Набор реагентов для выделения ДНК из клинического материала на основе спиртового осаждения ("Экстра-ДНК-Био") по ТУ 9398-244-98539446-2012 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- П р и к а з о м о т« » 20 г. № «УТВЕРЖДЕНА» Р о с з д р а в н а д з о р а «УТВЕРЖДАЮ» р е к т о р кор Б и о » ы р ев М .В . И Н С Т Р У К Ц И Я П О П Р И М Е Н Е Н И Ю Н А Б О Р А Р Е А Г Е Н Т О В Д Л Я В Ы Д Е Л Е Н И Я Д Н К И З К Л И Н И Ч Е С К О Г О М А Т Е Р И А Л А Н А О С Н О В Е С П И Р Т О В О Г О О С А Ж Д Е Н И Я (« Э к с т р а -Д Н К -Б и о » ) 1. Н А З Н А Ч Е Н И Е Н а б о р р е а ге н т о в « Э к с т р а -Д Н К -Б и о » п р е д н а з н а ч е н д л я б ы с тр о го и э ф ф е к т и в н о го в ы д е л е н и я Д Н К из с ы в о р о тк и /п л а з м ы кр о в и , ц е л ь н о й крови, сухих п я те н крови , сл ю ны , м о чи , с о с ко б о в э п и т е л и а л ь н ы х к л е т о к со с л и зи с то й ц е р в и к а л ь н о го к а н а л а и у р е тр ы с ц ел ь ю п о с л е д у ю щ е го и с с л е д о в а н и я м о л е к у л я р н о -б и о л о ги ч е с к и м и м е т о д а м и , в т о м ч и с л е м е т о д о м п о л и м е р а з н о й ц е п н о й р е а к ц и и (П Ц Р ) с д е т е к ц и е й п р о д у кто в а м п л и ф и к а ц и и в р е ж и м е р е а л ь н о го в р е м е н и . Н а б о р р а с с ч и т а н н а в ы д е л е н и е Д Н К из 9 6 о б р а з ц о в . Внимание! В состав наборов ПЦР серии «НК-Детект» входит положительный контрольный образец (ПКО) и внутренний контрольный образец (ВКО), соответствующие анализируемому объекту. ПКО должен проходить процедуру выделения одновременно с биологическими образцами. ВКО добавляется перед началом процедуры выделения во все анализируемые образцы, включая контрольные (ПКО и отрицательный контрольный образец (ОКО)). При использовании нескольких наборов для выявления ДНК использовать контрольные образцы (ПКО, ВКО) с большим порядковым номером серии на флаконе. 2 . Х А Р А К Т Е Р И С Т И К И Н А Б О Р А 2 .1 . П р и н ц и п д е й с т в и я П р и н ц и п д е й с т в и я н а б о р а « Э к с т р а -Д Н К -Б и о » с о с т о и т в о б р а б о т к е б и о л о ги ч е с к о го о б р а з ц а л и з и р у ю щ и м б у ф е р о м с п о с л е д у ю щ и м с п и р то в ы м о с а ж д е н и е м , о тм ы в ко й и э л ю ц и е й Д Н К . 1 --- стр. 2 --- 2.2. Состав набора Реактив Лизирую щ ий б у ф е р О б ъ е м , мл 5 0 К о л и ч е с тв о 1 ф л а ко н О садитель Д Н К 35 2 ф л а к о н а Раствор д л я о тм ы в ки 5 0 2 ф л а к о н а Буф ер д л я р а с т в о р е н и я Д Н К 10 1 ф л а ко н О тр и ц а те л ь н ы й ко н тр о л ь н ы й о б р а з е ц1.5 1 п р о б и р ка Д л я в ы д е л е н и я Д Н К из о б р а з ц о в м о чи и сл ю ны н е о б х о д и м о и сп о л ь зо в ать д о п о л н и т е л ь н ы е р е а ге н т ы - ф и з и о л о ги ч е с к и й р а с т в о р (N a C I 0 ,9 % ) и т р а н с п о р тн у ю с р е д у с м у к о л и т и к о м с о о т в е т с т в е н н о . 