Набор реагентов для качественного и количественного иммуноферментного определения поверхностного антигена вируса гепатита В в сыворотке и плазме крови человека ("ГепатитИФА-HBsAg") по ТУ 9398-218-98539446-2010 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2011/12131 от 17.10.2011 · класс риска 3

Производитель: ООО "Компания Алкор Био" (Россия)

Вид изделия: Вирус гепатита В поверхностный антиген ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 135 контрактов, медианная цена за единицу 8 125 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
/ 3
«УТВЕРЖДЕНА»
Приказом Росздравнадзора 
от« » 20 г.№
«УТВЕРЖДАЮ»
ьный директор 
,ния Алкор Био» 
Швырев М.В. 
^^|>|ноября 201 От.
и
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ КАЧЕСТВЕННОГО И КОЛИЧЕСТВЕННОГО  
ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ  
ПОВЕРХНОСТНОГО АНТИГЕНА ВИРУСА ГЕПАТИТА В 
В СБШОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА  
(«Г епатитИФА-HBsAg»)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «ГепатитИФА-HBsAg» предназначен для качественного и  
количественного определения поверхностного антигена (HBsAg) вируса гепатита В (HBV)  
в сыворотке и плазме крови человека.
1.2. Поверхностный антиген (HBsAg) представляет собой гликозилированный  
белок оболочки HBV и является важным маркером инфицирования. HBsAg содержит де­
терминанту «а», обгцую для всех субтипов вируса и дополнительные субдетерминанты (d  
и у), определяюгцие иммунологические различия подгрупп (ad и ау). В настоящее время  
это основной маркер при определении инфицирования вирусом гепатита В. HBV вызыва­
ет острый и хронический вирусный гепатит и чаще других вирусных гепатитов передается  
при переливании крови. Он вызывает целый спектр проявлений, варьирующих от мягкой,  
бессимптомной формы до молниеносного гепатита, серьезных поражений печени и цир­
роза. Кроме того, ясно доказана роль HBV в развитии первичного рака печени.
Количественное определение HBsAg в крови представляется целесообразным при  
корректировке диагноза и подборе лечения. При проведении скрининга на гепатит В дос­
таточно качественного определения HBsAg в крови.
1.3. Набор выпускается в двух вариантах комплектации:
Комплектация на 96 определений рассчитана на количественный анализ в дублика­
тах 40 неизвестных, либо качественный анализ в дубликатах 44 неизвестных проб, при  
использовании всех стрипов одновременно.
Комплектация на 192 определения рассчитана на количественный анализ в дублика­
тах 80 неизвестных, либо качественный анализ в дубликатах 88 неизвестных проб, при  
использовании всех стрипов одновременно.
Обратите внимание, что при количественном анализе определение оптических  
плотностей калибровочных проб и раствора ТМБ. а также определение конпентрации кон­
трольной сыворотки обязательно на каждом планщете.


--- стр. 2 ---
Обратите внимание, что при качественном анализе определение оптических плот­
ностей калибровочной пробы №1 ('отрицательный контроль), калибровочной пробы №2  
(слабоположительный контроль), калибровочной пробы №6 (положительный контроль) и  
раствора ТМБ. обязательно на каждом планшете.
Примечание: в случае дробного применения набор может быть использован только  
в течение месяца после вскрытия компонентов набора.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип дейетвия
В наборе «ГепатитИФА-HBsAg» реализован «сэндвич»-вариант твердофазного им-  
муноферментного анализа. Для этого использованы два моноклональных антитела с раз­
личной эпитопной специфичностью к HBsAg. Одно из них иммобилизовано на твердой  
фазе (внутренняя поверхность лунок), второе конъюгировано с пероксидазой хрена. В  
лунках, при добавлении исследуемого образца и конъюгата aнти-HBsAg-пepoкcидaзa, во  
время инкубации одновременно происходит иммобилизация HBsAg, содержащегося в ис­
следуемом образце, и связывание его с конъюгатом. При удалении содержимого из лунок  
и промывке происходит удаление избытка конъюгата aнти-HBsAg-пepoкcидaзa, не свя­
завшегося с иммобилизованным в ходе инкубации HBsAg. Количество связавшегося  
конъюгата прямо пропорционально количеству HBsAg в исследуемом образце (Рису­
нок 1).
Планшет с моноклональными  
антителами к HBsAg
Рисунок 1. Схема анализа
Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках.  
Степень окраски прямо пропорциональна концентрации HBsAg в анализируемых пробах.  
После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочного  
графика рассчитывается концентрация HBsAg в исследуемых образцах. Наличие HBsAg в  
случае проведения качественного анализа оценивается относительно значения, получен­
ного делением оптической плотности КП №2 на 2 (ОН крит.).
2.2. Состав набора
• комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов в рамке с иммобилизованными  
на внутренней поверхности лунок моноклональными антителами к HBsAg маркирован  
«Стрипы с моноклональными антителами к HBsAg» - 1 упаковка или 2 упаковки, в зави­
симости от варианта комплектации (см. таблицу 1);


