Наборы реагентов in vitro для иммуноферментного анализа — инструкция и характеристики

РУ: ФСЗ 2011/11432 от 04.12.2006 · класс риска 3

Производитель: "Диа Лаб Сервисиз С.р.л" (Италия)

Вид изделия: Вирус простого герпеса 2 тип антитела класса иммуноглобулин G (IgG) ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА) · Вирус простого герпеса 1 и 2 тип антитела класса иммуноглобулин M (IgM) ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА) · Вирус простого герпеса 1 тип антитела класса иммуноглобулин G (IgG) ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 44 контракта, медианная цена за единицу 10 307 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДАЮ 
Генеральный
_ ___ и § /  К о м п а н и я х ^ООО «Компани^ А 11корД|| 1|:> ^ ^ ^ ^ .м 
Швырев М.В.
М
М.В. U g r
\C ornpanv" 2 0 1 1t
'л L I H ,  / ■
Ч < ' - , ,o VПо т о а' ^ ' ’ :
НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ КАЧЕСТВЕННОГО И/ИЛИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО  
ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ КЛАССА IgG ПРОТИВ Toxoplasma gondii
В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА  
Токсоплазма IgG
Т о л ь к о  д л я  in  v itro  д и а гн о с т и ки
1.НАЗНАЧЕНИЕ
Toxoplasma gondii относится к  простейшим. Это внутриклеточный паразит, способный 
инфицировать и  человека, и  животных. Окончательным хозяином являются кошки, в ЖКТ которых 
проходит фаза полового размножения T.gondii. Человек может инфицироваться через контакт с 
зараженным животным или при употреблении в пищу мяса, не прошедшего достаточную тепловую 
обработку. В большинстве случаев у взрослых и  подростков инфекция протекает субклинически или 
со слабо выраженными симптомами.
Приобретенная инфекция часто сопровождается лимфаденитами, повышением температуры, 
лимфоцитозом, миалгией. Хориоретиниты являются известным проявлением приобретенной 
инфекции, но также могут быть и  результатом врожденного токсоплазмоза. Для ВИЧ- 
инфицированных пациентов частым проявлением токсоплазмоза является энцефалит. Наиболее 
уязвимыми для инфицирования являются пациенты с ослабленным иммунитетом и  беременные 
женщины (воздействие на плод), особенно в первые 6 месяцев беременности. В течение этого 
периода у плода идет развитие ЦНС, поэтому инфицирование приводит к  негативным последствиям, 
таким как хориоретиниты, церебральное кальцифицирование, психомоторные нарушения, 
гидроцефалия. Уровень определяемых антител у взрослых варьирует в зависимости от таких 
факторов, как возраст, географические условия, метод определения.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
Принцип действия данного набора основан на твердофазном иммуноферментном анализе 
(ИФА). В качестве ферментной метки в наборе применяется пероксидаза хрена. В течение первой 
инкубации антитела класса IgG против токсоплазмы (если они есть в образце) связываются с 
антигеном токсоплазмы, адсорбированным на твердой фазе (в лунках планшета). С помощью 
промывки удаляется несвязавшийся материал. В течение следующей инкубации антитела против IgG 
человека, меченные пероксидазой хрена, взаимодействуют с комплексом антиген токсоплазмы -  
антитело. После цикла промывки в лунки добавляется раствор ТМБ, что приводит к  развитию 
окраски под воздействием фермента. Реакция останавливается добавлением стоп-реагента (HCI). 
Интенсивность окрашивания раствора измеряется на спектрофотометре при длине волны 450 нм или 
405 нм. Содержание антител класса IgG в образцах и  калибраторах прямо пропорционально 
измеренной оптической плотности раствора в лунках.
2.2. СОСТАВ НАБОРА
Реагент Количество Состояние
1й в а р и а н т  
к о м п л е к т а ц и и
2й в а р и а н т  
к о м п л е к т а ц и и
Планшет
|МТР
1  X  96 лунок 2 X 96 лунок Готов к  использованию 
Ready for use
Промывочный раствор 
^W ASH
1  X  50 м л 2 X  50 м л Концентрат
Cone.
Раствор для разведения
Id il
1  X  20 м л 2 X  20 м л Концентрат
Cone.
1 / 7


--- стр. 2 ---
1  Отрицательный контроль 1  X  2 м л 1  X  2 мл Готов к использованию
Ready for use
Калибраторы
ICAL
1  X  2.5 мл 
4 X  1.5 мл
1  X  2.5 мл 
4 X  1.5 мл
Готов к  использованию 
Ready for use
Конъюгат 1  X  14 м л 2 X  14 м л Готов к  использованию
Ready for use
Раствор ТМБ
т м в 1
1  X  14 м л 2 X  14 мл Готов к  использованию 
Ready for use
Стоп-реагент 1  X  14 мл 2 x 1 4  мл Готов к  использованию
ISTO P] Ready for use
К о л и ч е с т в о  р е а ге н то в  р а с с ч и т а н о  н а  9 6  и л и  н а  1 9 2  л у н к и .
2.2.1. Специфические реагенты
• Иммуносорбент -  планшет (МТР) / Coated microplates: 1  или 2 планшета на 96 лунок, 
каждая из которых покрыта очищенным и  инактивированным антигеном токсоплазмы. 
Неиспользованные стрипы хранить при температуре +2...8°С в плотно закрытом пластиковом пакете 
(прилагается).
• Калибраторы (CAL) / Calibrator: растворы на основе сыворотки крови, Содержат IgG против 
токсоплазмы в следующих концентрациях: 15, 30, 60, 120 и  240 МЕ/мл. Готовы к  использованию. 
Растворы калибраторов 30, 60, 120, 240 МЕ/мл красного цвета, раствор калибратора 15 МЕ/мл -  
голубого. Консервант: М аМ з (<0.1 %), Калибраторы аттестованы по 2 Международному Стандарту 
(SSI), 1980,
• Конъюгат (CONJ) / Enzyme Conjugate: раствор на основе сыворотки крови со 
стабилизаторами, содержащий мышиные моноклональные антитела против IgG человека, 
конъюгированные с пероксидазой хрена (HRPO). Готов к  использованию. Раствор розового цвета. 
Консервант: неомицин.
2.2.2. Реагенты, общие для п р о д у к т о в л и н и й «To.R.C.H. -  S.T.D.» производства компании  
RADIM
• Промывочный раствор 20х (WASH) / Washing Solution (concentrated): фосфатный 
буферный раствор, содержащий Твин-20. Консервант: тимеросал(< 0.05%). Перед использованием 
разведите необходимое количество концентрата дистиллированной водой в 20 раз. В случае 
образования нерастворимых кристаллов поместите раствор в термостат (+37°С) на несколько минут. 
Приготовленный промывочный раствор хранить не более 30 суток при +2...8°С.
• Раствор для разведения (20х) Sample Diluent (concentrated); раствор на основе сыворотки 
крови со стабилизаторами. Жидкость красного цвета. Консерванты: М аМ з (< 0.1%). Непосредственно 
перед применением разведите в 20 раз подготовленным к  использованию промывочным раствором 
(см. выше). Приготовленный раствор для разведения хранить не более 30 суток при +2...8°С.
• Отрицательный контроль (NEG) / Negative Control: раствор на основе сыворотки крови, не 
содержит антител класса IgG к  токсоплазме. Готов к использованию. Раствор красного цвета. 
Консервант: М аЫ з (< 0.1%). Может использоваться как:
1) Отрицательный контроль в качественном анализе.
2) Калибратор с концентрацией О  МЕ/мл в количественном анализе.
• Раствор ТМБ (ТМВ): Раствор тетраметилбензидина в цитратно-фосфатном буфере, 
содержащем DMSO и  Н2О2.  Готов к  использованию.
• Стоп-реагент (STOP) / Blocking Reagent: IN HCI Готов к  использованию
• Бумага для заклеивания планшета (СРА).
• Пластиковый пакет.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Диагностическая специфичность
Диагностическая специфичность данного метода оценивалась на группе более 500 образцов, 
полученных от пациентов, не имеющих иммунитета к токсоплазме. Специфичность составляет 99,1%.
3.2. Диагностическая чувствительность
Диагностическая чувствительность данного метода оценивалась на группе более 200 образцов, 
полученных от пациентов, перенесших в прошлом токсоплазмоз. Чувствительность составляет 
97,1%.
3.3. Аналитическая специфичность
Аналитическая специфичность определяется как способность анализа точно выявлять 
специфический аналит в присутствии интерферирующих факторов в матриксе образца. Контрольные 
исследования показали, что характеристики анализа не изменяются под действием антикоагулянтов 
(соли ЭДТА и  гепарина).
3.4. Аналитическая чувствительность
1
2 / 7


--- стр. 3 ---
Аналитическая чувствительность выражается минимальным количеством определяемого 
аналита, выявляемым с помощью данного набора. Предел детекции составляет 0,6 МЕ/мл (99% 
доверительный интервал). Эта величина была определена как концентрация аналита, отличающаяся 
о т нулевого калибратора на три стандартных отклонения.
3.5. Прецизионность
Прецизионность оценивалась на анализаторе производства RADIM посредством определения 
повторяемости и  воспроизводимости анализа (внутри- и  межаналитический коэффициент вариации) 
н а  трех сыворотках с различной концентрацией антител класса IgG против токсоплазмы.
Повторяемость (Внутрианалитический коэффициент вариации)
Сыворотка
а
Ь
с
Среднее
значение
15.8
25.0
78.68
±
(МЕ/мл)
+
±
±
S.D.
0.3
1.16
5.7
C.V.
%
1.9
4.64
7.2
Кол-во
репликатов
10
10
10
Воспроизводимость (Межаналитический коэффициент вариации)
Сыворотка Среднее ± S.D. C.V. Кол-во
значение (МЕ/мл) % постановок
а 24.70 ± 3.00 12.20 10
Ь 38.50 ± 4.80 12.40 10
с 97.40 ± 14.20 14.60 10
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Для получения достоверных результатов необходимо соблюдать следующие правила:
Не смешивайте специфические реагенты набора разных серий (см. п.2.2.1). Не 
смешивайте их с реагентами других производителей.
Смешивание общих реагентов разных серий (см. п.2.2.2) допускается.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке
-  Не храните реагенты при вьюоких температурах и/или в местах, где возможно их 
загрязнение.
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в чистой
посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для каждого образца 
и ли реагента.
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и  
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к  неправильным результатам анализа.
В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и  обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует 
убедиться, что все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, 
спектрофотометр, термостат) проходит регулярную проверку и  поддерживается в исправном состоянии.
Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок 
или автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок 
может привести к  неверной интерпретации результатов анализа.
Убедитесь в исправности спеетрофотометра. Использование неоткалиброванного 
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к  неверному определению 
оптической плотности образцов и  последующим неверным результатам анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». 
Если температура инкубации отклоняется от 37±2°С, это может привести к  снижению 
чувствительности анализа и/или биологической денатурации образцов и  реагентов. Следует 
периодически проверять показания датчика температуры.
Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или 
образцов. Несоблюдение температурного режима хранения может привести к  биологической 
денатурации компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная 
идентификация может привести к  ложным результатам и  постановке ошибочного клинического 
диагноза.
Чтобы исключить заражение персонала и загрязнение окружающей среды, следует  
соблюдать следующие правила:
3 / 7


--- стр. 4 ---
При работе с потенциально инфекционным материалом и  во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
Не разрешается пипетировать ртом.
Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и  курение в 
помещениях, предназначенных для работы с наборами.
Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и  Стоп-реагентом. 
Избегать попадания в глаза, на кожу и  слизистые. В случае контакта тщательно промыть пораженный 
участок проточной водой.
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на 
присутствие HBsAg, антител к  ВИЧ и  к вирусу гепатита С. Не смотря на полученные отрицательные 
результаты, следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не может гарантировать 
полное отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и  другие реагенты, содержащие 
сыворотку крови человека, следует считать потенциально инфекционными.
Следует избегать разбрызгивания реагентов и  образования аэрозолей. Места, на которые 
попал пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. 
Использованный при этом протирочный материал следует считать потенциально инфицированным и  
подвергнуть соответствующей обработке перед утилизацией.
Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных 
азидов металлов в чугунных и  медных водопроводных трубах, после слива использованных 
реагентов следует промыть сток большим объемом проточной воды.
5. МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В НАБОР
5.1. Материалы и оборудование, необходимые при ручной постановке анализа
-Микропипетки, в том числе многоканальные, высокой точности (10-200 мкл, менее 3% 
ошибки) со сменными наконечниками.
-Градуированный цилиндр для разведения реагентов.
-Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
-Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления 
содержимого из лунок.
-Дистиллированная вода.
-Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую 
плотность раствора в лунках в диапазоне 0-3 ед. опт. плотн. при длинах волн 620,450 и  405нм.
-  Миллиметровая бумага.
5.2. Автоматическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа 
на автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC.
В случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю 
необходимо удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для 
иммуноферментного анализа производства RADIM.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Данный набор может применяться для исследования образцов сыворотки и  плазмы крови 
человека. Сильно гемолизованные или липемичные образцы, а также присутствие в образцах 
фибрина могут оказывать влияние на результаты анализа. Перед постановкой анализа следует 
убедиться в том, что образцы прозрачные и  не содержат осадка. Допускается хранение образцов при 
температуре +2..8°С в течение 1  недели. Для хранения в течение более длительного времени 
образцы следует заморозить при -20°С. Избегайте повторного оттаивания и  замораживания 
образцов.
Перед проведением анализа разведите образцы в соотношении 1:300 с помощью 
приготовленного Раствора для разведения (см. п.2.2.2.). Например; 10 мкл образца + 2990 мкл 
раствора для разведения.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА*
-  
Д о в е д и те  р е а ге н ты  д о  ко м н а т н о й  те м п е р а ту р ы  (+ 1 8 ...2 5 °С ).Т щ а т е л ь н о  п е р е м е ш а й т е  о б р а з ц ы  п е р е д  п р о в е д е н и е м  а н а л и з а .
7.1. Промаркируйте лунки для контролей или калибраторов и  исследуемых образцов. Оставьте 
1  лунку для обнуления (Blank).
7.2. Внесите по 100 мкл контролей или калибраторов и  разведенных образцов в  
соответствующие лунки.
Внимание: Контроли и  калибраторы готовы к использованию и  не требуют разведения.
7.3. Внесите 100 мкл приготовленного Раствора для разведения в лунку для обнуления.
4 / 7


--- стр. 5 ---
7.4. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и  инкубируйте его в течение 60±5 
минут при 37±2°С.
7.5. Удалите содержимое лунок и  промойте их 4 раза, внося при каждой промывке по 350 мкл 
разведенного Промывочного раствора. Тщательно удалите жидкость из лунок.
7.6. Внесите во все лунки по 100 мкл Конъюгата .
7.7. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и  инкубируйте его в течение 30±2 
минут при 37±2°С.
7.8. Удалите содержимое лунок и  промойте планшет (см. п.7.5).
7.9. Внесите во все лунки по 100 мкл Раствора ТМБ.
7.10. Инкубируйте в течение 10 минут при 37±2°С или 15 минут при комнатной температуре
(+18...25‘’С), Избегайте попадания света на планшет.
7.11.Внесите во все лунки по 100 мкл Стоп-реагента.
*  При использовании автоматического анализатора производства RADIM и/или SEAC, 
действуйте в соответствии с его инструкцией.
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 6
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ*
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм, 
Референсный фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо вычитать 
величину оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех остальных лунок. 
В  случае, если значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, считывание результатов 
проводят при длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не позже, чем через 15 минут после 
остановки реакции.
Примечание: при использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или SEAC 
для планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять значения 
автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и  620 нм, что позволит расширить область кривой.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1 Качественный анализ
Определить оптическую плотность (ОП) отрицательного контроля и  калибратора Cut-off (15 
МЕ/мл: пороговое значение). Присутствие или отсутствие антител класса IgG против опреляется 
путем сравнения ОП образца с ОП калибратора Cut-off.
Образцы с ОП ниже ОП калибратора Cut-off признают не реактивными (не содержащими 
антитела класса IgG против Toxoplasma gondii).
Образцы с ОП выше ОП калибратора Cut-off признают реактивными (содержащими антитела 
класса IgG против Toxoplasma gondii).
Область значений ОП ± 10% от ОП калибратора Cut-off является областью сомнительных 
значений. Если ОП образца попадает в эти пределы, результат считается сомнительным и  требует 
повторного тестирования для подтверждения.
9.2 Количественный анализ
Отрицательный контроль является первой точкой калибровочной кривой (О  МЕ/мл антител 
класса IgG против Toxoplasma gondii).
Калибровочная кривая строится в линейных координатах, где по оси X откладывают 
концентрацию каждого калибратора, а по оси У -  ОП каждого калибратора. Соответствующие 
концентрации исследуемых образцов (МЕ/мл) получаются путем интерполяции ОП образца на 
калибровочной кривой.
Образцы с концентрацией IgG антител менее 15МЕ/мл признают нереактивными.
Образцы с концентрацией IgG антител более ЗОМЕ/мл признают реактивными.
Образцы с концентрацией IgG антител в диапазоне от 15 до ЗОМЕ/мл признают слабо-реактивными,
Определение концентрации образцов  
Например:
Описание ОП 
450 п т
Концентрация антител IgG 
против Toxoplasma gondii
o n
405 nm
Калибратор 0 МЕ/мл 0.010 0,003
Калибратор 15 МЕ/мл 0.291 0.097
Калибратор 30 МЕ/мл 0.698 0.232
Калибратор 60 МЕ/мл 1.375 0.458
Калибратор 120 МЕ/мл 2.064 0.688
Калибратор 240 МЕ/мл 2.746 0.915
Образец 1.780 85 МЕ/мл 0.590
Внимание: Отрицательный контроль = Калибратор О  МЕ/мл
Путем интерполяции на калибровочной кривой полученная концентрация антител IgG класса против 
токсоплазмы составляет 85 МЕ/мл.
5/7


--- стр. 6 ---
Критерии достоверности
Прежде чем начать обсчет результатов, убедитесь, что ОП контрольных точек соответствуют следующим 
кр итериям:
Описание Условие
Отрицательный контроль
ОП Кал 240 МЕ/мл / ОП Кал 15 МЕ/мл
0П К ал 15М Е /м л  / ОП Кал О  МЕ/мл
< 0.200  
>6.08 
> 7.16
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ,
9.3. Интерпретация результатов
-  Нереактивные образцы признают отрицательными по содержанию антител IgG класса против 
токсоплазмы.
Реактивные и  сомнительные образцы признают положительными по содержанию антител 
IgG класса против токсоплазмы.
Образцы сыворотки крови, полученные от одного пациента с промежутком времени, должны 
сравниваться только при исследовании в одном и  том же анализе. В этом случае 60% увеличение ОП 
во втором образце является значимым признаком недавней или развивающейся инфекции. В этом 
случае образцы тестируются на присутствие специфических 1д М .
Ю.УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
Н а б о р  д о л ж е н  х р а н и т ь с я  п р и  те м п е р а ту р е  + 2 ...В "С .С р о к  го д н о с ти  р е а ге н то в  у к а з а н  н а  этикетках ф л а к о н о в .В с кр ы т ы е  р е а ге н ты  с т а б и л ь н ы  п р и  те м п е р а ту р е  + 2 ...8 °С  в  т е ч е н и е  2  м е с я ц е в .
11. ОГРАНИЧЕНИЯ В ПРИМЕНЕНИИ АНАЛИЗА
При определении уровня иммунитета пациента против Toxoplasma gondii присутствие антител 
кпасса IgG не исключает возможность текущей инфекции. Таким образом, определение 
специфических антител класса 1 д М  является основным методом для ранней диагностики острой 
инфекции. В случае заболевания раннее вмешательство значительно уменьшает риск. Однако 
результаты анализа должны интерпретироваться с осторожностью и  подтверждаться клиническими 
данными и  дальнейшей диагностикой.
СХЕМА АНАЛИЗА
Предварительное разведение образцов: 1:300
Лунки
Реагенты^ —
Blank Калибраторы и  
контроли
Образцы
Калибраторы и  контроли NEG |CAL| 100 мкл
Образцы — 100 мкл
Раствор для разведения |DIL 100 мкл —
Инкубация: 37±2°С, 60±5 мин.
Промывка: 4 х 350 мкл.
Конъюгат CONJI 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубация: 37±2°С, 30±2 мин 
Промывка: 4 х 350 мкл
Раствор ТМБ ТМВ 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубация: вариант А: 37+2°С, 10 мин; вариант В: комнатная температура, 15 мин
Стоп-реагент STOP 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Считывание: 450-405 пт.
6 / 7


--- стр. 8 ---


--- стр. 9 ---
УТВЕРЖДАЮ 
Генеральный дир8«т<1^^^^
ООО «Ком пг1ниЯ 'Алкро^о'»л\  
Швырев М.В.| iiS __i l \ |
v x  ■  \Com pany"/^
L t d -  '  <  ■
НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЯеЙ^»:,,о»^^^  
АВИДНОСТИ АНТИТЕЛ КЛАССА IgG к Toxoplasma gondii  
В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
Т о л ь к о  д л я  in  v itro  д и а гн о с ти ки
Токсоплазма lgG-авидность
1. НАЗНАЧЕНИЕ
T o x o p la s m a  g o n d ii относится к  внутриклеточным паразитам класса простейших. Клинические 
проявления инфекции разнообразны. Около 80-90% токсоплазменной инфекции, встречающейся у  
иммунокомпетентных подростков или взрослых, протекает бессимптомно. Клинические симптомы 
(лимфаденит, лимфоцитоз и  миалгия) проявляются в легкой форме. Первичная токсоплазменная 
инфекция в течение беременности приводит к  врожденному токсоплазмозу плода с возникновением 
хориоретинита и  повреждений ЦНС. Особенно высока частота возникновения отрицательных 
последствий при инфицировании в течение первых 6 месяцев беременности. Идентификация 
первичной токсоплазменной инфекции затруднена тем, что иммуноглобулины М  (1дМ ), типичные 
маркеры недавней инфекции, могут присутствовать в сыворотке крови в течение многих месяцев и  
даже лет после инфицирования. По этой причине особенно полезным для идентификации недавней 
инфекции оказывается определение авидности специфических IgG. Первичный иммунный ответ на 
инфекцию характеризуется IgG-антителами с низкой авидностью, которые связываются со 
специфическим антигенным сайтом, но легко диссоциируют.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
Принцип действия данного набора основан на твердофазном иммуноферментном анализе 
(ИФА), в котором сыворотки пациентов, внесенные в лунки микропланшета в дубликатах, реагируют 
с антигеном токсоплазмы, иммобилизованным на внутренней поверхности лунок. После первой 
инкубации планшет промывают, а парные лунки инкубируют с разными буферными растворами, 
один из которых содержит мочевину. Мочевина вызывает диссоциацию ранее образовавшегося 
комплекса антиген токсоплазмы - антитело. Степень диссоциации зависит от авидности антител.
После следующего цикла промывки связанные с твердой фазой антитела вступают в 
реакцию с антителами против IgG человека, меченными пероксидазой хрена, которая, в свою 
очередь, реагирует с раствором ТМБ. Интенсивность окрашивания раствора измеряется на 
спектрофотометре при длине волны 450 нм или 405 нм. Процент авидности вычисляют как 
отношение между оптическими плотностями в парных лунках.
2.2. СОСТАВ НАБОРА
Реагент Количество Состояние
Планшет
|мтИ
1x96 лунок Готов к  использованию 
Ready for use
Промывочный раствор 
M /ASH1
1  X  50 мл Концентрат
Concentrated
Раствор для разведения образцов
Idil
1  X  20 мл Концентрат
Concentrated
Контроль Низкоавидный 
ICTR BAl
1  X  2 мл Лиофилизован
Lyophilized
Контроль Вьюокоавидный 
^TRAA
1  X  2 мл Лиофилизован
Lyophilized
Реагент для диссоциации 1  X  10 мл Готов к  использованию 
Ready for use
Конъюгат 1  X  14 мл Готов к  использованию
1 / 7


--- стр. 10 ---
Ready for use
Раствор ТМБ 1  X  14 м л Готов к  использованию
г м в | Ready for use
Стоп реагент 1  X  14 м л Готов к  использованию
Ready for use
К о л и ч е с т в о  р е а ге н то в  р а с с ч и т а н о  н а  9 6  л у н о к .
2.2.1. Специфические реагенты
Иммуносорбент -  планшет (МТР) / Coated microplate: Планшет из 12 стрипов по 8  
лунок: внутренняя поверхность лунок покрыта очищенным и  инактивированным антигеном 
токсоплазмы. Неиспользованные стрипы поместить в пластиковый пакет (прилагается) и  плотно 
закрыть; хранить при температуре +2...8°С.
• Низкоавидный контроль (CTR ВА) / Low Avidity Control; 1  флакон. Лиофилизованый 
препарат красного цвета. Изготовлен на основе сыворотки крови, содержащей низкоавидные IgG 
человека к токсоплазме. Консервант: NaNa (< 0.1%). Перед использованием восстановите 
содержимое флакона в 2 мл дистиллированной или деионизованной воды. Восстановленный 
реагент хранить не более 2 месяцев при температуре +2.,.8‘’С. Для длительного хранения 
заморозить при -20°С.
• Высокоавидный контроль (CTR АА) / High Avidity Control: 1  флакон
Лиофилизованный препарат синего цвета. Изготовлен на основе сыворотки крови, содержащей 
высокоавидные IgG человека к  токсоплазме. Консервант: М аМ з (< 0.1%). Перед использованием 
восстановите содержимое флакона в 2 мл дистиллированной или деионизованной воды. 
Восстановленный реагент хранить не более 2 месяцев при температуре +2...8°С. Для длительного 
хранения заморозить при -20°С.
• Реагент для диссоциации (DISS) / Dissociating Reagent: 1  флакон (10 мл). Содержит 
буферный раствор с мочевиной. Готов к  использованию.
• Конъюгат (CONJ) / Enzyme Conjugate: 1  флакон (14 мл). Раствор на основе сыворотки 
крови со стабилизаторами, содержащий мышиные моноклональные антитела против IgG 
человека, конъюгированные с пероксидазой хрена. Готов к  использованию. Раствор розового 
цвета. Консервант: неомицин.
2.2.2. Реагенты, общие для п р о д у к т о в линий «To.R.C.H. -  S.T.D.» производства компании
RADIM
• Промывочный раствор 20х (WASH) / Washing Solution (concentrated): 1  флакон (50 
мл). Фосфатный буферный раствор, содержащий Твин 20. Консервант: тимеросал(< 0.05%). Перед 
использованием разведите необходимое количество концентрата в соотношении 1:20 
дистиллированной водой. В случае образования нерастворимых кристаллов поместите раствор в  
термостат (+37°С) на несколько минут. Приготовленный промывочный раствор хранить не более 
30 суток при +2...8°С.
• Раствор для разведения образцов 20х (DIL) / Sample Diluent (concentrated): 1  флакон 
(20 мл). Раствор на основе сыворотки крови со стабилизаторами. Жидкость красного цвета. 
Консервант: М аМ з (<0.1% ). Непосредственно перед применением разведите концентрат в 
соотношении 1:20 подготовленным к  использованию промывочным раствором (см. выше). 
Приготовленный раствор для разведения хранить не более 30 суток при +2...8°С.
• Раствор ТМБ (ТМВ): 1  флакон (14 мл). Раствор тетраметилбензидина в цитратно- 
фосфатном буфере, содержащем DMSO и  Н 2О2.  Готов к использованию.
• Стоп-реагент (STOP) / Blocking Reagent: 1  флакон (14 мл), 1Н HCI. Готов к  
использованию.
• Бумага для заклеивания планшета (СРА) / Adhesive plate seales.
• Пластиковый пакет.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Диагностическая специфичность
Диагностическую специфичность данного метода оценивали на панели клинических 
образцов от пациентов с перенесенной ранее или повторной инфекцией. Диагностическая 
специфичность составляет 90“ /о.
3.2. Диагностическая чувствительность
Диагностическую чувствительность данного метода оценивали на панели образцов от 
пациентов с первичной инфекцией. Диагностическая чувствительность составляет 89%.
3.3. Аналитическая специфичность
Аналитическая специфичность определяется, как способность анализа точно выявлять 
специфический аналит в присутствии интерферирующих факторов в матриксе образца.
2 / 7


--- стр. 11 ---
г
Контрольные исследования показали, что характеристики анализа не изменяются под действием 
антикоагулянтов (соли ЭДТА и  гепарина),
3.4. Прецизионность
Прецизионность оценивалась на анализаторе производства RADIM посредством 
определения повторяемости и  воспроизводимости анализа (внутри- и  межаналитический 
коэффициенты вариации) на трех сыворотках с разными % авидности,
Повторяемость (Внутрианалитический коэффициент вариации)
Сыворотка Авидность, % Коэффициент Количество
Среднее
значение
± Стандартное отклонение вариации, % репликатов
а 13.9 ± 1.6 11,6 10
Ь 32 ± 4 13,4 10
с 52 ± 5 10,1 10
Воспроизводимость (Межаналитический коэффициент вариации)
Сыворотка Авидность, % Коэффициент 
вариации, %
Количество
постановокСреднее
значение
± Стандартное отклонение
а 23.9 ± 2.9 12 10
Ь 42.5 ± 4.7 11.1 10
с 75.6 ± 8.8 11.6 10
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Для получения достоверных результатов необходимо соблюдать следующие  
правила:
Не смешивайте специфические реагенты набора разных серий (см. п.2.2,1), Не 
смешивайте их с реагентами других производителей.
Смешивание общих реагентов разных серий (см. п.2.2.2) допускается.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке,
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их 
загрязнение.
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в  
чистой посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для каждого 
образца или реагента.
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала 
и  температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к  неправильным 
результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к  неправильным результатам 
анализа.
В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и  обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует 
убедиться, что все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, 
спектрофотометр, термостат) проходит регулярную проверку и поддерживается в исправном 
состоянии.
Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок 
или автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок 
может привести к  неверной интерпретации результатов анализа.
Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к  неверному определению 
оптической плотности образцов и  последующему неверному результату анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в  «Схеме 
анализа». Если температура инкубации отклоняется от 37±2°С, это может привести к  снижению 
чувствительности анализа и/или биологической денатурации образцов и  реагентов. Следует 
периодически проверять показания датчика температуры.
Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или 
образцов. Несоблюдение температурного режима хранения может привести к биологической 
денатурации компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная 
идентификация может привести к ложным результатам и  постановке ошибочного клинического 
диагноза.
3 / 7


--- стр. 12 ---
Чтобы исключить заражение персонала и загрязнение окружающей среды, следует  
соблюдать следующие правила:
При работе с потенциально инфекционным материалом и  во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
Не разрешается пипетировать ртом.
Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и  курение в  
помещениях, предназначенных для работы с наборами.
Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и  Стоп-реагентом, 
Избегать попадания в глаза, на кожу и  слизистые. В случае контакта тщательно промыть пораженный 
участок проточной водой.
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на 
присутствие HBsAg, антител к  ВИЧ и  к  вирусу гепатита С. Несмотря на полученные отрицательные 
результаты, следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не может 
гарантировать полное отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и  другие 
реагенты, содержащие сыворотку крови человека, следует считать потенциально инфекционными.
Следует избегать разбрызгивания реагентов и  образования аэрозолей. Места, на 
которые попал пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита 
натрия. Использованный при этом протирочный материал следует считать потенциально 
инфицированным и  подвергнуть соответствующей обработке перед утилизацией.
Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление 
взрывоопасных азидов металлов в чугунных и  медных водопроводных трубах, после слива 
использованных реагентов следует промыть сток большим объемом проточной воды.
5. МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В НАБОР
5.1. Материалы и оборудование, необходимые при ручной постановке анализа
Микропипетки, в том числе многоканальные, высокой точности (10-200 мкл, менее 3% 
ошибки) со сменными наконечниками.
-  Градуированные цилиндры для разведения реагентов.
Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2“С.
Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления 
содержимого из лунок.
-  Дистиллированная вода.
Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую 
плотность раствора в лунках в диапазоне 0-3 ед. опт. плотн. при длинах волн 620,450 и  405нм.
Миллиметровая бумага.
5.2. Автоматическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения 
анализа на автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM 
и/или SEAC.
В случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю 
необходимо удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы 
реагентов для иммуноферментного анализа производства RADIM.
6. АНАЛИРИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Данный набор может применяться для исследования образцов сыворотки и  плазмы крови 
человека. Сильно гемолизованные или липимичные образцы, а также присутствие в образцах 
фибрина могут оказывать влияние на результаты анализа. Перед постановкой анализа следует 
убедиться в том, что образцы прозрачные и  не содержат осадка. Допускается хранение образцов 
при температуре +2,..8‘’С в течение 1-2 суток. Для хранения в течение более длительного времени 
образцы следует заморозить при -20°С. Избегайте повторного оттаивания и  замораживания 
образцов.
Перед проведением анализа разведите образцы в соотношении 1:300 с помощью 
приготовленного Раствора для разведения (см. п,2.2.2). Например: 10 мкл образца + 2990 мкл 
Раствора для разведения.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА*
-  
Д о в е д и те  р е а ге н ты  д о  ко м н а т н о й  те м п е р а ту р ы  (+ 1 8 .. .2 5 ° С ).Т щ а т е л ь н о  п е р е м е ш а й т е  о б р а з ц ы  п е р е д  п р о в е д е н и е м  а н а л и з а .
7.1. Составьте схему нанесения образцов на планшет. Отметьте по 2 лунки для: 
обнуления спектрофотометра (Blank), низкоавидного контроля, высокоавидного контроля и  
каждого из исследуемых образцов,
7.2. Внесите по 100 мкл Низкоавидного контроля в лунки С1 и  D1; по 100 мкл 
Высокоавидного контроля в лунки Е1 и  F1; по 100 мкл предварительно разведенных образцов в 
дубликатах -  во все остальные лунки.
4 / 7


--- стр. 13 ---
7.3. Закройте планшет клейкой пленкой (входит в состав набора) и  инкубируйте его в 
течение 60±5 минут при 37±2°С,
7.4. Удалите содержимое лунок и  промойте лунки 4 раза, внося при каждой промывке по 
350 мкл разведенного Промывочного раствора. Тщательно удалите жидкость из лунок.
7.5. Внесите по 100 мкл Раствора для разведения в нечетные лунки (А1, С1, Е1, G1 и  т.д.) и  
по 100 мл Реагента для диссоциации в четные лунки (В1, D1, F1, Н1 и  т. д.).
7.6. Закройте планшет клейкой пленкой (входит в состав набора) и  инкубируйте его в 
течение 60±5 минут при 37±2“С.
7.7. Удалите содержимое лунок и  промойте планшет (см. п.7.4).
7.8. Внесите во все лунки по 100 мкл Конъюгата.
7.9. Закройте планшет клейкой пленкой (входит в состав набора) и  инкубируйте его в  
течение 30±2 минут при 37±2°С.
7.10. Удалите содержимое лунок и  промойте планшет (см. п . 7.4).
7.11. Внесите во все лунки по 100 мкл Раствора ТМБ.
7.12. Инкубируйте в течение 10 минут при 37±2“С. Избегайте попадания света на планшет.
7.13. Внесите во все лунки по 100 мкл Стоп-реагента.
*  При использовании автоматического анализатора производства RADIM или SEAC, 
действуйте в соответствии с его инструкцией по эксплуатации.
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 7.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. 
Референсный фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо вычитать 
I  величину оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех остальных 
лунок. В случае, если значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, считывание 
результатов проводят при длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не позже, чем через 15 
минут после остановки реакции.
Примечание: при использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или 
SEAC для планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять 
значения автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и  620 нм, что позволит расширить область кривой.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
Вычтите среднее значение оптической плотности (ОП) лунок А1, В1 из значений ОП
других лунок.
Убедитесь, что ОП каждого образца, инкубированного с Раствором для разведения образцов, >
0,300 ед.опт.плотн. Если это так, можно выполнять расчеты. Если ОП образца < 0,300 ед.опт.плотн., 
это свидетельствует, что образец не содержит достаточную концентрацию антител для определения 
авидности IgG (пациент либо не имеет иммунитета к  инфекции вирусом токсоплазмы, либо находится в 
периоде, когда иммунный ответ еще не сформирован).
Д ля каждого образца и  контроля рассчитайте процентное отношение ОП лунки, инкубированной с 
Реагентом для диссоциации и  ОП лунки, инкубированной с Раствором для разведения.
ОП с Реагентом для диссоциации
-----------------------------------------------  X  100 = % Авидности
ОП с Раствором для разведения
Если ОП образца при длине волны 450 нм >3,000 ед.опт.плотн. в любой из лунок, следует измерить ОП 
повторно при длине волны 405 нм. Процент авидности рассчитывается по формуле (см. выше) на 
основании ОП при 405 нм.
Образец О Пс
Раств. для разведения
О Пс
Реаг. для диссоциации
% Авидности
Низкоавидный контроль 1.276 0.031 2.4%
Высокоавидный контроль 1.475 0.580 39.3%
Образец 0.766 0.127 16.6%
9.2. Критерии достоверности
ОП, измеренная при 450 нм, в лунках с высокоавидным и  низкоавидным контролями, 
инкубированными с Раствором для разведения, должна быть > 0,500 ед.опт.плотн.
Процент авидности должен быть ниже 20% для низкоавидного контроля и  выше 30% для 
высокоавидного контроля. В любом случае, результаты анализа должны подтверждаться 
клиническими наблюдениями и  результатами других диагностических тестов.
9.3. Интерпретация результатов______________________________________________________
% авидности > 30% = 
% авидности 20-30% = 
% авидности < 20% =
IgG к  Токсоплазме с высокой авидностью
IgG к  Токсоплазме со средней авидностью (т.н. «серая зона»)
IgG к  Токсоплазме с низкой авидностью
____________________
5/7


--- стр. 14 ---
Н а б о р  д о л ж е н  х р а н и т ь с я  п р и  те м п е р а ту р е  + 2 ...8 °С .С р о к  го д н о с ти  р е а ге н то в  у к а з а н  н а  этике тках ф л а к о н о в .В с кр ы т ы е  р е а ге н ты  с т а б и л ь н ы  п р и  те м п е р а ту р е  + 2 ...8 °С  в  те ч е н и е  2  м е с я ц е в .
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
11. ОГРАНИЧЕНИЯ В ПРИМЕНЕНИИ АНАЛИЗА
Наличие высокоавидных антител не исключает возможность недавнего инфицирования, Тем 
не менее, учитывая высокую специфичность данного анализа, положительный результат 
позволяет с вьюокой степенью достоверности предполагать, что инфицирование произошло в  
предшествующие 3 месяца.
6 / 7


--- стр. 16 ---
П рош ито, пронум еровано, скреплено 
п е ч а ть ю . _____) лист^
Г е н е р а д / х ш Й ^ ^ ^ к ^  j ^ 1|
О О О ____тко й Б и о »
Ш вы рев


--- стр. 17 ---
«УТВ 
Генерал(1>)щ 
ООО «Ком 
Швырев
« »
"Ч\,
1 М 1 Я  \'^о\
Щ ’иТю” \|\  
10» )q
Ltd.
,//2011Г
НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ  
ИММУНОГЛОБУЛИНОВ М К Toxoplasma gondii  
В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА  
Токсоплазма 1дМ
Т о л ь к о  д л я  in  v itro  д и а гн о с ти ки
1. НАЗНАЧЕНИЕ
T o x o p la s m a  g o n d ii относится к  простейшим. Это внутриклеточный паразит, способный 
инфицировать и  человека, и  животных. Окончательным хозяином являются кошки, в ЖКТ которых 
проходит фаза полового размножения T .g o n d ii. Человек может инфицироваться при употреблении в  
пищу мяса, не прошедшего достаточную тепловую обработку или при прямом контакте с зараженным 
животным. В большинстве случаев у взрослых и  подростков инфекция протекает субклинически или со 
слабо выраженными симптомами.
Приобретенная инфекция часто сопровождается лимфаденитами, повышением температуры, 
лимфоцитозом, миалгией. Хориоретиниты являются известным проявлением приобретенной 
инфекции, но также могут быть и  результатом врожденного токсоплазмоза. Для ВИЧ-инфицированных 
пациентов частым проявлением токсоплазмоза является энцефалит. Наиболее уязвимыми для 
инфицирования являются пациенты с ослабленным иммунитетом и  беременные женщины 
(воздействие на плод), особенно в первые 6 месяцев беременности. В течение этого периода у плода 
идет развитие ЦНС, поэтому инфицирование приводит к  негативным последствиям, таким как 
хориоретиниты, церебральное кальцифицирование, психомоторные нарушения, гидроцефалия. 
Уровень определяемых антител у взрослых варьирует в зависимости от таких факторов, как возраст, 
географические условия, метод определения.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
Принцип действия данного набора основан на твердофазном иммуноферментном анализе 
(ИФА), вариант «capture». В качестве ферментной метки в наборе применяется пероксидаза хрена. В  
течение первой инкубации антитела класса 1 д М  против токсоплазмы (если они есть в образце) 
улавливаются антителами против ц-цепей иммуноглобулинов М  человека, адсорбированными на 
твердой фазе (в лунках планшета). С помощью промывки удаляется несвязавшийся материал. В  
течение двух следующих инкубаций комплекс «антиген токсоплазмы - биотинилированные антитела» 
реагирует со связанными антителами 1д М  против токсоплазмы, далее стрептавидин, меченный 
пероксидазой хрена, взаимодействует с биотином. После цикла промывки в лунки добавляется раствор 
ТМБ, что приводит к  развитию окраски под воздействием фермента. Реакция останавливается 
добавлением стоп-реагента (HCL). Интенсивность окрашивания раствора измеряется на 
спектрофотометре при длине волны 450 нм или 405 нм. Содержание антител класса 1 д М  в образцах и  
контролях прямо пропорционально измеренной оптической плотности в лунках.
2.2. СОСТАВ НАБОРА
Реагент Количество Описание
Планшет
мтИ
1  X  96 лунок Готов к использованию 
Ready for use
Промывочный раствор 
IWASH
1  X  50 мл Концентрат
Cone.
Рас7
DIL
■вор для разведения 1  X  100 мл Готов к  использованию 
Ready for use
«1цательный контроль 1  X  2 мл Готов к  использованию 
Ready for use
Пол(
POS
ожительный контроль 1  X  2 мл Готов к использованию 
Ready for use
1 / 7


--- стр. 18 ---
C ut-off контроль
Антиген
а
Конъюгат/биотин
н чЛ И Ш И
Конъюгат HRPO
Раствор ТМБ
[гм в
Стоп-реагент
1  X  2,5 мл
7 X 2,5 мл
1  X 19 мл
1  X 14 мл
1х 14 мл
1  X  14 мл
Готов к использованию 
Ready for use
Лиофилизован
Готов к  использованию 
Ready for use
Готов к использованию 
Ready for use
Готов к использованию 
Ready for use
Готов к  использованию Ready 
for use
К о л и ч е с т в о  р е а ге н то в  р а с с ч и т а н о  н а  9 6  и л и  н а  1 9 2  л у н к и .
2.2.1. Специфические реагенты
• Иммуносорбент -  планшет (МРТ) / (Coated microplates): лунки стрипов планшета покрыты 
антителами против ц-цепей иммуноглобулинов человека. Неиспользованные стрипы хранить при 
температуре +2...8°С в плотно закрытом пластиковом пакете (прилагается).
• Положительный контроль (POS) / Positive Control: 1  флакон. Раствор на основе сыворотки 
кр о в и , содержит антитела класса 1 д М  к  токсоплазме. Готов к использованию. Консервант: NaNs (<0.1 %).
•  Cut-off контроль (С/О) / Cut-off Control: 1  флакон. Раствор на основе сыворотки крови, 
содержит антитела класса 1 д М  к  токсоплазме. Готов к  использованию. Раствор голубого цвета. 
Консервант; М аМ з (<0.1 %).
• Антиген токсоплазмы (Ад) / Toxoplasma antigen: 7 флаконов, содержат инактивированный 
антиген токсоплазмы. Перед использованием восстановите содержимое каждого флакона, добавив 
2,5 мл раствора конъюгат/биотин. Восстановленный реагент хранить не более 10 суток при 
температуре +2...8°С.
• Конъюгат/биотин (CONJ|BIO) / Biotinylated Conjugate: 1  флакон Раствор на основе 
сыворотки крови со стабилизаторами, содержит моноклональные антитела против токсоплазмы, 
конъюгированные с биотином. Готов к  использованию. Консервант: неомицин.
• Конъюгат (CONJ) / Enzyme Conjugate: 1  флакон. Раствор на основе сыворотки крови со 
стабилизаторами, содержит стрептавидин, конъюгированный с пероксидазой хрена (HRPO). Готов к  
использованию. Консервант: неомицин.
2.2.2. Реагенты, общие д л я  п р о д у к т о в  линий «To.R.C.H. -  S.T.D.» п р о и з в о д с т в а  к о м п а н и и  
RADIM
• Промывочный раствор 20х (WASH) / Washing Solution (concentrated): 1  флакон. 
Фосфатный буферный раствор, содержащий Твин 20. Консервант: тимеросал (< 0.05%). Перед 
использованием разведите необходимое количество концентрата дистиллированной водой в  
соотношении 1:20. В случае образования нерастворимых кристаллов поместите раствор в термостат 
(+37°С) на несколько минут. Приготовленный промывочный раствор хранить не более 30 суток при 
+2...8°С.
• Раствор для разведения (DIL) / Sample Diluent: 1  флакон. Раствор на основе сыворотки 
крови со стабилизаторами. Жидкость красного цвета. Консервант: М аМ з (< 0.1%). Готов к  
использованию.
• Отрицательный контроль (NEG) / Negative Control: 1  флакон. Раствор на основе сыворотки 
крови, не содержит антител класса 1д М  к  токсоплазме. Готов к  использованию. Раствор красного цвета. 
Консервант: NaNs (< 0.1%).
• Раствор ТМБ (ТМВ): 1  флакон. Раствор тетраметилбензидина в цитратно-фосфатном 
буфере, содержащем DMSO и  Н 2О2.  Готов к  использованию.
•  CTon-peareHT(STOP) / Blocking Reagent: 1  флакон.1Н HCI. Готов к  использованию.
• Бумага для заклеивания планшета (СРА) / Adhesive plate sealers.
• Пластиковый пакет.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Диагностическая специфичность
Диагностическая специфичность данного метода оценивалась на группе из 183 образцов, 
отрицательных по содержанию антител 1д М  класса против токсоплазмы. Специфичность составляет 
98,2%.
3.2. Диагностическая чувствительность
Диагностическая чувствительность данного метода оценивалась на группе из 124 образцов, 
полученных от пациентов, с острым токсоплазмозом. Чувствительность составляет 98,1%.
2 / 7


--- стр. 19 ---
г
3.3. Аналитическая специфичность
Аналитическая специфичность определяется как способность анализа точно выявлять 
специфический аналит в присутствии интерферирующих факторов в матриксе образца. Контрольные 
исследования показали, что характеристики анализа не изменяются под действием антикоагулянтов 
(со л и  ЭДТА и  гепарина).
3.4. Прецизионность
Прецизионность оценивалась на анализаторе производства RADIM посредством определения 
повторяемости и  воспроизводимости анализа (внутри- и  межаналитический коэффициенты вариации) 
н а  трех сыворотках с различной концентрацией антител класса 1д М  против токсоплазмы.
Повторяемость (Внутрианалитический коэффициент вариации)
Сыворотка
а
Ь
с
Среднее значение ±
Индекс
S.D.
4,46
1,73
0,96
±
±
±
0,15
0,06
0,02
C.V.
%
3,45
3,39
2,56
Кол-во
репликатов
10
10
10
Воспроизводимость (Межаналитический коэффициент вариации)
Сыворотка
а
Ь
с
Среднее значение ±
___________________Индекс
S.D.
1,72
5,41
1,40
±
±
±
0,18
0,51
0,10
C.V.
%
10,40
9,48
6,99
Кол-во
постановок
10
10
10
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Для получения достоверных результатов необходимо соблюдать следующие правила;
Не смешивайте специфические реагенты набора разных серий (см, п.2.2.1). Не смешивайте 
и х с реагентами других производителей.
Смешивание общих реагентов разных серий (см. п.2.2.2) допускается.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их 
загрязнение.
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте только дистиллированную воду или деионизованную воду. Храните воду только 
в чистой посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для кахо д о го  образца или
реагента.
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и  
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к  неправильным 
результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам анализа.
В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и  обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует 
убедиться, что все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, 
спектрофотометр, термостат) проходит регулярную проверку и  поддерживается в исправном 
состоянии.
Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок или 
автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок может 
привести к  неверной интерпретации результатов анализа.
Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к  неверному определению 
оптической плотности образцов и  последующему неверному результату анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». Если 
температура инкубации отклоняется от 37±2®С, это может привести к  снижению чувствительности 
анализа и/или биологической денатурации образцов и  реагентов. Следует периодически проверять 
показания датчика температуры.
Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или образцов. 
Несоблюдение температурного режима хранения может привести к биологической денатурации 
компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная идентификация 
может привести к  ложным результатам и  постановке ошибочного клинического диагноза.
3 / 7


