Набор реагентов для количественного иммуноферментного определения альфа-фетопротеина в сыворотке крови человека («ИФА-АФП») по ТУ 9398-209-98539446-2010 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2012/13339 от 18.04.2012 · класс риска 2б

Производитель: ООО "Компания Алкор Био" (Россия)

Вид изделия: Альфа-фетопротеин (АФП) ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 148 контрактов, медианная цена за единицу 7 172 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 2 ---
2. Х Л Р А К I ЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип действия
В наборе «ИФА-АФП» использован «сэндвич»-вариант твердофазного  
иммуноферментного анализа. Для реализации этого варианта использованы два  
моноклональных антитела с различной эпитопной специфичностью к АФП. Одно из них  
иммобилизовано на твердой фазе (внутренняя поверхность лупок), второе конъюгировано  
с нероксидазой хрена. В лунках, при добавлении исследуемого образца и конъюгата апти-  
АФ11-пероксидаза, во время инкубации одновременно происходит иммобилизация АФП,  
содержап;егося в исследуемом образце, и связывание образовавшегося комплекса с  
конъюгатом.
Несвязавшиеся компоненты удаляются промывкой. Количество связавпюгося  
конъюгата прямо пропорционально количеству АФП в исследуемом образце (Рисунок 1).
< о >1
анти-АФП-пероксидаза 
Планш ет 
с антителами к АФП
Рисунок 1. Схема анализа
Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лупках.  
Степень окраски прямо пропорциональна концентрации АФП в анализируемых пробах.  
После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочного  
графика рассчитывается концентрация АФП в исследуемых образцах.
2.2. Состав набора
—  комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов в рамке с иммобилизованными па
внутренней поверхности лунок моноклональными антителами к АФП, маркирован
«Стрипы с моноклональными антителами к АФП» —  1  упаковка;
— калибровочные пробы (КП), аттестованные по Первому международному стандарту
WHO на АФП 72/225, содержащие известные количества АФП. Флаконы маркированы  
«Калибровочная проба №1», «Калибровочная проба №2», «Калибровочная проба №3»,
«Калибровочная проба №4», «Калибровочная проба №5», «Калибровочная проба № 6 »;
точные значения концентраций АФП в калибровочных пробах указаны па этикетках  
флаконов, ориентировочные -  0; 10; 50; 100; 200; 300 МЕ/мл -  6 флаконов
(лиофилизованпые препараты или жидкости но 0,5 мл);
— конъюгат анти-АФП-пероксидаза, маркирован «Конъюгат Е» —  1  флакон (14 мл);
— водно-солевой раствор для разведения образцов сыворотки крови, маркирован  
«Буфер Д» —  1  флакон (10 мл);
— к о н ц е н т р и р о в а 1П 1ы й  в о д н о -с о л е в о й  р а с т в о р  д л я  промывки л у н о к , м а р к и р о в а н  
«Буфер Р» —  1  ф л а к о н  (14 мл);
— раствор тетраметилбензидина, маркирован «Раствор ТМБ» —  1  флакон (14 мл);


