Набор реагентов для количественного определения РНК вируса гепатита С (HCV) в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме "реального времени" "АмплиСенс® HCV-Монитор-FL" по ТУ 9398-035-01897593-2012 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2007/00577 от 09.08.2007 · класс риска 3

Производитель: ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора (Россия)

Вид изделия: Вирус гепатита С нуклеиновая кислота ИВД, набор, анализ нуклеиновых кислот

В госконтрактах 44-ФЗ: 127 контрактов, медианная цена за единицу 60 515 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 3 ---
список СОКРАЩЕНИИ
В настоящей инструкции применяются следующие сокращения и обозначения:
ВКО - внутренний контрольный образец
к- - отрицательный контроль ПЦР
к+ - положительный контроль ПЦР
ок - отрицательный контроль экстракции
око - отрицательный контрольный образец
от - обратная транскрипция
ПК - положительный контроль экстракции
пко - положительный контрольный образец
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
- Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный 
научно-исследовательский институт эпидемиологии» 
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав 
потребителей и благополучия человека
HCV - вирус гепатита С
HDV - вирус гепатита D («Дельта»)
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «АмплиСенс® НС\/-Монитор-РЬ» предназначен для 
количественного определения РНК вируса гепатита С {HCV) в клиническом 
материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно- 
флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени». Материалом для 
проведения ПЦР служат пробы РНК, выделенные из плазмы крови.
ВНИМАНИЕ! Результаты ПЦР-исследования учитываются в комплексной 
диагностике заболевания^
ПРИНЦИП МЕТОДА
Принцип тестирования основывается на экстракции РНК из плазмы крови 
совместно с ВКО, проведении реакции обратной транскрипции РНК и ПЦР- 
амплификации кДНК с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме 
«реального времени» (формат FRT). По каналу, соответствующему флуорофору 
РАМ, детектируется продукт амплификации ВКО. По каналу, соответствующему 
флуорофору JOE, детектируется продукт амплификации кДНК HCV. Положительные 
контрольные образцы этапа экстракции Г\KO-^-HCV, ПКО-2-HCV детектируются по 
каналам соответствующим флуорофорам РАМ (ВКО) и JOE {HCV). Контрольные 
образцы амплификации (ДНК-калибраторы) - КВ1 HCV и КВ2 HCV, а также 
калибратор HCV-Q (при использовании формы 5) аналогично детектируются по 
каналам, соответствующим флуорофорам РАМ (ВКО) и JOE {HCV).
^ в соответствии с директивой Европейского Союза 98/79/ЕС.
67936
21.10.2019


--- стр. 4 ---
*
ФОРМАТЫ И ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ 
Набор реагентов выпускается в 1 формате:
Формат FRT
Набор реагентов выпускается в 5 формах комплектации:
Форма 1 включает комплекты реагентов «РИБО-сорб-12», ОКО (4 пробирки), «ПЦР- 
комплект» вариант FRT.
Форма 2 включает комплекты реагентов «РИБО-преп» вариант 50, ОКО 
(4 пробирки), «ПЦР-комплект» вариант FRT.
Форма 4 включает комплекты реагентов «МАГНО-сорб» вариант 100-1000, ОКО 
(8 пробирок), «ПЦР-комплект» вариант FRT - 2 штуки.
Форма 5 включает комплекты реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT, ОКО 
(4 пробирки), «Комплект для калибровки HCV-Q».
Форма 6 включает наборы реагентов оптом, расфасованные по отдельным 
реагентам, с маркировкой реагентов на их оптовой фасовке.
Примечание - Форма 3 удалена.
Форма комплектации 1 предназначена для проведения полного ПЦР-
исследования, включающего экстракцию РНК из клинического материала методом 
сорбции на силикагеле, обратную транскрипцию РНК и амплификацию кДНК с 
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени».
Форма комплектации 2 предназначена для проведения полного ПЦР-
исследования, включающего экстракцию РНК из клинического материала методом 
преципитации, обратную транскрипцию РНК и амплификацию кДНК с 
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени».
Форма комплектации 4 предназначена для проведения полного ПЦР-
исследования, включающего экстракцию РНК из клинического материала магнитной 
сепарацией, обратную транскрипцию РНК и амплификацию кДНК с 
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени».
Форма комплектации 5 предназначена для проведения обратной транскрипции 
РНК и амплификации кДНК с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме 
«реального времени». Для проведения полного ПЦР-исследования необходимо 
использовать комплекты реагентов для экстракции РНК/ДНК, рекомендованные 
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.
Форма комплектации 6 предназначена для производственных целей для 
последующей маркировки на языке заказчика и комплектации по наборам.
67936
21.10.2019


--- стр. 5 ---
ВНИМАНИЕ! Форма комплектации 6 используется только в соответствии с 
регламентом, утвержденным ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТИСТИКИ
Линейный диапазон измерения набора реагентов
Вид
клинического
материала
Объем
экстракции,
мкл
Комплект для 
экстракции РНК/ДНК
Линейный диапазон 
измерения, МЕ/мл
Плазма крови
100
«РИБО-сорб-12» 
«РИБО-преп» 
NucliSENS easyMAG
300- 100 000 000
200 «МАГНО-сорб» 150- 100 000 000
1000 «МАГНО-сорб» 
NucliSENS easyMAG 3 0 - 100 000 000
Аналитическая специфичность
Оценка аналитической специфичности набора реагентов проведена посредством 
добавления в реакцию геномной ДНК/РНК следующих организмов и вирусов: вирус 
гепатита А, вирус гепатита В, вирус гепатита D, вирус иммунодефицита человека, 
цитомегаловирус, вирус Эпштейна-Барр, вирус простого герпеса типы 1, 2, вирус 
ветряной оспы, вирус герпеса человека типы 6, 8, парвовирус В19, вирус клещевого 
энцефалита, вирус лихорадки западного Нила, аденовирус типы 2, 3, 7, Escherichia 
coli, Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae. Homo  
sapiens.
Перекрестные реакции для указанных организмов и вирусов зарегистрированы не 
были.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно­
биологические (ПЦР) исследования клинического материала на наличие возбудителей 
инфекционных болезней, с соблюдением санитарно-эпидемиологических правил СП 
1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности 
(опасности) и возбудителями паразитарных болезней», СанПиН 2.1.7.2790-10 
«Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами» 
и методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, 
использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, 
содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности».
При работе необходимо всегда выполнять следующие требования:
- Температура в помещении лаборатории от 20 до 28 °С, относительная влажность 
от 15 до 75%.
- Рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные, организовывать
67936
21.10.2019


