Набор реагентов для определения антител к Treponema pallidum в сыворотке и/или плазме крови человека с помощью РПГА (реакция пассивной гемагглютинации) - ТРНА — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 20 ---
ТРНА
^ 200 й1р]
^ 500 RE^
72503
72504
НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К TREPONEMA PALLIDUM В
СЫВОРОТКЕ И/ИЛИ ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА С ПОМОЩЬЮ РПГА (РЕАКЦИЯ
ПАССИВНОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ)
JVD С€
883683 - 2014/12
,
--- стр. 21 ---
СОДЕРЖАНИЕ
1. НАЗНАЧЕНИЕ.............................................................................................................. 3
2. ОБЗОР И ОБЪЯСНЕНИЕ МЕТОДА ИССЛЕДОВАНИЯ................................... 3
3. ПРИНЦИПБ1 МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЯ................................................... 3
4. РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА ..................................................4
5. ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ...................................4
6. ИССЛЕДУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ...................................................................................... 5
7. ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ............................................................................. 6
8. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА ИССЛЕДОВАНИЯ................................................... 9
9. ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ .................................................... 10
10. БИБЛИОГРАФИЯ.......................................................................................................П
--- стр. 22 ---
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов ТРНА предназначен для качественного и/или полуколичественного определения
антител к Treponema pallidum в сыворотке и/или плазме крови человека с помощью реакции
пассивной гемагглютинации при обследовании доноров и пациентов на наличие сифилитической
инфекции.
2. ОБЗОР И ОБЪЯСНЕНИЯ МЕТОДА ИССЛЕДОВАНИЯ
Сифилис - это хроническое инфекционное заболевание, которое в свое.м развитии проходит
несколько четко различимых стадий; первичный, вторичный, третичный и четвертичный сифилис.
На этих стадиях происходит развитие различных клинических симптомов, наиболее характерными
из которых являются образование первичных язв, так называемых шанкров, затем - появление
сифилитической сыпи, за которы.м следует продолжительный латентный период без каких-либо
видимых клинических проявлений. Инфекция при отсутствии лечения может вызывать нарушения
со стороны сердечно-сосудистой системы и нейросифилис.
Возбудителем данной инфекции является спирохета Treponema pallidum. Заражение обычно
^ происходит при половом контакте, однако болезнь может передаваться и при переливании
инфицированной крови. Кроме того, возможно развитие внутриутробной инфекции. Было
установлено, что данный микроорганизм практически невозможно выращивать на искусственных
питательных средах, и диагностика инфекции обычно основывается на выявлении антител в
крови, которые появляются вскоре после первоначального заражения и могут персистировать в
ней в течение многих лет.
Вьщеляют четыре категории исследований на наличие сифилиса: прямое микроскопическое
исследование, трепонемные антительные тесты, нетрепонемные антительные тесты и прямые
антигенные тесты. В связи с наличием продолжительных латентных периодов заболевания и
ввиду неспецифической природы антител, выявляемых с помощью нетрепонемных тестов, при
проведении скрининговых исследований все чаще используются тесты, основанные на
определении специфических анти-трепонемных антител в образцах крови. Одним из таких тестов
является ТРНА.
3. ПРИНЦИПЫ МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЯл
В наборах ТРНА использованы стабилизированные птичьи эритроциты, покрытые антигеном Т.
pallidum (штамм Николса), которые связывают специфические антитела, присутствующие в
сыворотке или плазме крови пациента. Клетки представлены в виде суспензии в среде, которая
содержит компоненты, способные устранять неспецифические реакции.
Положительные реакции характеризуются агглютинацией клеток, отрицательные реакции -
осаждением клеток на дне лун^ в виде пуговки или маленького кольца.
Несмотря на то, что данные наборы предназначены для проведения, прежде всего, качественного
анализа, они могут быть использованы и для определения уровня антител посредством их
титрования последовательным двукратным разведением.
Интерпретация картины агглютинации осуществляется на основании результатов визуальной
оценки.
--- стр. 28 ---
Если при исследовании образца в лунке с сенсибилизированными клетками не наблюдается
реакции, то такой образец считается отрицательным на наличие T.pallidum.
Реактивность меньше той, что указана как «неопределенная», свидетельствует об отрицательном
результате теста.
Любой образец, результаты исследования которого можно оценить как неопределенные или
положительные, должен рассматриваться как положительный и подвергнуться повторному
исследованию в соответствии с описанным выше протоколом, но в двух повторах, при этом в одну
серию ячеек необходимо добавить контрольные клетки (R2), а в другую - сенсибилизированные
клетки (R1).
Если хотя бы в одной из лунок с сенсибилизированными клетками (R1) результат окажется
неопределенным или положительным, образец должен считаться положительным на наличие
Т, pallidum.
При наличии неспецифической реакции, картина агглютинации должна оцениваться следующим
образом: если агглютинация более выражена у сенсибилизированных клеток (R1), чем у
контрольных (R2), образец расценивается как положительный и должен быть подвергнут
повторному исследованию.
