Набор реагентов для количественного иммуноферментного определения свободного трийодтиронина в сыворотке крови человека («ТироидИФА-свободный Т3») по ТУ 9398-203-98539446-2010 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2011/11312 от 13.07.2011 · класс риска 1

Производитель: ООО "Компания Алкор Био" (Россия)

Вид изделия: Свободный трийодтиронин ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 220 контрактов, медианная цена за единицу 8 908 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДЕНА» «УТВЕРЖДАЮ»
Приказом Росздравнадзора директор
от «_»_____20_г. X»_________ Q 0 0  AiiKop Био »
!  у ijfebipeB М.В.
V  ; .  Д  » ^п]зёля 201 O r.
ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ 
НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО 
ОПРЕДЕЛЕНИЯ СВОБОДНОГО ТРИЙОДТИРОНИНА  
В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА 
(«Т ироидИФ А-свободныйТЗ»)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «ТироидИФА-свободныйТЗ» предназначен для 
количественного определения концентрации свободного трийодтиронина (ТЗ) в 
сыворотке крови методом твердофазного иммуноферментного анализа.
1.2. Трийодтиронин (3,5,3'-трийодтиронин, ТЗ) -  тироидный гормон с 
молекулярной массой 651 Да. Трийодтиронин является одним из гормонов, синтезируемых 
щитовидной железой. Основная часть молекул трийодтиронина находится в связанной с 
белками плазмы форме. Доля свободного ТЗ составляет 0,2 -  0,5% от общего 
трийодтиронина. Именно свободный трийодтиронин обеспечивает весь спектр 
метаболической активности и осуществляет обратную связь с гипофизом. Его 
концентрация наиболее точно характеризует тиреоидный статус организма, так как в 
значительно меньшей степени, по сравнению с общим трийодтиронином, зависит от 
физиологического или патологического состояний организма (беременность, оральная 
контрацепция, стероидная терапия). Таким образом, уровень свободного ТЗ отражает
^  истинный тиреоидный статус.
Измерение концентрации свободного ТЗ наиболее информативно в случаях 
ТЗ-тиреотоксикоза, синдрома эутиреоидного больного, при генерализованной 
резистентности к тироидным гормонам, при классификации тиреотоксикозов по степени 
тяжести и мониторинге антитиреоидной терапии.
Уменьщение концентрации свободного ТЗ может указывать на первичный, 
вторичный, третичный гипотиреоидизм. Однако в некоторых случаях снижение уровня 
свободного ТЗ наблюдается также и при нетиреоидных заболеваниях 
некомпенсированной первичной надпочечниковой недостаточности, тяжелых 
соматических и психических патологиях, в период выздоровления после тяжелых 
заболеваний, при низкокалорийной диете или диете с низким содержанием белка.
Повышенный уровень свободного ТЗ наблюдается при тиреоидитах, синдроме 
резистентности к тиреоидным гормонам, ТТГ-независимом тиреотоксикозе, при 
тиреотропиноме и тиреотоксической аденоме, токсическом зобе, изолированном ТЗ- 
токсикозе. Кроме того, повышение уровня свободного ТЗ возможно при послеродовой 
дисфункции щитовидной железы, нефротическом синдроме, хронических заболеваниях 
печени, после гемодиализа.
1.3. Набор рассчитан на проведение анализа в дубликатах 40 неизвестных, 
,6 калибровочных проб, 1  пробы контрольной сыворотки и I пробы для измерения
1


--- стр. 2 ---
значения оптической плотности раствора ТМБ при использовании всех стрипов 
одновременно (всего 96 определений).
П р и м е ч а н и е :  в случае дробного применения набор молсет быть использован  
только в течение месяца после вскрытия компонентов набора.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип действия
В наборе «ТироидИФА-свободныйТЗ» использован вариант конкурентного 
твердофазного иммуноферментного анализа. В лунках, при добавлении исследуемого 
образца и конъюгата ТЗ-пероксидаза, во время инкубаций конъюгат ТЗ-пероксидаза и 
свободный ТЗ сыворотки крови конкурируют за связывание с антителами, 
иммобилизованными на внутренней поверхности лунок. Не связавшиеся компоненты 
удаляются промывкой. Количество связанного антителами конъюгата обратно 
пропорционально количеству свободного ТЗ в исследуемом образце (Рис. 1).
Во время инкубации с ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. Степень 
окраски обратно пропорциональна концентрации свободного ТЗ в анализируемых пробах. 
После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочного 
графика рассчитывается концентрация свободного ТЗ в исследуемых образцах
Равновесие между свободной 
и связанной фракциями ТЗ
Рисунок 1. Схема анализа
2.2. Состав набора
- комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов в рамке с моноклональными 
антителами к трийодтиронину, маркирован «Стрипы с моноклональными антителами к 
трийодтиронину» — 1 упаковка;
- калибровочные пробы (КП), содержащие известные количества свободного ТЗ. 
Флаконы маркированы «Калибровочная проба №1», «Калибровочная проба №2», 
«Калибровочная проба №3», «Калибровочная проба №4», «Калибровочная проба №5», 
«Калибровочная проба № 6 »; точные значения концентраций свободного ТЗ в 
калибровочных пробах указаны на этикетках флаконов, ориентировочные -  0; 1; 4; 13, 30, 
60 пмоль/л -  6 флаконов (лиофилизованные препараты или жидкости по 1,0  мл);
2