3 . М Е Р Ы П Р Е Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И • П о т е н ц и а л ь н ы й р и с к п р и м е н е н и я н а б о р а - к л а с с 1 (п о Г О С Т Р 5 1 6 0 9 -2 0 0 0 ). • Р а б о т а д о л ж н а п р о в о д и ть с я в л а б о р а т о р и и , в ы п о л н я ю щ е й м о л е к у л я р н о б и о л о ги ч е с к и е (П Ц Р ) и с с л е д о в а н и я к л и н и ч е с к о го м а т е р и а л а на н а л и ч и е в о з б у д и т е л е й и н ф е к ц и о н н ы х б о л е з н е й с с о б л ю д е н и е м с а н и т а р н о -э п и д е м и ч е с к и х п р ав и л С П 1 .3 .2 3 2 2 -0 8 « Б е з о п а с н о с т ь р а б о ты с м и к р о о р га н и з м а м и III - IV групп п а т о ге н н о с т и (о п а с н о с т и ) и в о з б у д и т е л я м и п а р а з и т а р н ы х б о л е з н е й » и м е т о д и ч е с к и х у к а з а н и й М У 1 .3 .2 5 6 9 -0 9 « О р га н и з а ц и я р а б о ты л а б о р а т о р и й , и с п о л ь з у ю щ и х м е т о д ы а м п л и ф и к а ц и и н у кл е и н о в ы х ки с л о т, при р а б о т е с м а т е р и а л о м , с о д е р ж а щ и м м и к р о о р га н и з м ы I-IV групп п а т о ге н н о с т и » . • О б р а б о т к у к л и н и ч е с к о го м а т е р и а л а и в ы д е л е н и е Д Н К н е о б х о д и м о п р о в о д и ть в з о н е в ы д е л е н и я н у кл е и н о в ы х к и с л о т с о гл а с н о м е т о д и ч е с к и м у к а з а н и я м М У 1 .3 .1 8 8 8 -0 4 « О р га н и з а ц и я р а б о ты при и с с л е д о в а н и я х м е т о д о м П Ц Р м а т е р и а л а , и н ф и ц и р о в а н н о го п а т о ге н н ы м и б и о л о ги ч е с к и м и а ге н т а м и III-1V групп п а т о ге н н о с т и » . • У д а л я т ь н е и с п о л ь з о в а н н ы е р е а к ти в ы в с о о т в е т с т в и и с т р е б о в а н и я м и С П 2 .1 .7 .7 2 8 -9 9 « П р а в и л а с б о р а , х р а н е н и я и у д а л е н и я о тх о д о в л е ч е б н о п р о ф и л а к т и ч е с к и х у ч р е ж д е н и й » . • Д л я в ы д е л е н и я Д Н К с л е д у е т и м е т ь д в а н а б о р а п и п е т о к - д л я р аб о ты с кл и н и ч е с ки м и о б р а з ц а м и и д л я в н е с е н и я р а с тв о р о в . • Н е и с п о л ь з о в а т ь н а б о р по и с т е ч е н и и с р о ка го д н о с ти . • Н е д о п у с к а т ь к о н т а к т а к о м п о н е н т о в н а б о р а с к о ж е й , гл а з а м и и с л и зи с то й о б о л о ч ко й . П р и к о н т а к т е о б и л ь н о п р о м ы ть у ч а с т о к к о н т а к т а в од о й , при н е о б х о д и м о с т и о б р а т и т ь с я з а м е д и ц и н с к о й п о м о щ ь ю . 4 . О Б О Р У Д О В А Н И Е И М А Т Е Р И А Л Ы - Л а м и н а р н ы й б о к с (к л а с с б и о л о ги ч е с к о й б е з о п а с н о с т и И ти п А ); - т е р м о ш е й к е р д л я п р о б и р о к 1 ,5 м л, п о д д е р ж и в а ю щ и й + 2 5 ...