--- стр. 7 ---
методам молекулярной диагностики и правилам работы в клинико- 
диагностической лаборатории в установленном порядке (СП 1.3.2322-08 
«Безопасность работы с микроорганизмами III-1V групп патогенности 
(опасности) и возбудителями паразитарных болезней»).
- Не использовать набор реагентов, если нарушена внутренняя упаковка или 
внешний вид реагента не соответствует описанию.
Не использовать набор реагентов, если не соблюдались условия 
транспортирования и хранения согласно инструкции.
- Не использовать набор реагентов по истечении срока годности.
Использовать одноразовые неопудренные перчатки, лабораторные халаты, 
защищать глаза во время работы с образцами и реагентами. Тщательно 
вымыть руки по окончании работы. Все операции проводятся только в 
перчатках для исключения контакта с организмом человека.
- Избегать вдыхания паров, контакта с кожей, глазами и слизистой оболочкой. 
Вреден при проглатывании. При контакте немедленно промыть пораженное 
место водой, при необходимости обратиться за медицинской помощью.
- При соблюдении условий транспортировки, эксплуатации и хранения риски 
взрыва и возгорания отсутствуют.
- Листы безопасности реагентов (SDS - safety data sheet) доступны по запросу. 
Оценка вероятных событий, в результате наступления которых могут произойти 
отрицательные последствия для организма человека (для формы, не включающей 
комплекты реагентов «РИБО-сорб-12», «РИБО-преп», «МАГНО-сорб»).
При использовании по назначению и соблюдении вышеперечисленных мер 
предосторожности набор реагентов безопасен.
Оценка вероятных событий, в результате наступления которых могут произойти 
отрицательные последствия для организма человека (для форм, включающих 
комплекты реагентов «РИБО-сорб-12», «РИБО-преп», «МАГНО-сорб»).
При использовании по назначению и соблюдении вышеперечисленных мер 
предосторожности контакт с организмом человека исключен. При аварийных 
ситуациях возможно следующее:
- раздражение слизистой оболочки глаз у чувствительных лиц,
- раздражение кожи у чувствительных лиц,
- аллергическая реакция,
- вред при вдыхании,
- вред при приеме внутрь.
Специфические воздействия набора реагентов на организм человека:
67936
21.10.2019


--- стр. 8 ---
- Канцерогенный эффект отсутствует.
- Мутагенное действие отсутствует.
- Репродуктивная токсичность отсутствует.
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ 
ЗОНА 1. Экстракция РНК из клинического материала
1. Ламинарный бокс.
2. Центрифуга/вортекс.
3. Автоматические дозаторы переменного объема.
4. Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся 
пробирки объемом 1,5 мл.
5. Одноразовые наконечники с фильтром до 200 мкл и до 1000 мкл.
6. Штативы для наконечников и пробирок объемом 1,5 мл.
7. Холодильник от 2 до 8 °С.
8. Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки по МУ 1.3.2569-09.
9. Емкость с дезинфицирующим раствором.
При использовании комплекта реагентов «РИБО-сорб-12» или «РИБО-преп» (РУ № 
ФОР 2008/03147):
1. Термостат для пробирок типа «Эппендорф» от 25 до 100 °С.
2. Микроцентрифуга для пробирок типа «Эппендорф» до 12 тыс д.
3. Вакуумный отсасыватель медицинский с колбой-ловушкой для удаления
надосадочной жидкости.
4. Одноразовые наконечники до 200 мкл.
5. Одноразовый флакон на 10-20 мл.
При использовании комплекта реагентов «МАГНО-сорб» (РУ № ФОР 2010/07265):
1. Термостат для пробирок объемом 5 мл, диаметром 12 мм от 25 до 100 °С.
2. Термостат для пробирок типа «Эппендорф» от 25 до 100 °С.
3. Магнитный штатив для пробирок типа «Эппендорф» на 1,5 мл.
4. Магнитный штатив для пробирок на 5 мл, диаметр 12 мм.
5. Вакуумный отсасыватель медицинский с колбой-ловушкой для удаления
надосадочной жидкости.
6. Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся 
пробирки объемом 1,5 мл.
7. Одноразовые полипропиленовые или полистирольные пробирки объемом до 5 мл 
диаметром 12 мм, круглодонные.
8. Одноразовые полипропиленовые крышки для пробирок объемом до 5 мл
стр. 8 из 38
67936
21.10.2019