--- стр. 3 ---
—  стоп-реагспт (1 Н соляная кислота), маркирован «Стоп-реагент» —  1  флакон  
(14 мл);
—  контрольная сыворотка с известным содержанием АФП, маркирована «Контрольная  
сыворотка» —  1  флакон (лиофилизованный препарат или жидкость 0,5 мл);
—  прозрачный пластиковый пакет с замком (при упаковке стрипов в пакет из  
2-слойного полиэтилена).
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Специфичность. Не обнаружено перекрестной реакции обоих  
моноклональных антител к АФП с сывороточным альбумином, хорионическим  
гонадотропином, плацентарным лактогеном и иммуноглобулинами человека.
3.2. Коэффициент вариации результатов определения АФП в одном и том же  
образце сыворотки крови человека с использованием набора «ИФА-АФП» не превыншет  
8% .
3.3. Линейность. Зависимость концентрации АФП в образцах сыворотки крови  
при разведении их буфером Д имеет линейный характер в диапазоне концентраций  
калибровочных проб №2 - № 6 и составляет 90-110% .
3.4. Точность. Данный аналитический параметр проверяется тестом на  
«открытие» АФП —  проверка соответствия значения определяемой концентрации АФП  
расчетной величине, полученной путем смешивания равных объемов контрольной  
сыворотки и калибровочной пробы № 6. Процент открытия составляет 90-110%.
3.5. Чувствительность. Минимальная достоверно определяемая набором  
концентрация АФП в сыворотке крови человека не превышает 0,9 МЕ/мл.
3.6. Хук-эффект высоких концентраций. В наборах реагентов, основанных на  
«сэндвич»-принципе анализа, при высоких концентрациях аналита зависимость величины  
оптической плотности от концентрации становится обратно пропорциональной (так  
называемый хук-эффект высоких концентраций). При использовании набора «ИФА-АФП»  
хук-эффект не обнаружен вплоть до концентрации АФП 12 500 МЕ/мл.
3.7. Диапазон ожидаемых значений. Концентрация АФП в сыворотке крови у  
200 здоровых доноров обоих полов составила 0-14,4 МЕ/мл. В таблице 1  приведены  
значения ожидаемых показателей АФП у женщин на различных сроках нормально  
протекающей беременности. Значения медиан получены в Федеральном медико­
генетическом центре при ГУПИИАГ им. Д.О. Отта РАМН, г. Санкт-Петербург. Всего  
исследовано 22 058 образцов крови беременных женщин Северо-Западного региона.
Таблица 1
Срок беременности  
(полных недель)
Медиана АФП,  
МЕ/мл
Толерантные пределы,  
МЕ/мл
14 28 13-47
15 31 17-70
16 35 19-62
17 38 22-69
18 45 25-60
19 48 28-92
2 0 54 29-104


--- стр. 4 ---
Диапазон ожидаемых значений, медианы и их толерантные пределы зависят от  
многих факторов: специфичности метода, особенностей исследуемой популяции,
точности метода в конкретной лаборатории. По этой причине каждой лаборатории  
рекомендуется использовать предоставленные изготовителем значения только до тех пор,  
пока специалистами лаборатории не будут определены диапазоны ожидаемых значений,  
характерных для конкретной популяции в месте расположения лаборатории.
Примечание: в наборе «ИФА-АФП» значения концентраций калибровочных проб  
выражены в МЕ/мл. Для пересчета концентраций А Ф П  в нг/мл необходимо значение кон­
центрации в МЕ/мл ум нож ить на 1,21.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Потенциальный риск применения набора —  класс 26.
4.2. Все компоненты набора в используемых концентрациях являются  
нетоксичными.
4.3. При работе с набором следует соблюдать ГОСТ Р 52905-2007 «Лаборатории  
медицинские. Требования безопасности».
4.4. Стоп-реагент представляет собой 1 Н раствор соляной кислоты. Избегать  
разбрызгивания и попадания на кожу и слизистые. В случае попадания стоп-реагента на  
кожу и слизистые необходимо промыть пораженный участок большим количеством  
проточной воды.
4.5. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или  
пластиковые перчатки, т.к. производные крови, входящие в состав набора, и исследуемые  
образцы являются потенциально инфицированным материалом, способным длительное  
время сохранять и передавать возбудителей различных вирусных инфекций.
4.6. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с  
набором, должны быть соответствующим образом маркированы и храниться отдельно.
4.7. Запрещается прием пищи, использование косметических средств и курение  
в помещениях, предназначенных для работы с наборами.
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
—  Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую  
плотность раствора в лунках при длине волны 450 нм;
— прибор для встряхивания рамки со стрипами (термостатируемый шейкер),  
позволяющий производить встряхивание со скоростью 400-800 об/мин при температуре  
+37°С;
—  пипетки полуавтоматические одноканальные со сменными наконечниками с  
изменяемым объемом отбора жидкостей: на 5-50 мкл; 40-200 мкл; 200-1000 мкл; 1000-  
5000 мкл;
— пипетка полуавтоматическая восьмиканальная со сменными наконечниками, позво­
ляющая отбирать объемы жидкости до 300 мкл;
—  цилиндр мерный, позволяющий отмерять 50-500 мл;
— стакан стеклянный подходящего объема;
—  вода дистиллированная;
— бумага фильтровальная;
— перчатки резиновые или пластиковые;
I


