Набор реагентов для выявления и количественного определения РНК вируса гепатита С методом ОТ-ПЦР в реальном времени (РеалБест ВГС ПЦР) по ТУ 9398-199-23548172-2009 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2010/07201 от 29.03.2010 · класс риска 3

Производитель: АО "Вектор-Бест" (Россия)

Вид изделия: Вирус гепатита С нуклеиновая кислота ИВД, набор, анализ нуклеиновых кислот

В госконтрактах 44-ФЗ: 430 контрактов, медианная цена за единицу 24 162 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
ф
ф
ф
УТВЕРЖДЕНА «УТВЕРЖДАЮ»
Приказом Росздравнадзора директор
от 2009 г. № /о ^ ^ 5 ^ § ^ ^ к т ^ -Б е с т »
// • «  ПV - -  -  '  •  П/\ J!^\\ _
^ М .Д . Хусаинов 
2009 г.
с к а '»
ИНСТРУКЦИЯ ^ ^
по применению набора реагентов 
для выявления и количественного определения 
РНК вируса гепатита С методом ОТ-ПЦР 
в реальном времени 
«РеалБест ВГС ПЦР»
(комплект 1)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «РеалБест ВГС ПЦР» комплект 1  предназначен для выявления и ко­
личественного определения РНК вируса гепатита С (ВГС) в сыворотке (плазме) крови мето­
дом, основанным на обратной транскрипции вирусной РНК с последующей амплификацией 
фрагмента кДНК в полимеразной цепной реакции (ОТ -  ПЦР) с гибридизационно-флуорес- 
центной детекцией продуктов ПЦР в реальном времени.
Набор может быть применён как для высокочувствительного скринирования донор­
ской крови, так и в клинической практике для диагностики гепатита С, определения вирус­
ной нагрузки и оценки эффективности противовирусной терапии.
Набор предназначен для применения с приборами «iQ iCycler», «iQ5 iCycler», 
«CFX96» (фирма Bio-Rad, США), ДТ-96 (ЗАО «НПФ ДНК-Технология», Россия) или их ана­
логами.
Выделение РНК вируса гепатита С (ВГС) из сыворотки (плазмы) крови проводится с 
помощью набора «РеалБест ДельтаМаг ВГВ/ВГС/ВИЧ».
Набор рассчитан на проведение анализа 96 образцов, включая контрольные.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип метода.
Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного специ­
фического фрагмента к ДНК (полученной методом обратной транскрипции из РНК ВГС), за-
Инст рущ ия сост авлена сот рудникам и ЗАО «Вектор-Бест»: Д ирект ором
п о производст ву Тк ачевы м  В.К. и  н а ч . от деления производст ва ПЦР наборов Т р ухи н ой  А .В .


--- стр. 2 ---
ключающегося в повторяющихся циклах: температурная денатурация, отжиг праймеров на 
комлементарные последовательности, достройка полинуклеотидных последовательностей с 
этих праймеров Тац-полимеразой.
В основе используемого метода регистрации лежит измерение уровня флуоресценции в 
каждом цикле ПЦР. Увеличение уровня флуоресценции происходит благодаря использова­
нию специфичного для данной кДНК гибридизанионного ДНК-зонда, который в ходе реак- 
ции связывается с одной из цепей ДНК, обеспечивая также дополнительную специфичность 
метода. ДНК-зонд содержит на 5’-конце флуоресцентный краситель, а на 3’-конце -  гаситель 
флуоресценции, значительно снижающий интенсивность флуоресценции. В ходе полимераз­
ного синтеза комплементарной цепи зонд расщепляется с 5’-конца, благодаря 5’-3’- 
нуклеазной активности Taq ДНК-полимеразы и происходит разобщение красителя и гасите­
ля, приводящее по мере накопления продукта реакции к возрастанию уровня флуоресценции. 
При этом измеряемая интенсивность флуоресценции зависит от количества образовавшихся 
специфических ампликонов и динамика нарастания уровня флуоресценции определяется ис­
ходным количеством кДНК в образце.
Достоверность анализа контролируется по наличию положительного результата в об­
разцах ПКО и СПКО, которые подвергаются процедуре выделения РНК вместе с анализи- 
руемыми биопробами.
Учет эффективности выделения РНК из образцов обеспечивается выделением РНК 
^  ВГС из клинических проб совместно с внутренним контрольным образцом (ВКО).
2.2. Состав набора:
-  готовая реакционная смесь для ОТ-ПЦР (ГРС), лиофилизированная -  96 пробирок;
-  слабый положительный контрольный образец (СПКО ВГВ/ВГС/ВИЧ), лиофилизиро- 
ванный -  1  фл.;
-  положительный контрольный образец (ПКО ВГС), лиофилизированный -  2 фл.;
-  калибровочный образец 1  (KOI ВГС), лиофилизированный -  1  фл.;
-  калибровочный образец 2 (К02 ВГС), лиофилизированный -  1  фл.;
-  раствор для восстановления контрольных образцов (РВК) -  2 флакона по 4 мл.
Набор дополнительно комплектуется: крышками для пробирок -  12 стрипов по 8 штук 
или плёнкой оптической -  3 листа.
Вним ание! ПКО, СПКО, KOI, К02 долж ны пройт и процедуру вы деления РНК с 
пом ощ ью  набора «РеалБест ДельтаМаг ВГВ/ВГС/ВИЧ» согласно и н ст рук ц и и  к  набо­
ру-
Ф


