Набор реагентов для количественного иммуноферментного определения ассоциированного с беременностью протеина-А плазмы в сыворотке крови человека ("ИФА-РАРР-А") по ТУ 9398-208-98539446-2010 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- Приказом Росздравнадзора Генеральный директор от« » 20 г. № _________ Ж<)мпйия Алкор Био» i f . . Швырев М.В. / Ц А л к i ' 12!»-ац^ля 2010г. "AlkorBio y v /’ «УТВЕРЖДЕНА» «УТВЕРЖДАЮ» ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АССОЦИИРОВАННОГО С БЕРЕМЕННОСТЬЮ ПРОТЕИНА А НЛАЗМЫ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА («ИФА-РАРР-А») 1. НАЗНАЧЕНИЕ 1.1. Набор реагентов «ИФА-РАРР-А» предназначен для количественного определения РАРР-А (ассоциированного с беременностью протеина А плазмы) в сыворотке крови человека методом твердофазного иммуноферментного анализа. 1.2. Определяемый аналит является гетеротетрамером, состоящим из двух субъединиц РАРР-А с молекулярной массой 250 кДа и двух субъединиц ргоМВР (основной белок эозинофилов) с молекулярной массой 50-90 кДа. В первом триместре беременности при синдроме Дауна у плода наблюдается снижение уровня РАРР-А в сыворотке крови матери. После 14-й недели беременности различия между уровнем РАРР-А в сыворотке крови матери при синдроме Дауна и нормой исчезают. Установлено, что комбинация данного теста с определением свободной бета- субъединицы ХГЧ, данными УЗИ (толщина воротникового пространства), оценкой возрастных факторов риска является оптимальным методом для пренатального скрининга синдрома Дауна в первом триместре беременности. 1.3. Набор «ИФА-РАРР-А» рассчитан на проведение анализа в дубликатах 40 неизвестных, 6 калибровочных проб, одной пробы контрольной сыворотки и одной пробы для определения оптической плотности раствора ТМБ при использовании всех стрипов одновременно (всего 96 определений). Примечание: в случае дробного применения набор может быть использован только в течение месяца после вскрытия компонентов набора. --- стр. 2 --- 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1. Принцип действия В наборе «ИФА-РАРР-А» использован «сэндвич» - вариант твердофазного иммуноферментного анализа. Для реализации этого варианта использованы два моноклональных антитела с различной эпитопной специфичностью к РАРР-А. Одно из них иммобилизовано на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок), второе конъюгировано с пероксидазой хрена. В лунках, при добавлении исследуемого образца и конъюгата анти-РАРР-А-пероксидаза во время инкубации одновременно происходит иммобилизация РАРР-А, содержащегося в исследуемом образце, и связывание образовавшегося комплекса с конъюгатом. Несвязавшиеся компоненты удаляются промывкой. Количество связавшегося конъюгата прямо пропорционально количеству РАРР-А в исследуемом образце (Рисунок 1). с антителами к РАРР-А Рисунок 1. Схема анализа Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо пропорциональна концентрации РАРР-А в анализируемых пробах. После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочного графика рассчитывается концентрация РАРР-А в исследуемых образцах. 2.2. Состав набора: комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов в рамке с иммобилизованными на внутренней поверхности лунок моноклональными антителами к РАРР-А, маркирован «Стрипы с моноклональными антителами к РАРР-А» -1 упаковка; калибровочные пробы (КП), содержащие известные количества РАРР-А. Флаконы маркированы «Калибровочная проба №1», «Калибровочная проба №2», «Калибровочная проба №3», «Калибровочная проба №4», «Калибровочная проба №5», «Калибровочная проба №6»; точные значения концентраций РАРР-А в калибровочных пробах указаны на этикетках флаконов, ориентировочные - 0; 0.175; 0.7; 1.75; 3.5 и 7.0 мЕд/мл - 6 флаконов (лиофилизованные препараты или жидкости, по 0,5 мл); конъюгат анти-РАРР-А-пероксидаза, маркирован «Конъюгат