Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК вируса Эпштейна-Барр (ЕВV) в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией «АмплиСенс® EBV-скрин/монитор-FL» по ТУ 9398-086-01897593-2012 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2010/09503 от 16.12.2010 · класс риска 2б

Производитель: ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора (Россия)

Вид изделия: Вирус Эпштейна-Барр нуклеиновая кислота ИВД, набор, анализ нуклеиновых кислот

В госконтрактах 44-ФЗ: 78 контрактов, медианная цена за единицу 24 611 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДЕНА 
Приказом Р о с з д р а в н а д з о р а  
№от
УТВЕРЖ ДАЮ
Д иректор Ф едерального
бю дж етного учреж дения науки 
« Ц ен тр альн ы й  научно-
и ссл ед о в ател ь ск и й  институт 
эп и д ем и ологи и » Ф едеральной 
служ бы  по н адзору в с ф е р е  
потребителей и 
"  ' )луч 1^  ч еловека
П о кро веки й 
N:  Х <  ) 2012 г.
И Н С Т Р У К Ц И Я
по п р и м е н е н и ю  н а б о р а  р е а ге н т о в 
д л я  в ы я в л е н и я  и к о л и ч е с т в е н н о го  о п р е д е л е н и я 
Ф  Д Н К  в и р у с а  Э п ш т е й н а -Б а р р  ( E B V ) в к л и н и ч е с к о м  м а т е р и а л е 
м е т о д о м  п о л и м е р а з н о й  ц е п н о й  р е а к ц и и  (П Ц Р ) с 
ги б р и д и з а ц и о н н о -ф л у о р е с ц е н т н о й  д е т е к ц и е й
« А м п л и С е н с ®  £ В и - с к р и н / м о н и т о р - Р Ь »
АмплиСенс’
m l
Федеральное бюджетное учреждение н ауки 
«Центральный научно-исследовательский 
инст и т у т  эпидемиологии»,
Российская Федерация, 1 1 1 1 2 3 ,
город Москва, улица Новогиреевская, дом За IVD


--- стр. 2 ---
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.......................................................................................................... 3
НАЗНАЧЕНИЕ..............................................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА................................................................................................................... 3
ФОРМАТЫ И ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ..................................................4
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ................................................................................. 5
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ.............................................................................................. 5
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ..................................................7
ВЗЯТИЕ. ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА.... 8
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ ДНК ............................8
ФОРМАТ FRT.............................................................................................................................10
СОСТАВ......................................................................................................................................10
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ................................................................................11
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ.......................................................11
ПРОВЕДЕНИЕ АМПЛИФИКАЦИИ С ДЕТЕКЦИЕЙ В  РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО
ВРЕМЕНИ».................................................................................................................................11
А. Подготовка пробирок для амплификации....................................................................11
Б. Проведение амплификации с детекцией в  режиме «реального времени»........13
АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ................................................................. 14
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ .....................20
ПРИЛОЖЕНИЕ 1. Схема приготовления реакционных смесей ......................................21
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ..........................................22
ОГЛАВЛЕНИЕ