--- стр. 20 ---
Чтобы исключить заражение персонала и загрязнение окружающей среды, следует соблюдать  
Iследующие правила:
- При работе с потенциально инфекционным материалом и  во время проведения анализа следует
[  н а д е в а ть  одноразовые защитные перчатки.
- Не разрешается пипетировать ртом.
- Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и  курение в помещениях,
?  предназначенных для работы с наборами.
- Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и  Стоп-реагентом. Избегать 
I  п о п а д а н и я  в глаза, на кожу и  слизистые. В случае контакта тщательно промьп-ь пораженный участок 
(проточной  водой.
- Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на присутствие 
'  H B sA g, антител к  ВИЧ и  к вирусу гепатита С. Несмотря на полученные отрицательные результаты,
следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не может гарантировать полное 
[отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и  другие реагенты, содержащие 
сыворотку крови человека, следует считать потенциально инфекционными.
- Следует избегать разбрызгивания реагентов и  образования аэрозолей. Места, на которые попал 
пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. 
Использованный при этом протирочный материал следует считать потенциально инфицированным и  
подвергнуть соответствующей обработке перед утилизацией.
Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных азидов 
металлов в чугунных и  медных водопроводных трубах, после слива использованных реагентов следует 
промыть сток большим объемом проточной воды.
5. МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В НАБОР
5.1. Материалы и оборудование, необходимые при ручной постановке анализа
-  Микропипетки, в том числе многоканальные, вьюокой точности (10-200 мкл, менее 3% ошибки) со 
сменными наконечниками.
-  Градуированные цилиндры для разведения реагентов.
-  Дистиллированная вода.
-  Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
-  Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления содержимого и з 
лун о к.
-  Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность 
раствора в лунках в диапазоне 0-3 ед. опт. плотн. при длинах волн 620,450 и  405нм.
-  Миллиметровая бумага.
5.2. Автоматическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа на 
автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC.
В случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю необходимо 
удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для иммуно- 
ферментного анализа производства RADIM.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Данный набор может применяться для исследования образцов сыворотки и  плазмы крови 
человека. Сильно гемолизованные или липемичные образцы, а также присутствие в образцах фибрина 
могут оказывать влияние на результаты анализа. Перед постановкой анализа следует убедиться в том, 
что образцы прозрачные и  не содержат осадка. Допускается хранение образцов при температуре 
+2...8°С в течение 1  недели. Для хранения в течение более длительного времени образцы следует 
заморозить при -20°С. Избегайте повторного оттаивания и  замораживания образцов.
Перед проведением анализа разведите образцы в соотношении 1:100 Раствором для 
разведения ( п.2.2.2).
Например: 10 мкл образца + 990 мкл Раствора для разведения.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА*
Д о в е д и т е  р е а ге н ты  д о  ко м н а т н о й  те м п е р а ту р ы  (+ 1 8 .. .2 5 '‘С ).Т щ а т е л ь н о  п е р е м е ш а й т е  о б р а з ц ы  п е р е д  п р о в е д е н и е м  а н а л и з а .
7.1. Промаркируйте лунки для контролей и  исследуемых образцов. Контроли вносите в дубликатах, 
образцы - в монопликатах. Оставьте 1  лунку для обнуления (Blank).
7.2. Внесите по 100 мкл контролей и  разведенных образцов в соответствующие лунки.
Внимание: Контроли готовы к использованию и  не требуют разведения.
7.3. Внесите 100 мкл Раствора для разведения в лунку для обнуления.
7.4. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и  инкубируйте его в течение 60±5 минут при 
37±2°С
4 / 7


--- стр. 21 ---
7 .5 . Удалите содержимое лунок и  промойте лунки 4 раза, внося при каждой промывке по 350 мкл 
{разведенного Промывочного раствора. Тщательно удалите жидкость из лунок.
7.6. Внесите во все лунки по 100 мкл Антигена, восстановленного раствором конъюгат/биотин.
7 .7 . Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и  инкубируйте его в течение 60±2 минут при 
3 7 ± 2 °С .
7.8. Удалите содержимое лунок промойте планшет (см. п.7.5).
7.9. Внесите во все лунки по 100 мкл Конъюгата (стрептавидин-H R P O ).
7.10. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и  инкубируйте его в течение 30+2 минут при 
3 7 ± 2 ‘> С .
Удалите содержимое лунок и  промойте планшет (см. п.7.5).
Внесите во все лунки по 100 мкл Раствора ТМБ.
Инкубируйте в течение 10 минут при 37±2°С или 15 минут при комнатной температуре  
(+18...25°С). Избегайте попадания света на планшет.
7.14. Внесите во все лунки по 100 мкл Стоп-реагента .
*  При использовании автоматического анализатора производства RADIM и/или SEAC, действуйте в  
соответствии с его инструкцией.
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 6
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. 
Референсный фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо вычитать 
величину оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех остальных 
лунок. В случае, если значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, считывание 
результатов проводят при длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не позже, чем через 15 
минут после остановки реакции.
Примечание: при использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или 
SEAC для планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять 
значения автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и  620 нм.
/
I
1
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
Определить оптическую плотность (ОП) отрицательного контроля, положительного контроля и  
cut-off контроля (пороговое значение). Присутствие или отсутствие антител класса 1 д М  против 
Toxoplasma gondii определяется путем сравнения ОП образца с ОП Cut-off контроля.
Образцы с ОП ниже ОП Cut-off контроля признают нереактивными (не содержащими антитела 
класса 1 д М  против Toxoplasma gondii).
Образцы с ОП выше ОП Cut-off контроля признают реактивными (содержащими антитела 
класса IgM против Toxoplasma gondii).
Область значений ОП ± 10% от ОП Cut-off контроля является областью сомнительных 
значений. Если ОП образца попадает в эти пределы, требуется повторное тестирование для 
подтверждения.
9,1 Критерии достоверности  
П рехаде чем начать обсчет результатов, убедитесь, что ОП контрольных точек соответствуют следующим
кзитериям.
Описание Условие
Отрицательный контроль < 0,200
Положительный контроль > 0,700
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ.
9.2 Интерпретация результатов
Результат определяется как отношение ОП образца к  ОП Cut-off контроля. Эта величина называется 
индексом.
ОП образца
Индекс = ----------------------------
ОП Cut-off контроля
Образцы с Индексом < 0,9 признают отрицательными по содержанию антител IgM класса 
против токсоплазмы.
Образцы с Индексом > 1,1 признают положительными по содержанию антител IgM класса 
против токсоплазмы.
Образцы с Индексом 0,9 -  1,1 (ОП ± 10% от Cut-off контроля) считаются сомнительными и  
требуют повторного тестирования.
9.3 Пример подсчета
Нижеследующие данные приведены в качестве примера и  не могут быть использованы как 
экспериментальные результаты.__________________________________________
Описание ОП
5/7
IgM anti-Toxo Индекс


--- стр. 22 ---
450 п т
Отрицательный контроль 0,082
Cut-off контроль 0,504
Положительный контроль 1,992
Образец 0,889 + 1,76
[Исследуемый образец признается положительным (+) по содержанию антител класса 1 д М  против 
[таксоплазмы.
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
Н а б о р  д о л ж е н  х р а н и ть с я  п р и  те м п е р а ту р е  + 2 ...8 °С .С р о к  го д н о с ти  р е а ге н то в  у к а з а н  н а  этике тках ф л а к о н о в .В с кр ы т ы е  р е а ге н ты  с т а б и л ь н ы  п р и  те м п е р а ту р е  + 2 .,.8 °С  в  те ч е н и е  2  м е с я ц е в .
11. ОГРАНИЧЕНИЯ В ПРИМЕНЕНИИ АНАЛИЗА
При определении уровня иммунитета пациента против Toxoplasma gondii присутствие антител 
класса IgG не исключает возможность текущей инфекции. Таким образом, определение 
специфических антител класса 1д М  является основным методом для ранней диагностики острой 
инфекции. В случае заболевания раннее вмешательство значительно уменьшает риск. Применение 
варианта «capture» ИФА позволяет значительно снизить возможность неспецифических реакций. 
Однако результаты анализа должны интерпретироваться с осторожностью и  подтверждаться 
клиническими данными и  дальнейшей диагностикой.
СХЕМА АНАЛИЗА
Предварительное разведение образцов: 1:100
-----
--------------Лунки
Реагенты ---------------
Blank Контроли Образцы
Отрицательный, положительный и  cut­ ----- 100 мкл
off контрол и  n e gIIp o s С/0|
Образцы 100 мкл
Раствор для разведения |DIL 100 мкл
Инкубация: 37±2°С, 60±5 мин. 
Промывка: 4 х 350 мкл.
Раствор антигена в конъюгате с 100 мкл 100 мкл 100 мкл
биотином Ад +CONJI |В10
Инкубация: 37±2°С, 60±5 мин. 
Промывка: 4 х 350 мкл.
Конъюгат CONJ 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубация: 37±2°С, 30±2 мин. 
Промывка: 4 х 350 мкл
Раствор ТМБ ТМВ 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубация: вариант А: 37±2°С, 10 мин; вариант В: комнатная температура, 15 мин
Стоп-реагент р то р 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Считывание: 450-405 нм.


--- стр. 24 ---
П р о ш ито , пронум еровано, скреплено .
печатью  Ф ( ___________) л и с т ^
"КоМПЗН1|Я^^\\
Г  eH e^^H b ift® & p e iC T O p;
" ^  “  Ш вы рев


--- стр. 25 ---
«УТВЕР 
Генеральн  
ООО «Комп 
Швырев М.
« _ 2 ^ »  Ш 11г
НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ КАЧЕСТВЕННОГО И/ИЛИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО  
ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ КЛАССА IgG ПРОТИВ ВИРУСА  
КРАСНУХИ В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
Краснуха IgG
Т о л ь к о  д л я  in  v itro  д и а гн о с ти ки
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Вирус краснухи представляет собой РНК-содержащий вирус сферической формы, 60 нм в диаметре. 
Краснуха как заболевание обычно протекает в легкой форме, оставляя пациента иммунизированным к  
этому вирусу. Однако, когда первичное заражение происходит во время беременности, это может 
оказывать тератогенное влияние на плод, особенно в первый триместр беременности. Кардио­
васкулярные нарушения, глухота, хориоретиниты, задержка роста и  развития нервной системы могут 
быть следствием воздействия вируса на плод. Краснуха менее заразна, чем корь, поэтому значительное 
количество женщин репродуктивного возраста не успевают перенести эту болезнь к  моменту 
беременности. Из них 10-20% не вакцинированы, а значит, восприимчивы к  вирусу краснухи.
Диагноз «краснуха» может быть поставлен следующим образом:
- по увеличению количества антител класса IgG к вирусу краснухи в двух тестируемых образцах 
крови пациента, взятых с промежутком времени;
- выявлением антител класса 1 д М  в образце крови.
Анализ с целью определения антител класса 1д М  к  вирусу краснухи является наиболее 
распространенным методом для постановки диагноза в острой стадии заболевания.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
Принцип работы данного набора основан на твердофазном иммуноферментном анализе (ИФА). В 
качестве ферментной метки в наборе применяется пероксидаза хрена. В течение первой инкубации 
антитела класса IgG против вируса краснухи (если они есть в образце) связываются с антигеном вируса 
краснухи, адсорбированным на твердой фазе (в лунках планшета). С помощью промывки удаляется 
несвязавшийся материал. В течение следующей инкубации антитела против IgG человека, меченные 
пероксидазой хрена, взаимодействуют с комплексом антиген вируса краснухи -  антитело. После цикла 
промывок в лунки добавляется раствор ТМБ, что приводит к развитию окраски под воздействием 
фермента. Реакция останавливается добавлением Стоп-реагента (HCI). Интенсивность окрашивания 
раствора измеряется на спектрофотометре при длине волны 450 нм или 405 нм. Содержание антител 
класса IgG в образцах и  калибраторах прямо пропорционально измеренной оптической плотности 
раствора в лунках.
2.2. СОСТАВ НАБОРА
Реагент Количество Состояние
1й вариант 
комплектации
2й вариант 
комплектации
Планшет
мтИ 1х 96 лунок 2 X  96 лунок Готов к использованию 
Ready for use
Промывочный
раствор 1  X  50 мл 2 X  50 мл Концентрат
Cone.
Раст
[D IL
■вор для разведения 1  X  20 мл 2 X  20 мл Концентрат
Cone.
Отр1
К О Н Т
NEG
^цательный
|>оль 1  X  2 мл 1  X  2 мл Готов к  использованию 
Ready for use
Кал1
ICAL
^браторы 1  X  2.5 мл 
4 X  1,5 мл
1  X  2.5 мл 
4 X  1.5 мл
Готов к  использованию 
Ready for use
1 / 7


--- стр. 26 ---
Г К онъ ю гат 1  X  14 мл 2 X  14 мл Готов к  использованию
1 Ready for use
Раствор ТМБ
|гм^
1  X  14 мл 2 X  14 мл Готов к  использованию 
Ready for use
Стоп-реагент 1  X  14 мл 2 X  14 мл Готов к  использованию
Ready for use
К о л и ч е с т в о  р е а ге н то в  р а с с ч и т а н о  н а 96 и л и  н а  1 9 2  л у н к и .
2.2.1. Специфические реагенты
• Иммуносорбент -  планшет (МРТ) I Coated microplates: лунки стрипов планшета покрыты 
очищенным и  инактивированным антигеном вируса краснухи. Неиспользованные стрипы хранить при 
температуре +2...8“С в плотно закрытом пластиковом пакете (прилагается).
• Калибраторы (CAL) / Calibrator: растворы на основе сыворотки крови, содержат антитела класса 
Ig G  против вируса краснухи в следующих концентрациях: 15, 30, 60, 120 и  240 МЕ/мл. Готовы к  
использованию. Растворы калибраторов 30, 60, 120, 240 МЕ/мл красного цвета, раствор калибратора 
15 МЕ/мл -  голубого цвета. Консервант: М аМ з (<0.1%). Калибраторы аттестованы по 2 Международному 
Стандарту ВОЗ 67/182, 1986.
• Конъюгат (CONJ) / Enzyme Conjugate: раствор на основе сыворотки крови со
стабилизаторами, содержит мышиные моноклональные антитела против IgG человека,
конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP). Готов к использованию. Раствор розового цвета. 
Консервант: неомицин.
2.2.2. Реагенты, общие для п р о д у к т о в  л и н и й «To.R.C.H. -  S.T.D.» производства компании  
R ADIIVI
• Промывочный раствор 20х (WASH) / Washing Solution (concentrated): фосфатный буферный 
раствор, содержащий твин-20 и  консервант Тимеросал (< 0,05%). Перед использованием разведите 
необходимое количество концентрата дистиллированной водой в соотношении 1:20, В случае 
образования нерастворимых кристаллов поместите раствор в термостат (+37°С) на несколько минут. 
Приготовленный промывочный раствор хранить не более 30 суток при +2,..8°С.
• Раствор для разведения 20х (DIL) / Sample Diluent (concentrated): раствор на основе
сыворотки крови со стабилизаторами. Жидкость красного цвета. Консервант: NaNs (<0.1%).
Непосредственно перед употреблением разведите в отношении 1:20 подготовленным к  использованию 
промывочным раствором (см. выше). Приготовленный раствор для разведения хранить не более 
30 суток при +2...8°С.
• Отрицательный контроль(МЕб) / Negative Control: раствор на основе сыворотки крови, не 
содержит антител класса IgG к  вирусу краснухи. Готов к использованию. Раствор красного цвета. 
Консервант: NaNs (< 0,1%). Может использоваться как:
1) Отрицательный контроль в качественном анализе.
2) Калибратор с концентрацией О  МЕ/мл в количественном анализе.
• Раствор ТМБ (ТМВ): 1  флакон. (Раствор тетраметилбензидина в цитратно-фосфатном буфере, 
содержащем DMSO и  Н2О2.  Готов к использованию.
• Стоп-реагент (STOP) 
I Blocking Reagent: 1  флакон .  1Н HCI. Готов к  использованию.
• Бумага для заклеивания планшета (СРА) / Adhesive plate sealers.
• Пластиковый пакет.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1 Диагностическая специфичность
Диагностическая специфичность данного метода оценивалась на группе более 100 образцов, 
полученных от пациентов, не имеющих иммунитета к  вирусу краснухи. Специфичность составляет 97,2%,
3.2 Диагностическая чувствительность
Диагностическая чувствительность данного метода оценивалась на группе более 200 образцов, 
полученных от пациентов, перенесших в прошлом краснуху. Чувствительность составляет 100%.
3.3 Аналитическая специфичность
Аналитическая специфичность определяется как способность анализа точно выявлять 
специфический аналит в присутствии интерферирующих факторов в матриксе образца. Контрольные 
исследования показали, что характеристики анализа не изменяются под действием антикоагулянтов (соли 
ЭДТА и  гепарина).
3.4 Аналитическая чувствительность
Аналитическая чувствительность выражается минимальным количеством определяемого аналита, 
выявляемым с помощью данного набора. Предел детекции составляет 0,4 МЕ/мл (99% доверительный 
интервал). Эта величина была определена как концентрация аналита, отличающаяся от нулевого калибратора 
на три стандартных отклонения.
2 / 7


--- стр. 27 ---
3.5 Прецизионность
Прецизионность оценивалась на анализаторе производства RADIM посредством определения 
I  повторяемости и  воспроизводимости анализа (внутри- и  межаналитический коэффициенты вариации) на 
I  т р е х  сыворотках с различной концентрацией антител класса IgG против вируса краснухи.
Повторяемость (Внутрианалитический коэффициент вариации)
Сыворотка Среднее
значение
± S.D. C.V. Кол-во
репликатов
(МЕ/мл) %
а 24.37 ± 0.92 3.78 10
Ь 102.64 ± 4.83 4.70 10
с 200.3 ± 13.9 6.9 10
Воспроизводимость (Межаналитический коэффициент вариации)
Сыворотка Среднее
значение
± S.D. C.V. Кол-во
(МЕ/мл) % постановок
а 32.10 ± 3.83 11.90 10
Ь 94.26 ± 12.33 13.10 10
с 163.47 ± 22.47 13.70 10
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Для получения достоверных результатов необходимо соблюдать следующие правила;
Не смешивайте специфические реагенты разных серий набора (см. п.2.,2.1.). Не смешивайте их 
с реагентами других производителей.
Смешивание общих реагентов разных серий (см. п.2.2.2.) допускается.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их загрязнение.
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в чистой
посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для каждого образца или
реагента.
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и  
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к  неправильным 
результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к  неправильным результатам анализа.
В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и  обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует убедиться, 
что все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, спектрофотометр, термостат) 
проходит регулярную проверку и  поддерживается в исправном состоянии.
Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок или 
автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок может 
привести к  неверной интерпретации результатов анализа.
Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к  неверному определению оптической 
плотности образцов и  последующим неправильным результатам анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». Если 
температура инкубации отклоняется от 37±2°С, это может привести к  снижению чувствительности анализа 
и/или биологической денатурации образцов и  реагентов. Следует периодически проверять показания 
датчика температуры.
Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или образцов. 
Несоблюдение температурного режима хранения может привести к  биологической денатурации 
компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
-  Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная идентификация 
может привести к  ложным результатам и  постановке ошибочного клинического диагноза.
Чтобы исключить заражение персонала и загрязнение окружающей среды, следует  
соблюдать следующие правила:
При работе с потенциально инфекционным материалом и  во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
3 / 7


--- стр. 28 ---
Не разрешается пипетировать ртом.
Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и  курение в помещениях, 
предназначенных для работы с наборами.
Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и  Стоп-реагентом. Избегать 
попадания в глаза, на кожу и  слизистые. В случае контакта тщательно промыть пораженный участок проточной 
в о д о й .
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на присутствие 
HBsAg, антител к ВИЧ и  к вирусу гепатита С. Несмотря на полученные отрицательные результаты, 
следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не может гарантировать полное 
отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и  другие реагенты, содержащие сыворотку 
крови человека, следует считать потенциально инфекционными.
Следует избегать разбрызгивания реагентов и  образования аэрозолей. Места, на которые 
попал пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. Исполь­
зованный при этом протирочный материал следует считать потенциально инфицированным и  подвергнуть 
соответствующей обработке перед утилизацией.
- Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных азидов 
металлов в чугунных и  медных водопроводных трубах, после слива использованных реагентов следует 
промыть сток большим объемом проточной воды.
5. МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В НАБОР
5.1. Материалы и оборудование, необходимые при ручной постановке
Микропипетки, в том числе многоканальные, высокой точности (10-200 мкл, менее 3% ошибки) со 
сменными наконечниками.
Мерные цилиндры.
Дистиллированная вода.
Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
Автоматическое промывочное устройство для мифопланшетов или насос для удаления содержимого и з
лунок.
Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность 
раствора в лунках в диапазоне 0-3 ед. опт. плотн. при длинах волн 620,450 и  405нм.
Миллиметровая бумага.
5.2. Автоматическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа на 
автоматических анализаторах открытогом типа производства компании RADIM и/или SEAC.
В случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю необходимо 
удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для иммуно- 
ферментного анализа производства RADIM.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Данный набор может применяться для исследования образцов сыворотки и  плазмы крови человека. 
Сильно гемолизованные или липемичные образцы, а также присутствие в образцах фибрина могут 
оказывать влияние на результаты анализа. Перед постановкой анализа следует убедиться в том, что 
образцы прозрачные и  не содержат осадка. Допускается хранение образцов при температуре +2..,8‘’С в  
течение 1  недели. При необходимости более длительного хранения образцы следует заморозить при - 
20°С. Избегайте повторного оттаивания и  замораживания образцов.
Перед проведением анализа разведите образцы в соотношении 1:300 с помощью приготовленного 
Раствора для разведения (см. п.2.2.2.). Например; 10 мкл образца + 2990 мкл раствора для разведения.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА*
Д о в е д и т е  р е а ге н ты  д о  ко м н а т н о й  те м п е р а ту р ы  (+ 1 8 ...2 5 '‘С ).Т щ а т е л ь н о  п е р е м е ш а й т е  о б р а з ц ы  п е р е д  п р о в е д е н и е м  а н а л и з а .
7.1. Промаркируйте лунки для контролей и  исследуемых образцов. Оставьте 1  лунку для обнуления 
(Blank).
7.2. Внесите по 100 мкл контролей или калибраторов и  разведенных образцов в соответствующие
лунки.
Внимание: Контроли и  калибраторы готовы к  использованию и  не требуют разведения.
7.3. Внесите 100 мкл приготовленного Раствора для разведения в лунку для обнуления.
7.4. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и  инкубируйте его в течение 60±5 минут 
при 37±2°С
7.5. Удалите содержимое лунок, а затем промойте их 4 раза, внося при каждой промывке по 350 
мкл разведенного Промывочного раствора. Тщательно удалите жидкость из лунок.
4 / 7


--- стр. 29 ---
г
7.6. Внесите во все лунки по 100 мкл Конъюгата.
7.7. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и  инкубируйте его в течение 30±2 минут 
п р и  37±2°С.
7.8. Удалите содержимое лунок и  промойте планшет (см, п,7.5).
7.9. Внесите во все лунки по 100 мкл Раствора ТМБ.
7.10. Инкубируйте в течение 10 минут при 37±2“С или 15 минут при комнатной температуре  
+18...25°С), Избегайте попадания света на планшет.
7.11. Внесите во все лунки по 100 мкл Стоп-реагента.
*  При использовании автоматического анализатора производства RADIM и/или SEAC, действуйте в  
соответствии с его инструкцией.
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 6.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. Референсный 
)ильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо вычитать величину 
оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех остальных лунок. В случае, 
есл и  значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, считывание результатов проводят 
п р и  длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не позже, чем через 15 минут после остановки 
> е акц и и .
Примечание: при использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или SEAC 
д л я  планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять значения 
автоматически на 3 длинах волн; 450, 405 и  620 нм, что позволит расширить область кривой.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1 Качественный анализ
Определить оптическую плотность (ОП) Отрицательного Контроля и  Cut-off калибратора (15 МЕ/мл: 
пороговое значение). Присутствие или отсутствие антител класса IgG против вируса краснухи 
определяется путем сравнения ОП образца с ОП Cut-off калибратора.
Образцы с ОП ниже ОП Cutoff признают не реактивными (не содержащими антитела класса IgG против вируса 
фаснухи).
Образцы с ОП выше ОП Cut-off признают реактивными (содержащими антитела кпасса IgG против вируса 
краснухи).
Область значений ОП ± 10% от ОП калибратора является областью сомнительных значений. Если ОП 
образца попадает в эти пределы, результат считается сомнительным и  требует повторного тестирования для 
подтверждения.
9.2 Количественный анализ
Отрицательный контроль является первой точкой калибровочной кривой (О  МЕ/мл антител класса 
IgG против вируса краснухи).
Калибровочная кривая строится в линейных координатах, где по оси X откладывают концентрации 
каждого калибратора, а по оси У -  ОП каждого калибратора. Соответствующие концентрации исследуемых 
образцов (МЕ/мл) получаются путем интерполяции ОП образца на калибровочной кривой.
Образцы с концентрацией IgG антител менее 15МЕ/мл признают не реактивными.
Образцы с концентрацией IgG антител более ЗОМЕ/мл признают реактивными.
Образцы с концентрацией IgG антител в диапазоне от 15 до ЗОМЕ/мл признают сомнительными и  
требуют повторного тестирования для подтверждения.
Определение концентрации образцов
Например:
Описание ОП 
450 п т
Концентрация антител 
IgG против вируса 
краснухи
ОП 
405 п т
Калибратор 0 МЕ/мл 0.015 0.005
Калибратор 15 МЕ/мл 0.309 0.103
Калибратор 30 МЕ/мл 0.591 0.330
Калибратор 60 МЕ/мл 1.280 0.426
Калибратор 120 МЕ/мл 2.170 0.723
Калибратор 240 МЕ/мл 2.898 0.966
Образец 1.280 59 МЕ/мл 0,426
Внимание; Отрицательный контроль = Калибратор О  МЕ/мл
5/7


--- стр. 30 ---
Путем интерполяции на калибровочной кривой полученная концентрация антител класса IgG 
|п ро ти в вируса краснухи составляет 59 МЕ/мл.
Критерии достоверности
П реяод е чем начать обсчет результатов, убедитесь, что ОП контрольных точек соответствуют следующим 
зриям._____________________________________________________________________________________
•Описание Условие
Отрицательный контроль
1оП Кал 240 МЕ/мл / ОП Кал 15 МЕ/мл
10П Кал 15 МЕ/мл / ОП Кал О  МЕ/мл
< 0.200  
> 7.8  
> 13.8
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ.
9.3. Интерпретация результатов
Нереактивные образцы признают отрицательными по содержанию антител IgG класса против 
{вируса краснухи.
Реактивные и  сомнительные образцы признают положительными по содержанию антител IgG 
Jmacca против вируса краснухи.
Образцы сыворотки крови, полученные от одного пациента с промежутком времени, должны 
[сравниваться только при исследовании в одном и  том же анализе. В этом случае 60% увеличение ОП во 
[втором образце является значимым признаком недавней или развивающейся инфекции. В этом случае 
[образцы тестируются на присутствие специфических 1д М .
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
Х р а н и т ь  п р и  те м п е р а ту р е +2.. ,8'С.
I -  С р о к  го д н о с ти  р е а ге н то в  у к а з а н  н а  этике тках ф л а к о н о в .В с кр ы т ы е  р е а ге н ты  с т а б и л ь н ы  п р и  те м п е р а ту р е  + 2 .,.8 °С  в  т е ч е н и е  2  м е с я ц е в .
11. ОГРАНИЧЕНИЯ В ПРИМЕНЕНИИ АНАЛИЗА
Наличие антител класса IgG к  вирусу краснухи в любых концентрациях не исключает текущей 
инфекции. Таким образом, определение специфических антител класса 1д М  является основным методом 
для ранней диагностики острой инфекции. В случае заболевания раннее вмешательство значительно 
уменьшает риск. Однако результаты анализа должны интерпретироваться с осторожностью и  
подтверждаться клиническими данными и  дальнейшей диагностикой.
СХЕМА АНАЛИЗА
Предварительное разведение образцов: 1:300
_ Лунки 
Реагенты ^
Blank Калибраторы и  
контроли
Образцы
Калибраторы и  контроли NEC |CAL — 100 мкл
Образцы — — 100 мкл
Раствор для разведения |DIL 100 мкл — -----------
Инкубация: 37±2°С, 60±5 мин. 
Промывка: 4 х 350 мкл.
Конъюгат ICONJ 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубация: 37±2°С, 30±2 мин. 
Промывка: 4 х 350 мкл
Раствор ТМБ тмв 100 мкл 100 мкл 1  100 мкл
Инкубация; вариант А: 37±2°С, 10 мин; вариант В: комнатная температура 15 мин.
Стоп-реагент |STOP 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Считывание: 450-405 нм.
6/7


--- стр. 32 ---


--- стр. 33 ---
«УТВЕРЖДАЮ—^ ,  
Г енеральны й^^ектор
ООО «Компат!^ Алкор'^йЦ»  
Швырев М Щ
\ у
У/ » ^(^4:^фэп-.рл,../' / 20.11 г
V  1 ., /  JL td . /
НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ  
АВИДНОСТИ АНТИТЕЛ КЛАССА IgG ПРОТИВ ВИРУСА КРАСНУХИ  
В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА  
Краснуха lgG-авидность
Т о л ь к о  д л я  in  v itro  д и а гн о с т и ки
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Вирус краснухи представляет собой РНК-содержащий вирус сферической формы, 60 нм в  
диаметре. Краснуха как заболевание обычно протекает в легкой форме, оставляя пациента 
иммунизированным к  этому вирусу. Однако, когда первичное заражение происходит во время 
беременности, особенно в первый триместр, это может оказывать тератогенное влияние на плод. 
Следствием воздействия вируса на плод могут бьп"ь кардио-васкулярные нарушения, глухота, 
хориоретиниты, задержка роста и  развития нервной системы.
Краснуха менее заразна, чем корь, поэтому значительное количество женщин репродуктивного 
возраста не успевает перенести эту болезнь к  моменту беременности. Из них 10-20% не вакцинированы, 
а значит, восприимчивы к  вирусу краснухи. По этой причине диагностика острой формы краснухи у 
беременных женщин особенно важна. Обычно для этой цели проводят определение 1 д М . Так как 1 д М  
персистируют (часто длительно) либо присутствуют в случаях бессимптомного течения инфекции (которое не 
представляет опасности для плода), то выявить острую фазу заболевания путем исследования только 
одного образца крови, взятого у пациента, может быть достаточно сложно. Для выявления первичной 
инфекции особенно полезным оказывается определение авидности специфических IgG. Первичный 
иммунный ответ на инфекцию характеризуется IgG-антителами с низкой авидностью, которые 
связываются со специфическим антигенным сайтом, но легко диссоциируют.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
Принцип работы данного набора основан на твердофазном иммуноферментном анализе 
(ИФА), в котором сыворотки пациентов, внесенные в лунки микропланшета в дубликатах, реагируют с 
антигеном вируса краснухи, иммобилизованным на внутренней поверхности лунок. После первой 
инкубации планшет промывают, а парные лунки инкубируют с разными буферными растворами, один 
из которых содержит мочевину. Мочевина вызывает диссоциацию ранее образовавшегося комплекса 
антиген вируса краснухи - антитело. Степень диссоциации зависит от авидности антител.
После следующего цикла промывки комплекс «антиген вируса краснухи-антитело» вступают в  
реакцию с антителами против IgG человека, меченными пероксидазой хрена, которая, в свою 
очередь, реагирует с раствором ТМБ. Интенсивность окрашивания раствора измеряется на 
спектрофотометре при длине волны 450 нм или 405 нм. Процент авидности вычисляют как 
отношение между оптическими плотностями в парных лунках.
2.2. СОСТАВ НАБОРА
Реагент Количество Состояние
Планшет
МТР|
1  X  96 лунок Готов к использованию 
Ready for use
Промывочный раствор 
^Л/ASH
1  X  50 м л Концентрат
Concentrate
Раствор для разведения образцов 
DIL
1  X  20 м л Концентрат
Concentrate
Контроль Низкоавидный 
CTR ВА
1  X  2 мл Лиофилизован
Lyophilized
Контроль Высокоавидный 
IC TF^ АА
1  X  2 м л Лиофилизован
Lyophilized
Реагент для диссоциации 1  X  10 м л Готов к  использованию
1 / 7


--- стр. 34 ---
fgissT
Конъюгат
Раствор ТМБ
гм в
Стоп реагент
1  X 14 мл
1  X  14 мл
1  X 14 мл
Ready for use
Готов к использованию 
Ready for use
Готов к использованию 
Ready for use
Готов к использованию 
Ready for use
К о л и ч е с т в о  р е а ге н то в  р а с с ч и т а н о  н а 96 л у н о к .
2.2.1. Специфические реагенты
• Иммуносорбент -  планшет (МТР) / Coated microplate: Планшет из 12 стрипов по 8 лунок: 
внутренняя поверхность лунок покрыта очищенным и  инактивированным антигеном вируса краснухи. 
Оставшиеся неиспользованными стрипы поместить в пластиковый пакет (прилагается) и  плотно 
закрыть; хранить при температуре +2...8°С,
• Низкоавидный контроль (CTR ВА) / Low avidity control: 1  флакон. Лиофилизованный 
препарат красного цвета. Изготовлен на основе сыворотки крови, содержащей низкоавидные IgG 
человека к  вирусу краснухи. Консервант; NaNs (<0.1%). Перед использованием восстановите 
содержимое флакона в 2 мл дистиллированной воды. Восстановленный реагент хранить болев 
течении 2 месяцев при температуре +2...8°С. Для длительного хранения - заморозить при -20°С.
• Высокоавидный контроль (CTR АА) / High avidity control: 1  флакон. Лиофилизованный 
препарат синего цвета. Изготовлен на основе сыворотки крови, содержит высокоавидные 
человеческие IgG к вирусу краснухи. Консервант; МаМз(< 0.1%). Перед использованием восстановите 
содержимое флакона в 2 мл дистиллированной воды. Восстановленный реагент хранить более 
течении 2 месяцев при температуре +2...8°С. Для длительного хранения - заморозить при -20°С.
• Реагент для диссоциации (D1SS) / Dissociating reagent: 1  флакон (10 мл). Содержит 
буферный раствор с мочевиной. Готов к использованию.
• Конъюгат (CONJ) / Conjugate: 1  флакон (14 мл). Раствор на основе сыворотки крови со 
стабилизаторами, содержащий мышиные моноклональные антитела против IgG человека, 
конъюгированные с пероксидазой хрена (HRPO). Готов к использованию. Раствор розового цвета. 
Консервант: неомицин.
2.2.2. Реагенты, общие для npoflVKTOB линий «To.R.C.H. -  S.T.D.» производства компании  
RADIM
• Промывочный раствор 20х (WASH) / Washing Solution (concentrated): 1  флакон (50 мл). 
Содержит фосфатный буферный раствор и  Твин 20, Консервант: тимеросал (<0.05%). Перед 
использованием разведите необходимое количество концентрата в соотношении 1:20 
дистиллированной водой. В случае образования нерастворимых кристаллов поместите раствор в 
термостат (+37°С) на несколько минут. Приготовленный промывочный раствор хранить 30 суток при 
+2...8“С.
• Раствор для разведения образцов 20х (DIL) 
I Sample Diluent (concentrated): 1  флакон 
(20 мл). Раствор на основе сыворотки крови со стабилизаторами. Жидкость красного цвета. 
Консервант: М аМ з (<0.1% ). Непосредственно перед применением разведите концентрат в  
соотношении 1:20 подготовленным к  использованию промывочным раствором (см выше). 
Приготовленный раствор для разведения хранить 30 суток при +2...8°С.
• Раствор ТМБ (ТМВ): 1  флакон (14 мл). Раствор тетраметилбензидина в цитратно- 
фосфатном буфере, содержащем DMSO и  Н 2О2.  Готов к  использованию.
• Стоп реагент (STOP) / Blocking Reagent: 1  флакон (14 мл), 1Н HCI. Готов к  использованию.
• Бумага для заклеивания планшета (СРА) I Adhesive plate sealers.
• Пластиковый пакет.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Диагностическая специфичность
Диагностическую специфичность данного метода оценивали на группе из 100 образцов от 
пациентов с перенесенной ранее или повторной инфекцией. Диагностическая специфичность 
составляет 100%.
3.2. Диагностическая чувствительность
Диагностическую чувствительность данного метода оценивали на группе из 56 образцов с 
первичной инфекцией. Диагностическая чувствительность составляет 87,8%.
3.3. Аналитическая специфичность
Аналитическая специфичность определяется, как способность анализа точно выявлять 
специфический аналит в присутствии интерферирующих факторов в матриксе образца. Контрольные 
исследования показали, что характеристики анализа не изменяются под действием антикоагулянтов 
(ЭДТА и  гепарин).
2/7


--- стр. 35 ---
3.4. Прецизионность
Прецизионность оценивалась на анализаторе производства RADIM посредством определения 
повторяемости и  воспроизводимости анализа (внутри- и  межаналитический коэффициент вариации) 
на трех сыворотках с разными % авидности.
Повторяемость (Внутрианалитический коэффициент вариации)
Сыворотка Авидность, % Коэффициент
вариации,
%
Количество
репликатовСреднее значение ± Стандартное
отклонение
а 96 ± 2 2.5 10
Ь 72 ± 4 5.2 10
с 17.1 ± 1.3 7.5 10
Воспроизводимость (Межаналитический коэффициент вариации)
Сыворотка Авидность, % C.V.
%
Количество
постановокСреднее
значение
± Стандартное
отклонение
а 95.5 ± 4.7 4.9 10
Ь 74.9 ± 9.94 13.36 10
с 17.53 ± 2.17 12.36 10
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Для получения достоверных результатов необходимо соблюдать следующие  
правила:
Не смешивайте специфические реагенты набора разных серий (см. п.2.2.1). Не 
смешивайте их с реагентами других производителей.
Смешивание общих реагентов разных серий (см. п.2.2.2) допускается.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их 
загрязнение.
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в 
чистой посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для каж дого 
образца или реагента.
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного 
интервала и  температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к  
неправильным результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к  неправильным результатам 
анализа.
В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и  обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует 
убедиться, что все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, 
спектрофотометр, термостат) проходит регулярную проверку и  поддерживается в исправном 
состоянии.
Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из 
лунок или автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка 
лунок может привести к  неверной интерпретации результатов анализа.
Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к  неверному определению 
оптической плотности образцов и  последующим неправильным результам анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». 
Если температура инкубации отклоняется от 37±2°С, это может привести к  снижению 
чувствительности анализа и/или биологической денатурации образцов и  реагентов. Следует 
периодически проверять показания датчика температуры.
Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или 
образцов. Несоблюдение температурного режима хранения может привести к  биологической 
денатурации компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная 
идентификация может привести к  ложным результатам и  постановке ошибочного клинического 
диагноза.
Чтобы исключить заражение персонала и загрязнение окружающей среды, следует  
соблюдать следующие правила:
3/7


--- стр. 36 ---
4
•?
При работе с потенциально инфекционным материалом и  во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
Не разрешается пипетировать ртом.
Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и  курение в  
помещениях, предназначенных для работы с наборами.
Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и  Стоп-реагентом. 
Избегать попадания в глаза, на кожу и  слизистые. В случае контакта тщательно промыть пораженный 
участок проточной водой.
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на 
присутствие HBsAg, антител к ВИЧ и  к вирусу гепатита С. Несмотря на то что были полученны 
отрицательные результаты, следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не 
может гарантировать полное отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и  другие 
реагенты, содержащие сыворотку крови человека, следует считать потенциально инфекционными.
Следует избегать разбрызгивания реагентов и  образования аэрозолей. Места, на 
которые попал пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита 
натрия. Использованный при этом протирочный материал следует считать потенциально 
инфицированным и  подвергнуть соответствующей обработке перед утилизацией.
Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление 
взрывоопасных азидов металлов в чугунных и  медных водопроводных трубах, после слива 
использованных реагентов следует промыть сток большим объемом проточной воды.
5.1. МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В НАБОР
5.1. Ручная постановка
Микропипетки, в том числе многоканальные, высокой точности (10-200 мкл, менее 3% 
ошибки) со сменными наконечниками.
Градуированный цилиндр для разведения реагентов.
Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления 
содержимого из лунок.
Дистиллированная или деионизованная вода.
Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую 
плотность раствора в лунках в диапазоне 0-3 ед. опт. плотн. при длинах волн 620, 450 и  405нм.
5.2. Автоматическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа
на автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC.
В случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю
необходимо удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы
реагентов для иммуноферментного анализа производства RADIM.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Набор может применяться для исследования образцов сыворотки и  плазмы крови человека. 
Сильно гемолизованные или липемичные образцымогут изменять результаты анализа. Присутствие 
фибрина также может оказывать влияние на результаты анализа. Перед постановкой анализа 
следует убедиться в том, что образцы прозрачные и  не содержат осадка. Храните образцы при 
температуре +2...8°С в течение 1-2 дней. При необходимости хранения в течение более длительного 
времени образцы следует заморозить при -20°С. Избегайте повторного оттаивания и  замораживания 
образцов.
Перед проведением анализа разведите образцы в отношение 1;300 с помощью 
приготовленного Раствора для разведения (см. п.2.2.2). Например: 10 мкл образца + 2990 мкл 
Раствора для разведения.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА*
Д о в е д и те  р е а ге н ты  д о  ко м н а т н о й  те м п е р а ту р ы ('+f8...25°Cj.
Т щ а т е л ь н о  п е р е м е ш а й т е  о б р а з ц ы  п е р е д  п р о в е д е н и е м  а н а л и з а .
7.1. Составьте схему нанесения образцов на планшет. Отметьте по 2 лунки для: обнуления 
спектрофотометра (Blank), низкоавидного контроля, высокоавидного контроля и  каждого из 
образцов.
7.2. Внесите по 100 мкл Низкоавидного контроля в лунки С1 и  D1; по 100 мкл Высокоавидного 
контроля в лунки Е1 и  F1; по 100 мкл предварительно разведенных образцов в дубликатах -  во все 
остальные лунки.
7.3. Закройте планшет клейкой пленкой (входит в состав набора) и  инкубируйте его в течение 
60±5 минут при 37±2°С.
4 / 7


--- стр. 37 ---
7.4. Удалите содержимое лунок и  промойте лунки 4 раза, внося при каждой промывке по 350 
мкл предварительно разведенного Промывочного раствора в каждую лунку. Тщательно удалите 
жидкость из лунок.
7.5. Внесите по 100 мкл Раствора для разведения в нечетные лунки (А1, С1, Е1, G1 и  т.д.) и  по
100 мл Реагента для диссоциации в четные лунки (В1,  D1,  F1,  Н1 и  т. д.).
7.6. Зафойте планшет клейкой пленкой (входит в состав набора) и  инкубируйте его в течение 30±2 
минут при 37±2°С.
7.7. Удалите содержимое лунок. Промойте планшет (см. п. 7.4).
7.8. Внесите по 100 мкл Конъюгата в каждую лунку
7.9. Закройте планшет клейкой пленкой (входит в состав набора) и  инкубируйте его в течение 30±2 
минут при 37±2°С.
7.10. Удалите содержимое лунок и  промойте планшет (см. п.7.4).
7.11. Внесите по 100 мкл Раствора ТМБ во все лунки.
7.12. Инкубируйте в течение 10 минут при 37±2°С. Избегайте'попадания света на планшет.
7.13. Внесите по 100 мкл Стоп реагента во все лунки.
*  При использовании автоматического анализатора производства RADIM и/или SEAC, 
действуйте в соответствии с инструкцией по эксплуатации анализатора.
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 6
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. 
Референсный фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо 
^  вычитать величину оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех 
остальных лунок. В случае, если значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, 
считывание результатов проводят при длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не 
позже, чем через 15 минут после остановки реакции.
Примечание; при использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или 
SEAC для планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять 
значения автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и  620 нм, что позволит расширить область 
кривой.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1.Вычтите среднее значение оптической плотности (ОП) лунок А1, В1 из значений ОП других 
лунок.
Убедитесь, что ОП каждого образца, инкубированного с Раствором для разведения образцов, >
0,300.. Если это так, можно выполнить расчеты. Если ОП образца < 0,300 ,  это свидетельствует, что 
образец не содержит достаточную концентрацию антител для определения авидности IgG (пациент 
либо не имеет иммунитета к  инфекции вирусом краснухи, либо находится в периоде, когда 
иммунный ответ еще не сформирован).
Для каждого образца и  контроля рассчитайте процентное отношение ОП лунки, 
инкубированной с Реагентом для диссоциации и  ОП лунки, инкубированной с Раствором для 
_ разведения.
ОП с Реагентом для диссоциации
------------------------------------------------ X  100 = % Авидности
ОП с Раствором для разведения
Если ОП образца при длине волны 450 нм >3,000 в любой из лунок, следует измерить ОП повторно 
при длине волны 405 нм. Процент авидности рассчитывается по формуле (см выше) на основании 
ОП при 405 нм.
9.2. Пример расчета
Образец О П с
Раств. для разведения
ОП с
Реаг. для диссоциации
% Авидности
Низкоавидный контроль 0.953 0.086 9.0
Высокоавидный контроль 1.470 1.256 85.4
Образец 0.610 0.105 17.2
9.3. Критерии достоверности
ОП, измеренная при 450 нм, в лунках с высокоавидным и  низкоавидным контролями, 
инкубированными с Раствором для разведения, должна быть > 0,400
Процент авидности должен быть ниже 50% для Низкоавидного контроля и  выше 60% для 
Вьюокоавидного контроля. В любом случае, результаты анализа должны подтверждаться 
клиническими наблюдениями и  результатами других диагностических тестов.
Ui
5/7


--- стр. 38 ---
9.4. Интерпретация результатов
%  авидности > 60% = 
%  авидности 50-60% =  
%  авидности < 50% =
IgG к  вирусу краснухи с высокой авидностью
IgG к  вирусу краснухи со средней авидностью (т е. «серая зона»)
IgG к  вирусу краснухи с низкой авидностью ____________________
1  10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
t
-  Х р а н и т ь  п р и  те м п е р а ту р е +2,. .8°С,
С р о к  го д н о с ти  р е а ге н то в  у к а з а н  н а  этике тках ф л а к о н о в .В с кр ы т ы е  р е а ге н ты  с т а б и л ь н ы  п р и  те м п е р а ту р е  + 2 .,.8 °С  в  те ч е н и е  2  м е с я ц е в .
11. ОГРАНИЧЕНИЯ В ПРИМЕНЕНИИ АНАЛИЗА
Наличие высокоавидных антител не исключает возможность недавнего инфицирования. Тем не 
менее, учитывая высокую специфичность данного анализа, положительный результат позволяет с 
высокой степенью достоверности предполагать, что инфицирование произошло в предшествующие 
3 месяца.
СХЕМА АНАЛИЗА
Предварительное разведение образцов; 1;300
Лунки
Р е а ге н т^ '^ '^ ^ --^
Д 1 В1 С1 D1 Е1 F1 G1 Н 1
Низкоавидный 
контроль CTR |ВА
— — 100 мкл 100 мкл — — -------- —
Высокоавидный 
контроль CTR 1А А
— — — — 100 мкл 100 мкл -------- —
Образец — — — — — 100 мкл 100 мкл
Инкубация; 37±2°С, 60±5 мин
Раствор для 
разведения DIL
100 мкл --- 100 мкл 100 мкл 100 мкл —
Реагент д л я_____ --- 100 мкл --- 100 мкл --- 100 мкл — 100 мкл
диссоциации! DISS|
Инкубация; 37±2°С, 30±2 мин.
Конъюгат CONJ 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубация: 37±2°С, 30±2 мин. 
Промывка; 4 х 350 мкл.
Раствор ТМБ| ТМВ| 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубация; А: 37±2°С, 10 мин.
Стоп реагент 
STOP
100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Считывание при длине волны 450 и  405 нм.
L
6 / 7


--- стр. 40 ---
П рош ито, щз0|умерован<?', скреплено П 
печатью  ) л и ст^|^
Ш  V . « o 2 S ^  У ;,
Генеральной, директор у' S .
О О О  <<КомЙакй<1‘А л Й6^"^о > >
ч  ; :  b‘^ 1 f f f  mBbipeBiT te T 'V


--- стр. 41 ---
«УTBJPPЖJ^Ю 
Генеральный дире1^ор
■  ■ 9 / 1  'Ов,., \о  ■
ООО «K9мл^lния Алко^Бир»
о го
2011 г
НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ  
ИММУНОГЛОБУЛИНОВ М К ВИРУСУ КРАСНУХИ 
В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА  
Краснуха 1дМ
Т о л ь к о  д л я  in  v itro  д и а гн о с ти ки
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Вирус краснухи представляет собой РНК-содержащий вирус сферической формы, 60 нм в  
диаметре, принадлежит к  семейству T o g a v irid a e . Заболевание, вызванное вирусом краснухи, обычно 
протекает в легкой форме, оставляя пациента иммунизированным к  этому вирусу. Однако, когда 
первичное заражение происходит во время беременности, это может оказывать тератогенное влияние 
на плод, особенно в первый триместр беременности. Кардио-васкулярные нарушения, глухота, 
хориоретиниты, задержка роста и  развития нервной системы могут быть следствием воздействия 
вируса на плод. Краснуха менее заразна, чем корь, поэтому значительное количество женщин 
репродуктивного возраста не успевают перенести эту болезнь к моменту беременности. Из них 10-20% 
не вакцинированы, следовательно, восприимчивы к  вирусу краснухи.
Диагноз «краснуха» может быть поставлен следующим образом:
по увеличению количества антител класса IgG к вирусу краснухи в двух тестируемых образцах 
крови пациента, взятых с промежутком времени;
определением присутствия антител класса 1 д М  в образце крови.
Анализ с целью определения антител класса 1 д М  к  вирусу краснухи является наиболее 
распространенным методом для постановки диагноза в острой стадии заболевания.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
Принцип работы данного набора основан на твердофазном иммуноферментном анализе (ИФА), 
вариант «capture». В качестве ферментной метки в наборе применяется пероксидаза хрена. В 
течение первой инкубации антитела класса 1 д М  против вируса краснухи (если они есть в образце) 
улавливаются антителами против ц-цепей иммуноглобулинов М  человека, адсорбированными на 
твердой фазе (в лунках планшета). С помощью промывки удаляется несвязавшийся материал. В  
течение двух следующих инкубаций комплекс «антиген вируса краснухи - биотинилированные 
антитела» сначала реагирует со связанными антителами 1д М  против вируса краснухи, а 
стрептавидин, меченный пероксидазой хрена, взаимодействует с биотином. После цикла промывок 
в лунки добавляется раствор ТМБ, что приводит к  развитию окраски под воздействием фермента. 
Реакция останавливается добавлением Стоп-реагента (HCI). Интенсивность окрашивания раствора 
измеряется на спектрофотометре при длине волны 450 нм или 405 нм. Содержание антител кпасса 
1 д М  в образцах и  контролях прямо пропорционально измеренной оптической плотности в лунках,
2.2. СОСТАВ НАБОРА
Реагент Количество Состояние
Планшет
|мтИ
1  X  96 лунок Готов к  использованию 
Ready for use
Промывочный раствор 
WASH
1  X  50 мл Концентрат
Cone,
Раствор для разведения 
DIL
1  X 100 мл Готов к использованию 
Ready for use
Отрицательный контроль 1  X  2 мл Готов к  использованию 
Ready for use
Положительный контроль
Ip o sI
1  X  2 мл Готов к использованию 
Ready for use


--- стр. 42 ---
Cut-off контроль
ш.
1  X 2,5 мл Готов к  использованию 
Ready for use
Антиген 7 X  2,5 мл Лиофилизован
Конъюгат/биотин 
^ONJ/BIO
1  X 19 мл Готов к  использованию 
Ready for use
Конъюгат HRPO 
^ONJ
1  X  14 мл Готов к  использованию 
Ready for use
Раствор ТМБ 1х 14 мл Готов к  использованию 
Ready for use
Стоп-реагент 1  X  14 мл Готов к  использованию 
Ready for use
К о л и ч е с т в о  р е а ге н то в  р а с с ч и т а н о  н а  9 6  л у н о к.
2.2.1. Специфические реагенты
• Иммуносорбент -  планшет (МТР) / Coated microplates: лунки стрипов планшета покрыты 
антителами против ц-цепей иммуноглобулинов М  человека. Неиспользованные стрипы 
хранить при температуре +2...8°С в плотно закрытом пластиковом пакете (прилагается).
• Положительный контроль (POS) / Positive Control: 1  флакон (2 мл). Раствор на основе 
сыворотки крови, содержит антитела класса 1 д М  к  вирусу краснухи. Готов к  использованию. 
Консервант: М аМ з (< 0,1%).
• Cut-off контроль (С/О) / Cut-off Control: 1  флакон (2,5 мл), Раствор на основе сыворотки 
крови, содержит антитела класса 1д М  к  вирусу краснухи. Готов к  использованию. Раствор 
голубого цвета. Консервант: М аМ з (< 0.1%).
• Антиген вируса краснухи (Ад) / Rubella antigen: 7 флаконов, содержат инактивированный 
антиген вируса краснухи. Перед использованием восстановите содержимое каждого флакона с 
помоидью 2,5 мл раствора конъюгат/биотин. Хранить восстановленный реагент не более 5 
суток при +2...8“С или 1  месяц замороженным при -20°С. Не допускается повторное 
замораживание.
• Конъюгат/биотин (CONJ/BIO) / Biotinylated Conjugate: 1  флакон (19 мл). Раствор на основе 
сыворотки крови со стабилизаторами, содержащий моноклональные антитела против вируса 
краснухи, конъюгированные с биотином. Готов к  использованию. Консервант: неомицин.
• Конъюгат (CONJ) 
I Enzyme Conjugate: 1  флакон (14 мл). Раствор на основе сыворотки крови 
со стабилизаторами, содержащий стрептавидин, конъюгированный с пероксидазой хрена 
(HRPO). Готов к использованию. Консервант: неомицин.
2.2.2. Реагенты, общие хшя п р о д у к т о в  линий «To.R.C.H. -  S.T.D.» производства компании
RADIM
• Промывочный раствор 20х (WASH) / W ashing Solution (concentrated): 1  флакон (50 мл). 
Фосфатный буферный раствор, содержащий Твин 20. Консервант: Тимеросал (< 0.05%), Перед 
использованием разведите необходимое количество концентрата дистиллированной водой в  
соотношении 1:20. В случае образования нерастворимых кристаллов поместите раствор в  
термостат (+37°С) на несколько минут. Приготовленный промывочный раствор хранить не 
более 30 суток при +2... 8“С.
• Раствор для разведения (DIL) / Sample Diluent: 1  флакон (100 мл). Раствор на основе 
сыворотки крови со стабилизаторами. Жидкость красного цвета. Консервант: М аМ з (< 0,1%). 
Готов к  использованию.
• Отрицательный контроль (NEG) I Negative Control: 1  флакон (2 мл). Раствор на основе 
сыворотки крови, не содержит антител класса 1д М  к  вирусу краснухи. Готов к  использованию. 
Раствор красного цвета. Консервант: М аМ з (< 0.1%),
• Раствор ТМБ (ТМБ): 1  флакон (14 мл). Раствор тетраметилбензидина в цитратно-фосфатном 
буфере, содержащем DMSO и  Н 2О2.  Готов к  использованию,
• Стоп-реагент (STOP) / Blocking Reagent: 1  флакон (14 мл). 1Н HCI, Готов к использованию.
• Бумага для заклеивания планшета (СРА) / Adhesive plate sealers.
• Пластиковый пакет.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Диагностическая специфичность


--- стр. 43 ---
Диагностическая специфичность данного метода оценивалась на группе из 253 образцов, 
отрицательных по содержанию антител 1дМ класса против вируса краснухи. Специфичность 
составляет 100%.
3.2. Диагностическая чувствител ьн ость
Диагностическая чувствительность данного метода оценивалась на группе из 112 образцов, 
полученных от пациентов с острой краснушной инфекцией. Чувствительность составляет 96,4%.
3.3. Аналитическая спец иф ичность
Аналитическая специфичность определяется как способность анализа точно выявлять 
специфический аналит в присутствии интерферирующих факторов в матриксе образца. 
Контрольные исследования показали, что характеристики анализа не изменяются под действием 
антикоагулянтов (соли ЭДТА и гепарина).
3.4. П рецизионность
Прецизионность оценивалась на анализаторе производства RADIM посредством определения 
повторяемости и воспроизводимости анализа (внутри- и межаналитический коэффициент 
вариации) на трех сыворотках с различной концентрацией антител кпасса 1дМ против вируса 
краснухи.
П овторяем ость (Внутрианалитический коэф ф ициент вариации)
Сыворотка Среднее значение ± 
Индекс
S.D. C.V.
%
Кол-во
репликатов
а 0,95 ± 0,06 6.2 10
Ь 2,98 ± 0,13 4.25 10
с 5,97 ± 0,19 3.26 10
В осп р ои звод и м ость (М ежаналитический коэф ф ициент вариации)
Сыворотка Среднее значение S.D.
Индекс
C.V.
%
Кол-во
постановок
а
Ь
с
6,80
4,71
1,47
±
±
±
0,65
0,44
0,21
9,50
9,33
14,03
10
10
10
4. М Е Р Ы  П Р Е Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И
Для получения д остовер н ы х результатов необходимо со б л ю д ать следую щ ие правила:
-  Не смешивайте специфические реагенты набора разных серий (см. п.2.2.1). Не смешивайте их 
с реагентами других производителей.
Смешивание общих реагентов разных серий (см. п.2.2.2) допускается.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их загрязнение.
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в чистой 
посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для каждого образца или 
реагента.
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и 
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам 
анализа.
В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и обращать особое внимание на точность внесения реагентов, Следует 
убедиться, что все применяемое оборудование микропипетки, промывочное устройство, 
спектрофотометр, термостат) проходит регулярную проверку и поддерживается в исправном 
состоянии.
-  Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок или 
автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок может 
привести к неверной интерпретации результатов анализа.
Убедитесь в исправности спеетрофотометра. Использование неоткалиброванного 
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению 
оптической плотности образцов и последующим неверным результатам анализа.