--- стр. 5 ---
— 1% раствор гипохлорита натрия или 6% раствор перекиси водорода;
—  контейнер для дезинфекции;
—  ванночки для внесения реагентов восьмиканальной пипеткой.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
6.1. Забор крови из вены осуществляют с соблюдением правил асептики. После  
формирования сгустка сыворотку отделяют путем центрифугирования. После  
центрифугирования сыворотку переносят в отдельную пробирку.
6.2. Для проведения анализа не разрешается использовать плазму крови,  
гемолизированную или мутную сыворотку, а также образцы сыворотки, содержащие азид  
натрия.
6.3. Образцы сыворотки крови разрещается хранить при температуре +2...8°С  не  
более 2-х суток; при необходимости более длительного хранения (до 3-х месяцев)  
рекомендуется аликвотировать образец и хранить в замороженном виде при температуре  
-20°С  и ниже. Не допускается повторное замораживание образца.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
7.1. Подготовка реагентов
7.1.1. Стрипы. Перед вскрытием пакет со стрипами необходимо выдержать при  
комнатной температуре (+18...25°С) не менее 30 минут. Вскрыть пакет и переставить на  
свободную рамку необходимое количество стрипов.
7.1.2. Жидкие калибровочные пробы и контрольная сыворотка готовы к  
использованию.
Для восстановления лиофилизованных калибровочных проб и контрольной  
сыворотки перед вскрытием флаконов легким постукиванием стряхнуть частицы,  
прилипшие к стенкам флаконов или к крышкам. Открыть флаконы и положить крышки  
перевернутыми на сухую поверхность. В каждый флакон с калибровочной пробой и  
контрольной сывороткой внести по 0,5 мл дистиллированной воды и закрыть крышками.  
Выдержать флаконы в течение 10 минут при комнатной температуре без перемепшвания.  
Затем, аккуратно наклоняя и вращая флаконы, перемешать их содержимое до полного  
растворения, избегая пенообразования. В течение следующих 10 минут вьщержать  
флаконы при комнатной температуре, периодически перемешивая.
7.1.3. Конъюгат готов к использованию. Расход конъюгата на один стрин  
составляет 1,15 мл.
7.1.4. Буфер Д готов к использованию.
7.1.5. Промывочный раствор. Необходимое количество буфера Р развести  
дистиллированной водой в 2 0 раз.
Например:
5 мл буфера Р + 95 мл дистиллированной воды.
Тщательно перемешать, избегая ценообразования.
7.1.6. Раствор тетраметилбензидина (ТМБ) готов к использованию. Расход ТМБ на  
один стрин составляет 1,15 мл.
7.1.7. Стоп-реагент готов к использованию. Расход стоп-реагента на один стрин  
составляет 1,15 мл.
7.1.8. Все реагенты перед проведением анализа должны быть тщательно  
перемешаны и доведены до комнатной температуры (+18...25°С).
В приложении 1  приведена схема проведения анализа.
7.1.9. Разведение исследуемых образцов сывороток крови. Если по  
предварительным данным или по результатам анализа (см. п 9.3.) значения концентрации
5