--- стр. 3 ---
с п и с о к СОКРАЩЕНИЙ
В  настоящей инструкции применяются следующие сокращения и  обозначения:
ВКО STI-87 -  экзогенный внутренний контрольный образец
ВКО Glob -  эндогенный внутренний контрольный образец
К+ -  положительный контроль ПЦР
К- -  отрицательный контроль ПЦР
ОК -  отрицательный контрол экстракции
ОКО -  отрицательный контрольный образец
ПКО -  положительный контрольный образец
ПК -  положительный контроль экстракции
ПЦР -  полимеразная цепная реакция
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
-  Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный 
научно-исследовательский институт эпидемиологии» 
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав 
потребителей и благополучия человека
E B V -  вирус Эпштейна-Барр
FRT -  флуоресцентная детекция в  режиме «реального времени»
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «АмплиСенс® £Б\Лскрин/монитор-РЬ» предназначен для  
выявления и количественного определения ДНК вируса Эпштейна-Барр {E B V ) путем 
амплификации специфического фрагмента ДНК вируса методом ПЦР с  
гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации.  
Материалом для проведения ПЦР служат пробы ДНК, выделенные из плазмы  
периферической крови, амниотической жидкости, спинномозговой жидкости (ликвора), 
слюны, смывов и мазков из ротоглотки, бронхоальвеолярного лаважа, цельной крови, 
лейкоцитов крови, биоптатов внутренних органов).
ВНИМАНИЕ! Результаты ПЦР-исследования учитываются в  комплексной  
диагностике заболевания^
ПРИНЦИП МЕТОДА
Выявление E B V методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с  
гибридизационно-флуоресцентной детекцией включает в  себя три этапа: экстракцию 
ДНК из образцов клинического материала, амплификацию участка ДНК данного  
микроорганизма и  гибридизационно-флуоресцентную детекцию, которая  
производится непосредственно в  ходе ПЦР. Экстракция ДНК из плазмы  
периферической крови, амниотической жидкости, спинномозговой жидкости (ликвора), 
слюны, смывов и  мазков из ротоглотки и бронхоальвеолярный лаважа проводится в 
присутствии внутреннего контрольного образца (ВКО STI-87), который позволяет
' в  с о о т в етствии с  директивой Европейского Союза 9 8 / 7 9 / Е С .


--- стр. 4 ---
контролировать выполнение процедуры исследования для каждого образца. При  
экстракции ДНК из клинического материала, содержащего клетки, происходит  
амплификация участка ДНК генома человека (эндогенный внутренний контроль).  
Эндогенный внутренний контроль (ВКО Glob) позволяет не только контролировать 
этапы ПЦР-исследования (экстракция ДНК и  проведение ПЦР), но и  оценивать  
адекватность взятия материала и его хранения. Затем с полученными пробами ДНК 
проводится реакция амплификации участка ДНК E B V при помощи специфичных к 
этому участку ДНК праймеров и фермента Taq-полимеразы. В составе реакционной 
смеси присутствуют флуоресцентно-меченые олигонуклеотидные зонды, которые  
гибридизуются с комплементарным участком амплифицируемой ДНК-мишени, в  
результате чего происходит нарастание интенсивности флуоресценции. Это  
позволяет регистрировать накопление специфического продукта амплификации  
путем измерения интенсивности флуоресцентного сигнала. Детекция  
флуоресцентного сигнала осуществляется непосредственно в  ходе ПЦР с помощью 
амплификатора с системой детекции флуоресцентного сигнала в  режиме  
«реального времени».
ФОРМАТЫ И ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ  
Набор реагентов выпускается в 1  формате.
Формат FRT
Набор реагентов выпускается в  3 формах комплектации:
Форма 1  включает комплекты реагентов «РИБО-преп» вариант 100, «ПЦР-комплект» 
вариант FRT-100 F;
Форма 2 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F.
Форма 3 включает наборы реагентов оптом, расфасованные по отдельным  
реагентам, с маркировкой реагентов на их оптовой фасовке.
Форма комплектации 1  предназначена для проведения полного ПЦР-исследования, 
включающего экстракцию ДНК, амплификацию и  количественное определение ДНК 
вируса Эпштейна-Барр (E B V ) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в  
режиме «реального времени».
Форма комплектации 2 предназначена для амплификации и  количественного  
определения ДНК вируса Эпштейна-Барр (E B V ) с гибридизационно-флуоресцентной 
детекцией в режиме «реального времени». Для проведения полного ПЦР-  
исследования необходимо использовать комплекты реагентов для экстракции ДНК, 
рекомендованные ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.