--- стр. 44 ---
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». 
Если температура инкубации отклоняется от 37±2Х , это может привести к снижению 
чувствительности анализа и/или биологической денатурации образцов и реагентов. Следует 
периодически проверять показания датчика температуры.
Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или 
образцов. Несоблюдение температурного режима хранения может привести к биологической 
денатурации компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная 
идентификация может привести к ложным результатам и постановке ошибочного клинического 
диагноза.
Ч тобы  исклю чить заражение персонала и загрязнение окружающ ей среды, следует  
соблю д ать следую щ ие правила:
При работе с потенциально инфекционным материалом и во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
Не разрешается пипетировать ртом.
Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и курение в помещениях, 
предназначенных для работы с наборами.
Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и Стоп-реагентом. Избегать 
попадания в глаза, на кожу и слизистые. В случае контакта тщательно промыть пораженный участок 
проточной водой.
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на 
присутствие HBsAg, антител к ВИЧ и к вирусу гепатита С. Несмотря на полученные отрицательные 
результаты, следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не может 
гарантировать полное отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и другие 
реагенты, содержащие сыворотку крови человека, следует считать потенциально инфекционными.
Следует избегать разбрызгивания реагентов и образования аэрозолей. Места, на которые 
попал пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. 
Использованный при этом протирочный материал следует считать потенциально 
инфицированным и подвергнуть соответствующей обработке перед утилизацией.
Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных 
азидов металлов в чугунных и медных водопроводных трубах, после слива использованных 
реагентов следует промыть сток большим объемом проточной воды.
5. М А Т ЕР И А Л Ы  И О Б О Р У Д О В А Н И Е , НЕ В Х О Д Я Щ И Е  В Н А Б О Р
5.1. М атериалы  и оборудование, необходим ы е при ручной постановке анализа
-  Микропипетки, в том числе многоканальные, вьюокой точности (10-200 мкл, менее 3% ошибки).
-  Градуированные цилиндры для разведения реагентов.
-  Дистиллированная вода.
-  Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
-  Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления содержимого 
из лунок.
-  Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность 
раствора в лунках в диапазоне 0-3 ед. опт. плотн. при длинах волн 620,450 и 405нм.
-  Миллиметровая бумага.
5.2. Автом атическое проведение анализа
-  Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа 
на автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC.
-  В случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю необходимо 
удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для 
иммуноферментного анализа производства RADIM.
6. А Н А Л И З И Р У Е М Ы Е  О Б Р А З Ц Ы
Данный набор может применяться для исследования образцов сыворотки и плазмы крови 
человека. Сильно гемолизованные или липемичные образцы, а также присутствие в образцах 
фибрина могут оказывать влияние на результаты анализа. Перед постановкой анализа следует 
убедиться в том, что образцы прозрачные и не содержат осадка. Допускается хранение образцов 
при температуре +2...8°С в течение 1  недели. Для хранения в течение более длительного времени 
образцы следует заморозить при -20°С. Избегайте повторного оттаивания и замораживания 
образцов.
Перед проведением анализа разведите образцы в соотношении 1;100 Раствором для разведения 
(см. п. 2.2.2.). Например: 10 мкл образца + 990 мкп Раствора для разведения.


--- стр. 45 ---
7. П Р О В Е Д Е Н И Е  А Н А Л И ЗА *
-  Доведите реагенты до комнатной температуры (+18...25°С).
Тщательно перемешайте образцы перед проведением анализа.
7.1. Промаркируйте лунки для контролей и исследуемых образцов. Контроли вносятся в 
дубликатах, образцы - в монопликатах. Оставьте 1  лунку для обнуления (Blank).
7.2. Внесите по 100 мкл Контролей и разведенных образцов в соответствующие лунки.
Внимание: Контроли готовы к использованию и не требуют разведения
7.3. Внесите 100 мкл Раствора для разведения в лунку для обнуления.
7.4. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 60±5 
минут при 37±2°С.
7.5. Удалите содержимое лунок и промойте их 4 раза, внося при каждой промывке по 350 мкл 
разведенного Промывочного раствора. Тщательно удалите жидкость из лунок.
7.6. Внесите во все лунки по 100 мкл Антигена, восстановленного раствором Конъюгат/биотин,
7.7. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 60+5 
минут при 37±2°С
7.8. Удалите содержимое лунок и промойте планшет (см. п. 7.5).
7.9. Внесите по 100 мкл Конъюгата (стрептавидин-HRP) во все лунки.
7.10. Закройте планшет кпейкой бумагой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 
30±2 минут при 37±2“С
7.11. Удалите содержимое лунок и промойте планшет (см. п. 7.5).
7.12. Внесите во все лунки по 100 мкл Раствора ТМБ.
7.13. Инкубируйте в течение 10 минут при 37±2°С или 15 минут при комнатной температуре  
(+18..,25°С). Избегайте попадания света на планшет.
7.14. Внесите во все лунки по 100 мкл Стоп-реагента.
* При использовании автоматического анализатора производства RADIM и/или SEAC, действуйте в 
соответствии с его инструкцией.
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 6
8. Р Е Г И С Т Р А Ц И Я  Р Е З У Л Ь Т А Т О В
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм, 
Референсный фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо 
вычитать величину оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей 
всех остальных лунок. В случае, если значение ОП превышает предел линейности 
спектрофотометра, считывание результатов проводят при длине волны 405 нм. Измерение 
должно проводиться не позже, чем через 15 минут после остановки реакции.
Примечание: при использовании автоматических анализаторов производства RADIM 
и/или SEAC для планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен 
измерять значения автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм, что позволит 
расширить область кривой.
9. УЧЕТ Р Е З У Л Ь Т А Т О В  *
Определить оптическую плотность (ОП) отрицательного контроля, положительного контроля и 
Cut-off контроля (пороговое значение). Присутствие или отсутствие антител класса 1дМ против 
вируса краснухи определяется путем сравнения ОП образца с ОП Cut-off контроля (пороговое 
значение).
Образцы с ОП ниже ОП Cut-off контроля признают не реактивными (не содержащими 
антитела класса 1дМ против вируса краснухи).
Образцы с ОП выше ОП Cut-off контроля признают реактивными (содержащими антитела класса 1дМ  
против вируса фаснухи).
Область значений ОП ± 10% от ОП Cut-off контроля является областью сомнительных 
значений. Если ОП образца попадает в эти пределы, результат считается сомнительным и 
требует повторного тестирования для подтверждения.
9.1. Критерии д остоверности
Прежде чем начать обсчет результатов, убедитесь, что ОП контрольных точек соответствуют
Описание Условие
Отрицательный контроль < 0,200
Положительный контроль > 0,700
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ. 
9.2. Интерпретация результатов
5


--- стр. 46 ---
Результат определяется как отношение ОП образца к ОП Cut-off контроля. Эта величина называется 
индексом,
ОП образца
Индекс = ---------------------------------
ОП Cut-off контроля
-  Образцы с Индексом < 0,9 признают отрицательными по содержанию антител класса 1дМ  
против вируса краснухи.
-  Образцы с Индексом > 1,1 признают положительными по содержанию антител класса 1дМ  
против вируса краснухи.
Образцы с Индексом 0,9 -  1,1 (ОП ± 10% от Cut-off контроля) считаются сомнительными и 
требуют повторного тестирования.
9.3. Пример подсчета
Нижеследующие данные приведены в качестве примера и не могут быть использованы как
Описание ОП 450 п т 1дМ anti-Rubella Индекс
Отрицательный контроль 0,082
Cut-off контроль 0,600
Положительный контроль 2,500
Образец 0,889 + 1,48
Исследуемый образец признается положительным (+) по содержанию антител класса 1дМ против 
вируса краснухи.
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
Набор должен храниться при температуре +2...8°С.
Срок годности реагентов указан на этикетках флаконов.
Вскрытые реагенты стабильны при температуре +2...8°С в течение 2 месяцев.
11. ОГРАНИЧЕНИЯ В ПРИМЕНЕНИИ АНАЛИЗА
Наличие антител класса IgG к вирусу краснухи в любых концентрациях не исключает текущей 
инфекции. Таким образом, определение специфичесих антител класса 1дМ является основным 
методом для ранней диагностики острой инфекции. В случае заболевания раннее вмешательство 
значительно уменьшает риск. Применение варианта «capture» ИФА позволяет значительно 
снизить возможность неспецифических реакций. Однако результаты анализа должны 
интерпретироваться с осторожностью и подтверждаться клиническими данными и дальнейшей 
диагностикой.
СХЕМА АНАЛИЗА
Предварительное разведение образцов: 1:100
Лунки
Реагенты
Blank Контроли Образцы
Отрицательный, положительный и 100 мкл
cut-off контрол и NEG POSl С/0|
Образцы — 100 мкл
Раствор для разведения DIL 100 мкл
Инкубация: 37±2°С, 60±5 мин 
Промывка: 4 х 350 мкл.
Раствор антигена в конъюгате с 100 мкл 100 мкл 100 мкл
биотином Ад + CONJilBIOl
Инкубация: 37±2°С, 60±5 мин 
Промывка: 4 х 350 мкл.
Конъюгат с HRPO CONJ 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубация: 37±2°С, 30±2 мин 
Промывка: 4 х 350 мкл
Раствор ТМБ| ТМВ| 100 мкл 100 мкл 100 мкл


--- стр. 48 ---


--- стр. 49 ---
У Т В ЕР Ж Д А Ю  ^ 
Ге н е ра л ь н^ 1^Рй з1й (й Т $ в1сг£^
О О О  «Ком  
Ш вы рев 
« »
•л "  Ч
Н А Б О Р  Р Е А Г Е Н Т О В  ДЛЯ К А Ч Е С Т В Е Н Н О Г О 
И/ИЛИ К О Л И Ч Е С Т В Е Н Н О ГО  И М М У Н О Ф ЕР М Е Н Т Н О Г О  О П Р Е Д Е Л Е Н И Я 
АН ТИТЕЛ  К Л А С С А  IgG  П РО Т И В  Ц И Т О М Е Г А Л О В И Р У С А 
В С Ы В О Р О Т К Е  И П Л А З М Е  К РО В И  Ч Е Л О В Е К А 
Ц М В  IgG
Только для in vitro диагностики
1. Н А З Н А Ч Е Н И Е
Цитомегаловирус (ЦМВ) представляет собой вирус икосаэдрический формы, 180-250нм в 
диаметре, принадлежит к семейству герпесвирусов. Вирус оказывает цитопатический эффект, 
увеличивая размеры кпетки-хозяина за счет цитоплазматических и ядерных включений.
В настоящее время ЦМВ признан основным биологическим агентом, который приводит к 
врожденным аномалиям вследствие внутриутробной инфекции. Около 2% беременных женщин 
подвергаются первичной инфекции или реинфекции. 10-20% новорожденных детей с врожденной 
ЦМВ-инфекцией имеют выраженные признаки нарушения центральной нервной системы.
Врожденная инфекция также может быть следствием эндогенной реактивации вируса в 
организме беременной женщины. В последнее время ЦМВ определяют как основную причину 
осложнений при трансплантации органов, особенно при трансплантации почки. Процент ЦМВ 
инфекции как следствие трансплантации от ЦМВ-позитивного донора ЦМВ-негативному реципиенту 
составляет от 52 до 100%. ЦМВ инфекция широко распространена: антитела к ЦМВ были 
обнаружены у 50-70% населения старше 35 лет. Кроме того, ЦМВ может быть изолирован из 
эпителия шейки матки 10% здоровых женщин. Обычно ЦМВ инфекция протекает бессимптомно. В 
результате первичной ЦМВ инфекции антитела класса IgG против ЦМВ сохраняются у 
иммунокомпетентных пациентов на период от 2 до 9 месяцев; у пациентов с нарушениями 
иммунной системы эти антитела могут сохраняться более 2 лет.
2. Х А РА К Т ЕРИ С Т И К И  Н А Б О Р А
2.1. П РИ Н Ц И П  Д Е Й С Т В И Я
Принцип действия данного набора основан на твердофазном иммуноферментном анализе 
(ИФА). В качестве ферментной метки в наборе применяется пероксидаза хрена. В течение первой 
инкубации антитела класса IgG против ЦМВ (если они есть в образце) связываются с антигеном 
ЦМВ, адсорбированным на твердой фазе (в лунках планшета). С помощью промывки удаляется 
несвязавшийся материал. В течение следующей инкубации антитела против IgG человека, 
меченные пероксидазой хрена, взаимодействуют с комплексом антиген ЦМФ-антитело. После 
цикла промывок в лунки добавляется раствор ТМБ, что приводит к развитию окраски под 
воздействием фермента. Реакция останавливается добавлением Стоп-реагента (HCI). 
Интенсивность окрашивания раствора измеряется на спектрофотометре при длине волны 450 им 
или 405 нм. Содержание антител класса IgG в образцах и калибраторах прямо пропорционально 
измеренной оптической плотности раствора в лунках.
2.2. С О С Т А В  Н А Б О Р А
Реагент Количество Состояние
1й вариант 
комплектации
2й вариант 
комплектации
Пла
MTF
ншет
> 1
1  X  96 лунок 2 X  96 лунок Готов к использованию 
Ready for use
Промывочный раствор 1  X  50 мл 2 X  50 мл Концентрат
Cone.
Рас-
Id il
гвор для разведения 1  X  20 мл 2 X  20 мл Концентрат
Cone.
Отрицательный контроль
n e gI
1  X  2 мл 1  X  2 мл Готов к использованию 
Ready for use
1/7


--- стр. 50 ---
Калибраторы 1  X  2.5 мл 
4 X  1.5 мл
1  X  2.5 мл 
4 X  1.5 мл
Готов к использованию 
Ready for use
Конъюгат 1  X 14 мл 2 X 14 мл Готов к использованию 
Ready for use___________
Раствор ТМБ 1  X 14 мл 2 X 14 мл
гмв
Готов к использованию 
Ready for use
Стоп-
^ТОР
реагент 1  X  14 мл 2 X  14 мл Готов к использованию 
Ready for use
Количество реагентов рассчитано на 96 лунок или на 192 лунки
2.2.1 Специф ические реагенты
• И м м уносорбент -  планш ет (МТР) / Coated M icroplates: лунки стрипов планшета покрыты 
очищенным и инактивированным антигеном ЦМВ. Неиспользованные стрипы хранить при 
температуре +2...8°С в плотно закрытом пластиковом пакете (прилагается).
• Калибраторы  (C A L) / Calibrators: растворы на основе сыворотки крови, содержат 
антитела класса IgG против ЦМВ в следуюо(их концентрациях: 10, 30, 60, 120 и 240 ОЕ/мл. Готовы к 
использованию. Растворы калибраторов 30, 60, 120, 240 ОЕ/мл красного цвета, раствор 
калибратора 10 ОЕ/мл -  голубого. Консервант; МаМз (<0.1 %). Калибраторы аттестованы по 
Международному Стандарту Института Пауля Эрлиха (International Standard PEI) 10/2001.
(1 0 Е  анти-Ц М В IgG  = 0.141 ME).
• Конъ ю гат (CO N J) I Enzym e Conjugate: мышиные моноклональные антитела против IgG 
человека, коньюгированные с пероксидазой хрена (HRPO), в матриксе на основе сыворотки крови со 
стабилизаторами. Готов к использованию. Раствор розового цвета. Консервант: неомицин.
2.2.2 О бщ ие реагенты для тест-систем «To.R.C.H. -  S.T.D.» производства компании  
R A D IM
• П р ом ы воч ны й  раствор 20х (W A SH ) / W a sh in g Solution (concentrated): фосфатный 
буферный раствор, содержащий твин-20. Консервант: тимеросал (< 0.05%). Перед использованием 
разведите необходимое количество концентрата в соотношении 1:20 дистиллированной водой. При 
наличии в концентрате промывочного раствора кристаллов, поместите его в термостат (+37°С) на 
несколько минут. Приготовленный промывочный раствор можно хранить 30 суток при +2..  .8°С.
• Р аствор для разведения 20x(DIL) / Sam ple Diluent (concentrated): раствор на основе 
сыворотки крови со стабилизаторами. Жидкость красного цвета. Консервант: NaNs (< 0.1%), 
Непосредственно перед применением разведите в соотношении 1:20 подготовленным к 
использованию промывочным раствором (см. выше). Приготовленный раствор для разведения 
можно хранить 30 суток при +2.,,8°С.
• О трицательны й контроль (N EG ) I Negative Control: раствор на основе сыворотки крови, 
не содержит антител класса IgG к ЦМВ, Готов к использованию. Раствор красного цвета. 
Консервант: NaNs (< 0,1%), Может использоваться как:
1) отрицательный контроль в качественном анализе;
2) калибратор с концентрацией О  ОЕ/мл в количественном анализе,
• Раствор Т М Б  (ТМВ): 1  флакон. Раствор тетраметилбензидина в цитратно-фосфатном 
буфере, содержащем DMSO и Н 2О2,  Готов к использованию,
• Стоп-реагент (ST O P ) / Blocl<ing Reagent: 1  флакон . 1Н HCI. Готов к использованию .
• Бумага для заклеивания планш ета (С Р А ) I A dhesive plate sealers.
• П ластиковы й пакет.
З.А Н А Л И Т И Ч ЕСК И Е И Д И А ГН О С Т И Ч Е С К И Е  Х А РА К Т ЕРИ С Т И К И
3.1. Диагностическая специф ичность
Диагностическая специфичность данного метода оценивалась на группе из 150 образцов, 
полученных от пациентов, не имеющих антител к ЦМВ, Специфичность составляет 97,5%,
3.2. Д иагностическая чувствительность
Диагностическая чувствительность данного метода оценивалась на группе из 246 образцов, 
полученных от пациентов, перенесших в прошлом цитомегаловирусную инфекцию. 
Чувствительность составляет 98,7%.
3.3. Аналитическая специф ичность
Аналитическая специфичность определяется как способность анализа точно выявлять 
специфический аналит в присутствии интерферирующих факторов в матриксе образца.
Контрольные исследования показали, что хараетеристики анализа не изменяются под действием 
антикоагулянтов (цитрат, соли ЭДТА и гепарина),
3.4. Аналитическая чувствительность
Аналитическая чувствительность выражается минимальным количеством определяемого 
аналита, достоверно выявляемым с помощью данного набора. Предел детекции составляет 0,7
2/7


--- стр. 51 ---
ОЕ/мл (99% доверительный интервал). Эта величина была определена как концентрация аналита, 
отличающаяся от нулевого калибратора на три стандартных отклонения.
3.5. Прецизионность
Прецизионность оценивалась на анализаторе производства RADIM посредством определения 
повторяемости и воспроизводимости анализа (внутри- и межаналитический коэффициенты 
вариации) на трех сыворотках с различной концентрацией антител класса IgG против ЦМВ,
П овторяем ость (Внутрианалитический коэф ф ициент вариации)
Сыворотка
а
Ь
с
Среднее
значение
112.17
69.38
22.2
±
(ОЕ/мл)
±
±
±
S.D.
11.48
3.24
1.13
C.V.
%
10.24
4.67
5.1
Кол-во
репликатов
10
10
10
В осп р ои звод и м ость (М ежаналитический коэф ф ициент вариации)
Сыворотка Среднее ± S.D. C.V. Кол-во
значение (ОЕ/мл) % постановок
а 232.50 ± 13.20 5.70 10
Ь 91.85 ± 8.67 9.43 10
с 26.22 ± 1.74 6.64 10
4. М Е Р Ы  П РЕ Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И
Для получения д остовер н ы х результатов необходим о соб л ю д ать следую щ ие правила:
Не смешивайте специфические реагенты наборов разных серий (см. п.2.2.1.). Не 
смешивайте их с реагентами других производителей.
Смешивание общих реагентов разных серий (см. п.2.2.2) допускается.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Отбирайте только то количество реагента, которое необходимо для анализа. Во 
избежание контаминации не возвращайте отобранный реагент обратно во флакон.
Используйте дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в чистой
посуде.
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов 
или окислителей.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их 
загрязнение.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для ка>едого образца 
или реагента.
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и 
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам 
анализа.
В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует 
убедиться, что все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, 
спектрофотометр, термостат) проходит регулярную проверку и поддерживается в исправном 
состоянии.
Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок 
или автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок 
может привести к неверной классификации образцов.
Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению 
оптической плотности образцов и последующему неверному результату анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». 
Если температура инкубации отклоняется от 37±2°С, это может привести к снижению 
чувствительности анализа и/или биологической денатурации образцов и реагентов. Следует 
периодически проверять показания датчика температуры.
Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или 
образцов. Несоблюдение температурного режима хранения может привести к биологической 
денатурации компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная 
идентификация может привести к ложным результатам и постановке ошибочного клинического 
диагноза.
3/7


--- стр. 52 ---
J
Ч тобы  исклю чить заражение персонала и загрязнение окружающ ей среды, следует  
соблюдать следую щ ие правила:
При работе с потенциально инфекционным материалом и во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
Не разрешается пипетировать ртом.
Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и курение в 
помещениях, предназначенных для работы с наборами.
Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и Стоп-реагентом. Избегать 
попадания в глаза, на кожу и слизистые. В случае контакта тщательно промыть пораженный участок 
проточной водой.
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на 
присутствие HBsAg, антител к ВИЧ и к вирусу гепатита С. Несмотря на полученные отрицательные 
результаты, следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не может 
гарантировать полное отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и другие 
реагенты, содержащие сыворотку крови человека, следует считать потенциально инфекционными.
Следует избегать разбрызгивания реагентов и образования аэрозолей. Места, на которые 
попал пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия, 
Использованный при этом протирочный материал следует считать потенциально инфицированным 
и подвергнуть соответствующей обработке перед утилизацией.
Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных 
азидов металлов в чугунных и медных водопроводных трубах, после слива использованных 
реагентов следует промыть сток большим объемом проточной воды,
5. М А Т Е Р И А Л Ы  И О Б О Р У Д О В А Н И Е , НЕ В Х О Д Я Щ И Е  В Н А Б О Р
5.1. М атериалы  и оборудование, необходим ы е при ручной постановке анализа
-  Микропипетки, в том числе многоканальные, высокой точности (10-200 мкл, менее 3% ошибки) 
со сменными наконечниками,
-  Градуированный цилиндр для разведения реагентов.
-  Дистиллированная вода.
-  Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
-  Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления 
содержимого из лунок.
-  Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую 
плотность раствора в лунках в диапазоне 0 - 3  единиц оптической плотности при длинах волн 
6 2 0 ,4 5 0  И 405Н М .
-  Миллиметровая бумага.
5.2 Автом атическое проведение анализа
-  Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения 
анализа на автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или 
SEAC,
-  В случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю 
необходимо удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов 
для иммуноферментного анализа производства RADIM.
6. А Н А Л И З И Р У Е М Ы Е  О Б Р А З Ц Ы
Данный набор может применяться для исследования образцов сыворотки и плазмы крови 
человека. Умеренная липемичность образцов не влияет на результаты анализа. Сильно 
гемолизованные или липемичные образцы, а также присутствие в образцах фибрина могут оказывать 
влияние на результаты анализа. Перед постановкой анализа следует убедиться в том, что образцы 
прозрачные и не содержат осадка. Допускается хранение образцов при температуре +2.,,8"С в 
течение 1  недели. Для хранения в течение более длительного времени образцы следует 
заморозить при -20°С . Избегайте повторного оттаивания и замораживания образцов.
Перед проведением анализа разведите образцы в соотношении 1:300 с помощью 
приготовленного Раствора для разведения (см, п.2.2.2.). Например; 10 мкл образца + 2990 мкл 
Раствора для разведения.
7. П Р О В Е Д Е Н И Е  А Н А Л И ЗА *
Доведите реагенты до комнатной температуры (+18.. ,25°С).
Тщательно перемешайте образцы перед проведением анализа.
7.1.Промаркируйте лунки для контролей или калибраторов и исследуемых образцов. Оставьте
1  лунку для обнуления (Blank).
7.2.Внесите по 100 мкл контролей или калибраторов и разведенных образцов в соответствующие 
лунки.
Внимание: Контроли и калибраторы готовы к использованию и не требуют разведения,
7.3. Внесите 100 мкл приготовленного Раствора для разведения в лунку для обнуления.
4/7


--- стр. 53 ---
7.4. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 
60±5 минут при 37±2°С.
7.5. Удалите содержимое лунок и промойте планшет 4 раза, внося при каждой промывке по 350 
мкл разведенного Промывочного раствора. Тщательно удалите жидкость из лунок,
7.6. Внесите во все лунки по 100 мкл Конъюгата.
7.7. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 
30±2 минут при 37±2°С
7.8. Удалите содержимое лунок и промойте планшет (см. п,7.5).
7.9. Внесите во все лунки по 100 мкл Раствора ТМБ.
7.10. Инкубируйте в течение 10 минут при 37±2°С или 15 минут при комнатной температуре  
(18-25°С). Избегайте попадания света на планшет.
7.11. Внесите во все лунки по 100 мкл Стоп-реагента.
* При использовании автоматического анализатора производства RADIM или/и SEAC, 
действуйте в соответствии с его инструкцией.
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 6
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. 
Референсный фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо 
вычитать величину оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех 
остальных лунок. В случае, если значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, 
считывание результатов проводят при длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не 
позже, чем через 15 минут после остановки реакции.
Примечание: при использовании автоматических анализаторов производства RAD1M и/или 
SEAC для планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять 
значения автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм, что позволит расширить область 
кривой.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1. Качественный анализ
Следует определить оптическую плотность (ОП) отрицательного контроля и калибратора Cut-off 
(10 ОЕ/мл: пороговое значение). Присутствие или отсутствие антител класса IgG против ЦМВ 
определяется путем сравнения ОП образца с ОП калибратора Cut-off.
Образцы с ОП ниже ОП 10 ОЕ/мл калибратора Cut-off признают нереактивными (не 
содержащими антитела класса IgG против ЦМВ).
Образцы с ОП выше ОП калибратора Cut-off признают реактивными (содержащими антитела 
класса IgG против ЦМВ).
Область значений ОП ± 10% от ОП калибратора Cut-off является областью сомнительных 
значений. Если ОП образца попадает в эти пределы, требуется повторное тестирование для 
подтверждения.
9.2. Количественный анализ
Отрицательный контроль является первой точкой калибровочной кривой (О  ОЕ/мл антител класса IgG 
против ЦМВ).
Калибровочная кривая строится в линейных координатах, где по оси X откладывают 
концентрацию каждого калибратора, а по оси У -  ОП каждого калибратора. Соответствующие 
концентрации исследуемых образцов (ОЕ/мл) получаются путем интерполяции ОП образца на 
калибровочной кривой.
Образцы с концентрацией IgG антител менее 10 ОЕ/мл признают нереактивными.
Образцы с концентрацией IgG антител более 30 ОЕ/мл признают реактивными.
Образцы с концентрацией IgG антител в диапазоне от 10 до 30 ОЕ/мл признают сомнительными 
и требуют повторного тестирования для подтверждения.
О п р е д е л е н и е  к о н ц е н т р а ц и и  о б р а з ц о в
Например:
Описание ОП 
450 п т
Концентрация антител IgG 
против ЦМВ
ОП 
405 п т
Калибратор 0 ОЕ/мл 0.080 0.027
Калибратор 10 ОЕ/мл 0.190 0.060
Калибратор 30 ОЕ/мл 0.463 0.154
Калибратор 60 ОЕ/мл 1.494 0.498
Калибратор 120 ОЕ/мл 2.251 0.750
Калибратор 240 ОЕ/мл 2.800 0.930
Образец 1.794 80 ОЕ/мл 0.590
Внимание: Отрицательный контроль = Калибратор О  ОЕ/мл
5/7


--- стр. 54 ---
Путем интерполяции на калибровочной кривой полученная в образце концентрация антител 
класса IgG против ЦМВ составляет 80 ОЕ/мл.
Критерии достоверности
Прежде чем начать обсчет результатов, убедитесь, что ОП контрольных точек соответствуют следующим 
фитериям.____________________________________________________________________________________________
Описание Условие
Отрицательный контроль
ОП Кал 240 ОЕ/мл / ОП Кал 10 ОЕ/мл
ОП Кал 10 ОЕ/мл / ОП Кал О  ОЕ/мл
< 0.200  
>7,13 
>3,3
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ. 
Интерпретация результатов
Нереактивные образцы признают отрицательными по содержанию антител IgG класса против 
ЦМВ.
Реактивные и сомнительные образцы признают положительными по содержанию антител IgG 
класса против ЦМВ.
Образцы сыворотки крови, полученные от одного пациента с промежутком времени, должны 
сравниваться только при исследовании в одном и том же анализе. В этом случае 60% увеличение 
ОП во втором образце является значимым признаком недавней или развивающейся инфекции. В 
этом случае образцы тестируются на присутствие специфических 1дМ.
10. У С Л О В И Я  Х Р А Н Е Н И Я  И ЭК СП Л УА Т А Ц И И
Набор хранить при температуре +2...8°С.
Срок годности реагентов указан на этикетках флаконов.
Вскрытые реагенты стабильны при температуре +2...8°С в течение 2 месяцев.
11. О Г Р А Н И Ч Е Н И Я  В П Р И М Е Н Е Н И И  А Н А Л И З А
При определении уровня иммунитета пациента против ЦМВ присутствие антител класса IgG, 
в любой концентрации, не исключает возможности наличия инфекции. Поэтому определение 
специфических антител класса 1дМ необходимо для ранней диагностики острой инфекции. В 
случае заболевания раннее вмешательство значительно уменьшает риск. Однако результаты 
анализа должны интерпретироваться с осторожностью и подтверждаться клиническими данными и 
дальнейшей диагностикой.
С Х Е М А  А Н А Л И З А
Предварительное разведение образцов: 1:300
'  ■
-----Лунки
Реагенты "
Blank Отрицательный
контроль.
Калибратор
Образцы
Отрицательный контроль |NEG 
Калибраторы |CAL
— 100 мкл
Образцы — 100 мкл
Раствор для разведения DIL 100 мкл —
Инкубация: 37±2°С, 60±5 мин. 
Промывка: 4 х 350 мкл.
Конъюгат C O N J 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубация: 37±2°С, 30±2 мин. 
Промывка: 4 х 350 мкп.
Раствор ТМБ [ТМВ 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубация: вариант А: 37±2°С, 10 минут; вариант В: комнатная температура, 15 минут.
Стоп-реагент S T O P 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Считывание: 450-405 п т .
6/7


--- стр. 56 ---


--- стр. 57 ---
«УТ ВЕРЖ Д А Ю
r O ® ' -  -
Генерал ь н | ^ '
■"'O'-6/0 
Ofnpany'<y,
Н А Б О Р  Р Е А Г Е Н Т О В  ДЛЯ И М М У Н О Ф ЕР М ЕН Т Н О ГО  О П Р Е Д Е Л Е Н И Я  ^
А В И Д Н О СТ И 
И М М У Н О ГЛ О Б У Л И Н О В  G  К Ц И Т О М Е Г А Л О В И Р У С У 
В  С Ы В О Р О Т К Е  И П Л А З М Е  К РО В И  Ч Е Л О В Е К А 
(Ц М В  lg G -авидность)
Только для in vitro диагностики
11г
1. Н А З Н А Ч Е Н И Е
Цитомегаловирус (ЦМВ) представляет собой вирус икосаэдрический формы, 180-250 нм в 
диаметре, принадлежит к семейству герпесвирусов. Вирус оказывает цитопатическое действие, 
увеличивая размеры клетки-хозяина за счет цитоплазматических и ядерных включений. В 
настоящее время ЦМВ признан основным биологическим агентом, который приводит к 
врожденным аномалиям вследствие внутриутробной инфекции, Около 2% беременных женщин 
подвергаются первичной инфекции или реинфекции. 10-20% новорожденных детей с врожденной 
ЦМВ-инфекцией имеют выраженные признаки нарушения центральной нервной системы. В 
настоящее время принято считать, что врожденные повреждения вызываются преимущественно 
первичной инфекцией, а не реинфекциией. ЦМВ также является частой причиной осложнений при 
трансплантации органов, особенно при трансплантации почки. В этом случае первичная инфекция 
более опасна, чем реинфекция.
Диагностика первичной инфекции посредством определения специфических 1дМ  
затруднена, поскольку 1дМ присутствуют и при обострении инфекции. Кроме того, 1дМ антитела 
могут циркулировать от нескольких месяцев до двух лет в случае иммунодепрессивного 
состояния. Для выявления первичной инфекции особенно полезным оказывается определение 
авидности специфических IgG. Первичный иммунный ответ на инфекцию характеризуется 
появлением низкоавидных IgG антител, которые связываются со специфическим антигенным 
сайтом, но легко диссоциируют.
2. Х А РА К Т ЕРИ С Т И К И  Н А Б О Р А
2.1. П РИ Н Ц И П  Д Е Й С Т В И Я
Принцип действия данного набора основан на твердофазном иммуноферментном анализе 
(ИФА), в котором сыворотки пациентов, внесенные в лунки микропланшета в дубликатах, 
реагируют с антигеном ЦМВ, иммобилизованным на внутренней поверхности лунок. После первой 
инкубации планшет промывают, а парные лунки инкубируют с разными буферными растворами, 
один из которых содержит мочевину. Мочевина вызывает диссоциацию ранее образовавшегося 
комплекса антиген ЦМВ-антитело. Степень диссоциации зависит от авидности антител.
После следующего цикла промывки связанные с твердой фазой антитела вступают в 
реакцию с антителами против IgG человека, меченными пероксидазой хрена, которая, в свою 
очередь, реагирует с раствором ТМБ. Интенсивность окрашивания раствора измеряется на 
спектрофотометре при длине волны 450 нм или 405 нм. Процент авидности вычисляют как 
отношение между оптическими плотностями в парных лунках.
2.2. С О С Т А В  Н А Б О Р А
Реагент Количество Состояние
Планшет]МТР| 1  X 96 лунок Готов к использованию 
Ready for ruse
Промывочный pacTBop|WASH| 1  X 50 м л Концентрат
Concentrated
Раствор для разведения образцов01Ь 1  X 20 м л Концентрат
Concentrated
Контроль Низкоавидный|СТР В А 1  X 2 м л Лиофилизован
Lyophilized
Контроль Высокоавидный |CTR А А 1  X 2 м л Лиофилизован
Lyophilized
Реагент для диссоциации 1  X 10 м л Готов к использованию
1/7


--- стр. 58 ---
1
КонъюгатШ И
Раствор ТМБ[
Стоп-реагент
1  X 14 м л
1  X 14 мл
1  X 14 м л
Ready for use
Готов к использованию 
Ready for use ___________
Готов к использованию 
Ready for use___________
Готов к использованию 
Ready for use___________
Количество реагентов рассчитано на 96 лунок, что соответствует 45 определениям.
2.2.1. Специф ические реагенты
• Им муносорбент (МТР) / Coated microplate: Планшет из 12 стрипов по 8 лунок: 
внутренняя поверхность лунок покрыта очищенным и инактивированным антигеном ЦМВ. 
Неиспользованные стрипы поместить в пластиковый пакет (прилагается) и плотно закрыть; 
хранить при температуре +2...8°С.
• Н изкоавидны й контроль (C T R  ВА) / Low  avidity control: 1  флакон. Лиофипизованный 
препарат красного цвета. Изготовлен на основе сыворотки крови, содержащей низкоавидные IgG 
человека к ЦМВ. Консервант: NaNa (< 0.1%). Перед использованием восстановите содержимое 
флакона в 2 мл дистиллированной или деионизованной воды. Восстановленный реагент хранить 
не более 2 месяцев при температуре +2...8°С. Для длительного хранения заморозить при 
температуре -20°С.
• В ы сокоави д ны й  контроль (C T R  АА) / High avidity control: 1  флакон. 
Лиофилизованый препарат синего цвета. Изготовлен на основе сыворотки крови, содержащий 
высокоавидные человеческие IgG против ЦМВ. Консервант: NaNs (< 0.1%). Перед использованием 
восстановите содержимое флакона в 2 мл дистиллированной или деионизованной воды. 
Восстановленный реагент хранить не более 2 месяцев при температуре +2...8°С. Для длительного 
хранения заморозить при температуре -20°С.
• Реагент для диссоциации (D ISS) / D isso ciating reagent: 1  флакон. Содержит 
буферный раствор с мочевиной. Готов к использованию.
• Конъюгат (CONJ) / Enzyme conjugate: 1  флакон. Раствор на основе сыворотки крови со 
стабилизаторами, содержащий мышиные моноклональные антитела против IgG человека, 
конъюгированные с пероксидазой хрена (HRPO). Готов к использованию. Раствор розового цвета. 
Консервант: неомицин.
2.2.2. Реагенты, общ ие для п р о д у к т о в линий «To.R.C.H. -  S.T.D.» производства  
компании RADIIVI
• П р ом ы воч ны й  раствор 20х (W A SH ) / W ash in g solution (concentrated): 1  флакон 
Фосфатный буферный раствор, содержащий Твин-20. Консервант: тимеросал (< 0.05%). Перед 
использованием разведите необходимое количество концентрата в соотношении 1:20 
дистиллированной водой. В случае образования нерастворимых кристаллов поместите раствор в 
термостат (+37°С) на несколько минут. Приготовленный промывочный раствор хранить не более 
30 суток при +2...8®С.
• Раствор для разведения образцов 20х (DIL) / Sam ple Diluent (concentrated): 1
флакон. Раствор на основе сыворотки крови со стабилизаторами. Жидкость красного цвета. 
Консервант: МаМз (<0.1% ). Перед использованием разведите концентрат в соотношении 1:20 
предварительно разведенным промывочным раствором (см. выше). Приготовленный раствор для 
разведения хранить не более 30 суток при +2...8°С.
• Раствор Т М Б  (ТМВ): 1  флакон. Раствор тетраметилбензидина в цитратно-фосфатном 
буфере, содержащем DMSO и Н 2О2.  Готов к использованию.
• Стоп реагент (ST O P ) / Blocking reagent: 1  флакон. 1Н HCI. Готов к использованию.
• Пленка для заклеивания планшета (СРА ) / Adhesive plate sealers.
• П ластиковы й пакет.
3. А Н А Л И Т И Ч ЕС К И Е И Д И А ГН О С Т И Ч ЕС К И Е Х А РА К Т ЕРИ С Т И К И  Н А Б О Р А
3.1. Диагностическая специф ичность
Диагностическая специфичность данного метода оценивалась на группе из 118 образцов 
сыворотки крови пациентов с перенесенной ранее или повторной инфекцией. Диагностическая 
специфичность метода составляет 97,4%.
3.2. Д иагностическая чувствительность
Диагностическая чувствительность данного метода оценивалась на группе из 33 образцов 
сыворотки крови пациентов с первичной инфекцией. Диагностическая чувствительность метода 
составляет 93,9%.
3.3. Аналитическая специф ичность
Аналитическая специфичность определяется, как способность анализа точно выявлять 
специфический аналит в присутствии интерферирующих факторов в матриксе образца.
2/7


--- стр. 59 ---
г
Контрольные исследования показали, что характеристики анализа не изменяются под действием 
антикоагулянтов (соли ЭДТА и гепарина).
3.4. П рецизионность
Прецизионность оценивалась на анализаторе производства RADIM посредством 
определения повторяемости и воспроизводимости анализа (внутри- и межаналитический 
коэффициенты вариации) на трех сыворотках с разными % авидности.
П овтор яем ость (Внутрианалитический коэф ф ициент вариации)
Сыворотка Авидность, % Коэффициент 
вариации, %
Количество
репликатовСреднее
значение
± Стандартное
отклонение
а 11.5 ± 0.8 7.1 10
Ь 53.2 ± 3.6 6.7 10
с 82.9 ± 2.1 2.5 10
В оспр ои звод и м ость (М ежаналитический коэф ф ициент вариации)
Сыворотка Авидность, % Коэффициент Количество
Среднее ± Стандартное вариации, % постановок
значение отклонение
а 11.15 ± 2.98 26.7 10
Ь 18.44 ± 2.26 12,3 10
с 76.39 ± 10.64 13.9 10
4. М Е Р Ы  П РЕ Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И 
Для получения д остовер н ы х результатов необходимо соб л ю д ать следую щ ие правила:
Не смешивайте специфические реагенты набора разных серий (см. п.2.2.1). Не 
смешивайте их с реагентами других производителей.
Смешивание разных серий общих реагентов (см. п.2.2.2) допускается.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их 
загрязнение.
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в чистой
посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для каждого образца 
или реагента,
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и 
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
результатам анализа.
-  Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам 
анализа.
В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует 
убедиться, что все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, 
спектрофотометр, термостат) проходит регулярную проверку и поддерживается в исправном 
состоянии.
Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок 
или автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок 
может привести к неверной интерпретации результатов анализа.
Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению 
оптической плотности образцов и последующему неверному результату анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». 
Если температура инкубации отклоняется от 37±2°С, это может привести к снижению 
чувствительности анализа и/или биологической денатурации образцов и реагентов. Следует 
периодически проверять показания датчика температуры.
Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или 
образцов. Несоблюдение температурного режима хранения может привести к биологической 
денатурации компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
3/7


--- стр. 60 ---
Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная 
идентификация может привести к ложным результатам и постановке ошибочного клинического 
диагноза.
Ч тобы  исклю чить заражение персонала и загрязнение окруж аю щ ей среды, следует  
соблюдать следую щ ие правила:
При работе с потенциально инфекционным материалом и во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
Не разрешается пипетировать ртом.
Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и курение в 
помещениях, предназначенных для работы с наборами.
Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и Стоп-реагентом. Избегать 
попадания в глаза, на кожу и слизистые. В случае контакта тщательно промыть пораженный участок 
проточной водой.
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на 
присутствие HBsAg, антител к ВИЧ и к вирусу гепатита С. Несмотря на полученные отрицательные 
результаты, следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не может 
гарантировать полное отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и другие 
реагенты, содержащие сыворотку крови человека, следует считать потенциально инфекционными.
Следует избегать разбрызгивания реагентов и образования аэрозолей. Места, на которые 
попал пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. 
Использованный при этом протирочный материал следует считать потенциально инфицированным 
и  подвергнуть соответствующей обработке перед утилизацией.
Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных 
азидов металлов в чугунных и медных водопроводных трубах, после слива использованных 
реагентов следует промыть сток большим объемом проточной воды.
5. М А Т Е Р И А Л Ы  И О Б О Р У Д О В А Н И Е , НЕ В Х О Д Я Щ И Е  В Н А Б О Р
5.1. М атериалы  и оборудование, необходим ы е при ручной постановке анализа
Микропипетки, в том числе многоканальные, высокой точности (10-200 мкп, менее 3% 
ошибки) со сменными наконечниками.
Градуированные цилиндры для разведения реагентов.
Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления 
содержимого из лунок.
Дистиллированная вода.
Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую 
плотность раствора в лунках в диапазоне 0 -3  ед. опт. плотн. при длинах волн 620,450 и 405нм.
Миллиметровая бумага.
5.2. Автом атическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения 
анализа на автоматических анализаторах открытого типа производства компаний RADIM и/или 
SEAC.
В случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю 
необходимо удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов 
для иммуноферментного анализа производства RADIM.
6. А Н А Л И З И Р У Е М Ы Е  О Б Р А З Ц Ы
Данный набор может применяться для исследования образцов сыворотки и плазмы крови 
человека. Сильно гемолизованные или липемичные образцы, а также присутствие в образцах 
фибрина могут оказывать влияние на результаты анализа. Перед постановкой анализа следует 
убедиться в том, что образцы прозрачные и не содержат осадка. Допускается хранение образцов 
при температуре +2...8°С в течение 1-2 суток. Для хранения в течение более длительного времени 
образцы следует заморозить при -20°С. Избегайте повторного оттаивания и замораживания 
образцов.
Перед проведением анализа разведите образцы в соотношении 1:300 с помощью 
приготовленного Раствора для разведения (см. п.2.2.2). Например: 10 мкп образца + 2990 мкп 
Раствора для разведения.
7. П Р О В Е Д Е Н И Е  А Н А Л И ЗА *
-  Доведите реагенты до комнатной температуры (+18.. .25°С).
Перед проведением анализа тщательно перемешайте образцы.
J
4/7