--- стр. 6 ---
АФП в исследуемых образцах выше КП № 6, образцы следует развести буфером Д в 100 и  
5000 раз. Пример подготовки образца к анализу:
Образец № 1  (разведение в 100 раз):
990 мкл буфера Д + 10 мкл исследуемого образца.
Образец № 2 (разведение в 5000 раз):
490 мкл буфера Д + 10 мкл образца № 1.
При каждом разведении необходимо тщательное перемешивание.
7.2. Постановка анализа
7.2.1. Составить протокол маркировки лунок. Лунки промаркировать следующим  
образом:
А1, А2 —  № 1  —  для измерения величины оптической плотности раствора ТМБ;
В 1, В2 —  № 2 —  для измерения величины оптической плотности КП № 1;
С 1, С2 —  № 3 —  для измерения величины оптической плотности КП №2;
D 1, D2 —  № 4 —  для измерения величины оптической плотности КП №3;
Е 1,Е 2 —  № 5 — для измерения величины оптической плотности КП №4;
F1, F2 —  № 6 —  для измерения величины оптической плотности КП №5;
G1, G2 —  № 7 —  для измерения величины оптической плотности КП № 6;
И 1, П2 —  № 8 —  для измерения величины оптической плотности контрольной  
сыворотки.
7.2.2. Во все лунки, кроме лунок Л1 и А2, внести по 100 мкл конъюгата.
7.2.3. Внести в соответствующие лунки по 20 мкл калибровочных проб и  
контрольной сыворотки, в оставшиеся лунки - по 2 0 мкл исследуемой сыворотки крови в  
дубликатах.
Примечание: 
общее время внесения калибровочных проб, контрольной сыворотки  
и исследуемых сывороток крови не должно превышать 15 минут, иначе время инкубации  
разных образцов будет значительно различаться, что приведет к неправильным  
результатам .
7.2.4. Инкубировать стрипы в течение 60 минут при встряхивании в  
термостатируемом шейкере при температуре +37°С со скоростью 500-800 об/мин.
7.2.5. По окончании инкубации удалить содержимое лунок в контейнер с  
дезинфицирующим раствором ( 1% раствором гипохлорита натрия и;ш 6% раствором  
перекиси водорода) и промыть лунки пять раз. При каждой промывке во все лунки  
добавлять по 300 мкл промывочного раствора, приготовлешюго по п. 7.1.5, встряхнуть  
рамку на шейкере в течение 5-10 секунд с последующим декантированием. После  
последнего декантирования тщательно удалить остатки жидкости из лунок постукиванием  
рамки со Стрипами в перевернутом положении по фильтровальной бумаге.
Допускается промывка лунок при помощи автоматического промывочного  
устройства.
7.2.6. Пемедленно внести во все лунки по 100 мкл раствора ТМБ. Инкубировать  
стрипы в темноте при комнатной температуре (+18...25°С) в течение 15-30 минут в  
зависимости от степени развития окраски.
Примечание: максимальная оптическая плотность не должна превышать  
пределов линейного измерения спектрофотометра. Рабочий диапазон спектрофото­
м етра необходимо уто ч н ять в паспорте прибора. Рекомендуемая максимальная  
оптическая плотность не более 2,5 ед. ОП.
12.1. Добавить во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности,  
как и раствор ТМБ, по 100 мкл стоп-реагента для остановки ферментной реакции,  
I встряхивать на шейкере в течение 1-2 минут при комнатной температуре (+18...25°С).
I 7.2.8. Если невозможно измерить оптическую плотность в лунках планшета
I непосредственно после выполнения п. 7.2.7., то следует иметь в виду, что окраска в


--- стр. 7 ---
Измерить на фотометре вертикального сканирования оптическую плотность в  
лунках при длине волны 450 нм.
При регистрации результатов необходимо вычитать величину оптической  
плотности в лунках Л1 и А2 из значений оптических плотностей всех остальных лунок.
П р и м е ч а н и е : среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках  
А1 и А2 не должно превышать 0,09 ед.ОП.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1. Построить калибровочный график зависимости оптических плотностей от  
концентрации АФП (МЕ/мл) в калибровочных пробах (Рисунок 2). Внешний вид графика  
зависит от способа преобразования осей.
П р и м е ч а н и е  1 : для построения калибровочных графиков рекомендуется
использовать Программное обеспечение «ИФА Мастер».
П р1ш е ч а н и е  2 : для построения калибровочного графика на масштабной бумаге  
необходимо использовать данные оптических плотностей после вычитания из tmx средней  
величины оптической плотности лупок с ТМБ.
Если программа ф отом етра не позволяет вы чи тать величину оптической  
плотности лунок А 1 и А2, т о  необходимо пользоваться формулой:
В - В т ,
где В -  среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках,  
содержащих капибровочпые или исследуемые пробы,
В т—  среднее арифметическое значение оптической плотности лунок А 1 и А2.
9.2. Определить содержание АФП в пробах по калибровочному графику. В  
случае дополнительного разведения образцов необходимо измеренную концентрацию  
АФ11 умножить на фактор разведения.
9.3. Экстраполяция калибровочного графика для значений концентрации АФП,  
превыншющих номинал КП № 6, не допускается. Для точного определения концентрации  
в таких образцах необходимо выполнить их разведение в соответствии с п. 7.1.9.
Концентрация АФП, МЕ/мл  
Рисунок 2. Типичный калибровочный график  
Запрещается использовать для оценки реальных экспериментальных данных!