Набор реагентов для количественного иммуноферментного определения свободного простат-специфического антигена в сыворотке крови человека («ОнкоИФА-свободный ПСА») по ТУ 9398-238-98539446-2011 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2012/13341 от 18.04.2012 · класс риска 2б

Производитель: ООО "Компания Алкор Био" (Россия)

Вид изделия: Свободный (несвязанный) простатический специфический антиген (ПСА) ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 114 контрактов, медианная цена за единицу 6 232 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
Приказом Росздравнадзора директор
от«_»_____20_г.№ __________ ( ( § 1 Х)^0^,<|^^|Мп|^ия Алкор Био»
|^Ш вы рсв М.В. 
5/i марта 20 11 г.
«УТВЕРЖДЕНА» «УТВЕРЖДАЮ»
И Н С Т Р У К Ц И Я  п о  П РИ М ЕН ЕН И Ю 
Н АБО РА Р Е А Г Е Н Т О В  Д Л Я  К О Л И Ч Е С Т В Е Н Н О ГО  И М М У Н О Ф Е Р М Е Ш ТЮ ГО
О П Р ЕД ЕЛ ЕН И Я
СВОБОДНОЮ ПРОСТАТ-СПЕЦИФИЧЕСКОЮ АИТИ1 Е11Л
В СЫ В О Р О Т К Е  КРО ВИ  Ч Е Л О В Е К А 
(«ОнкоИФЛ-свободный ПСА»)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «ОпкоИФА-свободный П С А »  предназначен для количесг-  
венного определения свободной фракции простат-специфического антигена (свободного  
П СА ) в сыворотке крови человека методом твердофазного иммуноферментного анализа.
1.2. П С А  представляет собой гликопротеин с молекулярной массой около  
32 О О О  Да, состоящий из одной полипептидной цепи. П С А  является сериновой протсазой, 
продуцируемой эпителием человеческой простаты. В норме П С А  секретирусгся в семен­
ную жидкость в высоких концентрациях, где он является ферментативно активным и на­
прямую вовлечен в разжижение семенного сгустка. В кровотоке П С А  присутствует в низ­
ких концентрациях. Увеличение концентрации П С А  в сыворотке крови свидетельствует о  
патологиях простаты, таких как доброкачественная гиперплазия и злокачественное пере­
рождение ткани простаты. Определение П С А  широко используется для обнаружения и  
мониторинга пациентов с раком простаты.
Показано, что П С А  образует стабильные комплексы с различными ингибиторами  
протеаз. Основная часть П С А  в сыворотке крови че:ювека присутствует в виде комплекса  
с а|-антихимотрипсином (П С А -А Х Т ). Однако существует больнтя разница в соотноше­
нии свободного П С А  и П С А -А Х Т  комплекса среди различных пациентов. Доля свободно­
го П С А  выше в случае доброкачественной гиперплазии в сравнении с раком простаты.
1.3. Набор «ОпкоИФА-свободный П С А »  рассчитан на проведение anajm3a в дуб­
ликатах 40 неизвестных, 6 калибровочных проб, одной пробы контрольной сыворотки и  
одной пробы для определения оптической плотности раствора ТМ Б при использовании  
всех стрипов одновременно (всего 96 определений).
Примечание: в случае дробного применения набор может быть использован только в 
течение месяца после вскрытия компонентов набора.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1.Нринци 1 1 действии
В наборе «ОпкоИФА-свободный П С А »  использован «сэндвич»-вариант твердофазно­
го иммуноферментного ана:шза. Для реализации этого варианта использованы два моно­
клональных антитела с различной эпитопной специфичностью к П С А . Одно из них иммо­
билизовано на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок), второе конъюгировано с пе-  
роксидазой хрена. В лунках, при добавлении исследуемого образца и ана)штического бу-


--- стр. 2 ---
фера, во время первой инкубации происходит связывание свободного П С Л  с иммобили­
зованными на внутренней поверхности лунок моноклональными антителами, специфич­
ными к уникальному эпитопу на молекуле свободного П С А . Во время второй инкубации  
конъюгат моноклональных антител к П С А  с пероксидазой связывается со свободным  
П С А , иммобилизованным в ходе первой инкубации.
Несвязавшиеся компоненты удаляются промывкой. Количество связавшегося конъю­
гата прямо пропорционально концентрации свободного П С А  в исследуемом образце (Ри­
сунок 1).
« » 1свободный 
ПСА анти-ПСА-пероксидаза  
Планшет с антителами 
к  свободному ПСА
I  Рисунок 1. Схема анализа
Во время инкубации с раствором ТМ Б происходит окрашивание раствора в лунках.  
Степень окраски прямо пропорциональна концентрации свободного П С А  в анализируе­
мых пробах. После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании ка­
либровочного графика рассчитывается концентрация свободного П С А  в исследуемых об­
разцах.
2.2. Состав набора
•  комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов в рамке с иммобилизованными  
на внутренней поверхности лунок моноклональными антителами к П С А , маркирован  
«Стрипы с моноклональными антителами к свободному П С А »  —  1 упаковка;
•  калибровочные пробы (КП), содержащие известные количества свободного П СА .  
Флаконы маркированы «Калибровочная проба № 1», «Калибровочная проба №2», «Калиб­
ровочная проба №3», «Калибровочная проба №4», «Калибровочная проба №5», «Ка;шбро-  
вочная проба №6»; точные значения концентраций свободного П С А  в калибровочных  
пробах указаны на этикетках флаконов, ориентировочные - 0; 0,2; 0,5; 2; 5; 10 нг/мл -  
6 флаконов (лиофилизованные препараты или жидкости по 0,5 мл);
•  аналитический водно-солевой раствор, маркирован «Буфер А »  -  1 флакон (14 мл);
•  конъюгат анти-ПСА-пероксидаза, маркирован «Конъюгат Е » —  1 флакон (14 мл);
•  концентрированный водно-солевой раствор для промывки лунок, маркирован  
«Буфер Р» —  2 флакона (но 14 мл);
•  раствор тетраметилбензидина, маркирован «Раствор ТМ Б» —  1 флакон (14 мл);
•  стоп-реагент (1 П соляная кислота), маркирован «Стоп-реагент» —  1 флакон  
(14 мл);
•  контрольная сыворотка с известным содержанием свободного П С А , маркирована  
«Контрольная сыворотка» —  1 флакон (лиофилизованный препарат или жидкость 0,5 мл);
•  прозрачный пластиковый пакет с замком (при упаковке стрипов в пакет из 2-  
слойного полиэтилена).


