Набор реагентов для количественного иммуноферментного определения тиреотропного гормона в сыворотке крови человека ("ТироидИФА-ТТГ") по ТУ 9398-213-98539446-2016 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2011/11309 от 12.07.2011 · класс риска 2а

Производитель: ООО "Компания Алкор Био" (Россия)

Вид изделия: Тиреотропный гормон (ТТГ) ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 346 контрактов, медианная цена за единицу 6 630 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
Инструкция по применению_ТироидИФА-ТТГ
«УТВЕРЖДАЮ»
Генеральный директор 
пания Алкор Био» 
Швырев М.В. 
сентября 2016г.
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ'^'
НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО 
ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ 
ТИРЕОТРОПНОГО ГОРМОНА 
В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА 
(«Т ироидИФ А-ТТГ »)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «ТироидИФА-ТТГ» предназначен для количественного 
иммуноферментного определения тиреотропного гормона (ТТГ) в сыворотке крови 
человека.
1.2. ТТГ — гликопротеиновый гормон с молекулярным весом около 30 000 Да, 
состоягций из двух субъединиц — альфа (а) и бета (Р). ТТГ секретируется передней долей 
гипофиза и стимулирует синтез трийодтиронина и тироксина в щитовидной железе. 
Количественное определение уровня ТТГ в крови имеет диагностическое значение при 
оценке тироидного статуса организма.
1.3. Набор «ТироидИФА-ТТГ» рассчитан на проведение анализа в дубликатах 
40 неизвестных, 6 калибровочных проб, одной пробы контрольной сыворотки и одной 
пробы для определения оптической плотности раствора ТМБ при использовании всех 
стрипов одновременно (всего 96 определений).
Примечание: в случае дробного применения набор может быть использован  
только в течение месяца после вскрытия компонентов набора.
2. ТРЕБОВАНИЯ К ПЕРСОНАЛУ,  
ВЫПОЛНЕНИИ ИССЛЕДОВАНИЙ
УЧАСТВУЮЩЕМУ В
Исследования могут выполнять специалисты не моложе 18 лет с высшим и 
средним медицинским, биологическим или иным образованием, окончившие 
соответствующие курсы специальной подготовки с освоением методов безопасной работы 
с патогенными биологическими агентами (ПБА) 1-П групп патогенности. Персонал, 
проводящий исследования с использованием данного набора реагентов, должен владеть 
навыками проведения молекулярно-биологических исследований и работы на 
соответствующем оборудовании.
3. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
3.1. Принцип действия
В наборе «ТироидИФА-ТТГ» использован «сэндвич»-вариант твердофазного 
иммуноферментного анализа. Для реализации этого варианта использованы два 
моноклональных антитела с различной эпитопной специфичностью к ТТГ. Одно из них
1


--- стр. 2 ---
Инструкция по применению_ТироидИФА-ТТГ
иммобилизовано на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок), второе конъюгировано 
с пероксидазой хрена. В лунках, при добавлении исследуемого образца и конъюгата анти- 
ТТГ-пероксидаза, во время инкубации одновременно происходит иммобилизация ТТГ, 
содержащегося в исследуемом образце, и связывание его с конъюгатом. При удалении 
содержимого из лунок и промывке происходит удаление избытка конъюгата анти-ТТГ- 
пероксидаза, не связавшегося с иммобилизованным в ходе инкубации ТТГ. Количество 
связавшегося конъюгата прямо пропорционально количеству ТТГ в исследуемом образце 
(Рис.1).
ТТГ
Планшет
анти-ТТГ -пероксидаза
с антителами к ТТГ
Рисунок 1. Схема анализа
Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. 
Степень окраски прямо пропорциональна концентрации ТТГ в анализируемых пробах. 
После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочного 
графика рассчитывается концентрация ТТГ в исследуемых образцах.
3.2 Состав набора
комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов в рамке с иммобилизованными на 
внутренней поверхности лунок моноклональными антителами к ТТГ, маркирован 
«Стрипы с моноклональными антителами к ТТГ» — 1  упаковка;
калибровочные пробы (КП), аттестованные по Третьему международному 
стандарту на ТТГ человека WHO 81/565, содержащие известные количества ТТГ. Точные 
значения концентраций ТТГ в калибровочных пробах указаны на этикетках флаконов, 
ориентировочные - 0; 0,25; 0,75; 2,5; 7,5 и 15 мкМЕ/мл - 6 флаконов (лиофилизованные 
препараты или жидкости по 0,5 мл);
конъюгат анти-ТТГ-пероксидаза, маркирован «Конъюгат Е» — 1  флакон (14 мл);
водно-солевой раствор для разведения образцов сыворотки крови, маркирован 
«Буфер Д» — 1  флакон (3,0 мл);
концентрированный водно-солевой раствор для промывки лунок, маркирован 
«Буфер Р» — 2 флакона (14 мл);
раствор тетраметилбензидина, маркирован «Раствор ТМБ» — 1  флакон (14 мл);
стоп-реагент (1 Н соляная кислота), маркирован «Стоп-реагент» — 1  флакон 
(14 мл);
- контрольная сыворотка с известным содержанием ТТГ, маркирована «Контрольная 
сыворотка» — 1 флакон (лиофилизованный препарат или жидкость 0,5 мл;
прозрачный пластиковый пакет с замком (при упаковке стрипов в пакет из 2- 
слойного полиэтилена).
4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
4.1 Специфичность. Не обнаружено перекрестной реакции моноклональных 
антител к Р-субъединице ТТГ с хорионическим гонадотропином, лютеинизирующим и