Е» — 1 флакон (25 мл); водно-солевой раствор для разведения образцов сыворотки крови, маркирован «Буфер Д» — 1 флакон (3 мл); концентрированный водно-солевой раствор для промывки лунок, маркирован «Буфер Р» — 1 флакон (14 мл); раствор тетраметилбензидина, маркирован «Раствор ТМБ» — 1 флакон (14 мл); стоп-реагент (1 Н соляная кислота), м^кирован «Стоп-реагент» — 1 флакон (14 мл); контрольная сыворотка с известным содержанием РАРР-А, маркирована «Контрольная сыворотка» — 1 флакон (лиофилизованный препарат или жидкость 0,5 мл); --- стр. 3 --- прозрачный пластиковый пакет с замком (при упаковке стрипов в пакет из 2-слойного полиэтилена). 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1. Специфичность. Используемые в наборе антитела обладают специфичностью только к гетеротетрамеру РАРР-А/ргоМВР. 3.2. Коэффициент вариации результатов определения РАРР-А в одном и том же образце сыворотки крови человека с использованием набора «ИФА-РАРР-А» не превышает 8%. 3.3. Линейность. Зависимость концентрации РАРР-А в образцах сыворотки крови при разведении их буфером Д имеет линейный характер в диапазоне концентраций калибровочных проб №2 - №6 и составляет 90-110%. 3.4. Точность. Данный аналитический параметр проверяется тестом на «открытие» РАРР-А — проверка соответствия значения определяемой концентрации РАРР-А расчетной величине, полученной путем смешивания равных объемов контрольной сыворотки и калибровочной пробы №3. Процент открытия составляет 90-110%. 3.5. Чувствительность. Минимальная достоверно определяемая набором концентрация РАРР-А в сыворотке крови человека не превышает 0,02 мЕд/мл. 3.6. Хук-эффект высоких концентраций. В наборах реагентов, основанных на «сэндвич»-принципе анализа, при высоких концентрациях аналита зависимость величины оптической плотности от концентрации становится обратно пропорциональной (так назьшаемый хук-эффект высоких концентраций). При использовании набора «ИФА-РАРР-А» хук-эффект не обнаружен вплоть до концентрации РАРР-А 412 мЕд/мл. 3.7. Диапазон ожидаемых значений. Концентрацию РАРР-А измеряли в сыворотках крови 971 беременных женщин с 9 по 13 неделю беременности. Значения медиан по срокам беременности приведены в Таблице 1 . Таблица 1 Срок беременности (недели) Медиана РАРР-А (мЕд/мл) Минимальное/максимальное значение концентрации РАРР-А в группе (мЕд/мл) Число образцов в группе 9 0,65 0,09 / 5,4 112 10 1,2 0,04 / 8,0 202 И 1,7 0,19/17,1 256 12 2,8 0,27/16,8 308 13 3,9 1,02/17,8 93 Значение медианы, рассчитанное для каждого срока беременности, зависит от многих факторов: специфичности метода, особенностей исследуемой популяции, точности метода в конкретной лаборатории. По этой причине каждой лаборатории рекомендуется использовать предоставленные изготовителем значения медиан только до тех пор, пока специалистами лаборатории не будут определены медианы, характерные для конкретной популяции в месте расположения лаборатории. --- стр. 4 --- 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 4.1. Потенциальный риск применения набора — loiacc 26. 4.2. Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными. 4.3. При работе с набором следует соблюдать требования ГОСТ Р 52905-2007 «Лаборатории медицинские. Требования безопасности». 4.4. Стоп-реагент представляет собой 1 Н раствор соляной кислоты. Избегать разбрызгивания и попадания на кожу и слизистые. В случае попадания раствора стоп- реагента на кожу и слизистые необходимо промыть пораженный участок большим количеством проточной воды. 4.5. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. производные крови, входящие в состав набора, и исследуемые образцы являются потенциально инфицированным материалом, способным длительное время сохранять и передавать возбудителей различных вирусных инфекций. 4.6. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с набором, должны быть соответствующим образом маркированы и храниться отдельно. 