--- стр. 61 ---
7.1. Составьте схему нанесения образцов на планшет. Отметьте по 2 лунки для: 
обнуления спектрофотометра (Blank), Низкоавидного контроля, Высокоавидного контроля и 
каждого из исследуемых образцов.
7.2. Внесите по 100 мкл Низкоавидного контроля в лунки С1 и D1; по 100 мкл  
Высокоавидного контроля в лунки Е1 и F1; по 100 мкл предварительно разведенных образцов в 
дубликатах -  во все остальные лунки.
7.3. Закройте планшет клейкой пленкой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 60±5 
минут при 37±2°С.
7.4. Удалите содержимое лунок и промойте лунки 4 раза, внося при каждой промывке по 
350 мкл предварительно разведенного Промывочного раствора в каждую лунку. Тщательно 
удалите жидкость из лунок.
7.5. Внесите по 100 мкл Раствора для разведения образцов в нечетные лунки (А1, С1, 
Е1, G1 и т.д.) и по 100 мл Реагента для диссоциации в четные лунки (В1, D1, F1, Н1 и т. д.).
7.6. Закройте планшет клейкой пленкой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 30±2 
минут при 37±2°С
7.7. Удалите содержимое лунок и промойте планшет (см. п.7.4).
7.8. Внесите во все лунки по 100 мкл Конъюгата.
7.9. Закройте планшет клейкой пленкой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 30±2 
минут при 37±2°С
7.10. Удалите содержимое лунок и промойте планшет (см. п. 7.4).
7.11. Внесите во все лунки по 100 мкл Раствора ТМБ.
7.12. Инкубируйте в течение 10 минут при 37±2°С. Избегайте попадания света на
планшет.
7.13. Внесите во все лунки по 100 мкл Стоп-реагента.
* При использовании автоматического анализатора производства RADIM и/или SEAC, 
действуйте в соответствии с инструкцией по эксплуатации анализатора.
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 7.
8. Р Е Г И С Т Р А Ц И Я  Р Е З У Л Ь Т А Т О В
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. 
Референсный фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо 
вычитать величину оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех 
остальных лунок. В случае если значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, 
считывание результатов проводят при длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не 
позже, чем через 15 минут после остановки реакции.
Примечание; при использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или 
SEAC для планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять 
значения автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм, что позволит расширить диапазон 
линейного измерения.
9. У Ч ЕТ  Р Е З У Л Ь Т А Т О В
Вычтите среднее значение оптической плотности (ОП) лунок А1, В1 из значений ОП других
лунок.
Убедитесь, что ОП каждого образца, инкубированного с Раствором для разведения 
образцов > 0,300 ед.опт.плотн.. Если это так, можно выполнять расчеты. Если ОП образца < 0,300 
ед.опт.плотн., это свидетельствует, что образец не содержит достаточную концентрацию антител 
для определения авидности IgG (пациент либо не имеет иммунитета к цитомегаловирусной 
инфекции, либо находится в периоде, когда иммунный ответ еще не сформирован).
Для каждого образца и контроля рассчитайте процентное отношение ОП лунки, 
инкубированной с Реагентом для диссоциации и ОП лунки, инкубированной с Раствором для 
разведения.
ОП с Реагентом для диссоциации
--------------------------------------------------- X 100 = % Авидности
ОП с Раствором для разведения
Если ОП образца при длине волны 450 нм >3,000 ед.опт.плотн. в любой из лунок, следует 
измерить ОП повторно при длине волны 405 нм. Процент авидности рассчитывается по формуле (см 
выше) на основании ОП при 405 нм.
9.1. Пример расчета
Образец О П с
Раств. для разведения
ОП с
Реаг. для диссоциации
% Авидности
Низкоавидный контроль 0,947 0,178 18,8
5/7


--- стр. 62 ---
Высокоавидный 
контроль 
Образец 0,565
1,244
0,080
0,972 78.1
14.1
9.2. Критерии достоверности
ОП при длине волны 450 нм в лунках с Высокоавидным и Низкоавидным контролями после 
инкубации с Раствором для разведения должна быть > 0,500 ед.опт.плотн.
Процент авидности должен быть ниже 35% для Низкоавидного контроля и выше 45% для 
Высокоавидного контроля. В любом случае, результаты анализа должны подтверждаться 
клиническими наблюдениями и результатами других диагностических тестов.
________9.3. Интерпретация результатов______________________________________________________
% авидности > 45% = IgG против ЦМВ с высокой авидностью
% авидности 35-45% = IgG против ЦМВ со средней авидностью (т.н. «серая зона»)
% авидности < 35% = _____IgG против ЦМВ с низкой авидностью _____________________________________
10. У С Л О В И Я  Х Р А Н Е Н И Я  И ЭК СП Л УАТ АЦ И И
Набор хранить при температуре +2...8°С.
Срок годности реагентов указан на этикетках флаконов.
Вскрытые реагенты стабильны при температуре +2...8°С в течение 2 месяцев.
11. О Г Р А Н И Ч Е Н И Я  В П Р И М Е Н Е Н И И  А Н А Л И З А
Наличие высокоавидных антител не исключает возможность недавнего инфицирования. Тем 
не менее, учитывая высокую специфичность данного анализа, положительный результат позволяет 
с высокой степенью достоверности предполагать, что инфицирование произошло в 
предшествующие 3 месяца.
С Х Е М А  А Н А Л И З А
Предварительное разведение образцов: 1:300
Лунки
Реагент
А1 В1 01 D1 Е1 F1 G1 Н1
Низкоавидный контроль 
ICTR В А
-------- -------- 100 мкл 100 мкл — —
Высокоавидный 
контроль C T R  |АА
-------- — — 100 мкл 100 мкл — —
Образец --------- — — — 100 мкп 100 мкл
Инкубация: 37±2°С, 60±5 мин
Раствор для 
разведения образцов 
DIL
100 мкл . . . . 100 мкл 100 мкл “““ “ 100 мкл . . . .
Реагент для ----- 100 мкл ----- 100 мкл ----- 100 мкл ----- 100 мкл
диссоциации |DISS|
Инкубация: 37±2°С, 30±2 мин.
Конъюгат CONJi 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкп 100 мкл
Инкубация: 37±2“С, 30±2 мин. 
Промывка: 4 х 350 мкл.
Раствор ТМБ ТМВ 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубация: 37±2°С, 10 мин.
Стоп реагент S T O P  100 мкп 100 мкп 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Считывание при длине волны 450-405 нм.
6/7


--- стр. 64 ---
Прошито, пронумеровано, скреплено ^ 
печатью Ц- (  cMlfe __________) лист 0 ^
ООО (компания'Алкр|) Био»
/М Б . Швырев
-Ч, 1 1 4 . / /


--- стр. 65 ---
УТВЕРЖДАЮ^'
Генерал ы ^ 1Й ^иректрр
. ‘ В  ■ '- 1 Я  - л  \,
О О О  «Компанйя Алкор Био»
ill!
Ш в ы р е в  M j9<\ / в /‘
П (5 1 0р'’ ’
Н А Б О Р  Р Е А Г Е Н Т О В  ДЛЯ 
И М М У Н О Ф ЕР М Е Н Т Н О Г О  О П Р Е Д Е Л Е Н И Я 
И М М У Н О ГЛ О Б У Л И Н О В  М К 
Ц И Т О М Е Г А Л О В И Р У С У  В С Ы В О Р О Т К Е  И П Л А З М Е  К РО В И  Ч Е Л О В Е К А
Ц М В  1дМ
Только для in vitro диагностики
1. Н А З Н А Ч Е Н И Е
Цитомегаловирус (ЦМВ) представляет собой вирус икосаэдрический формы, 180-250 нм в 
диаметре, принадлежит к семейству герпесвирусов. Вирус оказывает цитопатическое действие, 
увеличивая размеры клетки-хозяина за счет цитоплазматических и ядерных включений.
В настоящее время ЦМВ признан основным биологическим агентом, который приводит к 
врожденным аномалиям вследствие внутриутробной инфекции. Около 2% беременных женщин 
подвергаются первичной инфекции или реинфекции. 10-20% новорожденных детей с врожденной 
ЦМВ-инфекцией имеют выраженные признаки нарушения центральной нервной системы. 
Врожденная инфекция также может быть следствием эндогенной реактивации вируса в организме 
беременной женщины. В последнее время ЦМВ определяют как основную причину осложнений 
при трансплантации органов, особенно при трансплантации почки. Процент ЦМВ инфекции как 
следствие трансплантации от ЦМВ-позитивного донора ЦМВ-негативному субъекту составляет от 
52 до 100%. ЦМВ инфекция широко распространена: антитела к ЦМВ были обнаружены у 50-70% 
населения старше 35 лет. Обычно ЦМВ инфекция протекает бессимптомно. В результате 
первичной ЦМВ инфекции антитела класса 1дМ против ЦМВ сохраняются у иммунокомпетентных 
пациентов на период от 2 до 9 месяцев; у пациентов с нарушениями иммунной системы эти 
антитела могут сохраняться более 2 лет.
2. Х А РА К Т ЕРИ С Т И К И  Н А Б О Р А
2.1. П РИ Н Ц И П  Д Е Й С Т В И Я
Принцип действия данного набора основан на твердофазном иммуноферментном анализе (ИФА), 
вариант «capture». В качестве ферментной метки в наборе применяется пероксидаза хрена. В 
течение первой инкубации антитела класса 1дМ против ЦМВ (если они есть в образце) 
улавливаются антителами против ц-цепей иммуноглобулинов М человека, адсорбированными на 
твердой фазе (в лунках планшета). С помощью промывки удаляется несвязавшийся материал. В 
течение последующей инкубации комплекс антиген ЦМВ -  биотинилированные антитела 
реагирует с антителами 1дМ против ЦМВ, избыток антител удаляется при промывке. Во время 
третьей инкубации стрептавидин, меченный пероксидазой хрена, взаимодействует с биотином. 
После цикла промывки в лунки добавляется раствор ТМБ, что приводит к развитию окраски под 
воздействием фермента. Реакция останавливается добавлением Стоп-реагента (HCI). 
Интенсивность окрашивания раствора измеряется на спектрофотометре при длине волны 450 нм 
или 405 нм. Содержание антител класса 1дМ в образцах и контролях прямо пропорционально 
измеренной оптической плотности раствора в лунках
2.2. С О С Т А В  Н А Б О Р А
Реагент Количество Состояние
Планшет
|МТР
1  X 96 лунок Готов к использованию 
Ready for use
Промывочный раствор 
M/ASH
1  X 50 мл Концентрат
Cone.
Раствор для разведения 
^ IL
1  X 100 мл Готов к использованию 
Ready for use
Отрицательный контроль
n e gI
1  X 2 мл Готов к использованию 
Ready for use
Положительный контроль 1  X 2 мл Готов к использованию
1/7


--- стр. 66 ---
т
Cut-off контроль
ш ___________
Антиген
Конъюгат/биотин 
ICONJ/BIO
Конъюгат с пероксидазой
|сош1 __________
1  х2 ,0  мл
7 X 2,5 мл
1  X 19 м л
1  X 14 мл
Ready for use
Готов к использованию 
Ready for use
Лиофилизован
Готов к использованию 
Ready for use
Готов к использованию 
Ready for use
Раствор ТМБ 
тмв
1  X 14 мл Готов к использованию 
Ready for use ___________
Стоп-реагент
ST O P
1  X 14 мл Готов к использованию 
Ready for use
Количество реагентов рассчитано на 96 лунок.
2.2.1. Специф ические реагенты
• И м м уносорбент -  планш ет (МТР) / Coated m icroplates: лунки стрипов планшета покрыты 
монокпональными антителами против иммуноглобулинов М человека. Неиспользованные 
стрипы хранить при температуре +2,..8°С в плотно закрытом пластиковом пакете 
(прилагается).
• П олож ительны й контроль (P O S) / /Positive Control: 1  флакон. Раствор на основе сыворотки 
крови, содержит антитела класса 1дМ к ЦМВ. Готов к использованию. Консервант: NaNa (<
0,1%).
• Cut-off контроль (С/О) / Cut-off Control: 1  флакон, Раствор на основе сыворотки крови, 
содержит антитела класса 1дМ к ЦМВ. Готов к использованию. Консервант: NaNs (< 0,1%). 
Раствор голубого цвета.
• Антиген цитом егаловируса (Ад) / C M V  Antigen: 7 флаконов. Содержат инактивированный 
антиген ЦМВ. Перед использованием растворите содержимое каждого флакона в 2,5 мл 
раствора конъюгат/биотин. Восстановленный реагент хранить не более 3 суток при 
температуре +2...8°С или 1  месяц при -20°С. Повторное замораживание не допускается.
• Конъюгат/биотин (CO N J/B IO ) / Biotinylated Conjugate: 1  флакон. Раствор на основе 
сыворотки крови со стабилизаторами, содержит моноклональные антитела против ЦМВ, 
конъюгированные с биотином. Готов к использованию. Консервант: неомицин.
• Конъю гат (CO N J) / Enzym e Conjugate: 1  флакон. Раствор на основе сыворотки крови со 
стабилизаторами, содержащий стрептавидин, конъюгированный с пероксидазой хрена (HRPO). 
Готов к использованию. Консервант: неомицин.
2.2.2. Реагенты, общ ие для п р о д у к т о в линий «To.R.C.H. -  S.T.D.» производства
компании R A D IM
• П р ом ы воч ны й  раствор 20х (W A SH ) / W a sh in g Solution (concentrated): 1  флакон. 
Фосфатный буферный раствор, содержащий Твин 20. Консервант: тимеросал (< 0.05%). Перед 
использованием разведите необходимое количество концентрата дистиллированной водой в 
соотношении 1:20. В случае образования нерастворимых кристаллов поместите раствор в 
термостат (+37°С) на несколько минут. Приготовленный промывочный раствор хранить не 
более 30 суток при +2...8°С.
• Раствор для разведения (DIL) / Sam ple Diluent: 1  флакон. Фосфатно-солевой буферный 
раствор со стабилизаторами. Жидкость красного цвета. Консервант: ЫаМз (< 0,1%), Готов к 
использованию,
• О трицательны й контроль (N EG ) I Negative Control: 1  флакон. Раствор на основе сыворотки 
крови, не содержит антител класса 1дМ к ЦМВ. Готов к использованию. Консервант: ЫаМз 
(< 0.1%). Раствор красного цвета.
• Раствор Т М Б  (ТМВ): 1  флакон. Раствор тетраметилбензидина в цитратно-фосфатном 
буферном растворе, содержащем DMSO и Н 2О2.  Готов к использованию.
• Стоп-реагент (ST O P ) / Blo ckin g Reagent: 1  флакон, 1Н HCI, Готов к использованию,
• Бумага для заклеивания планш ета (СРА ) I A dhesive plate sealers.
• П ластиковы й пакет.
3. А Н А Л И Т И Ч Е С К И Е  И Д И А ГН О С Т И Ч Е С К И Е  Х А РА К Т ЕРИ С Т И К И  Н А Б О Р А
3.1. Д иагностическая специф ичность
2/7


--- стр. 67 ---
Диагностическая специфичность данного метода оценивалась на группе из 236 образцов, 
отрицательных по содержанию антител 1дМ класса против ЦМВ. Специфичность составляет 100%. 
В  представленном методе отсутствует влияние ревматоидного фактора и 1дМ других вирусов 
герпеса (вирус Эпштейна -  Барр, вирус ветряной оспы, вирус простого герпеса).
3.2. Д иагностическая чувствител ьность
Диагностическая чувствительность данного метода оценивалась на группе из 61 образцов, 
полученных от пациентов с острой цитомегаловирусной инфекцией. Чувствительность составляет 
93,4%.
3.3. Аналитическая специф ичность
Аналитическая специфичность определяется как способность анализа точно выявлять 
специфический аналит в присутствии интерферирующих факторов в матриксе образца. 
Контрольные исследования показали, что характеристики анализа не изменяются под действием 
антикоагулянтов (соли ЭДТА и гепарина).
3.4. П рецизионность
Прецизионность оценивалась на анализаторе производства RADIM посредством 
определения повторяемости и воспроизводимости анализа (внутри- и межаналитический 
коэффициенты вариации) на трех сыворотках с различной концентрацией антител класса 1дМ 
против ЦМВ.
П овторяем ость (Внутрианалитический коэф ф ициент вариации)
Сыворотка Среднее значение ±
(Индекс)
S.D. C.V.
%
Кол-во
репликатов
а 11,7 ± 0.3 2,28 10
Ь 4 ± 0,2 6,19 10
с 1,9 ± 0,11 5,57 10
В осп р ои звод и м ость (М ежаналитический коэф ф ициент вариации)
Сыворотка Среднее значение ±
(Индекс)
S.D. C.V.
%
Кол-во
постановок
а 19,01 ± 2,74 14,40 10
Ь 2,18 ± 0,28 13,07 10
с 1,57 ± 0,22 13,80 10
4. М Е Р Ы  П РЕ Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И 
Для получения д остовер ны х результатов необходим о соб л ю д ать следую щ ие правила:
Не смешивайте специфические реагенты набора разных серий (см. п.2.2.1). Не смешивайте их 
с реагентами других производителей.
Смешивание общих реагентов разных серий (см. п.2.2.2) допускается.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их загрязнение. 
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте только дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в 
чистой посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для кахедого образца или 
реагента.
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и 
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к 
неправильным результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам 
анализа.
В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и обращать особое внимание на точность внесения реагентов. 
Следует убедиться, что все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное 
устройство, спектрофотометр, термостат) проходит регулярную проверку и поддерживается в 
исправном состоянии.
Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок или 
автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок 
может привести к неверной интерпретации результатов анализа.
3/7


--- стр. 68 ---
Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению 
оптической плотности образцов и последующему неверному результату анализа.
-  Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». Если 
температура инкубации отклоняется от 37±2°С, это может привести к снижению 
чувствительности анализа и/или биологической денатурации образцов и реагентов, Следует 
периодически проверять показания датчика температуры.
Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или 
образцов. Несоблюдение температурного режима хранения может привести к биологической 
денатурации компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная 
идентификация может привести к ложным результатам и постановке ошибочного клинического 
диагноза.
Ч тобы  исклю чить заражение персонала и загрязнение окруж аю щ ей среды, следует  
соблю дать следую щ ие правила:
При работе с потенциально инфекционным материалом и во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
Не разрешается пипетировать ртом.
Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и курение в помещениях, 
предназначенных для работы с наборами.
Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и Стоп-реагентом. Избегать 
попадания в глаза, на кожу и слизистые. В случае контакта тщательно промыть пораженный 
участок проточной водой.
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на 
присутствие HBsAg, антител к ВИЧ и к вирусу гепатита С. Несмотря на полученные 
отрицательные результаты, следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не 
может гарантировать полное отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и 
другие реагенты, содержащие сыворотку крови человека, следует считать потенциально 
инфекционными.
Следует избегать разбрызгивания реагентов и образования аэрозолей. Места, на которые 
попал пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. 
Использованный при этом протирочный материал следует считать потенциально 
инфицированным и подвергнуть соответствующей обработке перед утилизацией.
Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных 
азидов металлов в чугунных и медных водопроводных трубах, после слива использованных 
реагентов следует промыть сток большим объемом проточной воды.
5. М А Т Е Р И А Л Ы  И О Б О Р У Д О В А Н И Е , Н Е В Х О Д Я Щ И Е  В Н А Б О Р
5.1. М атериалы  и оборудование, необходим ы е при ручной постановке анализа
-  Микропипетки, в том числе многоканальные, вьюокой точности (10-200 мкл, менее 3% ошибки) со 
сменными наконечниками.
-  Градуированные цилиндры для разведения реагентов.
-  Дистиллированная вода,
-  Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
-  Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления содержимого 
из лунок
-  Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность 
раствора в лунках в диапазоне 0-3 ед. опт. плотн. при длинах волн 620,450 и 405нм.
-  Миллиметровая бумага.
5.2. Автом атическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа 
на автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC.
В случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю 
необходимо удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы 
реагентов для иммуноферментного анализа производства RADIM.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Данный набор может применяться для исследования образцов сыворотки и плазмы крови 
человека. Сильно гемолизованные или липимичные образцы, а также присутствие в образцах
4/7


--- стр. 69 ---
фибрина могут оказывать влияние на результаты анализа. Перед постановкой анализа следует 
убедиться в том, что образцы прозрачные и не содержат осадка. Допускается хранение образцов 
при температуре +2...8°С в течение 1  недели. Для хранения в течение более длительного времени 
образцы следует заморозить при -20°С. Избегайте повторного оттаивания и замораживания 
образцов.
Перед проведением анализа разведите образцы в соотношении 1:100 с помощью приготовленного 
Раствора для разведения (см. п.2.2.2). Например: 10 мкл образца + 990 мкл Раствора для 
разведения.
7. П Р О В Е Д Е Н И Е  А Н А Л И ЗА *
-  Доведите реагенты до комнатной температуры (+18...25°С).
Тщательно перемешайте образцы перед проведением анализа.
7.1. Промаркируйте лунки для контролей и исследуемых образцов. Контроли вносятся в 
дубликатах, образцы - в монопликатах. Оставьте лунку для обнуления (Blank).
7.2. Внесите по 100 мкл Контролей и разведенных образцов в соответствующие лунки.
Внимание: Контроли готовы к использованию и не требуют разведения.
7.3. Внесите 100 мкл приготовленного Раствора для разведения в лунку для обнуления.
7.4. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 60±5 минут  
при 37±2“ С.
7.5. Удалите содержимое лунок и промойте лунки 4 раза, внося при каждой промывке по 350 мкл  
разведенного Промывочного раствора. Тщательно удалите жидкость из лунок.
7.6. Внесите во все лунки по 100 мкл Антигена, восстановленного раствором конъюгат/биотин.
7.7. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 60±2 
минут при 37±2“ С.
7.8. Удалите содержимое лунок и промойте планшет (см. п. 7.5).
7.9. Внесите во все лунки по 100 мкл Конъюгата (стрептавидин-пероксидаза).
7.10. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 30±2 
минут при 37±2°С.
7.11. Удалите содержимое лунок и промойте планшет (см. п,7.5).
7.12. Внесите во все лунки по 100 мкл Раствора ТМБ .
7.13. Инкубируйте в течение 20±2 минут при 37±2°С. Избегайте попадания света на планшет.
7.14. Внесите во все лунки по 100 мкл Стоп-реагента.
* При использовании автоматического анализатора производства RADIM и/или SEAC, действуйте 
в соответствии с его инструкцией.
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 7.
8. Р Е Г И С Т Р А Ц И Я  Р Е З У Л Ь Т А Т О В
Измерьте оптическую плотность (СП) на спе/арофотометре при  длине волны 450 нм. 
Референсный фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо 
вычитать величину оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех 
остальных лунок. В случае, если значение СП превышает предел линейности спектрофотометра, 
считывание результатов проводят при длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не 
позже, чем через 15 минут после остановки реакции.
Примечание: при использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или 
SEAC для планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять 
значения автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм.
9. УЧЕТ Р Е З У Л Ь Т А Т О В
Определить оптическую плотность (ОП) отрицательного контроля, положительного контроля и Cut­
off контроля (пороговое значение). Присутствие или отсутствие антител класса IgM против ЦМВ 
определяется путем сравнения ОП образца с ОП Cut-off контроля.
Образцы с ОП ниже ОП Cut-off контроля признают не реактивными (не содержащими антитела 
класса IgM против ЦМВ).
Образцы с ОП выше ОП Cut-off контроля признают реактивными (содержащими антитела класса IgM 
против ЦМВ).
Область значений ОП ± 10% от ОП Cut-off контроля является областью сомнительных значений. 
Если ОП образца попадает в эти пределы, требуется повторное тестирование для подтверждения.
9.1. Критерии д остоверности
Прежде чем начать обсчет результатов, убедитесь, что ОП контрольных точек соответствуют 
следующим критериям:
5/7


--- стр. 70 ---
Описание Условие
Отрицательный контроль <0,100
Cut-off контроль > 0,200
Положительный контроль > 0,700
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ.
9.2. Интерпретация результатов
Результат определяется как отношение ОП образца к ОП Cut-off контроля. Эта величина называется 
индексом.
ОП образца
Индекс = --------------------------------
ОП Cut-off контроля
Образцы с Индексом < 0,9 признают отрицательными по содержанию антител класса 1дМ 
против ЦМВ.
Образцы с Индексом >1,1 признают положительными по содержанию антител класса 1дМ 
против ЦМВ.
Образцы с Индексом 0,9 -  1,1 (ОП ± 10% от Cut-off контроля) считаются сомнительными и 
требуют повторного тестирования.
9.3. Пример подсчета
Нижеследующие данные приведены в качестве примера и не могут быть использованы как
Описание ОП 450 п т ЦМВ 1дМ Индекс
Отрицательный контроль 0,023
Cut-off контроль 0,424
Положительный контроль 1,252
Образец 0,932 + 2.2
Исследуемый образец признается положительным (+) по содержанию антител класса 1дМ против 
ЦМВ.
10. У С Л О В И Я  Х Р А Н Е Н И Я  И ЭК СП Л УА Т А Ц И И
Набор должен храниться при температуре +2...8°С.
Срок годности реагентов указан на этикетках флаконов.
Вскрытые реагенты стабильны при температуре +2...8°С в течение 2 месяцев.
11. О Г Р А Н И Ч Е Н И Я  В П РИ М ЕН ЕН И И  А Н А Л И З А
При определении уровня иммунитета пациента против ЦМВ, присутствие антител класса IgG не 
исключает возможность текущей инфекции. Таким образом, определение специфических антител 
класса 1дМ является основным методом для ранней диагностики острой инфекции. В случае 
заболевания раннее вмешательство значительно уменьшает риск. Применение варианта 
«capture» ИФА позволяет значительно снизить возможность неспецифических реакций. Однако 
результаты анализа должны интерпретироваться с осторожностью и подтверждаться 
клиническими данными и дальнейшей диагностикой.
J
6/7


--- стр. 72 ---


--- стр. 73 ---
y T B E P ^ j a ^ ^ o ; ^ '^
Г енерал1^^^(Гдир?»«торя"^ч;^Д
О О О  «Koмл^^ия^Al1kЗ|i Ev ' '  ''  
Ш вы р е в li/i.Bi 
/ j t » 1  г
Н А Б О Р  Р Е А Г Е Н Т О В  ДЛЯ И М М У Н О Ф ЕР М Е Н Т Н О Г О  О П Р Е Д Е Л Е Н И Я 
И М М У Н О ГЛ О Б У Л И Н О В  G  П РО Т И В  В И Р У С А  П Р О С Т О Г О  Г Е Р П Е С А  1  ТИПА 
В С Ы В О Р О Т К Е  И П Л А З М Е  К РО В И  Ч Е Л О В Е К А
В П П  IgG
Только для in vitro диагностики
1. Н А З Н А Ч Е Н И Е
Вирус простого герпеса (ВПГ), цитомегаловирус, вирус ветряной оспы и вирус Эпштейн- 
Барра принадлежат к семейству герпесвирусов.
Известны два вида ВПГ с общими и специфическими антигенными характеристиками: 
вирус простого герпеса тип 1  (ВПГ-1), локализующийся главным образом на 
орбитальных и лабиальных областях;
вирус простого герпеса тип 2 (ВПГ-2), поражающий, как правило, органы 
репродуктивной системы у мужчин и женщин.
ВПГ обладает высокой патогенностью, передается через прямой и непрямой контакг и 
половым путем. Герпетическая инфекция клинически проявляется в виде высыпаний на губах 
(Herpes labialis) или половых органах (Herpes genitalis) и герпетической экземы. Однако 
встречаются и более опасные формы. Инфицирование во время беременности (главным образом 
ВПГ 2 типа) может привести к врожденным порокам развития плода,
Антитела класса 1дМ против ВПГ появляются в течение первой недели после 
проникновения возбудителя и сохраняются в течение нескольких месяцев. Антитела класса IgG 
появляются примерно на 10 день после инфицирования и могут определяться годами, иногда титр 
их меняется при реинфицировании или реактивации латентного вируса.
Наиболее распространенными тестами для определения антител к ВПГ являются тесты 
нейтрализации, иммунофлюоресценции (прямой или непрямой) и иммуноферментный анализ для 
IgG и 1дМ.
2. ХА РА К Т ЕРИ С Т И К И  Н А Б О Р А
2.1. ПРИ Н Ц И П  Д Е Й С Т В И Я
Принцип работы данного набора основан на твердофазном иммуноферментном анализе 
(ИФА). В качестве ферментной метки в наборе применяется пероксидаза хрена. В течение первой 
инкубации антитела класса IgG против ВПГ 1  типа (если они есть в образце) связываются с антигеном 
ВПГ 1  типа, адсорбированным на твердой фазе (в лунках планшета). С помощью промывки удаляется 
несвязавшийся материал. В течение следующей инкубации антитела против IgG человека, меченные 
пероксидазой хрена, взаимодействуют с комплексом антиген ВПГ 1  типа -  антитело. После цикла 
промывок в лунки добавляется раствор ТМБ, что приводит к развитию окраски под воздействием 
фермента. Реакция останавливается добавлением Стоп-реагента (HCI). Интенсивность окрашивания 
раствора измеряется на спектрофотометре при длине волны 450 или 405 нм. Содержание антител 
класса IgG против вируса простого герпеса 1  типа в контролях и образцах прямо пропорционально 
измеренной оптической плотности раствора в лунках.
2.2. С О С Т А В  Н А Б О Р А
Реагент Количество Состояние
1й вариант 
комплектации
2й вариант 
комплектации
Планшет
м тИ
1  X 96 лунок 2 X 96 лунок Готов к использованию 
Ready for use
Промывочный раствор 
IW ASH
1  X  50 мл 2 X  50 мл Концентрат
Cone.
Раствор для разведения
Id il
1  X  20 мл 2 X  20 мл Концентрат
Cone.
1/7


--- стр. 74 ---
Отрицательный
№ Н т р о л ь
1  X  2 мл 1  X  2 мл Готов к использованию 
Ready for use
Положительный
«жтроль
1  X  2 мл 1  X 2 мл Готов к использованию 
Ready for use
Cut-off контроль
М
1  X 2,5 мл 1  X 2,5 мл Готов к использованию 
Ready for use
Конъюгат 1  X 14 мл 2 X 14 мл Готов к использованию 
Ready for use
Раствор ТМБ
ш
1  X 14 мл 2 X 14 мл Готов к использованию 
Ready for use
Стоп-реагент 1  X 14 мл 2 X  14 мл Готов к использованию 
Ready for use
Набор рассчитан на определение в монопликатах 89 неизвестных образцов и одной пробы для  
определения оптической плотности раствора для разведения образцов, в дубликатах трех  
контрольных образцов при использовании всех стрипов одновременно
Количество реагентов рассчитано на 96 или на 192 лунки.
2.2.1 Специф ические реагенты
• Им м уносорбент -  планш ет (МТР) I Coated m icroplates: лунки стрипов планшета покрыты 
очищенным и инактивированным антигеном ВПГ 1  типа. Неиспользованные стрипы хранить при 
температуре +2...8°С в плотно закрытом пластиковом пакете (прилагается).
• П олож ительны й контроль (P O S) / Positive Control: раствор на основе сыворотки крови, 
содержит антитела класса IgG к ВПГ 1  типа. Готов к использованию. Консервант; МаМз (<0.1%).
• Cut-off контроль (С/О) / Cut-off Control: раствор на основе сыворотки крови, содержит 
антитела класса IgG к ВПГ 1  типа. Готов к использованию. Раствор голубого цвета. Консервант; 
NaN3(<0.1%).
• Конъю гат (CO N J) / Enzym e Conjugate: раствор на основе сыворотки крови со 
стабилизаторами, содержаа 1ий мышиные моноклональные антитела против IgG человека, 
коньюгированные с пероксидазой хрена (HRPO).. Готов к использованию. Раствор розового цвета. 
Консервант: неомицин.
2.2.2 Реагенты, общ ие для п р о д у к т о в линий «To.R.C.H.-S.T.D.» производ ства компании  
RADIM.
• П р ом ы воч ны й  раствор 20х (W A SH ) / W a sh in g Solution (concentrated): фосфатный
буферный раствор, содержаи^ий Твин 20. Консервант; Тимеросал (< 0.05%). Перед
использованием разведите необходимое количество концентрата дистиллированной водой в 
соотношении 1;20. В случае образования нерастворимых кристаллов поместите раствор в 
термостат (+37°С) на несколько минут. Приготовленный промывочный раствор хранить не более 
30 суток при +2...8°С.
• Раствор для разведения 20х (DIL) / Sam ple Diluent (concentrated): раствор на основе 
сыворотки крови со стабилизаторами. Жидкость красного цвета. Консервант; NaNs (<0.1%), 
Непосредственно перед применением растворяется в отношении 1;20 подготовленным к 
использованию промывочным раствором (см. выше). Приготовленный раствор для разведения 
хранить не более 30 суток при +2...8°С.
• О трицательны й контроль (N EG ) / Negative Control: раствор на основе сыворотки крови, не 
содержит антител класса IgG к ВПГ 1  типа. Готов к использованию. Раствор красного цвета. 
Консервант; NaNs (< 0.1%).
• Раствор Т М Б  (ТМВ): 1  флакон (14 мл). Раствор тетраметилбензидина в цитратно- 
фосфатном буфере, содержащем DMSO и Н 2О2.  Готов к использованию.
• Стоп-реагент(БТОР) / Blo ckin g Reagent: 1  флакон (14 мл). 1Н HCI. Готов к использованию.
• Бумага для заклеивания планш ета (СРА).
• П ластиковы й пакет с замком.
3. АН А Л И Т И Ч ЕСК И Е И Д И А ГН О С Т И Ч Е С К И Е  Х А РА К Т ЕРИ С Т И К И
3.1. Диагностическая специф ичность
Диагностическая специфичность данного метода оценивалась на образцах, полученных от 
пациентов, не имеющих иммунитета к ВПГ 1  типа. Специфичность составляет 100%.
3.2. Диагностическая чувствительность
Диагностическая чувствительность данного метода оценивалась на образцах, полученных от 
группы пациентов, перенесших в прошлом инфекцию, вызванную ВПГ 1  типа. Чувствительность 
составляет 97,6%.
2/7


--- стр. 75 ---
г
3 .3 . Прецизионность
Прецизионность оценивалась на анализаторе производства RADIM посредством 
определения повторяемости и воспроизводимости анализа (внутри- и межаналитический 
коэффициенты вариации) на трех сыворотках с различной концентрацией антител класса IgG 
против ВПГ 1  типа.
Повторяемость (Внутрианалитический коэф ф ициент вариации)
Сыворотка Среднее значение ±
СП (450 нм)
S.D, C,V,% Количество
репликатов
а 0,570 ± 0,028 4,8 12
Ь 1,027 ± 0,063 6,2 12
с 2,718 ± 0,104 3,8 12
Воспроизводим ость (М ежаналитический коэф ф ициент вариации)
Сыворотка Среднее значение ±
СП (450 нм)
S.D. C.V.% Кол-во
постановок
а 0,431 ± 0,06 13,8 10
Ь 1,870 ± 0,286 15,3 10
с 3,547 ± 0,397 11,1 10
4. М Е Р Ы  П Р Е Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И
Для получения д остовер н ы х результатов необходим о со б л ю д ать следую щ ие правила:
Не смешивайте специфические реагенты набора разных серий (см. п.2.2.1). Не смешивайте с 
реагентами других производителей.
Смешивание общих реагентов разных серий (см. п.2.2.2) допускается.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их 
загрязнение.
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте только дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в 
чистой посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для ка>кдого образца или 
реагента.
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и 
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам 
анализа.
В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует 
убедиться, что все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, 
спектрофотометр, термостат) проходит регулярную проверку и поддерживается в исправном 
состоянии.
Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок или 
автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок может 
привести к неверной интерпретации результатов анализа.
Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению 
оптической плотности образцов и последующему неверному результату анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». 
Если температура инкубации отклоняется от 37±2°С, это может привести к снижению 
чувствительности анализа и/или биологической денатурации образцов и реагентов. Следует 
периодически проверять показания датчика температуры.
Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или 
образцов. Несоблюдение температурного режима хранения может привести к биологической 
денатурации компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная 
идентификация может привести к ложным результатам и постановке ошибочного клинического 
диагноза.
Чтобы  исклю чить заражение персонала и загрязнение окруж ающ ей среды, следует  
соблю д ать следую щ ие правила:
3/7


--- стр. 76 ---
-  При работе с потенциально инфекционным материалом и во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
-  Не разрешается пипетировать ртом.
-  Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и курение в 
помещениях, предназначенных для работы с наборами.
-  Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и Стоп-реагентом. Избегать 
попадания в глаза, на кожу и слизистые. В случае контакта тщательно промыть пораженный участок 
проточной водой.
-  Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на 
присутствие HBsAg, антител к ВИЧ и к вирусу гепатита С. Несмотря на полученные отрицательные 
результаты, следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не может 
гарантировать полное отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и другие 
реагенты, содержащие сыворотку крови человека, следует считать потенциально инфекционными.
Следует избегать разбрызгивания реагентов и образования аэрозолей. Места, на которые 
попал пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. 
Использованный при этом протирочный материал следует считать потенциально 
инфицированным и подвергнуть соответствующей обработке перед утилизацией.
Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных 
азидов металлов в чугунных и медных водопроводных трубах, после слива использованных 
реагентов следует промыть сток большим объемом проточной воды.
5. М А Т Е Р И А Л Ы  И О Б О Р У Д О В А Н И Е , НЕ В Х О Д Я Щ И Е  В Н А Б О Р
5.1. М атериалы  и оборудование, необходим ы е при ручной постановке анализа
Микропипетки, в том числе многоканальные, высокой точности (10-200 мкл, менее 3% 
ошибки) со сменными наконечниками.
Мерные цилиндры.
-  Дистиллированная или деионизованная вода.
Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
-  Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления 
содержимого из лунок.
Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую 
плотность раствора в лунках в диапазоне 0-3 ед. опт. плотн. при длинах волн 620, 450 и 405нм. 
Миллиметровая бумага.
5.2. Автом атическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа на 
автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC.
В случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю необходимо 
удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для иммуно- 
ферментного анализа производства RADIM.
6. А Н А Л И З И Р У Е М Ы Е  О Б Р А З Ц Ы
Данный набор может применяться для исследования образцов сыворотки и плазмы крови 
человека. Сильно гемолизованные или липимичные образцы, а также присутствие в образцах 
фибрина могут оказывать влияние на результаты анализа. Перед постановкой анализа следует 
убедиться в том, что образцы прозрачные и не содержат осадка. Допускается хранение образцов 
при температуре +2...8°С в течение 1  недели. При необходимости более длительного хранения 
образцы следует заморозить при -20°С. Избегайте повторного оттаивания и замораживания образцов.
Перед проведением анализа разведите образцы в соотношении 1:300 с помощью 
приготовленного Раствора для разведения (см. п.2.2.2.). Например: 10 мкл образца + 2990 мкл 
раствора для разведения.
7. П Р О В Е Д Е Н И Е  А Н А Л И ЗА *
-  Доведите реагенты до комнатной температуры (+18...25°С).
Тщательно перемешайте образцы перед проведением анализа.
7.1. Промаркируйте лунки для контролей (в дубликатах) и исследуемых образцов (в 
монопликатах). Оставьте 1  лунку для обнуления (Blank).
7.2. Внесите по 100 мкл контролей и разведенных образцов в соответствующие лунки. 
Внимание: Контроли готовы к использованию и не требуют разведения.
7.3. Внесите 100 мкл приготовленного Раствора для разведения в лунку для обнуления.
7.4. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 
60±5 минут при 37±2‘ ’С.
7.5. Удалите содержимое лунок и промойте лунки 4 раза, внося при каждой промывке по 350  
мкл разведенного Промывочного раствора. Тщательно удалите жидкость из лунок.
4/7


--- стр. 77 ---
7.6. Внесите во все лунки по 100 мкл Конъюгата.
7.7. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 
30±2 минут при 37±2°С.
7.8. Удалите содержимое лунок и промойте планшет (см. п.7,5).
7.9. Внесите во все лунки по 100 мкл Раствора ТМБ,
7.10. Инкубируйте в течение 10 минут при 37±2*С или 15 минут при комнатной температуре  
(18-25°С). Избегайте прямого попадания солнечного света на планшет.
7.11. Внесите во все лунки по 100 мкл Стоп-реагента.
* При использовании автоматического анализатора производства компаний RADIM или/и SEAC, 
действуйте в соответствии с его инструкцией.
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 7
8. Р Е Г И С Т Р А Ц И Я  Р Е З У Л Ь Т А Т О В  *
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. 
^еференсный фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо вычитать 
еличину оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех остальных 
унок. В случае, если значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, считывание 
[результатов проводят при длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не позже, чем через 15 
|минут после остановки реакции.
Примечание; при использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или 
[SEAC для планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять 
[значения автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм.
9. У Ч ЕТ  Р Е З У Л Ь Т А Т О В
«
1
9.1. Определить оптическую плотность (ОП) отрицательного контроля, положительного 
контроля и cut-off контроля (пороговое значение). Присутствие или отсутствие антител класса IgG 
против ВПГ 1  типа определяется путем сравнения ОП образца с ОП Cut-off контроля.
Образцы с ОП ниже ОП Cut-off признают нереактивными (не содержащими антитела класса 
IgG против ВПГ 1  типа).
Образцы с ОП выше ОП Cut-off признают реактивными (содержащими антитела класса IgG 
против ВПГ 1  типа).
Область значений ОП ± 10% от ОП калибратора является областью сомнительных значений. 
Если ОП образца попадает в эти пределы, результат считается сомнительным и требует 
повторного тестирования для подтверждения.
9.2. Критерии достоверности
Прежде чем начать обсчет результатов, убедитесь, что ОП контрольных точек соответствуют
Описание Условие
Отрицательный контроль < 0,200
Положительный контроль > 0,700
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ.
3.3.Интерпретация результатов
Результат определяется как отношение ОП образца к ОП Cut-off контроля. Эта величина 
называется индексом.
ОП образца
Индекс = --------------------------------
ОП Cut-off контроля
- Образцы с Индексом < 0,9 признают отрицательными по содержанию антител IgG класса 
против ВПГ 1  типа.
Образцы с Индексом >1,1 признают положительными по содержанию антител IgG класса 
против ВПГ 1  типа.
Образцы с Индексом 0,9 -  1,1 (ОП ± 10% от Cut-off контроля) считаются сомнительными 
и требуют повторного тестирования.
Образцы сыворотки крови, полученные от одного пациента с промежутком времени, должны 
сравниваться только при исследовании в одном и том же анализе. В этом случае 60% 
увеличение ОП во втором образце является значимым признаком недавней или развивающейся 
инфекции. В этом случае образцы тестируются на присутствие специфических 1дМ.
9.4.Пример подсчета
Нижеследующие данные приведены в качестве примера и не могут быть использованы 
как экспериментальные результаты.
5/7


--- стр. 78 ---
Описание ОП (450 нм) IgG к ВПГ 1 Индекс
отрицательный контроль 0,082
Cut-off контроль 0,504
Положительный контроль 1,992
Образец 0,889 + 1,76
Исследуемый образец определен как положительный (+) на наличие антител класса IgG к 
ВПГ 1  типа.
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
Набор должен храниться при температуре +2...8°С.
Срок годности реагентов указан на этикетках флаконов.
Вскрытые реагенты стабильны при температуре  +2., ,8°С в течение 2 месяцев.
11. ОГРАНИЧЕНИЯ В ПРИМЕНЕНИИ АНАЛИЗА
Наличие антител класса IgG к ВПГ 1  типа в любых концентрациях не исключает текущей 
инфекции. Таким образом, определение специфических антител класса 1дМ  является основным для 
ранней диагностики острой инфекции. В случае заболевания раннее вмешательство значительно 
уменьшает риск. Однако результаты анализа должны интерпретироваться с осторожностью и 
подтверждаться клиническими данными и дальнейшей диагностикой.
СХЕМА АНАЛИЗА
Предварительное разведение образцов; 1:300
—
------------------ Лунки
Реагенты ^  ■ — — ____
Blank Контроли Образцы
Отрицательный, положительный и 
cut-off контроли |NEG| |P0S С/О
------------ 100 мкл
Образцы — 100 мкл
Раствор для разведения |DIL 100 мкл —
Инкубация: 37±2°С, 60±5 мин. 
Промывка: 4 х 350 мкл.
Конъюгат ICONJi 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубация: 37±2°С, 30±2 мин 
Промывка: 4 х 350 мкл.
Раствор ТМБ [ТМВ 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубация: вариант А: 37±2°С, 10 мин; вариант В: комнатная температура, 15 мин
Стоп-реагент STOP 100 мкп 100 мкл 100 мкл
Считывание: 450-405 нм.
6/7


--- стр. 80 ---


--- стр. 81 ---
«УТВЕРЖДАЮ.
О О О  «Ком тан^^ АЛкрр Биа>уД  
Ш вы р е в ^.1^.
« /-/ » i2011r
Н А Б О Р  Р Е А Г Е Н Т О В  ДЛЯ И М М У Н О Ф ЕР М ЕН Т Н О ГО  О П Р Е Д Е Л Е Н И Я  й Ш ^ Ы б Г Л О Б У Л И Н О В 
G  П РО Т И В  В И Р У С А  П Р О С Т О ГО  Г Е Р П Е С А  2 Т И П А 
В С Ы В О Р О Т К Е  И П Л А З М Е  К РО В И  Ч Е Л О В Е К А
В П Г 2 1 д С
Только для in vitro диагностики
1. Н А З Н А Ч Е Н И Е
Вирус простого герпеса (ВПГ), цитомегаловирус, вирус ветряной оспы и вирус Эпштейн-Барра 
принадлежат к семейству герпесвирусов.
Известны два вида ВПГ с общими и специфическими антигенными характеристиками:
- вирус простого герпеса тип 1  (ВПГ-1), локализующийся главным образом на орбитальных и 
лабиальных областях;
- вирус простого герпеса тип 2 (ВПГ-2), поражающий, как правило, органы репродуктивной системы у 
мужчин и женщин.
ВПГ обладает высокой патогенностью, передается через прямой и непрямой контакт и 
половым путем. Герпетическая инфекция клинически проявляется в виде высыпаний на губах 
(Herpes labialis) или половых органах (Herpes genitalis) и герпетической экземы. Однако 
встречаются и более опасные формы. Инфицирование во время беременности (главным образом 
ВПГ 2 типа) может привести к врожденным порокам развития плода.
Антитела класса 1дМ против ВПГ появляются в течение первой недели после проникновения 
возбудителя и сохраняются в течение нескольких месяцев. Антитела класса IgG появляются 
примерно на 10 день после инфицирования и могут определяться годами, иногда титр их меняется 
при реинфицировании или реактивации латентного вируса.
Наиболее распространенными тестами для определения антител к ВПГ являются тесты 
нейтрализации, иммунофлюоресценции (прямой или непрямой) и иммуноферментный анализ для 
IgG и 1дМ.
2, ХАРА К Т ЕРИ С Т И К И  Н А Б О Р А
2.1. П РИ Н Ц И П  Д ЕЙ С Т В И Я
Принцип работы данного набора основан на иммуноферментном твердофазном анализе (ИФА). 
В качестве ферментной метки в наборе применяется пероксидаза хрена. В течение первой 
инкубации антитела класса IgG против ВПГ 2 типа (если они есть в образце) связываются с 
антигеном ВПГ 2 типа (гликопротеин gG2), адсорбированном на твердой фазе (в лунках 
планшета). С помощью промывки удаляется несвязавшийся материал. В течение следующей 
инкубации антитела против IgG человека, меченные пероксидазой хрена, взаимодействуют с 
комплексом антиген ВПГ 2 типа -  антитело. После цикла промывки в лунки добавляется раствор 
ТМБ, что приводит к развитию окраски под воздействием фермента. Реакция останавливается 
добавлением стоп-реагента (НС1). Интенсивность окрашивания раствора измеряется на 
спектрофотометре при длине волны 450 нм или 405 нм. Содержание антител класса IgG против 
вируса простого герпеса 2 типа в контролях и образцах прямо пропорционально измеренной 
оптической плотности раствора в лунках.
2.2. С О С Т А В  Н А Б О Р А
Реагент Количество Состояние
1й вариант 
комплектации
2й вариант 
комплектации
Планшет
МТР
1  X 96 лунок 2 X 96 лунок Готов к использованию 
Ready for use
Промывочный раствор 
VVASHI
1  X  50 мл 2 X  50 мл Концентрат
Cone.
Раствор для разведения 
Id il
1  X  20 мл 2 X  20 мл Концентрат
Cone.
Отрицательный контроль 
tjEGl
1  X  2 мл 1  X  2 мл Готов к использованию 
Ready for use
1/7


