Набор реагентов для выявления и типирования возбудителей грибковых инфекций рода Candida, Malassezia, Saccharomyces и Debaryomyces методом ПЦР в режиме реального времени (МикозоСкрин) по ТУ 21.20.23-104-46482062-2018 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 5 ---
Инструкция по применению Лист 5
МикозоСкрин Листов 37
сопровождающимися нейтропенией (гемобластозы, солидные опухоли, трансплантация
кроветворных стволовых клеток), недоношенные новорожденные е экстремально низкой
массой тела (ЭНМТ). Развитию инвазивных микозов способствуют: использование
центральных венозных или мочевых катетеров, эндотрахеальная интубация, полное
парентеральное питание, длительное пребывание в ОРИТ, применение антибактериальной,
кортикостероидной, цитостатической, лучевой и химиотерапии, обширные ожоги и т.д. В
зависимости от присутствия инфекции в крови и поражения внутренних органов, выделяют
фунгемию без поражения внутренних органов, органное поражение без фунгемии и
сочетание фунгемии и органного грибкового поражения. Летальность колеблется от 10 до
49 % в группах с различными факторами риска. Отмечено, что клинические симптомы при
сепсисе грибковой этиологии не отличаются от таковых при сепсисе бактериальной
природы, поэтому крайне важно своевременно выявлять этиологическую причину
инфекционного процесса. Примерно в 90 % случаев причиной фунгемий и инвазивных
микозов являются грибы рода Candida. Самым патогенным и часто встречающимся
является вид С. albicans (48-54%), реже диагностируются С. glabrata (13,8-23 %), С.
parapsilosis (11-18,5 %), С. auris (10 %), С. tropicalis (6-10 %), С. krusei (2-2,5 %). В
последние годы прослеживается тенденция к увеличению значимости non-albicans видов в
возникновении инвазивного кандидоза [18; 22; 23]. Наряду с грибами рода Candida,
этиологическое значение в развитии катетер-ассоциированной фунгемии имеют грибы рода
Malassezia, в частности Malassezia furfur [1; 12; 14; 16; 20; 24].
Существует прямая зависимость между сроками начала лекарственной терапии
противогрибковыми средствами и уровнем летальноети: назначение противогрибковой
терапии спустя 12 часов после начала инфекционного процесса увеличивает смертность
более чем в 2 раза. Задержка до 48-ми часов и более, увеличивает летальность почти в
3 раза в сравнении с ранним началом (до 12 чаеов) терапевтических мероприятий. Таким
образом, актуальным становится выявление этиологического фактора в кратчайшие сроки.
Однако «золотой стандарт» - культуральная диагностика не дает такой возможности,
поэтому перспективным признана разработка молекулярно-генетических методов, в т.ч.
метода ПЦР, который сократит время исследования до 3-4 часов, позволив увеличить
количество благоприятных исходов инфекционного процесса [2; 3; 13; 15; 21; 27; 28; 29; 30;
31].
Корректная и своевременная видовая идентификация, и количественная оценка
грибов - важная задача для постановки диагноза. В зависимости от видовой
принадлежности и количества возбудителя тактика лечения больных с инвазивными
--- стр. 6 ---
^ ^ ЛНК-ТШОЛОГНЯ
ч
Инструкция по применению Лист 6
МикозоСкрин Листов 37
микозами может существенно отличаться. Одним из наиболее перспективных подходов,
которые можно использовать для решения этой задачи, являются молекулярно
генетические методы с использованием полимеразной-цепной реакции (ПЦР). В сравнении
с фенотипическими микробиологическими методами такой подход наиболее быстрый
(классическая диагностика занимает более 48 часов), требует меньшего количества
биологического материала, что особенно важно при диагностике фунгемии у
глубоконедоношенных детей. По сравнению с методами, связанными с таргетным
секвенированием видоспецифических генов, ПЦР-методики существенно дешевле, гораздо
более доступны в клинической практике и занимают меньше времени.
Список литературы
1. Богданова, Т. В. Морфолого-физиологические характеристики дрожжевых
организмов - Malassezia species (Malassez, 1874) Bailloon, 1989 [Текст]: (обзор) /
Т. В. Богданова, Н. П. Блинова // Проблемы медицинской микологии. - 2011. - Т. 13. -
№ 1.-С. 3-14.
2. Бурова, С. А. Инвазивные микозы в отделениях интенсивной терапии: обзор
литературы (сообщение 1) // Инфекции в хирургии. - 2014. - Т. 12. - № 2. - С. 12-16.
3. Веселов, А. В. Инвазивный кандидоз: современные аспекты эпидемиологии,
диагностики, терапии и профилактики у различных категорий пациентов /
А. В. Веселов, Р. С. Козлов // Клин, микробиол. антимикроб, химиотер. - 2016. - Т. 18.