--- стр. 5 ---
Форма комплектации 3 предназначена для производственных целей для  
последующей маркировки на языке заказчика и  комплектации по наборам. 
ВНИМАНИЕ! Форма комплектации 3 используется только в  соответствии с  
регламентом, утвержденным ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ  
Аналитическая чувствительность
Линейный диапазон измерения набора реагентов: 500 -  10 000 000 копий/мл.  
Если результат больше, чем 10 000 О О О  копий/мл, то он выдается как р е з у л ь т а т 
бо лее 10 ООО ООО ко п и й  Д Н К  E B V /мл. Если результат меньше чем, 500 копий/мл, то 
он выдается как р е з у л ь т а т  м е н е е  500 коп ий Д Н К  E B V /мл.
Плазма периферической крови, 
амниотическая жидкость, 
спинномозговая жидкость (ликвор), 
слюна, см ы вы  и  мазки из ротоглотки, 
бронхоальвеолярный лаваж_______
РИБО-преп
fe ■  :7.;
Аналитическая
|чувств‘ йтЫьность
400 копий/мл
Цельная кровь, лейкоциты крови, 
биоптаты внутренних органов РИБО-преп 5 копий ДНК E B V 
на 1 0 ®  клеток
Аналитическая специфичность
Набор реагентов обнаруживает фрагмент ДНК вируса Эпштейна-Барр {E B V ). 
Специфическая активность набора реагентов доказана при исследовании панели  
QCMD, а также при исследовании клинического материала с последующим  
подтверждением результата методом секвенирования фрагментов амплификации.
Показано отсутствие активности компонентов набора в отношении ДНК других  
вирусов (цитомегаловирус человека, вирус простого герпеса 1  и  2 типа, вирус  
герпеса 6 и  8 типа, вирус Варицелла-Зостер, Parvo viru s В19 и др.), бактериальных  
возбудителей {Strep to co ccu s pyogenes, Stap h ylo coccu s aureus, Streptococcus  
agalactiae  и  др.) и  ДНК человека.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Работа должна проводиться в  лаборатории, выполняющей молекулярно­
биологические (ПЦР) исследования кпинического материала на наличие  
возбудителей инфекционных болезней, с соблюдением санитарно-эпидемических  
правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп  
патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней», СанПиН  
2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с


--- стр. 6 ---
медицинскими отходами» и методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация  
работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при 
работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности».
При работе всегда следует выполнять следующие требования:
- Следует рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные,  
организовывать работу и  хранение в  соответствии с СП 1.3.2322-08  
«Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности  
(опасности) и возбудителями паразитарных болезней».
- Убирать и дезинфицировать разлитые образцы или реактивы, используя  
дезинфицирующие средства в  соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность  
работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и  
возбудителями паразитарных болезней».
- Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. Анализ проводится в  
отдельных помещениях (зонах). Работу следует начинать в  Зоне Экстракции, 
продолжать в  Зоне Амплификации и Детекции. Не возвращать образцы,  
оборудование и реактивы в зону, в  которой была проведена предыдущая стадия 
процесса.
- Удалять неиспользованные реактивы в  соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10  
«Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими  
отходами».
ВНИМАНИЕ! При удалении отходов после амплификации (пробирок, содержащих  
продукты ПЦР) недопустимо открывание пробирок и  разбрызгивание содержимого, 
поскольку это может привести к контаминации продуктами ПЦР лабораторной зоны, 
оборудования и  реагентов.
- Применять набор строго по назначению, согласно данной инструкции.
- Допускать к работе с набором только специально обученный персонал.
- Не использовать набор по истечении срока годности.
- Использовать одноразовые перчатки, лабораторные халаты, защищать глаза во 
время работы с образцами и реактивами. Тщательно вымыть руки по окончании 
работы.
- Избегать контакта с кожей, глазами и слизистой оболочкой. При контакте  
немедленно промыть пораженное место водой и обратиться за медицинской  
помощью.
- Листы безопасности материалов (MSDS -  material safety data sheet) доступны по 
запросу.