--- стр. 3 ---
у/
• калибровочные пробы (КП), аттестованные по международному стандарту на  
HBsAg NIBSC 00/588, содержащие известные количества HBsAg. Флаконы маркированы  
«Калибровочная проба №1», «Калибровочная проба №2», «Калибровочная проба №3»,  
«Калибровочная проба №4», «Калибровочная проба №5», «Калибровочная проба №6»;  
точные значения концентрации HBsAg указаны на этикетках флаконов, ориентировочные: 
0; 0.1; 0.5; 1.0; 2.0; 5.0 МЕ/мл; 6 флаконов (по 1 мл) (лиофилизованные препараты или  
жидкости) (см. таблицу 1);
• конъюгат aнти-HBsAg-пepoкcидaзa, маркирован «Конъюгат Е» - 1 флакон (8 мл)  
или 1 флакон (16 мл) в зависимости от варианта комплектации (см. таблицу 1);
• аналитический водно-солевой раствор, маркирован «Буфер А» - 1 флакон (6 мл)  
или 1 флакон (12 мл) в зависимости от варианта комплектации (см. таблицу 1);
• водно-солевой раствор для разведения образцов сыворотки и плазмы крови, марки­
рован «Буфер Д» - 1 флакон (50 мл) или 2 флакона (50 мл) в зависимости от варианта ком­
плектации (см. таблицу 1);
• концентрированный водно-солевой раствор для промывки лунок, маркирован «Бу­
фер Р» - 1 флакон (14 мл) или 2 флакона (14 мл) в зависимости от варианта комплектации  
(см. таблицу 1);
• раствор тетраметилбензидина, маркирован «Раствор ТМБ» - 1 флакон (14 мл) или  
2 флакона (14 мл) в зависимости от варианта комплектации (см. таблицу 1);
• стоп-реагент, маркирован «Стоп-реагент» - 1 флакон (14 мл) или 2 флакона (14мл)  
в зависимости от варианта комплектации (см. таблицу 1);
• контрольная сыворотка с известным содержанием HBsAg, маркирована «Кон­
трольная сыворотка» - 1 флакон (1 мл) (лиофилизованный препарат или жидкость) (см.  
таблицу 1);
• прозрачный пластиковый пакет с замком (при упаковке стрипов в пакет из  
2-слойного полиэтилена) - 1 шт. или 2 шт. в зависимости от комплектации (см. табли­
цу 1).