--- стр. 82 ---
Положительный контроль 
jP O |___________________
1  X 2 мл 1  X 2 мл Готов к использованию 
Ready for use __________
Cut-off контроль 1  X 2,5 мл 1  X 2,5 мл Готов к использованию 
Ready for use
Конъюгат 1  X 14 мл 2 X 14 мл
ICONJ
Готов к использованию 
Ready for use
Раствор ТМБ 1  X 14 мл 2 X 14 мл Готов к использованию 
Ready for use___________
Стоп-реагент 
IST O P_______
1  X 14 мл 2 X 14 мл Готов к использованию 
Ready for use
Номер набора ВПГ 2 IgG по 
каталогу Алкор Био _________
200-11
Количество реагентов рассчитано на 96 (REF KH2G) или на 192 (REF KH2GB) лунки,
2.2.1. Специф ические реагенты
• И м м уносорбент -  планш ет (МТР) / Coated m icroplates лунки стрипов планшета покрыты 
специфическим гликопротеином gG2 (антиген ВПГ 2 типа). Неиспользованные стрипы хранить при 
температуре +2..,8°С в плотно закрытом пластиковом пакете (прилагается).
• П олож ительны й контроль (POS) / Positive C ontroi; раствор на основе сыворотки крови, 
содержит антитела класса IgG к ВПГ 2 типа. Готов к использованию. Консервант: NaNs (<0.1 %).
• C ut-off контроль (С/О) / C ut-off C ontrol: раствор на основе сыворотки крови, содержит 
антитела класса IgG к ВПГ 2 типа. Готов к использованию. Раствор голубого цвета. Консервант: 
М аМ з (<0,1 %).
• Конъю гат (CONJ) / Enzyme C onjugate: мышиные моноклональные антитела против IgG 
человека, конъюгированные с пероксидазой хрена (HRPO), на основе сыворотки крови со 
стабилизаторами. Готов к использованию. Раствор розового цвета. Консервант: неомицин.
2.2.2. Реагенты, общ ие для п р о д у к т о в л и н и й «To.R.C.H. -  S.T.D.» производ ства компании  
RADIM
• П ром ы вочны й раствор 20х (WASH) / W ashing Solution (concentrated): фосфатный 
буферный раствор, содержащий Твин 20. Консервант: Тимеросал (< 0.05%). Перед использованием 
разведите необходимое количество концентрата дистиллированной водой в соотношении 1:20. В 
случае образования нерастворимых кристаллов поместите раствор в термостат (+37“С) на несколько 
минут. Приготовленный промывочный раствор хранить 30 суток при +2... 8°С.
• Р аствор для разведения 20х (DIL) / Sample D iluent (concentrated): раствор на основе 
сыворотки крови со стабилизаторами. Жидкость красного цвета. Консервант: NaNj (<0.1%). 
Непосредственно перед применением разведите в отношении 1:20 подготовленным к 
использованию промывочным раствором (см. выше). Приготовленный раствор для разведения 
хранить не более 30 суток при +2..,8°С.
• О трицательны й контроль (NEG) / Negative C ontrol: раствор на основе сыворотки крови, не 
содержит антител класса IgG к ВПГ 2 типа. Готов к использованию. Раствор красного цвета. 
Консервант: NaNj (< 0.1%).
• Раствор Т М Б  (ТМВ): 1  флакон (14 мл). Раствор тетраметилбензидина в цитратно- 
фосфатном буфере, содержащем и DMSO и Н 2О2.  Готов к использованию.
• Стоп-реагент(ЗТО Р) / B locking Reagent: 1  флакон (14 мл). 1Н HCL. Готов к использованию.
• Бумага для заклеивания планш ета (СРА).
• Пластиковы й пакет.
3. А Н А Л И Т И Ч Е С К И Е  И Д И А ГН О С Т И Ч Е С К И Е  Х А РА К Т ЕРИ С Т И К И
3.1. Д иагностическая специф ичность
Диагностическая специфичность данного метода оценивалась на образцах, полученных от 
пациентов, не имеющих иммунитета к ВПГ 2 типа. Специфичность составляет 99,4%.
3.2. Д иагностическая чувствительность
Диагностическая чувствительность данного метода оценивалась на образцах, полученных от 
группы пациентов, перенесших в прошлом инфекцию, вызванную ВПГ 2 типа. Чувствительность 
составляет 97,9%.
3.3. П рецизионность
Прецизионность оценивалась посредством определения повторяемости и воспроизводимости 
анализа (внутри- и межаналитический коэффициенты вариации) на трех сыворотках с различной 
концентрацией антител класса IgG против ВПГ 2 типа.
П овторяем ость (Внутрианалитический коэф ф ициент вариации
Сыворотка Среднее значение ±
ОП (450 нм)
S.D. C.V.
%
Кол-во
репликатов
а 0,294 ± 0,018 6.1 12
2/7


--- стр. 83 ---
ь 1,433 ± 0,059 4,1 12
с 1,936 ± 0,122 6,3 12
В осп р ои звод и м ость (М ежаналитический коэф ф ициент вариации)
Сыворотка Среднее значение ±
СП (450 нм)
S.D. C.V.
%
Кол-во
постановок
а 0,525 ± 0,092 17,6 10
Ь 1,297 ± 0,121 9,3 10
с 1,704 ± 0,251 14,7 10
4. М Е Р Ы  П РЕ Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И
Для получения д остовер н ы х результатов необходим о со б л ю д ать следую щ ие правила:
Не смешивайте специфические реагенты набора разных серий (см. п.2.2.1). Не смешивайте 
с реагентами других производителей.
Смешивание общих реагентов разных серий (см, п.2.2.2) допускается.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их 
загрязнение.
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте только дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в 
чистой посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для каждого образца 
или реагента.
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и 
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам 
анализа.
В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует 
убедиться, что все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, 
спектрофотометр, термостат) проходит регулярную проверку и поддерживается в исправном 
состоянии.
Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок 
или автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок 
может привести к неверной интерпретации результатов анализа.
Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению 
оптической плотности образцов и последующему неверному результату анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». 
Если температура инкубации отклоняется от 37±2°С, это может привести к снижению 
чувствительности анализа и/или биологической денатурации образцов и реагентов. Следует 
периодически проверять показания датчика температуры.
-  Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или 
образцов. Несоблюдение температурного режима хранения может привести к биологической 
денатурации компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
-  Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная 
идентификация может привести к ложным результатам и постановке ошибочного клинического 
диагноза.
Чтобы  исклю чить заражение персонала и загрязнение окруж аю щ ей среды, следует  
соблю дать следую щ ие правила:
При работе с потенциально инфекционным материалом и во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
Не разрешается пипетировать ртом.
Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и курение в 
помещениях, предназначенных для работы с наборами.
-  Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и Стоп-реагентом. Избегать 
попадания в глаза, на кожу и слизистые, В случае контакта тщательно промыть пораженный участок 
проточной водой.
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на 
присутствие HBsAg, антител к ВИЧ и к вирусу гепатита С. Несмотря на полученные отрицательные 
результаты, следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не может
3/7


--- стр. 84 ---
гарантировать полное отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и другие 
реагенты, содержащие сыворотку крови человека, следует считать потенциально инфекционными, 
Следует избегать разбрызгивания реагентов и образования аэрозолей. Места, на которые 
попал пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия, 
Использованный при этом протирочный материал следует считать потенциально 
инфицированным и подвергнуть соответствующей обработке перед утилизацией.
Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных 
азидов металлов в чугунных и медных водопроводных трубах, после слива использованных 
реагентов следует промыть сток большим объемом проточной воды,
5. М А Т Е Р И А Л Ы  И О Б О Р У Д О В А Н И Е , НЕ В Х О Д Я Щ И Е  В Н А Б О Р
5.1. М атериалы  и оборудование, необходимы е при ручной постановке анализа
Микропипетки, в том числе многоканальные, высокой точности (10-200 мкл, менее 3% 
ошибки) со сменными наконечниками.
Градуированные цилиндры для разведения реагентов.
-  Дистиллированная вода.
Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления 
содержимого из лунок.
Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую 
плотность раствора в лунках в диапазоне 0 -3 ед. опт, плотн, при длинах волн 620, 450 нм и 
405нм.
Миллиметровая бумага.
5.2. А втом атическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа
на автоматических анализаторах открытого типа производства компаний RADIM и/или SEAC.
В случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю
необходимо удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы
реагентов для иммуноферментного анализа производства RADIM,
6. А Н А Л И З И Р У Е М Ы Е  О Б Р А З Ц Ы
Данный набор может применяться для исследования образцов сыворотки и плазмы крови 
человека. Сильно гемолизованные или липемичные образцы, а также присутствиев образцах 
фибрина могут оказывать влияние на результаты анализа. Перед постановкой анализа следует 
убедиться в том, что образцы прозрачные и не содержат осадка. Допускается хранение образцов 
при температуре +2...8°С в течение 1  недели. Для хранения в течение более длительного времени 
образцы следует заморозить при -20°С, Избегайте повторного оттаивания и замораживания 
образцов.
Перед проведением анализа разведите образцы в соотношении 1:300 с помощью 
приготовленного Раствора для разведения (см. п.2.2.2.). Например: 10 мкл образца + 2990 мкл 
раствора для разведения.
7. П Р О В Е Д Е Н И Е  А Н А Л И ЗА *
-  Доведите реагенты до комнатной температуры (+18...25°С).
Тщательно перемешайте образцы перед проведением анализа.
7.1. Промаркируйте лунки для контролей (в дубликатах) и исследуемых образцов (в 
монопликатах). Оставьте лунку для обнуления (Blank).
7.2. Внесите по 100 мкл контролей и разведенных образцов в соответствующие лунки.
Внимание: Контроли готовы к использованию и не требуют разведения.
7.3. Внесите 100 мкл приготовленного Раствора для разведения в лунку для обнуления,
7.4. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 
60±5 минут при 37±2°С,
7.5. Удалите содержимое лунок и промойте их 4 раза, внося при каждой промывке по 350 мкл  
разведенного Промывочного раствора. Тщательно удалите жидкость из лунок.
7.6. Внесите во все лунки по 100 мкл Конъюгата.
7.7. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 
30±2 минут при 37±2°С.
7.8. Удалите содержимое лунок и промойте планшет (см. п.7,5).
7.9. Внесите во все лунки по 100 мкл Раствора ТМБ.
7.10. Инкубируйте в течение 10 минут при 37±2“С  или 15 минут при комнатной температуре  
(18-25°С). Избегайте прямого попадания солнечного света на планшет,
7.11. Внесите во все лунки по 100 мкл Стоп-реагента,
* При использовании автоматического анализатора производства RADIM и/или SEAC, 
действуйте в соответствии с его инструкцией.
4/7


--- стр. 85 ---
8. Р Е Г И С Т Р А Ц И Я  Р Е З У Л Ь Т А Т О В
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм, 
Референсный фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо 
вычитать величину оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех 
остальных лунок. В случае, если значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, 
считывание результатов проводят при длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не 
позже, чем через 15 минут после остановки реакции.
Примечание: при использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или 
SEAC для планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять 
значения автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм, что позволит расширить область 
кривой,
9. УЧЕТ Р Е З У Л Ь Т А Т О В
Определить оптическую плотность (ОП) отрицательного контроля, положительного контроля и 
Cut-off контроля (пороговое значение). Присутствие или отсутствие антител класса IgG против ВПГ
2 типа определяется путем сравнения ОП образца с ОП Cut-off контроля.
Образцы с ОП ниже ОП Cut-off признают не реактивными (не содержащими антитела класса IgG 
против ВПГ 2 типа).
Образцы с ОП выше ОП Cut-off признают реактивными (содержащими антитела класса IgG против 
ВПГ 2 типа).
Область значений ОП ± 10% от ОП калибратора является областью сомнительных значений. 
Если ОП образца попадает в эти пределы, результат считается сомнительным и требуется 
повторного тестирования для подтверждения,
9.1. Критерии д остоверности
Прежде чем начать обсчет результатов, убедитесь, что ОП контрольных точек соответствуют
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 6.
след /ющим критериям.
Описание Условие
Отрицательный контроль < 0,200
Положительный контроль > 0,700
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ,
9.2. Интерпретация результатов
Результат определяется как отношение ОП образца к ОП Cut-off контроля. Эта величина 
называется индексом,
ОП образца
Индекс = --------------------------------
ОП Cut-off контроля
Образцы с Индексом < 0,9 признают отрицательными по содержанию антител IgG класса 
против ВПГ 2 типа.
Образцы с Индексом > 1,1 признают положительными по содержанию антител IgG класса 
против ВПГ 2 типа.
Образцы с Индексом 0,9 -  1,1 (ОП ± 10% от Cut-off контроля) считаются сомнительными и 
требуют повторного тестирования.
Образцы сыворотки крови, полученные от одного пациента с промежутком времени, должны 
сравниваться только при исследовании в одном и том же анализе, В этом случае 60% увеличение 
ОП во втором образце является значимым признаком недавней или развивающейся инфекции, В 
этом случае образцы тестируются на присутствие специфических 1дМ,
9.3. Пример подсчета
Нижеследующие данные приведены в качестве примера и не могут быть использованы как 
экспериментальные результаты.
Описание ОП при 450 нм IgG к ВПГ 2 Индекс
Отрицательный контроль 0,082
Cut-off контроль 0,504
Положительный контроль 1,992
Образец 0,889 + 1,76
Исследуемый образец определен как положительный (+) на наличие антител класса IgG к 
ВПГ 2 типа.
10. У С Л О В И Я  Х Р А Н Е Н И Я  И ЭКСП Л УАТ АЦ И И
- Набор должен храниться при температуре +2...8°С.
5/7


--- стр. 86 ---
- Срок годности реагентов указан на этикетке флаконов.
- Вскрытые реагенты стабильны при температуре +2...8‘'С в течение 2 месяцев.
11. ОГРАНИЧЕНИЯ В ПРИМЕНЕНИИ АНАЛИЗА
Наличие антител класса IgG к ВПГ 2 типа в любых концентрациях не исключает текущей
инфекции. Таким образом, определение специфических антител класса 1дМ является основным
для ранней диагностики острой инфекции. В случае заболевания раннее вмешательство 
значительно уменьшает риск. Однако результаты анализа должны интерпретироваться с 
осторожностью и подтверждаться клиническими данными и дальнейшей диагностикой.
СХЕМА АНАЛИЗА
Предварительное разведение образцов: 1;300
'  — — Л у н к и  
Реагенты ^  ~ -------- Blank Контроли Образцы
Отрицательный, положительный и cut­
off контрол и |N EG PCS |С/01
---- 100 мкл —
Образцы ---- ----- 100 мкл
Раствор для разведения DIL 100 мкл ----- ----
- Инкубация: 37±2°С, 60±5 мин.
- Промывка: 4 х 350 мкл.
Конъюгат ICONJ 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубация: 37±2“С, 30±2 мин. 
Промывка: 4 х 350 мкл.
Раствор ТМБ ТМ В 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубация: вариант А; 37±2°С, 10 мин; вариант В: комнатная температура, 15 мин.
Стоп-реагент STOP 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Считывание: 450-405 нм.
6/7


--- стр. 88 ---
Ь '',
Прошито, пронумеровано, скреплено л 
печатью ( e&cUi_________) л и с т ^
I  Генерайь1 1М , дире1^ 'р ^
0 0 Q  «Коми
> * /•  .о,,, ■ii' у
^! п!к9 Р $ио»
Швырев
4 ) « К т г а ^ р я
'\Со


--- стр. 89 ---
УТВЕР)КД ^ £^Г '® * //-
Г е н е р а л ь н ^ ^ ^ ^ р р
О О О  < < K o M n ^ A > f e ^
Ш в ь , р е в М . в Д « ; ^ , ^ Г / |/ /
Н А Б О Р  Р Е А Г Е Н Т О В  ДЛЯ К А Ч Е С Т В Е Н Н О Г О 
И М М У Н О Ф ЕР М Е Н Т Н О Г О  О П Р Е Д Е Л Е Н И Я  И М М У Н О ГЛ О Б У Л И Н О В  М 
П РО Т И В  В И Р У С А  П Р О С Т О ГО  Г Е Р П Е С А  1  И 2 ТИ ПА 
В С Ы В О Р О Т К Е  И П Л А З М Е  К РО В И  Ч Е Л О В Е К А 
В П Г1 /2  1дМ
Только для in vitro диагностики
1. Н А З Н А Ч Е Н И Е
Вирус простого герпеса (ВПГ), цитомегаловирус, вирус ветряной оспы и вирус Эпштейн-Барра 
принадлежат к семейству герпесвирусов.
Известны два вида ВПГ с общими и специфическими антигенными характеристиками:
-вирус простого герпеса тип 1  (ВПГ-1), локализующийся главным образом на орбитальных и 
лабиальных областях;
-вирус простого герпеса тип 2 (ВПГ-2), поражающий, как правило, органы репродуктивной 
системы у мужчин и женщин.
ВПГ обладает высокой патогенностью, передается через прямой и непрямой контакт и 
половым путем. Герпетическая инфекция клинически проявляется в виде высыпаний на губах 
(Herpes labialis) или половых органах (Herpes genitalis) и герпетической экземы. Однако встречаются 
и более опасные формы. Инфицирование во время беременности (главным образом ВПГ 2 типа) 
может привести к врожденным порокам развития плода.
Антитела класса 1дМ против ВПГ появляются в течение первой недели после проникновения 
возбудителя и сохраняются в течение нескольких месяцев. Антитела класса IgG появляются 
примерно на 10 день после инфицирования и могут определяться годами, иногда титр их меняется 
при реинфицировании или реактивации латентного вируса,
Наиболее распространенными тестами для определения антител к ВПГ являются тесты 
нейтрализации, иммунофлюоресценции (прямой или непрямой) и иммуноферментный анализ для 
IgG и 1дМ.
2. Х А РА К Т ЕРИ С Т И К И  Н А Б О Р А
2.1. П РИ Н Ц И П  Д Е Й С Т В И Я
Принцип работы данного набора основан на твердофазном иммуноферментном анализе 
(ИФА). В качестве ферментной метки в наборе применяется пероксидаза хрена. В течение первой 
инкубации антитела кпасса 1дМ против ВПГ (если они есть в образце) связываются с антигеном ВПГ, 
адсорбированным на твердой фазе (в лунках планшета). С помощью промывки удаляется 
несвязавшийся материал. В течение следующей инкубации антитела против 1дМ человека, меченные 
пероксидазой хрена, взаимодействуют с комплексом антиген ВПГ -  антитело. После цикла промывки 
в лунки добавляется раствор ТМБ, что приводит к развитию окраски под воздействием фермента. 
Реакция останавливается добавлением Стоп-реагента (НО!). Интенсивность окрашивания раствора 
измеряется на спектрофотометре при длине волны 450 нм или 405 нм. Содержание антител класса 
1дМ  против вируса простого герпеса в контролях и образцах прямо пропорционально измеренной 
оптической плотности раствора в лунках.
2.2. С О С Т А В  Н А Б О Р А
Реагент Количество Состояние
Планшет
МТР
1  X  96 лунок Готов к использованию 
Ready for use
Промывочный раствор 
^ A S H
1  X  50 мл Концентрат
Cone.
Раствор для разведения 
DIL
1  X  20 мл Концентрат
Cone.
Отрицательный контроль
n e gI
1  X  2 мл Готов к использованию 
Ready for use
1/7


--- стр. 90 ---
1  Положительный контроль 1  х 2  мл Готов к использованию 
Ready for use
[ Cut-off контроль
1ю о|
1  X 2,5 м л Готов к использованию 
Ready for use
Конъюгат 1  X 14 м л Готов к использованию
Ready for use
Раствор ТМБ 
ГМ^
1  X 14 мл Готов к использованию 
Ready for use
Стопчэеагент 1  X 14 мл Готов к использованию
Ready for use
I
г
Количество реагентов рассчитано на 96 лунок.
2.2.1 ■  Специф ические реагенты
• И м м уносорбент -  планш ет (МТР) / Coated m icroplates: лунки стрипов планшета покрыты 
очищенным и инактивированным антигеном ВПГ. Неиспользованные стрипы хранить при 
температуре +2...8°С в плотно закрытом пластиковом пакете (прилагается).
• Полож ительны й контроль (P O S) / Positive Control: 1  флакон. Раствор на основе сыворотки 
крови, содержит антитела кпасса 1дМ к ВПГ. Готов к использованию. Консервант: NaNa 
(<0.1 %).
• Cut-off контроль (С/О) / Cut-off Control: 1  флакон. Раствор на основе сыворотки крови, содержит 
антитела класса 1дМ к ВПГ. Готов к использованию. Раствор голубого цвета. Консервант: NaNa 
(<0.1 % ).
• Конъю гат (CO N J) / Enzym e Conjugate: 1  флакон. Раствор на основе сыворотки крови со 
стабилизаторами, содержит мышиные моноклональные антитела против 1дМ человека, 
конъюгированные с пероксидазой хрена (HRPO). Готов к использованию. Раствор розового 
цвета. Консервант: неомицин.
2.2.2. Реагенты, общ ие для п р о д у к т о в линий «To.R.C.H. -  S.T.D.» производ ства компании
R A D IM
• П р ом ы воч ны й  раствор 20х (W A SH ) / W a sh in g Solution (concentrated): 1  флакон (50 мл) 
Фосфатный буферный раствор, содержащий Твин 20. Консервант: тимеросал (< 0.05%). Перед 
использованием разведите необходимое количество концентрата дистиллированной водой в 
соотношении 1:20. В случае образования нерастворимых кристаллов поместите раствор в 
термостат (+37°С) на несколько минут. Приготовленный промывочный раствор хранить не 
более 30 суток при +2...8°С.
• Раствор для разведения 20х (DIL) I Sam ple Diluent (concentrated): 1  флакон. Раствор на 
основе сыворотки крови со стабилизаторами. Жидкость красного цвета. Консервант: NaNs 
(<0.1%). Непосредственно перед применением разведите в соотношении 1:20 подготовленным к 
использованию промывочным раствором (см. выше). Приготовленный раствор для разведения 
хранить не более 30 суток при +2...8°С.
• О трицательный контроль (NEG) / Negative Control: 1  флакон. Раствор на основе сыворотки 
крови, не содержит антител класса 1дМ  к ВПГ. Готов к использованию. Раствор красного цвета. 
Консервант: МаМз (< 0.1%),
• Раствор Т М Б  (ТМВ): 1  флакон. Раствор тетраметилбензидина в цитратно-фосфатном 
буфере, содержащем DMSO и Н 2О2.  Готов к использованию.
• Стоп-реагент (ST O P ) / Blo ckin g Reagent: 1  флакон. 1Н HCI. Готов к использованию.
• Бумага для заклеивания планш ета (СРА).
• П ластиковы й пакет.
3. А Н А Л И Т И Ч ЕС К И Е И Д И А ГН О С Т И Ч Е С К И Е  Х А РА К Т ЕРИ С Т И К И  Н А Б О Р А
3.1. Д иагностическая специф ичность
Диагностическая специфичность данного метода оценивалась на образцах, полученных от 
пациентов, не имеющих иммунитета к ВПГ. Специфичность составляет 100%.
3.2.Д иагностическая чувствительность
Диагностическая чувствительность данного метода оценивалась на образцах, полученных от 
пациентов с острой герпесвирусной инфекцией. Чувствительность составляет 100%.
3.3. Прецизионность
Прецизионность оценивалась посредством определения повторяемости и воспроизводимости 
анализа (внутри- и межаналитический коэффициент вариации) на трех сыворотках с различной 
концентрацией антител класса 1дМ против ВПГ.
П овторяем ость (Внутрианалитический коэф ф ициент вариации)
2/7


--- стр. 91 ---
Сыворотка Среднее значение 
ОП (при 450 нм)
± S.D. C.V.
%
Кол-во
репликатов
а 0.67 + 0.039 5.8 10
Ь 1.081 + 0.054 5 10
с 2.061 + 0.074 3.6 10
Воспроизводим ость (М ежаналитический коэф ф ициент вариации)
Сыворотка Среднее значение 
ОП (при 450 нм)
± S.D. C.V.
%
Кол-во
постановок
а 0.663 ± 0.096 14.5 10
Ь 0.943 ± 0.116 12.3 10
с 1.307 ± 0.115 8.84 10
4. М Е Р Ы  П Р Е Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И 
Для получения д остове р н ы х результатов необходимо со б л ю д ать следую щ ие правила;
Не смешивайте специфические реагенты набора разных серий (см. п.2.2.1). Не смешивайте с 
реагентами других производителей.
Смешивание общих реагентов разных серий (см. п.2.2.2) допускается.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их 
загрязнение.
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте дистиллированную воду. Храните воду только в чистой посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для ка>кцого образца или 
реагента.
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и 
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам анализа.
В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует 
убедиться, что все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, 
спектрофотометр, термостат) проходит регулярную проверку и поддерживается в исправном 
состоянии.
Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок или 
автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок может 
привести к неверной интерпретации результатов анализа.
Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению 
оптической плотности образцов и последующему неверному результату анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». 
Если температура инкубации отклоняется от 37±2°С, это может привести к снижению 
чувствительности анализа и/или биологической денатурации образцов и реагентов. Следует 
периодически проверять показания датчика температуры.
Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или 
образцов. Несоблюдение температурного режима хранения может привести к биологической 
денатурации компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная 
идентификация может привести к ложным результатам и постановке ошибочного клинического 
диагноза.
Ч тобы  исклю чить заражение персонала и загрязнение окруж аю щ ей среды, следует  
соблю д ать следую щ ие правила:
При работе с потенциально инфекционным материалом и во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
Не разрешается пипетировать ртом.
Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и курение в помещениях, 
предназначенных для работы с наборами.
3/7


--- стр. 92 ---
Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и Стоп-реагентом. Избегать 
попадания в глаза, на кожу и слизистые. В случае контакта тщательно промыть пораженный участок 
проточной водой.
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на 
присутствие HBsAg, антител к ВИЧ и к вирусу гепатита С. Не смотря на полученные 
отрицательные результаты, следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не 
может гарантировать полное отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и 
другие реагенты, содержащие сыворотку крови человека, следует считать потенциально 
инфекционными.
Следует избегать разбрызгивания реагентов и образования аэрозолей. Места, на которые 
попал пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. 
Использованный при этом протирочный материал следует считать потенциально 
инфицированным и подвергнуть соответствующей обработке перед утилизацией.
Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных 
азидов металлов в чугунных и медных водопроводных трубах, после слива использованных 
реагентов следует промыть сток большим объемом проточной воды.
5. М А Т ЕР И А Л Ы  И О Б О Р У Д О В А Н И Е , Н Е В Х О Д Я Щ И Е  В Н А Б О Р
5.1. М атериалы  и оборудование, необходимы е при ручной постановке анализа
Микропипетки, в том числе многоканальные, высокой точности (10-200 мкл, менее 3% ошибки) 
со сменными наконечниками.
Градуированные цилиндры для разведения реагентов.
-  Дистиллированная вода.
Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
-  Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления 
содержимого из лунок.
Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую 
плотность раствора в лунках в диапазоне 0-3 ед. опт. плотн. при длинах волн 620,450 и 405нм. 
Миллиметровая бумага.
5.2. Автом атическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа 
на автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC.
В случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю 
необходимо удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов 
для иммуноферментного анализа производства RADIM.
6. А Н А Л И З И Р У Е М Ы Е  О Б Р А З Ц Ы
Данный набор может применяться для исследования образцов сыворотки и плазмы крови 
человека. Сильно гемолизованные или липемичные образцы, а также присутствие в образцах 
фибрина могут оказывать влияние на результаты анализа. Перед постановкой анализа следует 
убедиться в том, что образцы прозрачные и не содержат осадка. Допускается хранение образцов 
при температуре +2..,8°С в течение 1  недели. Для хранения в течение более длительного 
времени образцы следует заморозить при -20°С. Избегайте повторного оттаивания и 
замораживания образцов.
Перед проведением анализа разведите образцы в соотношении 1:300 с помощью 
приготовленного Раствора для разведения (см. п.2.2.2.). Например: 10 мкл образца + 2990 мкл 
раствора для разведения,
7. П Р О В Е Д Е Н И Е  А Н А Л И ЗА *
Доведите реагенты до комнатной температуры (+18.. .25°С).
Тщательно перемешайте образцы перед проведением анализа.
7.1. Промаркируйте лунки для контролей (в дубликатах) и исследуемых образцов (в 
монопликатах). Оставьте 1  лунку для обнуления (Blank).
7.2. Внесите по 100 мкл контролей и разведенных образцов в соответствующие лунки.
Внимание: Контроли готовы к использованию и не требуют разведения.
7.3. Внесите 100 мкл приготовленного Раствора для разведения в лунку для обнуления.
7.4. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 
60±5 минут при 37±2°С.
7.5. Удалите содержимое лунок и промойте их 3 раза, внося при каждой промывке по 350 мкл 
разведенного Промывочного раствора. Тщательно удалите жидкость из лунок.
7.6. Внесите во все лунки по 100 мкл Конъюгата.
4/7


--- стр. 93 ---
'  7.7. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в сххггав набора) и инкубируйте его в течение 30+2 минут 
при 37±2°С
7.8. Удалите содержимое лунок и промойте планшет (см. п.7.5).
7.9. Внесите во все лунки по 100 мкл Раствора ТМБ.
7.10. Инкубируйте в течение 10 минут при 37±2"С или 15 минут при комнатной температуре 
(+18...25®С). Избегайте попадания света на планшет.
7.11. Внесите во все лунки по 100 мкл Стоп-реагента.
* При использовании автоматического анализатора производства RADIM или/и SEAC, действуйте 
в соответствии с его инструкцией.
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 6.
В .РЕГИ СТ РА Ц И Я  Р Е З У Л Ь Т А Т О В
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. 
Референсный фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо 
вычитать величину оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех 
остальных лунок. В случае если значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, 
считывание результатов проводят при длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не 
позже, чем через 15 минут после остановки реакции.
Примечание: при использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или 
SEAC для планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять 
значения автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм.
9. УЧЕТ Р Е З У Л Ь Т А Т О В
Определить оптическую плотность (ОП) отрицательного контроля, положительного контроля и 
Cut-off контроля (пороговое значение). Присутствие или отсутствие антител класса 1дМ против 
ВПГ определяется путем сравнения ОП образца с ОП Cut-off контроля.
Образцы с ОП ниже ОП Cut-off контроля признают не реактивными (не содержащими антитела класса 
1дМ  против ВПГ).
Образцы с ОП выше ОП Cut-off контроля признают реактивными (содержащими антитела класса 
1дМ  против ВПГ).
Область значений ОП ± 10% от ОП Cut-off контроля является областью сомнительных 
значений. Если ОП образца попадает в эти пределы, результат считается сомнительным и 
требует повторного тестирования для подтверждения.
9.1. Критерии достоверности
Прежде чем начать обсчет результатов, убедитесь, что ОП контрольных точек соответствуют
Описание Условие
Отрицательный контроль < 0,200
Положительный контроль > 0,700
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ.
9.2. Интерпретация результатов
Результат определяется как отношение ОП образца к ОП Cut-off контроля. Эта величина называется 
индексом.
ОП образца
Индекс =
--------------------------------
ОП Cut-off контроля
Образцы с Индексом < 0,9 признают отрицательными по содержанию антител 1дМ класса 
против ВПГ.
Образцы с Индексом >1,1 признают положительными по содержанию антител 1дМ  класса против 
ВПГ.
Образцы с Индексом 0,9 -  1,1 (ОП ± 10% от Cut-off контроля) считаются сомнительными и 
требуют повторного тестирования.
9.3.Пример подсчета
Нижеследующие данные приведены в качестве примера и не могут быть использованы как
Описание ОП при 450 нм 1дМ к ВПГ Индекс
Отрицательный контроль 0.082
Cut-off контроль 0.504
Положительный контроль 1.500
Образец 0.889 + 1,76
Исследуемый образец определен как положительный (+) на наличие антител класса 1дМ к ВПГ.
5/7


--- стр. 94 ---
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
Набор должен храниться при температуре  +2. ..8°С.
Срок годности реагентов указан на этикетках флаконов.
Вскрытые реагенты стабильны при температуре  +2. ,.8°С в течение 2 месяцев.
11. ОГРАНИЧЕНИЯ В ПРИМЕНЕНИИ АНАЛИЗА
Наличие антител класса IgG к ВПГ в любых концентрациях не исключает текущей инфекции. 
Таким образом, определение специфических антител класса 1дМ является основным методом для 
ранней диагностики острой инфекции. В случае заболевания раннее вмешательство значительно 
уменьшает риск. Однако результаты анализа должны интерпретироваться с осторожностью и 
подтверждаться клиническими данными и дальнейшей диагностикой.
СХЕМА АНАЛИЗА
Предварительное разведение образцов: 1:300
— ------------___Лунки
Реагенты ' ——
Blank Контроли Образцы
Отрицательный, положительный и 
Cut-off контроль NEG POS |С/0|
100 мкл —
Образцы — ----- 100 мкл
Раствор для разведения |DIL 100 мкл ----
Инкубация: 37±2°С, 60±5 мин. 
Промывка: 3 х 350 мкп.
Конъюгат CONJ 100 мкл 100 мкл 100 ML
-  Инкубация; 37±2°С, 30±2 мин. 
Промывка: 3 х 350 мкл.
Раствор ТМБ |ТМВ 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубация: вариант А: 37±2°С, 10 мин; вариант В: комнатная температура, 15 мин. 
Стоп-реагент |STOP| 100 мкл 100 мкп 100 мкл
Считывание: 450-405 нм.
6/7


--- стр. 97 ---
«УТВЕРЖДАЮ г. - ^  
Генеральны й
О О О  «Компани*}' "
Ш вы рев М.В. ^
« / /  » Ш ^ 1 ^ ^ \ С о г } -> р ,^ ^ ^ ° 2 (У Ч г
Н А Б О Р  Р Е А Г Е Н Т О В  ДЛЯ 
И М М У Н О Ф ЕР М Е Н Т Н О Г О  О П Р Е Д Е Л Е Н И Я  И М М У Н О Г Л О Б У Л И Н О В  G
К CHLAMYDIA TRACHOMATIS  В С Ы В О Р О Т К Е  И П Л А З М Е  К РО В И  Ч Е Л О В Е К А
Хламидии IgG
Только для In vitro диагностики
1. Н А З Н А Ч Е Н И Е
К роду Chlamydia относятся чувствительные к антибиотикам грамотрицательные бактерии. В 
хламидийных клетках содержится как ДНК, так и РНК, а также рибосомы. Размножение 
осуществляется простым делением. Хламидии являются облигатными внутриклеточными 
паразитами.
Все представители рода Chlamydia имеют общий групповой, родоспецифичный антиген 
(липополисахаридный комплекс), хотя могут отличаться между собой серологически и по степени 
патогенности. Chlamydia trachomatis  является возбудителем одного из наиболее распространенных 
заболеваний, передающихся половым путем. Этот вид является основной причиной инфекций 
мочеполовой системы у мужчин (негонококковый уретрит, эпидидимит) и часто вызывает 
воспалительные процессы у женщин.
Хламидийную инфекцию половых путей мужчин часто классифицируют как негонококковый 
уретрит. При двойной инфекции с Neisseria gonorrhoeae развивается постгонококковый уретрит. 
Наиболее частым осложнением хламидийным уретрита у мужчин является эпидидимит.
У женщин наиболее часто инфицируется шейка матки. Если хламидиальный цервицит не 
выявлен своевременно, воспалительный процесс может распространиться на фаллопиевы трубы и 
вызвать сальпингит, следствием которого может быть бесплодие. Chlamydia trachomatis участвует 
также в воспалительных процессах органов малого таза, включая воспаления шейки матки, 
собственно матки, фаллопиевых труб и яичников.
Обследование беременных женщин на наличие антител к Chlamydia trachomatis  позволяет 
установить правильный диагноз и избежать возможных осложнений. Своевременная диагностика 
позволяет предотвратить передачу инфекции от матери к плоду. Инфицирование плода приводит к 
серьезным последствиям, включая конъюнктивиты, пневмонию и другие осложнения.
Для широкомасштабных программ скрининга популяции с умеренным или низким риском 
инфицирования диагностика возбудителя путем выделения из культуры клеток экономически 
нецелесообразна по причине трудоемкости сбора и транспортировки образцов и технической 
сложности анализа.
Научными исследованиями было подтверждено, что высокие концентрации специфических 
антител класса IgG и IgA к антигену Chlamydia в сыворотке крови могут служить адекватным 
маркером для ранней диагностики хламидийной инфекции без применения инвазивных процедур,
2. Х А РА К Т ЕРИ С Т И К И  Н А Б О Р А
2.1. П РИ Н Ц И П  Д Е Й С Т В И Я
В наборе использован принцип иммуноферментного анализа (ИФА), в качестве ферментной 
метки применяется пероксидаза хрена. Во время первой инкубации антитела класса IgG к антигену 
Chlamydia (если они есть в образце) связываются с иммобилизованным на внутренней поверхности 
лунок антигеном Chlamydia (серотип L2). Несвязавшийся материал удаляется с помощью промывки. 
При последующей инкубации к образовавшемуся комплексу антиген С/7/атус//а-антитело 
взаимодействует с антителами к иммуноглобулину G человека, конъюгированными с пероксидазой 
хрена. После повторной промывки в лунки добавляется раствор ТМБ, что приводит к развитию 
окраски под воздействием фермента. Цветовую реакцию останавливают добавлением Стоп-реагента 
(HCI). Интенсивность окрашивания раствора измеряется на спектрофотометре при длине волны 
450 нм или 405 нм и будет прямо пропорциональна концентрации антител класса IgG к Chlamydia в 
контрольных и исследуемых образцах.


--- стр. 98 ---
»
2.2. СОСТАВ НАБОРА
Реагент
Планшет
ж в .
Положительный контроль 
POS
Контроль Cut-off
л_ _ _ _
Промывочный
lacTBop
a s hI
Раствор для разведения
Ж
Отрицательный контроль
Конъюгат
ICONJ
Раствор ТМБ
Стоп-реагент
STOP
Количество
1х 96 лунок
1  X 2 мл
1  X 2,5 мл
1  X 50 мл
1  X 20 мл
1  X 2 мл
1  X 14 мл
1  X 14 мл
1  X 14 мл
Состояние
Готов к использованию 
Ready for use ___________
Готов к использованию 
Ready for use ___________
Готов к использованию 
Ready for use ___________
Концентрат
Cone.
Концентрат
Cone.
Готов к использованию 
Ready for use
Готов к использованию 
Ready for use ___________
Готов к использованию 
Ready for use
Готов к использованию 
Ready for use
Количество реагентов рассчитано на 96 лунок.
2.2.1. Специф ические реагенты
• Им муносорбент -  планш ет (МТР) / Coated m icroplate: 1  планшет из 12 разборных стрипов 
по 8 лунок (всего 96 лунок), лунки стрипов планшета покрыты очииденным и инактивированным 
антигеном Chlamydia trachomatis.  Неиспользованные стрипы хранить при температуре +2...8°С в 
плотно закрытом пластиковом пакете.
• Полож ительны й контроль (POS) / Positive C ontrol: -  1  флакон, Раствор на основе 
сыворотки крови, содержит антитела класса IgG к антигену Chlamydia. Готов к использованию 
Консервант: NaNs (< 0,1%).
• Контроль C ut-off (С/О) / C ut-off C ontrol: -  1  флакон. Раствор голубого цвета на основе 
сыворотки крови, содержит антитела класса IgG к антигену Chlamydia. Готов к использованию. 
Консервант: NaNs (< 0.1%).
• Конъю гат (CONJ) / Enzyme conjugate: -  1  флакон. Раствор розового цвета на основе 
сыворотки крови со стабилизаторами, содержит мышиные моноклональные антитела к IgG человека, 
конъюгированные с пероксидазой хрена (HRPO). Готов к использованию. Консервант: неомицин.
2.2.2. Реагенты, общ ие для п р о д у к т о в л и н и й «To.R.C.H. -  8.Т.Р.» производства компании  
RADIM
• П р ом ы вочны й  раствор 20х (WASH) / W ashing Solution (concentrated): -  1  флакон. 
Фосфатный буферный раствор, содержащий Твин 20. Консервант; Тимеросал (< 0.05%). Перед 
использованием развести необходимое количество концентрата дистиллированной водой в 
соотношении 1:20. В случае образования нерастворимых кристаллов поместить раствор в термостат 
(+37°С) на несколько минут. Приготовленный промывочный раствор хранить не более 30 суток при 
+2...8“С.
• Раствор для разведения 20х (DIL) / Sample D iluent (concentrated): -  1  флакон. Раствор 
красного цвета на основе сыворотки крови со стабилизаторами. Консервант: ЫаМз (<0.1%). 
Непосредственно перед применением развести в соотношении 1:20 подготовленным к 
использованию промывочным раствором (см. выше). Приготовленный раствор для разведения хранить 
не более 30 суток при +2... 8°С.
• О трицательны й контроль (NEG) / Negative C ontrol: -  1  флакон. Раствор красного цвета 
на основе сыворотки крови, не содержит антител класса IgG к антигену Chlamydia. Готов к 
использованию. Консервант: NaNa (< 0.1%).
• Раствор Т М Б  (ТМВ): 1  флакон. Раствор тетраметилбензидина в цитратно-фосфатном 
буфере, содержащем DMSO и Н 2О2.  Готов к использованию.
• Стоп-реагент (STOP) / Blocking Reagent: 1  флакон. 1Н НС1. Готов к использованию.
• Бумага для заклеивания планшета (СРА ) / Adhesive plate sealers.
• П ластиковы й пакет с замком.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ


--- стр. 99 ---
г
3.1 Д иагностическая специф ичность
Диагностическая специфичность данного метода оценивалась на группе из 263 образцов, 
отрицательных по содержанию антител класса IgG к антигену Chlamydia. Специфичность составляет 
99% .
3.2 Д иагностическая чувствительность
Диагностическая чувствительность данного метода оценивалась на группе из 104 образцов, 
полученных от пациентов, перенесших хламидиоз и содержащих антитела класса IgG к антигену 
Chlamydia. Чувствительность составляет 93,2%.
3.3 Аналитическая специф ичность
Аналитическая специфичность определяется как способность анализа точно выявлять 
специфический аналит в присутствии интерферирующих факторов в матриксе образца. Контрольные 
исследования показали, что присутствие антикоагулянтов (соли ЭДТА и гепарина) не влияют на 
характеристики анализа.
3.4 П рецизионность
Прецизионность оценивалась на анализаторе производства RADIM посредством определения 
повторяемости и воспроизводимости анализа (внутри- и межаналитический коэффициенты 
вариации) на трех сыворотках с различной концентрацией антител класса IgG к антигену Chlamydia.
П овторяем ость (Внутрианалитический коэф ф ициент вариации)
Сыворотка Среднее значение ±
Индекс
SD КВ, % Кол-во
репликатов
а 2,16 ± 0,23 10,42 10
Ь 4,95 ± 0,15 3,10 10
с 9,53 ± 0,64 6,77 10
В осп р ои звод и м ость (М ежаналитический коэф ф ициент вариации)
Сыворотка Среднее значение ±
Индекс
SD КВ. % Кол-во
постановок
а
Ь
с
3,69
2,26
1,24
±
±
±
0,46
0,31
0,14
12.40 
13,60
11.40
10
10
10
4. М Е Р Ы  П РЕ Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И
Для получения д остовер н ы х результатов необходим о соб л ю д ать следую щ ие правила;
Не смешивайте специфические реагенты разных серий набора (см. п.2..2.1). Не смешивайте 
их с реагентами других производителей.
Смешивание общих реагентов разных серий (см. п.2.2.2.) допускается.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их загрязнение.
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в чистой 
посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для каяодого образца или 
реагента.
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и 
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам анализа.
-  В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует 
убедиться, что все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, 
спектрофотометр, термостат) проходит регулярную проверку и поддерживается в исправном 
состоянии.
Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок, или 
автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок может 
привести к неверной интерпретации результатов анализа.
Убедитесь в исправности спектрофотометра, Использование неоткалиброванного 
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению 
оптической плотности образцов и последующему неверному результату анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». Если 
температура инкубации отклоняется от 37±2°С, это может привести к снижению чувствительности 
анализа и/или биологической денатурации образцов и реагентов. Следует периодически проверять 
показания датчика температуры.
3


--- стр. 100 ---
т
I -  Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или образцов.
I Несоблюдение температурного режима хранения может привести к биологической денатурации
I компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
I - Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная идентификация
I  может привести к ложным результатам и постановке ошибочного клинического диагноза.
I  Чтобы исклю чить заражение персонала и загрязнение окруж аю щ ей среды, следует
I  соблюдать следую щ ие правила:
I -  При работе с потенциально инфекционным материалом и во время проведения анализа
I  следует надевать одноразовые защитные перчатки.
I  -  Не разрешается пипетировать ртом.
I  -  Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и курение в помещениях,
I предназначенных для работы с наборами.
I -  Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и Стоп-реагентом. Избегать
I  попадания в глаза, на кожу и слизистые. В случае контакта тщательно промыть пораженный участок
I проточной водой.
I  -  Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на присутствие
I HBsAg, антител к ВИЧ и к вирусу гепатита С. Несмотря на полученные отрицательные результаты,
I следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не может гарантировать полное
I отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и другие реагенты, содержащие
сыворотку крови человека, следует считать потенциально инфекционными.
Следует избегать разбрызгивания реагентов и образования аэрозолей. Места, на которые 
попал пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. 
Использованный при этом протирочный материал следует считать потенциально инфицированным 
и подвергнуть соответствующей обработке перед утилизацией.
Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных 
азидов металлов в чугунных и медных водопроводных трубах, после слива использованных 
реагентов следует промыть сток большим объемом проточной воды.
5. М А Т Е Р И А Л Ы  И О Б О Р У Д О В А Н И Е , НЕ В Х О Д Я Щ И Е  В Н А Б О Р
5.1. М атериалы  и оборудование, необходим ы е при ручной постановке анализа
Микропипетки, в том числе многоканальные, высокой точности (10-200 мкл, менее 3% ошибки) 
со сменными наконечниками.
Градуированный цилиндр для разведения реагентов.
Дистиллированная вода.
Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2 °С. 
Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления содержимого 
из лунок.
Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность 
раствора в лунках в диапазоне 0-3 ед. опт. плотн. при длинах волн 620,450 и 405нм. 
Миллиметровая бумага.
t
5.2. Автом атическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа на 
автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC.
В случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю необходимо 
удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для иммуно- 
ферментного анализа, производства RADIM.
6. А Н А Л И З И Р У Е М Ы Е  О Б Р А З Ц Ы
Данный набор может применяться для исследования образцов сыворотки и плазмы крови 
человека. Умеренная липемия в образцах не оказывает влияния на результаты, однако сильная 
липемия или гемолиз, а также присутствие в образцах фибрина могут оказывать влияние на 
результаты анализа. Перед постановкой анализа следует убедиться в том, что образцы прозрачные и  
не содержат осадка. Допускается хранение образцов при температуре +2...8°С в течение 1  недели. 
Для хранения в течение более длительного времени образцы следует заморозить при -20°С. 
Избегайте повторного оттаивания и замораживания образцов.
Перед проведением анализа разведите образцы в соотношении 1:300 Раствором для 
разведения, приготовленным в соответствии с п. 2.2.2. Например: 10 мкл образца + 2990 мкл 
Раствора для разведения.
7. П Р О В Е Д Е Н И Е  А Н А Л И ЗА *
-  Доведите реагенты до комнатной температуры (+18.. ,25°С).
Перед проведением анализа тщательно перемешайте образцы.


--- стр. 101 ---
* 7.1. Промаркируйте лунки для Контролей и исследуемых образцов. Контроли вносите в
дубликатах, образцы - в монопликатах. Оставьте одну лунку для обнуления (Blank).
7.2. Внесите по 100 мкл Контролей и разведенных образцов в соответствующие лунки.
J  Внимание: Контроли готовы к использованию и не требуют разведения.
7.3. Внесите 100 мкл подготовленного к использованию Раствора для разведения (см п. 2.2.2.) в лунку 
дня обнуления.
7.4. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 
60±5 минут при температуре 37±2°С.
7.5. Удалите содержимое лунок и промойте лунки 4 раза, внося при каждой промывке по 350  
мкл предварительно разведенного Промывочного раствора.Тщательно удалите жидкость из лунок.
7.6. Внесите во все лунки по 100 мкл Конъюгата.
7.7. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 30+2 
минут при 37±2”С.
7.8. Удалите содержимое лунок и промойте планшет (см. п.7.5).
7.9. Внесите во все лунки по 100 мкл раствора ТМБ.
7.10. Инкубируйте в течение 10 минут при 37±2'С или 15 минут при комнатной температуре 
(+18...25“С). Избегайте попадания света на планшет.
7.11. Внесите во все лунки по 100 мкл Стоп-реагента.
* При использовании автоматического анализатора производства RAD1M и/или SEAC, 
действуйте в соответствии с Инструкцией по эксплуатации анализатора.
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 6.
В. Р Е Г И С Т Р А Ц И Я  Р Е З У Л Ь Т А Т О В
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. 
Референсный фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо 
вычитать величину оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех 
остальных лунок. В случае, если значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, 
считывание результатов проводят при длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не 
позже, чем через 15 минут после остановки реакции.
Примечание; при использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или 
SEAC для планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять 
значения автоматически на 3 длинах волн; 450, 405 и 620 нм.
9. У Ч ЕТ  Р Е З У Л Ь Т А Т О В
Определить оптическую плотность (ОП) Отрицательного контроля, Положительного контроля и 
Cut-off контроля (пороговое значение). Присутствие или отсутствие антител класса IgG к антигену 
Chlamydia trachomatis  определяется путем сравнения ОП образца с ОП Cut-off контроля.
Образцы с ОП ниже ОП Cut-off контроля признают не содержащими антитела класса IgG к 
антигену Chlamydia.
Образцы с ОП выше ОП Cut-off контроля признают содержащими антитела класса IgG к 
антигену Chlamydia.
Область значений ОП ± 10% от ОП Cut-off контроля является областью сомнительных значений. 
Если ОП образца попадает в эти пределы, результат считается сомнительным и требует повторного 
исследования для подтверждения.
9.1. Критерии д остоверности
Прежде чем начать обсчет результатов, убедитесь, что ОП контрольных точек соответствуют
Условие
Отрицательный контроль < 0,200
Положительный контроль > 0,700
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ.
9.2. Интерпретация результатов
Результат определяется как отношение ОП образца к ОП Cut-off контроля. Эта величина 
называется индексом.
ОП образца
Индекс =
--------------------------------
ОП Cut-off контроля
Образцы с Индексом < 0,9 признают отрицательными по содержанию антител класса IgG к 
антигену Chlamydia.
Образцы с Индексом > 1,1 признают положительными по содержанию антител класса IgG к 
антигену Chlamydia.