Если же при исследовании такого образца наблюдается более выраженная или сопоставимая
агглютинация у контрольных клеток (R2), образец необходимо абсорбировать, следуя
нижеописанной методике.
7.5. Абсорбция неспецифических реакций
(Процедура проводится в том случае, когда наблюдается агглютинация и сенсибилизированных, и
контрольных клеток).
1. Добавить 10 мкл образца к 190 мкл ресуспендированных контрольных клеток, хорошо
перемешать и инкубировать при комнатной температуре в течение 30 минут.
2. Центрифугировать до осаждения клеток при минимум 1500g в течение 3 минут.
3. Внести по 25 мкл супернатанта, полученного в ходе выполнения этапа 2, в каждую из двух
лунок.
4. Аккуратно перемешать сенсибилизированные и контрольные клетки для обеспечения
достаточного ресуспендирования.
Добавить 75 мкл сенсибилизированных клеток в первую лунку.
Добавить 75 мкл контрольных клеток во вторую лунку.
5. Тщательно перемешать и инкубировать при комнатной температуре в течение минимум 45
минут.
6. Оценить и интерпретировать картину клеточной агглютинации, согласно описанной выше
схеме.
8. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА ИССЛЕДОВАНИЯ
Отдельные тесты или точно определенные эталонные стандарты для каждой из стадий
заболевания отсутствуют. Поэтому диагностика сифилиса опирается, преимущественно, на
серологическое исследование, для чего требуются результаты как нетрепонемных, так и
трепонемных тестов.
Ни один из диагностических тестов не может дать абсолютной гарантии, что в образце не
содержатся антитела к Т. pallidum в низкой концентрации, как, может, например, происходить на
самой ранней стадии заболевания. Следовательно, отрицательный результат, полученный в какой-
либо момент времени, не исключает вероятности заражения сифилисом.
Как правило, результаты всех трепонемных тестов остаются положительными и после проведения
терапии трепонемной инфекции, поэтому эти тесты не могут быть использованы для оценки
ответа на лечение. Поскольку реактивность сохраняется практически в течение всей жизни
пациента, трепонемные тесты не являются достоверным методом выявления рецидива или
повторного инфицирования у людей, ранее имевших положительные результаты такого
исследования. В данном случае рекомендуется использовать другие методики анализа и
соответствующие наборы; Syphilis Total Ab, Syphilis IgM EIA и RPR.
--- стр. 29 ---
9. ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
9.1. Исследование воспроизводимости
Исследование воспроизводимости заключалось в проведении анализа 3 образцов (I
отрицательный, 1 слабоположительный и 1 положительный) в 10 повторах в одной и той же
постановке теста (сходимость) и в 2 повторах в течение 5 дней, с применением реактивов из 2
различных партий и с привлечением 2 различных специалистов для оценки результатов
(внутрилабораторная воспроизводимость).
Сходимость: при исследовании всех 3 образцов десять раз были получены идентичные
результаты.
Внутрилабораторная воспроизводимость/ воспроизводимость между партиями: в ходе анализа
всех 3 образцов, проводимого в различных условиях (40 раз), были получены идентичные
результаты.
9.2. Клинические характеристики
Характеристики метода ТРНА определялись посредством оценки образцов, полученных у
произвольно выбранных доноров крови, госпитализированных пациентов и пациентов,
зараженных сифилисом, а также образцов, в которых были выявлены маркеры, не связанные с
инфекцией Т. pallidum.
Исследования проводились в 2 центрах донорской крови, а также в исследовательском центре Bio-
Rad.
9.2.1. Специфичность
Всего было исследовано 5032 образца, полученных у доноров в 2 различных центрах в ходе
проспективных исследований.
Среди образцов была как сыворотка (3626), так и плазма, собранная с ЭДТА К2 (539) или с литий-
гепарином (867). Образцы исследовались в течение менее чем 7 дней, следующих за датой забора
крови, и результаты сравнивали с результатами скринингового исследования, проводимого в
лаборатории.
Таблица 1: Популяция доноров крови
Центр Кол-во Первично
реактивные образцы
(IR)
Повторно реактивные
образцы (RR)
Специфичность
(%)
95%
Доверительный
интервал (%)
Центр
№ 1 2519 18 7 99,72%
(2512/ 2519)
99,43%-
99,89%
Центр
№2 2513* 20
d
7 99,72%
(2505 /2512)
99,43% -
99,89%
Всего 5032 Л
(8 положительных,
30 неопределенных)
14
(3 положительных,
11 неопределенных)
99,72%
(5017/5031)
99,53%-
99,85%
*:один образец (истинно положительный) был исключен из подсчета.
Общая специфичность по популяции банков крови, равна 99,72Уо (5017/5031), при этом 95%
доверительный интервал составляет [99,53% -99,85%]. Из 14 ложноположительных образцов 11
оказались повторно неопределенными.
Также бьито проведено ретроспективное исследование 201 замороженного образца, полученного
от пациентов с отрицательными результатами по сифилису Центра по изучению инфекций,
передающихся половым путем, или частных лабораторий.
Специфичность этих образцов составила 99,5% (200/201) с 95% доверительным интервалом
[97,3%- 100,0%].