-№ 2.-С. 286-304.
Сахарук, Н. А. Кандидоз: этиология, клиника, диагностика, лечение: [монография] /
Н. А. Сахарук, В. В. Козловская. - Витебск: ВГМУ, 2010. - 192 с.
Крюков, А. И. Эпидемиология грибковых заболеваний верхних дыхательных путей и
уха / А. И. Крюков, В. Я. Кунельская, Г. Б. Шадрин // Проблемы медицинской
микологии. -2011. -Т. 13. -№ 1. -С. 28-31.
6. Маликов, В. Е. Этиология вагинального кандидоза и проблема устойчивости к
антимикотикам / В. Е.Маликов, И. Е. Жарикова, Т. А. Романовская, Д. Н. Рассказов //
Контрацепция и здоровье женщины. - 2002. - №1. - С. 9-16.
7. Мирзабалаева, А. К. Инфекционные вульвовагиниты: клиническая проблема и пути ее
решения // Акушерство и гинекология. - 2005. - № 6. - С. 51-55.
8. Мороз, А.Ф, Снегирёва, А.Е. Грибы рода Candida (Методы выделения, идентификации
на видовом уровне и определение чувствительности к противогрибковым препаратам) //
Методические рекомендации. - М.: НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, 2009. - 60 с.
9. Муравьева, В. В. Сравнительная оценка видовой идентификации вагинальных
изолятов дрожжевых грибов методом MALDI-TOF MS и традиционными
4.
5.
--- стр. 7 ---
Инструкция по применению
МикозоСкрин
Лист 7
Листов 37
f
(биохимическими и фенотипическими) методами / В. В. Муравьева,
Т. В. Припутневич, М. Г. Завьялова, А. С. Анкирская, Е. Н. Ильина // Клиническая
микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2014. - Т. 16. -№ 1. - С. 10-17.
10. Прилепская, В. Н. Вагинальный кандидоз: этиопатогенез, клиника, диагностика,
принципы терапии / В. Н. Прилепская, Г. Р. Байрамова // Контрацепция и здоровье
женщины. - 2002. - №1. - С. 3-8.
11. Прилепская, В. Н. Вульвовагинальный кандидоз: современные методы лечения //
Практическая гинекология. - М., 2001. - С. 177-189
12. Приходько, Н. А. Совершенствование диагностики, профилактики и лечения
инвазивных микозов у недоношенных новорожденных в условиях стационара /
Н. А. Приходько // Автореф. дис.... к-та мед. наук. - Москва, 2016. - 24 с.
13. Aliaga, S., Clark, R., Laughon, М., et al. Changes in theincidence of candidiasis in neonatal
intensive care units // Pediatrics. - 2014. - Vol. 133 (2). - P. 236-42.
14. Ashbee, H. R., Evans, E. G. Immunology of diseases associated ith Malassezia species
// Clin Microbiol Rev. - 2002. - Vol. 15. - P. 21-57.
15. Blumberg, H. M., Jarvis, W. R., Soucie, J. M. et al. Risk factors for candidal bloodstream
infections in surgical intensive care unit patients: the NEMIS prospective multicenter study.
The National Epidemiology of Mycosis Survey // Clin Infect Dis. - 2001. - Vol. 33. -
P. 177-86.
16. Cabanes, F. J., Vega, S., Castella, G. Malassezia cuniculi sp. nov., a novel yeast species
isolated from rabbit skin // Med Mycol. -2011.- Vol. 49. - № 1. - P. 40-48.
17. Chowdhary, A., Randhawa, H. S., Sharma, S., Brandt, M. E., Kumar, S. Malassezia furfur in
a case of onychomycosis: Colonizer or etiologic agent? // Med Mycol. - 2005. -
Vol. 43(1).-P. 87-90.
18. Clancy, C. J., Nguyen, M. H. Finding the «missing 50%» of invasive candidiasis: how
nonculture diagnostics will improve understanding of disease spectrum and transform
patient care // Clin Infect Dis. - 2013. - Vol. 56(9). - P. 1284-92.
19. Okungbowa, F. 1., Isikhuemhen, O. S, and Dede, A. P. O. The distribution frequency of
Candida species in the genitourinary tract among symptomatic individuals in Nigerian cities
// Revised Iberoam Microbiology. - 2003. - Vol. 20. - Jfo 2. - P. 60-63.
20. Gaitanis, G., Magiatis, P., Hantschke, M., Bassukas, 1. D., Velegraki, A. The Malassezia gen
us in skin and systemic diseases // Clin Microbiol Rev. - 2012. - Vol. 25. - P. 106-41.
21. Gudlaugsson, O., Gillespie, S., Lee, K., et al. Attributable mortality of nosocomial
candidemia, revisited // Clin Infect Dis. - 2003. - Vol. 37. - P. 1172-1177.
