиться в том , что на стрипах п роявились контрольн ы е полосы вн е сен и я сы воротк и , т.е. полоса внутреннего к он трол я (анти-IgG человека). 7