--- стр. 30 ---
9.2.2. Чувствительность
Исследование чувствительности проводилось на 435 ретроспективно сооранных и замороженных
образцах сыворотки, полученных из лаборатории Центра по изучению инфекций, передающихся
половым путем, или на замороженных образцах, полученных из частных лабораторий. Эти
образцы были определены как положительные при проведении иммуноанализа, исследования с
применением метода флуоресцирующих трепонемных антител, проведении RPR/VDRL-тестов или
исследования РПГА, в соответствии с их источником.
Все образцы сначала были исследованы при помощи СЕ сертифицированного набора для
поетановки РПГА, а затем - при помощи набора ТРНА 500 (72504) производства Bio-Rad.
Чувствительность в этой популяции составила 100% (435/435) с 95% доверительным интервалом
[99,2%-100,0%].
9.3. Аналитическая чувствительность
Аналитическая чувствительность исследовалась в сравнении с установленным ВОЗ
международным стандартом «Выявление IgG и IgM в плазме крови при наличии сифилиса», код
05/132 в системе NIBSC (Национальный институт биологических стандартов и контроля). При
использовании протокола полуколичественного определения, чувствительность составила
0,05 МЕ/мл.
9.4. Аналитическая специфичность / Исследование перекрестной реактивности
210 образцов с потенциальной интерференцией, содержащих антитела к патогенам, которые могут
привести к развитию инфекционного заболевания (цитомегаловирус, вирус Эпштейна-Барра,
вирус ветряной оспы, вирус краснухи, вирус гепатита С, вирус гепатита В, ВИЧ 1/2, вирус HTLV
1/2, Toxoplasma gondii, возбудители лихорадки Денге, малярии, лептоспироза), образцов,
полученных у беременных женщин и многократно рожавших женщин, или образцов, полученных
у пациентов с заболеваниями иммунной системы (аутоиммунные антитела (СКВ), ревматоидный
фактор), было исследовано при помощи ТРНА. Четыре (4) истинно положительных ооразца оыли
исключены из подсчета.
Один образец оказался положительным и при повторном проведении исследования РПГА.
Специфичность в данной целевой выборке составила 99,5 % (205/206), что сопоставимо со
специфичностью на клинических образцах.
9.5. Феномен прозоны (хук-эффект)
Вероятность существования феномена прозоны была исследована посредством тестирования 3
образцов с высокими титрами (> 1:20480) в различных разведениях. Идентичность результатов,
полученных при тестировании неразведенных и разведенных образцов, свидетельствует об
отсутствии феномена прозоны.
10. БИБЛИОГРАФИЯ
1. Daguet G.L. - Diagnostic Biologique de la Syphilis. Technique et Biologie, 1995; 120:5-30.
2. Houng H. - Syphilis: new diagnostic directions. Intern. J. STD and AIDS 1992; 3: 391- 413.8.
3. Larsen S.A., Hambie E.A., et coll., Specificity, sensitivity and reproducibility among the fluorescent
treponemal antibody absorption test, the microhemagglutination assay for Treponema pallidum
antibodies, and the hemagglutination treponemal test for syphilis. J. Clin. Microbiol., 1981; 14: 441 -445.
4. North MLet Guntz Ph. Sérodiagnostic de la syphilis. La Revue Française des Laboratoires, 1997; 294:
51-58. . .
5. Paris Hamelin, A., Dreux P. et coll. - Tréponématoses: aspects cliniques et biologiques. Feuill.
Biol.l991a;23: 88-89.
6. Rathlev T. - Haemagglutination tests utilizing antigens from pathogenic and apathogemc Treponema
pallidum WHO/VDT/RES 1965; 77: 65.
--- стр. 32 ---
d
Bio-Rad Био-Рад
3, boulevard Raymond Poincare
92430 Mames-la-Coquette, France
Тел..:+33 (0)1 47 95 60 00
Факс:+33 (0)1 47 41 91 33
www.bio-rad.com
C€
2014/12
мэваз
--- стр. 33 ---
ПРИЛОЖЕНИЕ
ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ ОБРАЩЕНИЯ МЕДИЦИНСКОГО ИЗДЕЛИЯ НА ТЕРРИТОРИИ РФ
Показания к применению медицинского изделия
Качественное и/или полуколичественное определение антител к Treponema pallidum в сыворотке
.........1го»»аг-гтт1гчтинятти ппи ооследованииКачественное и/или ^
и/или плазме крови человека с помощью реакции пассивной гемагглютинации при ооследовании
доноров и пациентов на наличие сифилитической инфекции.
Противопоказания
При строгом соблюдении инструкции по применению противопоказаний к применению данного
медицинского изделия нет.
Побочные действия
Ф Не применимо для данного МИ
Область применения
Только для диагностики in vitro.
Условия хранения и использования (Дополнение)
Данный набор должен храниться при температуре +2-8°С (в холодильнике, холодильной камере),
Хпанить Ллаконы в вертикальном положении. Не замораживать.