--- стр. 3 ---
ф
ф
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Специфичность анализа
Набор выявляет вирус гепатита С генотипов 1а, 1Ь, 2а, 2Ь, 2с, 2i, 3, 4, 5а, 6 независимо от 
субтипа. Образцы, содержащие РНК ВГС (выше предела обнаружения), определяются как 
положительные. В образцах, не содержащих РНК ВГС, результат анализа гарантированно (в 
100% образцах) должен быть отрицательным.
Чувствительность (предел обнаружения)
Набор гарантированно (в 100% образцов) выявляет РНК ВГС в концентрации не менее 
15 МЕ/мл при выделении РНК из 1  мл образца (или не менее 15 ME в пробе).
о
Диапазон определяемых концентраций -  от 100 до 10 ME РНК ВГС в 1  мл исследуемого 
образца.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Потенциальный риск применения набора -  класс 26 (ГОСТ Р 51609-2000).
4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с 
микроорганизмами II1-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных 
болезней».
4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы 
выделения ДНК/РНК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 1888-04 «Организация работы при 
исследовании методом ПЦР материала, инфицированного патогенными биологическими 
агентами III-IV групп патогенности».
4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки.
4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором пипеток пере­
менного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. Запре­
щается их перемещение между рабочими местами.
4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов ПЦР в режиме ре­
ального времени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для 
пипеток.
4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении разных 
образцов.
4.8. После окончания работ для предотвращения контаминации рабочие поверхности 
ламинарных боксов и лабораторных столов следует подвергнуть действию бактерицидных 
УФ ламп в течение 1  часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами 
дезинфицирующими средствами (такими, как: 0,2% раствор ДП-2Т; 1-3% раствор «Диабак»;
0,5% раствор «Лизафин»; 0,5-1% раствор «Мистраль»).
4 ^ ^


--- стр. 4 ---
ф
ф
ф
4.9. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфицирую­
щими средствами с последующей утилизацией.
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
-  амплификатор с флуоресцентной детекцией в реальном времени: «iQ iCycler», «iQ5 
iCycler», «CFX96» (фирма Bio-Rad, США), ДТ-96 (ЗАО «НПФ ДНК-Технология», Россия) 
или их аналог;
-  ПЦР-бокс или отдельный стол, освещаемый УФ-лампой («Циклотемп», фирма СП 
«РТС», Россия);
-  холодильник бытовой, поддерживающий температуру от 2 до 8 °С;
-  микроцентрифуга типа «Eppendorf MiniSpin» (фирма Eppendorf, Германия);
-  пипетки полуавтоматические (дозаторы механические) одноканальные с переменным 
или фиксированным объёмом, со сменными наконечниками (фирма Biohit, Финляндия);
-  перчатки медицинские одноразовые нестерильные неопудренные латексные или не- 
опреновые (перчатки «NeoTouch», фирма Ansell HealthCare, Германия);
-  одноразовые наконечники для пипеток с защитным фильтром /аэрозольным барье­
ром/ (фирма Biohit, Финляндия);
-  штативы для микропробирок вместимостью 1,5 мл и 0,25 мл (фирма Хеликон, Рос­
сия);
-  емкость для сброса наконечников.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Для анализа используются пробы выделенной РНК, полученные из образцов сыворотки 
(плазмы) крови с помощью набора для выделения нуклеиновых кислот (НК): «РеалБест 
ДельтаМаг ВГВ/ВГС/ВИЧ» согласно инструкции по применению набора.
Каждая группа образцов, проходящая через процедуру выделения РНК, должна содер­
жать положительный контрольный образец (ПКО) в трех повторах, слабый положительный 
контрольный образец (СПКО) и отрицательный контрольный образец (ОКО), который явля­
ется компонентом набора для выделения НК.
Внимание: в случае необходимости валидации аналитической системы в исследование 
должны быть также включены калибровочные образцы 1  и 2, в трех повторах каждый 
(см. Приложение 2).
Подготовка контрольных образцов к выделению НК: во флаконы с ПКО и СПКО внести 
по 1000 мкл РВК, перемешать на вортексе и выдержать при температуре от 18 до 25 °С в те­
чение 15 мин; затем снова аккуратно перемешать.