--- стр. 9 ---
Инструкция по применению Лист 9
МикозоСкрин Листов 37
i
1 НАЗНАЧЕНИЕ
1.1 Настоящая инструкция распространяется на Набор реагентов для выявления и
типирования возбудителей грибковых инфекций рода Candida, Malassezia, Saccharomyces и
Debaryomyces методом ПЦР в режиме реального времени (МикозоСкрин) по ТУ 21.20.23-
104-46482062-2018, далее по тексту - набор реагентов.
1.2 Набор реагентов предназначен для выявления и типирования возбудителей
грибковых инфекций рода Candida, Malassezia, Saccharomyces и Debaryomyces: Meyerozyma
guilliermondii (C. guilliermondii), Candida albicans, Pichia kudriavzevii (C.krusei),
Saccharomyces cerevisiae, Candida auris, Candida tropicalis, Clavispora lusitaniae (C.lusitaniae).
Debaryomyces hansenii (C.famata), Candida dubliniensis, Candida glabrata, Candida parapsilosis,
Malassezia spp., Kluyveromy cesmarxianus (C.kefyr), Malassezia furfur в препаратах,
полученных из биологического материала человека (кровь, мокрота, моча, мазки\соскобы
из дыхательных путей, желудочно- кишечного и урогенитального тракта, фекалии,
биоптаты), из смывов с катетеров и эндотрахеальных трубок, а также из культур
возбудителей микозов методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени
с использованием детектирующих амплификаторов.
1.3 Функциональное назначение: изделие предназначено для диагностики in vitro
(выявление и типирование возбудителей грибковых инфекций в препаратах ДНК,
полученных из биологического материала человека, из смывов с катетеров и
эндотрахеальных трубок, а также из культур возбудителей микозов).
1.4 Показания к проведению анализа: подозрение на кандидоз, кандидемию,
кандидурию или кандидоносительство; мониторинг динамики колонизации дрожжевыми
грибами нестерильных в норме локусов пациентов, ран, катетеров; инфекционный
контроль, в т.ч. у пациентов групп риска; исследование культур дрожжевых грибов с целью
видовой идентификации.
Исследование применимо как для анализа клинического материала из
предполагаемого очага инфекции, так и для предварительно выращенных на жидких и
плотных средах культур возбудителей микозов.
1.5 Применение медицинского изделия не зависит от популяционных и
демографических аспектов. Противопоказаний к применению нет.
1.6 Набор может быть использован в клинико-диагностических лабораториях
медицинских учреждений и научно-исследовательской практике.
1.7 Потенциальные пользователи: квалифицированный персонал, обученный
методам молекулярной диагностики и правилам работы в клинико-диагностической
лаборатории.
1.8 Применять набор реагентов строго по назначению согласно данной
инструкции по применению.
--- стр. 10 ---
к
Инструкция по применению Лист 10
МикозоСкрин Листов 37
2 ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1 Состав набора
Набор реагентов выпускается в стандартной фасовке (маркируетея - фасовка S) и
включает следующие компоненты:
R1-P023-S3/S, фасовка S
Наименование компонентов Внешний вид Количество
пробирок
Номинальный
объём компонента
Смеси для амплификации,
запечатанные парафином
Прозрачная бесцветная или голубая
жидкость под белым воскообразным
слоем
24 стрипа по
8 пробирок по 20 мкл
Раствор Taq-полимеразы Прозрачная бесцветная жидкость 4 пробирки по 500 мкл
Минеральное масло Прозрачная бесцветная вязкая
маслянистая жидкость 4 пробирки по 1,0 мл
Положительный контрольный
образец Прозрачная бесцветная жидкость 1 пробирка 320 мкл
Крышки для Стрипов 24 шт.
Все компоненты набора реагентов готовы к применению и не требуют
дополнительной подготовки к работе.
2.2 Количеетво анализируемых проб
Набор реагентов предназначен для одноразового применения и рассчитан на
проведение 24 определений, что соответствует исследованию не более 20 неизвеетных
образцов, отрицательного контрольного образца и положительного контрольного образца.
2.3 Принцип метода
Метод: Полимеразная цепная реакция (ПЦР) с детекцией результатов в* режиме
реального времени; полуколичественный мультиплексный анализ. Результат исследования
выражен десятичным логарифмом количества копий ДНК-мишени в 1 мл препарата ДНК.
Принцип метода основан на использовании процесса амплификации ДНК с
помощью полимеразной цепной реакции. Процесс амплификации заключается в серии
повторяющихся циклов температурной денатурации ДНК, отжига праймеров с
комплементарными последовательностями и последующей достройкой полинуклеотидных
цепей с этих праймеров Taq-полимеразой.