--- стр. 3 ---
3. А Н А Л И Т И Ч Е С К И Е  И  Д И А Г Н О С Т И Ч Е С К И Е  Х А Р А К Т Е Р И С  ГИ К И
3.1. Специфичность. Не обнаружено перекрестной реакции моноклональных анти­
тел к свободному П С А  с А Ф П , РЭА, С А  19-9, С А  125, РАРР-А, альбумином, гликопро­
теином, билирубином и человеческим IgG.
3.2. Коэффициент вариации результатов определения свободного П С А  в одном и  
том же образце сыворотки крови человека с использованием набора «ОнкоИФА-  
свободный П С А »  не превышает 8 % .
3.3. Линейность. Зависимость концентрации свободного П С А  в образцах сыворот­
ки крови при разведении их калибровочной пробой №1 имеет линейный характер в диапа­
зоне концентраций калибровочных проб №2 - №6 и составляет 9 0 -110 % .
3.4. Точность. Данный аналитический параметр проверяется тестом на «открытие»  
свободного П С А  —  проверка соответствия значения определяемой концентрации свобод­
ного П С А  расчетной величине, полученной путем смешивания равных объемов контроль­
ной сыворотки и калибровочной пробы №3. Процент открытия составляет 9 0 -1 10 % .
3.5. Чувствительность. Минимальная достоверно определяемая набором концен­
трация свободного П С А  в сыворотке крови человека не превышает 0,08 нг/мл.
3.6. Ожидаемое пороговое соотношение. Отношение концентрации свободного  
П С А  к концентрации общего П С А  может быть использовано как критерий для дифферен­
циальной диагностики рака простаты и доброкачественной гиперплазии предстательной  
железы (Д ГПЖ ) у пациентов с умеренно увеличенным (4-10 нг/мл) уровнем общего П СА .  
Отношение концентрации свободного П С А  к концентрации общего П С А  выражается в  
процентах и имеет вид:
Копиентраиия свободного ПСА х ю о%
Концентрация общего ПСА
Значение соотношения концентраций свободного и общего П С А  ниже определенного  
уровня (по данным литературы —  1 4 -1 6 % )  с большой вероятностью свидетельствует о  
наличии рака предстательной железы, однако конкретный уровень этого порогового соот­
ношения в различных лабораториях и клиниках подвержен некоторым колебаниям.
Измерение концентрации одного только свободного П С А  в сыворотке (без измерения  
концентрации общего П С А  и расчета их соотношения) не имеет самостоятельного диаг­
ностического значения. Для получения корректных значений соотношения свободного и  
общего П С А  необходимо измерять их в один день, не допуская повторного заморажива­
ния-размораживания образца.
Ожидаемое пороговое соотношение зависит от многих факторов: специфичности ме­
тода, особенностей исследуемой популяции, точности метода в конкретной лаборатории.  
По этой причине каждой лаборатории рекомеьщуется использовать предоставленное изго­
товителем соотношение только до тех пор, пока специалистами лаборатории не будет оп­
ределено ожидаемое пороговое соотношение, характерное для конкретной популяции в  
месте расположения лаборатории.


--- стр. 4 ---
4.1. Потенциальный риск применения набора —  класс 26.
4.2. Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксич­
ными.
4.3. При работе с набором следует соблюдать требования Г О С Т  Р 52905-2007 «Ла­
боратории медицинские. Требования безопасности».
4.4. Стоп-реагент представляет собой 1 Н раствор соляной кислоты. Избегать раз­
брызгивания и попадания на кожу и слизистые. В случае попадания стоп-реагента на ко­
жу и слизистые необходимо промыть пораженный участок большим количеством про­
точной воды.
4.5. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластико­
вые перчатки, т.к. производные крови, входящие в состав набора, и исследуемые образцы  
являются потенциально инфицированным материалом, способным длительное время со­
хранять и передавать возбудителей различных вирусных инфекций.
4.6. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с набо­
ром, должны быть соответствующим образом маркированы и храниться отдельно.
4.7. Запрещается прием пищи, использование косметических средств и курение в  
помещениях, предназначенных для работы с наборами.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
5. О Б О Р У Д О В А Н И Е  И  М А Т Е Р И А Л Ы
•  Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптиче­
скую плотность раствора в лунках при длине волны 450 нм;
•  прибор для встряхивания рамки со стрипами (термостатируемый шсйкер), позво­
ляющий производить встряхивание со скоростью 400-800 об/мин при температуре + 3 7 °С ;
•  пипетки полуавтоматические одноканальные со сменными наконечниками с из­
меняемым объемом отбора жидкостей: на 5-5 0  мкл; на 40-200 мкл; на 200-1000 мкл; на  
1000-5000 мкл;
•  пипетка полуавтоматическая восьмиканальная со сменными наконечниками, по-  
зволяюн1ая отбирать объемы жидкости до 300 мкл;
•  цилиндр мерный, позволяющий отмерять 50-500 мл;
•  стакан стеклянный подходящего объема;
•  вода дистиллированная;
•  бумага фильтровальная;
•  перчатки резиновые или пластиковые;
•  1 %  раствор гипохлорита натрия или 6 %  раствор перекиси водорода;
•  контейнер для дезинфекции;
•  ванночки для внесения реагентов восьмиканальной пипеткой.