+ 1 0 0 °С и с ко р о с ть в р а щ е н и я 1 3 0 0 о б /м и н ; т е м п е р а т у р у --- стр. 3 --- г - м и кр о ц ен тр иф уга д л я п р о б и р о к т и п а « Э п п е н д о р ф » д о 13 ты с о б /м и н ; - ц ен тр и ф у га /в о р те кс ; - вакуумны й о т с а с ы в а т е л ь м е д и ц и н с к и й с к о л б о й -л о в у ш к о й д л я у д а л е н и я надосадочной ж и д к о с т и ; - набор п и п е т о к п о л у а в т о м а т и ч е с к и х о д н о к а н а л ь н ы х п е р е м е н н о го о б ъ е м а (2 0 - 200 м к л ;1 0 0 -1 0 0 0 м кл ); - о д н о р а зо в ы е п о л и п р о п и л е н о в ы е п л о тн о з а к р ы в а ю щ и е с я м и кр о п р о б и р ки объемом 1 ,5 мл; - о д н о р а з о в ы е н а к о н е ч н и к и д л я п и п е т о к п е р е м е н н о го о б ъ е м а с а э р о зо л ь н ы м б арь ер о м д о 2 0 0 и д о 1 0 0 0 мкл; - ш та т и в ы д л я м и к р о п р о б и р о к о б ъ е м о м 1 ,5 мл; - х о л о д и л ь н и к о т + 2 . . . + 8 ° С с м о р о з и л ь н о й к а м е р о й , п о д д е р ж и в а ю щ е й т е м п е р а т у р у - 1 8 ...- 2 2 °С ; - о тд е л ь н ы й х а л а т , ш а п о ч к а , о б ув ь и о д н о р а з о в ы е п е р ч а т к и . - е м к о с т ь с д е з и н ф и ц и р у ю щ и м с р е д с т в о м д л я с б р о с а н а к о н е ч н и к о в . 5 . В З Я Т И Е , Т Р А Н С П О Р Т И Р О В А Н И Е , Х Р А Н Е Н И Е И ‘ П Р Е Д О Б Р А Б О Т К А О Б Р А З Ц О В К Л И Н И Ч Е С К О Г О М А Т Е Р И А Л А П р о ц е д у р а в зя ти я к л и н и ч е с к о го м а т е р и а л а п р о в о д и тс я в с о о тв е тс т в и и с м е т о д и ч е с к и м и р е к о м е н д а ц и я м и « В з я т и е , т р а н с п о р т и р о в к а х р а н е н и е к п и н и ч е с к о го м а т е р и а л а д л я П Ц Р -д и а г н о с т и к и » , р а з р а б о т а н н ы м и Ф Г У Н Ц Н И И Э Р о с п о т р е б н а д з о р а . Т р а н с п о р т и р о в а н и е к л и н и ч е с к о го м а т е р и а л а о с у щ е с т в л я ю т в с п е ц и а л ь н о м т е р м о к о н т е й н е р е с о х л а ж д а ю щ и м и э л е м е н т а м и или в т е р м о с е со л ь д о м . Д л я д л и т е л ь н о го х р а н е н и я о б р а з ц о в при т е м п е р а т у р е -1 8 ...-2 2 °С и н и ж е ж е л а т е л ь н о а л и к в о т и р о в а т ь п о р ц и я м и 0 , 1 -0 ,2 м л в о т д е л ь н ы е п л а с ти ко в ы е п р о б и р ки о б ъ е м о м 1 ,5 м л . Д о п у с к а е т с я т о л ь ко о д н о к р а т н о е з а м о р а ж и в а н и е - о т т а и в а н и е о б р а з ц а . В з я т и е ц е л ь н о й к р о в и п р о в о д и ть в п л а с т и к о в ы е п р о б и р ки с д о б а в л е н и е м в к а ч е с т в е а н т и к о а гу л я н т а э т и л е н д и а м и н т е т р а - а ц е т а т а (Э Д Т А ) в ко н е ч н о й к о н ц е н т р а ц и и 2 ,0 м г/м л . В к а ч е с т в е а н т и к о а гу л я н т а д о п у с к а е т с я т а к ж е и с п о л ь з о в а н и е ц и т р а т а н а т р и я . Внимание! Не допускается использование гепарина в качестве антикоагулянта. Д л я п о л у ч е н и я п л а з м ы ц е л ь н у ю кровь с а н т и к о а гу л я н т о м ц е н т р и ф у ги р о в а т ь при 3 тью . о б /м и н . в т е ч е н и е 2 0 м и н у т при + 1 8 . . . + 2 5 ° С . О т о б р а т ь а в т о м а т и ч е с к о й п и п е т ко й в ер хн ю ю ф р а к ц и ю (п л а з м а ) и п е р е н е с т и в о т д е л ь н у ю п л а с ти ко в у ю п р о б и р к у о б ъ е м о м 1 ,5 м л. --- стр. 4 --- Д л я п о л у ч е н и я с ы в о р о т к и п р о б и р ки с ц е л ь н о й кровью б ез д о б а в л е н и я а н т и к о а гу л я н