Набор реагентов для выявления РНК вируса гриппа А (Influenza virus A) и идентификации субтипа H5N1 в биологическом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией "АмплиСенс® Influenza virus A H5N1-FL" по ТУ 9398-047-01897593-2009 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 11 --- 5. Вортекс (например, «ТЭТА-2», фирмы «Биоком», Россия). 6. Отдельный набор автоматических пипеток переменного объема (например, фирмы «Ленпипет», Россия). 7. Штативы для микропробирок объемом 0,5 и 0,2 мл (например, фирмы «Хеликон», Рос сия). 8. Одноразовые полипропиленовые микропробирки для ПЦР на 0,5 мл (например, фирмы «Axygen», США). 9. Одноразовые наконечники для микропипеток в штативах (например, фирмы «Хели кон», Россия). 10. Одноразовые наконечники с аэрозольным барьером до 100 и 200 мкл (например, фир мы «Axygen», США) 11. Холодильник от 2 до 8 °С; морозильник на минус 18+2 °С для хранения выделенной ДНК. 12. Отдельный халат и одноразовые перчатки. 13. Емкость для сброса наконечников. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА. ЭТАП 1. ВЫДЕЛЕНИЕ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА. (проводится в ЗОНЕ 1 - помещении для обработки исследуемого материала). А. Выделение РНК из подготовленного материала. Порядок работы. 1. Лизирующий раствор и раствор для отмывки 1 (если они хранились при темпера туре от 2 до 8 °С) прогреть при температуре от 60 до 65 °С до полного растворения кри сталлов. 2. Подготовить необходимое количество одноразовых пробирок объемом 1,5 мл (вклю чая отрицательный контроль выделения). Внести в каждую пробирку 450 мкл лизи рующего раствора, 10 мкл ВКО и 50 мкл ОКО. Промаркировать пробирки. 3. В пробирки с лизирующим раствором, ВКО и ОКО внести по 50 мкл исследуемого образца, используя отдельные наконечники с аэрозольным барьером, перемешать пи- петированием. Инкубировать при комнатной температуре 3-5 мин. 4. В пробирку отрицательного контроля (ОК) выделения внести 50 мкл ОКО. 5. Плотно закрытые пробы перемешать на вортексе и проценрифугировать в течение 5 с при 5 тыс об/мин на микроцентрифуге для удаления капель со внутренней поверхности крышки пробирки. Если в пробирках находятся взвешенные частицы (не растворив шийся полностью материал), центрифугировать при 10 тыс об/мин в течение 1 мин на микроцентрифуге и перенести надосадочную жидкость в другие пробирки. --- стр. 12 --- 10 1 6. Тщательно ресуспендировать сорбент на вортексе. В каждую пробирку отдельным на конечником добавить по 25 мкл ресуспендированного сорбента. Перемешать на вор тексе, поставить в штатив на 1 мин, еще раз перемешать и оставить на 5 мин. 7. Процентрифугировать пробирки для осаждения сорбента при 10 тыс об/мин в течение 30 с на микроцентрифуге. Удалить надосадочную жидкость, используя вакуумный от- сасыватель и отдельный наконечник для каждой пробы. 8. Добавить в пробирки по 400 мкл раствора для отмывки 1. Перемешать на вортексе до полного ресуспендирования сорбента, процентрифугировать 30 с при 10 тыс об/мин на микроцентрифуге. Удалить надосадочную жидкость, используя вакуумный отсасы- ватель и отдельный наконечник для каждой пробы. 9. Добавить в пробирки по 500 мкл раствора для отмывки 3. Тщательно ресуспенди ровать сорбент на вортексе. Проценрифугировать 30 с при 10 тыс об/мин на микроцен трифуге. Удалить надосадочную жидкость, используя вакуумный отсасыватель и от дельный наконечник для каждой пробы. 10. Повторить отмывку раствором для отмывки 3, следуя пункту 9. 11. Добавить в пробирки по 400 мкл раствора для отмывки 4. Тщательно ресуспенди ровать сорбент на вортексе, процентрифугировать 30 с при 10 тыс об/мин на микроцен трифуге. Полностью удалить надосадочную жидкость из каждой пробирки отдельным наконечником, используя вакуумный отсасыватель. 12. Поместить пробирки в термостат при температуре 60 °С на 5-10 мин для подсушива ния сорбента. При этом крышки пробирок должны быть открыты. 