Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК Streptococcus agalactiae в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией "АмплиСенс® Streptococcus agalactiae-скрин-титр-FL" по ТУ 9398-187-01897593-2011 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
П р и к азо м Р о с з д р а в н а д з о р а
о т №
У Т В Е Р Ж Д А Ю
Д и р е к т о р Ф е д е р а л ь н о г о
б ю д ж е т н о г о у ч р е ж д е н и я науки
« Ц е н т р а л ь н ы й н ау ч н о -
и с с л е д о в а т е л ь с к и й и н сти тут
э п и д е м и о л о г и и » Ф е д е р а л ь н о й
с л у ж б ы п о н а д з о р у в с ф е р е
з а щ и т ы п р а в п о т р е б и т е л е й и
б л а г о п о л у ч и я ч е л о в е к а
И. П окровский
2 0 1 1г.
И Н С Т Р У К Ц И Я
по применению набора реагентов
для выявления и количественного определения
ДНК Streptococcus agalactiae в клиническом материале
методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией
« А м п л и С е н с ® S t r e p t o c o c c u s a g a l a c t i a e -
с к р и н - т и т р - F L »
А м п л и С е н с ^
Федеральное бюджетное учреждение науки
«Центральный научно-исследовательский
институт эпидемиологии»,
Российская Федерация, 111123,
город Москва, улица Новогиреевская, дом За IVD
--- стр. 2 ---
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ...................................................................................................... 3
НАЗНАЧЕНИЕ..........................................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА...............................................................................................................3
ФОРМАТЫ И ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ .............................................. 4
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ............................................................................. 5
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ.......................................................................................... 5
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ.............................................. 7
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА8
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАЦИИ ДНК/РНК ..................8
ФОРМАТ FRT...........................................................................................................................9
СОСТАВ................................................................................................................................... 9
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ ........................................................................... 10
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ................................................... 11
ПРОВЕДЕНИЕ АМПЛИФИКАЦИИ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО
ВРЕМЕНИ»............................................................................................................................12
А. Подготовка пробирок для амплификации...................................................................12
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени»
.......13
АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ .............................................................14
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ ..................20
ПРИЛОЖЕНИЕ 1. Схема приготовления реакционных смесей...................................21
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ.......................................22
ОГЛАВЛЕНИЕ
--- стр. 3 ---
с п и с о к СОКРАЩЕНИИ
В настоящей инструкции применяются следующие сокращения и обозначения:
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ПКО - положительный контрольный образец
ВКО STI-87 - экзогенный внутренний контрольный образец
ВКО Glob - эндогенный внутренний контрольный образец
ОКО - отрицательный контрольный образец
К+ - положительный контроль ПЦР
К- - отрицательный контроль ПЦР
ОК - отрицательный контроль экстракции
ПК - положительный контроль экстракции
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
- Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный
научно-исследовательский институт эпидемиологии»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека
___________________
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «АмплиСенс® S tr e p to c o c c u s aga/acf/ae-CKpMH-TMTp-FL»
предназначен для выявления и количественного определения ДНК Streptococcus
agalactiae в клиническом материале (плазма крови, спинномозговая жидкость
(СМЖ), мазок из ротоглотки, соскоб эпителиальных клеток с боковых стенок
влагалища, аноректальный мазок) методом ПЦР с гибридизационно-
флуоресцентной детекцией продуктов амплификации.
ВНИМАНИЕ! Результаты ПЦР-исследования учитываются в комплексной
диагностике заболевания^
ПРИНЦИП МЕТОДА
Выявление ДНК при помощи полимеразной цепной реакции основано на
амплификации участка ДНК микроорганизма при помощи специфичных к данному
участку ДНК праймеров. Наличие в реакционной смеси олигонуклеотидных зондов,
меченых флуоресцентными красителями, позволяет проводить гибридизационно-
флуоресцентную детекцию продукта амплификации без открывания пробирок
после ПЦР-. Регистрация флуоресцентного сигнала проводится непосредственно в
ходе ПЦР с помощью амплификатора с системой детекции в режиме «реального
времени». Экстракция ДНК из бесклеточных биологических сред (плазмы крови,
СМЖ) проводится в присутствии внутреннего контрольного образца (ВКО STI-87),
который позволяет контролировать выполнение процедуры исследования для
каждого образца. При экстракции ДНК из клинического материала, содержащего
клетки, происходит амплификация участка ДНК генома человека (эндогенный
в соответствии с Директивой Европейского Союза 98/79/ЕС,
--- стр. 4 ---
внутренний контроль). Эндогенный внутренний контроль (ВКО Glob) позволяет не
только контролировать этапы ПЦР-анализа (экстракцию ДНК и проведение ПЦР),
но и оценивать адекватность забора материала и его хранения. В наборе реагентов
применяется «горячий старт», что значительно снижает количество
неспецифических реакций. «Горячий старт» обеспечивается использованием
! химически модифицированной Тад-полимеразы. Химически модифицированная
полимераза (TaqF) активируется при прогреве реакционной смеси при 95 °С в
течение 15 мин.