--- стр. 3 ---
- конъюгат ТЗ-пероксидаза, маркирован «Конъюгат Е» -  1  флакон (14 мл);
- аналитический водно-солевой раствор, маркирован «Буфер А» -  1  флакон (10 мл);
- концентрированный водно-солевой раствор для промывки лунок, маркирован 
«Буфер Р» ~ 2 флакона (14 мл);
- раствор тетраметилбензидина, маркирован «Раствор ТМБ» -  1  флакон (14 мл);
- стоп-реагент (1 Н соляная кислота), маркирован «Стоп-реагент» -  1  флакон (14 мл);
- контрольная сыворотка с известным содержанием свободного ТЗ, маркирована 
«Контрольная сыворотка» -  1  флакон (лиофилизованный препарат или жидкость 1,0 мл);
- прозрачный пластиковый пакет с замком (при упаковке стрипов в пакет из 
2 -слойного полиэтилена).
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
ЗЛ. Специфичность. Перекрестная реакция антител к трийодтиронину с другими 
тироидами приведена в Таблице 1.
Таблица 1
Тироид Перекрестная реакция, %
ТЗ 100
L-Тироксин < 0.1
Р-Тироксин < 0.1
г-ТЗ < 0.1
Дийодотирозин < 0.1
3.2. Коэффициент вариации результатов определения свободного ТЗ в одном и 
том же образце сыворотки крови человека с использованием набора 
«ТироидИФА-свободныйТЗ» не превышает 8%.
3.3. Чувствительность. Минимальная достоверно определяемая набором 
концентрация свободного ТЗ в анализируемом образце не превышает 0,5 пмоль/л.
3.4. Диапазон ожидаемых значений. Содержание свободного ТЗ измеряли в 
сыворотке крови, взятой с 9 до 11 часов у 200 здоровых лиц в возрасте 18^5 лет. 
Диапазон измеренных концентраций составил 2,5 -  7,5 пмоль/л. Этот диапазон может быть 
использован в качестве ориентировочного показателя нормы.
Диапазон ожидаемых значений зависит от многих факторов: специфичности 
метода, особенностей исследуемой популяции, точности метода в конкретной 
лаборатории. По этой причине каждой лаборатории рекомендуется использовать 
предоставленные изготовителем значения только до тех пор, пока специалистами 
лаборатории не будут определены диапазоны ожидаемых значений, характерных для 
конкретной популяции в месте расположения лаборатории.
П р и м е ч а н и е :  в наборе «ТироидИФА-свободныйТЗ» значения концентраций  
калибровочных проб выраэюены в пмоль/л. Для пересчета концентраций свободного ТЗ в  
пг/мл необходимо значение концентрации в пмоль/л разделить на 0,651.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Потенциальный риск применения набора — класс 1 .
4.2. Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксич­
ными.
4.3. При работе с набором следует соблюдать требования ГОСТ Р 52905-2007 
«Лаборатории медицинские. Требования безопасности».
4.4. Стоп-реагент представляет собой 1  Н раствор соляной кислоты. Избегать 
разбрызгивания и попадания на кожу и слизистые. В случае попадания раствора стоп- 
реагента на кожу и слизистые необходимо промыть пораженный участок большим