--- стр. 102 ---
г
Образцы с Индексом 0,9 -  1,1 (ОП ± 10% от Cut-off контроля) считаются сомнительными и 
требуют повторного тестирования.
Результаты анализа нескольких образцов, полученных от одного пациента с промежутком 
времени, допускается сравнивать между собой только в том случае, если все образцы были 
исследованы в одном и том же анализе. В этом случае изменение ОП во втором образце более чем 
на 60% можно считать существенным признаком недавней или прогрессирующей инфекции. В этом 
случае рекомендуется исследовать образец на содержание специфических антител класса IgA.
9.3. Пример подсчета
Нижеследующие данные приведены исключительно в качестве примера. Не следует
ОП 450 п т IqG Индекс
Отрицательный контроль 0,082
Cut-off Контроль 0,450
Положительный контроль 2,200
Образец 0,889 + 1,97
Исследуемый образец признается положительным (+) по содержанию антител класса IgG к 
антигену Chlamydia.
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
Набор должен храниться при температуре  + 2..,8°С.
Срок годности реагентов указан на этикетках флаконов.
Вскрытые реагенты стабильны при температуре +2.. .8°С в течение 2 месяцев.
11. ОГРАНИЧЕНИЯ В ПРИМЕНЕНИИ АНАЛИЗА
При определении у пациента иммунитета к Chlamydia наличие антител класса IgG в любой 
концентрации не исключает возможности наличия инфекции в настоящий момент. Следовательно, 
для раннего выявления случаев острой инфекции необходимо определение специфических 
антител класса IgA. В случае выявления заболевания своевременная медицинская помощь 
существенно снижает риск отрицательных последствий. Однако, результаты анализа должны 
интерпретироваться с осторожностью и подтверждаться клиническими данными и дальнейшей 
диагностикой.
СХЕМА АНАЛИЗА
Предварительное разведение образцов; 1:300
Реагенты Blank Контроли Исследуемые
образцы
Контроли INEGI PCS |С/0 — 100 мкл
Исследуемые образцы 100 мкл
Раствор для разведения |d IL 100 мкл
Инкубация; 37±2°С, 60±5 мин. 
Промывка: 4 х 350 мкл.
Конъюгат CONJ 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубация; 37±2°С, 30±2 мин. 
Промывка: 4 х 350 мкл.
Раствор ТМБ rriVlBl 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубация: А: 37±2°С, 10 мин; или В: комнатная температура 15 мин. 
Стоп-реагент |STOP| 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Определение ОП при 450 - 405 нм.


--- стр. 106 ---
l i J S Ready for use
I f e
ывочный раствор 1  X 50 мл Концентрат
Cone.
PacTf
к
зор для разведения 1  X 20 м л Концентрат
Cone.
Отри
|neg
цательный контроль 1  X 2 м л Готов к использованию 
Ready for use
Поло
Ipos
жительный контроль 1  X 2 м л Готов к использованию 
Ready for use
Cut-off контроль
ш
1  X 2,5мл Готов к использованию 
Ready for use
Коны
^ON.
огат 1  X 14 м л Готов к использованию 
Ready for use
РастЕ
ТМБ
юр ТМБ 1  X 14 м л Готов к использованию 
Ready for use
ш
реагент 1  X 14 м л Готов к использованию 
Ready for use
Количество реагентов рассчитано на  96 определений.
2.2.1. Специф ические реагенты
• И м м уносорбент -  планш ет |МТР| I Coated microplate: 1  планшет из 12 разборных стрипов по 8 
лунок (всего 96 лунок), лунки стрипов планшета покрыты очищенным и инактивированным антигеном 
Chlamydia trachomatis.  Неиспользованные стрипы хранить при температуре +2...8°С в плотно 
закрытом пластиковом пакете.
• Положительный контроль |POS| /Positive Control; -  1  флакон, Раствор на основе сыворотки крови, 
содержит антитела класса IgA к антигену Chlamydia. Готов к использованию. Консервант: МаМз (< 0,1%).
• Контроль Cut-off |С/0  
сыворотки крови, содержит 
Консервант: NaN 3 (< 0.1%).
/ Cut-off Control: -  1  флакон. Раствор голубого цвета на основе 
антитела класса IgA к антигену Chlamydia. Готов к использованию.
Конъю гат |CONJ| / Enzym e Conjugate: -  1  флакон. Раствор розового цвета на основе сыворотки 
крови со стабилизаторами, содержит козьи антитела к IgA человека, конъюгированные с 
пероксидазой хрена (HRPO). Готов к использованию. Консервант: неомицин.
2.2.2. Реагенты, общ ие для продуктов линий «To.R.C.H. -  S.T.D.» производ ства компании  
RADIM
• П р ом ы воч ны й  раствор 20х |WASH| / W a sh in g Solution (concentrated): -  1  флакон. Фосфатный 
буферный раствор, содержащий Твин 20. Консервант; Тимеросал (< 0.05%). Перед использованием 
развести необходимое количество концентрата дистиллированной водой в соотношении 1:20. В 
случае образования нерастворимых кристаллов поместить раствор в термостат (+37°С) на несколько 
минут. Приготовленный промывочный раствор хранить не более 30 суток при +2...8°С.
• Раствор для разведения 20х / Sam ple Diluent (concentrated): -  1  флакон Раствор
красного цвета на основе сыворотки крови со стабилизаторами. Консервант: МаЫз (< 0.1%). 
Непосредственно перед применением развести в соотношении 1:20 подготовленным к 
использованию промывочным раствором (см. выше). Приготовленный раствор для разведения 
хранить не более 30 суток при +2...8°С.
• О трицательны й контроль |NEG| / Negative Control: -  1  флакон. Раствор красного цвета на 
основе сыворотки крови, не содержит антител класса IgA к антигену Chlamydia. Готов к 
использованию. Консервант: МаМз (< 0.1%).
• Раствор Т М Б  tTMB|:  -  1  флакон. Раствор тетраметилбензидина в цитратно-фосфатном буфере, 
содержащем и DMSO и НгОг- Готов к использованию.
• Стоп-реагент |STOP| / Blo ckin g R e a gent: -  1  флакон. 1Н HCI. Готов к использованию.
• Бумага для заклеивания планш ета |СРД| / A dhesive plate sealers.
• Пластиковы й пакет с замком.
3. АН А Л И Т И Ч ЕСК И Е И Д И А ГН О С Т И Ч Е С К И Е  Х А РА К Т ЕРИ С Т И К И
3.1 Диагностическая специф ичность
Диагностическая специфичность данного метода оценивалась на группе из 208 образцов, 
отрицательных по содержанию антител класса IgA к антигену Chlamydia. Специфичность составляет 
98%.
3.2 Диагностическая чувствител ьн ость


--- стр. 107 ---
Диагностическая чувствительность данного метода оценивалась на группе из 59 образцов, 
полученных от пациентов, перенесших хламидиоз и содержащих антитела класса IgA к антигену 
Chlamydia. Чувствительность составляет 100%.
3.3 Аналитическая специф ичность
Аналитическая специфичность определяется как способность анализа точно выявлять 
специфический аналит в присутствии интерферирующих факторов в матриксе образца. Контрольные 
исследования показали, что присутствие антикоагулянтов (соли ЭДТА и гепарина) не влияют на 
характеристики анализа.
3.4 П рецизионность
Прецизионность оценивалась на анализаторе производства RADIM посредством определения 
повторяемости и воспроизводимости анализа (внутри- и межаналитический коэффициенты 
вариации) на трех сыворотках с различной концентрацией антител класса IgA к антигену Chlamydia.
П овторяем ость (Внутрианалитический коэф ф ициент вариации)
Сыворотка
Среднее значение ± SD
C.V., % Кол-во
репликатовОП (при 450 нм)
а 0.522 ± 0.037 7.17 10
Ь 1.054 ± 0.103 9.76 10
с 3.166 ± 0.157 4.96 10
В оспр ои звод и м ость (Межаналитический коэф ф ициент вариации)
Сыворотка
а
Ь
с
Среднее значение SD
0.488
1.152
2.067
ОП (при 450 нм)
±
±
±
0.683
0.130
0.306
C.V., %
14.0
11.3
14.8
Кол-во
постановок
10
10
10
f
4. М Е Р Ы  П Р Е Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И
Для получения д остовер н ы х результатов необходим о соб л ю д ать следую щ ие правила:
Не смешивайте специфические реагенты разных серий набора (см. п.2..2.1). Не смешивайте 
их с реагентами других производителей.
Смешивание общих реагентов разных серий (см. п.2.2.2.) допускается.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их загрязнение.
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте только дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в 
чистой посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для ка ко го  образца или 
реагента.
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и 
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам 
анализа.
В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует 
убедиться, что все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, 
спектрофотометр, термостат) проходит регулярную проверку и поддерживается в исправном состоянии.
Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок или 
автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок может 
привести к неверной интерпретации результатов анализа.
Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению 
оптической плотности образцов и последующему неверному результату анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». Если 
температура инкубации отклоняется от 37±2“С, это может привести к снижению чувствительности 
анализа и/или биологической денатурации образцов и реагентов. Следует периодически проверять 
показания датчика температуры.
Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или образцов. 
Несоблюдение температурного режима хранения может привести к биологической денатурации 
компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
3


--- стр. 108 ---
-  Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная идентификация 
может привести к ложным результатам и постановке ошибочного клинического диагноза.
Чтобы исклю чить заражение персонала и загрязнение окруж аю щ ей среды, следует  
соблюдать следую щ ие правила:
-  При работе с потенциально инфекционным материалом и во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
-  Не разрешается пипетировать ртом,
-  Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и курение в помещениях, 
предназначенных для работы с наборами.
-  Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и Стоп-реагентом. Избегать 
попадания в глаза, на кожу и слизистые. В случае контакта тщательно промьп-ь пораженный участок 
проточной водой.
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на присутствие 
HBsAg, антител к ВИЧ и к вирусу гепатита С. Несмотря на полученные отрицательные результаты, 
следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не может гарантировать полное 
отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и другие реагенты, содержащие 
сыворотку крови человека, следует считать потенциально инфекционными,
Следует избегать разбрызгивания реагентов и образования аэрозолей. Места, на которые 
попал пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. 
Использованный при этом протирочный материал следует считать потенциально инфицированным и 
подвергнуть соответствующей обработке перед утилизацией.
Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных 
азидов металлов в чугунных и медных водопроводных трубах, после слива использованных 
реагентов следует промыть сток большим объемом проточной воды.
5. М А Т Е Р И А Л Ы  И О Б О Р У Д О В А Н И Е , НЕ В Х О Д Я Щ И Е  В Н А Б О Р
5.1. М атериалы  и оборудование, необходим ы е при ручной постановке анализа
Микропипетки, в том числе многоканальные, высокой точности (10-200 мкл, менее 3% ошибки) 
со сменными наконечниками.
Градуированный цилиндр для разведения реагентов,
-  Дистиллированная вода.
Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С,
Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления содержимого 
из лунок,
- Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность 
раствора в лунках в диапазоне 0 -3  ед. опт, плотн. при длинах волн 620,450 и 405нм.
- Миллиметровая бумага.
5.2. Автом атическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа на 
автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC,
В случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю необходимо 
удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для иммуно- 
ферментного анализа производства RADIM,
6. А Н А Л И З И Р У Е М Ы Е  О Б Р А З Ц Ы
Данный набор может применяться для исследования образцов сыворотки и плазмы крови 
человека. Умеренная липемия в образцах не оказывает влияния на результаты, однако сильная 
липемия или гемолиз, а также присутствие в образцах фибрина могут оказывать влияние на 
результаты анализа. Перед постановкой анализа следует убедиться в том, что образцы прозрачные и не 
содержат осадка. Допускается хранение образцов при температуре +2,,,8°С в течение 1-2 суток. Для 
хранения в течение более длительного времени образцы следует заморозить при -20°С. Избегайте 
повторного оттаивания и замораживания образцов.
Перед проведением анализа разведите образцы в соотношении 1:300 Раствором для 
разведения, приготовленным в соответствии с п. 2,2.2. Например; 10 мкл образца + 2990 мкл 
Раствора для разведения.
7. П Р О В Е Д Е Н И Е  А Н А Л И ЗА *
Доведите реагенты до комнатной температуры (+18.. .25'’С).
Перед проведением анализа тщательно перемешайте образцы.
7.1. Промаркируйте лунки для Контролей и исследуемых образцов. Контроли вносите в дубликатах, 
образцы - в монопликатах. Оставьте одну лунку для обнуления (Blank),
7.2. Внесите по 100 мкл Контролей и разведенных образцов в соответствующие лунки.
Внимание: Контроли готовы к использованию и не требуют разведения.


--- стр. 109 ---
7.3. Внесите 100 мкл подготовленного к использованию Раствора для разведения в лунку для обнуления.
7.4. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 60±5  
минут при температуре 37±2°С.
7.5. Удалите содержимое лунок и промойте лунки 4 раза, внося при каждой промывке по 350 мкл  
предварительно разведенного Промывочного раствора. Тщательно удалите жидкость из лунок.
7.6. Внесите во все лунки по 100 мкл Конъюгата.
7.7. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 30±2 минут 
при 37±2°С.
7.8. Удалите содержимое лунок и промойте планшет (см. п.7.5).
7.9. Внесите во все лунки по 100 мкл раствора ТМБ.
7.10. Инкубируйте в течение 10 минут при 37±2“С  или 15 минут при комнатной температуре  
(+18...25°С). Избегайте попадания света на планшет.
7.11. Внесите во все лунки по 100 мкл Стоп-реагента.
* При использовании автоматического анализатора производства RADIM и/или SEAC, действуйте 
в соответствии с Инструкцией по эксплуатации анализатора.
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 6.
В. Р Е Г И С Т Р А Ц И Я  Р Е З У Л Ь Т А Т О В
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. 
Референсный фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо 
вычитать величину оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех 
остальных лунок. В случае, если значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, 
считывание результатов проводят при длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не 
позже, чем через 15 минут после остановки реакции.
Примечание: при использовании автоматических анализаторов производства RAD1M и/или 
SEAC для планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять 
значения автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм, что позволит расширить область 
кривой.
9. У Ч ЕТ  Р Е З У Л Ь Т А Т О В
Определить оптическую плотность (ОП) Отрицательного контроля, Положительного контроля и 
cut-off контроля (пороговое значение). Присутствие или отсутствие антител класса IgA к Chlamydia 
trachomatis определяется путем сравнения ОП образца с ОП Cut-off контроля.
Образцы с ОП ниже ОП Cut-off контроля признают не содержащими антитела класса IgA к 
антигену Chlamydia.
Образцы с ОП выше ОП Cut-off контроля признают содержащими антитела класса IgA к 
антигену Chlamydia.
Область значений ОП ± 10% от ОП Cut-off контроля является областью сомнительных 
значений. Если ОП образца попадает в эти пределы, результат считается сомнительным и требует 
повторного исследования для подтверждения.
9.1. Критерии д остоверности
Прежде чем начать обсчет результатов, убедитесь, что ОП контрольных точек соответствуют следующим 
критериям:
Условие
Отрицательный контроль < 0,200
Положительный контроль >0,700
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ.
9.2. Интерпретация результатов
Результат определяется как отношение ОП образца к ОП Cut-off контроля. Эта величина называется 
индексом.
ОП образца
Индекс =
--------------------------------
ОП Cut-off контроля
Образцы с Индексом < 0,9 признают отрицательными по содержанию антител класса IgA к 
антигену Chlamydia.
Образцы с Индексом >1,1 признают положительными по содержанию антител класса IgA к 
антигену Chlamydia.
Образцы с Индексом 0,9 -  1,1 (ОП ± 10% от Cut-off контроля) считаются сомнительными и 
требуют повторного тестирования.
Результаты анализа нескольких образцов, полученных от одного пациента с промежутком времени, 
допускается сравнивать между собой только в том случае, если все образцы были исследованы в одном 
и том же анализе. В этом случае изменение ОП во втором образце более чем на 60% можно считать


--- стр. 110 ---
существенным признаком недавней или прогрессирующей инфекции. В этом случае рекомендуется 
исследовать образец на содержание специфических антител класса IgG.
9.3. Пример подсчета
Нижеследующие данные приведены исключительно в качестве примера. Не следует использовать
ОП при 450 нм IgA Индекс
Отрицательный контроль 0.082
Cut-off контроль 0.504
Положительный контроль 1.992
Образец 0.889 + 1.76
Исследуемый образец признается положительным (+) по содержанию антител класса IgA к антигену 
Chlamydia.
10. У С Л О В И Я  Х Р А Н Е Н И Я  И ЭК СП Л УАТ АЦ И И
Набор должен храниться при температуре  +2. ,.8°С.
Срок годности реагентов указан на этикетках флаконов.
Вскрытые реагенты стабильны при температуре +2...8°С в течение 2 месяцев.
11. О ГР А Н И Ч Е Н И Я  В П Р И М Е Н Е Н И И  А Н А Л И З А
При определении у пациента уровня иммунитета к Chlamydia наличие антител класса IgG в любой 
концентрации не исключает возможности наличия инфекции в настоящий момент. Следовательно, 
для раннего выявления случаев острой инфекции необходимо определение специфических антител 
класса IgA. В случае выявления заболевания своевременная медицинская помощь существенно 
снижает риск отрицательных последствий. Однако, результаты анализа должны интерпретироваться 
с осторожностью и подтверждаться клиническими данными и дальнейшей диагностикой.
С Х Е М А  А Н А Л И ЗА
Предварительное разведение образцов: 1:300
Реагенты Blank Контроли Исследуемые
образцы
Контрол и IN EGllPOS CIO — 100 мкл
Исследуемые образцы 100 мкл
Раствор для разведения DIL 100 мкл
Инкубация: 37±2°С, 60±5 мин. 
Промывка: 4 х 350 мкл.
Конъюгат CON j I 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубация: 37±2°С, 30±2 мин. 
Промывка: 4 х 350 мкл.
Раствор ТМБ ТМВ 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубация: А; 37±2°С, 10 мин; или В: комнатная температура 15 мин.
Стоп-реагент STOP 100 мкл 100 мкл 100 мкл
i нм.


--- стр. 113 ---
Г енерал №Ь^Гдиректо|>^^ л
ООО «Ко[^(|^ия
ш в ы р ^ Щ г щ ^ -  I I
«  - У Х ^ »  U -W ^ i'''ip a i)v " / ‘^ / / 2 0 1 1  г
vO>-, i-< d .
•  ''У
НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ  
ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ G К  
CHLAMYDIA PNEUMONIAE В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
Chlamydia pneumoniae IgG
Только для in vitro диагностики
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Chlamydia - неподвижный, грамотрицательный облигатный внутриклеточный паразит, который 
формирует характерные включения в цитоплазме инфицированных клеток. Хламидии легко различимы в 
световой микроскоп. Известны 3 патогенных для человека вида Chlamydia: Chlamydia trachomatis, 
Chlamydia pneumoniae и Chlamydia psittaci и один вид, который патогенен только для животных 
(Chlamydia pecorum).
Chlamydia trachomatis - наиболее распространенная причина заболеваний, передающихся половым 
путем, количество заболевших по всему миру людей оценивается 400-500 милионами и эта цифра 
постоянно растет. У новорожденных, которые могут заразится во время прохождения по родовым путям 
матери больной хламидиозом, С. trachomatis может вызвать конъюктивит или пневмонию. Нелеченые 
случаи хламидийной инфекции могут привести к хроническому сальпингиту, который может стать 
причиной внематочной беременности или бесплодия. У мужчин С. trachomatis в большинстве случаев 
вызывает негонококковый уретрит. Хламидийная инфекция часто протекает бессимптомно, что является 
большой проблемой, так как может привести к возникновению хронических заболеваний. Во многих 
случаях удается диагностировать заболевания, являющиеся последствием инфекции, в то время как 
первичное инфицирование остается нераспознанным.
Вид Механизм передачи инфекции Заболевания Методы диагностики
С. trachomatis
Прямой или половой путь 
передачи
Очаги инфекции: обычно 
слизистая глаз или мочеполовой 
системы
Венерическая 
лимфогранулема; 
трахома; 
конъюктивит с 
включениями; цервицит; 
сальпингит; уретрит; 
эпидидимит; проктит и 
пневмония 
новорожденных
ПЦР
Серологические методы 
Микроскопические 
методыС. pneumoniae Проникают через слизистую 
дыхательной системы
Поражение
дыхательной системы 
Возможно: эндокардит, 
коронарная болезнь
С. psittaci
Вдь\хан 1ле пьш\л, содержащей 
частички испражнений 
инфицированных пт иц Орнитоз (Пситтакоз) ,
инфицироанных птиц
Для диагностики инфекции могут быть использованы следующие методы:
• Микроскопический анализ: окраска по Романовскому-Гимзе
• ПЦР
• Серологическое исследование:
Определение антигенов методом ИФА
Определение антител методами иммунофлюоресценции и ИФА.
Тест-система Chlamydia pneumoniae IgG предназначена для качественного и полуколичественного 
определения иммуноглобулинов класса G против Chlamydia pneumoniae в сыворотке и плазме 
(цитратная) крови человека.
1/7


--- стр. 114 ---
2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
Принцип действия данного набора основан на твердофазном иммуноферментном анализе (ИФА), В 
1сачестве ферментной метки в наборе применяется пероксидаза хрена. В течение первой инкубации 
антитела против Chlamydia pneumoniae (если они есть в образце) связываются с антигеном С, 
pneumoniae, адсорбированным на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок планшета). С помощью 
промывки удаляется несвязавшийся материал. В течение следующей инкубации антитела против IgG 
человека, меченные пероксидазой хрена, взаимодействуют с комплексом антиген С. pneumoniae -  
антитело. После цикла промывок в лунки добавляется раствор ТМБ, что приводит к развитию окраски 
под воздействием фермента. Реакция останавливается добавлением Стоп-реагента (HCI). 
Интенсивность окрашивания раствора измеряется на спектрофотометре при длине волны 450 нм или 
405 нм. Содержание специфических антител класса IgG в образцах и контролях прямо пропорционально 
измеренной оптической плотности раствора в лунках.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2 .2 . СОСТАВ НАБОРА
Реагент Количество Состояние
Планшет
м т И 1х 96 лунок Готов к использованию 
Ready for use
Промывочный
раствор
WASH
1  X 50 м л
Концентрат
Cone.
Раст
DIL
вор для разведения 1  X 105 м л
Готов к использованию 
Ready for use
Отр 1
конт
In e g
1цательный
роль 1  X 2 м л
Готов к использованию 
Ready for use
Контроль Cut-off
1с /0| 1  X 2 м л
Готов к использованию 
Ready for use
Пол(
КОНТ
|POS
эжительный
ооль 1  X 2 м л
Готов к использованию 
Ready for use
Конъюгат
c o n jI
1  X 20 м л Готов к использованию 
Ready for use
Раствор ТМБ 
Т М ^
1  X 14 м л Готов к использованию 
Ready for use
Стоп-реагент
s t o p!
1  X 14 м л Готов к использованию 
Ready for use
Количество реагентов рассчитано на  96 лунок.
2.2.1 ■  Реагенты
• Иммуносорбент -  планшет |МТР| / Coated microplate: 1  планшет из 12 разборных стрипов по 8 
лунок (всего 96 лунок), лунки стрипов планшета покрыты антигеном Chlamydia pneumoniae. 
Неиспользованные стрипы хранить при температуре +2..,8°С в плотно закрытом пластиковом пакете.
• Раствор для разведения / Sample Diluent IgG: -  1  флакон Фосфатный буферный раствор 
желтого цвета, pH 7,2±0,2. Готов к использованию.  Консерванты: 0,09% азид натрия и 0,1% Катон GC.
• Промывочный раствор 20х |WASH| / Washing Solution (20х): -  1  флакон. Консервант: 0,2% 
Катон GC. Перед использованием развести необходимое количество концентрата дистиллированной 
водой в соотношении 1:20. В случае образования нерастворимых кристаллов поместить раствор в 
термостат (+37°С) на несколько минут. Приготовленный промывочный раствор хранить не более 5 суток 
при комнатной температуре (+18...25°С).
• Конъюгат |CONJ| / Enzyme Conjugate: -  1  флакон. Раствор розового цвета со стабилизаторами, 
содержит кроличьи антитела к IgG человека, конъюгированные с пероксидазой хрена (HRPO). Готов к 
использованию. Консервант: 0,2% Бронидокс L.
• Положительный контроль |POS| /Positive Control: -  1  флакон. Раствор желтого цвета. Готов к 
использованию. Консерванты: 0,09% азид натрия и 0,1% Катон GC.
• Контроль Cut-off |с/0| / Cut-off Control: -  1  флакон. Раствор желтого цвета. Готов к 
использованию. Консерванты: 0,09% азид натрия и 0,1% Катон GC.
• Отрицательный контроль |n eG | / Negative Control: -  1  флакон. Раствор желтого цвета Готов к 
использованию. Консерванты: 0,09% азид натрия и 0,1% Катон GC.
2/7


--- стр. 115 ---
•  Раствор ТМБ (ТМВ): 1  флакон. Раствор тетраметилбензидина в цитратно-фосфатном буфере, 
[ержащем DMSO и Н2О 2.  Готов к использованию.
•  Стоп-реагент (STOP) / Blocking Reagent; 1  флакон. 1Н HCI. Готов к использованию.
•  Бумага для заклеивания планшета (СРА) / Adhesive plate sealers.
•  Пластиковый пакет.
]
3 . АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3 .1  Диагностическая специфичность
Диагностическая специфичность - способность метода определять образцы, не содержащие 
1фический аналит, как отрицательные. Специфичность составляет 91,7%.
3.2 Диагностическая чувствительность
Диагностическая чувствительность - способность метода определять образцы, содержащие 
мифический аналит, как положительные. Чувствительность составляет 90,2%.
3.3 Прецизионность
Прецизионность оценивалась посредством определения повторяемости и воспроизводимости 
та  (внутри- и межаналитический коэффициенты вариации).
Воспроизводимость (Межаналитический коэффициент вариации)
Образец
Положительная 
сыворотка
Положительная
сыворотка
Кол-во измерений
12
12
Уровень специфических 
_________IgG, ЕР _________
32
КВ, %
10,6
5,2
Повторяемость (Внутрианалитический коэффициент вариации)
Образец
Положительная 
сыворотка
Кол-во измерений
20
Положительная 
сыворотка 24
Оптическая плотность, 
_______ед.опт.пл. _______
0,41
1,37
КВ, %
7,2
4,3
3.4 Интерференция
Интерференция гемоглобина, триглицеридов и билирубина не обнаружена вплоть до концентраций 
10 мг/мл, 5 мг/мл и 0,2 мг/мл соответственно.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Для получения достоверных результатов необходимо соблюдать следующие правила;
Не смешивайте специфические реагенты разных серий набора (см,п.2.2.1.). Не смешивайте их 
с реагентами других производителей.
Разрешается смешивать Промывочный раствор, Раствор ТМБ и Стоп-реагент разных серий 
набора. Не смешивайте их с реагентами других производителей.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их загрязнение,
-  Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте только дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в 
чистой посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для каадого образца или
реагента.
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и 
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам анализа.
В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует убедиться, 
что все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, спектрофотометр, термостат) 
проходит регулярную проверку и поддерживается в исправном состоянии.
Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок или 
автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок может 
привести к неверной интерпретации результатов анализа.
3/7


--- стр. 116 ---
-  Убедитесь в исправности спею-рофотометра. Использование неоткалиброванного 
трофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению оптической 
ности образцов и последующим неправильным результатам анализа.
-  Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа» Если 
Ьмпература инкубации отклоняется от 37±2”С, это может привести к снижению чувствительности анализа 
|Й1л и  биологической денатурации образцов и реагентов. Следует периодически проверять показания
чика температуры.
Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или образцов. 
Элюдение температурного режима хранения может привести к биологической денатурации 
ипонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная идентификация 
(«ожет привести к ложным результатам и постановке ошибочного клинического диагноза.
Чтобы исклю чить заражение персонала и загрязнение окружающ ей среды, следует  
[соблюдать следую щ ие правила:
При работе с потенциально инфекционным материалом и во время проведения анализа 
цует надевать одноразовые защитные перчатки.
Не разрешается пипетировать ртом.
Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и курение в помещениях, 
[[предназначенных для работы с наборами.
Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и Стоп-реагентом. Избегать 
I попадания в глаза, на кожу и слизистые. В случае контакта тщательно промыть пораженный участок проточной 
I водой.
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на присутствие 
HBsAg, антител к ВИЧ и к вирусу гепатита С. Несмотря на полученные отрицательные результаты, 
(следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не может гарантировать полное 
'отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и другие реагенты, содержащие сыворотку 
крови человека, следует считать потенциально инфекционными.
Следует избегать разбрызгивания реагентов и образования аэрозолей. Места, на которые 
попал пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. Исполь­
зованный при этом протирочный материал следует считать потенциально инфицированным и подвергнуть 
соответствующей обработке перед утилизацией.
- Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных азидов 
металлов в чугунных и медных водопроводных трубах, после слива использованных реагентов следует 
промыть сток большим объемом проточной воды.
5. М А Т Е Р И А Л Ы  И О Б О Р У Д О В А Н И Е , НЕ В Х О Д Я Щ И Е  В Н А Б О Р
5.1. М атериалы  и оборудование, необходим ы е при ручной постановке анализа
- Микропипетки, в том числе многоканальные, высокой точности (10-200 мкл, менее 3% ошибки) со сменными 
наконечниками.
- Градуированные цилиндры для разведения реагентов.
- Дистиллированная вода.
- Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
- Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления содержимого из лунок.
- Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность 
раствора в лунках в диапазоне 0 -3 ед. опт. плотн. при длинах волн 620,450 и 405нм.
- Миллиметровая бумага,
5.2. Автом атическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа на 
автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC.
В случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю необходимо 
удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для иммуно- 
ферментного анализа производства RADIM.
6. А Н А Л И З И Р У Е М Ы Е  О Б Р А З Ц Ы
Данный набор может применяться для исследования образцов сыворотки и цитратной плазмы крови 
человека. Сильно гемолизованные или липемичные образцы, а также присутствие в образцах фибрина 
могут оказывать влияние на результаты анализа. Перед постановкой анализа следует убедиться в том, 
что образцы прозрачные и не содержат осадка. Допускается хранение образцов при температуре +2...8°С 
в течение 5 суток. При необходимости более длительного хранения образцы следует заморозить при - 
20°С. Избегайте повторного оттаивания и замораживания образцов.
Перед проведением анализа разведите образцы в соотношении 1:101 с помощью Раствора для 
разведения (см, п,2.2.1). Например; 10 мкп образца + 1000 мкл раствора для разведения.
4/7


--- стр. 117 ---
7. П Р О В Е Д Е Н И Е  А Н А Л И ЗА *
-  Доведите реагенты до комнатной температуры (+18.. .25°С).
Тщательно перемешайте образцы перед проведением анализа.
7.1. Промаркируйте лунки для контролей и исследуемых образцов. Оставьте 1  лунку для обнуления 
апк), 1  лунку для Отрицательного контроля, 2 лунки для контроля Cut-off и одну лунку для 
ложительного контроля.
7.2. Внесите по 100 мкл контролей и разведенных образцов в соответствующие лунки.
Внимание: Контроли готовы к использованию и не требуют разведения.
7.3. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 60±5 минут 
|лри37±ГС
7.4. Удалите содержимое лунок и промойте их 3 раза, внося при каждой промывке по 300 мкл 
зведенного Промывочного раствора. Тщательно удалите жидкость из лунок.
7.5. Внесите во все лунки, искпючая лунку Blank, по 100 мкл Конъюгата.
7.6. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 30±2 минут 
|при 20...25Х.
7.7. Удалите содержимое лунок и промойте планшет (см. п.7.4).
7.8. Внесите во все лунки по 100 мкл Раствора ТМБ.
|Инкубируйте в течение 15 минут при комнатной температуре (+18..,25°С) в темноте.
7.9. Внесите во все лунки по 100 мкл Стоп-реагента.
* При использовании автоматического анализатора производства RADIM и/или SEAC, действуйте в 
[[соответствии с его инструкцией.
( СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 6.
8. Р Е Г И С Т Р А Ц И Я  Р Е З У Л Ь Т А Т О В
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. Референсный 
фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо вычитать величину 
оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех остальных лунок. В случае, 
если значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, считывание результатов проводят 
при длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не позже, чем через 15 минут после остановки 
реакции.
Примечание;
1) При использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или SEAC для 
планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять значения 
автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм.
2) В вьюокоположительных образцах, в следствие очень интенсивной окраски, ТМБ может 
осаждаться на стенках лунок планшета, что приведет к невозможности адекватно измерить 
оптическую плотность. В этом случае, перед разведением образцов буфером для разведения, 
рекомендуется развести их в 2 раза физиологическим раствором. При анализе результатов 
таких образцов необходимо помнить, что полученное значение в ОР должно быть умножено на 
2.
9, УЧЕТ Р Е З У Л Ь Т А Т О В
9.1 Анализ результатов (качественный метод)
Определите оптическую плотность (ОП) Контроля Cut-off. Найдите среднее значение ОП для 
Контроля Cut-off. Присутствие или отсутствие антител класса IgG против Chlamydia pneumoniae 
определяется путем сравнения ОП образца с ОПср. Контроля Cut-off.
Образцы с ОП ниже ОП Контроля Cut-off -  10% признают нереактвными (не содержащими антитела класса 
IgG против Chlamydia pneumoniae).
Образцы с ОП выше ОП Контроля Cut-off + 10% признают реактивными (содержащими антитела класса IgG 
против Chlamydia pneumoniae).
Область значений ОП ± 10% от ОП Контроля Cut-off является областью сомнительных значений. Если 
ОП образца попадает в эти пределы, результат считается сомнительным. Рекомендуется повторить анализ 
через 2 - 4  недели, получив для этого свежий образец сыворотки или плазмы. Если результат повторного 
теста также окажется сомнительным, то образец следует признать отрицательным.
9.2. А нализ результатов (полуколичественны й метод)
Определите оптическую плотность (ОП) Контроля Cut-off. Найдите среднее значение оптической 
плотности для Контроля Cut-off. Для каждого образца рассчитать коэффициент в единицах RADIM (ЕР) по 
формуле 1:
ОПобразца хЮ /ОПср.Cut-off (1)
Образцы с коэффициентом ниже 9 ЕР признают нереактивными (не содержащими анпттела класса IgA против 
Chlamydia pneumoniae).
5/7


--- стр. 118 ---
Образцы с коэффициентом выше 11 ЕР признают реактивными (содержащими антитела класса IgA против 
Chlamydia pneumoniae).
Область значений коэффициента 9-11  ЕР является областью сомнительных значений. Если 
коэффициент для образца попадает в эти пределы, результат считается сомнительным. Рекомендуется 
повторить анализ через 2 - 4  недели, получив для этого свежий образец сыворотки или плазмы. Если 
результат повторного теста также окажется сомнительным, то образец следует признать отрицательным.
9.3. Критерии д остоверности
Пре>еде чем начать обсчет результатов, убедитесь, что ОП контрольных точек соответствуют следующим
Описание Условие
Blank <0,100
Отрицательный контроль < 0,200
Контроль Cut-off 0,250-0,900
Положительный контроль > ОП Cut-off
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ.
9.4. Интерпретация результатов
Нереактивные образцы признают отрицательными по содержанию антител IgG класса против 
Chlamydia pneumoniae.
Реактивные и сомнительные образцы признают положительными по содержанию антител IgG 
класса против Chlamydia pneumoniae.
10. У С Л О В И Я  Х Р А Н Е Н И Я  И ЭК СП Л УАТ АЦ И И
Набор должен храниться при температуре +2...8°С.
Срок годности реагентов указан на этикетках флаконов.
Вскрытые реагенты стабильны при температуре  +2.. .8'С  в течение 2 месяцев.
11. О Г Р А Н И Ч Е Н И Я  В П Р И М Е Н Е Н И И  А Н А Л И З А
Бактериальная контаминация и повторная заморозка/разморозка могут сказаться на 
оптической плотности образцов. Поэтому постановка диагноза не должна основываться на единичном 
лабораторном исследовании, следует принимать во внимание анамнез и результаты исследования 
другими методами. У пациентов с иммуносупрессией и новорожденных данные серологического 
исследования должны интерпретироваться с осторожностью.
Антиген Chlamydia pneumoniae, сорбированный в лунках, представляет собой структурные 
элементы наружной мембраны. Для сывороток, содержащих антитела против LPS и МОМР Chlamydia 
trachomatis, возможен ложноположительный результат.
СХЕМА АНАЛИЗА
Предварительное разведение образцов: 1:101
— Л у н к и  
Реагенть!
Blank с /о POS Образцы 
(разведенные 
в 101 раз)
NEGI — 100 мкл — —
с/о|
------------ — 100 мкл —
POSi — — ------------ 100 мкл
Образцы (разведенные в 101 раз) — ------------ ------------ 100 мкл
-  Инкубация: 37±ГС , 60±5 мин. 
Промывка: 3 х 300 мкл.
Конъюгат CO N J 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубация; 20...25'’С, 30±2 мин. 
Промывка: 3 х 300 мкл
Раствор ТМБ т м й 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубация: комнатная температура, 15 мин.
Стоп-реагент |STOP| 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Считывание: 450-405 нм (референсная длина волны: 620 нм).
6/7


--- стр. 119 ---
' ^еральный директор  
JO «Компания Алкор Био»
оводитель лаборатории разработки ИФА-систем  
«Компания Алкор Био»
Ъ1рев М.В.
Сусорова А.С.
RADIM S.p.A. - Via del Mare, 125 - 00040 Pomezia (Roma) Italia 
Tel.: +39 06 91.249.1 - Fax: +39 06 91.249.443 
National Order Entry: +39 06 91.249.702 
Export Department:  +39 06 91.249.701 
Customer Care: +39 06 91.249.700 
infoHS>radim .it - www.radim.it


--- стр. 121 ---
«УТ ВЕРЖ Д АЮ ,
г  в н е р а л ^ ]^ ^ А1ф в к + ! й ^
О О О  «Ко)^|1^йя А п к о р  ^о;>)кЛ
■ ' ' А; I  у .
^ ; о г  B io 
x^cnrhpnny^y д 2011 г
Н А Б О Р  Р Е А Г Е Н Т О В  ДЛЯ 
И М М У Н О Ф ЕР М Е Н Т Н О Г О  О П Р Е Д Е Л Е Н И Я  И М М У Н О Г Л О Б У Л И Н О В  А  К 
C H L A M Y D IA  P N E U M O N IA E  В С Ы В О Р О Т К Е  К РО В И  Ч Е Л О В Е К А 
Chlam ydia pneum oniae IgA
Только для in vitro диагностики
1. Н А З Н А Ч Е Н И Е
Chlamydia - неподвижный, грамотрицательный облигатный внутриклеточный паразит, который 
формирует характерные включения в цитоплазме инфицированных клеток. Хламидии легко различимы в 
световой микроскоп. Известны 3 патогенных для человека вида Chlamydia: Chlamydia trachomatis, 
Chlamydia pneumoniae и Chlamydia psittaci и один вид, который патогенен только для животных 
(Chlamydia pecorum).
Chlamydia trachomatis - наиболее распространенная причина заболеваний, передающихся половым 
путем, количество заболевших по всему миру людей оценивается 400-500 милионами и эта цифра 
постоянно растет. У новорожденных, которые могут заразится во время прохождения по родовым путям 
матери больной хламидиозом, С. trachomatis может вызвать конъюктивит или пневмонию. Нелеченые 
случаи хламидийной инфекции могут привести к хроническому сальпингиту, который может стать 
причиной внематочной беременности или бесплодия. У мужчин С. trachomatis в большинстве случаев 
вызывает негонококковый уретрит. Хламидийная инфекция часто протекает бессимптомно, что является 
большой проблемой, так как может привести к возникновению хронических заболеваний. Во многих 
случаях удается диагностировать заболевания, являющиеся последствием инфекции, в то время как 
первичное инфицирование остается нераспознанным.
Вид Механизм передачи инфекции Заболевания Методы диагностики
С, trachomatis
Прямой или половой путь 
передачи
Очаги инфекции: обычно 
слизистая глаз или мочеполовой 
системы
Венерическая 
лимфогранулема; 
трахома; 
конъюктивит с 
включениями; цервицит; 
сальпингит; уретрит; 
эпидидимит; проктит и 
пневмония 
новорожденных
ПЦР
Серологические методы 
Микроскопические 
методыС. pneumoniae Проникают через слизистую 
дыхательной системы
Поражение
дыхательной системы 
Возможно: эндокардит, 
коронарная болезнь
С. psittaci
Вдыхание пыли, содержащей 
частички испражнений 
инфицированных птиц 
Контакт с внутренними органами 
инфицироанных птиц
Орнитоз (Пситтакоз)
Для диагностики инфекции могут быть использованы следующие методы:
• Микроскопический анализ: окраска по Романовскому-Гимзе
• ПЦР
• Серологическое исследование:
Определение антигенов методом ИФА
Определение антител методами иммунофлюоресценции и ИФА.
Тест-система Chlamydia pneumoniae IgA предназначена для качественного и полуколичественного 
определения иммуноглобулинов класса А против Chlamydia pneumoniae в сыворотке крови человека.
1/7


--- стр. 122 ---
г т
2 . ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
Принцип действия данного набора основан на твердофазном иммуноферментном анализе (ИФА), В 
вчестве ферментной метки в наборе применяется пероксидаза хрена. В течение первой инкубации 
'антитела против Chlannydia pneumoniae (если они есть в образце) связываются с антигеном С.
moniae, адсорбированным на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок планшета), С помощью 
промывки удаляется несвязавшийся материал. В течение следующей инкубации антитела против IgA 
человека, меченные пероксидазой хрена, взаимодействуют с комплексом антиген С. pneumoniae -  
антитело. После цикла промывок в лунки добавляется раствор ТМБ, что приводит к развитию окраски 
п о д  воздействием фермента. Реакция останавливается добавлением Стоп-реагента (HCI). 
[^Интенсивность окрашивания раствора измеряется на спектрофотометре при длине волны 450 нм или 
4 0 5  нм, Содержание специфических антител класса IgA в образцах и контролях прямо пропорционально 
измеренной оптической плотности раствора в лунках.
2.2. СОСТАВ НАБОРА
Реагент Количество Состояние
Планшет
ШР\ 1х 96 лунок Готов к использованию 
Ready for use
1
Промь
раствс
WASH
1В0ЧНЫЙ
> р 1  X 50 м л
Концентрат
Cone.
Раст
|DIL
вор ДЛЯ разведения 1  X 105 мл Готов к использованию 
Ready for use
Отрк
конт;
In EG
щательный
роль 1  X 2 м л
Готов к использованию 
Ready for use
Контроль Cut-off
|с/о 1  X 2 м л
Готов к использованию 
Ready for use
ПО Л(
КОНТ
Ip o s
эжительный
ЮЛЬ 1  X 2 м л
Готов к использованию 
Ready for use
Конъюгат 1  X 20 м л Готов к использованию 
Ready for useCONJ
Раст
ТМЕ
■вор ТМБ 1  X 14 м л Готов к использованию 
Ready for use
)еагент 1  X 14 м л Готов к использованию 
Ready for use
Количество реагентов рассчитано на 96 лунок.
2.2.1 ■  Реагенты
• И ммуносорбент -  планш ет |МТР| / C hlam ydia pneum oniae Coated m icroplate (IgA): 1  планшет 
из 12 разборных стрипов по 8 лунок (всего 96 лунок), лунки стрипов планшета покрыты антигеном 
Chlamydia pneumoniae. Неиспользованные стрипы хранить при температуре +2...8°С в плотно закрытом 
пластиковом пакете.
• Раствор для разведения |D IL | / IgA Sample Diluent: -  1  флакон. Фосфатный буферный раствор 
желтого цвета, pH 7,2±0,2. Готов к использованию.  Консерванты: 0,095% азид натрия и 0,1% Катон GG.
• Промывочный раствор 20х |WASH| I Washing Solution (20х): -  1  флакон. Консервант: 0,2% 
Катон GC. Перед использованием развести необходимое количество концентрата дистиллированной 
водой в соотношении 1:20. В случае образования нерастворимых кристаллов поместить раствор в 
термостат (+37°С) на несколько минут. Приготовленный промывочный раствор хранить не более 5 суток 
при комнатной температуре (+18...25°С).
• Конъюгат |CONJ| / Chlamydia pneumoniae anti-lgA Conjugate: -  1  флакон. Раствор розового 
цвета со стабилизаторами, содержит кроличьи антитела к IgA человека, конъюгированные с пероксидазой 
хрена (HRPO). Готов к использованию. Консервант: 0,2% Бронидокс L
• Положительный контроль |POS| I Chlamydia pneumoniae IgA Positive Control: -  1  флакон. 
Раствор желтого цвета. Готов к использованию. Консервант: 0,095% азид натрия и 0,1% Катон GC.
• Контроль Cut-off |С/0| / Chlamydia pneumoniae IgA Cut-off Control: -  1  флакон. Раствор 
желтого цвета. Готов к использованию. Консервант: 0,095% азид натрия и 0,1% Катон ОС.
2/7


--- стр. 123 ---
•  О трицательны й контроль |NEG| / Chlam ydia pneum oniae Ig A  Negative Control; -  1  флакон, 
во р  желтого цвета. Готов к использованию. Консерванты; 0,095% азид натрия и 0,1% Катон GC.
Раствор Т М Б  (ТМВ): 1  флакон. Раствор тетраметилбензидина в цитратно-фосфатном буфере, 
ащем DMSO и Н 2О2.  Готов к использованию.
Стоп-реагент (ST O P ) / B lo ckin g Reagent; 1  флакон. 1Н HCI. Готов к использованию.
Бумага для заклеивания планш ета (СРА ) I A dhesive plate sealers.
П ластиковы й пакет.
3. А Н А Л И Т И Ч ЕС К И Е И Д И А ГН О С Т И Ч Е С К И Е  ХАРА К Т ЕРИ С Т И К И
3.1 Диагностическая специф ичность
Диагностическая специфичность - способность метода определять образцы, не содержащие 
цифический аналит, как отрицательные. Специфичность составляет > 95%.
3.2 Д иагностическая чувствительность
Диагностическая чувствительность - способность метода определять образцы, содержащие 
цифический аналит, как положительные. Чувствительность составляет 88,9%.
3.3 Прецизионность
Прецизионность оценивалась посредством определения повторяемости и воспроизводимости 
1 (внутри- и межаналитический коэффициенты вариации).
Воспр оизвод им ость (М ежаналитический коэф ф ициент вариации)
Образец Кол-во измерений Уровень специфических IgA, 
ЕР КВ, %
Положительная
сыворотка 12 22,2 9,7
Положительная
сыворотка 12 16,3 14,0
П овторяем ость (Внутрианалитический коэф ф ициент вариации)
Образец Кол-во измерений Оптическая плотность, 
_______ед.опт.пл. _______ КВ, %
Положительная 
сыворотка ______ 20 1,20 4,9
Положительная 
сыворотка 24 0,84 8,3
3.4 Интерф еренция
Интерференция гемоглобина, триглицеридов и билирубина не обнаружена вплоть до концентраций 
10 мг/мл, 5 мг/мл и 0,2 мг/мл соответственно.
4. М Е Р Ы  П Р Е Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И
Для получения д остове р н ы х результатов необходимо соб л ю д ать следую щ ие правила;
Не смешивайте специфические реагенты разных серий набора (см.п.2.2.1.)- Не смешивайте их 
с реагентами других производителей.
Разрешается смешивать Промывочный раствор. Раствор ТМБ и Стоп-реагент разных серий 
набора. Не смешивайте их с реагентами других производителей.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их загрязнение.
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте только дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в 
чистой посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для каждого образца или
реагента.
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и 
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам анализа.
В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует убедиться, 
что все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, спектрофотометр, термостат) 
проходит регулярную проверку и поддерживается в исправном состоянии.
3/7


--- стр. 124 ---
-  Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок или 
матического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок может
вести к неверной интерпретации результатов анализа.
-  Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
(ктрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению оптической 
1Т Н0С Т И  образцов и последующим неправильным результатам анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». Если 
шература инкубации отклоняется от 37±2°С, это может привести к снижению чувствительности анализа 
1Л И  биологической денатурации образцов и реагентов. Следует периодически проверять показания 
ика температуры.
Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или образцов. 
[Несоблюдение температурного режима хранения может привести к биологической денатурации 
понентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная идентификация 
может привести к ложным результатам и постановке ошибочного клинического диагноза.
Чтобы  исклю чить заражение персонала и загрязнение окружающ ей среды, следует  
соблюдать следую щ ие правила;
При работе с потенциально инфекционным материалом и во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
Не разрешается пипетировать ртом.
Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и курение в помещениях, 
предназначенных для работы с наборами.
Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и Стоп-реагентом. Избегать 
попадания в глаза, на кожу и слизистые. В случае контакта тщательно промыть пораженный участок проточной 
водой.
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на присутствие 
HBsAg, антител к ВИЧ и к вирусу гепатита С. Несмотря на полученные отрицательные результаты, 
следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не может гарантировать полное 
отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и другие реагенты, содержащие сыворотку 
крови человека, следует считать потенциально инфекционными.
Следует избегать разбрызгивания реагентов и образования аэрозолей. Места, на которые 
попал пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. Исполь­
зованный при этом протирочный материал следует считать потенциально инфицированным и подвергнуть 
соответствующей обработке перед утилизацией,
- Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных азидов 
металлов в чугунных и медных водопроводных трубах, после слива использованных реагентов следует 
промыть сток большим объемом проточной воды.
5. М А Т ЕР И А Л Ы  И О Б О Р У Д О В А Н И Е , НЕ В Х О Д Я Щ И Е  В Н А Б О Р
5.1. М атериалы  и оборудование, необходим ы е при ручной постановке анализа
- Микропипетки, в том числе многоканальные, высокой точности (10-200 мкл, менее 3% ошибки) со сменными 
наконечниками.
- Градуированные цилиндры для разведения реагентов.
-Дистиллированная вода.
- Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2“С.
- Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления содержимого из лунок.
- Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность 
раствора в лунках в диапазоне 0-3 ед. опт. плотн. при длинах волн 620,450 и 405нм.
■  Миллиметровая бумага.
5.2. Автом атическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа на 
автоматических анализаторах открытогом типа производства компании RADIM и/или SEAC.
В случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю необходимо 
удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для иммуно- 
ферментного анализа производства RADIM.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Данный набор может применяться для исследования образцов сыворотки крови человека. 
Допускается хранение образцов при температуре +2,..8°С в течение 24 часов. При необходимости более 
длительного хранения образцы следует заморозить при -20°С. Избегайте повторного оттаивания и 
замораживания образцов.
4/7