Йждьй ioMHOHCHT набора, хранящийся при температуре .2-8°С,
окончания срока годности, указанного на упаковке. После вскрытия флаконо У
контаминации реагенты R1, R2, R3, R4 и R5, хранящиеся при +2-8“С, могут оыть использованы д
окончания срока годности, указанного на этикетке.
Условия транспортирования
Изделие следует перевозить в оригинальной упаковке производителя, защищающей "родукдию от
внеГих возХйств^, на всех видах транспорта в крыть« транспортных средствах в соответствии
С правилами перевозок, действующими на транспорте данного вида.
"пГгГд^Гработ и транспортировании следует строго выполнять
требования манипуляционных знаков, нанесенных на упаковке и транспортной таре.
При несоблюдении условий транспортирования медицинское изделие не подлежит
использованию!
Предупреждения и меры предосторожности (Дополнение)
В состав некоторых реагентов входит азид натрия. Концентрация вещества менее 0,1%.
в директиве № 1272/2008 (СЕР - классификация, маркировка и упаковка) не
токсикологические данные для смесей, содержащих азид натрия. Следовательно, в соответствии
рекомендациями СЕР, оценка острой токсичности рассчитывается из токсичности ингредиентов^
При используемых в смесях концентрациях вещества <0,1%, смеси не классифицируются как
ш "'а зи д натрия может вступать в химические реакции со свинцом или медью водопроводнь«
?руб образуя чрезвычайно взрывоопасные азиды данных металлов. Для предотвращени
накопления азидов, следует смывать удаляемые жидкости большим количеством воды.
--- стр. 34 ---
Клинические характеристики (Дополнение)
В ходе клинических испытаний (в форме клинико-лабораторных испытаний медицинского
изделия с целью регистрации МИ), проведенных ООО «Независимая лаборатория ИНВИТРО»,
проанализировано 300 образцов клинического материала от 68 женщин и 32 мужчин в возрасте от
10 до 87 лет (от каждого пациента были получены образцы сыворотки и плазмы с различными
заявленными антикоагулянтами). 100 образцов сыворотки, 50 образцов плазмы с ЭДТА, 50
образцов плазмы с цитратом натрия, 50 образцов плазмы с гепарином натрия и 50 образцов
плазмы с ACD были исследованы для оценки чувствительности и специфичности испытуемого
медицинского изделия в сравнительных иепытаниях с использованием зарегистрированного в РФ
изделия сравнения.
Чувствительность для испытуемого МИ ИВД составила ЮОУо (доверительный интервал 97,57% -
100%, с доверительной вероятностью 95%), специфичность для испытуемого МИ ИВД
составила 100% (доверительный интервал 97,57% - 100%, с доверительной вероятностью 95%).
По результатам клинических испытаний установлена эффективность, качество и безопасность МИ
Набор реагентов для определения антител к Treponema pallidum в сыворотке и/или плазме крови
человека с помощью РПГА (реакция пассивной гемагглютинации) - ТРНА„ производства Bio-Rad
(Био-Рад), Франция.
Утилизация
Утилизация изделия должна производиться в соответствии с требованиями локального,
регионального и национального законодательства.
Все образцы и материаты, использующиеся и образующиеся при выполнении исследований, в том
числе реагенты с истекшим сроком годности, следует утилизировать как потенциально
эпидемиологически опасные отходы (класс Б).
Гарантии
Производитель гарантирует соответствие характеристик медицинского изделия заявленным в
эксплуатационной документации при условии применения изделия в соответствии с инструкцией
и по назначению, предусмотренному производителем.
По всем вопросам, для получения технической консультации и поддержки следует обращаться к
уполномоченному представителю производителя на территории РФ:
ООО «Био-Рад Лаборатории»
Адрес: 105064, г. Москва, Нижний Сусальный переулок, дом 5, строение 5А.
Телефон: +7 (495) 721-14-04
--- стр. 35 ---
/
\
a bo^' 000^®
V u p o u r certificatio i.
m a té rie lle ^ ^ a sig n atu re
» ................
-m
{’elk ceniiicflt-on dc s.gnaiurejsl ne I*"} ei
aucun ca» usidéret aa t-rSrti! dooimenl 1«
caraaiwd'ua..rieai.;hcni4ik
U lespnusaf-diii Nciaire n^ ->eui A a-cun
mrt £U'- en c.' >k. r :c >{ui ..in«.ciM k
coDicuu du piiikni iocun'eru APOSTÎTLE
{iomeniiou de La H a ^iu
KUO
1 République tnjucaise
Le pre%ent acte public
2. a eîé sîgiîé par... .Mc.CHEVAlL
à, agissant en qualité de, .N.OtliijV.,'
..................