--- стр. 4 ---
Таблица 1. Варианты комплектации
Название компонента 96 определений 192 определения
Комплект Стрипов 1 комплект 2 комплекта
Комплект калибровочных 
проб 1 комплект - 1 мл 1 комплект - 1 мл
Контрольная сыворотка 1 флакон - 1 мл 1 флакон - 1 мл
Конъюгат анти-HBsAg- 
пероксидаза 1 флакон - 8 мл 1 флакон - 16 мл
Аналитический водно-солевой 
раствор 1 флакон - 6 мл 1 флакон - 12мл
Водно-солевой раствор для разве­
дения образпов сыворотки и плаз­
мы крови
1 флакон - 50 мл 2 флакона - по 50 мл
Концентрированный буферный 
раствор для промывки лунок 1 флакон - 14 мл 2 флакона - по 14 мл
Раствор ТМБ 1 флакон - 14 мл 2 флакона - по 14 мл
Стоп-реагент 1 флакон - 14 мл 2 флакона - по 14 мл
Прозрачный пластиковый пакет с 
замком 1 шт. 2 шт.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Диагностическая специфичность набора определялась на 200 отрицательных  
сыворотках крови человека, и составила 99,5%.
3.2. Диагностическая чувствительность определялась на 100 положительных сы­
воротках крови человека, и составила 100%.
3.3. Коэффициент вариации результатов определения HBsAg в одном и том же  
образце с использованием набора «ГепатитИФА-HBsAg» не превышает 8%.
3.4. Линейность. Зависимость концентрации HBsAg в анализируемых образцах  
сыворотки крови при разведении их буфером Д имеет линейный характер в диапазоне  
концентраций калибровочных проб №3 - №6 и составляет 90-110%.
3.5. Точность. Данный аналитический параметр проверяется тестом на «откры­
тие» HBsAg - проверка соответствия значения определяемой концентрапии HBsAg рас­
чётной величине, полученной путем смешивания равных объемов контрольной сыворотки  
и КП№3. Процент открытия составляет 90-110%.
3.6. Аналитическая чувствительность. Минимальная достоверно определяемая  
набором концентрация HBsAg по 0С042-28-311-00 в анализируемом образце не превы­
шает 0,05 МЕ/мл.
1


--- стр. 5 ---
л
4.
4.1.
4.2.
сичными.
4.3.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Потенциальный риск применения набора - класс 3.
Все компоненты набора в используемых концентрациях являются неток-
При работе с набором следует соблюдать требования ГОСТ Р 52905-2007  
«Лаборатории медицинские. Требования безопасности».
4.4. Стоп-реагент представляет собой 1 Н раствор соляной кислоты. Избегать  
разбрызгивания и попадания на кожу и слизистые. В случае попадания стоп-реагента на  
кожу и слизистые необходимо промыть пораженный участок большим количеством про­
точной воды.
4.5. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пла­
стиковые перчатки, т.к. производные крови, входящие в состав набора, и исследуемые об­
разцы являются потенциально инфицированным материалом, способным длительное вре­
мя сохранять и передавать возбудителей различных вирусных инфекций.
4.6. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с на­
бором, должны быть соответствующим образом маркированы и храниться отдельно.
4.7. Запрещается прием пищи, использование косметических средств и курение  
в помещениях, предназначенных для работы с наборами.
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
• Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптиче­
скую плотность раствора в лунках при длине волны 450 нм;
• прибор для встряхивания рамки со стрипами (термостатируемый шейкер), позво­
ляющий производить встряхивание со скоростью 400-800 об/мин при температуре +37°С;
• пипетки полуавтоматические одноканальные со сменными наконечниками с изме­
няемым объемом отбора жидкостей: на 5-50 мкл; 40-200 мкл; 200-1000 мкл; 1000-  
5000 мкл;
• пипетка полуавтоматическая восьмиканальная со сменными наконечниками, по­
зволяющая отбирать объемы жидкости до 300 мкл;
• цилиндр мерный, позволяющий отмерятъ 50-1000 мл;
• стакан стеклянный подходящего объема;
• вода дистиллированная;
• бумага филътровалъная;
• перчатки резиновые или пластиковые;
• 1% раствор гипохлорита натрия или 6% раствор перекиси водорода;
• контейнер для дезинфекции;
• ванночки для внесения реагентов восъмиканальной пипеткой.