--- стр. 5 ---
6. АНАЛИЗИ РУЕМ Ы Е ОБРАЗЦЫ
6.1. Забор крови из вены осуществляют с соблюдением правил асептики. После  
формирования сгустка сыворотку отделяют путем центрифугирования. После центрифу­
гирования сыворотку переносят в отдельную пробирку.
6.2. Для проведения анализа не следует использовать плазму крови, гемолизиро-  
ванную или мутную сыворотку, а также образцы сыворотки, содержащие азид натрия.
6.3. Образцы сыворотки крови разрешается хранить при температуре +2...8°С не  
более 2-х суток; при необходимости более длительного хранения (до 3-х месяцев) реко­
мендуется аликвотировать образец и хранить в замороженном виде при  
температуре -20°С  и ниже. Не допускается повторное замораживание образца.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
7.1. Подготовка реагентов
7.1.1. Стрипы. Перед вскрытием пакет со стринами необходимо выдержать при  
комнатной температуре (+18...25°С ) не менее 30 минут. Вскрыть пакет и переставить на  
свободную рамку необходимое количество стрипов.
7.1.2. Жидкие калибровочные пробы и контрольная сыворотка готовы к использо­
ванию.
Для восстановления лиофилизованных калибровочных проб и контрольной сыворотки  
перед вскрытием флаконов легким постукиванием стряхнуть частицы, прилипшие к стен­
кам флаконов или к крышкам. Открыть флаконы и положить крышки перевернутыми на  
сухую поверхность. В каждый флакон с калибровочной пробой и контрольной сыворот­
кой внести по 0,5 мл дистиллированной воды и закрыть крышками. Выдержать флаконы в  
течение 10 минут при комнатной температуре без перемешивания. Затем, аккуратно на­
клоняя и вращая флаконы, перемешать их содержимое до полного растворения, избегая  
пенообразования. В течение следующих 10 минут выдержать флаконы при комнатной  
температуре, периодически перемешивая.
7.1.3. Конъюгат готов к использованию. Расход конъюгата на один стрип состав­
ляет 1,15 мл.
7.1.4. Буфер А готов к использованию. Расход буфера А на один стрин составляет
1,15 мл.
7.1.5. Промывочный раствор. Необходимое количество буфера Р развести дистил­
лированной водой в 20 раз.
Например:
5 мл буфера Р + 95 мл дистиллированной воды.
Тщательно перемешать, избегая пенообразования.
7.1.6. Раствор тетраметилбензидипа (ТМБ) готов к использованию. Расход ГМБ на  
один стрип составляет 1,15 мл.
7.1.7. Стоп-реагент готов к использованию. Расход стоп-реагента на один стрип  
составляет 1,15 мл.
7.1.8. Все реагенты перед проведением анализа должны быть тщательно переме­
шаны и доведены до комнатгюй температуры.
В Приложении 1  приведена схема проведения анализа.
7.2. Постановка анализа
7.2.1.
образом:
Составить протокол маркировки лунок. Лунки промаркировать следующим