т а о т с т а и в а т ь при ко м н а тн о й т е м п е р а т у р е в т е ч е н и е 3 0 м и н у т д о п о л н о го о б р а зо в а н и я с гу с т к а . З а т е м ц е н т р и ф у ги р о в а т ь при 3 ты с. о б /м и н . в т е ч е н и е 1 0 м и н у т при к о м н а т н о й т е м п е р а т у р е . О т о б р а т ь а в т о м а т и ч е с к о й п и п е т ко й в е р х н ю ю ф р а к ц и ю (с ы в о р о тка ) и п е р е н е с т и в о т д е л ь н у ю п л а с т и к о в у ю п р о б и р к у о б ъ е м о м 1 ,5 м л. У сл овия х р а н е н и я м а т е р и а л а Н е д о п у с к а е т с я з а м о р а ж и в а н и е о б р а з ц о в ц е л ь н о й к р о в и ! О б р а з ц ы ц е л ь н о й крови х р а н и т ь при т е м п е р а т у р е + 2 . . . 8 ° С - н е б о л е е 2 с у т о к д л я п р о в е д е н и я к о л и ч е с т в е н н о го а н а л и з а и н е б о л е е 1 м е с я ц е в д л я п о л у ч е н и я ге н о м н о й Д Н К . О б р а з ц ы п л а з м ы и с ы в о р о т к и : • при т е м п е р а т у р е + 2 ... + 8 °С - в т е ч е н и е 5 суток; • при т е м п е р а т у р е - 1 8 ...-2 2 °С - в т е ч е н и е го д а • при т е м п е р а т у р е - 6 8 ...- 7 2 °С - д л и тел 'ь н о . С О С К О Б Ы Э П И Т Е Л И А Л Ь Н Ы Х К Л Е Т О К И З У Р Е Т Р Ы И Ц Е Р В И К А Л Ь Н О Г О К А Н А Л А П р е д о б р а б о т к а проб И с с л е д у е м ы й м а т е р и а л з а б и р а т ь о д н о р а зо в ы м и с т е р и л ь н ы м и з о н д а м и в т р а н с п о р т н у ю с р е д у . У с л о в и я х р а н е н и я м а т е р и а л а П р и и с п о л ь зо в а н и и т р а н с п о р т н о й с р е д ы с м уко л и ти ко м : • при к о м н а т н о й т е м п е р а т у р е ( + 1 8 ... + 2 5 °С ) - не б о л е е 4 8 ч ас о в ; • при т е м п е р а т у р е + 2 ... + 8 °С - н е б о л е е 4 суток; • при т е м п е р а т у р е - 1 8 ...-2 2 °С и н и ж е - д л и т е л ь н о . М О Ч А П р е д о б р а б о т к а проб В з б о л т а т ь ф л а к о н с м о ч е й . П е р е н е с т и 1 мл м о чи , и с п о л ь зуя н а к о н е ч н и к с ф и л ь т р о м , в с т е р и л ь н ы е о д н о р а зо в ы е м и к р о п р о б и р к и о б ъ е м о м 1 ,5 м л . Ц е н т р и ф у ги р о в а т ь 5 м и н ут при 13 т ь ю .о б /м и н . И с п о л ь зу я в а ку у м н ы й о т с а с ы в а т е л ь с к о л б о й -л о в у ш к о й , п о л н о с ть ю у д а л и т ь с у п е р н а т а н т , не з а х в а т ы в а я о с а д о к . К о с а д к у д о б а в и т ь ф и з и о л о ги ч е с к и й р а с т в о р (N a C I 0 ,9 % ) д о к о н е ч н о го о б ъ ё м а 0 ,2 м л, т щ а т е л ь н о п е р е м е ш и в а т ь с о д е р ж и м о е на в о р т е к с е . У с л о в и я х р а н е н и я п р е д в а р и т е л ь н о о б р а б о т а н н ы х проб О б р а з ц ы м очи: • при к о м н а т н о й т е м п е р а т у р е + 1 8 . ..+ 2 5 °С н е б о л е е 4 8 ч асо в; • при т е м п е р а т у р е + 2 ... + 8 °С - в т е ч е н и е д в у х н ед е л ь ; • при т е м п е р а т у р е - 1 8 ...