--- стр. 6 ---
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
[
6.1. Забор крови из вены осуществляют с соблюдением правил асептики. После  
формирования сгустка сыворотку отделяют путем центрифугирования. Забор крови для  
получения плазмы осуществляют в пробирку, содержащую антикоагулянт. После центри­
фугирования сыворотку или плазму переносят в отдельную пробирку.
6.2. Для проведения анализа не следует использовать гемолизированную или мут­
ную сыворотку и плазму, а также образцы сыворотки, содержащие азид натрия.
6.3. Образцы сыворотки и плазмы крови разрешается хранить при температуре  
+2...8°С не более 2 суток; при необходимости более длительного хранения рекомендуется  
аликвотировать образец и хранить в замороженном виде при температуре -20°С или ни­
же. Не допускается повторное замораживание образца.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
7.1. Подготовка реагентов
7.1.1. Стрипы. Перед вскрытием пакет необходимо выдержать при комнатной темпе­
ратуре (+18...25°С) не менее 30 минут. Вскрыть пакет и переставить на свободную рамку  
необходимое количество стрипов.
7.1.2. Жидкие калибровочные пробы и контрольная сыворотка готовы к использова­
нию.
Для восстановления лиофилизованных калибровочных проб и контрольной сыво­
ротки перед вскрытием флаконов легким постукиванием стряхнуть частицы, прилипшие к 
стенкам флаконов или к крышкам. Открыть флаконы и положить крышки перевернутыми 
на сухую поверхность. В каждый флакон с калибровочной пробой и контрольной сыво­
роткой внести по 1 мл дистиллированной воды и закрыть крышками. Выдержать флаконы  
в течение 10 минут при комнатной температуре (+18...25°С) без перемешивания. Затем,  
аккуратно наклоняя и вращая флаконы, перемешать их содержимое до полного растворе­
ния, избегая пенообразования. В течение следующих 10 минут выдержать флаконы при  
комнатной температуре, периодически перемешивая.
7.1.3. Конъюгат Е готов к использованию. Расход конъюгата на один стрип составля­
ет 0,66 мл.
7.1.4. Промывочный раствор. Необходимое количество буфера? развести дистилли­
рованной водой в 20 раз. Например:
5 мл буфера Р + 95 мл дистиллированной воды.
Тшательно перемешатъ, избегая пенообразования.
7.1.5. Буфер А готов к исполъзованию. Расход Буфера А на один стрип составляет  
0,5 мл.
7.1.6. Буфер Д готов к использованию.
7.1.7. Раствор тетраметилбензидина (ТМБ) готов к использованию. Расход ТМБ на  
один стрип составляет 1,15 мл.
7.1.8. Стоп-реагент готов к использованию. Расход стоп-реагента на один стрип со­
ставляет 1,15 мл.


--- стр. 7 ---
/ /
7.1.9. Все реагенты перед проведением анализа должны быть тщательно перемеша­
ны и доведены до комнатной температуры (+18.. .25°С).
В Приложениях 1 и 2 приведены схемы проведения количественного и качественно­
го анализов, соответственно.
7.1.10. Разведение исследуемых образцов крови. Если концентрация HBsAg в ис­
следуемых образцах по предварительным данным выше 5 МЕ/мл, образцы следует развес­
ти буфером Д в 100 и 1000 раз. Пример подготовки образца к анализу:
Образец № 1 (разведение в 100 раз):
990 мкл буфера Д + 10 мкл исследуемого образца.
Образец № 2 (разведение в 1000 раз):
270 мкл буфера Д + 30 мкл образца № 1.
При каждом разведении необходимо тщательное перемешивание.
7.2. Постановка анализа
7.2.1.
образом:
Составить протокол маркировки лунок. Лунки промаркировать следующим
7.2.1.1. Количественный анализ:
А1, А2 -№ 1 - для измерения величины оптической плотности раствора ТМБ;
В1, В2 -№ 2 - для измерения величины оптической плотности КП №1;
С1, С2 - № 3 - для измерения величины оптической плотности КП №2;
D1, D2 - № 4 - для измерения величины оптической плотности КП №3;
Е1, Е2 - № 5 - для измерения величины оптической плотности КП №4;
F1, F2 - № 6 - для измерения величины оптической плотности КП №5;
G1, G2- № 7 - для измерения величины оптической плотности КП №6;
Н1, Н2 - № 8 - для измерения величины оптической плотности контрольной сыворот­
ки.
7.2.1.2. Качественный анализ:
А1, А2 - № 1 - для измерения величины оптической плотности раствора ТМБ;
В1,В2-  № 2 - для измерения величины оптической плотности КП №1 (отрицательный  
контроль);
С1,С2-  №3 - для измерения величины оптической плотности КП №2 (слабоположи­
тельный контроль);
D1, D2 - № 4 - для измерения величины оптической плотности КП №6 (положительный  
контроль).
7.2.2. Внести во все лунки, кроме лунок А1 и А2, по 25 мкл аналитического буфе­
ра.
7.2.3. Внести в соответствующие лунки по 100 мкл калибровочных проб и кон­
трольной сыворотки, в оставшиеся лунки по 100 мкл исследуемых образцов в дубликатах.
Примечание: общее время внесения калибровочных проб, контрольной сыворотки и  
исследуемых сывороток крови не должно превышать 15 минут, иначе время инкубации  
разных образцов будет значительно различаться, что приведет к неправильным резуль­
татам.
7.2.4. Инкубировать стрипы в течение 30 минут при встряхивании в термостати- 
руемом шейкере при температуре +37°С со скоростью 600-800 об/мин.