--- стр. 9 ---
диаметром 12 мм.
9. Автоматический дозатор переменного объема с возможностью дозирования от 
1000 до 5000 мкл.
10.Одноразовые наконечники до 200 мкл, до 1000 мкл и до 5000 мкл.
При использовании автоматических станций для экстракции нуклеиновых кислот:
11. Автоматическая станция для экстракции РНК/ДНК (например, NucliSENS 
easyMAG (bioMerieux, Франция)).
12. Набор реактивов и расходных материалов к автоматической станции (например 
NucliSENS easyMAG (NucliSens буфер для экстракции 1, NucliSens буфер для 
экстракции 2, NucliSens буфер для экстракции 3, NucliSens буфер для лизиса, 
NucliSens магнетизированная силика) (bioMerieux, Франция)).
ЗОНА 2. Проведение реакции обратной транскрипции, ПЦР и гибридизационно- 
флуоресцентной детекции продуктов амплификации
1. Бокс абактериальной воздушной среды (ПЦР-бокс).
2. Центрифуга/вортекс.
3. Автоматические дозаторы переменного объема.
4. Одноразовые наконечники с фильтром до 200 мкл в штативах.
5. Штативы для пробирок объемом 0,2 мл или 0,5 мл (в соответствии с 
используемыми комплектами реагентов).
6. Холодильник от 2 до 8 °С.
7. Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки по МУ 1.3.2569-09.
8. Емкость для сброса наконечников.
При работе с «nUP-комплект» вариант FRT:
9. Программируемый амплификатор роторного типа (например, Rotor-Gene 3000 
или 6000 (Corbett Research, Австралия)) или амплификатор планшетного типа
9
(например, i05 (Bio-Rad, США), МхЗОООР (Stratagene, США)) и рекомендованные 
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора в методических рекомендациях 
по применению данного набора реагентов).
Ю.Сдноразовые полипропиленовые пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл или 0,1 мл:
а) тонкостенные пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл с выпуклой крышкой - при 
использовании прибора планшетного типа;
б) тонкостенные пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл с плоской крышкой - при 
использовании прибора роторного типа.
67936
21.10.2019


--- стр. 10 ---
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА
Перед началом работы следует ознакомиться с методическими рекомендациями 
«Взятие, транспортировка, хранение клинического материала для ПЦР- 
диагностики», разработанными ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.
Для проведения ПЦР-исследования используется плазма периферической крови. 
Взятие крови проводится утром натощак в пробирку с раствором ЭДТА в качестве 
антикоагулянта. Закрытую пробирку с кровью несколько раз переворачивают. В 
течение 6 ч с момента взятия крови следует отобрать плазму и перенести в новую 
пробирку. Для этого пробирку с кровью центрифугируют 20 мин при 800-1600 д. 
Хранить плазму можно не более 3 сут при температуре от 2 до 8 °С и длительно - 
при температуре не выше минус 68 °С.
В отдельных случаях допускается использование сыворотки крови. 
Аналитическая чувствительность набора реагентов для данного материала 
сохраняется, однако клиническая чувствительность ввиду осаждения вирусных 
частиц при ретракции сгустка может быть существенно снижена. Хранить сыворотку 
можно не более 3 сут при температуре от 2 до 8 °С и длительно - при температуре 
не выше минус 68 °С.
67936
21.10.2019


--- стр. 13 ---
Реактив Описание Объем, мл Кол-во
Полимераза (TaqF) Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,02 4 пробирки
ТМ-Ревертаза (MMIv) Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,01 4 пробирки
КВ1 HCV Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,1 4 пробирки
КВ2 HCV Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,1 4 пробирки
Буфер для элюции Прозрачная бесцветная 
жидкость 1,2 4 пробирки
Комплект реагентов рассчитан на проведение 80 реакций обратной транскрипции и 
амплификации, включая контроли и калибраторы.
Входит в состав форм комплектации 1,2, 5 (в количестве 1 шт.), 4 (в количестве 
2 шт.).
К комплекту реагентов прилагаются контрольные образцы этапа выделения:
Реактив Описание Объем, мл Кол-во
ПКО-1-HCV Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,06 4 пробирки
ПКО-2-HCV Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,06 4 пробирки
ВКО ICZ-rec Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,28 4 пробирки
В составе формы комплектации 5 к «ПЦР-комплекту» прилагается следующий 
реагент:
Реактив Описание Объем, мл Кол-во
ОКО Прозрачная бесцветная 
жидкость 1,2 4 пробирки
Комплект реагентов «Комплект для калибровки HCV-Q»  включает:
Реактив ' Описание Объем, мл Кол-во
Калибратор HCV-Q Порошок желтого цвета 1 пробирка
Растворитель Q Прозрачная бесцветная 
жидкость 1,2 3 пробирки
Входит в состав формы комплектации 5.
К набору реагентов прилагается на цифровом носителе или находится на 
официальном сайте Изготовителя программное обеспечение AmpliSens Soft Monitor 
FRT (в формате Microsoft® Excel) для автоматической обработки результатов.
67936
21.10.2019


--- стр. 14 ---
(Г ■'»!«** Я’"-?'-а1гМ »йй-»: >
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ
ПЦР-исследование состоит из следующих этапов:
- Экстракция РНК из исследуемых образцов.
- Проведение реакции обратной транскрипции и амплификации с 
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени».
- Анализ и интерпретация результатов.
ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ
ВНИМАНИЕ! Для работы с РНК необходимо использовать только одноразовые 
стерильные пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку 
RNase-free, DNase-free.
Для экстракции РНК используются комплекты реагентов, рекомендованные ФБУН 
ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора:
- при использовании комплекта реагентов «РИБО-сорб-12» порядок работы см. в 
приложении 1. «Экстракция РНК с использованием комплекта реагентов «РИБО- 
сорб-12».
- при использовании комплекта реагентов «РИБО-преп» порядок работы см. в 
приложении 2. «Экстракция РНК с использованием комплекта реагентов «РИБО- 
преп».
- при использовании автоматической станций для экстракции нуклеиновых кислот 
NucliSENS easyMAG (BioMerieux, Франция) порядок работы см. в приложении 3. 
«Экстракция РНК с использованием автоматической станций для экстракции 
нуклеиновых кислот NucliSENS easyMAG.
- при использовани 1/1 комплекта реагентов «МАГНО-сорб» порядок работы для 
экстракции РНК из 1000 мкл и 200 мкл плазмы крови см. в приложении 4. 
«Экстракция РНК с использованием комплекта реагентов «МАГНО-сорб».
- при использовании комплектов реагентов для экстракции, не входящих в состав 
данного набора реагентов, порядок работы см. в приложении 5. «Экстракция РНК 
с использованием комплектов для экстракции, не входящих в состав данного 
набора реагентов».
Также см. методические рекомендации ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии 
Роспотребнадзора по применению набора реагентов «АмплиСенс® НСУ-Монитор- 
FL».
67936
21.10.2019