-2 2 °С - д л и т е л ь н о . --- стр. 5 --- СЛЮНА Забор м а т е р и а л а п о л о с к а н и е б у к к а л ь н ы е м а з ки П о л о с т ь р т а т щ а т е л ь н о п р о п о л о с к а ть (1 0 -1 5 с е к у н д ) 8 -1 0 м л и з о т о н и ч е с к о го р а с тв о р а х л о р и д а н а т р и я . Ж и д к о с т ь з а б р а т ь в с т е р и л ь н у ю ц е н т р и ф у ж н у ю п р о б и р к у 15 мл. М а з к и б е р у т с у х и м и с те р и л ь н ы м и в атны м и т а м п о н а м и в р а щ а т е л ь н ы м и д в и ж е н и я м и с в н у т р е н н е й п о в е р х н о с т и щ е к и . П о с л е з а б о р а м а т е р и а л а т а м п о н (р а б о ч у ю ч а с ть з о н д а с в а тн ы м т а м п о н о м ) п о м е щ а ю т в с тер и л ь н ую о д н о р а з о в у ю п р о б и р к у с т р а н с п о р т н о й с р е д о й . П о гр у з и в р а б о ч у ю ч а с т ь з о н д а в т р а н с п о р тн у ю с р е д у , в р а щ а ю т з о н д в т е ч е н и е 1 0 -1 5 се ку н д , и з б е га я р а з б р ы з ги в а н и я р а с т в о р а . В ы н и м а ю т з о н д из р а с т в о р а , п р и ж и м а я е го к с т е н к е п р о б и р ки и, о т ж а в и зб ы то к ж и д к о с т и , у д а л я ю т з о н д и з а к р ы в а ю т п р о б и р ку . П р е д о б р а б о тка проб Б и о м а т е р и а л ц е н т р и ф у ги р у ю т в т е ч е н и е 3 м и н у т при 3 0 0 0 о б /м и н ., с у п е р н а т а н т о т б и р а ю т т а к , ч то б н а д о с а д ко м о с т а л с я с л о й в о д н о й ф р а к ц и и 0 ,5 - 1 м л. В пробы в н о ся т 2 0 0 м кл т р а н с п о р т н о й с р е д ы с м у к о л и ти к о м , о с а д о к р е с у с п е н д и р у ю т н а в о р т е к с е . П о л у ч е н н у ю с у с п е н зи ю и с п о л ь з у ю т д л я в ы д е л е н и я Д Н К . Усл о в ия х р а н е н и я м а т е р и а л а • при к о м н а т н о й т е м п е р а т у р е ( + 1 8 . . .+25 °С ) - в т е ч е н и е 6 ч а с о в ; • при т е м п е р а т у р е +2... + 8 °С - в т е ч е н и е 1 н е д е л и ; • при т е м п е р а т у р е - 1 8 ...-2 2 °С - в т е ч е н и е 1 м е с я ц а ; • при т е м п е р а т у р е - 6 8 . . .-72 °С - д л и т е л ь н о . 6 . П Р О В Е Д Е Н И Е А Н А Л И З А 6 .1 . П о д г о т о в к а к о м п о н е н т о в н а б о р а И з в л е ч ь н а б о р из х о л о д и л ь н и к а , о ткр ы ть у п а к о в к у , и зв л е ч ь ко м п о н е н ты , л и зи р у ю щ и й б у ф е р п р о гр е т ь при т е м п е р а т у р е + 6 5 °С д о п о л н о го р а с т в о р е н и я кр и с та л л о в . 6 .2 . П о с т а н о в к а а н а л и з а • О т о б р а т ь и п р о м а р к и р о в а т ь н е о б х о д и м о е д л я р а б о т ы к о л и ч е с т в о п р о б и р о к о б ъ е м о м 1 ,5 м л (п о к о л и ч е с т в у и с с л е д у е м ы х о б р а з ц о в , в кл ю ч а я п о л о ж и т е л ь н ы е и о т р и ц а т е л ь н ы е к о н т р о л и ). • В к а ж д у ю п р о б и р к у в н е с ти по 2 0 м кл р а с т в о р а В К О и по 5 0 0 м кл л и з и р у ю щ е го б у ф е р а . Внимание! ВКО и ПКО необходимо использовать только при выделении ЛНК для анализа ПЦР-наборами серии «НК-Летект». Процедура подготовки --- стр. 6 --- J m контрольных образцов к анализу описана в инструкциях к соответствующим ПЦР-наборам. 