4.7. Запрещается прием пищи, использование косметических средств и курение в помещениях, предназначенных для работы с наборами. 5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность раствора в лунках при длине волны 450 нм; прибор для встряхивания рамки со стрипами (термостатируемый шейкер), позволяющий производить встряхивание со скоростью 400-800 об/мин при температуре +37°С; пипетки полуавтоматические одноканальные со сменными наконечниками с изменяемым объемом отбора жидкостей: на 5-50 мкл; на 40-200 мкл; на 200-1000 мкл; на 1000-5000 мкл; пипетка полуавтоматическая восьмиканальная со сменными наконечниками, позволяющая отбирать объемы жидкости до 300 мкл; цилиндр мерный, позволяющий отмерять 50-500 мл; стакан стеклянный подходящего объема; вода дистиллированная; бумага фильтровальная; перчатки резиновые или пластиковые; 1 % раствор гипохлорита натрия или 6% раствор перекиси водорода; контейнер для дезинфекции; ванночки для внесения реагентов восьмиканальной пипеткой. 6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ 6.1. Забор крови из вены осуществляют с соблюдением правил асептики. После формирования сгустка сыворотку отделяют путем центрифугирования. После центрифугирования сыворотку переносят в отдельную пробирку. Для проведения анализа не следует использовать плазму крови, гемолизированную или мутную сыворотку, а также образцы сыворотки, содержащие азид натрия. 6.2. Образцы сыворотки крови разрешается хранить при температуре +2...8°С не более 6 дней; при необходимости более длительного хранения рекомендуется аликвотировать образец и хранить в замороженном виде при температуре -20°С и ниже. Не допускается повторное замораживание образца. 4 --- стр. 5 --- 7.1. Подготовка реагентов. 7.1.1. Стрипы. Перед вскрытием пакет со стрипами необходимо вьщержать при комнатной температуре (+18...25°С) не менее 30 минут. Вскрыть пакет и переставить на свободную рамку необходимое количество стрипов. 7.1.2. Жидкие калибровочные пробы и контрольная сыворотка готовы к использованию. Для восстановления лиофилизованных калибровочных проб и контрольной сыворотки перед вскрытием флаконов легким постукиванием стряхнуть частицы, прилипшие к стенкам флаконов или к крышкам. Открыть флаконы и положить крышки перевернутыми на сухую поверхность. В каждый флакон с калибровочной пробой и контрольной сывороткой внести по 0,5 мл дистиллированной воды и закрыть крышками. Вьщержать флаконы в течение 10 минут при комнатной температуре без перемешивания. Затем, аккуратно наклоняя и вращая флаконы, перемешать их содержимое до полного растворения, избегая пенообразования. В течение следующих 10 минут выдержать флаконы при комнатной температуре, периодически перемешивая. 7.1.3. Конъюгат Е готов к использованию. Расход конъюгата Е на один стрип составляет 2,08 мл. 7.1.4. Буфер Д готов к использованию. 7.1.5. Промывочный раствор. Необходимое количество Буфера? развести дистиллированной водой в 20 раз. Например: 5 мл Буфера Р+95 мл дистиллированной воды. Тщательно перемешать, избегая пенообразования. 7.1.6. Раствор тетраметилбензидина (ТМБ) готов к использованию. Расход ТМБ на один стрип составляет 1,15 мл. 7.1.7. Стоп-реагент готов к использованию. Расход стоп-реагента на один стрип составляет 1,15 мл. 7.1.8. Все реагенты перед проведением анализа должны быть тщательно перемешаны и доведены до комнатной температуры (+18...25°С). В Приложении 1 приведена схема проведения анализа. 7.1.9. Разведение исследуемых образцов сывороток крови. Если по результатам анализа (см. п 9.3.) значения концентрации РАРР-А в исследуемых образцах выше КП №6, образцы следует развести буфером Д в 5 раз. Пример подготовки образца к анализу: 120 мкл буфера Д + 30 мкл исследуемого образца При каждом разведении необходимо тщательное перемешивание. 