--- стр. 4 ---
количеством проточной воды.
4.5. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или 
пластиковые перчатки, т.к. производные крови, входящие в состав набора, и исследуемые 
образцы являются потенциально инфицированным материалом, способным длительное 
время сохранять и передавать возбудителей различных вирусных инфекций.
4.6. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с 
набором, должны быть соответствующим образом маркированы и храниться отдельно.
4.7. Запрещается прием пищи, использование косметических средств и курение 
в помещениях, предназначенных для работы с наборами.
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
- Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять
оптическую плотность раствора в лунках при длине волны 450 нм;
- прибор для встряхивания рамки со стрипами (термостатируемый шейкер),
позволяющий производить встряхивание со скоростью 400-800 об/мин при температуре 
+37°С;
- пипетки полуавтоматические одноканальные с изменяемым объемом отбора
W  жидкостей: на 5-50 мкл; 40-200 мкл; 200-1000 мкл; 1000-5000 мкл с наконечниками;
- пипетка полуавтоматическая восьмиканальная, позволяющая отбирать объемы 
жидкости до 300 мкл, с наконечниками;
- цилиндр мерный, позволяющий отмерять 50-500 мл;
- стакан стеклянный подходящего объема;
- вода дистиллированная;
- бумага фильтровальная;
- перчатки резиновые или пластиковые;
- 1% раствор гипохлорита натрия или 6% раствор перекиси водорода;
- контейнер для дезинфекции;
- ванночки для внесения реагентов восьмиканальной пипеткой.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
6.1. Забор крови из вены осуществляют с соблюдением правил асептики. После 
формирования сгустка сыворотку отделяют путем центрифугирования. После 
центрифугирования сыворотку переносят в отдельную пробирку. Для проведения анализа
^  не разрещается использовать плазму крови, гемолизированную или мутную сыворотку, а
также образцы сыворотки, содержащие азид натрия.
6.2. Образцы сыворотки крови разрешается хранить при температуре +2... 8°С не 
более 2 суток; при необходимости более длительного хранения рекомендуется 
аликвотировать образец и хранить в замороженном виде при температуре -20°С или 
ниже. Не допускается повторное замораживание образца.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
7.1. Подготовка реагентов
7.1Л» Стрипы. Перед вскрытием пакет необходимо выдержать при комнатной 
температуре не менее 30 минут. Вскрыть пакет и переставить на свободную рамку 
необходимое количество стрипов.
7.1.2. Жидкие калибровочные пробы и контрольная сыворотка готовы к 
использованию.
Для восстановления лиофилизованных калибровочных проб и контрольной 
сыворотки перед вскрытием флаконов легким постукиванием стряхнуть частицы, 
прилипшие к стенкам флаконов или к крышкам. Открыть флаконы и положить крышки 
перевернутыми на сухую поверхность. В каждый флакон с калибровочной пробой и
4


--- стр. 5 ---
контрольной сывороткой внести по 1 ,0 мл дистиллированной воды и закрыть крышками. 
Выдержать флаконы в течение 10  минут при комнатной температуре (+18...25°С) без 
перемешивания. Затем, аккуратно наклоняя и вращая флаконы, перемешать их 
содержимое до полного растворения, избегая пенообразования. В течение следующих 
10  минут выдержать флаконы при комнатной температуре, периодически перемешивая.
7.1.3. Конъюгат Е готов к использованию. Расход конъюгата Е на один стрип 
составляет 1,15 мл.
7.1.4 . Буфер А готов к использованию. Расход буфера А на один стрип составляет
1,0  мл.
7.1.5. Промывочный раствор. Необходимое количество Буфера Р развести 
дистиллированной водой в 2 0 раз.
Например:
5 мл Буфера Р + 95 мл дистиллированной воды.
Тщательно перемешать, избегая пенообразования.
7.1.6. Раствор тетраметилбензидина (ТМБ) готов к использованию. Расход ТМБ на 
один стрип составляет 1,15 мл.
7.1.7. Стоп-реагент готов к использованию.
7.1.8. Все реагенты перед проведением анализа должны быть тщательно 
перемешаны и доведены до комнатной температуры (+18...25°С).
В приложении 1  приведена схема проведения анализа.
7.2. Постановка анализа
7.2.1. Составить протокол маркировки лунок. Лунки промаркировать следующим 
образом:
AI, А2 -  № 1  для измерения величины оптической плотности раствора ТМБ;
В 1, В2 -  № 2 для измерения величины оптической плотности КП № 1 ;
С1, С2 -  № 3 для измерения величины оптической плотности КП №2;
D1, D2 -  № 4 для измерения величины оптической плотности КП №3;
Е1, Е2 -  № 5 для измерения величины оптической плотности КП №4;
F1, F2 -  № 6 для измерения величины оптической плотности КП №5;
G1, G2 -  № 7 для измерения величины оптической плотности КП № 6 ;
Н1, Н2 ~ № 8 для измерения величины оптической плотности контрольной 
сыворотки.
7.2.2. В лунки для исследуемых образцов внести по 
80 мкл буфера А.
П р и м е ч а н и е :  В лунки для калибровочных проб, контрольной сыворотки и ТМБ  
буфер Л не вносить.
7.2.3. Внести в соответствующие лунки по 100 мкл калибровочных проб и 
контрольной сыворотки в дубликатах.
7.2.4. В лунки для исследуемых образцов - по 20 мкл образцов сыворотки крови в 
дубликатах.
Внимание:  объем вносимых калибровочных проб и образцов различается!
П р и м е ч а н и е :  общее время внесения калибровочных проб, контрольной сыворотки  
и исследуемых сывороток крови не должно превышать 15 минут, иначе время инкубации  
разных образцов будет значительно различаться, что приведет к неправильным  
результатам.
7.2.5. Инкубировать стрипы при встряхивании в течение 45 минут в 
термостатируемом шейкере при температуре +37°С со скоростью 400-650 об/мин.
7.2.6. По окончании инкубации удалить содержимое лунок в контейнер с 
дезинфицирующим раствором ( 1% раствором гипохлорита натрия или 6% раствором 
перекиси водорода) и промыть лунки четыре раза. При каждой промывке во все лунки 
добавить по 300 мкл промывочного раствора, приготовленного по п. 7.1.5., встряхнуть 
рамку на шейкере в течение 5-10 секунд с последующим декантированием. После
5