--- стр. 125 ---
Перед проведением анализа разведите образцы в соотношении 1;101 с помощью Раствора для 
ведения (см. п.2.2.). Например: 10 мкл образца + 1000 мкл Раствора для разведения.
7. П Р О В Е Д Е Н И Е  А Н А Л И ЗА *
-  Доведите реагенты до комнатной температуры (+18.. .25” С).
Тщательно перемешайте образцы перед проведением анализа.
7.1. Промаркируйте лунки для контролей и исследуемых образцов. Оставьте 1  лунку для обнуления 
Blank), 1  лунку для Отрицательного контроля, 2 лунки для контроля Cut-off и одну лунку для 
оложительного контроля.
7.2. Внесите по 100 мкл контролей и разведенных образцов в соответствующие лунки.
Внимание: Контроли готовы к использованию и не требуют разведения.
7.3. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 60±5 минут  
| л р и  37±2°С.
7.4. Удалите содержимое лунок и промойте их 3 раза, внося при каждой промывке по 300 мкл  
[разведенного Промывочного раствора. Тщательно удалите жидкость из лунок.
7.5. Внесите во все лунки, исключая лунку Blank, по 100 мкл Конъюгата.
7.6. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 30±2 минут  
|при 20...25'С,
7.7. Удалите содержимое лунок и промойте планшет (см. п.7.4.).
7.8. Внесите во все лунки по 100 мкл Раствора ТМБ.
Инкубируйте в течение 15 минут при комнатной температуре (+18...25°С) в темноте.
7.9. Внесите во все лунки по 100 мкл Стоп-реагента.
* При использовании автоматического анализатора производства RADIM и/или SEAC, действуйте в
I  соответствии с его инструкцией.
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 6.
В. Р Е Г И С Т Р А Ц И Я  Р Е З У Л Ь Т А Т О В
Измерить оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. Референсный 
фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо вычитать величину 
оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех остальных лунок. В случае, 
если значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, считывание результатов проводить 
при длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не позже, чем через 15 минут после остановки 
реакции.
Примечание;
1) При использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или SEAC для 
планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять значения 
автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм.
2) В высокоположительных образцах, в следствие очень интенсивной окраски, ТМБ может 
осаждаться на стенках лунок планшета, что приведет к невозможности адекватно измерить 
оптическую плотность. В этом случае, перед разведением образцов буфером для разведения, 
рекомендуется развести их в 2 раза физиологическим раствором. При анализе результатов 
таких образцов необходимо помнить, что полученное значение в ЕР должно быть умножено на
2 .
9. УЧЕТ Р Е З У Л Ь Т А Т О В
9.1. А нализ результатов (качественный метод)
Определить оптическую плотность (ОП) Контроля Cut-off. Найти среднее значение ОП для Контроля 
Cut-off. Присутствие или отсутствие антител класса IgA против Chlamydia pneumoniae определяется путем 
сравнения ОП образца с ОПср. Контроля Cut-off.
Образцы с ОП ниже ОП Контроля Cut-off -  10% признают нереактивными (не содержащими антитела класса 
IgA против Chlamydia pneumoniae).
Образцы с ОП выше ОП Контроля Cut-off + 10% признают реактивными (содержащими антитела класса IgA 
против Chlamydia pneumoniae).
Область значений ОП ± 10% от ОП Контроля Cut-off является областью сомнительных значений. Если 
ОП образца попадает в эти пределы, результат считается сомнительным. Рекомендуется повторить анализ 
через 2 - 4  недели, получив для этого свежий образец сыворотки крови. Если результат повторного теста 
также окажется сомнительным, то образец следует признать отрицательным.
9.2. А нализ результатов (полуколичественны й метод)
Определить оптическую плотность (ОП) Контроля Cut-off. Найти среднее значение ОП для 
Контроля Cut-off. Для каждого образца рассчитать коэффициент в единицах RADIM (ЕР) по формуле 1:
ОПобразцаХЮ/ОПср. Cut-off (1)
5/7


--- стр. 126 ---
Образцы с коэффициентом ниже 9 ЕР признают нереакшвными (не содержащими антитела класса IgA против 
Ihlamydia pneumoniae).
Образцы с коэффициентом выше 11 ЕР признают реактивными (содержащими антитела класса IgA против 
pneumoniae).
Область значений коэффициента 9-11  ЕР является областью сомнительных значений. Если 
РЛэффициент для образца попадает в эти пределы, результат считается сомнительным. Рекомендуется 
"ввторить анализ через 2 - 4  недели, получив для этого свежий образец сыворотки крови. Если результат 
овторного теста также окажется сомнительным, то образец следует признать отрицательным.
9.3. Критерии достоверности
Прежде чем начать обсчет результатов, убедитесь, что СП контрольных точек соответствуют следующим 
1итериям:
Описание Условие
Blank <0,100
Отрицательный контроль < 0,200
Контроль Cut-off 0,250-0,900
Положительный контроль г  СП Cut-off
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ.
9.4. Интерпретация результатов
Нереактивные образцы признают отрицательными по содержанию антител IgA класса против 
Chlamydia pneumoniae.
Реактивные и сомнительные образцы признают положительными по содержанию антител IgA 
класса против Chlamydia pneumoniae.
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
Набор должен храниться при температуре +2...8°С.
Срок годности реагентов указан на этикетках флаконов.
Вскрытые реагенты стабильны при температуре +2. ..8°С в течение 2 месяцев.
11. ОГРАНИЧЕНИЯ В ПРИМЕНЕНИИ АНАЛИЗА
Бактериальная контаминация и повторная заморозка/разморозка могут сказаться на 
оптической плотности образцов. Поэтому постановка диагноза не должна основываться на единичном 
лабораторном исследовании, следует принимать во внимание анамнез и результаты исследования 
другими методами. У пациентов с иммуносупрессией и новорожденных данные серологического 
исследования должны интерпретироваться с осторожностью.
Антиген Chlamydia pneumoniae, сорбированный в лунках, представляет собой структурные 
элементы наружной мембраны. Для сывороток, содержащих антитела против LPS и МОМР Chlamydia 
trachomatis, возможен ложноположительный результат.
СХЕМА АНАЛИЗА
Предварительное разведение образцов: 1:101
-------Лунки Blank С/О PCS Образцы 
(разведенные 
в 101 раз)
Реагенты
NEGl — 100 мкл ---- —
С/0| — ----- 100 мкл
POSI ---- ----- 100 мкл
Образцы (разведенные в 101 раз) — ----- 100 мкл
Инкубация: 37±1“С, 60+5 мин. 
Промывка: 3 х 300 мкл.
Конъюгат CONJI — 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл
-
Инкубация: 20...25°С, 30±2 мин. 
Промывка: 3 х 300 мкл
iPacTBop ТМБ T M 0 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл
L Инкубация: комнатная температура, 15 мин.
'  ^Сгоп-реагену
L- \
STOP 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл
0/7


--- стр. 127 ---
Считывание: 450-405 нм (референсная длина
рпьный директор  
Компания Алкор Био»
цитель лаборатории разработки ИФА-систем  
^(Компания Алкор Био»
ев М.В.
RADIM S.p.A. - Via del Mare, 125 - 00040 Pomezia (Roma) Italia 
Tel.: +39 06 91.249.1 - Fax: +39 06 91.249.443 
National Order Entry: +39 06 91.249.702 
Export Department:  +39 06 91.249.701 
Customer Care: +39 06 91.249.700 
info(d>radim.it - www.radim.it


--- стр. 128 ---
Прошито, пронумеровано, скреплено л
печатью _________
/ ■ ' а / "Компания ЛД\Генеральн^1Й директор V
0 0 0/<Компания Атеор Био»
. М-В. Швырев


--- стр. 129 ---
«УТ ВЕРЖ Д АЮ 
Генеральны й директор
О О О  «Компания Алкор Био» ,  
Ш вы р е в М.В. .
2011 г
'7
Н А Б О Р  Р Е А Г Е Н Т О В  ДЛЯ 
И М М У Н О Ф ЕР М Е Н Т Н О Г О  О П Р Е Д Е Л Е Н И Я  И М М У Н О Г Л О Б У Л И Н О В  М К 
C H L A M Y D IA  P N E U M O N IA E  В С Ы В О Р О Т К Е  И П Л А З М Е К РО В И  Ч Е Л О В Е К А
Chlam ydia pneum oniae IgM
Только для in vitro диагностики
1. Н А З Н А Ч Е Н И Е
Chlamydia - неподвижный, грамотрицательный облигатный внутриклеточный паразит, который 
формирует характерные включения в цитоплазме инфицированных клеток. Хламидии легко различимы в 
световой микроскоп. Известны 3 патогенных для человека вида Chlamydia: Chlamydia trachomatis, 
Chlamydia pneumoniae и Chlamydia psittaci и один вид, который патогенен только для животных 
(Chlamydia pecorum).
Chlamydia trachomatis - наиболее распространенная причина заболеваний, передающихся половым 
путем, количество заболевших по всему миру людей оценивается 400-500 милионами и эта цифра 
постоянно растет. У новорожденных, которые могут заразится во время прохождения по родовым путям 
матери больной хламидиозом, С. trachomatis может вызвать конъюктивит или пневмонию. Нелеченые 
случаи хламидийной инфекции могут привести к хроническому сальпингиту, который может стать 
причиной внематочной беременности или бесплодия. У мужчин С. trachomatis в большинстве случаев 
вызывает негонококковый уретрит. Хламидийная инфекция часто протекает бессимптомно, что является 
большой проблемой, так как может привести к возникновению хронических заболеваний.Во многих 
случаях удается диагностировать заболевания, являющиеся последствием инфекции, в то время как 
первичное инфицирование остается нераспознанным.
Вид Механизм передачи инфекции Заболевания Методы диагностики
С. trachomatis
Прямой или половой путь 
передачи
Очаги инфекции: обычно 
слизистая глаз или мочеполовой 
системы
Венерическая 
лимфогранулема; 
трахома; 
конъюктивит с 
включениями; цервицит; 
сальпингит; уретрит; 
эпидидимит; проктит и 
пневмония 
новорожденных
ПЦР
Серологические методы 
Микроскопические 
методыС. pneumoniae Проникают через слизистую 
дыхательной системы
Поражение 
дыхательной системы 
Возможно: эндокардит, 
коронарная болезнь
С. psittaci
Вдыхание пыли, содержащей 
частички испражнений 
инфицированных птиц 
Контакт с внутренними органами 
инфицироанных птиц
Орнитоз (Пситтакоз)
Для диагностики инфекции могут быть использованы следующие методы:
• Микроскопический анализ: окраска по Романовскому-Гимзе 
. ПЦР
• Серологическое исследование:
Определение антигенов методом ИФА
Определение антител методами иммунофлюоресценции и ИФА.
Тест-система Chlamydia pneumoniae IgM предназначена для качественного и полуколичественного 
определения иммуноглобулинов класса М против Chlamydia pneumoniae в сыворотке и плазме 
(цитратной) крови человека.
1/7


--- стр. 130 ---
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. П РИ Н Ц И П  д е й с т в и я
Принцип действия данного набора основан на твердофазном иммуноферментном анализе (ИФА). В 
качестве ферментной метки в наборе применяется пероксидаза хрена. В течение первой инкубации 
антитела против Chlannydia pneumoniae (если они есть в образце) связываются с антигеном С. 
pneumoniae, адсорбированным на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок планшета). С помощью 
промывки удаляется несвязавшийся материал. В течение следующей инкубации антитела против 1дМ  
человека, меченные пероксидазой хрена, взаимодействуют с комплексом антиген С. pneumoniae -  
антитело. После цикла промывок в лунки добавляется раствор ТМБ, что приводит к развитию окраски 
под воздействием фермента. Реакция останавливается добавлением Стоп-реагента (HCI). 
Интенсивность окрашивания раствора измеряется на спектрофотометре при длине волны 450 нм или 
405 нм. Содержание специфических антител класса 1дМ в образцах и контролях прямо пропорционально 
измеренной оптической плотности раствора в лунках.
2.2. С О С Т А В  Н А Б О Р А
Реагент Количество Состояние
7ii?2
1шет 1x96 лунок Готов к использованию 
Ready for use
Промывочный
раствор
W A SH
1  X 50 мл Концентрат
Cone.
Рас
DIL
твор для разведения 1  X 105 мл1
Готов к использованию 
Ready for use
Отрицательный
контроль
NEG
1  X 2 м л Готов к использованию 
Ready for use
Кон
|с/о
троль Cut-off 1  X 2 м л Готов к использованию 
Ready for use
Положительный
контроль
posl
1  X 2 м л Готов к использованию 
Ready for use
Конък
ICONJ
)гат 1  X 20 мл Готов к использованию 
Ready for use
\Ш
зор ТМБ 1  X 14 м л Готов к использованию 
Ready for use
зеагент 1  X 14 м л Готов к использованию 
Ready for use
Количество реагентов рассчитано на 96 лунок.
2.2.1. Реагенты
• И м м уносорбент -  планш ет |МТР| / Coated microplate: 1  планшет из 12 разборных стрипов по 8 
лунок (всего 96 лунок), лунки стрипов планшета покрыты антигеном Chlamydia pneumoniae. 
Неиспользованные стрипы хранить при температуре +2...8°С в плотно закрытом пластиковом пакете.
• Раствор для разведения / Sam ple Diluent IgM : -  1  флакон Фосфатный буферный раствор 
зеленого цвета, содержит антитела к IgG человека, pH 7,2±0,2. Готов к использованию. Консервант: 0,09% 
азид натрия и 0,1% Катон GC.
• П р ом ы воч ны й  раствор 20х |WASH| / W a sh in g Solution (20х): -  1  флакон. Консервант: 0,2% 
Катон GC. Перед использованием развести необходимое количество концентрата дистиллированной 
водой в соотношении 1:20. В случае образования нерастворимых кристаллов поместить раствор в 
термостат (+37°С) на несколько минут. Приготовленный промывочный раствор хранить не более 5 суток 
при комнатной температуре (+18...25°С).
• Конъю гат |CONJ| / Enzym e Conjugate: -  1  флакон. Раствор розового цвета со стабилизаторами, 
содержит кроличьи антитела к IgM человека, конъюгированные с пероксидазой хрена (HRPO). Готов к 
использованию. Консервант: 0,2% Бронидокс L.
• Положительный контроль |POS| /Positive Control: -  1  флакон. Раствор желтого цвета. Готов к 
использованию. Консервант: 0,09% азид натрия и 0,1% Катон GC.
• Контроль Cut-off |С/0| / Cut-off Control: -  1  флакон. Раствор желтого цвета. Готов к 
использованию. Консервант: 0,09% азид натрия и 0,1% Катон GC.
2/7


--- стр. 131 ---
• О трицательны й контроль |NEG| I Negative Control: -  1  флакон. Раствор желтого цвета. Готов к 
ользованию. Консерванты: 0,09% азид натрия и 0,1% Катон GC.
• Раствор Т М Б  (ТМВ): 1  флакон. Раствор тетраметилбензидина в цитратно-фосфатном буфере, 
цержащем DMSO и Н 2О2.  Готов к использованию.
• Стоп-реагент (ST O P ) / Blo ckin g Reagent: 1  флакон. 1Н HCI. Готов к использованию
• Бумага для заклеивания планш ета (С Р А ) / A dhesive plate sealers.
• Пластиковы й пакет.
3. А Н А Л И Т И Ч ЕС К И Е И Д И А ГН О С Т И Ч Е С К И Е  ХАРА К Т ЕРИ С Т И К И
3.1 Диагностическая специф ичность
Диагностическая специфичность - способность метода определять образцы, не содержащие 
специфический аналит, как отрицательные. Специфичность составляет > 95%.
3.2 Диагностическая чувствительность
Диагностическая чувствительность - способность метода определять образцы, содержащие 
специфический аналит, как положительные, Чувствительность составляет 83,3%.
3.3 Прецизионность
Прецизионность оценивалась посредством определения повторяемости и воспроизводимости 
анализа (внутри- и межаналитический коэффициенты вариации).
В оспр оизвод им ость (М ежаналитический коэф ф ициент вариации)
Образец Кол-во измерений Уровень специфических IgA, 
ЕР КВ, %
Положительная
сыворотка 12 21,6 8,25
П овторяем ость (Внутрианалитический коэф ф ициент вариации)
Образец Кол-во измерений Оптическая плотность, 
_______ед,опт,пл. _______ КВ, %
Положительная
сыворотка 20 1,16 4,01
3.4 Интерф еренция
Интерференция гемоглобина, триглицеридов и билирубина не обнаружена вплоть до концентраций
10 мг/мл, 5 мг/мл и 0,2 мг/мл соответственно,
4. М Е Р Ы  П РЕ Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И
Для получения д остовер н ы х результатов необходимо соб л ю д ать следую щ ие правила:
Не смешивайте специфические реагенты разных серий набора (см,п,2,2,1,), Не смешивайте их 
с реагентами других производителей.
Разрешается смешивать Промывочный раствор, Раствор ТМБ и Стоп-реагент разных серий 
набора. Не смешивайте их с реагентами других производителей.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их загрязнение.
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте только дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в 
чистой посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для каждого образца или
реагента.
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и  
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам анализа.
В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует убедиться, 
что все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, спектрофотометр, термостат) 
проходит регулярную проверку и поддерживается в исправном состоянии.
Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок или 
автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок может 
привести к неверной интерпретации результатов анализа.
3/7


--- стр. 132 ---
Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
пектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению оптической 
плотности образцов и последующим неправильным результатам анализа,
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». Если 
температура инкубации отклоняется от 37±2“С, это может привести к снижению чувствительности анализа 
и/или биологической денатурации образцов и реагентов. Следует периодически проверять показания
i датчика температуры.
-  Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или образцов, 
Несоблюдение температурного режима хранения может привести к биологической денатурации 
компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная идентификация 
может привести к ложным результатам и постановке ошибочного клинического диагноза.
Чтобы  исклю чить заражение персонала и загрязнение окружающ ей среды, следует  
соблюдать следую щ ие правила:
При работе с потенциально инфекционным материалом и во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
Не разрешается пипетировать ртом.
Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и курение в помещениях, 
предназначенных для работы с наборами.
Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и Стоп-реагентом. Избегать 
попадания в глаза, на кожу и слизистые. В случае контакта тщательно промыть пораженный участок проточной 
водой.
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на присутствие 
HBsAg, антител к ВИЧ и к вирусу гепатита С. Несмотря на полученные отрицательные результаты, 
следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не может гарантировать полное 
отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и другие реагенты, содержащие сыворотку 
крови человека, следует считать потенциально инфекционными.
Следует избегать разбрызгивания реагентов и образования аэрозолей. Места, на которые 
попал пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. Исполь­
зованный при этом протирочный материал следует считать потенциально инфицированным и подвергнуть 
соответствующей обработке перед утилизацией.
- Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных азидов 
металлов в чугунных и медных водопроводных трубах, после слива использованных реагентов следует 
промыть сток большим объемом проточной воды.
5. М А Т ЕР И А Л Ы  И О Б О Р У Д О В А Н И Е , НЕ В Х О Д Я Щ И Е  В Н А Б О Р
5.1. М атериалы  и оборудование, необходим ы е при ручной постановке анализа
- Микропипетки, в том числе многоканальные, высокой точности (10-200 мкл, менее 3% ошибки) со сменными 
наконечниками.
- Градуированные цилиндры для разведения реагентов.
- Дистиллированная вода.
- Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
- Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления содержимого из лунок,
- Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность 
раствора в лунках в диапазоне 0 -3 ед. опт, плотн. при длинах волн 620,450 и 405нм.
- Миллиметровая бумага.
5.2. Автом атическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа на 
автоматических анализаторах открытогом типа производства компании RADIM и/или SEAC.
В случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю необходимо 
удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для иммуно- 
ферментного анализа производства RAD1M.
6. А Н А Л И З И Р У Е М Ы Е  О Б Р А З Ц Ы
Данный набор может применяться для исследования образцов сыворотки и цитратной плазмы крови 
человека. Допускается хранение образцов при температуре +2...8“С в течение 5 суток. При 
необходимости более длительного хранения образцы следует заморозить при -20“С. Избегайте 
повторного оттаивания и замораживания образцов.
Перед проведением анализа разведите образцы в соотношении 1:101 с помощью Раствора для 
разведения (см. п.2.2.1). Например: 10 мкл образца + 1000 мкл Раствора для разведения.
4/7


--- стр. 133 ---
Гл
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА*
-  Доведите реагенты до комнатной температуры (+18.. ,25'С).
Тщательно перемешайте образцы перед проведением анализа.
7.1. Промаркируйте лунки для контролей и исследуемых образцов. Оставьте 1  лунку для обнуления 
(Blank), 1  лунку для Отрицательного контроля, 2 лунки для контроля Cut-off и одну лунку для 
Положительного контроля.
7.2. Внесите по 100 мкл контролей и разведенных образцов в соответствующие лунки.
Внимание: Контроли готовы к использованию и не требуют разведения.
7.3. Зафойте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 60±5 минут 
при 37±2°С.
7.4. Удалите содержимое лунок и промойте их 3 раза, внося при каждой промывке по 300 мкл  
разведенного Промывочного раствора. Тщательно удалите жидкость из лунок.
7.5. Внесите во все лунки, искпючая лунку Blank, по 100 мкл Конъюгата.
7.6. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора) и инкубируйте его в течение 30±2 минут 
при 20...25°С.
7.7. Удалите содержимое лунок и промойте планшет (см. п.7.4).
7.8. Внесите во все лунки по 100 мкл Раствора ТМБ.
Инкубируйте в течение 15 минут при комнатной температуре (+18...25°С) в темноте.
7.9. Внесите во все лунки по 100 мкл Стоп-реагента.
* При использовании автоматического анализатора производства RADIM и/или SEAC, действуйте в 
соответствии с его инструкцией.
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 6.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. Референсный 
фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо вычитать величину 
оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех остальных лунок. В случае, 
если значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, считывание результатов проводят 
при длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не позже, чем через 15 минут после остановки 
реакции.
Примечание:
1) При использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или SEAC для 
планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять значения 
автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм.
2) В вьюокоположительных образцах, в следствие очень интенсивной окраски, ТМБ может 
осаждаться на стенках лунок планшета, что приведет к невозможности адекватно измерить 
оптическую плотность. В этом случае, перед разведением образцов буфером для разведения, 
рекомендуется развести их в 2 раза физиологическим раствором. При анализе результатов 
таких образцов необходимо помнить, что полученное значение в ЕР должно быть умножено на
2 .
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1. Анализ результатов (качественный метод)
Определите оптическую плотность (ОП) Контроля Cut-off. Найдите среднее значение ОП для 
Контроля Cut-off, Присутствие или отсутствие антител класса 1дМ против Chlamydia pneumoniae 
определяется путем сравнения ОП образца с ОПср. Контроля Cut-off.
Образцы с ОП ниже ОП Контроля Cut-off -  10% признают нереактивными (не содержащими антитела класса 
1дМ  против Chlamydia pneumoniae).
Образцы с ОП выше ОП Контроля Cut-off + 10% признают реактивными (содержащими антитела класса 1д М  
против Chlamydia pneumoniae).
Область значений ОП ± 10% от ОП Контроля Cut-off является областью сомнительных значений. Если 
ОП образца попадает в эти пределы, результат считается сомнительным. Рекомендуется повторить анализ 
через 2 - 4  недели, получив для этого свежий образец сыворотки или плазмы. Если результат повторного 
теста также окажется сомнительным, то образец следует признать отрицательным.
9.2. Анализ результатов (полуколичественный метод)
Определите оптическую плотность (ОП) Контроля Cut-off. Найдите среднее значение ОП для 
Контроля Cut-off. Для каждого образца рассчитать коэффициент в единицах RADIM (ЕР) по формуле 1:
ОПобразцаХЮ/O n cp .C u t-O ff (1)
Образцы с коэффициентом ниже 9 ЕР признают нереактивными (не содержащими антитела класса 1дМ  против 
Chlamydia pneumoniae).
Образцы с коэффициентом выше 11 ЕР признают реактивными (содержащими антитела класса 1дМ  против 
Chlamydia pneumoniae).
5/7


--- стр. 134 ---
Область значений коэффициента 9-11  ЕР является областью сомнительных значений. Если 
коэффициент для образца попадает в эти пределы, результат считается сомнительным, Рекомендуется 
повторить анализ через 2 - 4  недели, получив для этого свежий образец сыворотки или плазмы. Если 
результат повторного теста также окажется сомнительным, то образец следует признать отрицательным.
9.3. Критерии д остоверности
Пре>еде чем начать обсчет результатов, убедитесь, что ОП контрольных точек соответствуют следующим 
критериям:
Описание Условие
Blank <0,100
Отрицательный контроль < 0,200
Контроль Cut-off 0,250-0,900
Положительный контроль s ОП Cut-off
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ.
9.4. Интерпретация результатов
Нереактивные образцы признают отрицательными по содержанию антител 1дМ  класса против 
Chlamydia pneumoniae.
Реактивные и сомнительные образцы признают положительными по содержанию антител 1дМ 
класса против Chlamydia pneumoniae.
10. У С Л О В И Я  Х Р А Н Е Н И Я  И ЭК СП Л УАТ АЦ И И
Набор должен храниться при температуре +2...8°С.
Срок годности реагентов указан на этикетках флаконов.
Вскрытые реагенты стабильны при температуре +2...8°С в течение 2 месяцев.
11. О Г Р А Н И Ч Е Н И Я  В П Р И М Е Н Е Н И И  А Н А Л И З А
Бактериальная контаминация и повторная заморозка/разморозка могут сказаться на 
оптической плотности образцов. Поэтому постановка диагноза не должна основываться на единичном 
лабораторном исследовании, следует принимать во внимание анамнез и результаты исследования 
другими методами. У пациентов с иммуносупрессией и новорожденных данные серологического 
исследования должны интерпретироваться с осторожностью.
Антиген Chlamydia pneumoniae, сорбированный в лунках, представляет собой структурные 
элементы наружной мембраны. Для сывороток, содержащих антитела против LPS и МОМР Chlamydia 
trachomatis, возможен ложноположительный результат.
СХЕМА АНАЛИЗА
Предварительное разведение образцов; 1;101
Инкубация; 37±2°С, 60±5 мин. 
Промывка; 3 х 300 мкл.
Конъюгат ICONJ 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл
-  Инкубация; 20...25°С, 30±2 мин. 
Промывка: 3 х 300 мкл
Раствор ТМБ TMBl 100 мкп 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубация: комнатная температура. 15 мин.
Стоп-реагент |STOP 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Считывание; 450-405 нм (референсная длина волны: 620 нм).
1еральныи директор
6/7


--- стр. 135 ---
одитель лаборатории разработки И Ф А-систе 
)  «Компания А лко р Био»
)  «Компания А лко р Био»
RADIM S.p.A. - Via del Mare, 125 - 00040 Pomezia (Roma) Italia 
Tel.; +39 06 91.249.1 - Fax: +39 06 91.249.443 
National Order Entrv: +39 06 91.249.702 
Export Department:  +39 06 91.249.701 
Customer Care: +39 06 91.249.700 
info(a)radim.it - www.radim.it
RADIM
h


--- стр. 140 ---
«УТВЕРЖДАЮ
Г енер альн ы н
О О О  « К ом пш ^ Я  A^^kpjp, Би6>> 
Ш вы р е в М.В. 
y f 'i » 2011 г
'^'^':-r0pftvjPi£^
Н А Б О Р  Р Е А Г Е Н Т О В  ДЛЯ И М М У Н О Ф ЕР М Е Н Т Н О Г О 
О П Р Е Д Е Л Е Н И Я  А Н Т И ГЕН А  «Е» В И Р У С А  ГЕП А Т И Т А  В И/ИЛИ АНТИТЕЛ 
К АН ТИ ГЕН У  « Е » В И Р У С А  ГЕП А Т И Т А  В С Ы В О Р О Т К Е  И П Л А З М Е  К РО В И  Ч Е Л О В Е К А
Н ВеАд& АЬ
Только для in vitro диагностики
1. Н А З Н А Ч Е Н И Е
Определение антигена «е» вируса гепатита В (НВеДд) и антител против ИВеАд (анти-НВе) играет 
важную роль при мониторинге ВГВ инфекции. Присутствие НВеДд в сыворотке крови говорит об 
активной репликации вируса. Этот антиген позволяет наблюдать за развитием инфекционного процесса 
и спрогнозировать течение инфекции. С другой стороны, присутствие антител к НВеЛд говорит о 
снижении репликативной активности ВГВ. Определение анти-НВе очень полезно при мониторинге 
сероконверсии у пациентов с острой ВГВ инфекцией и определении активности инфекционного процесса 
у пациентов с хроническим гепатитом В.
2. ХАРА К Т ЕРИ С Т И К И  Н А Б О Р А
2.1. П РИ Н Ц И П  Д Е Й С Т В И Я
В наборе реагентов реализовано 2 варианта иммуноферментного анализа.
ИВеЛд определяют с помощью «сэндвич»-варианта твердофазного ИФА с использованием 
антител к НВеЛд, которые иммобилизованы на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок) и 
конъюгированы с пероксидазой хрена. В лунках, при добавлении исследуемого образца и конъюгата 
антител с пероксидазой, во время инкубации одновременно происходит иммобилизация антигена, 
содержащегося в исследуемом образце, и связывание его с конъюгатом, При удалении содержимого из 
лунок и промывке происходит удаление избытка конъюгата, не связавшегося с иммобилизованным в 
ходе инкубации антигеном. Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в 
лунках. Степень окраски прямо пропорциональна количеству антигена в анализируемых пробах. После 
измерения оптической плотности раствора в лунках наличие соответствующего антигена оценивается 
относительно значения cut-off.
Антитела к НВеДд определяют методом конкурентного ИФА. Во время инкубации в лунках, при 
добавлении исследуемого образца, нейтрализующего раствора, содержащего рекомбинантный НВеДд и 
антител к НВеДд, конъюгированных с пероксидазой хрена, происходит связывание НВеДд с 
иммобилизованными антителами и конкуренция за связывание с образовавшимся комплексом 
конъюгированных антител и антител, содержащихся в исследуемом образце. Несвязавшиеся компоненты 
удаляются промывкой. Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в 
лунках. Степень окраски обратно пропорциональна количеству антител к НВеДд в анализируемых 
пробах. После измерения оптической плотности раствора в лунках наличие специфических антител 
оценивают относительно значения cut-off.
2.2. С О С Т А В  Н А Б О Р А
Реагент Количество Состояние
Планшет
|МТР 1х 96 лунок Готов к использованию 
Ready for use
Промывочный раствор 
VVASH 1  X 50 мл Концентрат
Cone.
Отрицательный контроль
n e gI 1  X 3,0 мл Готов к использованию 
Ready for use
НЬеДд Положительный контроль 
IpOS Ад 1  X  1,0 мл Готов к использованию 
Ready for use
НВеДЬ Г1оложительный контроль 1  X  1,0 мл Готов к использованию 
Ready for use
Нейтрализующий раствор 1  флакон Лиофилизованнный препарат
1/8


--- стр. 141 ---
Ж Ш -
I
илюент для нейтрализующего раствора 
IL NEUTl 1  X 5,0 мл
Lyoph. __________________
Готов к использованию 
Ready for use
Конъюгат 1  X 14 мл
CONJ
Готов к использованию 
Ready for use
Раствор ТМБ
тмв
1  X 14 мл Готов к использованию 
Ready for use
Стоп-реагент
STOP
1  X 14 мл Готов к использованию 
Ready for use
2.2.1.Реагенты
• Иммуносорбент -  планшет (МТР) I Coated microplate: 1  планшет из 12 разборных стрипов по 
8 лунок (всего 96 лунок), лунки стрипов планшета покрыты моноклональными антителами к НВеАд. 
Неиспользованные стрипы хранить при температуре +2...8°С в плотно закрытом пластиковом пакете 
(прилагается),
• Отрицательный контроль (NEG) / Negative Control: 1  флакон. Раствор на основе сыворотки 
крови, отрицательный по отношению ко всем маркерам гепатита В и не содержащий антитела к вирусу 
гепатита С и ВИЧ. Консервант: неомицин. Готов к использованию.
• НВеАд Положительный контроль (POS Ад) / НВеАд Positive Control: 1  флакон Раствор на 
основе сыворотки крови, содержит НВеАд и не содержит HBsAg и антитела к вирусу гепатита С и ВИЧ. 
Консервант: неомицин. Готов к использованию,
• НВеАЬ Положительный контроль (POS АЬ) I НВеАЬ Positive Control: 1  флакон. Раствор на 
основе сыворотки крови, содержит антитела к НВеАд и не содержит HBsAg и антитела к вирусу гепатита С 
и ВИЧ, Консервант: неомицин. Готов к использованию.
• Нейтрализующий раствор (NEUT) / Neutralizing Solution (HBeAg): 1  флакон. Содержит 
НВеАд и БСА. Лиофилизован. Перед использованием растворите содержимое флакона в 5 мл дилюента 
для нейтрализующего раствора. Восстановленный реагент хранить не более 7 суток при температуре 
+2...8°С или более длительный срок при -20°С. Повторное замораживание не допускается. Консервант: 
неомицин.
• Дилюент для Нейтрализующего раствора (DIL NEUT) / Neutralizing Diluent: 1  флакон 
Раствор на основе трисового буфера содержит БСА. Консервант: неомицин. Готов к использованию.
• Конъюгат (CONJ) / Enzyme Conjugate: 1  флакон. Раствор на основе трисового буфера 
содержит моноклональные антитела к НВеАд, конъюгированные с пероксидазой хрена (HRPO). 
Консервант: неомицин. Готов к использованию.
• Промывочный раствор (WASH) / Washing Solution (concentrated): 1  флакон. Фосфатный 
буферный раствор, содержащий Твин 20. Консервант: Тимеросал (< 0,05%). Перед использованием 
развести необходимое количество концентрата дистиллированной водой в соотношении 1:10. В случае 
образования нерастворимых кристаллов поместите раствор в термостат (+37°С) на несколько минут. 
Приготовленный промывочный расгеор хранить не более 30 суток при +2...8°С, Реагент общий для продуктов  
линий «HEPATITIS В» производства компании RADIM.
• Раствор ТМБ (ТМВ): 1  флакон. Раствор тетраметилбензидина в цитратно-фосфатном буфере, 
содержащем DMSO и Н 2О2.  Готов к использованию.
• Стоп-реагент (STOP) / Blocking Reagent: 1  флакон. 1Н HCI. Готов к использованию.
• Бумага для заклеивания планшета (СРА) I Adhesive plate sealers.
• Пластиковый пакет.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1 Диагностическая специфичность
Диагностическая специфичность данного метода оценивалась на группе более 500 образцов, 
полученных от доноров крови и пациентов не имеющих ВГВ инфекции. Специфичность составляет г: 98%.
3.2 Диагностическая чувствительность
Диагностическая чувствительность данного метода оценивалась на группе более 200 
(Положительных образцов. Чувствительность составляет 2 98%.
1 3.3 Аналитическая специфичность
Аналитическая специфичность определяется как способность анализа точно выявлять 
|1специфический аналит в присутствии интерферирующих факторов в матриксе образца. Контрольные 
исследования показали, что характеристики анализа не изменяются под действием антикоагулянтов (соли 
ЭДТА и гепарина), аутоантител или родственных вирусов.
3.4 Аналитическая чувствительность
2/8


--- стр. 142 ---
Аналитическая чувствительность -  это минимальное количество специфического аналита, 
1еляемого при анализе. Она определялась с помощью референсной панели, полученной из 
итута Пауля Эрлиха. Для HbeAg она составила 0,5 МЕ/мл, а для НЬеАЬ -  0,6 МЕ/мл.
3.5 Прецизионность
Прецизионность оценивалась на анализаторе производства RADIM посредством определения 
повторяемости и воспроизводимости анализа (внутри- и межаналитический коэффициенты вариации) на 
тр е х  сыворотках с различной концентрацией HbeAg и антител против HbeAg, Для того чтобы перевести 
1'ечественный результат в количественный параметр, оптическую плотность (ОП), полученную для 
(образцов, делили на значение Cut-off, получая, таким образом, значение S/CO (сигнал/ Cut-off),
J Повторяем ость (Внутрианалитический коэф ф ициент вариации)
Анти-НВе
Сыворотка Среднее
значение
± S.D. C.V. Кол-во
репликатов
%
а 1,64 ± 0,09 5.4 10
Ь 1,11 ± 0,09 7,9 10
с 0,79 ± 0,07 9,0 10
HbeAg
Сыворотка Среднее ± S.D. C.V. Кол-во
значение репликатов
%
а 0,35 ± 0,005 13,4 10
Ь 2,22 ± 0,12 5,5 10
с 48,83 ± 1,55 3,2 10
В оспр оизвод им ость (М ежаналитический коэф ф ициент вариации)
Сыворотка Среднее
значение
± S.D. C.V. Кол-во
S/CO % постановок
а 1,2 ± 0,08 7,5 10
Ь 37,02 ± 4,62 12,5 10
с 68,04 ± 4,68 6,87 10
Анти-НВе
Сыворотка Среднее
значение
± S.D. C.V. Кол-во
S/CO % постановок
а 0,22 ± 0,02 7,87 10
Ь 0,80 ± 0,10 12,2 10
с 1,75 ± 0,18 10,6 10
4. М Е Р Ы  П Р Е Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И
Для получения д остовер н ы х результатов необходим о соб л ю д ать следую щ ие правила:
Не смешивайте специфические реагенты разных серий набора (см, п,2.2.1.). Не смешивайте их 
с реагентами других производителей,
-  Смешивание общих реагентов разных серий (см. п.2.2.1,) допускается.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их загрязнение.
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте только дистиллированную воду. Храните воду только в чистой посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для каждого образца или
реагента.
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и 
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам анализа.
В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует убедиться, 
что все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, спектрофотометр, термостат) 
проходит регулярную проверку и поддерживается в исправном состоянии.
3/8


--- стр. 143 ---
II
-  Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок или 
магического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок может 
вести к неверной интерпретации результатов анализа.
Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
рофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению оптической 
юсти образцов и последующим неправильным результатам анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». Если 
температура инкубации отклоняется от 37±2°С, это может привести к снижению чувствительности анализа 
« /и л и  биологической денатурации образцов и реагентов. Следует периодически проверять показания 
датчика температуры.
-  Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или образцов. 
.'Несоблюдение температурного режима хранения может привести к биологической денатурации 
компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная идентификация 
м ож ет привести к ложным результатам и постановке ошибочного клинического диагноза.
Чтобы исклю чить заражение персонала и загрязнение окружающ ей среды, следует  
соблюдать следую щ ие правила;
При работе с потенциально инфекционным материалом и во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
1  -  Не разрешается пипетировать ртом.
' -  Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и курение в помещениях,
предназначенных для работы с наборами.
Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и Стоп-реагентом. Избегать 
попадания в глаза, на кожу и слизистые. В случае контакта тщательно промыть пораженный участок проточной 
водой.
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на присутствие 
HBsAg, антител к ВИЧ и к вирусу гепатита С. Несмотря на полученные отрицательные результаты, 
следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не может гарантировать полное 
отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и другие реагенты, содержащие сыворотку 
крови человека, следует считать потенциально инфекционными.
Следует избегать разбрызгивания реагентов и образования аэрозолей. Места, на которые 
попал пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. Исполь­
зованный при этом протирочный материал следует считать потенциально инфицированным и подвергнуть 
соответствующей обработке перед утилизацией.
- Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных азидов 
металлов в чугунных и медных водопроводных трубах, после слива использованных реагентов следует 
промыть сток большим объемом проточной воды.
5. М А Т Е Р И А Л Ы  И О Б О Р У Д О В А Н И Е , НЕ В Х О Д Я Щ И Е  В Н А Б О Р
5.1. М атериалы  и оборудование, необходим ы е при ручной постановке
- Микропипетки, в том числе многоканальные, вьюокой точности (10-200 мкл, менее 3% ошибки) со сменными 
наконечниками.
- Градуированные цилиндры для разведения реагентов.
- Дистиллированная вода.
- Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
- Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления содержимого из лунок.
- Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность 
раствора в лунках в диапазоне 0 -3  ед. опт. плотн. при длинах волн 620,450 и 405нм.
5.2. Автом атическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа на 
автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC.
В случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю необходимо 
удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для иммуно- 
ферментного анализа производства RADIM.
6. А Н А Л И З И Р У Е М Ы Е  О Б Р А З Ц Ы
Данный набор может применяться для исследования образцов сыворотки и плазмы крови человека. 
Сильно гемолизованные или липемичные образцы, а также присутствие в образцах фибрина могут 
оказывать влияние на результаты анализа. Перед постановкой анализа следует убедиться в том, что 
образцы прозрачные и не содержат осадка. Допускается хранение образцов при температуре +2...8°С в 
течение 1  недели. При необходимости более длительного хранения образцы следует заморозить при 
-20°С. Избегайте повторного оттаивания и замораживания образцов.
4/8


--- стр. 144 ---
7. П Р О В Е Д Е Н И Е  А Н А Л И З А *
7.1. H B e A g
Доведите реагенты до комнатной температуры (+18.. .25°С).
Тщательно перемешайте образцы перед проведением анализа.
7.1.1. Промаркируйте лунки для контролей и исследуемых образцов: Отрицательный контроль 
(йносится в тетрапликате, Положительный контроль - в дубликате, исследуемые образцы наносятся в 
монопликатах. Оставьте 2 лунки для обнуления (Blank).
7.1.2. Внесите по 100 мкл контролей и образцов в соответствующие лунки.
7.1.3. Внесите во все лунки по 100 мкл Конъюгата, исключая лунки Blank.
7.1.4. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора).
7.1.5. Инкубируйте его в течение 3 часов ±10 минут при 37±2 °С.
7.1.6. Удалите содержимое лунок и промойте лунки 4 раза, внося при каждой промывке по 350 мкл 
разведенного Промывочного раствора. Тщательно удалите жидкость из лунок.
7.1.7. Внесите во все лунки по 100 мкл Раствора ТМБ.
7.1.8. Инкубируйте в течение 20±2 минут при 3712*0. Избегайте прямого попадания солнечного 
света на планшет.
7.1.9. Внесите во все лунки по 100 мкл Стоп-реагента.
7.2. Анти-Н Ве
Доведите реагенты до комнатной температуры (+18.. .25” С).
Тщательно перемешайте образцы перед проведением анализа.
7.2.1. Промаркируйте лунки для контролей и исследуемых образцов: Отрицательный контроль (КП О  
мМЕ/мл) наносится в тетрапликате, Положительный контроль (КП 100 мМЕ/мл) наносится в дубликате, 
исследуемые образцы наносятся в монопликатах. Оставьте 2 лунки для обнуления (Blank).
7.2.2. Внесите по 50 мкл контролей и образцов в соответствующие лунки.
7.2.3. Внесите во все лунки по 50 мкл Нейтрализующего раствора, исключая лунки Blank.
7.2.4. Внесите во все лунки по 100 мкл Конъюгата, исключая лунки Blank.
7.2.5. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора).
7.2.6. Инкубируйте его в течение 3 часов ± 10 минут при 37±2°С.
7.2.7. Удалите содержимое лунок и промойте лунки 4 раза, внося при каждой промывке по 350 мкл  
разведенного Промывочного раствора. Тщательно удалите жидкость из лунок.
7.2.8. Внесите во все лунки по 100 мкл Раствора ТМБ.
7.2.9. Инкубируйте в течение 20±2 минут при 37±2°С. Избегайте прямого попадания солнечного 
света на планшет.
7.2.10. Внесите во все лунки по 100 мкл Стоп-реагента.
* При использовании автоматического анализатора производства RADIM и/или SEAC, действуйте в 
соответствии с его инструкцией.
СХЕМЫ АНАЛИЗОВ приведены на странице 7.
8. Р Е Г И С Т Р А Ц И Я  Р Е З У Л Ь Т А Т О В
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при двух длинах волн 450 нм. 
Референсный фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо вычитать 
величину оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех остальных лунок. В 
случае, если значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, считывание результатов 
проводят при длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не позже, чем через 15 минут после 
остановки реакции.
Примечание: при использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или SEAC 
для планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять значения 
автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм, что позволит расширить область кривой.
9. У Ч ЕТ  Р Е З У Л Ь Т А Т О В
9.1 H B e A g
Определите среднее значение оптической плотности (ОП) Отрицательного Контроля (ОК) и 
Положительного контроля (ПК). Рассчитайте значение Cut-off по формуле (1):
Cut-off = ОПсрОК + 0,100
Присутствие или отсутствие HBeAg определяется путем сравнения ОП образца со значением Cut­
off.
Образцы с ОП ниже Cut-off признают не реактивными (не содержащими HBeAg),
Образцы с ОП выше Cut-off признают реактивными (содержащими HBeAg) и требуют повторного 
тестирования для подтвер>кцения положительного результата. Если при повторном тестировании получен 
отрицательный результат, образец признается нереактивным. Если же при повторном тестировании получен 
положительный результат, образец признается реактивным,
5/8


--- стр. 145 ---
Область значений ОП ± 10% от Cutoff является областью сомнительных значений. Если ОП образца 
падает в эти пределы, результат считается сомнительным и требует повторного тестирования для 
эрждения.
Пример расчета результатов:
Запрещается использовать приведенные ниже значения вместо реальных экспериментальных
м.
[О П репликатов Отрицательного контроля: 0 ,0 1 5 - 0 ,0 1 8 -0 , 0 2 0 -0 ,0 1 9
^Среднее значение:
Критерий достоверности (< 0,050)  
f  Cut-O ff = 0,018 + 0,100 = 0,118
I  on Положительного контроля:  
[Среднее значение:
\ Критерий достоверности (> 0,800)
0,018
Выполняется
1,4 8 0 - 1,500 
1,490
Выполняется
9.2 Анти-Н Ве
Определите среднее значение оптической плотности (ОП) Отрицательного Контроля (ОК) и 
Положительного контроля (ПК). Рассчитайте значение Cut-off по формуле (1):
Cut-off = (ОПсрОК + 0ПсрПК)/2
Присутствие или отсутствие антител против НВеАд определяется путем сравнения ОП образца со 
значением Cut-off.
Образцы с ОП выше Cut-off признают не реактивными (не содержащими антитела против НВеДд).
Образцы с ОП ниже Cut-off признают реактивными (содержащими антитела против НВеЛд) и требуют 
повторного тестирования для подтверждения положительного результата. Если при повторном тестировании 
получен отрицательный результат, образец признается не реактивным. Если же при повторном тестировании 
получен положительный результат, образец признается реактивным.
Область значений ОП ± 10% от Cut-off является областью сомнительных значений. Если ОП образца 
попадает в эти пределы, результат считается сомнительным и требует повторного тестирования для 
подтверждения.
Пример расчета результатов:
Запрещается использовать приведенные ниже значения вместо реальных экспериментальных  
тых.
ОП репликатов Отрицательного контроля: 1,750 -  1,790 -  1,720 -  1,760
Среднее значение:
Критерий достоверности (> 1,000)  
ОП Положительного контроля:  
Среднее значение:
ОПсрОК/ОПсрПК
Критерий достоверности (> 10)
Cut-Off = (1,755  + 0,025)/2 = 0,890
1,755
Выполняется
0 ,0 2 0 -0 ,0 3 0
0,025
70,2
Выполняется
9.3. Критерии д остоверности
Прежде чем начать обсчет результатов, убедитесь, что ОП контрольных точек соответствуют следующим 
критериям.
Условиеиписание — НВеДд Днти-НВе
ОП Отрицательного контроля при 450 нм < 0,050 > 1,00
ОП Положительного контроля при 450 нм > 0,800
-----
ОПсрОК/ОПср НВеДЬПК ------ > 10,0
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ.
9.4. Интерпретация результатов
-  Нереактивные образцы признают отрицательными по содержанию НВеДд или антител против
НВеДд.
-  Реактивные образцы признают положительными по содержанию НВеДд или антител против
НВеДд.
10. У С Л О В И Я  Х Р А Н Е Н И Я  И ЭК СП Л УА Т А Ц И И
-  Набор должен храниться при температуре +2...8°0.
-  Срок годности реагентов указан на этикетках флаконов.
-  Вскрытые реагенты стабильны при температуре +2...8°С в течение 2 месяцев.
6/8


--- стр. 148 ---
Прошито, пронумепрвано, скреплено 
печатью ______) лист_
Генераль^|Ш директор 
ООО «К<»^анйя Алкор БиЬ»
М.В;'Швырев■  W  1 . ^ .  г


--- стр. 149 ---
«УТВЕРЖДАЮ ,ейио„)„ --t' ----“ ‘ •
генеральнь 1ЙWdeKTop ' ' \ ' ‘ o V
ООО «Компан1тАлкор,^,9,» \ \ у
Швырев М .
« »
J .5 "Alkor Bio у | Г  
Qom panV' / ^ 'i г
Ltd.
НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО  
ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОВЕРХНОСТНОГО АНТИГЕНА ВИРУСА ГЕПАТИТА В  
В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ  
HBsAg
Только для in vitro диагностики
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Определение поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) в сыворотке или плазме крови 
человека играет важную роль в диагностике Гепатита В. HBsAg начинает определяться в крови через 
4-12  недель после инфицирования и предшествует клиническим проявлениям заболевания, 
Присутствие в крови этого маркера говорит о наличии ВГВ инфекции. Эта тест-система -  третье 
поколение наборов для качественного определения HBsAg в сыворотке или плазме человека. В ней 
использованы два моноклональных антитела, которые узнают «а» детерминанту, общую для субтипов 
«ad» и «ау».
Тест-система HBsAg предназначена для качественного определения поверхностного антигена 
вируса Гепатита В в сыворотке и плазме крови человека.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
В наборе реагентов реализован «сэндвич»-вариант твердофазного иммуноферментного анализа. 
Для этого использованы антитела с различной эпитопной специфичностью к поверхностному антигену 
Гепатита В. Одно из них иммобилизовано на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок), второе 
конъюгировано с пероксидазой хрена. В лунках, при добавлении исследуемого образца и конъюгата 
антител с пероксидазой, во время инкубации одновременно происходит иммобилизация антигена, 
содержащегося в исследуемом образце, и связывание его с конъюгатом. При удалении содержимого из 
лунок и промывке происходит удаление избытка конъюгата, не связавшегося с иммобилизованным в 
ходе инкубации антигеном. Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в 
лунках. Степень окраски прямо пропорциональна количеству антигена в анализируемых пробах. После 
измерения оптической плотности раствора в лунках наличие HBsAg оценивается относительно значения 
cut-off.
2.2. СОСТАВ НАБОРА
Реагент Количество Состояние
1й вариант 
комплектации
2й вариант 
комплектации
Планшет
1м тИ 1x96 лунок 2х 96 лунок Готов к использованию 
Ready for use
1Промывочный
эаствор
WASH
1  X 50 мл 1  X 50 мл Концентрат
Cone.
Отрицательный
контроль
Ineg
1  X  2,0 мл 1  X  2,0 мл Готов к использованию 
Ready for use
Поло
контс
POS
жительный
ЮЛЬ 1  X  1,0 мл 1  X  1,0 мл Готов к использованию 
Ready for use
Конъюгат
ICONJ 1  X  14 мл 2 X  14 мл Готов к использованию 
Ready for use
Раст
[ГМВ
зор ТМБ 1  X  14 мл 2 X  14 мл Готов к использованию 
Ready for use
реагент 1 x 1 4  мл 2 X  14 мл Готов к использованию 
Ready for use
1/6