Для повышения чувствительности и специфичности реакции предусмотрено
применение «горячего» старта, который обеспечивается для стандартной фасовки набора
реагентов методикой приготовления реакционной смеси, состоящей из двух слоёв,
разделённых прослойкой из парафина. Смешение слоёв и превращение их в реакционную
10
--- стр. 11 ---
Инструкция по применению Лист 11
МикозоСкрин Листов 37
смесь происходит только после плавления парафина, что исключает неспецифический
отжиг праймеров на ДНК-мишени при начальном прогреве пробирки.
В реакционную смесь для амплификации введены ДНК-зонды, каждый из которых
несёт флуоресцентную метку и гаситель флуоресценции. При образовании специфичного
продукта ДНК-зонд разрушается, действие гасителя на флуоресцентную метку
прекращается, что ведёт к возрастанию уровня флуоресценции, который фиксируется
детектирующим амплификатором. Количество разрушенных зондов (а, следовательно, и
уровень флуоресценции) увеличивается пропорционально количеству образовавшихся
специфических ампликонов и измеряется на каждом цикле амплификации.
В состав ДНК-зондов, использующихся для детекции продуктов амплификации
фрагментов геномов определяемых возбудителей микозов, включены флуоресцентные
метки Fam и Су5. В состав ДНК-зондов, использующихся для детекции продуктов
амплификации внутреннего контрольного образца (ВК) и контроля взятия материала
(КВМ), входит флуоресцентный краситель Hex.
Использование нескольких флуоресцентных красителей позволяет сократить
количество пробирок, поскольку появляется возможность одновременно регистрировать
результаты разных реакций амплификации, проходящих в одной пробирке.
В наборе реагентов в состав смесей для амплификации № 1 -7 добавлен внутренний
контроль (ВК), предназначенный для оценки эффективности протекания полимеразной
цепной реакции.
В состав смеси для амплификации в пробирке № 8 входит смесь для определения
КВМ, который необходим для анализа качества вьщеления ДНК из образцов
биологического материала, содержащего клетки человека, и позволяет определить,
достаточно ли полученного количества ДНК для проведения анализа.
Для контроля расположения стрипа в термоблоке детектирующего амплифйкатора,
в смесь для амплификации пробирки стрипа № 3 добавлен олигонуклеотид с
флуоресцентной меткой Rox - «Маркер». Он используется прибором как маркер
определения положения стрипа в термоблоке детектирующего амплификатора. После
прохождения амплификации программа сравнивает заданное оператором расположение
пробирок с реальным положением маркера, и, если находит несовпадение, то
предупреждает оператора об этом несоответствии.
Перечень показателей, определяемых набором реагентов, каналы детекции
продуктов амплификации и цветовая маркировка смеси приведены в таблице 1.
Определение десятичного логарифма (Ig) концентрации (количество копий ДНК-
мишени в 1 мл препарата ДНК) проводится с использованием метода сравнения пороговых
--- стр. 12 ---
IW
4
Инструкция по применению Лист 12
МикозоСкрин Листов 37
циклов, также называемым методом AACt. Преимуществом метода AACt является более
точное определение соотношения количества ДНК-мишеней даже в условиях
субоптимальной эффективности ПЦР без необходимости построения калибровочной
кривой (Shefe J. Н. Quantitative real-time RT-PCR data analysis: cun-ent concepts and thenovel
«gene expression’s Ct difference» formula [Text] / J. H. Shefe, K. E. Lehmann, 1. R. Buschmann,
T. Unger, H. Funke-Kaiser // J. Mol. Med. - 2006. - Vol. 84. - P. 901-910 [DOI 10.1007/s00109-
006-0097-6]).
В расчёте учитывается значения порогового цикла (Ct) и эффективности
амплификации. Пороговый цикл - это точка на оси абсцисс графика накопления продуктов
в зависимости от номера цикла амплификации. Для нахождения порогового цикла
используют метод Crossing point - определение максимума второй производной (Ср)
(Ребриков и др., 2014). Эффективность ПЦР - это число, показывающее, во сколько раз за
один цикл амплификации изменится количество фрагментов ДНК.
Расчет проводится согласно формуле:
logiNO,) = l o g m х (Ср - Cr.), (1)
где NOa- исходное количество копий ДНК-мишени в 1 мл препарата ДНК исследуемого
образца;
Е - эффективность ПЦР;
Ср - пороговый цикл для образца, содержащего единственную молекулу ДНК;
Сра - пороговый цикл ДЛЯ анализируемого образца.
Значения Е и Ср являются константами, примерно равными 2 и 45 соответственно.
При максимальном значении эффективности ПЦР, равном 2, и при наличии выявляемой
ДНК в исследуемом образце количество целевого ампликона увеличивается в 10 фаз (на
llg) за 3,4 цикла амплификации. Точное значение этих параметров для каждого набора
праймеров и зондов хранится в файле настроек программного обеспечения.