7.2. Постановка анализа. 7.2.1. Составить протокол маркировки лунок. Лунки промаркировать следующим образом: А1, А2 - №1 для измерения величины оптической плотности раствора ТМБ; В1, В2 - №2 для измерения величины оптической плотности КП № 1; С1,С2 - №3 для измерения величины оптической плотности КП №2; D1,D2 - №4 для измерения величины оптической плотности КП №3; Е1,Е2 - №5 для измерения величины оптической плотности КП №4; F1,F2 - №6 для измерения величины оптической плотности КП №5; 0 1 ,0 2 - №7 для измерения величины оптической плотности КП №6; Н1,Н2 - №8 для измерения величины оптической плотности контрольной сыворотки. 7.2.2. Во все лунки, кроме лунок А1 и А2, внести по 200 мкл Конъюгата Е. 7.2.3. Внести в соответствующие лунки по 20 мкл калибровочных проб и контрольной сыворотки, в оставшиеся лунки по 20 мкл исследуемой сыворотки крови в дубликатах. 7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА 5 --- стр. 6 --- Примечание: общее время внесения калибровочных проб, контрольной сыворотки и исследуемых сывороток крови не должно превышать 15 минут, иначе время инкубации различных образцов будет значительно отличаться, что приведет к неправильным результатам. 12Л, Инкубировать стрипы в течение 90 минут при встряхивании в термостатируемом шейкере при температуре +37°С со скоростью 500-700 об/мин. 7.2.5. По окончании инкубации удалить содержимое лунок в контейнер с дезинфи цирующим раствором (1% раствором гипохлорита натрия или 6% раствором перекиси водорода) и промыть лунки 5 раз. При каждой промывке во все лунки добавить по 300 мкл промывочного раствора, приготовленного по п. 7.1.5, встряхнуть рамку на шейкере в течение 5-10 секунд с последующим декантированием. После последнего декантирования тщательно удалить остатки жидкости из лунок постукиванием рамки со Стрипами в перевернутом положении по фильтровальной бумаге. Допускается промывка лунок при помощи автоматического промывочного устройства. 7.2.6. Немедленно внести во все лунки по 100 мкл раствора ТМБ. Инкубировать стрипы в темноте при комнатной температуре (+18...25°С) в течение 15-30 минут в зависимости от степени развития окраски. Примечание: максимальная оптическая плотность не должна превышать пределов линейного измерения спектрофотометра. Рабочий диапазон спектрофотометра необходимо уточнять в паспорте прибора. Рекомендуемая максимальная оптическая плотность не более 2,5 ед. ОП. 12Л. Добавить во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, как и раствор ТМБ, по 100 мкл стоп-реагента для остановки ферментной реакции, перемешать на шейкере в течение 1-2 минут при комнатной температуре (+18.. .25°С). 7.2.8. Если невозможно измерить оптическую плотность в лунках планшета непосредственно после выполнения п. 7.2.7., то следует иметь в виду, что окраска в лунках планшета стабильна не более 20 минут при температуре +18.. .25°С. 8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ 8.1. Измерить на фотометре вертикального сканирования оптическую плотность в лунках при длине волны 450 нм. При регистрации результатов необходимо вычитать величину оптической плотности в лунках Л1 и А2 из значений оптических плотностей всех остальных лунок. Примечание: среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках А1 и А2 не должно превышать 0,09 ед.ОП. 9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ 9.1. Построить калибровочный график зависимости оптических плотностей от концентрации РАРР-А (мЕд/мл) в калибровочных пробах (Рисунок 2). Внешний вид графика зависит от способа преобразования осей. Примечание 1: для построения калибровочных графиков рекомендуется использовать Программное обеспечение «ИФА Мастер». Примечание 2: для построения калибровочного графика на масштабной бумаге необходимо использовать данные оптических плотностей после вычитания из них средней величины оптической плотности лунок с ТМБ. Если программа фотометра не позволяет вычитать величину оптической плотности лунок А1 и А2, то необходимо пользоваться формулой: В-Вт, --- стр. 11 --- «УТВЕРЖДЕНА» «УТВЕРЖДАЮ» Приказом Росздравнадзора от« » 20 г.