--- стр. 15 ---
ПРОВЕДЕНИЕ РЕАКЦИИ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ И АМПЛИФИКАЦИИ С 
ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»
Общий объем реакционной смеси - 50 мкл, включая объем пробы РНК- 25 мкл.
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать только одноразовые 
стерильные пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку 
RNase-free, DNase-free.
А. Подготовка пробирок для амплификации
Выбор пробирок для амплификации зависит от используемого  
амплификатора.
Для внесения в пробирки реагентов, проб РНК и контрольных образцов  
используются одноразовые наконечники с фильтрами.
ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси следует смешивать непосредственно 
перед проведением ПЦР-исследования. Смешивать реагенты из расчета на 
необходимое число реакций, включающее тестирование исследуемых и 
контрольных образцов, необходимо согласно расчетной таблице (см. табл. 1).
1. До начала работы разморозить, тщательно перемешать на вортексе все реагенты 
набора и осадить капли с крышек пробирок.
2. Отобрать необходимое количество пробирок для амплификации с учетом 
количества исследуемых, контрольных образцов (три контроля экстракции, четыре
калибратора). Тип пробирок стрипов или плашек выбрать в зависимости от 
используемого прибора.
3. Для приготовления реакционной смеси необходимо в пробирку с DTT 
лиофилизированным добавить все содержимое пробирки с ОТ-ПЦР-смесью-2- 
FEP/FRT. Тщательно перемешать смесь на вортексе и осадить капли с крышки 
пробирки. Приготовленная смесь хранится при температуре 2-8 °С. Для 
приготовления реакционной смеси необходимо в отдельной стерильной пробирке 
смешать реагенты из расчета на 1 реакцию: 15 мкл ОТ-ПЦР-смеси-1-FL HCV, 
10 мкл смеси ОТ-ПЦР-смеси-2-FEP/FRT и DTT лиофилизированного, 1,0 мкл  
лолимеразы (TaqF) и 0,5 мкл ТМ-Ревертазы (MMIv). Тщательно перемешать 
смесь на вортексе и осадить капли с крышки пробирки. Для 12 (стандартная 
панель экстракции набором «РИБО-сорб-12») - 16 (экстракция с использованием 
двух картриджей EasyMag) образцов после экстракции рекомендуется готовить 
реакционную смесь на 20 реакций, для этого в пробирку с DTT
стр. 15 из 38
67936
21.10.2019


--- стр. 16 ---
»<ae-/ajrraj-..4.fy
лиофилизированным добавить все содержимое пробирки с ОТ-ПЦР-смесью-2- 
FEP/FRT, все содержимое пробирки с ОТ-ПЦР-смесью-1-FL НС\/, все
содержимое пробирки с полимеразой (TaqF) и все содержимое пробирки с ТМ- 
Ревертазой (MMIv). Приготовленная смесь не хранится.
4. Внести в пробирки по 25 мкл готовой реакционной смеси. Неиспользованные 
остатки реакционной смеси выбросить.
5. В готовые пробирки внести по 25 мкл проб РНК, полученных в результате 
экстракции из клинических образцов. Содержимое пробирок необходимо  
тщательно перемешать пипетированием, не допуская появления пузырьков 
воздуха.
ВНИМАНИЕ! При добавлении проб РНК, выделенных с помощью комплекта 
реагентов «РИБО-сорб-12», «МАГНО-сорб» и NucliSENS easyMAG, необходимо 
избегать попадания сорбента в реакционную смесь.
6. Поставить контрольные реакции:
а) положительный контроль экстракции (ПК-1) - внести в пробирку 25 мкл 
пробы РНК, выделенной из образца ПКО-1-НС\/.
б) положительный контроль экстракции (ПК-2) - внести в пробирку 25 мкл 
пробы РНК, выделенной из образца ПКО-2-ИС\/.
в) отрицательный контроль экстракции (ОК) - внести в пробирку 25 мкл 
пробы РНК, выделенной из образца ОКО.
г) положительный контроль ПЦР (K+i) - внести в две пробирки по 25 мкл 
КВ1 НС]/
д) положительный контроль ПЦР (К+г) - внести в две пробирки по 25 мкл 
КВ2 НС\/.
Содержимое пробирок необходимо тщательно перемешать пипетированием, 
не допуская появления пузырьков воздуха.
При подозрении на возможную контаминацию также необходима постановка 
отрицательного контроля ПЦР (К— ). Для этого в пробирку с готовой реакционной 
смесью внести 25 мкл Буфера для элюции.
67936
21.10.2019