Контроль эффективности ПЦР осуществляется с помощью положительного
контрольного образца, входящего в состав набора.
Полное исследование состоит из следующих этапов: вьщеление ДНК
(пробоподготовка) комплектом/набором реагентов для выделения НК (см. п. 7.1) и ПЦР-
амплификации с использованием набора реагентов МикозоСкрин.
2.4 Время проведения анализа (без учета пробоподготовки): от 1,5 часов.
--- стр. 13 ---
к
V
л;'диктЕхнология Инструкция по применению
МикозоСкрин
Лист 13
Листов 37
Таблица 1 - Перечень показателей, определяемых набором реагентов, каналы детекции
продуктов амплификации и цветовая маркировка смеси
№
пробирки
в стрипе
Канал детекции Цветовая
маркировка
смесиFam Hex Rox Су 5 Cy5.5
1
Meyerozyma
guilliermondii
(C.guilliermondi)
BK - - -
■ ■ ' ...-
Голубая
2 Candida albicans BK - Pichia kudriavzevii
(C.krusei) -
Бесцветная
3 Saccharomyces
cerevisiae BK Маркер Candida auris -
4 Candida tropicalis BK -
Clavispora
lusitaniae (Candida
lusitaniae)
-
5
Debaryomyces
hansenii
(C.famata)
BK - Candida
dubliniensis -
6 Candida glabrata BK - Candida
parapsilosis -
7 Malassezia spp. BK - Malassezia furfur -
8
Kluyveromyces
marxianus
____(C.kefyr)____
KBM - - -
--- стр. 14 ---
Инструкция по применению Лист 14
МикозоСкрин Листов 37
3 АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
3.1 Специфичность анализа
В образпах исследуемого материала, содержащего ДНК выявляемых возбудителей
микозов, во время проведения амплификации программное обеспечение детектирующего
амплификатора фиксирует положительные результаты амплификации специфических
продуктов по заявленным каналам детекции.
В образцах исследуемого материала, не содержащего ДНК выявляемых
возбудителей микозов, при проведении амплификации программное обеспечение
детектирующего амплификатора фиксирует отрицательные результаты амплификации
специфических продуктов по заявленным каналам детекпии.
В образцах исследуемого материала, где присутствует геномная ДНК человека, при
проведении амплификации программное обеспечение детектирующего амплификатора
должно фиксировать положительный результат амплификации КВМ.
В образцах исследуемого материала, где отсутствует геномная ДНК человека, при
проведении амплификации программное обеспечение детектирующего амплификатора
должно фиксировать отрицательный результат амплификации КВМ.
Показано отсутствие перекрестных неспецифических реакций для каждой
специфической системы, входящей в состав набора, к аналитам, выявляемым другими
специфическими системами набора, а также неспецифических положительных результатов
амплификации при наличии в образцах ДНК других микроорганизмов и\или ДНК человека
о
в концентрации до 1,Ох 10 копий/мл образца.
3.2 Предел обнаружения
Предел обнаружения установлен путем анализа серийных разведений
лабораторных контрольных образцов (ЛКО) и составляет 5 копий ДНК на
амплификационную пробирку (1x10^ копий/мл препарата ДНК).
Предел обнаружения зависит от вида биоматериала, используемого набора
(комплекта) реагентов для вьщеления ДНК и конечного объёма элюции (разведения)
вьщеленной ДНК. Например, чувствительность набора МикозоСкрин для культуры
дрожжевых грибов составляет 50 копий/образец при вьщелении ДНК набором ПРОБА-НК
(объем элюции 50 мкл).
--- стр. 15 ---
, ^ ЛНК-ТВ(ИОЛОГМЯ Инструкция по применению Лист 15
МикозоСкрин I Листов 37
%
3.3 Интерферирующие вещества
Наличие интерферирующих веществ (ИВ) в образце биологического материала
может быть причиной ингибирования ПЦР и получения недостоверных результатов.
Признаком ингибирования ПЦР является одновременное отсутствие амплификации
внутреннего контроля и специфического продукта (см. раздел 2.3, раздел 9.4).
К ингибиторам ПЦР по результатам анализа рисков отнесены следующие
вещества: гемоглобин, присутствующий в образце ДНК в результате неполного удаления в
ходе выделения ДНК из образца биоматериала содержащего примесь крови, а также
изопропиловый спирт и метилацетат, присутствующие в образце ДНК в результате
неполного удаления промывочных растворов в ходе пробоподготовки.
Максимальные концентрации интерферирующих веществ, при которых не
наблюдалось влияние на амплификацию лабораторного контрольного образца и
внутреннего контрольного образца составляют: гемоглобин - 0,35 мг/мл образца ДНК,
изопропиловый спирт - 100 мкл/мл образца ДНК, метилацетат - 100 мкл/мл образца ДНК;
концентрации ИВ в образцах крови, при которых не наблюдается ингибирование ПЦР:
билирубин - 684 мкмоль/л, холестерин - 13 ммоль/л, триглицериды - 37 ммоль/л.