--- стр. 3 ---
Инструкция по применению_ТироидИФА-ТТГ
фолликулостимулирующим гормонами.
4.2. Коэффициент вариации результатов определения ТТГ в одном и том же 
образце с использованием набора «ТироидИФА-ТТГ» не превышает 8 %.
4.3. Линейность. Зависимость концентрации ТТГ в образцах сыворотки крови 
при разведении их буфером Д имеет линейный характер в диапазоне концентраций 
калибровочных проб №2 - №6 и составляет 90-110 %.
4.4. Точность. Данный аналитический параметр проверяется тестом на 
«открытие» ТТГ — проверка еоответствия значения определяемой концентрации ТТГ 
раечетной величине, полученной путем смешивания равных объемов контрольной 
еыворотки и КП №6. Процент открытия составляет 90-110 %.
4.5. Чувствительность. Минимальная достоверно определяемая набором 
концентрация ТТГ в сыворотке крови человека не превышает 0,05 мкМЕ/мл.
4.6. Хук-эффект высоких концентраций. В наборах реагентов, основанных на 
«сэндвич»-принципе анализа, при высоких концентрациях аналита завиеимоеть величины 
оптической плотности от концентрации становится обратно пропорциональной (так 
называемый хук-эффект выеоких концентраций). При использовании набора 
«ТироидИФА-ТТГ» хук-эффект не обнаружен вплоть до концентрации ТТГ 800 мкМЕ/мл.
4.7. Диапазон ожидаемых значений. Содержание ТТГ измеряли в сыворотке 
крови, взятой с 9 до 11 часов у 140 здоровых лиц в возрасте 21-45 лет. Средняя 
концентрация ТТГ составила 1,37 мкМЕ/мл (0,23-3,4 мкМЕ/мл).
Диапазон ожидаемых значений зависит от многих факторов: специфичности 
метода, особенноетей иееледуемой популяции, точности метода в конкретной 
лаборатории. По этой причине каждой лаборатории рекомендуется использовать 
предоставленные изготовителем значения только до тех пор, пока специалистами 
лаборатории не будут определены диапазоны ожидаемых значений, характерных для 
конкретной популяции в месте расположения лаборатории.
5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
класс 2а (согласно Приказу5.1. Потенциальный риек применения набора 
Министеретва здравоохранения РФ №4н от 06.06.2012г.).
5.2. Все компоненты набора в используемых концентрациях являются 
нетоксичными.
5.3. При работе с набором следует соблюдать требования ГОСТ Р 52905-2007 
«Лаборатории медицинские. Требования безопасноети».
5.4. Стоп-реагент представляет еобой 1  Н раствор соляной кислоты. Избегать 
разбрызгивания и попадания на кожу и слизистые. В случае попадания раствора стоп- 
реагента на кожу и слизистые необходимо промыть пораженный участок большим 
количеством проточной воды.
5.5. При работе е набором еледует надевать одноразовые резиновые или 
пластиковые перчатки, разрешенные на территории РФ, т.к. производные крови, 
входящие в состав набора, и исследуемые образцы являются потенциально 
инфицированным материалом, способным длительное время сохранять и передавать 
возбудителей различных вируеных инфекций.
5.6. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с 
набором, должны быть соответствующим образом маркированы и храниться отдельно.
5.7. Запрещается прием пищи, использование косметических средств и курение 
в помещениях, предназначенных для работы с наборами.
5.8. Убирать и дезинфицировать разлитые образцы или реактивы, используя 
дезинфицирующие средетва в еоответствии МУ-287-113 «Методические указания по 
дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского 
назначения».
5.9. Удалять неиепользованные реактивы в соответствии с требованиями