--- стр. 6 ---
A l, A2 -  № 1  - для измерения величины оптической плотности раствора ТМБ;
В1, В2 -  № 2 - для измерения величины оптической плотности КП №1;
С1, С2 -  № 3 - для измерения величины оптической плотности КП №2;
D 1,D 2 -  № 4 - для измерения величины оптической плотности КП №3;
Е 1, Е2 -  № 5 - для измерения величины оптической плотности КП №4;
F1, F2 -  № 6 - для измерения величины оптической плотности КП №5;
G 1,G 2 -  № 7 - для измерения величины оптической плотности КП №6;
И1, Н2 -  № 8 - для измерения величины оптической плотности контрольной сыво­
ротки.
7.2.2. Во все лунки, кроме лунок Л1 и А2, внести по 100 мкл буфера А.
7.2.3. Внести в соответствуюпще лунки по 50 мкл калибровочных проб и контроль­
ной сыворотки, в оставшиеся лунки -  по 50 мкл исследуемой сыворотки крови в дублика­
тах.
П р и м е ч а н и е : общее время внесения калибровочных проб, контрольной сыворотки и  
исследуемых сы вороток крови не должно превышать 15 минут, иначе время инкубации  
разных образцов будет значителыю различаться, что  приведет к неправильным резуль­
та та м .
7.2.4. Инкубировать стрипы в течение 60 минут при встряхивании в термостаги-  
руемом шейкере при температуре +37°С со скоростью 500-800 об/мип.
7.2.5. По окончании инкубации удалить содержимое лунок в контейнер с дезинфи­
цирующим раствором (1% раствором гипохлорита натрия или 6% раствором перекиси во­
дорода) и промыть лунки пять раз. При каждой промывке во все лунки добавить  
но 300 мкл промывочного раствора, приготовленного по п. 7.1.5., встряхнуть рамку на  
шейкере в течение 5-10 секунд с последуюпшм декантированием. После последнего де­
кантирования тщательно удалить остатки жидкости из лунок постукиванием рамки со  
Стрипами в перевернутом положении по фильтровальной бумаге.
Допускается промывка лунок при помощи автоматического промывочного устройст­
ва.
7.2.6. Немедленно внести во все лунки, кроме лунок А1 и А2, по 120 мкл конъюгата.
7.2.7. Инкубировать стрипы согласно п.7.2.4.
7.2.8. По окончании инкубации удалить содержимое лунок декантированием и про­
мыть лунки согласно п. 7.2.5.
7.2.9. Немедленно внести во все лунки по 100 мкл раствора ТМБ. Инкубировать  
стрипы в темноте при комнатной температуре (+18...25°С ) в течение 15-30 минут в зави­
симости от степени развития окраски.
7.2.10. Добавить во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, как  
и раствор ТМБ, по 100 мкл стоп-реагента для остановки ферментной реакции, перемешать  
на шейкере в течение 1-2 минут при комнатной температуре.
7.2.11. Если невозможно измерить оптическую плотность в лунках планшета непо­
средственно после выполнения п. 7.2.10., то следует иметь в виду, что окраска в лунках  
планшета стабильна не более 20 минут при комнатной температуре.
П р и м е ч а н и е : максимальная оптическая плотность не должна превышать пре­
делов линейного измерения спектроф отометра. Рабочий диапазон спектроф отометра  
необходимо у то ч н я ть  в паспорте прибора. Рекомендуемая максимальная оптическая  
плотность не более 2,5 ед. ОП.


--- стр. 11 ---


--- стр. 12 ---
Приказом Росздравнадзора орейгеральный директор
от « _ » _ _ _ _  20_г.№__________ 0 0 |ш |кбОД 1аййк:^Ал1^
. < <и-Ш »- Ntonta 2^011 г.
«УТВЕРЖ ДЕНА» ^ --«УТВ ЕРЖ Д А Ю »
ИНСТРУКЦИЯ п о  ПРИМЕНЕНИЮ  
НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
СВОБОДНОГО ПРОСТАТ-СПЕЦИФ ИЧЕСКОГО АНТИГЕНА
В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА  
(«ОнкоИФ А-свободный ПСА»)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «ОнкоИФА-свободный ПСА» предназначен для количест­
венного определения свободной фракции простат-специфического антигена (свободного  
ПСА) в сыворотке крови человека методом твердофазного иммуноферментного анализа.
1.2. ПСА представляет собой гликопротеин с молекулярной массой около  
32 О О О  Да, состоящий из одной полипептидной цепи. ПСА является сериновой протеазой,  
продуцируемой эпителием человеческой простаты. В норме ПСА секретируется в семен­
ную жидкость в высоких концентрациях, где он является ферментативно активным и на­
прямую вовлечен в разжижение семенного сгустка. В кровотоке ПСА присутствует в низ­
ких концентрациях. Увеличение концентрации ПСА в сыворотке крови свидетельствует о  
патологиях простаты, таких как доброкачественная гиперплазия и злокачественное пере­
рождение ткани простаты. Определение ПСА широко используется для обнаружения и  
мониторинга пациентов с раком простаты.
Показано, что ПСА образует стабильные комплексы с различными ингибиторами  
протеаз. Основная часть ПСА в сыворотке крови человека присутствует в виде комплекса  
с a i-антихимотрипсином (ПСА-АХТ). Однако существует большая разница в соотноше­
нии свободного ПСА и ПСА-АХТ комплекса среди различных пациентов. Доля свободно­
го ПСА выше в случае доброкачественной гиперплазии в сравнении с раком простаты.
1.3. Набор «ОнкоИФА-свободный ПСА» рассчитан на проведение анализа в дуб­
ликатах 40 неизвестных, 6 калибровочных проб, одной пробы контрольной сыворотки и  
одной пробы для определения оптической плотности раствора ТМБ при использовании  
всех стрипов одновременно (всего 96 определений).
П р и м е ч а н и е : в  с л у ч а е  д р о б н о г о  п р и м е н е н и я  н а б о р  м ож ет  б ы т ь  и с п о л ь з о в а н  т о л ь к о  в т е ч е н и е  м е с я ц а  п о с л е  в с к р ы т и я  к о м п о н е н т о в  н а б о р а .
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1.Принцип действия
В наборе «ОнкоИФА-свободный ПСА» использован «сэндвич«-вариант твердофазно­
го иммуноферментного анализа. Для реализации этого варианта использованы два моно­
клональных антитела с различной эпитопной специфичностью к ПСА. Одно из них иммо­
билизовано на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок), второе конъюгировано с пе-  
роксидазой хрена. В лунках, при добавлении исследуемого образца и аналитического бу-
1