№ ;^ьный директор И Я Алкор Био» Швырев М.В. апреля 2010г. ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АССОЦИИРОВАННОГО С БЕРЕМЕННОСТЬЮ ПРОТЕИНА А ПЛАЗМЫ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА («ИФА-РАРР-А») 1. НАЗНАЧЕНИЕ 1.1. Набор реагентов «ИФА-РАРР-А» предназначен для количественного определения РАРР-А (ассоциированного с беременностью протеина А плазмы) в сыворотке крови человека методом твердофазного иммуноферментного анализа. 1.2. Определяемый аналит является гетеротетрамером, состоящим из двух субъединиц РАРР-А с молекулярной массой 250 кДа и двух субъединиц ргоМВР (основной белок эозинофилов) с молекулярной массой 50-90 кДа. В первом триместре беременности при синдроме Дауна у плода наблюдается снижение уровня РАРР-А в сыворотке крови матери. После 14-й недели беременности различия между уровнем РАРР-А в сыворотке крови матери при синдроме Дауна и нормой исчезают. Установлено, что комбинация данного теста с определением свободной бета- субъединицы ХГЧ, данными УЗИ (толщина воротникового пространства), оценкой возрастных факторов риска является оптимальным методом для пренатального скрининга синдрома Дауна в первом триместре беременности. 1.3. Набор «ИФА-РАРР-А» рассчитан на проведение анализа в дубликатах 40 неизвестных, 6 калибровочных проб, одной пробы контрольной сыворотки и одной пробы для определения оптической плотности раствора ТМБ при использовании всех стрипов одновременно (всего 96 определений). Примечание: в случае дробного применения набор моэ/сет быть использован только в течение месяца после вскрытия компонентов набора. --- стр. 12 --- 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1. Принцип действия В наборе «ИФА-РАРР-А» использован «сэндвич» - вариант твердофазного иммуноферментного анализа. Для реализации этого варианта использованы два моноклональных антитела с различной эпитопной специфичностью к РАРР-А. Одно из них иммобилизовано на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок), второе конъюгировано с пероксидазой хрена. В лунках, при добавлении исследуемого образца и конъюгата анти-РАРР-А-пероксидаза во время инкубации одновременно происходит иммобилизация РАРР-А, содержащегося в исследуемом образце, и связывание образовавшегося комплекса с конъюгатом. Несвязавшиеся компоненты удаляются промывкой. Количество связавшегося конъюгата прямо пропорционально количеству РАРР-А в исследуемом образце (Рисунок 1). с антителами к РАРР-А Рисунок 1 . Схема анализа Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо пропорциональна концентрации РАРР-А в анализируемых пробах. После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочного графика рассчитывается концентрация РАРР-А в исследуемых образцах. 2.2. Состав набора: комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов в рамке с иммобилизованными на внутренней поверхности лунок моноклональными антителами к РАРР-А, маркирован «Стрипы с моноклональными антителами к РАРР-А» -1 упаковка; калибровочные пробы (КП), содержащие известные количества РАРР-А. Флаконы маркированы «Калибровочная проба №1», «Калибровочная проба №2», «Калибровочная проба №3», «Калибровочная проба №4», «Калибровочная проба №5», «Калибровочная проба №6»; точные значения концентраций РАРР-А в калибровочных пробах указаны на этикетках флаконов, ориентировочные - 0; 0.175; 0.7; 1.75; 3.5 и 7.0 мЕд/мл - 6 флаконов (лиофилизованные препараты или жидкости, по 0,5 мл); конъюгат анти-РАРР-А-пероксидаза, маркирован «Конъюгат Е» — 1 флакон (25 мл); водно-солевой раствор для разведения образцов сыворотки крови, маркирован «Буфер Д» — 1 флакон (3 мл); концентрированный водно-солевой раствор для промывки лунок, маркирован «Буфер Р» — 1 флакон (14 мл); раствор тетраметилбензидина, маркирован «Раствор ТМБ» — 1 флакон (14 мл); стоп-реагент (1 Н соляная кислота), маркирован «Стоп-реагент» — 1 флакон (14 мл); контрольная сыворотка с известным содержанием РАРР-А, маркирована «Контрольная сыворотка» — 1 флакон (лиофилизованный препарат или жидкость 0,5 мл); --- стр. 13 --- прозрачный пластиковый пакет с замком (при упаковке стрипов в пакет из 2-слойного полиэтилена). 