4, est levêm du sceau timbre de.,.,rt!^n étude
Atteste , ,
A '“" ..................’ o.m JD ig
" .p a rie Procureur général i \ ^ îV Paris
ictiel iLERNOUT
1ER AVOCAT^êéf^Ë^l'
, \^^^^^L^^o\îîîî^oHfiTÎÎ^ëv(emëu^^aïi^iëf>>^^^^^q^îgmriîre^î^cenî^ù
\ y^àinbre î« r ¡e document. Elle ne signifte pas qne le contenu du document est
' _ eoveei 'aiiyOpelo^epnbliq/ie fram/iUf I e sou i'oi/h’’iii
--- стр. 58 ---
Т Р Н А
V 200
500
REF:___ 72503
REFj 72504
НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К TREPONEMA PALLIDUM В
СЫВОРОТКЕ И/ИЛИ ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА С ПОМОЩЬЮ РПГА (РЕАКЦИЯ
ПАССИВНОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ)
jV D С€
^ 1 3 5 883683 - 2014/12
W
--- стр. 59 ---
СОДЕРЖАНИЕ
1. НАЗНАЧЕНИЕ.............................................................................................................. 3
2. ОБЗОР И ОБЪЯСНЕНИЕ МЕТОДА ИССЛЕДОВАНИЯ ................................... 3
3. ПРИНЦИПЫ МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЯ ................................................... 3
4. РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА...................................................4
5. ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ....................................4
6. ИССЛЕДУЕМБ1Е ОБРАЗЦБ1...................................................................................... 5
7. ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ............................................................................. 6
8. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА ИССЛЕДОВАНИЯ ................................................... 9
9. ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ .................................................... 10
10. БИБЛИОГРАФИЯ........................................................................................................11
--- стр. 60 ---
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов ТРНА предназначен для качественного и/или полуколичественного определения
антител к Treponema pallidum в сыворотке и/или плазме крови человека с помощью реакции
пассивной гемагглютинации при обследовании доноров и пациентов на наличие сифилитической
инфекции.
2. ОБЗОР И ОБЪЯСНЕНИЯ МЕТОДА ИССЛЕДОВАНИЯ
Сифилис - это хроническое инфекционное заболевание, которое в своем развитии проходит
несколько четко различимых стадий: первичный, вторичный, третичный и четвертичный сифилис.
На этих стадиях происходит развитие различных клинических симптомов, наиболее характерными
из которых являются образование первичных язв, так называемых шанкров, затем - появление
сифилитической сыпи, за которым следует продолжительный латентный период без каких-либо
видимых клинических проявлений. Инфекция при отсутствии лечения может вызывать нарушения
со стороны сердечно-сосудистой системы и нейросифилис.
Возбудителем данной инфекции является спирохета Treponema pallidum. Заражение обычно
происходит при половом контакте, однако болезнь может передаваться и при переливании
инфицированной крови. Кроме того, возможно развитие вн>дриутробной инфекции. Было
установлено, что данный микроорганизм практически невозможно выращивать на искусственных
питательных средах, и диагностика инфекции обычно основывается на выявлении антител в
крови, которые появляются вскоре после первоначального заражения и .могут персистировать в
ней в течение многих лет.
Выделяют четыре категории исследований на наличие сифилиса: прямое микроскопическое
исследование, трепонемные антительные тесты, нетрепонемные антительные тесты и прямые
антигенные тесты. В связи с наличием продолжительных латентных периодов заболевания и
ввиду неспецифической природы антител, выявляемых с помощью нетрепонемных тестов, при
проведении скрининговых исследований все чаще используются тесты, основанные на
определении специфических анти-трепонемных антител в образцах крови. Одним из таких тестов
является ТРНА.
А
3. ПРИНЦИПБ1 МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЯ
В наборах ТРНА использованы стабилизированные птичьи эритроциты, покрытые антигеном Т.
pallidum (штамм Николса), которые связывают специфические антитела, присутствующие в
сыворотке или плазме крови пациента. Клетки представлены в виде суспензии в среде, которая
содержит компоненты, способные устранять неспецифические реакции.
Положительные реакции характеризуются агглютинацией клеток, отрицательные реакции -
осаждением клеток на дне лун^:^1 в виде пуговки или маленького кольца.
Несмотря на то, что данные наборы предназначены для проведения, прежде всего, качественного
анализа, они могут быть использованы и для определения уровня антител посредством их
титрования последовательным двукратным разведением.
Интерпретация картины агглютинации осуществляется на основании результатов визуальной
оценки.
--- стр. 66 ---
Если при исследовании образца в лунке с сенсибилизированными клетками не наблюдается
реакции, то такой образец считается отрицательным на наличие T.pallidum.
Реактивность меньше той, что указана как «неопределенная», свидетельствует об отрицательном
результате теста.
Любой образец, результаты исследования которого можно оценить как неопределенные или
положительные, должен рассматриваться как положительный и подвергнуться повторному
исследованию в соответствии с описанным выше протоколом, но в двух повторах, при этом в одну
серию ячеек необходимо добавить контрольные клетки (R2), а в другую - сенсибилизированные
клетки (R1).
Если хотя бы в одной из лунок с сенсибилизированными клетками (R1) результат окажется
неопределенным или положительным, образец должен считаться положительным на наличие
Т. pallidum.
При натичии неспецифической реакции, картина агглютинации должна оцениваться следующим
образом: если агглютинация более выражена у сенсибилизированных клеток (R1), чем у
контрольных (R2), образец расценивается как положительный и должен быть подвергнут
повторному исследованию.
