Набор реагентов для определения активности аланинаминотрансферазы в сыворотке и плазме крови динитрофенилгидразиновым методом (ТРАНСАМИНАЗА-АЛТ-НОВО) по ТУ 9398-283-23548172-02 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- УТВЕРЖДЕНА «УТВЕРЖДАЮ» Приказом Росздравнадзора Генеральный директор от 20 __г. № ______ ЗАО «1^ктор-Бест» М.Д. Хусаинов 2012 г. ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для определения активности аланинаминотрансферазы в сыворотке и плазме крови динитрофенилгидразиновым методом (ТРАНСАМИНАЗА-АЛТ-НОВО) 1. НАЗНАЧЕНИЕ 1.1. Набор реагентов ТРАНСАМИНАЗА-АЛТ-НОВО предназначен ^ля определения активности аланинаминотрансферазы (АЛТ) в сыворотке и плазме крови человека унифици рованном методом Райтмана-Френкеля в клинико-диагностических и биохимических лабо раториях и научно-исследовательской практике. 1.2. Набор рассчитан на проведение 400 определений при расходе 0,25 мл реагента 1 на одно определение. 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1. Принцип метода В результате реакции переаминирования, происходящей под действием аланинамино трансферазы, образуется глутаминовая и щавелевоуксусная кислоты (последняя спонтанно превращается в пировиноградную). Определение активности основано на измерении оптиче ской плотности при длине волны 490 (490-540) нм окрашенных в щелочной среде 2,4- динитрофенилгидразонов глутаминовой и пировиноградных кислот, причем гидразон по следней обладает гораздо более высокой оптической плотностью. Концентрация образовав шегося гидразона пировиноградной кислоты пропорциональна активности АЛТ. И н с т р у к ц и я с о с т а в л е н а с о т р у д н и к а м и З А О « В е к т о р -Б е с т » : н а ч . о т д е л а , к .б .н . Л . В . Г а е в о й , н а ч . у ч а с т к а Е .А . К у р б а т о в о й . --- стр. 2 --- 2.2. Состав набора В состав набора входят: - реагент 1 - субстрат АЛТ (L-аланиновая кислота, 0,1 моль/л; а-кетоглутаровая кис лота, 2 ммоль/л в 0,1 моль/л фосфатном буфере; pH 7,4±0,1; азид натрия, 0,03 % ); готовый к использованию - 4 флакона (по 25 мл); - реагент 2 - 2,4-динитрофенилгидразин (1 ммоль/л в 1 моль/л соляной кислоте); го товый к использованию - 1 флакон (100 мл); - реагент 3 - гидроокись натрия, 4 моль/л - 1 флакон (100 мл); - калибратор - натрий пировинограднокислый (1,5 ммоль/л в 0 ,1 моль/л фосфатном буфере; pH 7,4±0,1); готовый к использованию - 1 флакон (5,0 мл). Конечная концентрация реагента 3 в рабочем растворе - 0,4 моль/л. 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1. Линейность. Линейная область определения активности аланинаминотрансферазы - в диапазоне от 10 до 70 Е/л. Отклонение от «линейности» - не более 10%. 3.2. Чувствительность определения - не более 7 Е/л. 3.3. Коэффициент вариации результатов измерений - не более 10%. ф 3.4. Нормальные величины активности АЛТ в сыворотке крови у мужчин и женщин в возрасте от 20 до 50 лет - не более 11,3 Е/л [(0,68 ммоль/(л х ч)]. 3.5. Рекомендуется в каждой лаборатории при использовании набора уточнить диапа зон нормальных величин активности АЛТ для обследуемого контингента людей. 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 1 (ГОСТ Р 51609-2000). 4.2. Реагент 3 содержит гидроокись натрия при работе с ним и его рабочим раствором не следует допускать их попадания на кожу; при попадании на кожу следует промыть пора жённое место проточной водой. 4.3. При работе с исследуемыми образцами следует соблюдать меры предосторожно сти, принятые при работе с потенциально инфекционным мaтepиaJюм. Основные правила работы изложены в «Инструкции по мерам профилактики распространения инфекционных заболеваний при работе в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилакти ческих учреждений», утвержденной Минздравом СССР 17 февраля 1991 г. и методических указаниях МУ-287-113-00. 