ФОРМАТЫ И ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ
Набор реагентов выпускается в одном формате.
Формат FRT
ф Набор реагентов выпускается в 3 формах комплектации:
Форма 1 включает комплекты реагентов «РИБО-преп» вариант 100, «ПЦР-комплект»
вариант FRT-100 F;
Форма 2 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F;
Форма 3 включает наборы реагентов оптом, расфасованные по отдельным
реагентам, с маркировкой реагентов на их оптовой фасовке.
Форма комплектации 1 предназначена для проведения полного ПЦР-
исследования, включающего экстракцию и амплификацию ДНК с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени».
Форма комплектации 2 предназначена для проведения амплификации ДНК с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени». Для
ф проведения полного ПЦР-исследования необходимо использовать комплекты
реагентов для экстракции ДНК/РНК, рекомендованные ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии Роспотребнадзора.
Форма комплектации 3 предназначена для производственных целей для
последующей маркировки на языке заказчика и комплектации по наборам.
ВНИМАНИЕ! Использование формы комплектации 3 производится только в
соответствии с регламентом, утвержденным ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора.
--- стр. 5 ---
г
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Аналитическая чувствительность
Вид
клинического
материала
Комплект для
экстракции
ДНК
Комплект для
амплификации и
детекции
Аналитическая
чувствительность,
копий/мл
Линейный
диапазон
измерения,
копий/мл
Плазма крови,
СМЖ, мазок из
ротоглотки, соскоб
эпителиальных
клеток с боковых
стенок влагалища,
аноректальный
мазок
«РИБО-преп» «ПЦР-комплект»
вариант FRT-100 F 3x10^ 1000-
1 0.000.000
Аналитическая специфичность
Набор реагентов обнаруживает фрагмент ДНК Streptococcus agalactiae.
Специфическая активность набора реагентов доказана при исследовании
бактериальных штаммов Streptococcus agalactiae, а также при исследовании
клинического материала с последующим подтверждением результатов методом
секвенирования фрагментов амплификации.
Показано отсутствие активности компонентов набора в отношении ДНК других
бактериальных возбудителей {Streptococcus p yog en es, Staphylococcus aureus,
N eisseria meningitidis, H aemophilus parainfluenzae. Listeria m onocitogenes, Klebsiella
pneum oniae и др.).
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно
биологические (ПЦР) исследования клинического материала на наличие
возбудителей инфекционных болезней, с соблюдением санитарно-эпидемических
правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп
патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней», СанПиН
2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с
медицинскими отходами» и методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация
работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот
при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности».
При работе всегда выполнять следующие требования:
- Следует рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные,
организовывать работу и хранение в соответствии с СП 1.3.2322-08
«Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности
--- стр. 6 ---
(опасности) и возбудителями паразитарных болезней».
- Убирать и дезинфицировать разлитые образцы или реактивы, используя
дезинфицирующие средства в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность
работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и
возбудителями паразитарных болезней».
- Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. Анализ проводится в
отдельных помещениях (зонах). Работу следует начинать в Зоне Экстракции,
продолжать в Зоне Амплификации и Детекции. Не возвращать образцы,
оборудование и реактивы в Зону, в которой была проведена предыдущая
стадия процесса.
- Удалять неиспользованные реактивы в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10
«Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими
отходами».
ВНИМАНИЕ! При удалении отходов после амплификации (пробирок, содержащих
продукты ПЦР) недопустимо открывание пробирок и разбрызгивание
содержимого, поскольку это может привести к контаминации продуктами ПЦР
лабораторной зоны, оборудования и реагентов.
- Применять набор строго по назначению, согласно данной инструкции.
- Допускать к работе с набором только специально обученный персонал.
- Не использовать набор по истечении срока годности.
- Использовать одноразовые перчатки, лабораторные халаты, защищать
глаза во время работы с образцами и реактивами. Тщательно вымыть руки
по окончании работы.