--- стр. 13 ---
фера, во время первой инкубации происходит связывание свободного ПСА с иммобили­
зованными на внутренней поверхности лунок моноклональными антителами, специфич­
ными к уникальному эпитопу на молекуле свободного ПСА. Во время второй инкубации 
конъюгат моноклональных антител к ПСА с пероксидазой связывается со свободным 
ПСА, иммобилизованным в ходе первой инкубации.
Несвязавшиеся компоненты удаляются промывкой. Количество связавшегося конъю­
гата прямо пропорционально концентрации свободного ПСА в исследуемом образце (Ри­
сунок 1).
< о >
1свободный
ПСА анти-ПСА-пероксидаза  
Планшет с антителами  
к свободному ПСА
Рисунок 1 . Схема анализа
Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках.  
Степень окраски прямо пропорциональна концентрации свободного ПСА в анализируе­
мых пробах. После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании ка­
либровочного графика рассчитывается концентрация свободного ПСА в исследуемых об­
разцах.
2.2. Состав набора
• комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов в рамке с иммобилизованными  
на внутренней поверхности лунок моноклональными антителами к ПСА, маркирован  
«Стрипы с моноклональными антителами к свободному ПСА» —  1  упаковка;
• калибровочные пробы (КП), содержащие известные количества свободного ПСА.  
Флаконы маркированы «Калибровочная проба №1», «Калибровочная проба №2», «Калиб­
ровочная проба №3», «Калибровочная проба №4», «Калибровочная проба №5», «Калибро­
вочная проба №6»; точные значения концентраций свободного ПСА в калибровочных  
пробах указаны на этикетках флаконов, ориентировочные - 0; 0,2; 0,5; 2; 5; 10 нг/мл -
6 флаконов (лиофилизованные препараты или жидкости по 0,5 мл);
• аналитический водно-солевой раствор, маркирован «Буфер А» -  1  флакон (14 мл);
• конъюгат анти-ПСА-пероксидаза, маркирован «Конъюгат Е» —  1  флакон (14 мл);
• концентрированный водно-солевой раствор для промывки лунок, маркирован  
«Буфер Р» —  2 флакона (по 14 мл);
• раствор тетраметилбензидина, маркирован «Раствор ТМБ» —  1  флакон (14 мл);
• стоп-реагент (1 И соляная кислота), маркирован «Стоп-реагент» —  1  флакон  
(14 мл);
• контрольная сыворотка с известным содержанием свободного ПСА, маркирована  
«Контрольная сыворотка» —  1  флакон (лиофилизованный препарат или жидкость 0,5 мл);
• прозрачный пластиковый пакет с замком (при упаковке стрипов в пакет из 2-  
слойного полиэтилена).


--- стр. 14 ---
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Специфичность. Не обнаружено перекрестной реакции моноклональных анти­
тел к свободному ПСА с АФП, РЭА, СА 19-9, СА 125, РАРР-А, альбумином, гликопро­
теином, билирубином и человеческим IgG.
3.2. Коэффициент вариации результатов определения свободного ПСА в одном и  
том же образце сыворотки крови человека с использованием набора «ОнкоИФА-  
свободный ПСА» не превышает 8%.
3.3. Линейность. Зависимость концентрации свободного ПСА в образцах сыворот­
ки крови при разведении их калибровочной пробой №1 имеет линейный характер в диапа­
зоне концентраций калибровочных проб №2 - №6 и составляет 90-110%.
3.4. Точность. Данный аналитический параметр проверяется тестом на «открытие»  
свободного ПСА —  проверка соответствия значения определяемой концентрации свобод­
ного ПСА расчетной величине, полученной путем смешивания равных объемов контроль­
ной сыворотки и калибровочной пробы №3. Процент открытия составляет 90-110%.
3.5. Чувствительность. Минимальная достоверно определяемая набором концен­
трация свободного ПСА в сыворотке крови человека не превышает 0,08 нг/мл.
3.6. Ожидаемое пороговое соотношение. Отношение концентрации свободного  
ПСА к концентрации общего ПСА может быть использовано как критерий для дифферен­
циальной диагностики рака простаты и доброкачественной гиперплазии предстательной  
железы (ДГПЖ) у пациентов с умеренно увеличенным (4-10 нг/мл) уровнем общего ПСА.  
Отношение концентрации свободного ПСА к концентрации общего ПСА выражается в  
процентах и имеет вид:
К о н и е и т р а и и я  с в о б о д н о г о  П С А  х  ю о %К о н ц е н т р а ц и я  о б щ е г о  П С А
Значение соотношения концентраций свободного и общего ПСА ниже определенного  
уровня (по данным литературы —  14-16%) с большой вероятностью свидетельствует о  
наличии рака предстательной железы, однако конкретный уровень этого порогового соот­
ношения в различных лабораториях и клиниках подвержен некоторым колебаниям.
Измерение концентрации одного только свободного ПСА в сыворотке (без измерения  
концентрации общего ПСА и расчета их соотношения) не имеет самостоятельного диаг­
ностического значения. Для получения корректных значений соотношения свободного и  
общего ПСА необходимо измерять их в один день, не допуская повторного заморажива­
ния-размораживания образца.
Ожидаемое пороговое соотношение зависит от многих факторов: специфичности ме­
тода, особенностей исследуемой популяции, точности метода в конкретной лаборатории.  
По этой причине каждой лаборатории рекомендуется использовать предоставленное изго­
товителем соотношение только до тех пор, пока специалистами лаборатории не будет оп­
ределено ожидаемое пороговое соотношение, характерное для конкретной популяции в  
месте расположения лаборатории.