6 .2 .1 . Э к с т р а к ц и я Д Н К и з ц е л ь н о й к р о в и 1 В п о д го т о в л е н н ы е п р о б и р ки в н е с ти по 2 5 м кл к л и н и ч е с к о го о б р а з ц а . В п р о б и р к у м а р к и р о в а н н у ю « О К О » в н е с ти 2 5 м кл О К О . В п р о б и р ку м а р к и р о в а н н у ю « П К О » в н е с т и 2 5 м кл П К О . П е р е м е ш а т ь н а в о р те к с е 3 - 5 с е к у н д . 2 И н к у б и р о в а т ь при + 7 5 °С 1 5 м и н у т н а т е р м о ш е й к е р е * с ч а с то то й в р а щ е н и я 1 3 0 0 о б /м и н , с б р о с и т ь ка п л и р а с т в о р а со с т е н о к п р о б и р о к ц е н т р и ф у ги р о в а н и е м при 1 ,5 -3 ты с. о б /м и н . в т е ч е н и е 2 -3 с е ку н д . 3 В н е с т и в к а ж д у ю п р о б и р к у по 5 5 0 м кл о с а д и т е л я Д Н К , п е р е м е ш а т ь на в о р т е к с е 5 -1 0 с е к у н д . 4 Ц е н т р и ф у ги р о в а т ь в т е ч е н и е 5 м и н у т при 1 3 0 0 0 о б /м и н . С у п е р н а т а н т о т о б р а т ь м е д и ц и н с к и м о т с а с ы в а т е л е м . 5 Д о б а в и т ь к о с а д к у 1 м л р а с т в о р а д л я о тм ы в ки , п е р е м е ш а т ь на в о р те кс е 5 -1 0 с е к у н д . 6 Ц е н т р и ф у ги р о в а т ь в т е ч е н и е 3 м и н у т при 1 3 0 0 0 о б /м и н . С у п е р н а т а н т о т о б р а т ь м е д и ц и н с к и м о т с а с ы в а т е л е м . 7 В ы д е р ж а т ь о с а д к и в п р о б и р к а х с о ткр ы ты м и кр ы ш к а м и при ко м н а тн о й т е м п е р а т у р е 3 -5 м и н у т . П р о ц е с с в ы с у ш и в а н и я о с а д к о в н е о б х о д и м о к о н т р о л и р о в а т ь в и з у а л ь н о - сухо й о с а д о к н е б л е с т и т . В н и м а н и е ! Не допускать пересушивания осадка. 8 Д о б а в и т ь к о с а д к у 6 0 м кл б у ф е р а д л я р а с т в о р е н и я Д Н К , п е р е м е ш а т ь на в о р т е к с е . 9 И н к у б и р о в а т ь в т е р м о ш е й к е р е * при + 6 0 °С в т е ч е н и е 1 0 м и н у т с ч а с то то й в р а щ е н и я 1 3 0 0 о б /м и н . 10 Ц е н т р и ф у ги р о в а т ь п р о б и р ки в т е ч е н и е 1 м и н уты при 1 3 0 0 0 о б /м и н . П р о б ы го то вы д л я п р о в е д е н и я П Ц Р . 6 .2 .2 . Э к с т р а к ц и я Д Н К и з п я т е н к р о в и Д и с к и , в ы р е з а н н ы е п а н ч е р о м из ц е н т р а л ь н ы х о б л а с т е й в ы с у ш е н н ы х п я те н кр о ви , п о м е с т и т ь в п о д го т о в л е н н ы е п р о б и р ки . П е р е м е ш а т ь н а в о р т е к с е 3 -5 с еку н д . П р о б ы и н к у б и р о в а т ь при + 7 5 °С в т е ч е н и е 1 5 м и н у т н а т е р м о ш е й к е р е с ч а с т о т о й в р а щ е н и я 1 3 0 0 о б /м и н . Важно: в процессе инкубации перемешивать на вортексе каждые 2 минуты по 10-15 секунд. Ц е н т р и ф у ги р о в а т ь в т е ч е н и е 3 м и н у т при 1 3 0 0 0 о б /м и н . --- стр. 7 --- 4 Н е з а т р а ги в а я д и с ки , п е р е н е с т и с у п е р н а т а н т в к о л и ч е с т в е 4 0 0 м кп в ч и с ты е м и к р о п р о б и р к и о б ъ е м о м 1 ,5 м л. 5 В н е с т и о с а д и т е л ь : по 5 5 0 м кл в п р о б и р ки с О К О и П К О , по 4 0 0 мкл в п р о б и р ки с а н а л и з и р у е м ы м и о б р а з ц а м и . 