Примеси, содержащиеся в образце биоматериала, такие как слизь, кровь, элементы
тканевого распада и воспаления, местные лекарственные препараты, в том числе
содержащиеся в вагинальных свечах, тальк, спермицид и др. удаляются в ходе выделения
ДНК с использованием комплектов/наборов для пробоподготовки. Для снижения
количества ингибиторов ПЦР необходимо соблюдать правила взятия биологического
материала. При подозрении на наличие в образце больщого количества ингибиторов ПЦР
рекомендуется выбирать методы вьщеления ДНК, позволяющие максимально удалить
ингибиторы ПЦР из образца, не рекомендуется использовать экспресс-методы вьщеления
ДНК.
--- стр. 26 ---
^;^ЛНк-ТЕХиолоп1я Инструкция по применению Лист 27
МикозоСкрин Листов 37
7 ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
7.1 Выделение ДНК из иееледуемого материала
Для выделения ДНК рекомендуется использовать комплектьЛнаборы
реагентов, имеющие регистрационные удостоверения медицинского изделия и
предназначенные для соответствующих видов биоматериала с целью последующего
исследования ДНК методом ПЦР, например, комплект реагентов ПРОБА-НК,
производства ООО «ДНК-Технология ТС», Россия.
Вьщеление ДНК из исследуемого материала проводят в соответствии с инструкцией к
используемому комплекту/набору реагентов.
Контроль качества выделенной ДНК осуществляется в ходе ПЦР с помощью
системы внутреннего контроля (ВК), см.п.9.
ВНИМАНИЕ! Выделение ДНК из смывов с фрагментов венозных катетеров рекомендуется
проводить с помощью комплекта реагентов ПРОБА-НК (см. 6.5.8).
ВНИМАНИЕ! Одновременно с вьщелением ДНК из исследуемого материала необходимо
подготовить отрицательный контрольный образец, прощедщий все этапы
цробоподготовки. В качестве отрицательного контрольного образца рекомендуется
использовать физиологический раствор в объёме, указанном в инструкции к комплекту
реагентов для выделения нуклеиновых кислот, или отрицательный контрольный образец,
входящий в состав соответствующего комплекта реагентов.
7.2 Подготовка и проведение ПЦР
ВНИМАНИЕ! При проведении всех последующих действий следует избегать воздействия
прямьк солнечных лучей на пробирки со смесью для амплификации!
7.2.1 Промаркируйте по одному стрипу со смесью для амплификации,
запечатанной парафином, для каждого исследуемого образца, отрицательного контрольного
образца «К-» и положительного контрольного образца «К+».
Пример: Необходимо проанализировать два образца. Для этого необходимо
промаркировать четыре стрипа: два для исследуемых образцов, один для «К-» и один для
«К+» (таблица 2).
--- стр. 27 ---
Инструкция по применению Лист 28
МикозоСкрин Листов 37
Таблица 2 - Пример маркировки стрипов и пробирок для проведения ПЦР
Образцы № стрица № пробирки в стрипе
Образец 1 1 Пробирки 1-8
Образец 2 2 Пробирки 1-8
К- 3 Пробирки 1-8
К+ 4 Пробирки 1-8
7.2.2 Встряхните пробирку с раствором Taq-полимеразы в течение 3-5 с на
микроцентрифуге-вортексе и центрифугируйте в течение 1-3 с на микроцентрифуге-
вортексе.
7.2.3 Добавьте в каждую пробирку стрипов, не повреждая слой парафина, по
10 мкл раствора Taq-полимеразы.
7.2.4 Добавьте в каждую пробирку стрипов по одной капле (около 20 мкл)
минерального масла. Закройте крышки стрипов.
7.2.5 Встряхните пробирки с препаратом ДНК, отрицательным контрольным
образцом и положительным контрольным образцом в течение 3-5 с на микроцентрифуге-
вортексе и центрифугируйте в течение 1 -3 с на микроцентрифуге-вортексе.
ВНИМАНИЕ! Для предотвращения контаминации следует перед внесением ДНК
открывать крышку только того стрипа, в который будет вноситься данный образец, и
закрывать её перед внесением следующего. Препараты ДНК и контрольные образцы
следует вносить наконечниками с фильтром.
7.2.6 Внесите в каждую пробирку соответствующего промаркированного стрипа,
не повреждая слой парафина, по 5,0 мкл выделенного из образца препарата ДНК (кроме
стрипов, промаркированных «К+» и «К-»).