--- стр. 15 ---
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Потенциальный риск применения набора —  класс 26.
4.2. Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксич­
ными.
4.3. При работе с набором следует соблюдать требования ГОСТ Р 52905-2007 «Ла­
боратории медицинские. Требования безопасности».
4.4. Стоп-реагент представляет собой 1  И раствор соляной кислоты. Избегать раз­
брызгивания и попадания на кожу и слизистые. В случае попадания стоп-реагента на ко­
жу и слизистые необходимо промыть пораженный участок большим количеством про­
точной воды.
4.5. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластико­
вые перчатки, т.к. производные крови, входящие в состав набора, и исследуемые образцы  
являются потенциально инфицированным материалом, способным длительное время со­
хранять и передавать возбудителей различных вирусных инфекций.
4.6. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с набо­
ром, должны быть соответствующим образом маркированы и храниться отдельно.
4.7. Запрещается прием пищи, использование косметических средств и курение в  
помещениях, предназначенных для работы с наборами.
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
• Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптиче­
скую плотность раствора в лунках при длине волны 450 нм;
• прибор для встряхивания рамки со стрипами (термостатируемый шейкер), позво­
ляющий производить встряхивание со скоростью 400-800 об/мин при температуре +37°С;
• пипетки полуавтоматические одноканальные со сменными наконечниками с из­
меняемым объемом отбора жидкостей: на 5-50 мкл; на 40-200 мкл; на 200-1000 мкл; на  
1000-5000 мкл;
• пипетка полуавтоматическая восьмиканальная со сменными наконечниками, по­
зволяющая отбирать объемы жидкости до 300 мкл;
• цилиндр мерный, позволяющий отмерять 50-500 мл;
• стакан стеклянный подходящего объема;
• вода дистиллированная;
• бумага фильтровальная;  
перчатки резиновые или пластиковые;
1% раствор гипохлорита натрия или 6% раствор перекиси водорода;  
контейнер для дезинфекции;
• ванночки для внесения реагентов восьмиканальной пипеткой.


--- стр. 16 ---
6.1. Забор крови из вены осуществляют с соблюдением правил асептики. После  
формирования сгустка сыворотку отделяют путем центрифугирования. После центрифу­
гирования сыворотку переносят в отдельную пробирку.
6.2. Для проведения анализа не следует использовать плазму крови, гемолизиро-  
ванную или мутную сыворотку, а также образцы сыворотки, содержащие азид натрия.
6.3. Образцы сыворотки крови разрешается хранить при температуре +2...8°С не  
более 2-х суток; при необходимости более длительного хранения (до 3-х месяцев) реко­
мендуется аликвотировать образец и хранить в замороженном виде при  
температуре -20°С  и ниже. Не допускается повторное замораживание образца.
7. П РОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
6 . А Н А Л И З И Р У Е М Ы Е  О БРА ЗЦ Ы
♦
7.1. Подготовка реагентов
7.1.1. Стрипы. Перед вскрытием пакет со стрипами необходимо вьщержать при  
комнатной температуре (+18...25°С ) не менее 30 минут. Вскрыть пакет и переставить на  
свободную рамку необходимое количество стрипов.
7.1.2. Жидкие калибровочные пробы и контрольная сыворотка готовы к использо­
ванию.
Для восстановления лиофилизованных калибровочных проб и контрольной сыворотки  
перед вскрытием флаконов легким постукиванием стряхнуть частицы, прилипшие к стен­
кам флаконов или к крышкам. Открыть флаконы и положить крышки перевернутыми на  
сухую поверхность. В каждый флакон с калибровочной пробой и контрольной сыворот­
кой внести по 0,5 мл дистиллированной воды и закрыть крышками. Вьщержать флаконы в  
течение 10 минут при комнатной температуре без перемешивания. Затем, аккуратно на­
клоняя и вращая флаконы, перемешать их содержимое до полного растворения, избегая  
пенообразования. В течение следующих 10 минут вьщержать флаконы при комнатной  
температуре, периодически перемешивая.
7.1.3. Конъюгат готов к использованию. Расход конъюгата на один стрип состав­
ляет 1,15 мл.
7.1.4. Буфер А готов к использованию. Расход буфера А на один стрип составляет
1,15 мл.
7.1.5. Промывочный раствор. Необходимое количество буфера Р развести дистил­
лированной водой в 20 раз.
Например:
5 мл буфера Р + 95 мл дистиллированной воды.
Тщательно перемешать, избегая пенообразования.
7.1.6. Раствор тетраметилбензидина (ТМБ) готов к использованию. Расход ТМБ на  
один стрип составляет 1,15 мл.
7.1.7. Стоп-реагент готов к использованию. Расход стоп-реагента на один стрип  
составляет 1,15 мл.
7.1.8. Все реагенты перед проведением анализа должны быть тщательно переме­
шаны и доведены до комнатной температуры.
В Приложении 1  приведена схема проведения анализа.
7.2. Постановка анализа
Составить протокол маркировки лунок. Лунки промаркировать следующим7.2.1.
образом:


--- стр. 17 ---
A l, А2 -  № 1  - для измерения величины оптической плотности раствора ТМБ;
В1, В2 -  № 2 - для измерения величины оптической плотности КП №1;
С1, С2 -  № 3 - для измерения величины оптической плотности КП №2;
D 1,D 2 -  № 4 - для измерения величины оптической плотности КП №3;
Е1,Е2 -  № 5 - для измерения величины оптической плотности КП №4;
F1,F2 -  № 6 - для измерения величины оптической плотности КП №5;
G1, G2 -  № 7 - для измерения величины оптической плотности КП №6;
Н1, Н2 -  № 8 - для измерения величины оптической плотности контрольной сыво­
ротки.
7.2.2. Во все лунки, кроме лунок А1 и А2, внести по 100 мкл буфера А.
7.2.3. Внести в соответствующие лунки по 50 мкл калибровочных проб и контроль­
ной сыворотки, в оставшиеся лунки -  по 50 мкл исследуемой сыворотки крови в дублика­
тах.
Примечание: общее время внесения калибровочных проб, контрольной сыворотки и  
исследуемых сы вороток крови не должно превышать 15 минут, иначе время инкубации  
разных образцов будет значительно различаться, ч то  приведет к неправильным резуль­
та та м .
7.2.4. Инкубировать стрипы в течение 60 минут при встряхивании в термостати-  
руемом ш ейкере при температуре +37°С со скоростью 500-800 об/мин.
7.2.5. По окончании инкубации удалить содержимое лунок в контейнер с дезинфи­
цирующим раствором (1% раствором гипохлорита натрия или 6% раствором перекиси во­
дорода) и промыть лунки пять раз. При каждой промывке во все лунки добавить  
по 300 мкл промывочного раствора, приготовленного по п. 7.1.5., встряхнуть рамку на  
шейкере в течение 5-1 0  секунд с последующим декантированием. После последнего де­
кантирования тщательно удалить остатки жидкости из лунок постукиванием рамки со  
Стрипами в перевернутом положении по фильтровальной бумаге.
Допускается промывка лунок при помощи автоматического промывочного устройст­
ва.
7.2.6. Немедленно внести во все лунки, кроме лунок А1 и А2, по 120 мкл конъюгата.
7.2.7. Инкубировать стрипы согласно п.7.2.4.
7.2.8. По окончании инкубации удалить содержимое лунок декантированием и про­
мыть лунки согласно п. 7.2.5.
7.2.9. Немедленно внести во все лунки по 100 мкл раствора ТМБ. Инкубировать  
стрипы в темноте при комнатной температуре (+18...25°С ) в течение 15-30 минут в зави­
симости от степени развития окраски.
7.2.10. Добавить во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, как  
и раствор ТМБ, по 100 мкл стоп-реагента для остановки ферментной реакции, перемешать  
на шейкере в течение 1-2 минут при комнатной температуре.
7.2.11. Если невозможно измерить оптическую плотность в лунках планшета непо­
средственно после выполнения п. 7.2.Ю., то следует иметь в виду, что окраска в лунках  
планшета стабильна не более 20 минут при комнатной температуре.
Примечание: максимальная оптическая плотность не должна превышать пре­
делов линейного измерения спектроф отометра. Рабочий диапазон спектроф отометра  
необходимо у то ч н я ть  в паспорте прибора. Рекомендуемая максимальная оптическая  
плотность не более 2,5 ед. ОН.


--- стр. 22 ---
Прошито, пронумеровано, скреплено  
печатью Ю ________) лист_Ср


--- стр. 23 ---
Федеральное государственное учреждение 
«Федеральный Центр сердца, крови и эндокринологии имени В.А.Алмазова» 
Министерства здравоохранении и социального развитии Россий ской  Федерации 
197341, Россия, Санкт-Петербург, ул. Аккуратова, д.2 
Телефон (812) 7 0 2  37 00, E-mail: cr@aImazovcentre.ru
у^ в ё рЩ а ю.А ’ f ' ■  .t p e l i c i ' d s n r , .Ади ректора
/'/<13^.'<<<1)ЦСКЭ им. В.А.Алмазова»ff - ш ч -  - О  \
д ^(jy^paBGoupa3^ России  
I SI По^на^ч^^слёдйв^гельской работе 
uS'i^b'iV / A'&jkoHpaAH /
2011  года
Акт
проведения клинических испытаний 
Набора реагентов дли количесгветюго иммунофсрментного онределепнм свободною 
нростат-специфического антигена в сьнюроткс крови человека 
(«ОнкоИФА-свободный ПСА»)
Цель испытаний  - оценка медицинских и эксплуатационных качеств изделия с целью  
определения возможности его использования в практическом здравоохранении и научных  
исследованиях на территории Российской Федерации.
Место и  сроки проведения: медицинские испытания проводились в ФГУ  
«Федеральный Центр сердца, крови и эндокринологии имени В.А.Алмазова» Министерства  
здравоохранения и социального развития Российской Федерации с « 31 » августа по
« 14» сентября 2011 г.
Краткая характеристика изделия: Набор реагентов «ОнкоИФА-свободный ПСА»  
предназначен для количественного определения свободной фракции простат-  
специфического антигена (свободного ПСА) в сыворотке крови человека методом  
твердофазного иммуноферментного анализа.
В наборе «ОнкоИФА-свободный ПСА» использован «сэндвич»-вариант твердофазного  
иммуноферментного анализа. Для реализации этого варианта использованы два  
моноклональных антитела с различной эпитопной специфичностью к ПСА. Одно из них  
иммобилизовано на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок), второе конъюгировано с  
пероксидазой хрена. В лунках, при добавлении исследуемого образца и аналитического  
буфера, во время первой инкубации происходит связывание свободного ПСА с иммобили­
зованными на внутренней поверхности лунок моноклональными антителами,  
специфичными к уникальному эпитопу на молекуле свободного ПСА. Во время второй  
инкубации конъюгат моноклональных антител к ПСА с пероксидазой связывается со  
свободным ПСА, иммобилизованным в ходе первой инкубации.
Несвязавшиеся компоненты удаляются промывкой. Количество связавшегося  
конъюгата прямо пропорционально концентрации свободного ПСА в исследуемом образце.