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1. Специфичность. Используемые в наборе антитела обладают специфичностью только к гетеротетрамеру РАРР-А/ргоМВР. 3.2. Коэффициент вариации результатов определения РАРР-А в одном и том же образце сыворотки крови человека с использованием набора «ИФА-РАРР-А» не превышает 8%. 3.3. Линейность. Зависимость концентрации РАРР-А в образцах сыворотки крови при разведении их буфером Д имеет линейный характер в диапазоне концентраций калибровочных проб №2 - №6 и составляет 90-110%. 3.4. Точность. Данный аналитический параметр проверяется тестом на «открытие» РАРР-А — проверка соответствия значения определяемой концентрации РАРР-А расчетной величине, полученной путем смешивания равных объемов контрольной сыворотки и калибровочной пробы ]№ 3. Процент открытия составляет 90-110%. 3.5. Чувствительность. Минимальная достоверно определяемая набором концентрация РАРР-А в сыворотке крови человека не превышает 0,02 мЕд/мл. 3.6. Хук-эффект высоких концентраций. В наборах реагентов, основанных на «сэндвич»-принципе анализа, при высоких концентрациях аналита зависимость величины оптической плотности от концентрации становится обратно пропорциональной (так называемый хук-эффект высоких концентраций). При использовании набора «ИФА-РАРР-А» хук-эффект не обнаружен вплоть до концентрации РАРР-А 412 мЕд/мл. 3.7. Диапазон ожидаемых значений. Концентрацию РАРР-А измеряли в сыворотках крови 971 беременных женщин с 9 по 13 неделю беременности. Значения медиан по срокам беременности приведены в Таблице 1 . Таблица 1 Срок беременности (недели) Медиана РАРР-А (мЕд/мл) Минимальное/максимальное значение концентрации РАРР-А в группе (мЕд/мл) Число образцов в группе 9 0,65 0,09 / 5,4 112 10 1,2 0,04 / 8,0 202 1 1 1,7 0,19/17,1 256 12 2,8 0,27/16,8 308 13 3,9 1,02/17,8 93 Значение медианы, рассчитанное для каждого срока беременности, зависит от многих факторов: специфичности метода, особенностей исследуемой популяции, точности метода в конкретной лаборатории. По этой причине каждой лаборатории рекомендуется использовать предоставленные изготовителем значения медиан только до тех пор, пока специалистами лаборатории не будут определены медианы, характерные для конкретной популяции в месте расположения лаборатории. --- стр. 14 --- 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 4.1. Потенциальный риск применения набора — класс 26. 4.2. Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными. 4.3. При работе с набором следует соблюдать требования ГОСТ Р 52905-2007 «Лаборатории медицинские. Требования безопасности». 4.4. Стоп-реагент представляет собой 1 Н раствор соляной кислоты. Избегать разбрызгивания и попадания на кожу и слизистые. В случае попадания раствора стоп- реагента на кожу и слизистые необходимо промыть пораженный участок большим количеством проточной воды. 4.5. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. производные крови, входящие в состав набора, и исследуемые образцы являются потенциально инфицированным материалом, способным длительное время сохранять и передавать возбудителей различных вирусных инфекций. 4.6. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с набором, должны быть соответствующим образом маркированы и храниться отдельно. 4.7. Запрещается прием пищи, использование косметических средств и курение в помещениях, предназначенных для работы с наборами. 