Если же при исследовании такого образца наблюдается более выраженная или сопоставимая
агглютинация у контрольных клеток (R2), образец необходимо абсорбировать, следуя
нижеописанной методике.
7.5. Абсорбция неспецифических реакций
(Процедура проводится в том случае, когда наблюдается агглютинация и сенсибилизированных, и
контрольных клеток).
1. Добавить 10 мкл образца к 190 мкл ресуспендированных контрольных клеток, хорошо
перемешать и инкубировать при комнатной температуре в течение 30 минут.
2. Центрифугировать до осаждения клеток при минимум 1500g в течение 3 минут.
3. Внести по 25 мкл супернатанта, полученного в ходе выполнения этапа 2, в каждую из двух
лунок.
4. Аккуратно перемешать сенсибилизированные и контрольные клетки для обеспечения
достаточного ресуспендирования.
Добавить 75 мкл сенсибилизированных клеток в первую лунку.
Добавить 75 мкл контрольных клеток во вторую лунку.
5. Тщательно перемешать и инкубировать при комнатной температуре в течение минимум 45
минут.
6. Оценить и интерпретировать картину клеточной агглютинации, согласно описанной выше
схеме.
8. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА ИССЛЕДОВАНИЯ
Отдельные тесты или точно определенные эталонные стандарты для каждой из стадий
заболевания отсутствуют, рйэтому диагностика сифилиса опирается, преимущественно, на
серологическое исследование, для чего требуются результаты как нетрепонемных, так и
трепонемных тестов.
Ни один из диагностических тестов не может дать абсолютной гарантии, что в образце не
содержатся антитела к Т. pallidum в низкой концентрации, как, может, например, происходить на
самой ранней стадии заболевания. Следовательно, отрицательный результат, полученный в какой-
либо момент времени, не исключает вероятности заражения сифилисом.
Как правило, результаты всех трепонемных тестов остаются положительными и после проведения
терапии трепонемной инфекции, поэтому эти тесты не могут быть использованы для оценки
ответа на лечение. Поскольку реактивность сохраняется практически в течение всей жизни
пациента, трепонемные тесты не являются достоверным методом выявления рецидива или
повторного инфицирования у людей, ранее имевших положительные результаты такого
исследования. В данном случае рекомендуется использовать другие методики анализа и
соответствующие наборы: Syphilis Total Ab, Syphilis IgM EIA и RPR.
--- стр. 67 ---
9. ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
9.1. Исследование воспроизводимости
Исследование воспроизводимости заключалось в проведении анализа 3 образцов (1
отрицательный, 1 слабоположительный и 1 положительнь[й) в 10 повторах в одной и той же
постановке теста (сходимость) и в 2 повторах в течение 5 дней, с применением реактивов из 2
различных партий и с привлечением 2 различных специалистов для оценки результатов
(внутрилабораторная воспроизводимость).
Сходимость: при исследовании всех 3 образцов десять раз были получены идентичные
результаты.
Внутрилабораторная воспроизводимость/ воспроизводимость между партиями: в ходе анализа
всех 3 образцов, проводимого в различных условиях (40 раз), были получены идентичные
результаты.
9.2. Клинические характеристики
Характеристики метода ТРНА определялись посредством оценки образцов, полученных у
произвольно выбранных доноров крови, госпитализированных пациентов и пациентов,
зараженных сифилисом, а также образцов, в которых были выявлены маркеры, не связанные с
инфекцией Т. pallidum.
Исследования проводились в 2 центрах донорской крови, а также в исследовательском центре Bio-
Rad.
9.2.1. Специфичность
Всего было исследовано 5032 образца, полученных у доноров в 2 различных центрах в ходе
проспективных исследований.
Среди образцов была как сыворотка (3626), так и плазма, собранная с ЭДТА К2 (539) или с литий-
гепарином (867). Образцы исследовались в течение менее чем 7 дней, следующих за датой забора
крови, и результаты сравнивали с результатами скринингового исследования, проводимого в
лаборатории.
Таблица I: Популягщя доноров крови
Центр Кол-во Первично
реактивные образцы
(IR)
Повторно реактивные
образцы (RR)
Специфичность
(%)
95%
Доверите.1ьный
интервал (%)
Центр
№ 1 2519 18 7 99,72%
(2512/ 2519)
99,43% -
99,89%
Центр
№2 2513* f 7 99,72%
(2505/2512)
99,43% -
99,89%
Всего 5032 '38
(8 положительных,
30 неопределенных)
14
(3 положительных,
11 неопределенных)
99,72%
(5017/5031)
99,53%-
99,85%
"^:один образец (истинно положительный) был исключен из подсчета.
Общая специфичность по популяции банков крови, равна 99,72% (5017/5031), при этом 95%
доверительный интервал составляет [99,53% -99,85%]. Из 14 ложноположительных образцов 11
оказались повторно неопределенными.
Также было проведено ретроспективное исследование 201 замороженного образца, полученного
от пациентов с отрицательными результатами по сифилису Центра по изучению инфекций,
передающихся половым путем, или частных лабораторий.
Специфичность этих образцов составила 99,5% (200/201) с 95% доверительным интервалом
[97,3%- 100,0%].