--- стр. 22 ---
СРОК годности, УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРАНЕНИЯ 
Срок годности. 12 мес. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению 
не подлежит. Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку годности, 
указанному на этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не указано иное. 
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до 
8 С не более 5 сут. При получении разукомплектовать в соответствии с указанными 
температурами хранения.
Хранение. Комплекты реагентов «РИБО-сорб-12», «РИБО-преп» хранить при 
температуре от 2 до 8 °С, «МАГНО-сорб» хранить при температуре от 2 до 25 °С. 
«ПЦР-комплект» и набор для калибровки «HCV-Q» хранить при температуре не выше 
минус 16 °С. Не допускается замораживание/оттаивание ПKO-^-HCV, r\KO-2-HCV, 
КВ1 HCV, КВ2 HCV и ВКО /CZ-гес более двух раз, после размораживания ПКО-1- 
HCV, ПКО-2-HCV, КВ1 HCV, КВ2 HCV и ВКО /CZ-rec хранить при температуре от 2 до 
8 С не более 6 мес. ОТ-ПЦР-смесь-1-FL HCV хранить в защищенном от света 
месте.
Реагент ОКО, прилагающийся к комплектам реагентов «РИБО-сорб-12», «РИБО- 
преп», хранить при температуре от 2 до 8 °С. Реагент ОКО, прилагающийся к 
комплекту реагентов «МАГНО-сорб», хранить при температуре от 2 до 25 °С. Реагент 
ОКО, прилагающийся к «ПЦР-комплекту» в составе формы 5, хранить при температуре 
не выше минус 16 °С.
67936
21.10.2019


--- стр. 23 ---
гарантийные  обязательства  изготовителя
Изготовитель гарантирует соответствие основных параметров и характеристик 
набора реагентов требованиям, указанным в технической и эксплуатационной 
документации, в течение указанного срока годности при соблюдении всех условий 
транспортирования, хранения и применения.
Медицинское изделие техническому обслуживанию и ремонту не подлежит.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по адресу 111123, 
г. Москва, ул. Новогиреевская, дом ЗА, e-mail; cs@pcr.ru^^.
При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по применению 
набора реагентов, нежелательных реакций при его использовании, фактов и 
обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских 
работников при применении и эксплуатации набора реагентов, рекомендуется 
направить сообщение по адресу, указанному выше, и в уполномоченную 
государственную регулирующую организацию (в РФ - Федеральная служба по 
надзору в сфере здравоохранения) в соответствии с действующим 
законодательством.
о
Заведующий НПЛ ОМДиЭ 
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии 
Роспотребнадзора
Главный врач
ФГБУЗ ГЦГ и Э ФМБА России
13
Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету 
потребителя на сайте: www.amplisens.ru .
67936
21.10.2019


--- стр. 24 ---
I
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
Экстракция РНК с использованием комплекта реагентов «РИБО-сорб-12» 
Порядок работы.
1. Лизирующий раствор и раствор для отмывки 1 (если они хранились при 
температуре от 2 до 8 °С) прогреть при температуре 60 °С до полного 
растворения кристаллов.
2. Отобрать необходимое количество одноразовых пробирок на 1,5 мл (включая 
отрицательный и положительный контроли экстракции). Промаркировать 
пробирки.
3. На дно каждой пробирки внести по 10 мкл ВКО /CZ-rec.
4. В пробирки внести по 450 мкл лизирующего раствора. Промаркировать 
пробирки.
Примечание - При большом объеме образцов для облегчения процедуры 
экстракции допускается смешивание в отдельном стерильном флаконе 
лизирующего раствора и ВКО /CZ-rec (из расчета на один образец 450 мкл 
лизирующего раствора и 10 мкл ВКО /CZ-rec) с последующим разнесением по 
450 мкл смеси в заранее приготовленные пробирки на 1,5 мл.
5. В пробирки внести по 100 мкл исследуемых образцов, используя одноразовые 
наконечники с фильтрами. Закрыть крышки и перемешать на вортексе. Осадить 
на центрифуге для сброса капель жидкости с крышки.
6. Для каждой панели необходимо поставить положительные контроли (ПК-1, ПК- 
2). Для этого в приготовленную пробирку ПК-1 с лизирующим раствором добавить 
90 мкл ОКО и 10 мкл ПКО-1-f/C\/, в приготовленную пробирку ПК-2 с 
лизирующим раствором добавить 90 мкл ОКО и 10 мкл ПКО-2-HCV, перемешать 
пробирки на вортексе и осадить капли жидкости с крышки.
7. Для каждой панели необходимо поставить отрицательный контроль (ОК). Для 
этого в пробирку с лизирующим раствором добавить 100 мкл ОКО, перемешать 
на вортексе и осадить капли жидкости с крышки.
8. Поместить пробирки с образцами и контролями в термостат с температурой 60 °С 
на 10 мин. Осадить на центрифуге для сброса капель конденсата с крышки 
(пункт 8 выполнять только в случае одновременной экстракции РНК гепатита С и 
ДНК гепатита В и/или РНК гепатита D).
9. Ресуспендировать сорбент, интенсивно перемешивая на вортексе. Добавить в
67936
21.10.2019


--- стр. 27 ---
11. Аккуратно отобрать надосадочную жидкость, не задевая осадок, используя 
вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник для каждой пробы.
12. Добавить в пробирки по 500 мкл раствора для отмывки 3, плотно закрыть 
крышки, осторожно промыть осадок, переворачивая пробирки 3-5 раз.
13. Центрифугировать при 12 тыс g в течение 1-2 мин на микроцентрифуге.
14.Осторожно, не захватывая осадок, отобрать надосадочную жидкость, используя 
вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник для каждой пробы.
15. Добавить в пробирки по 200 мкл раствора для отмывки 4, плотно закрыть 
крышки и осторожно промыть осадок, переворачивая пробирки 3-5 раз.
16. Центрифугировать при 12 тыс g в течение 2 мин на микроцентрифуге.
17.Осторожно, не захватывая осадок, отобрать надосадочную жидкость, используя 
вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник для каждой пробы.
18. Поместить пробирки в термостат при температуре 65 °С на 5 мин для 
подсушивания осадка (при этом крышки пробирок должны быть открыты).
19. Добавить в пробирки по 50 мкл РНК-буфера. Перемешать на вортексе. 
Поместить в термостат при температуре 65 °С на 5 мин, периодически 
встряхивая на вортексе.
20. Центрифугировать пробирки при 12 тыс g в течение 1 мин на микроцентрифуге. 
Надосадочная жидкость содержит очищенные РНК и ДНК. Пробы готовы к 
постановке реакции обратной транскрипции и ПЦР.
Очищенная РНК может храниться до 4 ч при температуре от 2 до 8 °С, при 
температуре не выше минус 16 °С в течение 1 мес и не выше минус 68 °С в течение 
года.
67936
21.10.2019