6 Д а л е е с л е д у й т е п р о т о к о л у 6 .2 .1 , н а ч и н а я с 4 п у н кта . П р о б ы го то вы д л я п р о в е д е н и я П Ц Р . 6 .2 .3 . Э к с т р а к ц и я Д Н К и з с л ю н ы 1 В п о д го т о в л е н н ы е п р о б и р ки в н е сти по 1 0 0 м кл к л и н и ч е с к о го о б р а з ц а . В п р о б и р ку , м а р к и р о в а н н у ю « О К О » , в н е с ти 1 0 0 м кл О К О . В п р о б и р ку, м а р к и р о в а н н у ю « П К О » , в н е с т и 2 5 м кл П К О и 7 5 м кл О К О . П е р е м е ш а т ь на в о р т е к с е 3 -5 с е к у н д . 2 И н к у б и р о в а т ь при + 7 5 °С 15 м и н у т н а т е р м о ш е й к е р е * с ч а с т о т о й в р а щ е н и я 1 3 0 0 о б /м и н , с б р о с и т ь ка п л и р а с т в о р а со с т е н о к п р о б и р о к ц е н т р и ф у ги р о в а н и е м при 1 ,5 -3 ты с. о б /м и н . в т е ч е н и е 2 -3 с еку н д . 3 В н е с ти в к а ж д у ю п р о б и р к у по 7 0 0 м кл о с а д и т е л я , п е р е м е ш а т ь на в о р те кс е 5 -1 0 с е ку н д . 4 Д а л е е с л е д у й т е п р о т о к о л у 6 .2 .1 , н а ч и н а я с 4 п у н кта . П р о б ы го то в ы д л я п р о в е д е н и я П Ц Р . 6 .2 .4 . Э к с т р а к ц и я Д Н К и з м а з к о в /с о с к о б о в , п л а з м ы /с ы в о р о т к и 1 В п о д го т о в л е н н ы е п р о б и р ки в н е сти по 1 0 0 м кл к л и н и ч е с к о го о б р а з ц а . В п р о б и р ку , м а р к и р о в а н н у ю « О К О » , в н е с ти 1 0 0 м кл О К О . В п р о б и р ку, м а р к и р о в а н н у ю « П К О » , в н е с ти 2 5 м кл П К О и 7 5 м кл О К О . П е р е м е ш а т ь на в о р т е к с е 3 -5 с е к у н д . 2 И н к у б и р о в а т ь при + 7 5 °С в т е ч е н и е 1 5 м и н у т н а т е р м о ш е й к е р е * с ч а с то то й в р а щ е н и я 1 3 0 0 о б /м и н , с б р о с и т ь ка п л и р а с т в о р а со с т е н о к п р о б и р о к ц е н т р и ф у ги р о в а н и е м при 1 ,5 -3 ты с. о б /м и н . в т е ч е н и е 2 -3 с е ку н д . 3 В н е с ти в ка ж д у ю п р о б и р к у по 6 0 0 м кл о с а д и т е л я Д Н К , п е р е м е ш а т ь на в о р т е к с е 5 -1 0 с е ку н д . 4 Д а л е е с л е д у й т е п р о т о к о л у 6 .2 .1 , н а ч и н а я с 4 п у н кта . П р о б ы го то вы д л я п р о в е д е н и я П Ц Р . *п р и и с п о л ь з о в а н и и т е р м о с т а т а б е з ф у н кц и и п е р е м е ш и в а н и я н е о б х о д и м о в с тр я х и в а т ь с о д е р ж и м о е п р о б и р о к н а в о р т е к с е к а ж д ы е 2 м и н уты в т е ч е н и е 1 0 -1 5 с еку н д . --- стр. 8 --- 7. У С Л О В И Я Х Р А Н Е Н И Я И Т Р А Н С П О Р Т И Р О В А Н И Я Н А Б О Р А С р о к го д н о с ти н а б о р а 1 2 м е с я ц е в со д н я вы пуска. К о м п о н е н ты п о с л е в скр ы ти я х р а н и т ь при + 2 . . . + 8 ° С в т е ч е н и е в сего срока го д но сти н а б о р а . Н е д о п у с к а е т с я с м е ш и в а н и е или о д н о в р е м е н н о е и с п о л ь з о в а н и е р е а ге н т о в из р азн ы х с е р и й н а б о р о в . Д л я п о л у ч е н и я н а д е ж н ы х р е з у л ь т а т о в н е о б х о д и м о с т р о го е с о б л ю д е н и е и н с тр у кц и и . Н а б о р р е а ге н т о в с