7.2.7 Внесите в каждую пробирку стрипа, промаркированного «К-», не повреждая
слой парафина, по 5,0 мкл отрицательного контрольного образца, прошедшего этап
выделения ДНК (см. 7.1).
7.2.8 Внесите в каждую пробирку стрипа, промаркированного «К+», не повреждая
слой парафина, по 5,0 мкл положительного контрольного образна.
7.2.9 Центрифугируйте все стрипы в течение 1-3 с на микроцентрифуге-вортексе.
7.2.10 Установите все стрипы в блок детектирующего амплификатора.
7.2.11 Запустите программное обеспечение RealTime PCR в режиме «Работа с
прибором». При первом проведении ПЦР загрузите файл «Mycosis_screen.ini». Далее и при
последующих постановках добавьте в протокол тест «Mycosis screen», укажите количество
28
--- стр. 28 ---
iv
, ^ ДНК-ТВ(ИШ10П1Я Инструкция по применению
МикозоСкрин
Лист 29
Листов 37
и идентификаторы образцов, в том числе отрицательного и положительного контрольных
образцов, отметьте расположение стрипов на матрице термоблока в соответствии с их
установкой (см. 7.2.10) и проведите ПЦР.
При выборе теста «Mycosis screen» в окне «Запуск программы амплификации»
должна отображаться программа, приведённая в таблице 3.
Таблица 3 - Программа амплификации для детектирующих амплификаторов
«ДТпрайм», «ДТлайт» и ДТ-96
^ №
блока Температура, °С мин с Число
циклов {
Рошм
оптических
измерений
1 ип
блока
1 80 0 30 1 Цикл94 1 30
2 94 0 30 5 Цикл64 0 15 V
3 94 0 10 45 Цикл64 0 15 V
4 94 0 5 1 Цикл
5 10 Хранение Хранение
--- стр. 33 ---
7ДНК-Т1ХН0Л0ГИЯ Инструкция по применению Лист 34
МикозоСкрин Листов 37
10 ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ, ХРАНЕНИЕ И ЭКСПЛУАТАЦИЯ
10.1 Т ранспортирование
10.1.1 Транспортирование набора реагентов осущеетвляют в термоконтейнерах с
хладоэлементами всеми видами крытого транспорта при температуре внутри контейнера от
2 °С до 25 °С не более 5 суток.
10.1.2 Наборы реагентов, транспортированные с нарушением температурного
режима, применению не подлежат.
10.2 Хранение
10.2.1 Набор реагентов еледует хранить в холодильнике или холодильной камере
при температуре от 2 °С до 8 °С в течение всего срока годности набора.
10.2.2 Смеси для амплификации, запечатанные парафином, следует хранить в
холодильнике или холодильной камере при температуре от 2 °С до 8 °С в защищённом от
евета меете в течение веего срока годности набора реагентов.
10.2.3 Наборы реагентов, хранившиеея е нарушением регламентированного
режима, применению не подлежат.
10.3 Указания по эксплуатации
10.3.1 Набор реагентов должен применяться согласно действующей вереии
утвержденной инетрукции по применению.
10.3.2 Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение
инструкции по применению набора реагентов.
10.3.3 Поеле вскрытия упаковки компоненты набора реагентов еледует хранить
при следующих условиях:
- компоненты набора реагентов следует хранить в холодильнике или холодильной
камере при температуре от 2 °С до 8 °С в течение всего срока годности набора реагентов;
- смееи для амплификации, запечатанные парафином, следует хранить в
холодильнике или холодильной камере при температуре от 2 °С до 8 °С в защищённом от
света месте в течение всего срока годности набора реагентов.
10.3.3 Наборы реагентов е истекшим сроком годности применению не подлежат.
--- стр. 34 ---
Инструкция по применению
МикозоСкрин
Лист 35
Листов 37
11 УКАЗАНИЯ ПО УТИЛИЗАЦИИ
11Л При использовании набора реагентов в клинико-диагностической
лаборатории образуются отходы классов А и Б, которые классифицируются и
утилизируются в соответствии с требованиями СанПиН 2Л.7.2790-10.
11.2 Наборы реагентов, пришедшие в непригодность, в том числе, в связи с
истечением срока годности, и неиспользованные реактивы, отноеятся к классу Б и
подлежат утилизации в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.7.2790-10 и МУ 1.3.2569-
09.
11.3 Упаковка набора реагентов (коробки, грипперы) после использования по
назначению, относится к отходам класса А и утилизируется с бытовыми отходами.
12 ГАРАНТИИ ИЗГОТОВИТЕЛЯ
12.1 Предприятие-изготовитель гарантирует соответствие набора реагентов
требованиям технических условий при соблюдении уеловий транспортирования, хранения
и экеплуатации, установленных техническими условиями.
12.2 Срок годности набора реагентов - 12 месяцев при соблюдении всех условий
транспортирования, хранения и эксплуатации.