- Избегать контакта с кожей, глазами и слизистой оболочкой. При контакте
немедленно промыть пораженное место водой и обратиться за
медицинской помощью.
- Листы безопасности материалов (MSDS - material safety data sheet)
доступны по запросу.
--- стр. 18 ---
Ф О Р М А Т F R T
Таблица 3
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-исследования при
экстракции ДНК из мазков из ротоглотки, соскобов эпителиальных клеток с
боковы х стенок влагалища аноректальных мазков
Контроль
Контролируемый
этап ПЦР-
исследования
Результаты а м п л и ф и к а ц и и по каналу для ф л у о р о ф о р а
J O E
Качествен-
ный формат
Количествен-
ный формат
F A M
Качествен-
ный формат
Количествен-
ный формат
ОК Экстракция ДНК Значение
отсутствует
Значение
отсутствует
Значение
отсутствует
Значение
отсутствует
ПК Экстракция ДНК
Определено
значение
меньше
граничного
Значение
укладывается
в границы,
указанные во
вкладыше
Определено
значение
меньше
граничного
Определено
значение
меньше
граничного
К- ПЦР Значение
отсутствует
Значение
отсутствует
Значение
отсутствует
Значение
отсутствует
К+ ПЦР
Определено
значение
меньше
граничного
Определено
значение
меньше
граничного
К1 S /A G ,
K2SAG ПЦР
Определено
значение C tи
расчетная
концентрация
Определено
значение C tи
расчетная
концентрация
Для количественного теста расчет концентрации ДНК S tr e p to c o c c u s aga lactiae
на мл образца при экстракции из 100 мкл провести по формуле:
Расчет ная концент рация ДНК Streptococcus agalactiae х 100 = копии/мл.
В озм ож ны е ош ибии:
1. Если для пробы получен невалидный результат, требуется повторить ПЦР-
исследование соответствующего клинического образца.
2. Отсутствие положительного сигнала в калибраторах может свидетельствовать о
неправильно выбранной программе амплификации и о других ошибках,
допущенных на этапе постановки ПЦР. В таком случае необходимо провести ПЦР
еще раз для всех образцов.
3. Если в отрицательном контроле экстракции (ОК) по каналу для флуорофора РАМ
и/или JOE или в отрицательном контроле ПЦР (К-) по каналам для флуорофора
РАМ и/или JOE и/или ROX детектируется положительный сигнал, значит,
произошла контаминация реактивов или проб. В этом случае требуется повторить
анализ положительных проб, начиная с этапа экстракции, а также предпринять
меры по выявлению источника контаминации.
4. Для исследуемого образца зафиксирован положительный результат, при этом на
18
--- стр. 19 ---
Ф О Р М А Т F R T
графике флуоресценции отсутствует участок характерного экспоненциального
подъема (график представляет собой приблизительно прямую линию). Это может
свидетельствовать о неправильно заданном уровне пороговой линии или
параметров расчета базальной линии. Такой результат не должен рассматриваться
как положительный. Если он получен при правильном уровне пороговой линии,
требуется повторно провести ПЦР для этого образца.
19
--- стр. 20 ---
СРОК г о д н о с т и . УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 9 мес. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению не
подлежит. Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку годности,
указанному на этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не указано
иное.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до
8 °С не более 5 сут. При получении разукомплектовать в соответствии с указанными
температурами хранения.
Хранение. Набор реагентов хранить при температуре от 2 до 8 °С. ПЦР-смесь-1-FL
Streptococcus agalactiae, ПЦР-смесь-2-FRT и полимеразу (TaqF) хранить при
температуре не выше минус 16 °С. ПЦР-смесь-1-FL Streptococcu s agalactiae хранить
в защищенном от света месте.
Условия отпуска. Для лечебно-профилактических и санитарно-профилактических
учреждений.
Рекламации на качество набора реагентов «АмплиСенс® Streptococcus agalactiae-
скрин-титр-FL» направлять на предприятие-изготовитель ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии Роспотребнадзора (111123 г. Москва, ул. Новогиреевская, д. За) в
отдел по работе с рекламациями и организации обучения (тел. (495) 974-96-46, факс
(495) 916-18-18, e-mail: products@pcr.ru)®.
Заведующий НПЛ ОМДиЭ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора
Е.Н. Родионова
Зав. Лабораторией микробиологии
НИИАГ им.-Д.О.Отта 0 3 0 РАМН
д.м.н, профессор
А.М.Савичева
® Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету
потребителя на сайте: www.amplisens.ru.
20