--- стр. 4 ---
Инструкция по применению_ТироидИФА-ТТГ
СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемилогические требования к обращению е 
медицинскими отходами».
5.10. Все использованные одноразовые материалы и остатки образцов должны 
быть подвергнуты обработке дезинфицирующими средствами с последующей 
утилизацией в соответствии с требованиями СП 2.1.7.2790-10 и МУ-287-113.
5.11. Перед началом работы ознакомиться с инструкцией и применять набор 
строго по назначению.
5.12. Допускать к работе с набором только специально обученный персонал.
5.13. Не использовать набор по истечении срока годности.
6. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую 
плотность раствора в лунках при длине волны 450 нм;
прибор для встряхивания рамки со стрипами (термостатируемый шейкер), 
позволяющий производить встряхивание со скоростью 400-800 об/мин при температуре 
+37 °С;
пипетки полуавтоматические одноканальные с изменяемым объемом отбора 
жидкостей: на 5-50 мкл; 40-200 мкл; 200-1000 мкл; 1000-5000 мкл с наконечниками;
пипетка полуавтоматическая восьмиканальная, позволяющая отбирать объемы 
жидкости до 300 мкл, с наконечниками;
цилиндр мерный, позволяющий отмерять 50-500 мл;
стакан стеклянный подходящего объема;
вода дистиллированная;
- бумага фильтровальная;
одноразовые резиновые перчатки, разрешенные к применению на территории РФ;
1 % раствор гипохлорита натрия или 6% раствор перекиси водорода;
контейнер для дезинфекции;
ванночки для внесения реагентов восьмиканальной пипеткой.
7. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
7.1.Забор крови из вены осуществляют с соблюдением правил асептики. После 
формирования сгустка сыворотку отделяют путем центрифугирования. После 
центрифугирования сыворотку переносят в отдельную пробирку. Для проведения анализа 
не разрешается использовать плазму крови, гемолизированнзчо или мутную сыворотку, а 
также образцы сыворотки, содержащие азид натрия.
7.2.0бразцы сыворотки крови разрешается хранить при температуре +2...8 °С не 
более 2 суток; при необходимости более длительного хранения рекомендуется 
аликвотировать образец и хранить в замороженном виде при температуре -20 °С или 
ниже. Не допускается повторное замораживание образца.
8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
8.1. Подготовка реагентов
8.1.1. Стрипы. Перед вскрытием пакет со стрипами необходимо выдержать при 
комнатной температуре (+18...25 °С) не менее 30 минут. Вскрыть пакет и переставить на 
свободную рамку необходимое количество стрипов.
8.1.2. Жидкие калибровочные пробы и контрольная сыворотка готовы к 
использованию.
Для восстановления лиофилизованных калибровочных проб и контрольной 
сыворотки перед вскрытием флаконов легким постукиванием стряхнуть частицы, 
прилипшие к стенкам флаконов или к крышкам. Открыть флаконы и положить крышки 
перевернутыми на сухую поверхность. В каждый флакон с калибровочной пробой и


--- стр. 5 ---
Инструкция по применению_ТироидИФА-ТТГ
контрольной сывороткой внести по 0,5 мл дистиллированной воды и закрыть крышками. 
Выдержать флаконы в течение 10 минут при комнатной температуре без перемешивания. 
Затем, аккуратно наклоняя и вращая флаконы, перемешать их содержимое до полного 
растворения, избегая пенообразования. В течение следующих 10 минут вьщержать 
флаконы при комнатной температуре, периодически перемешивая.
8.1.3. Конъюгат Е готов к использованию. Расход конъюгата Е на один стрип 
составляет 1,15 мл.
8.1.4. Буфер Д готов к использованию.
8.1.5. Промывочный раствор. Необходимое количество буфера Р развести 
дистиллированной водой в 20 раз.
Например:
5 мл буфера Р + 95 мл дистиллированной воды.
Тщательно перемешать, избегая пенообразования.
8.1.6. Раствор тетраметилбензидина (ТМБ) готов к использованию. Расход ТМБ на 
один стрип составляет 1,15 мл.
8.1.7. Стоп-реагент готов к использованию. Расход стоп-реагента на один стрип 
составляет 1,15 мл.
8.1.8. Все реагенты перед проведением анализа должны быть тшательно 
перемешаны и доведены до комнатной температуры (+18...25 °С).
В приложении 1 приведена схема проведения анализа.
8.1.9. Разведение исследуемых образцов сывороток крови. Если по 
предварительным данным концентрация или по результатам анализа (см. п. 9.3.) значения 
концентрации ТТГ в исследуемых образцах выше КП №6, образцы следует развести 
буфером Д в 20 раз. Пример подготовки образца к анализу:
380 мкл буфера Д + 20 мкл исследуемого образца.
При разведении необходимо тщательное перемешивание.
8.2. Постановка анализа
8.2.1. Составить протокол маркировки лунок. Лунки промаркировать следуюшим 
образом:
А1, А2 — №1 для измерения величины оптической плотности раствора ТМБ;
В1,В2 — №2 для измерения величины оптической плотности КП№1;
С1,С2 — №3 для измерения величины оптической плотности КП№2;
D1,D2 — №4 для измерения величины оптической плотности КП№3;
Е1,Е2 — №5 для измерения величины оптической плотности КП№4;
F1,F2 — № 6 для измерения величины оптической плотности КП№5;
G1,G2 — № 7 для измерения величины оптической плотности КП№6;
Н1,Н2 — №8 для измерения величины оптической плотности контрольной 
сыворотки.
8.2.2. Во все лунки, кроме лунок А1 и А2, внести по 100 мкл раствора конъюгата 
анти-ТТГ-пероксидаза.
8.2.3. Внести в соответствующие лунки по 50 мкл калибровочных проб и 
контрольной сыворотки, в оставшиеся лунки по 50 мкл исследуемой сыворотки крови в 
дубликатах.
Примечание: общее время внесения калибровочных проб, контрольной сыворотки  
и исследуемых сывороток крови не должно превышать 15 минут, иначе время инкубации  
разных образцов будет значительно различаться, что приведет к неправшьным  
результатам.
8.2.4. Инкубировать стрипы в течение 1  часа при встряхивании в 
термостатируемом шейкере при температуре +37° С со скоростью 500-800 об/мин.
8.2.5. По окончании инкубации удалить содержимое лунок в контейнер с 
дезинфицируюшим раствором (1% раствором гипохлорита натрия или 6% раствором 
перекиси водорода) и промыть лунки пять раз. При каждой промывке во все лунки 
добавлять по 300 мкл промывочного раствора, приготовленного по п. 7.1.5., встряхнуть