--- стр. 28 ---
ПРИЛОЖЕНИЕ 3
Экстракция РНК с использованием автоматической станции для экстракции
нуклеиновых кислот NucliSENS easyMAG
Порядок работы.
А. Экстракция РНК из образца объемом 100 мкл и лизис образца вне прибора.
1. Включить прибор NucliSENS easyMAG и подготовить его к экстракции РНК, 
следуя инструкции к прибору.
2. В окне для ввода исследуемых образцов ввести для каждого образца следующие 
параметры: название образца, материал (Matrix) для экстракции РНК - плазма 
(Plasma), объем образца (Volume) - 0,1 ml, объем элюции (Eluate) - 55 mkl, тип 
образца (Туре) - Lysed,  очередность экстракции РНК в образцах (Priority) -  
Normal.
3. Создать новый протокол экстракции РНК и сохранить его. В протоколе указать, 
что лизис и инкубация образцов происходит вне прибора: On-board Lysis Buffer  
Dispensing - No, On-board Lysis Incubation - No.
4. Перенести запрограммированные образцы в созданный протокол.
5. В ячейки картриджа, предназначенные для экстракции РНК в приборе NucliSENS 
easyMAG, внести по 450 мкл смеси буфера для лизиса NucliSens.
6. В каждую ячейку добавить 100 мкл исследуемой плазмы отдельным 
наконечником с фильтром, тщательно перемешать пипетированием.
7. Для каждой панели необходимо поставить положительные контроли (ПК-1 и 
ПК-2). Для этого в ячейку, предназначенную для ПК-1 со смесью буфера для 
лизиса NucliSens, добавить 90 мкл ОКО и 10 мкл ПКО-1-НСЦ в ячейку, 
предназначенную для ПК-2 с буфером для лизиса NucliSens, добавить 90 мкл 
ОКО и 10 мкл ПКО-2-HCV, тщательно перемешать пипетированием.
8. Для каждой панели необходимо поставить отрицательный контроль (ОК). Для 
этого в ячейку, предназначенную для ОК с буфером для лизиса NucliSens, 
добавить 100 мкл ОКО, тщательно перемешать пипетированием.
9. Оставить картридж с образцами на 10 мин при комнатной температуре для 
прохождения лизиса.
10. В отдельной стерильной пробирке на 1,5 мл смешать магнитную силику 
NucliSens и ВКО ICZ-rec  одноразовыми наконечниками с фильтрами (см. табл. 
5).
67936
21.10.2019


--- стр. 29 ---
Таблица 5
Количество образцов Количество магнитной Количество
для экстракции РНК силики NucliSens, мкл ВКО ICZ-rec, мкл
1 10 10
8 90 90
16 170 170
24
(полная загрузка прибора)
250
(с запасом на 25 проб) 250
11.Добавить в каждую ячейку отдельным наконечником по 20 мкл подготовленной 
смеси магнитной силики NucliSens, ВКО ICZ-rec. Каждую ячейку тщательно 
перемешать пипетированием с помощью дозатора отдельными наконечниками с 
фильтрами на 1000 мкл.
12.Загрузить картридж с образцами в прибор, установить наконечники, запустить 
программу экстракции РНК с лизисом образцов вне прибора {Off board).
13. После окончания экстракции РНК извлечь картридж из прибора и не позднее 
30 мин после окончания процедуры экстракции РНК провести реакцию ОТ-  
ПЦР.
Для длительного хранения препарата необходимо перенести надосадочную 
жидкость в стерильную пробирку и хранить при температуре не выше минус 16 °С в 
течение 1 мес или не выше минус 68 °С в течение года.
Б. Экстракция РНК из образца объемом 100 мкл или 1 мл с автоматическим
лизисом образца в приборе.
1. Поставить флакон с буфером для лизиса NucliSens в прибор.
2. В каждую ячейку картриджа, предназначенную для экстракции РНК в приборе 
NucliSENS easyMAG, необходимо добавить 100 мкл или 1 мл исследуемой 
плазмы отдельным наконечником с фильтром.
3. Для каждой панели необходимо поставить положительные контроли (ПК-1 и 
ПК-2). Для этого в ячейку, предназначенную для ПК-1, добавить 90 мкл ОКО и 
10 мкл Г\KO-^-HCV, в ячейку, предназначенную для ПК-2, добавить 90 мкл ОКО и 
10 мкл UKO-2-HCV.
4. Для каждой панели необходимо поставить отрицательный контроль (ОК). Для 
этого в ячейку, предназначенную для ОК, добавить 100 мкл ОКО, тщательно 
перемешать пипетированием.
5. Включить прибор NucliSENS easyMAG и подготовить его к экстракции РНК, 
следуя инструкции к прибору.
67936
21.10.2019