5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность раствора в лунках при длине волны 450 нм; прибор для встряхивания рамки со стрипами (термостатируемый щейкер), позволяющий производить встряхивание со скоростью 400-800 об/мин при температуре +37°С; пипетки полуавтоматические одноканальные со сменными наконечниками с изменяемым объемом отбора жидкостей: на 5-50 мкл; на 40-200 мкл; на 200-1000 мкл; на 1000-5000 мкл; пипетка полуавтоматическая восьмиканальная со сменными наконечниками, позволяющая отбирать объемы жидкости до 300 мкл; цилиндр мерный, позволяющий отмерять 50-500 мл; стакан стеклянный подходящего объема; вода дистиллированная; бумага фильтровальная; перчатки резиновые или пластиковые; 1 % раствор гипохлорита натрия или 6% раствор перекиси водорода; контейнер для дезинфекции; ванночки для внесения реагентов восьмиканальной пипеткой. 6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ 6.1. Забор крови из вены осуществляют с соблюдением правил асептики. После формирования сгустка сыворотку отделяют путем центрифугирования. После центрифугирования сыворотку переносят в отдельную пробирку. Для проведения анализа не следует использовать плазму крови, гемолизированную или мутную сыворотку, а также образцы сыворотки, содержащие азид натрия. 6.2. Образцы сыворотки крови разрешается хранить при температуре +2...8°С не более 6 дней; при необходимости более длительного хранения рекомендуется аликвотировать образец и хранить в замороженном виде при температуре -20°С и ниже. Не допускается повторное замораживание образца. --- стр. 15 --- 7.1. Подготовка реагентов. 7.1.1. Стрипы. Перед вскрытием пакет со стрипами необходимо выдержать при комнатной температуре (+18...25°С) не менее 30 минут. Вскрыть пакет и переставить на свободную рамку необходимое количество стрипов. 7.1.2. Жидкие калибровочные пробы и контрольная сыворотка готовы к использованию. Для восстановления лиофилизованных калибровочных проб и контрольной сыворотки перед вскрытием флаконов легким постукиванием стряхнуть частицы, прилипшие к стенкам флаконов или к крышкам. Открыть флаконы и положить крышки перевернутыми на сухую поверхность. В каждый флакон с калибровочной пробой и контрольной сывороткой внести по 0,5 мл дистиллированной воды и закрыть крышками. Выдержать флаконы в течение 10 минут при комнатной температуре без перемешивания. Затем, аккуратно наклоняя и вращая флаконы, перемешать их содержимое до полного растворения, избегая пенообразования. В течение следующих 10 минут выдержать флаконы при комнатной температуре, периодически перемешивая. 7.1.3. Конъюгат Е готов к использованию. Расход конъюгата Е на один стрип составляет 2,08 мл. 7.1.4. Буфер Д готов к использованию. 7.1.5. Промывочный раствор. Необходимое количество Буфера Р развести дистиллированной водой в 20 раз. Например: 5 мл Буфера Р+95 мл дистиллированной воды. Тщательно перемешать, избегая пенообразования. 7.1.6. Раствор тетраметилбензидина (ТМБ) готов к использованию. Расход ТМБ на один стрип составляет 1,15 мл. 7.1.7. Стоп-реагент готов к использованию. Расход стоп-реагента на один стрип составляет 1,15 мл. 7.1.8. Все реагенты перед проведением анализа должны быть тщательно перемешаны и доведены до комнатной температуры (+18...25°С). В Приложении 1 приведена схема проведения анализа. 7.1.9. Разведение исследуемых образцов сывороток крови. Если по результатам анализа (см. п 9.3.) значения концентрации РАРР-А в исследуемых образцах выше КП №6, образцы следует развести буфером Д в 5 раз. Пример подготовки образца к анализу: 120 мкл буфера Д + 30 мкл исследуемого образца При каждом разведении необходимо тщательное перемешивание. 7.2. Постановка анализа. 