--- стр. 6 ---
^Инструкция  по применению_ТироидИФА-ТТГ
рамку на шейкере в течение 5-10 секунд с последующим декантированием. После 
последнего декантирования тщательно удалить остатки жидкости из лунок постукиванием 
рамки со Стрипами в перевернутом положении по фильтровальной бумаге.
Допускается промывка лунок при помощи автоматического промывочного 
устройства.
8.2.6. Немедленно внести во все лунки по 100 мкл раствора тетраметилбензидина. 
Инкубировать стрипы в темноте при комнатной температуре (+18...25°С) в течение 15- 
30 минут в зависимости от степени развития окраски.
Примечание: максимальная оптическая плотность не должна превышать  
пределов линейного измерения спектрофотометра. Рабочий диапазон  
спектрофотометра необходимо уточнять в паспорте прибора. Рекомендуемая  
максимальная оптическая плотность не более 2,5 ед. ОП.
8.2.7. Добавить во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, 
как и раствор тетраметилбензидина, по 100 мкл стоп-реагента для остановки ферментной 
реакции, встряхивать на шейкере в течение 1-2 минут.
8.2.8. Если невозможно измерить оптическую плотность в лунках планшета 
непосредственно после выполнения п. 7.2.7., то следует иметь в виду, что окраска в 
лунках планшета стабильна не более 20 минут при температуре не более +18...25 °С.
9. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерить на фотометре вертикального сканирования оптическую плотность в 
лунках при длине волны 450 нм.
При регистрации результатов необходимо вычитать величину оптической 
плотности в лунках А1 и А2 из значений оптических плотностей всех остальных лунок.
Примечание: среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках  
А1 и А2 не должно превышать 0,09 ед.ОП.
10. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
10.1. Построить калибровочный график зависимости оптических плотностей от 
концентрации ТТГ (мкМЕ/мл) в калибровочных пробах (Рис.2). Внешний вид графика 
зависит от способа преобразования осей.
Примечание 1: для построения калибровочных графиков рекомендуется
использовать Программное обеспечение «ИФА Мастер».
Примечание 2: для построения калибровочного графика на масштабной бумаге  
необходимо использовать данные оптических плотностей после вычитания из них средней 
величины оптической плотности лунок с ТМБ.
Если программа фотометра не позволяет вычитать величину оптической  
плотности лунок А1 иА2, то необходимо пользоваться формулой:
В— Вт,
где В - среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках,  
содержащих калибровочные или исследуемые пробы,
Вт—  среднее арифметическое значение оптической плотности лунок А1 и А2.
10.2. Определить содержание ТТГ в пробах по калибровочному графику. В случае 
дополнительного разведения образцов необходимо измеренную концентрацию ТТГ 
умножить на фактор разведения.
10.3. Экстраполяция калибровочного графика для значений концентрации ТТГ, 
превышающих номинал КП №6, не допускается. Для точного определения концентрации 
в таких образцах необходимо выполнить их разведение в соответствии с п. 7.1.9.