13 РЕМОНТ И ТЕХНИЧЕСКОЕ ОБСЛУЖИВАНИЕ
Набор реагентов предназначен для одноразового использования и не подлежит
техническому обслуживанию и текугцему ремонту.
14 СИМВОЛЫ, ИСПОЛБЗУЕМБ1Е ПРИ МАРКИРОВКЕ НАБОРА РЕАГЕНТОВ
| ivd | Только для диагностики in vitro d] Дата производства
I Температурный диапазон □а Содержит инструкцию по
применению
V Количество определений [r e f ) Каталожный номер
S Годен до i J Адрес производителя
[LOTj Серия набора реагентов Не допускается воздействие
солнечного света
--- стр. 35 ---
7ДНКТЕХН0110ГИЯ Инструкция по применению Лист 36
МикозоСкрин Листов 37
I
15 ПЕРЕЧЕНЬ ПРИМЕНЯЕМЫХ НАЦИОНАЛЬНЫХ СТАНДАРТОВ
гост 2.105-95 Общие требования к текстовым документам.
ГОСТ ISO 14971-2011 Изделия медицинские. Применение менеджмента риска к
медицинским изделиям.
ГОСТ Р 15.309-98 Система разработки и постановки продукции на производство.
Испытания и приёмка выпускаемой продукции. Основные положения.
ГОСТ Р 51088-2013 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Реагенты, наборы
реагентов, тест-системы, контрольные материалы, питательные среды. Требования к
изделиям и поддерживающей документации.
ГОСТ Р 51352-2013 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Методы испытаний.
ГОСТ Р 53022.3-2008 Требования к качеству клинических лабораторных исследований, Ч.З.
Правила оценки клинической информативности лабораторных тестов.
ГОСТ Р ИСО 18113-1-2015 Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация,
предоставляемая изготовителем (маркировка). Часть 1. Термины, определения и общие
требования.
ГОСТ Р ИСО 18113-2-2015 Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация,
предоставляемая изготовителем (маркировка). Часть 2. Реагенты для диагностики in vitro
для профессионального применения.
ГОСТ Р ИСО 23640-2015 Медицинские изделия для диагностики in vitro. Оценка
стабильности реагентов для диагностики in vitro.
ГОСТ Р ИСО 15223-1-2014 Изделия медицинские. Символы, применяемые при
маркировании на медицинских изделиях, этикетках и в сопроводительной документации.
4.1. Основные требования.
ГОСТ Р 52905-2007 (ИСО 15190:2003) Лаборатории медицинские. Требования
безопасности.
Примечание - Указанные выше стандарты были действующими на момент утверждения
инструкции по применению. В дальнейшем, при пользовании документом, целесообразно
проверить действие ссылочных нормативных документов на текущий момент. Если ссылочный
документ заменён или изменён, то при применении настоящего документа следует пользоваться
заменённым (изменённым документом).
--- стр. 36 ---
Инструкция по применению
МикозоСкрин
Лист 37
Листов 37
16 АДРЕС ДЛЯ ОБРАЩЕНИЯ
Производство наборов реагентов имеет сертифицированную систему менеджмента
качества и соответствует требованиям стандарта систем менеджмента качества ISO 9001 в
области разработки, производства и продажи IVD реагентов и приборов для молекулярно
генетической диагностики, и другого лабораторного применения и EN ISO 13485 в области
разработки, производства и продажи 1VD реагентов и приборов для медицинской
молекулярно-генетической диагностики.
Производитель: Общество с ограниченной ответственностью «ДНК-Технология ТС»;
ООО «ДНК-Технология ТС», Россия.
Адрес производителя: ООО «ДНК-Технология ТС», Россия, 117246, г. Москва, Научный
проезд, д. 20, стр. 4.
Место производства:
ООО «ДНК-Технология ТС»: Россия, 117246, г. Москва, Научный проезд, д. 20, стр.4
Рекламации по вопросам качества набора реагентов МикозоСкрин следует
направлять по адресу: ООО «ДНК-Технология», 117587, г. Москва, Варшавск lUOCCCj
д. 125 ж, К.6, этаж 5, ком. 14, тел./факс +7 (495) 640-17-71, www.dna-technology.ru
Служба клиентской поддержки:
8(800) 200-75-15 (звонок по России бесплатный),
+7(495) 640-16-93 (для стран СНЕ и зарубежья, звонок платный),
E-mail: hotline@dna-technology.ru
Старший научный сотрудник
ООО «НПФ ДНК-Технология»
■ >
Л.В
£75 —Огнева
.2020
СОЕЛАСОВАНО
Директор ФЕБУ «НМИЦ АГП
им. В.И. Кулакова» Минздрава России,
академик РАН, профессор
-Li- Сухих
2020 г.