7.2.1. Составить протокол маркировки лунок. Лунки промаркировать следующим образом: А1, А2 - №1 для измерения величины оптической плотности раствора ТМБ; В1,В2 - №2 для измерения величины оптической плотности КП №1; С1,С2 - №3 для измерения величины оптической плотности КП №2; D1,D2 - №4 для измерения величины оптической плотности КП №3; Е1, Е2 - №5 для измерения величины оптической плотности КП №4; F1,F2 - №6 для измерения величины оптической плотности КП №5; G1,G2 - №7 для измерения величины оптической плотности КП №6; Н1,Н2 - №8 для измерения величины оптической плотности контрольной сыворотки. 7.2.2. Во все лунки, кроме лунок А1 и А2, внести по 200 мкл Коньюгата Е. 7.2.3. Внести в соответствующие лунки по 20 мкл калибровочных проб и контрольной сыворотки, в оставшиеся лунки по 20 мкл исследуемой сыворотки крови в дубликатах. 7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА 5 --- стр. 16 --- Примечание: общее время внесения калибровочных проб, контрольной сыворотки и исследуемых сывороток крови не должно превышать 15 минут, иначе время инкубации различных образцов будет значительно отличаться, что приведет к неправильным результатам. 7.2.4. Инкубировать стрипы в течение 90 минут при встряхивании в термостатируемом шейкере при температуре +37°С со скоростью 500-700 об/мин. 7.2.5. По окончании инкубации удалить содержимое лунок в контейнер с дезинфи цирующим раствором (1% раствором гипохлорита натрия или 6% раствором перекиси водорода) и промыть лунки 5 раз. При каждой промывке во все лунки добавить по 300 мкл промывочного раствора, приготовленного по п. 7.1.5, встряхнуть рамку на шейкере в течение 5-10 секунд с последующим декантированием. После последнего декантирования тщательно удалить остатки жидкости из лунок постукиванием рамки со Стрипами в перевернутом положении по фильтровальной бумаге. Допускается промывка лунок при помощи автоматического промывочного устройства. 7.2.6. Немедленно внести во все лунки по 100 мкл раствора ТМБ. Инкубировать стрипы в темноте при комнатной температуре (+18...25°С) в течение 15-30 минут в зависимости от степени развития окраски. Примечание: максимальная оптическая плотность не должна превышать пределов линейного измерения спектрофотометра. Рабочий диапазон спектрофотометра необходимо уточнять в паспорте прибора. Рекомендуемая максимальная оптическая плотность не более 2,5 ед. ОП. 7.2.7. Добавить во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, как и раствор ТМБ, по 100 мкл стоп-реагента для остановки ферментной реакции, перемешать на шейкере в течение 1-2 минут при комнатной температуре (+18...25°С). 7.2.8. Если невозможно измерить оптическую плотность в лунках планшета непосредственно после выполнения п. 7.2.7., то следует иметь в виду, что окраска в лунках планшета стабильна не более 20 минут при температуре +18...25°С. 8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ Измерить на фотометре вертикального сканирования оптическую плотность в лунках при длине волны 450 нм. При регистрации результатов необходимо вычитать величину оптической плотности в лунках Л1 и А2 из значений оптических плотностей всех остальных лунок. Примечание: среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках А1 и А2 не доллсно превышать 0,09 ед.ОП. 9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ 9.1. Построить калибровочный график зависимости оптических плотностей от концентрации РАРР-А (мЕд/мл) в калибровочных пробах (Рисунок 2). Внешний вид графика зависит от способа преобразования осей. Примечание 1: для построения ка 1шбровочных графиков рекомендуется использовать Программное обеспечение «ИФА Мастер». Примечание 2: для построения калибровочного графика на масштабной бумаге необходимо использовать данные оптических плотностей после вычитания из них средней величины оптической плотности лунок с ТМБ. Если программа фотометра не позволяет вычитать величину оптической плотности лунок А1 и А2, то необходимо пользоваться формулой: В-Вт,