--- стр. 6 ---
последнего декантирования тщательно удалить остатки жидкости из лунок постукиванием 
рамки со Стрипами в перевернутом положении по фильтровальной бумаге.
Допускается промывка лунок при помощи автоматического промывочного 
устройства.
7.2.7. Немедленно внести во все лунки, кроме лунок А1 и А2, по 100 мкл 
конъюгата ТЗ-пероксидаза.
7.2.8. Инкубировать стрипы при встряхивании в течение 15 минут в 
термостатируемом щейкере при температуре +37°С со скоростью 400-650 об/мин.
7.2.9. По окончании инкубации удалить содержимое лунок декантированием и 
промыть лунки согласно п. 7.2.6.
7.2.10. Немедленно внести во все лунки по 100 мкл раствора ТМБ. Инкубировать 
стрипы в темноте при комнатной температуре (+18...25°С) в течение 20 минут.
П р и м е ч а н и е :  максимальная оптическая плотность не должна превышать  
пределов линейного измерения спектрофотометра. Рабочий диапазон  
спектрофотометра необходимо уточнять в паспорте прибора. Рекомендуемая  
максимальная оптическая плотность не более 2,5 ед. ОП.
7.2.11. Добавить во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, 
как и раствор ТМБ, по 100 мкл стоп-реагента для остановки ферментной реакции, 
встряхивать на шейкере в течение 1 -2  минут.
7.2.12. Если невозможно измерить оптическую плотность в лунках планшета 
непосредственно после выполнения п. 7.2.11., то следует иметь в виду, что окраска в 
лунках планщета стабильна не более 20 минут при температуре +18...25°С.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
8.1.Измерить на фотометре вертикального сканирования оптическую плотность в 
лунках при длине волны 450 нм.
При регистрации результатов необходимо вычитать величину оптической 
плотности в лунках А1 и А2 из значений оптических плотностей всех остальных лунок.
П р и м е ч а н и е :  среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках  
Л1 и А2 не должно превышать 0,09 ед. ОП.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1. Построить калибровочный график зависимости оптических плотностей  от 
концентрации свободного ТЗ в калибровочных пробах (пмоль/л) (Рис. 2). Внешний вид 
графика зависит от способа преобразования осей.
П р и м е ч а н и е  1 : для построения калибровочных графиков рекомендуется
использовать Программное обеспечение «ИФА Мастер».
П р и м е ч а н и е  2: для построения калибровочного графика на масштабной бумаге  
необходимо пользоваться формулой 1 или 2.
Если программа фотометра позволяет вычитать величину оптической плотности в
лунках Л1 и А2 из значений оптических плотностей всех остальных лунок, то для расчетов
для каждой калибровочной или исследуемой пробы использовать формулу:
В/В 1X 100%, (1)
Если программа фотометра не позволяет вычитать величину оптической  
плотности в лунках Л1 иА2, то использовать формулу:
( B - Bt) / ( Bi - Bt) x 1 0 0 % , ( 2 )
где В ~ среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках, содержащих  
калибровочные или исследуемые пробы,
В} —  среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках, содержащих 
калибровочную пробу NqI,
В т  — среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках А1 и А2.