13. В пробирки с высушенным сорбентом добавить по 40 мкл РНК-элюента, используя наконечник с аэрозольным барьером (имеющий специальную маркировку «RNase-free», «DNase-free»). Перемешать на вортексе. Поместить в термостат при температуре 60 °С на 2-3 мин. Перемешать на вортексе и процентрифугировать про бирки на максимальных оборотах микроцентрифуги (12-13 тыс об/мин) в течение 1 мин. Надосадочная жидкость содержит очищенную РНК. Пробы готовы к постановке реакции обратной транскрипции и ПЦР. Реакцию обратной транскрипции следует проводить сразу после получения РНК- пробы. Отбирать раствор РНК для реакции нужно очень осторожно, не захватывая сор бент. Если сорбент взмутился, необходимо осадить его на максимальных оборотах мик роцентрифуги (12-13 тыс об/мин) в течение 1 мин. Очищенная РНК может храниться до 4 ч при температуре от 2 до 8 °С. Для длитель ного хранения препарата, необходимо, не захватывая сорбент, отобрать раствор РНК, пе- V ренести в стерильную прабирку и хранить при температуре не выше минус 68 °С в т ече- wwe г о д д . --- стр. 13 --- ЭТАП 2. ПОСТАНОВКА РЕАКЦИИ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ И ПРОВЕДЕ НИЕ ПЦР. Проводится в ЗОНЕ 2 - комнате для подготовки и проведения амплификации (ПЦР). Постановка реакции обратной транскрипции . (Общий объем реакции - 20 мкл, объем РНК-пробы - 10 мкл). Порядок работы: Внимание! При работе с РНК необходимо использовать только одноразовые стерильные пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку «RNase-free», «DNase-free». 1. Подготовить необходимое количество микропробирок на 0,5 (0,2) мл. 2. Приготовить реакционную смесь на 12 реакций. Для этого в пробирку с лиофилизиро- ванным DTT добавить 125 мкл RT-mix и тщательно перемешать на вортексе, осадить капли с крышки пробирки. 3. К полученному раствору добавить 6 мкл ревертазы, пипетировать 5 раз, осторожно перемешать на вортексе, осадить капли с крышки пробирки кратковременным центри фугированием. 4. Внести в микропробирки по 10 мкл готовой реакционной смеси. 5. Используя наконечник с барьером, добавить 10 мкл РНК-пробы в пробирку с реак ционной смесью. Осторожно перемешать пипетированием. 6. Поставить пробирки в амплификатор (термостат) при температуре 37 °С на 30 мин. 7. Полученную в реакции обратной транскрипции кДНК для последующей постановки ПЦР развести в 2 раза ДНК-буфером (к 20 мкл кДНК отдельным наконечником с аэро зольным барьером добавить 20 мкл ДНК-буфера, аккуратно перемешать пипетировани ем 10 раз). Полученный препарат кДНК можно хранить при температуре не выше минус 16 °С в течение 1 нед или при температуре не выше минус 68 °С в течение 1 года. Постановка ПЦР с использованием комплекта «АмплиСенс» вариант FEP (с де текцией результатов ПЦР путем измерения флуоресцентного сигнала по «конечной точке») См. Приложения 1, 2. Постановка ПЦР с использованием набора «АмплиСенс» вариант FRT (с детек цией результатов ПЦР путем измерения флуоресцентного сигнала в режиме «реаль ного времени») См. Приложения 3, 4, 5. --- стр. 14 --- ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЕ. Обеззараживание биоматериала и реагентов необходимо проводить на каждой ста дии отдельно, помещая одноразовую пластиковую посуду (пробирки, наконечники) в кон тейнеры, содержащие 0,2 % раствор ДП-2Т. СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ. Срок годности. 6 месяцев. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению не подлежит. Транспортирование. В соответствии с СП 3.3.2.1248-03; при температуре от 2 до 8 °С в течение 5 сут. При получении разукомплектовать. Хранение. В соответствии с СП 3.3.3.1248-03; комплекты «РИБО-сорб» (кроме РНК- элюента) и «АмплиСенс» - при температуре от 2 до 8 °С. Комплект «РЕВЕРТА-L» и РНК-элюент (из комплекта «РИБО-сорб») - при температуре не выше минус 16 °С. Условия отпуска. Для лечебно-профилактических и санитарно-профилактических учре ждений. Рекламации на качество набора реагентов «АмплиСенс Influenza virus A H5N1- FL» направлять в ФГУН ГИСК им. Л.А. Тарасевича Роспотребнадзора (119002 г. Москва, пер. Сивцев Вражек, д. 41, тел. (495) 241-39-22, факс (495) 241-92-38), а также на предпри ятие-изготовитель: ФГУН «ЦНИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора (111123 г. Москва, ул. Новогиреевская, д. За, тел. (495) 305-54-24, факс (495) 305-54-23), e-mail: obtk@pcr.ru.) Директор ФГУН «ЦНИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора . ГОкровский Руководитель Государственных испытаний Зав.лабораторией биохимии и биотехнологии ФГУН ГИСК им.Тарасевича Роспотребнадзора