--- стр. 24 ---
Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках.  
Степень окраски прямо пропорциональна концентрации свободного ПСА в анализируемых  
пробах. После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании  
калибровочного графика рассчитывается концентрация свободного ПСА в исследуемых  
образцах.
Состав набора:
—  комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов в рамке с иммобилизованными на  
внутренней поверхности лунок моноклональными антителами к ПСА, маркирован «Стрипы  
с моноклональными антителами к свободному ПСА» —  1  упаковка;
—  калибровочные пробы (КП), содержащие известные количества свободного ПСА.  
Флаконы маркированы «Калибровочная проба №1», «Калибровочная проба №2»,  
«Калибровочная проба №3», «Калибровочная проба №4», «Калибровочная проба №5»,  
«Калибровочная проба № 6»; точные значения концентраций свободного ПСА в  
калибровочных пробах указаны на этикетках флаконов, ориентировочные - 0; 0,2; 0,5; 2; 5;  
10 нг/мл - 6 флаконов (лиофилизованные препараты или жидкости по 0,5 мл);
—  аналитический водно-солевой раствор, маркирован «Буфер А» -  1  флакон (14 мл);
—  конъюгат анти-ПСА-пероксидаза, маркирован «Конъюгат Е» —  1  флакон (14 мл);
—  концентрированный водно-солевой раствор для промывки лунок, маркирован  
«Буфер Р» —  2 флакона (по 14 мл);
—  раствор тетраметилбензидина, маркирован «Раствор ТМБ» —  1  флакон (14 мл);
—  стоп-реагент (1 Н соляная кислота), маркирован «Стоп-реагент» —  1  флакон (14 мл);
—  контрольная сыворотка с известным содержанием свободного ПСА, маркирована  
«Контрольная сыворотка» —  1  флакон (лиофилизованный препарат или жидкость 0,5 мл);
—  прозрачный пластиковый пакет с замком (при упаковке стрипов в пакет из 2-слойного  
полиэтилена).
Оборудование, необходимое для проведения анализа
- термостатируемый шейкер (+37°С, скорость встряхивания 500-800 об/мин);
- дозаторы 1  -канальные и 8-канальные, с переменным объемом;
- автоматический вошер для промывки планшетов;
- спектрофотометр планшетный (длина волны 450 нм).
Метод проведения анализа
Испытания проведены в сравнении с референтной тест-системой «Набор для  
определения свободного ПСА в сыворотке крови (Elecsys)» (Elecsys®free PSA), кат.  
№ 03289788190 производства «Roche Diagnostics GmbH».
Анализ проводили согласно инструкциям по применению фирм-изготовителей  
наборов «Elecsys free PSA» и «ОнкоИФА-свободный ПСА». Измерение свободного ПСА в  
пробах проводилось параллельно на двух тест-системах. Оценка результатов  
количественного определения свободного ПСА проводилась на 100 образцах сывороток  
крови здоровых мужчин и мужчин, страдающих различными урологическими  
заболеваниями.
При анализе полученных данных оценивали:
• коэффициент корреляции между результатами измерений концентрации  
свободного ПСА наборами «ОнкоИФА-свободный ПСА» и «Elecsys®free PSA».


--- стр. 25 ---
Критерии достовепности результатов анализа, проведенного с помощью набора 
«ОнкоИФА-свободпый ПСА»
- ОП калибровочной пробы № 6 (Вб) - не менее 1,5 ед.опт.плотн.;
- соотношение ОП калибровочных проб №1 - № 6 -  Bi < Вг < Вз < В 4 < В 5 < Вб;
- отношение Вг/Вб х 1 0 0% - 1,0^ , 0%;
- отношение В 5/В 6 х100% - 40-65%;
- концентрация свободного ПСА в контрольной сыворотке -  0.45-0.68 нг/мл.
Данные, полученные в течение испытания тест-системы «ОнкоИФА-свободный  
ПСА» производства ООО «Компания Алкор Био», соответствуют критериям достоверности  
(Таблица 1):
Таблица 1
ОП пробы  
Вб,
ед.опт.плотн.
Соотношение
ОП
калибровочных  
проб № 1 - № 6
Отношение  
Вз/Вб х 1 0 0% , 
%
Отношение  
Вз/Вб х 1 0 0%, 
%
концентрация  
свободного  
ПСА в 
контрольной  
сыворотке,  
нг/мл
Норма не менее 1,5 В| < В 2 < Вз  
< В 4 < В 5 < Вб 1,0-4,0 40-65 0.45-0.68
Постановка 1 1.802
0.003< 0.035  
<0.087 <0.300  
<0.915 <1.802
1.90 50.8 0.52
Постановка 2 1.852
0.003< 0.038  
<0.090 < 0.352  
<0.947< 1.852
2.05 51.1 0.53
Постановка 3 1.746
0.000 <0.027  
<0.078 <0.366  
<0.898< 1.746
1.5 51.4 0.54
Постановка 4 1.760
0.000 <0.025  
<0.075< 0.347  
<0.901 <1.760
1.4 51.2 0.53
Постановка 5 1.861
0.000 <0.030  
<0.070< 0.343  
<0.953< 1.861
1 . 6 51.2 0.57
Постановка 6 1.845
0.000 <0.030  
<0.071 <0.338  
<0.900 <1.845
1 . 6 48.8 0.55