и с т е к ш и м с р о ко м го д н о с ти п р и м е н е н и ю н е п о д л е ж и т . Д о п у с к а е т с я т р а н с п о р т и р о в а н и е н а б о р о в при т е м п е р а т у р е д о + 2 5 °С не б о л е е 7 суто к. 8 . У С Т Р А Н Е Н И Е П Р О Б Л Е М П р о б л е м а В о зм о ж н ы е п р и ч и н ы и п ути р е ш е н и я М а л о о ч и щ е н н о й Д Н К (Н а б л ю д а е т с я с д в и г п о ро го в ы х ц и кл о в В К О б о л е е ч е м н а 2 о т н о с и т е л ь н о с р е д н е го з н а ч е н и я В К О по в сей п о с т а н о в к е ) • И с п о л ь з о в а н и з б ы т о ч н ы й о б ъ е м о б р а з ц а . У м е н ь ш и т е к о л и ч е с т в о и с х о д н о го о б р а з ц а , не и с п о л ь з у й т е о б ъ е м ы б о л ь ш е т е х , ко то р ы е у казан ы в п р о т о к о л а х . • И с х о д н ы й м а т е р и а л н е б ы л п о л н о с т ь ю л и з и р о в а н . П р о гр е в а й т е л и з и р у ю щ и й б у ф е р п е р е д и с п о л ь з о в а н и е м д о р а с т в о р е н и я о с а д к а . • О с а д к и н е р а с т в о р и л и с ь . Н е п е р е с у ш и в а й т е о с а д к и . Д Н К в о б р а з ц е д е гр а д и р о в а л а (н е н а б л ю д а е т с я а н а л и т и ч е с к о го с и гн а л а , при н а л и ч и и с и гн а л а В К О ) • О б р а з е ц б ы л п о д в е р г н у т н е о д н о к р а т н о м у з а м о р а ж и в а н и ю . И з б е г а й т е п о в то р е н и я цикл о в з а м о р а ж и в а н и я -о т т а и в а н и я . И с п о л ь з у й т е с в е ж и й о б р а з е ц д л я в ы д е л е н и я Д Н К . • Н е б л а г о п р и я т н ы е у с л о в и я х р а н е н и я о б р а з ц а . Х р а н и т е о б р а з ц ы в т е х у с л о в и я х , ко то р ы е у к а з а н ы в п р о т о к о л а х . И н ги б и р о в а н и е р е а к ц и и (н а б л ю д а е т с я с д в и г п о р о го в ы х ц и кл о в В К О б о л е е ч е м н а 2 о т н о с и т е л ь н о с р е д н е го з н а ч е н и я В К О по в сей п о с т а н о в к е ) • О ч и щ е н н а я Д Н К с о д е р ж и т о с т а т к и о т м ы в о ч н о г о р а с т в о р а . В ы с у ш и в а н и е о са д ко в п е р е д р а с т в о р е н и е м Д Н К п р о в о д и т е в с о о тв е тс т в и и с и н с тр у к ц и е й . --- стр. 9 --- П о в о п р о с а м к а ч е с т в а н а б о р а « Э к с т р а -Д Н К -Б и о » с л е д у е т о б р а щ а т ь с я в О О О « К о м п а н и я А л к о р Б и о » по а д р е с у : 1 9 2 1 4 8 , г. С а н к т -П е т е р б у р г, Ж е л е з н о д о р о ж н ы й п р о с п е к т, д .4 0 , л и т .А , т е л /ф а к с : (8 1 2 ) 6 7 7 -8 7 - 7 9 . Г е н ер а л ь н ы й д и р е к т о р О О О « К о м п а н и я А л к о р Б и о » Р у ко в о д и те л ь Л М Д О О О « К о м п а н и я А п к о р Б и о » ( « С О Г Л А С О В А Н О » З ав . к а ф е д р о й кл и н и ч е с к о й л а б о р а т о р н о й д и а гн о с т и к и Г Б О У Д П О Р М А П О М и н з д р а в с о ц р а з в и т и я Р о с с и и Ш в ы ре в М .В . П а в л о в А .Е . Д .М .Н ., п р о ф е с с о р Д о л го в В .В . ____________2 0 1 2 г. --- стр. 10 --- Прошито, пронумеровано, скреплено П печатью Я ( ________) листС^ гор [кор Био» ;|_|М.В. Швырев