--- стр. 30 ---
'^ш 1тт л№ № т т -'чт е^),^г *и- -i
6. В окне для ввода исследуемых образцов ввести для каждого образца следующие 
параметры: название образца, материал (Matrix) для экстракции РНК - плазма 
(Plasma), объем образца (Volume) —  100 mkl или 1 ml, в зависимости от объема 
используемого клинического материала, объем элюции (Eluate) - 55 mkl,  тип 
образца (Туре) - Primary,  очередность экстракции РНК в образцах (Priority) -  
Normal.
7. Создать новый протокол экстракции РНК и сохранить его. В протоколе указать, 
что лизис и инкубация образцов происходит в приборе; On-board Lysis Buffer  
Dispensing  - Yes, On-board Lysis Incubation - Yes
8. Перенести запрограммированные образцы в созданный протокол.
9. Загрузить картридж с образцами в прибор, установить наконечники, запустить 
программу экстракции РНК с лизисом образцов в приборе (On board).
10. Дождаться, пока автоматическая станция NucliSENS easyMAG не остановит 
работу в положении Instrument State - Idle  (приблизительно 15 мин).
11. В отдельной стерильной пробирке на 1,5 мл смешать магнитную силику 
NucliSens и ВКО /CZ-rec одноразовыми наконечниками с фильтрами (см. табл. 
5).
"12. Открыть крышку прибора и добавить в каждую ячейку отдельным наконечником 
по 20 мкл подготовленной смеси магнитной силики NucliSens и ВКО /CZ-rec.
Тщательно перемешать пипетированием с помощью дозатора одноразовыми 
наконечниками с фильтрами на 1000 мкл.
13. Запустить на приборе программу продолжения экстракции РНК.
14. После окончания экстракции РНК извлечь картридж с образцами из прибора и не 
позднее 30 мин после окончания процедуры экстракции РНК провести реакцию 
ОТ-ПЦР.
Для длительного хранения препарата необходимо, не захватывая сорбент, 
перенести надосадочную жидкость в стерильную пробирку и хранить при 
температуре не выше минус 16 °С в течение 1 мес или не выше минус 68 °С в 
течение года.
Набор реагентов при использовании автоматической станции NucliSENS  
easyMAG позволяет работать с объемами образцов 0,1 мл или 1 мл.
67936
21.10.2019


--- стр. 31 ---
ПРИЛОЖЕНИЕ 4
Экстракция РНК с использованием комплекта реагентов «МАГНО-сорб»
А. Экстракция из 1000 мкл образца плазмы
Порядок работы.
1. Лизирующий раствор МАГНО-сорб и раствор для отмывки 5 прогреть при 
температуре 60 °С до полного растворения кристаллов.
2. Подготовить необходимое количество одноразовых пробирок на 5 мл и 
одноразовых крышек (включая отрицательный и положительный контроли 
экстракции) и промаркировать их.
3. При экстракции РНК из 24 образцов-
а) во флакон с лизирующим раствором МАГНО-сорб (70 мл) внести 0,28 мл 
ВКО /CZ-rec, все содержимое пробирки с компонентом А (0,6 мл) и все 
содержимое пробирки с магнетизированной силикой (0,9 мл).
б) закрыть крышку флакона и аккуратно перемешать переворачиванием 5-7 раз, 
избегая образования пены.
в) внести в пробирки на 5 мл по 2,6 мл подготовленной смеси лизирующего 
раствора МАГНО-сорб, ВКО /CZ-rec, компонента А и магнетизированной  
силики.
4. При экстракции РНК менее чем из 24 образцов:
а) смешать в отдельной стерильной пробирке на 1,5 мл ВКО /CZ-rec, компонент 
А и магнетизированную силику из расчета на одну точку 10 мкл ВКО /CZ-rec, 
20 мкл компонента А и 30 мкл магнетизированной силики. При расчете 
необходимо учитывать запас - рассчитывать на одну точку больше, например;
Количество образцов 
для экстракции РНК
ВКО /CZ- 
rec, мкл
Компонент А, 
мкл
Магнетизированная 
силика, мкл
6 70 140 210
12 130 260 ^ 390
18 190 380 570
б) внести в пробирки на 5 мл по 60 мкл подготовленной смеси ВКО /CZ-rec, 
компонента А и магнетизированной силики.
в) внести в пробирки на 5 мл по 2,6 мл лизирующего раствора МАГНО-сорб.
5. Добавить в каждую пробирку с лизирующим раствором 1 мл исследуемого  
образца плазмы и перемешать пипетированием, закрыть крышкой.
6. Для каждой панели необходимо поставить положительные контроли (ПК-1 и 
ПК-2). Для этого в приготовленную пробирку ПК-1 с лизирующим раствором
67936
21.10.2019


--- стр. 34 ---
■N-w«wiiXif>fcri«ic^uat.*j< 3i9t‘sattrs:.
на вортексе.
9. Поместить пробирки в термостат с температурой 60 °С на 10 мин.
10. Перенести пробирки в магнитный штатив на 2 мин.
11 .Осторожно, по внутренней стенке пробирки отобрать надосадочную жидкость, 
используя вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник для каждой пробы. 
Перенести пробирки в обычный штатив.
12. Добавить в пробирки по 700 мкл раствора для отмывки 5.
13. Смыть магнетизированную силику вортексированием, а затем осадить капли 
кратким центрифугированием.
14. Поставить пробирки в обычный штатив, открыть крышки и переставить в 
магнитный штатив. Инкубировать 2 мин.
15.Отобрать надосадочную жидкость и перенести пробирки в обычный штатив.
16. Повторить отмывку раствором для отмывки 5 (пп. 12-15).
17. Аналогично провести одну отмывку 700 мкл раствора для отмывки 6.
18. Добавить 200 мкл раствора для отмывки 7, перемешать, а затем осадить капли 
на вортексе. Поставить пробирки в обычный штатив и открыть крышки.
19. Переставить пробирки в магнитный штатив на 1 мин, затем отобрать 
надосадочную жидкость.
20. Высушить сорбент, оставив пробирки с открытыми крышками на магнитном 
штативе в течение 10 мин.
21. Добавить 70 мкл буфера для элюции и перемешать на вортексе.
22. Поместить пробирки в термостат при температуре 60 °С на 5 мин, через 2 мин 
перемешать на вортексе.
23. Коротко осадить капли на вортексе и переставить пробирки в магнитный штатив. 
Инкубировать 2 мин. Надосадочная жидкость содержит очищенные РНК и ДНК.
ВНИМАНИЕ! Отбор очищенной РНК для проведения ОТ-ПЦР осуществляется  
без снятия пробирок с магнитного штатива.
Очищенная РНК может храниться до 4 ч при температуре от 2 до 8 °С. Для 
длительного хранения препарата необходимо, не захватывая сорбент, перенести 
надосадочную жидкость в стерильную пробирку и хранить при температуре не выше 
минус 16 °С в течение 1 мес, или не выше минус 68 °С в течение года.
67936
21.10.2019