--- стр. 8 ---
7.2.5. Не удаляя содержимого лунок, во все лунки, кроме А1 и А2, немедленно  
внести по 50 мкл конъюгата aнти-HBsAg-пepoкcидaзa.
7.2.6. Инкубировать в течение 30 минут при встряхивании в термостатируемом 
шейкере при температуре +37°С со скоростью 600-800 об/мин.
7.2.7. По окончании инкубации удалить содержимое лунок в контейнер с дезинфи­
цирующим раствором (1% раствором гипохлорита натрия или 6% раствором перекиси во­
дорода) и промыть лунки пять раз. При каждой промывке во все лунки добавить по  
300 мкл промывочного раствора, приготовленного по и. 7.1.4., встряхнуть рамку на шей­
кере в течение 5-10 еекунд с последующим декантированием. После последнего деканти­
рования тщательно удалить оетатки жидкости из лунок постукиванием рамки со стрипами 
в перевернутом положении по фильтровальной бумаге.
Допускается промывка лунок при помощи автоматического промывочного устрой­
ства.
7.2.8. Немедленно внести во все лунки по 100 мкл раствора тетраметилбензидина.
7.2.9. Инкубировать стрипы в течение 10 минут при встряхивании в термо­
статируемом шейкере при температуре +37°С со скоростью 600-800 об/мин.
7.2.10. Добавить во все лунки е той же екоростью и в той же последовательности,  
как и раствор тетраметилбензидина, по 100 мкл стоп-реагента для оетановки ферментной  
реакции, встряхивать на шейкере в течение 1-2 минут.
7.2.11. Еели невозможно измерить оптическую плотность в лунках планшета непо­
средственно после выполнения и. 7.2.10., то следует иметь в виду, что окраска в лунках  
планшета стабильна в течение не более 20 минут при температуре +18.. .25°С.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерить на фотометре вертикального еканирования оптичеекую плотность в лун-  
ка.х при длине волны 450 нм.
При регистрации результатов необходимо вычитать величину оптической плот­
ности в лунках А1 и А2 из значений оптичееких плотностей всех оетальных лунок.
П р и м е ч а н и е :  среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках  
А1 и А2 не должно превышать 0,09 ед. ОП.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1. Количественный анализ
9.1.1. Построить калибровочный график зависимости оптических плотностей от  
концентрации HBsAg в калибровочных пробах (МЕ/мл) (Рисунок 2). Внешний вид графи­
ка зависит от способа преобразования осей.
П р и м е ч а н и е  1 :  для построения калибровочных графиков рекомендуется использо­
вать программное обеспечение «ИФА Мастер».
П р и м е ч а н и е  2 :  для построения калибровочного графика на масштабной бумаге не­
обходимо использовать данные оптических плотностей после вычитания из них средней  
величины оптической плотности лунок с ТМБ.
Если программа фотометра не позволяет вычитать величину оптической плотно­
сти лунок А1 и А2, то необходимо пользоваться формулой:
В-В т ,
8