--- стр. 68 ---
9.2.2. Чувствительность
Исследование чувствительности проводилось на 435 ретроспективно собранных и замороженных
образцах сыворотки, полученных из лаборатории Центра по изучению инфекций, передающихся
половым путем, или на замороженных образцах, полученных из частных лабораторий. Эти
образцы были определены как положительные при проведении иммуноанализа, исследования с
применением метода флуоресцирующих трепонемных антител, проведении RPR^VDRL-тестов или
исследования РПГА, в соответствии с их источником.
Все образцы сначала были исследованы при помощи СЕ сертифицированного набора для
постановки РПГА, а затем - при помощи набора ТРНА 500 (72504) производства Bio-Rad.
Чувствительность в этой популяции составила 100% (435/435) с 95% доверительным интервалом
[99,2%-100,0%].
9.3. Аналитическая чувствительность
Аналитическая чувствительность исследовалась в сравнении с установленным ВОЗ
международным стандартом «Выявление IgG и IgM в плазме крови при наличии сифилиса», код
05/132 в системе NIBSC (Национальный институт биологических стандартов и контроля). При
использовании протокола полуколичественного определения, чувствительность составила
0,05 МЕ/мл.
9.4. Аналитическая специфичность / Исследование перекрестной реактивности
210 образцов с потенциальной интерференцией, содержащих антитела к патогенам, которые могут
привести к развитию инфекционного заболевания (цитомегатовирус, вирус Эпщтейна-Барра,
вирус ветряной оспы, вирус краснухи, вирус гепатита С, вирус гепатита В, ВИЧ 1/2, вирус HTLV
1/2, Toxoplasma gondii, возбудители лихорадки Денге, малярии, лептоспироза), образцов,
полученных у беременных женщин и многократно рожавщих женщин, или образцов, полученных
у пациентов с заболеваниями иммунной системы (аутоиммунные антитела (СКВ), ревматоидный
фактор), было исследовано при помощи ТРНА. Четыре (4) истинно положительных образца были
исключены из подсчета.
Один образец оказался положительным и при повторном проведении исследования РПГА.
Специфичность в данной целевой выборке составила 99,5 % (205/206), что сопоставимо со
специфичностью на клинических образцах.
9.5. Феномен прозоны (хук-эффект)
Вероятность существования феномена прозоны была исследована посредством тестирования 3
образцов с высокими титрами (> 1:20480) в различных разведениях. Идентичность результатов,
полученных при тестировании неразведенных и разведенных образцов, свидетельствует об
отсутствии феномена прозоны.
10. БИБЛИОГРАФИЯ
1. Daguet G.L. - Diagnostic Biologique de la Syphilis. Technique et Biologie, 1995; 120:5-30.
2. Houng H. - Syphilis: new diagnostic directions. Intern. J. STD and AIDS 1992; 3: 391- 413.8.
3. Larsen S.A., Hambie E.A., et coll.. Specificity, sensitivity and reproducibility among the fluorescent
treponemal antibody absorption test, the microhemagglutination assay for Treponema pallidum
antibodies, and the hemagglutination treponemal test for syphilis. J. Clin. Microbiol., 1981 ; 14: 441 ^45.
4. North MLet Guntz Ph. Sérodiagnostic de la syphilis. La Revue Française des Laboratoires, 1997; 294:
51-58.
5. Paris Hamelin, A., Dreux P. et coll. - Tréponématoses: aspects cliniques et biologiques. Feuill.
Biol.l991a; 23: 88-89.
6. Rathlev T. - Haemagglutination tests utilizing antigens from pathogenic and apathogenic Treponema
pallidum WHO/VDT/RES 1965; 77: 65.
--- стр. 70 ---
с
V'
mJ
Bio-Rad Био-Рад
3, boulevard Raymond Poincare
92430 Mames-la-Coquette, France
Тел..:+33 (0)1 47 95 60 00
Факс: +33 (0)1 47 41 91 33
www.bio-rad.com
C€
2014.'12
--- стр. 71 ---
ПРИЛОЖЕНИЕ
ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ ОБРАЩЕНИЯ МЕДИЦИНСКОГО ИЗДЕЛИЯ НА ТЕРРИТОРИИ РФ
Показания к применению медицинского изделия
Качественное и/или полуколичественное определение антител к Treponema pallidum в сыворотке
и/или плазме крови человека с помощью реакции пассивной гемагглютинации при обследовании
доноров и папиентов на наличие сифилитической инфекции.
Противопоказания
При строгом соблюдении инструкции по применению противопоказаний к применению данного
медицинского изделия нет.
Побочные действия
Не применимо для данного МИ
Область применения
Только для диагностики in vitro.
Условия хранения и использования (Дополнение)
Данный набор должен храниться при температуре +2-8°С (в холодильнике, холодильной камере).
Хранить флаконы в вертикальном положении. Не замораживать.
Каждый компонент набора, хранящийся при температуре +2-8°С, может быть использован до
окончания срока годности, указанного на упаковке. После вскрытия флаконов и в отсутствие
контаминации реагенты R1, R2, R3, R4 и R5, хранящиеся при +2-8°С, могут быть использованы до
окончания срока годности, указанного на этикетке.