4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы сыворотки, плазмы крови человека следует рассматривать как по- --- стр. 3 --- тенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, ви рус гепатита или любой другой возбудитель вирусных инфекций. 5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ: - Спектрофотометр (длина волны 490 нм) или фотоэлектроколориметр (интервал длин волн 490 - 540 нм), кювета с длиной оптического пути 1 см; -термостат водяной, поддерживающий температуру +37±0,5 °С; - пипетки полуавтоматические одноканальные со сменными наконечниками, позво ляющие отбирать объёмы жидкости от 25 до 5000 мкл; - колба мерная вместимостью 1000 мл; - пробирки стеклянные вместимостью 10-15 мл; - перчатки резиновые или пластиковые; - физиологический раствор (0,9% NaCl); - вода дистиллированная. 6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ Негемолизированная сыворотка или плазма крови. Сыворотки можно хранить при температуре +2-8 °С не более 3 сут; активность АЛТ снижается после 3-х дней хранения при температуре +2-8 °С на 10%. 7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА 7.1. Приготовление рабочего раствора реагента 3 Содержимое флакона с реагентом 3 количественно перенести в мерную колбу вме стимостью 1000 мл. Объём колбы довести до метки дистиллированной водой и перемешать. Рабочий раствор реагента 3 можно хранить в плотно закрытом виде при комнатной температуре (+18-25°С) не более 6 месяцев. При появлении белого рыхлого осадка раствор не использовать! 7.2. Построение калибровочного графика 7.2.1. В пробирки внести калибратор, реагент 1 и дистиллированную воду в соответ ствии с таблицей 1. Раствор тщательно перемешать и добавить 0,5 мл реагента 2, перемешать и выдержать при комнатной температуре в течение 20 мин, после чего добавить 5,0 мл рабо чего раствора реагента 3, оставить на 10 мин при комнатной температуре для развития окраски. 7.2.2. Измерить оптическую плотность проб против дистиллированной воды при длине волны 490 (490-540) нм. --- стр. 4 --- Таблица 1 № про бирки Калибра тор, мл Вода ди стиллиро ванная, мл Реагент 1, мл Активность АЛТ Е/л ммоль/(лхч) мккат/л 1 0,10 0,50 0,025 0,10 0,475 6,25 0,37 0,103 0,05 0,10 0,45 12,50 0,75 0,209 0,10 0,10 0,40 25,0 1,50 0,417 0,15 0,10 0,30 50,0 3,00 0,834 0,30 0,10 0,20 75,0 4,25 1,182 7.2.3. Калибровочный график построить, откладывая по оси ординат разность оптиче ских плотностей опытных и контрольной (холостой) пробы (пробирка 0), а по оси абсцисс - соответствующие им значения активности АЛТ, используя данные графы 5 таблицы 1. Правильность определения активности АЛТ зависит от тщательности построения ка либровочного графика. Примечание. Для перевода единиц активности АЛТ Е/л в ммоль/(лхч) и мккат/л необ ходимо найденное по калибровочному графику значение активности разделить на коэффи циенты 16,67 и 60,68, соответственно. 7.3. Компоненты реакционной смеси для определения активности АЛТ внести в про бирки в количествах, указанных в таблице 2. Таблица 2 Отмерить (мл) Опытная проба Контрольная (холостая) проба Конечный объём Конечный объём 3,05 1,22 3,05 1,22 Реагент 1 0,25 0,10 0,25 0,10 Выдержать при температуре + 37 °С в течение 5 мин Сыворотка или плазма крови 0,05 0,02 — Дистиллированная вода — — 0,05 0,02 Перемешать и выдержать точно 60 мин при температуре + 37 °С Реагент 2 0,25 0,10 0,25 0,10 Перемешать и выдержать в течение 20 мин при комнатной температу ре (+18-25 °С) Реагент 3 (рабочий раствор реа гента) 2,50 1,00 2,50 1,00 Тщательно перемешать, выдержать в течение 10 мин при комнатной температуре