--- стр. 35 ---
ПРИЛОЖЕНИЕ 5
Экстракция РНК с использованием комплектов для экстракции, не входящих в 
состав данного набора реагентов
Заявленные аналитические характеристики набора реагентов при работе с 
формой 5 гарантируются только в случае экстракции РНК при помощи комплектов 
реагентов, рекомендованных ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора
Также см. методические рекомендации ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии 
Роспотребнадзора по применению набора реагентов «АмплиСенс® НСУ-Монитор- 
FL».
В случае, если коэффициент В для используемого комплекта 
реагентов/автоматической станции для экстракции нуклеиновых кислот не указан во 
вкладыше к набору реагентов «АмплиСенс® НСУ-Монитор-РБ», необходимо провести 
калибровку самостоятельно.
Калибровка необходима для определения коэффициента В и производится при 
первой постановке набора данной серии. Калибровка осуществляется один раз для 
каждой новой серии набора реагентов «АмплиСенс® НСУ-Монитор-РБ» и проводится 
на используемом для экстракции РНК комплекте реагентов/автоматической станции.
Для проведения калибровки необходимо при первой постановке набора реагентов 
данной серии провести анализ 5 дополнительных точек; дополнительный повтор ПКО- 
1, дополнительный повтор ПКО-2 и Калибратор HCV-Q в трех повторах.
Подготовка Калибратора HCV-Q к работе:
1. Осадить на вортексе содержимое пробирки, содержащей реагент Калибратор 
HCV-Q, и аккуратно открыть крышку и, избегая распыления содержимого, 
добавить 400 мкл Растворителя Q, используя одноразовые наконечники с 
фильтрами.
2. Плотно закрыть пробирку и оставить на 20 мин при комнатной температуре, 
периодически перемешивая на вортексе.
3. После полного растворения открутить содержимое пробирки калибратор HCV-Q 
на вортексе в течение 3-5 с для сброса капель жидкости с крышки.
Калибровку необходимо проводить на используемом для экстракции РНК
комплекте реагентов. Процедура экстракции РНК проводится в соответствии с 
инструкцией к комплекту реагентов/автоматической станции для экстракции 
нуклеиновых кислот. Обязательным условием является внесение ВКО /CZ-rec в
67936
21.10.2019


--- стр. 36 ---
образцы или лизирующего раствора до начала экстракции в объеме 10 мкл на одну 
пробу.
В случае если экстракция РНК проводится из 100 мкл плазмы - внести по 100 мкл 
растворенного калибратора HCV-Q в три пробирки для экстракции нуклеиновых 
кислот.
В случае если экстракция РНК проводится из прочего объема плазмы (100- 
1000 мкл) - внести в три пробирки, подготовленные для экстракции РНК, по 100 мкл 
растворенного калибратора HCV-Q и довести растворителем Q объем образца до 
используемого объема экстракции нуклеиновых кислот (например, при экстракции из 
1 мл внести 100 мкл растворенного калибратора HCV-Q и 900 мкл растворителя Q) .
После окончания экстракции РНК провести реакцию ОТ-ПЦР в соответствии с 
данной инструкцией.
Средние значения концентрации по каналам РАМ и JOE/HEX, полученные для 
трёх повторов калибратора HCV-Q, использовать в количественных расчетах для 
определения коэффициента В по следующей формуле:
Коэффициент В =
число копий ДНК ВКО (канал РАМ) в калибраторе HCV-Q 
число копий кДНК HCV (канал JOE/HEX) в калибраторе HCV-Q
X Коэффициент С
Коэффициент С указан во вкладыше к данной серии набора реагентов 
«АмплиСенс® /-/С\/-Монитор-Р1».
ВНИМАНИЕ! Вычисленное значение коэффициента В должно укладываться в 
диапазон, указанный во вкладыше к набору реагентов «АмплиСенс® HCV-Monmop- 
FL» данной серии.
Вычисленное значение коэффициента В записать во вкладыш для данной серии 
набора реагентов «АмплиСенс® НС\/-Монитор-РЕ» и использовать для расчета 
концентрации РНК HCV в исследуемых и контрольных образцах (см. раздел «Анализ 
и интерпретация результатов»).
Также см. методические рекомендации ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии 
Роспотребнадзора по применению набора реагентов «АмплиСенс® НСУ-Монитор- 
Р Ь > .
Значения, вычисленные для [ЖO-^-HCV и ПКО-2-HCV, записать во вкладыш для 
данной серии набора реагентов «АмплиСенс® НС\/-Монитор-Р1».
Найти среднее значение для ПКО-1-НСУ и среднее значение для ПКО-2-HCV. 
Установить диапазон допустимых значений для ПКО-1-НСУ и ПКО-2-HCV: от
67936
21.10.2019