Условия транспортирования
Изделие следует перевозить в оригинальной упаковке производителя, защищающей продукцию от
внещних воздействий, на всех видах транспорта в крытых транспортных средствах в соответствии
с правилами перевозок, действующими на транспорте данного вида.
Температурный режим: 2-8 °С
При проведении погрузочно-разгрузочных работ и транспортировании следует строго выполнять
требования манипуляционных знаков, нанесенных на упаковке и транспортной таре.
При несоблюдении условий транспортирования медипинское изделие не подлежит
использованию! 4
Предупреждения и меры предосторожности (Дополнение)
В состав некоторых реагентов входит азид натрия. Конпентрация вещества менее 0,1%.
В директиве № 1272/2008 (CLP - классификация, маркировка и упаковка) не представлены
токсикологические данные для смесей, содержащих азид натрия. Следовательно, в соответствии с
рекомендациями CLP, оценка острой токсичности рассчитывается из токсичности ингредиентов.
При используемых в смесях концентрациях вещества <0,1%, смеси не классифицируются как
опасные.
Однако, азид натрия может вступать в химические реакции со свинцом или медью водопроводных
труб, образуя чрезвычайно взрывоопасные азиды данных металлов. Для предотвращения
накопления азидов, следует смывать удаляемые жидкости большим количеством воды.
--- стр. 72 ---
Клинические характеристики (Дополнение)
В ходе клинических испытаний (в форме клинико-лабораторных испытаний медицинского
изделия с целью регистрации МИ), проведенных ООО «Независимая лаборатория ИНВИТРО»,
проанализировано 300 образцов клинического материала от 68 женщин и 32 мужчин в возрасте от
10 до 87 лет (от каждого пациента бьши получены образцы сыворотки и плазмы с различными
заявленными антикоагулянтами). 100 образцов сыворотки, 50 образцов плазмы с ЭДТА, 50
образцов плазмы с цитратом натрия, 50 образцов плазмы с гепарином натрия и 50 образцов
плазмы cACD были исследованы для оценки чувствительности и специфичности испытуемого
медицинского изделия в сравнительных испытаниях с использованием зарегистрированного в РФ
изделия сравнения.
Чувствительность для испытуемого МИ ИВД составила 100% (доверительный интерваз 97,57% -
100%, с доверительной вероятностью 95%), специфичность для испытуемого МИ ИВД
составила 100% (доверительный интерваз 97,57% - 100%, с доверительной вероятностью 95%).
По результатам клинических испытаний установлена эффективность, качество и безопасность МИ
Набор реагентов для определения антител к Treponema pallidum в сыворотке и/или плазме крови
человека с помощью РПГА (реакция пассивной гемагглютинации) - ТРНА„ производства Bio-Rad
(Био-Рад), Франция.
Утилизация
Утилизация изделия должна производиться в соответствии с требованиями локазьного,
регионазьного и национазьного законодательства.
Все образцы и материалы, использующиеся и образующиеся при выполнении исследований, в том
числе реагенты с истекшим сроком годности, следует утилизировать как потенциально
эпидемиологически опасные отходы (класс Б).
Гарантии
Производитель гарантирует соответствие характеристик медицинского изделия заявленным в
эксплуатационной документации при условии применения изделия в соответствии с инструкцией
и по назначению, предусмотренному производителем.
По всем вопросам, для получения технической консультации и поддержки следует обращаться к
уполномоченному представителю производителя на территории РФ:
ООО «Био-Рад Лаборатории»
Адрес: 105064, г. Москва, Нижний Сусазьный переулок, дом 5, строение 5А.
Телефон: +7 (495) 721-14-04
--- стр. 73 ---
V u p o u r certificotioi
m a lé n e lie ^ a signalurt
f f ll
appo*;ée ci-
P A R îS .le .
OlM ml.lM .<!-'»* “ "" •'
» g fiic aic /.Jiitci.r'* ''-.'
L» fctpr 111? •■3
• ^ . .1 • , • f .;3i « IV&C • f< w
c n № «# ï 0 * p 'W ^ l - »
Ss
.45'
[(.ftnvi'ttlipn lit' Lu
1 Rcpiihliijtu' fuuu;m i>
Le piesciit {jcte piibJtc
2 a ete stüiié jim. ,Mc CHEIVAIj
.1 asi->i.nni en qualité lie NotailV
J est levém (lu sceau tinibie (le K^iinctudc
Atteste , I
^ a Pans
6 1 e ^oMUuia
“ p f" U Ptoon*ni p ^ i ' p c u t l j ^ n
iP
\i..\ ÎÎ^re|(iieravocat'^ Im ëWM‘
îctie!k-€RNOUT
, ^ ' Jt*Apt»\iHle confiritt ifulemtiul‘autfiri<'^^^^^U^igîwiiirf^ntcMiiwi
' Ifjio n p e n t. EU,' »<• tigiti/îf pat qui' /r roiii,-ntt i)u itacinnem cu
.O;