--- стр. 150 ---
Количество реагентов рассчитано на 96 лунок.
2.2.1. Реагенты:
•  Им м уносорбент -  планш ет (МТР) / Coated microplate: 1  планшет из 12 разборных стрипов по 
;8  лунок (всего 96 лунок), лунки стрипов планшета покрыты мышиными моноклональными антителами к 
fH B s A g . Неиспользованные стрипы хранить при температуре +2...8°С в плотно закрытом пластиковом
(ке те  (прилагается).
Пром ы вочны й раствор (W ASH ) / W ashing Solution (concentrated): 1  флакон. Фосфатный 
!уферный раствор, содержащий Твин 20. Консервант: Тимеросал (< 0.05%). Перед использованием 
1вести необходимое количество концентрата дистиллированной водой в соотношении 1:10. В случае 
(азования нерастворимых кристаллов поместите раствор в термостат (+37°С) на несколько минут. 
1енный промывочный раствор хранить не более 30 суток при +2... 8°С.
О трицательны й контроль (N EG ) / Negative Control; 1  флакон. Раствор на основе сыворотки 
юви, отрицательный по отношению ко всем маркерам гепатита В и не содержащий антитела к вирусу 
'гепатита С и ВИЧ. Консервант: неомицин и тимеросал (<0,05%). Готов к использованию.
• П олож ительны й контроль (P O S) / Positive Control: 1  флакон. Буферный раствор содержащий 
HBsAg. Консервант: неомицин и тимеросал (<0,05%). Готов к использованию.
• Конъю гат (C O N J) / Enzym e Conjugate: 1  флакон или 2 флакона. Раствор на основе трисового 
буфера содержит моноклональные антитела к HBsAg, конъюгированные с пероксидазой хрена (HRPO). 
Консервант: неомицин. Готов к использованию.
• Раствор Т М Б  (ТМВ): 1  флакон. Раствор тетраметилбензидина в цитратно-фосфатном буфере, 
содержащем DMSO и Н 2О2.  Готов к использованию.
• Стоп-реагент (ST O P ) / Blockin g Reagent: 1  флакон. 1Н HCI. Готов к использованию.
• Бумага для заклеивания планш ета (СРА ) / A dhesive plate sealers.
• П ластиковы й пакет.
3. А Н А Л И Т И Ч ЕС К И Е И Д И А ГН О С Т И Ч Е С К И Е  ХАРА К Т ЕРИ С Т И К И
3.1 С пециф ичность
Диагностическая специфичность была определена на 1500 образцах, полученных от доноров, и 
составила 99,8%.
3.2 Ч увстви тельность
Чувствительность определялась путем анализа серии разведений стандартов на HBsAg (субтипы 
«ad» и «ау»), полученных из института Пауля Эрлиха. Концентрации выражены в Ед/мл.
Субтип ad Субтип ау
Концентрация Оптическая плотность Концентрация Оптическая плотность
Процедура А Процедура В Процедура А Процедура В
4 Ед/мл 1,810 0,932 4 Ед/мл 2,321 1,112
1  Ед/мл 0,469 0,225 1  Ед/мл 0,698 0,386
0,5 Ед/мл 0,225 0,110 0,5 Ед/мл 0,343 0,178
0,25 Ед/мл 0,116 0,065 0,25 Ед/мл 0,172 0,095
0,125 Ед/мл 0,061 0,035 0,125 Ед/мл 0,095 0,063
0,062 Ед/мл 0,030 0,022 0,062 Ед/мл 0,042 0,020
I
f
Ед/мл.
Среднее значение ОП Отрицательного контроля = 0,017 
Значение Cut-off: Вариант А: 0,067 
Вариант В: 0,047
Минимальная определяемая концентрация для субтипа ad -  0,15 Ед/мл, а для субтипа ау -  0,08
4. М Е Р Ы  П Р Е Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И
Для получения д остове р н ы х результатов необходимо соб л ю д ать следую щ ие правила:
Не смешивайте специфические реагенты ( см.2.2.1.) разных серий набора. Не смешивайте их с 
реагентами других производителей.
Разрешается смешивать Промывочный раствор, Раствор ТМБ и Стоп-реагент разных серий 
набора. Не смешивайте их с реагентами других производителей.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их загрязнение,
-  Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или
окислителей.
-  Используйте дистиллированную воду. Храните воду только в чистой посуде.
-  Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для каждого образца или
реагента.
2/6


--- стр. 151 ---
[- Н е вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и 
атуры  инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
'л ь та та м  анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
пгствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам анализа.
В  случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
тические пипетки и обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует убедиться, 
[все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, спектрофотометр, термостат) 
дит регулярную проверку и поддерживается в исправном состоянии.
-  Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок или 
иатического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок может
Ц ве сти к неверной интерпретации результатов анализа.
-  Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
ектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению оптической
ности образцов и последующим неправильным результатам анализа.
-  Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». Если 
мпература инкубации отклоняется от 37±2°С, это может привести к снижению чувствительности анализа 
'и л и  биологической денатурации образцов и реагентов. Следует периодически проверять показания
чика температуры.
-  Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или образцов, 
облюдение температурного режима хранения может привести к биологической денатурации
(компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
-  Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная идентификация 
[может привести к ложным результатам и постановке ошибочного клинического диагноза.
Чтобы исключить заражение персонала и загрязнение окружающей среды, следует  
f  соблюдать следующие правила:
При работе с потенциально инфекционным материалом и во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
Не разрешается пипетировать ртом.
Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и курение в помещениях, 
предназначенных для работы с наборами.
-  Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и Стоп-реагентом, Избегать 
попадания в глаза, на кожу и слизистые. В случае контакта тщательно промыть пораженный участок проточной 
водой.
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на присутствие 
HBsAg, антител к ВИЧ и к вирусу гепатита С. Несмотря на полученные отрицательные результаты, 
следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не может гарантировать полное 
отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и другие реагенты, содержащие сыворотку 
крови человека, следует считать потенциально инфекционными.
-  Следует избегать разбрызгивания реагентов и образования аэрозолей. Места, на которые 
попал пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. Исполь­
зованный при этом протирочный материал следует считать потенциально инфицированным и подвергнуть 
соответствующей обработке перед утилизацией.
- Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных азидов 
металлов в чугунных и медных водопроводных трубах, после слива использованных реагентов следует 
промыть сток большим объемом проточной воды.
5. МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В НАБОР
5.1. Материалы и оборудование, необходимые при ручной постановке
- Микропипетки, в том числе многоканальные, вьюокой точности (10-200 мкп, менее 3% ошибки) со сменными 
наконечниками.
- Градуированные цилиндры для разведения реагентов. ,
- Дистиллированная вода,
- Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С,
- Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления содержимого из лунок.
- Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность 
раствора в лунках в диапазоне 0 -3 ед. опт. плотн. при длинах волн 620,450 и 405нм.
5.2. Автоматическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа на 
автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC.
3/6


--- стр. 152 ---
в  случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю необходимо 
свериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для иммуно- 
ентного анализа производства RADIM.
6 . А Н А Л И З И Р У Е М Ы Е  О Б Р А З Ц Ы
Данный набор может применяться для исследования образцов сыворотки и плазмы крови человека, 
ь н о  гемолизованные или липемичные образцы должны быть отбракованы. Допускается хранение 
йцов при температуре +2...8°С в течение 1  -2 суток. При необходимости более длительного хранения 
ц ы  следует заморозить при -20°С. Образцы плазмы крови могут содержать фибриновые включения, 
ры е могут оказывать влияние на результаты анализа, поэтому перед постановкой анализа следует 
диться в том, что образцы прозрачные и не содержат осадка. Избегайте повторного оттаивания и 
ораживания образцов.
7. П Р О В Е Д Е Н И Е  А Н А Л И ЗА *
-  Доведите реагенты до комнатной температуры (+18.. ,25’ С).
-  Тщательно перемешайте образцы перед проведением анализа.
7.1. Промаркируйте лунки для контролей и исследуемых образцов. Оставьте 2 лунки для обнуления 
|(В 1 а п к), 4 лунки для отрицательного контроля и 2 лунки для положительного контроля.
7.2. Внесите по 100 мкл контролей и образцов в соответствующие лунки.
Внимание: Контроли готовы к использованию и не требуют разведения.
7.3. Внесите во все лунки, исключая лунки Blank, по 100 мкл Конъюгата.
7.4. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора).
7.5. Инкубируйте его в течение: Процедура А  -  3 часа при 37±2 °С.
Процедура В -  90 минут при 37±2 °С.
7.6. Удалите содержимое лунок и промойте их 4 раза, внося при каждой промывке по 300 мкл  
разведенного Промывочного раствора. Тщательно удалите жидкость из лунок.
7.7. Внесите во все лунки по 100 мкл Раствора ТМБ.
7.8. Инкубируйте в течение 20 минут при 37±2 °С в темноте.
7.9. Внесите во все лунки по 100 мкл Стоп-реагента.
* При использовании автоматического анализатора производства RADIM и/или SEAC, действуйте в 
соответствии с его инструкцией.
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 5.
8. Р Е Г И С Т Р А Ц И Я  Р Е З У Л Ь Т А Т О В
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. Референсный 
фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо вычитать величину 
оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех остальных лунок. В случае, 
если значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, считывание результатов проводят 
при длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не позже, чем через 15 минут после остановки 
реакции.
Примечание:
1) При использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или SEAC для 
планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять значения 
автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм
9. У Ч ЕТ  Р Е З У Л Ь Т А Т О В
9.1 Анализ результатов
9.1.1.Определить оптическую плотность (ОП) Отрицательного контроля. Найдите среднее значение 
оптической плотности для Отрицательного контроля, исключая значения выше 0,1 ед.опт.пл. Если два или 
больше значений ОП Отрицательного контроля больше 0,1 ед.опт.пл., анализ необходимо повторить.
И 9.1.2,Определить ОП Положительного контроля. Найдите среднее значение ОП для 
Положительного контроля, которое должно быть выше 0,8 ед,опт,пл, (Процедура А) или выше 0,4 
j; ед опт.пл, (Процедура В),
9,1.3.Расчитать значение Cut-off:
Процедура А -  ОПср.ОК + 0,050 
Процедура В -  ОПср.ОК + 0,030
Присутствие или отсутствие HBsAg определяется путем сравнения ОП образца со значением Cut­
o ff.
Образцы с ОП ниже Cut-off- признают нереактивными (не содержащими HBsAg).
4/6


--- стр. 153 ---
Образцы с o n  выше Cut-off - признают реактивными (содержащими HBsAg). Такие образцы должны быть 
анализированы повторно. Если при повторном анализе полученная ОП ниже значения Cut-off, образец 
нают нереактивным. Если же полученная ОП выше значения Cut-off, образец признают реактивным.
Область значений ОП ± 10% от Cut-off является областью сомнительных значений. Если ОП образца 
чает в эти пределы, результат считается сомнительным. Такие образцы должны быть проанализированы 
ггорно.
Пример расчета результатов:
^прещается использовать приведенные ниже значения вместо реальных экспериментальных
Отрицательный контроль:
(0,008 + 0,010 + 0,009  + 0,013)/4  = 0,01 (ОПср.ОК)
Положительный контроль:
Процедура А: (1,216  + 1,280)/2  = 1,248 (ОПср.ПК)
Процедура В: (0,826 + 0,8 17)/2 = 0,848 (ОПср.ПК)
Оптические плотности контролей соответствуют критериям.
Значение Cut-off:
Процедура А: (0,010 + 0,050) = 0,060  
Процедура В: (0,010 + 0,030)  = 0,040
9.2. Интерпретация результатов
Нереактивные образцы признают отрицательными по содержанию HBsAg,
Реактивные образцы признают положительными по содержанию HBsAg.
10. У С Л О В И Я  Х Р А Н Е Н И Я  И ЭК СП Л УАТ АЦ И И
Набор должен храниться при температуре +2...8°С.
Срок годности реагентов указан на этикетках флаконов.
СХЕМА АНАЛИЗА
Предварительное разведение образцов: 1:101
^
_______ Лунки
Реагенты _
Blank N E G
100 мкл
POS Образцы
- N E G
— ------------ 100 мкл
Образцы — 100 мкл
Конъюгат CONJ 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Процедура А: Инкубация: 37±2 °С, 3 часа. 
Процедура В: Инкубация: 37±2 °С, 90 мин. 
Промывка: 4 х 300 мкл.
Раствор ТМБ ТМВ| 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкп 100 мкл
Инкубация: 37±2 °С, 20 мин.
Стоп-реагент ISTOP 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Считывание: 450-405 нм (референсная длина волны: 620 нм).
5/6


--- стр. 154 ---
пьный директор 
^Компания А лко р Био»
Читель лаборатории разработки И Ф А-систем  
{«Компания А лко р Био»
в М.В.
ова А  С.
\
\
Л -
,h
- J '
RADIM S.p.A. - Via del Маге, 125 - 00040 Pomezia (Roma) Italia 
Tel.: +39 06 91.249.1 - Fax: +39 06 91.249.443 
National Order Entrv:  +39 06 91.249,702 
Export Departrnent: +39 06 91.249.701 
Customer Care: +39 06 91.249.700 
info^radim.it - www.radim.it


--- стр. 156 ---
О О О  « K o M n ^ tf^  А п к р ]^ и о > » \^ \. 
Швырев1«1.В.!
« »
Н А Б О Р  Р Е А Г Е Н Т О В  ДЛ Я К А Ч Е С Т В Е Н Н О Г О  И/ИЛИ К О Л И Ч Е С Т В Е Н Н О Г О 
И М М У Н О Ф ЕР М Е Н Т Н О Г О  О П Р Е Д Е Л Е Н И Я  АН ТИ ТЕЛ  К 
П О В Е Р Х Н О С Т Н О М У  А Н Т И ГЕН У  В И Р У С А  ГЕП А Т И Т А  В 
В С Ы В О Р О Т К Е  И П Л А З М Е  КРО В И  Ч Е Л О В Е К А 
H B sA b
Только для in vitro диагностики
1. Н А З Н А Ч Е Н И Е
Определение антител против поверхностного антигена вируса гепатита В (анти-HBs), последнего 
маркера, появляющегося при сероконверсии, играет важную роль при наблюдении за пациентами во 
время реконвалесценции (или при прогнозе течения ВГВ инфекции), а также позволяет оценить 
эффективность вакцинации. Обычно анти-HBs антитела появляются в конце «сероконверсионного окна», 
вслед за падением концентрации HBsAg, и могут сохраняться в крови годами или даже в течение всей 
жизни человека. Отсутствие сероконверсии, обусловленной анти-HBs антителами, говорит о том, что 
инфекция переходит в хроническую форму (5% случаев ВГВ инфекции).
2. ХАРА К Т ЕРИ С Т И К И  Н А Б О Р А
2.1. ПРИ Н Ц И П  Д Е Й С Т В И Я
В наборе реагентов, предназначенном для качественного и/или количественного определения 
антител к HBsAg (HBsAb), реализован «сэндвич» - вариант твердофазного иммуноферментного анализа 
(ИФД). Для реализации этого варианта использованы два HBsAg, один из которых иммобилизован на 
твердой фазе (внутренняя поверхность лунок), второй конъюгирован с пероксидазой хрена. В лунках, при 
добавлении исследуемого образца и конъюгата HBsAg-пероксидаза, во время инкубации одновременно 
происходит иммобилизация антител к HBsAg, содержащихся в исследуемом образце, и связывание 
образовавшегося комплекса с конъюгатом. Несвязавшиеся компоненты удаляются промывкой. Во время 
инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо 
пропорциональна концентрации антител к HBsAg в анализируемых пробах. После измерения оптической 
плотности раствора в лунках на основании калибровочного графика рассчитывается концентрация 
иммуноглобулинов к HBsAg в исследуемых образцах. В случае проведения качественного анализа 
наличие специфических антител оценивают относительно значения cut-off.
2.2. С О С Т А В  Н А Б О Р А
Р Е А Г Е Н Т Ы  - KIT R E A G E N T S
Реагент Количество Состояние
1й вариант 
комплектации
2й вариант 
комплектации
План 1
МТР
нет 1х 96 лунок 2 X  96 лунок Готов к использованию 
Ready for use
Промывочный
раствор
^A S H l
1  X  50 мл 1  X  100 мл Концентрат
Cone.
Раствор для разведения
Id il
1  X  20 мл
1
2 X  20 мл Готов к использованию 
Ready for use
Калибраторы 6 X  1,0 мл 6 X  1,0 мл Готов к использованию 
Ready for use
огат 2 X  17,5 мл 3 x 1 7 ,5  мл Готов к использованию 
Ready for use
юр ТМБ 1  X  14 мл 2 X  14 мл Готов к использованию 
Ready for use
;реагент
>
1  X  14 мл 2 X  14 мл Готов к использованию 
Ready for use
1/7


--- стр. 157 ---
Количество реагентов рассчитано на 96 или на 192 лунки.
Т
 2.2.1. Реагенты
• И м м уносорбент -  планш ет (МТР) / Coated microplate: 1  или 2 планшета из 12 разборных 
стрипов по 8 лунок (всего 96 лунок). Лунки стрипов планшета покрыты HBsAg (субтипы «ad» и «ау»). 
Неиспользованные стрипы хранить при температуре +2...8°С в плотно закрытом пластиковом пакете 
(прилагается).
• Калибраторы  (C A L) / Calibrators: 6 флаконов. Растворы на основе сыворотки крови, 
f содержащие антитела класса IgG к HBsAg в следующих концентрациях: О , 10, 30, 100, 300 и 1000 мМЕ/мл 
и  не содержащие HBsAg, антитела к вирусу гепатита С и ВИЧ. Калибраторы аттестованы относительно 
П ервого Международного стандарта. Готовы к использованию. Консерванты: неомицин и тимеросал (<0,05%). 
П р и  постановке качественного анализа нулевой калибратор и калибратор с концентрацией 1000 мМЕ/мл 
д о л ж н ы  быть использованы в качестве отрицательной и положительной контрольных проб  
1мтветственно.
*  • Конъю гат (CO N J) I Enzym e Conjugate; 2 флакона или 3 флакона. Раствор на основе трисового
буфера, содержит HBsAg (субтипы «ad» и «ау»), конъюгированный с пероксидазой хрена (HRPO) и БСА. 
Готов к использованию. Консервант: неомицин.
• Раствор для разведения (DIL) / Sam ple Diluent: 1  флакон или 2 флакона Раствор на основе 
сыворотки крови, отрицательный по отношению ко всем маркерам гепатита В и не содержащий HBsAg, 
антитела к вирусу гепатита С и ВИЧ. Готов к использованию. Консерванты: неомицин и тимеросал (<0,05%).
• Пром ы вочны й раствор (W ASH ) / W ashing Solution (concentrated): 1  флакон. Фосфатный 
буферный раствор, содержащий Твин 20. Консервант: Тимеросал (< 0.05%). Перед использованием 
развести необходимое количество концентрата дистиллированной водой в соотношении 1:10. В случае
J  образования нерастворимых кристаллов поместите раствор в термостат (+37°С) на несколько минут. 
Приготовленный промывочный раствор хранить не более 30 дней при +2...8°С. Реагент общ ий для п р о д у к т о в 
линий «H EPA TITIS В» пр оизвод ства компании R A D IM .
• Раствор Т М Б  (ТМВ); 1  флакон или 2 флакона. Раствор тетраметилбензидина в цитратно- 
фосфатном буфере, содержащем DMSO и Н 2О2.  Готов к использованию.
• Стоп-реагент (ST O P ) / Blo ckin g Reagent: 1  флакон или 2 флакона. 1Н НС1. Готов к 
использованию.
• Бумага для заклеивания планш ета (С Р А ) I A dhesive plate sealers.
• П ластиковы й пакет.
3. А Н А Л И Т И Ч ЕС К И Е И Д И А ГН О С Т И Ч Е С К И Е  ХА РА К Т ЕРИ С Т И К И
3.1 Диагностическая специф ичность
Диагностическая специфичность данного метода оценивалась на группе более 500 образцов, 
полученных от доноров крови. Специфичность составляет г  98%.
3.2 Диагностическая чувствительность
Диагностическая чувствительность данного метода оценивалась на группе более 200 
положительных образцов. Чувствительность составляет s 98%,
3.3 Аналитическая специф ичность
Аналитическая специфичность определяется как способность анализа точно выявлять 
специфический аналит в присутствии интерферирующих факторов в матриксе образца. Контрольные 
исследования показали, что характеристики анализа не изменяются под действием антикоагулянтов (соли 
ЭДТА и гепарина) или родственных вирусов. Дополнительные исследования, проведенные на сыворотках 
беременных женщин, показали, что качество анализа не изменяется под действием интерферирующих 
агентов.
3.4 Аналитическая чувствительность
Аналитическая чувствительность выражается минимальным количеством определяемого аналита, 
выявляемым с помощью данного метода. Минимальная достоверно определяемая концентрация составляет 4 
мМЕ/мл. Эта величина была определена как концентрация аналита, отличающаяся от нулевого калибратора на 
три стандартных отклонения.
3.5 Прецизионность
Прецизионность оценивалась на анализаторе производства RADIM посредством определения 
повторяемости и воспроизводимости анализа (внутри- и межаналитический коэффициенты вариации) на 
трех сыворотках с различной концентрацией антител против HBsAg.
Повторяем ость (Внутрианалитический коэф ф ициент вариации)Сыворотка Среднее ± S.D. C.V. Кол-во
значение % репликатов
(мМЕ/мл)
а 37,66 ± 2,42 6,4 10
Ь 40,16 ± 2,81 7,0 10
2/7


--- стр. 158 ---
1 ■  с 499,0 ± 59,2 11,8 10
В оспр оизвод им ость (М ежаналитический коэф ф ициент вариации)
Сыворотка Среднее ± S.D. C.V. Кол-во
значение %
(мМЕ/мл) постановок
а 31,7 ± 3,78 11,90 10
Ь 64,56 ± 7,3 11,30 10
с 144,45 ± 13,1 9,07 10
3.6 Хук-эф ф ект
Если образцы с высокой концентрацией антител анализируются без предварительного разведения в 
одностадийных тест-системах формата «сэндвич», «хук-эффект» может способствовать занижению 
определяемой концентрации. В тест-системе HBsAb «хук-эффект» не обнаружен вплоть до концентрации 
160000мМЕ/мл,
4. М Е Р Ы  П Р Е Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И
Для получения д остове р н ы х результатов необходимо соб л ю д ать следую щ ие правила:
Не смешивайте специфические реагенты разных серий набора (см. п.2,.2.1,), Не смешивайте их 
с реагентами других производителей.
Смешивание общего реагента разных серий (см. п.2.2.1.) допускается.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их загрязнение 
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте только дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в 
чистой посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для каждого образца или
реагента.
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и 
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам анализа.
-  В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует убедиться, 
что все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, спектрофотометр, термостат) 
проходит регулярную проверку и поддерживается в исправном состоянии.
Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок или 
автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок может 
^  привести к неверной интерпретации результатов анализа,
V  -  Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению оптической 
плотности образцов и последующим неправильным результатам анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». Если 
температура инкубации отклоняется от 37±2°С, это может привести к снижению чувствительности анализа 
и/или биологической денатурации образцов и реагентов. Следует периодически проверять показания 
датчика температуры.
Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или образцов. 
Несоблюдение температурного режима хранения может привести к биологической денатурации 
компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
-  Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная идентификация 
может привести к ложным результатам и постановке ошибочного клинического диагноза.
Ч тобы  исклю чить зараж ение персонала и загрязнение окружающ ей среды, следует  
соблюдать следую щ ие правила:
i
ripn работе с потенциально инфекционным материалом и во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
Не разрешается пипетировать ртом.
Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и курение в помещениях, 
предназначенных для работы с наборами.
3/7


--- стр. 159 ---
Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и Стоп-реагентом. Избегать 
попадания в глаза, на кожу и слизистые. В случае контакта тщательно промыть пораженный участок проточной 
водой.
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на присутствие 
HBsAg, антител к ВИЧ и к вирусу гепатита С. Несмотря на полученные отрицательные результаты, 
следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не может гарантировать полное 
отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и другие реагенты, содержащие сыворотку 
крови человека, следует считать потенциально инфекционными.
Следует избегать разбрызгивания реагентов и образования аэрозолей. Места, на которые 
попал пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. Исполь­
зованный при этом протирочный материал следует считать потенциально инфицированным и подвергнуть 
соответствующей обработке перед утилизацией.
- Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных азидов 
металлов в чугунных и медных водопроводных трубах, после слива использованных реагентов следует 
промыть сток большим объемом проточной воды.
5. М А Т ЕР И А Л Ы  И О Б О Р У Д О В А Н И Е , НЕ В Х О Д Я Щ И Е  В Н А Б О Р
5.1. М атериалы  и оборудование, необходим ы е при ручной постановке анализа
- Микропипетки, в том числе многоканальные, высокой точности (10-200 мкл, менее 3% ошибки) со сменными 
наконечниками.
- Градуированные цилиндры для разведения реагентов.
- Дистиллированная вода.
- Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
- Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления содержимого из лунок.
- Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность 
раствора в лунках в диапазоне 0 -3  ед. опт. плотн. при длинах волн 620, 450 и 405нм.
- Миллиметровая бумага.
5.2. Автом атическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа на
автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC.
В случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю необходимо
удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для иммуно-
ферментного анализа производства RADIM.
6. А Н А Л И З И Р У Е М Ы Е  О Б Р А З Ц Ы
Данный набор может применяться для исследования образцов сыворотки и плазмы крови человека. 
Сильно гемолизованные или липемичные образцы, а также присутствие в образцах фибрина могут 
оказывать влияние на результаты анализа. Перед постановкой анализа следует убедиться в том, что 
образцы прозрачные и не содержат осадка. Допускается хранение образцов при температуре +2,..8°С в 
течение 1  недели. При необходимости более длительного хранения образцы следует заморозить при - 
20°С. Избегайте повторного оттаивания и замораживания образцов.
Перед проведением количественного анализа образцы с ожидаемой высокой концентрацией 
антител должны быть разведены с помощью Раствора для разведения. Рекомендуемое разведение 1:10. 
Например: 50 мкл образца + 450 мкл Раствора для разведения.
7. П Р О В Е Д Е Н И Е  А Н А Л И ЗА *
7.1. Количественны й анализ
-  Доведите реагенты до комнатной температуры (+18...25°С).
Тщательно перемешайте образцы перед проведением анализа.
7.1.1. Промаркируйте лунки для калибраторов (вносятся в дубликатах) и исследуемых образцов 
(вносятся в монопликатах). Оставьте 2 лунки для обнуления (Blank).
7.1.2. Внесите по 50 мкл калибраторов и образцов в соответствующие лунки.
7.1.3. Внесите во все лунки по 200 мкл Конъюгата, исключая лунки Blank.
7.1.4. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора).
7.1.5. Инкубируйте его в течение 3 часов ± 10 минут при 37±2°С.
7.1.6. Удалите содержимое лунок и промойте лунки 6 раз, внося при каждой промывке по 350 мкл 
разведенного Промывочного раствора. Тщательно удалите жидкость из лунок.
7.1.7. Внесите во все лунки по 100 мкл Раствора ТМБ.
7.1.8. Инкубируйте в течение 20±2 минут при 37±2*С. Избегайте попадания света на планшет.
7.1.9. Внесите во все лунки по 100 мкл Стоп-реагента.
7.2. Качественны й анализ
Доведите реагенты до комнатной температуры (+18...25°С).
Тщательно перемешайте образцы перед проведением анализа.
4/7


--- стр. 160 ---
7.2.1. Промаркируйте лунки для контролей и исследуемых образцов; Отрицательный контроль (КП О  
мМЕ/мл) вносится в тетрапликате, Положительный контроль (КП 100 мМЕ/мл) вносится в дубликате, 
исследуемые образцы вносятся в монопликатах. Оставьте 2 лунки для обнуления (Blank).
7.2.2. Внесите по 50 мкл контролей и образцов в соответствующие лунки.
7.2.3. Внесите во все лунки по 200 мкл Конъюгата, исключая лунки Blank.
7.2.4. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора).
7.2.5. Инкубируйте его в течение 3 часов ± 10 минут при 37±2°С.
7.2.6. Удалите содержимое лунок и промойте лунки 6 раз, внося при каждой промывке по 350 мкл 
разведенного Промывочного раствора. Тщательно удалите жидкость из лунок.
7.2.7. Внесите во все лунки по 100 мкл Раствора ТМБ.
7.2.8. Инкубируйте в течение 20±2 минут при 37±2*С. Избегайте попадания света на планшет.
7.2.9. Внесите во все лунки по 100 мкл Стоп-реагента.
* При использовании автоматического анализатора производства RADIM и/или SEAC, действуйте в 
соответствии с его инструкцией.
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 6.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при двух длинах волн 405 и 450 нм (для 
образцов с концентрацией антител против HBsAg от О  до 300 мМЕ/мл использовать длину волны 450 нм, а 
для образцов с концентрацией антител против HBsAg выше 300 мМЕ/мл использовать длину волны 405 
нм). Референсный фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо 
вычитать величину оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех 
остальных лунок. Измерение должно проводиться не позже, чем через 15 минут после остановки реакции.
Примечание: при использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или SEAC 
для планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять значения 
автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм, что позволит расширить область кривой.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1 Качественный анализ
Определите среднее значение оптической плотности (ОП) Отрицательного Контроля (ОК) и 
Положительного контроля (ПК). Рассчитайте значение Cut-off по формуле (1):
Cut-off = ОПсрОК + 0,060 (1)
Присутствие или отсутствие антител против HBsAg определяется путем сравнения ОП образца со 
значением Cut-off.
Образцы с ОП ниже Cut-off признают нереакгивными (не содержащими антитела против HBsAg).
Образцы с ОП выше или равной Cut-off признают реактивными (содержащими антитела против HBsAg). 
Область значений ОП ± 10% от Cut-off является областью сомнительных значений. Если ОП образца 
попадает в эти пределы, результат считается сомнительным и требует повторного тестирования для 
подтверждения. Если при повторном тестировании получен отрицательный результат, образец признается не 
реактивным. Если же при повторном тестировании получен положительный результат, образец признается 
реактивным.
Пример расчета результатов:
Запрещается использовать приведенные ниже значения вместо реальных экспериментальных  
аннь/х.
0/7 репликатов Отрицательного контроля (ед.опт.плотн.): 0,020 ; 0,030; 0,020; 0,030  
Среднее значение ОП ОК (ед.опт.плотн.): 0,025  
Cut-Off = 0,025 + 0,060  = 0,085
ОП Положительного контроля (ед.опт.плотн.): 1,148 -1,182  
Среднее значение ОП ПК (ед.опт.плотн.): 1,165
ОП Образца 1: 0,031 ед.опт.плотн.- Образец считается отрицательным  
ОП Образца 2: 2,080 ед.опт.плотн.- Образец считается положительным
9.2 Количественный анализ
Калибровочная кривая строится в линейных координатах, где по оси X откладывают концентрации 
каждого калибратора, а по оси У -  ОП каждого калибратора. Соответствующие концентрации исследуемых 
образцов (мМЕ/мл) получаются путем интерполяции ОП образца на калибровочной кривой. Для 
разведенных образцов полученная концентрация умножается на фактор разведения.
Образцы с концентрацией антител против HBsAg менее 4 мМЕ/мл признают не реактивными.
5/7


--- стр. 161 ---
Образцы с концентрацией антител против HBsAg более или равной 4 мМЕ/мл признают 
реактивными.
Концентрация антител против HBsAg в образце равная 10 мМЕ/мл или более означает либо 
> выздоровление пациента после острой ВГВ инфекции, либо говорит о наличии поствакцинального 
j иммунитета.
Концентрация антител против HBsAg в образце от 4 до 10 мМЕ/мл является недостаточной для 
защиты от ВГВ.
Определение концентрации образцов
Запрещается использовать приведенные ниже значения  
экспериментальных данных.
Например:
вместо реальных
Описание ОП Концентрация антител ОП Концентрация антител
450 п т против HBsAg 405 п т против HBsAg
Калибратор 0 мМЕ/мл 0,025 0,009
Калибратор 10 мМЕ/мл 0,142 0,049
Калибратор 30 мМЕ/мл 0,358 0,125
Калибратор 100 мМЕ/мл 1,160 0,410
Калибратор 300 мМЕ/мл 2,550 0,895
Калибратор 1000 мМЕ/мл >3,000 1,875
Образец1 0,451 38 мМЕ/мл 0,160
Образец 2 >3,000 1,440 680 мМЕ/мл
9.3. Критерии д остоверности
Прежде чем начать обсчет результатов, убедитесь, что ОП контрольных точек соответствуют следующим 
критериям:
Описание Условие
ОП Отрицательного контроля при 450 нм 
ОП Кал 10 мМЕ/мл / ОП Кал О  мМЕ/мл 
ОП Положительного контроля при 450 нм
< 0,070 
> 2,0 
> 0,600
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ.
9.4. Интерпретация результатов
Нереактивные образцы признают отрицательными по содержанию антител против HBsAg. 
Реактивные образцы признают положительными по содержанию антител против HBsAg.
10. У С Л О В И Я  Х Р А Н Е Н И Я  И ЭК СП Л УАТ АЦ И И
Набор должен храниться при температуре +2...8°С.
Срок годности реагентов указан на этикетках флаконов.
Вскрытые реагенты стабильны при температуре +2...8°С в течение 2 месяцев.
11. О Г Р А Н И Ч Е Н И Я  В П Р И М Е Н Е Н И И  А Н А Л И З А
Результаты анализа должны интерпретироваться с осторожностью и подтверждаться 
клиническими данными и дальнейшей диагностикой.
СХЕМА АНАЛИЗА
■ — —-------------- Лунки
Реагенты ------------
Blank Калибраторы Образцы
Калибраторы |CAL 50 мкл
Образцы — ------------ 50 мкл
Конъюгат C O N jI 200 мкл 200 мкл
Инкубация: 37±2°0, 3 часа ± 10 мин. 
Промывка: 6 х 350 мкл.
Раствор ТМБ [ТМВ| 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубация; 37±2°С, 20±2 мин. 
Стоп-реагент |ST0P 100 мкл 100 мкл 100 мкл
i
Считывание: 450-405 п т .
6/7


--- стр. 163 ---
«УТ ВЕРЖ Д АЮ 
Г е н е м л ь н ы й  директор
/.'o'-':' ' -
ОО0^<{1|шмпания Адкор Био»
“ 'W t "  * * ;? ;
« Vi4SiAA-^ ' In  - j _______2011 г
.C o m p a n y” /
^ Оогерб'!^ '
Н А Б О Р  Р Е А Г Е Н Т О В  ДЛЯ О Д Н О СТ А Д И Й Н О ГО  И М М У Н О Ф ЕР М Е Н Т Н О Г О 
О П Р Е Д Е Л Е Н И Я  П О В Е Р Х Н О С Т Н О Г О  А Н Т И ГЕН А  В И Р У С А 
ГЕП А Т И Т А  В В С Ы В О Р О Т К Е  И П Л А З М Е К РО В И  Ч Е Л О В Е К А
H B s A g  one
Только для in vitro диагностики
1. Н А З Н А Ч Е Н И Е
Всемирная Организация Здравоохранения (ВОЗ) описывает Гепатит В следующим образом:
«Гепатит В -  это одна из главных болезней человечества и серьезная медицинская проблема мирового 
масштаба. Гепатит -  это воспаление печени причиной которого в большинстве случаев являются 5 
вирусов, называемые вирусами гепатитов А, В, С, D и Е. Все эти вирусы вызывают острое заболевание с 
симптомами, длящимися несколько недель и включающие пожелтение кожи и глаз (желтуха), 
потемнение мочи, слабость, тошноту, рвоту и боли в животе. Период реконвалесценции может длиться 
от нескольких месяцев до года. Гепатит В может перейти в хроническую форму при которой у пациента 
сохраняется виремия и которая может через несколько лет закончиться циррозом или раком печени.
Вирус Гепатита В (ВГВ) наиболее опасный среди вирусов гепатита и единственный вирус, 
вызывающий хронический гепатит, для профилактики которого разработана вакцина. ВГВ передается 
при контакте с зараженной кровью или другими биологическими жидкостями, подобно вирусу 
иммунодеффицита человека (ВИЧ), который вызывает СПИД. Однако вирус Гепатита В в 50 -  100 раз 
более контагиозный, чем ВИЧ. Главные пути заражения ВГВ -  это перинатальный (от матери к ребенку 
при рождении), контактно-бытовой, парентеральный и половой.
В мире большинство случаев инфицирования ВГВ связано с заражением ребенка от 
инфицированной матери, с передачей вируса при бытовом контакте и с повторным использованием 
нестерилизованных шприцев и игл. В развивающихся странах почти все дети инфицированы ВГВ. В 
развитых странах преобладают другие пути передачи инфекции. В этих странах, до введения программы 
вакцинирования детей, треть случаев хронического Гепатита В приходилась на перинатальный и  
контактно-бытовой пути передачи. Однако сейчас, большинство случаев заражения подростков связано 
с незащищенными половыми контактами и употреблением наркотиков. Кроме того, вирус Гепатита В 
представляет опасность для медицинских работников и большинство медицинских работников 
вакцинированы против ВГВ.
Вирус Гепатита В не передается через зараженную пищу и воду и им не возможно заразиться 
воздушно-капельным путем.
Высокий уровень хронического гепатита В характерен для южных районов Восточной и Центральной 
Европы. На Среднем Востоке и в Индии около 5% населения имеют хроническую ВГВ инфекцию, в то 
время как в странах Западной Европы и Северной Америки меньше 1% населения.
Инфекция ВГВ у детей в большинстве случаев переходит в хроническую форму. У 90% детей, 
инфицированных в первый год жизни, и у 30 -  50% детей, инфицированных в возрасте от 1  года до 4 
лет, развивается хроническая ВГВ инфекция. Риск смертельного исхода от рака или цирроза печени при 
хронической ВГВ инфекции составляет приблизительно 25%. Хронический Гепатит В лечат 
интерфероном и ламивудином, в ряде случаев эти препараты дают положительный эффект. Иногда для 
лечения больных с циррозом используют трансплантацию печени. И все же это заболевание легче 
предупредить, чем лечить.
Вакцина против Гепатита В безопасна и очень эффективна. С 1982 года, во всем мире было 
использовано более 1  миллиарда доз. Вакцина вводится 3 раза, внутримышечно. Как показали 
исследования, вакцинация в 95% случаев предотвращает развитие хронического Гепатита В у детей и 
взрослых. В странах, где до введения вакцинопрофилактики от 8 до 15% детей имели хроническую ВГВ 
инфекцию, после начала вакцинации этот показатель снизился ниже 1%. С 1991 года, ВОЗ призвал все 
страны включить вакцину против Гепатита В в национальные программы вакцинопрофилактики.»
Поверхностный антиген вируса Гепатита В (HBsAg) - наиболее важный белок оболочки вируса, 
HBsAg содержит детерминанту «а» общую для всех известных субтипов вируса Гепатита В, которые 
объединены в 2 группы «ad» и «ау». Тест-системы последнего поколения имеют очень высокую 
чувствительность определения HBsAg, что помогает в изучении распределения и эпидемиологии ВГВ, а 
также снижает риск передачи инфекции при переливании крови и ее продуктов.
Тест-система HbsAg one предназначена для качественного определения поверхностного антигена 
вируса Гепатита В в сыворотке и плазме крови человека.
1/11


--- стр. 164 ---
2 . ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА 
2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
В  наборе реагентов реализован «сэндвич»-вариант твердофазного иммуноферментного анализа. 
Для этого использованы антитела с различной эпитопной специфичностью к поверхностному антигену 
Гепатита В, Одно из них иммобилизовано на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок), второе 
конъюгировано с пероксидазой хрена. В лунках, при добавлении исследуемого образца и конъюгата 
антител с пероксидазой, во время инкубации одновременно происходит иммобилизация антигена, 
содержащегося в исследуемом образце, и связывание его с конъюгатом. При удалении содержимого из 
лунок и промывке происходит удаление избытка конъюгата, не связавшегося с иммобилизованным в 
ходе инкубации антигеном. Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в 
лунках. Степень окраски прямо пропорциональна концентрации антигена в анализируемых пробах. 
После измерения оптической плотности раствора в лунках наличие HBsAg оценивается относительно 
значения cut-off.
2.2. СОСТАВ НАБОРА
Реагент
Imicroplate T
Микропланшет
Количество
1-й вариант 
комплектации
1  X  96 лунок
2-й вариант 
комплектации
2 X  96 лунок
Состояние
Готов к использованию 
Ready for use ___________
^ N T R O L |- ~  
Отрицательный контроль 1  X  4,0 мл 2 х4 ,0  мл Готов к использованию 
Ready for use___________
ICONTROL
Положительный контроль 1  X  2,0 мл 1  X  4,0 мл Готов к использованию 
Ready for use___________
Ic a l'
Калибровочная проба 2 флакона 4 флакона Лиофилизованнный препарат
т 8 И В [ ] Г \ Ш \
20х Промывочный буфер 2 X  50 мл 2 X  50 мл Концентрированный раствор 
Сопс,
CONJ DIL
Раствор для Разведения 
Конъюгат
1  X  15 мл 1  X  30 мл Готов к использованию 
Ready for use
CONJ 20X
Конъюгат 1  X  0,8 мл 1  X  1,5 мл Концентрированный раствор 
Сопс
Раствор ТМБ
___Ш | 1  X  14 мл 2 X  14 мл Готов к использованию 
Ready for use ___________
Стоп-реагент
^ Т С ^ 1  X  14 мл 2 X 14 мл Готов к использованию 
Ready for use___________
Количество реагентов рассчитано на 96 или на 192 лунки.
2.2.1. Реагенты
• Иммуносорбент -  планшет (МТР) I Coated microplate: 1  или 2 планшета из 12 разборных 
стрипов по 8 лунок (всего 96 лунок). Лунки стрипов планшета покрыты мышиными моноклональными 
антителами к «а» детерминанте HBsAg. Неиспользованные стрипы хранить при температуре +2...8°С в 
плотно закрытом пластиковом пакете (прилагается).
• Отрицательный контроль (CONTROL -) I Negative Control: 1  флакон или 2 флакона. Раствор 
желтого цвета на основе 10 мМ фосфатного буфера, pH 7,4±0,1, содержит сыворотку козы. Готов к 
использованию. Консервант: 0,09% азид натрия и 0,1% Катон GC.
• Положительный контроль (CONTROL +) / Positive Control: 1  флакон. Раствор зеленого цвета 
на основе 10 мМ фосфатного буфера, pH 7,4±0,1, содержит сыворотку козы и рекомбинантный HBsAg, 
Готов к использованию. Консерванты; 0,02% гентамицина сульфат и 0,1% Катон GC.
• Калибратор (CAL) / Calibrator: 2 флакона или 4 флакона. Содержит фетальную бычью 
сыворотку и рекомбинантный HBsAg в концентрации 0,5 МЕ/мл (аттестован по Второму Международному 
Стандарту для HBsAg, NIBSC, 00/588). Консервант; 0,02% гентамицина сульфата и 0,1% Катон GC. 
Лиофилизован. Перед использованием растворите содержимое флакона в объеме дистиллированной 
воды, указанном на этикетке. Восстановленный реагент хранить при -2 0 ‘’С. Повторное замораживание не 
допускается.
Внимание: Объем дистиллированной воды, необходимый для растворения содержимого флакона, 
может быть различным для разных вариантов комплектаций реагента. Обратите внимание, чтобы 
препарат был растворен именно в том объеме воды, который указан на этикетке флакона.
• Промывочный раствор 20х (WASHBUF 20Х) / Washing buffer concentrate: 2 флакона. 1х 
Промывочный буфер представляет собой 10 мМ фосфатный буферный раствор, pH 7,0±0,2, содержаи 4ий
2 / 1 1


--- стр. 165 ---
0 ,0 5 %  Твин 20 и 0,1% Катон GC. Перед использованием развести необходимое количество концентрата 
дистиллированной водой в соотношении 1:20. В случае образования нерастворимых кристаллов поместите 
р а с тв о р  в термостат (+37°С) на несколько минут. Приготовленный промывочный раствор хранить не более 7 суток при 
+ 2 ...8 “С .
• Дилю ент для конъю гата (CO N J DIL) / Enzym e Conjugate Diluent: 1  флакон. Раствор красного 
ц ве та  на основе 10 мМ трисового буфера, pH 6,8±0,1, содержит 1% мышиную сыворотку, 5% БСА, 0,02% 
гентамицина сульфата и 0,1% Катон GC.
•  Конъю гат 20х (C O N J 20Х) / Enzym e Conjugate; 1  флакон. Раствор на основе 10 мМ трисового 
буф ера, pH 6,8±0,1, содержит мышиные моноклональные антитела к детерминанте «а» HBsAg, 
юнъюгированные с пероксидазой хрена (HRPO), 5% БСА, 0,02% гентамицина сульфата и 0,1% Катон GC. 
П еред использованием развести необходимое количество концентрата конъюгата дилюентом для
7 конъюгата в соотношении 1:20.
I • Раствор Т М Б  (ТМВ): 1  флакон или 2 флакона. Раствор тетраметилбензидина в цитратно- 
фосфатном буфере, содержащем DMSO и Н 2О2.  Готов к использованию.
• Стоп-реагент (ST O P ) / Blockin g Reagent: 1  флакон или 2 флакона. 1Н НС1. Готов к 
использованию.
• Бумага для заклеивания планш ета (СРА ) I A dhesive plate sealers.
• П ластиковы й пакет.
3. А Н А Л И Т И Ч ЕС К И Е И Д И А ГН О С Т И Ч Е С К И Е  ХА РА К Т ЕРИ С Т И К И
3.1 Д иагностическая специф ичность
Диагностическая специфичность определялась на панели образцов, полученных от доноров и 
пациентов, не имеющих иммунитета к ВГА, которые были определены как отрицательные тест-системой, 
зарегистрированной в Министерстве Здравоохранения Италии.
Не было обнаружено ложноположительных реакций при тестировании анализируемых образцов 
разных типов.
Не было также обнаружено влияния на специфичность заморозки анализируемых образцов.
Образцы, содержащие все известные субтипы ad и ау, а также изоформы w и г, полученные из 
СМТЗ(Франция), открылись как положительные.
Были протестированы образцы пациентов с другими вирусными заболеваниями (ВГС, ВГА) и с 
гепатитами невирусной природы. Ложноположительных реакций обнаружено не было.
В общей сложности в независимых референсных лабораториях было протестировано более 5000 
образцов. Диагностическая специфичность составила > 99,5%.
3.2 Д иагностическая чувствительность
Диагностическая чувствительность определялась на панели образцов, которые были определены 
как положительные тест-системой, одобренной FDA. Образцы были собраны из разных географических 
регионов (включали оба субтипа ad и ау) и с разными формами ВГВ инфекции (острой, бессимптомной и 
хронической). В общей сложности было протестировано более 400 образцов. Диагностическая 
чувствительность составила 100%.
Дополнительно были протестированы более 20 сероконверсионных панелей и панель для 
определения качества тест-системы (BBI, США). Результаты, полученные при тестировании двух 
сероконверсионных панелей, представлены в нижеследующих таблицах:
Панель РИМ  918
Образец Концентрация HBsAg, нг/мл RADIM, S/CO Ortho EIA, S/CO Sorin EIA, S/CO
01 <0,1 0,4 0.2 0,0
02 <0,1 0,3 0,2 0,1
03 <0,1 0,3 0,2 0,0
04 <0,1 0,4 0,1 0,0
05 <0,1 0,4 0,2 0,0
06 <0,1 0,4 0.6 0,1
07 <0,1 0.4 0,2 0,1
08 <0,1 0,5 0,2 0,1
09 0,2 0.9 0,4 0,2
10 0,5 1.4 2,2 1.2
11 2,3 4,5 10,1 6.2
Панель РН М  923
Образец Концентрация HBsAg, нг/мл RADIM, S/CO Ortho EIA, S/CO Sorin EIA, S/CO
01 <0,1 0,4 0,1 0,0
02 <0.1 0,4 0,2 0,1
03 <0,2 1.2 1,4 0.9
04 <0,5 1,4 2,6 1,8
3/11


--- стр. 166 ---
■  3.3 Прецизионность
i f  Исследования проводили на трех образцах, которые наносили в нескольких репликатах и 
■илизировали в разных постановках. Данные, полученные для двух образцов (один отрицательный и 
Годин слабоположительный), которые наносили в 16 репликатах и анализировали в трех независимых 
Впостановках, на трех лотах набора, представлены в нижеследующих таблицах.
1  Лот 1
Отрицательный образец
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
О П , 450 нм, ед.опт.пл 0,036 0,036 0,032 0,034
Ст. откл. 0,004 0,006 0,005 0,005
!. КВ, % 10,1 15,5 16,2 13,9
1  N IB SC  0,1 нг/мл
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
1  О П , 450 нм, ед.опт.пл 0,133 0,121 0,118 0,124
!  Ст. откл. 0,019 0,008 0,011 0,013
1  " КВ, % 14,1 6,9 9,2 10,1
S/CO 1,5 1.4 1,4 1,4
Лот 2
Отрицательный образец
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее1 1
i  ОП, 450 нм, ед.опт.пл 0,034 0,035 0,031 0,033
Ст. откл. 0,005 0,005 0,005 0,005
КВ, % 15,5 13,5 15,4 14,8
N IB SC  0,1 нг/мл
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
ОП, 450 нм, ед.опт.пл 0,125 0,129 0,129 0,127
Ст. откл. 0,012 0,010 0,013 0,012
КВ, % 9,7 7,5 10,4 9,2
S/CO 1,5 1,5 1,6 1,5
Лот 3
О трицательный образец
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
ОП, 450 нм, ед.опт.пл 0,034 0,035 0,034 0,034
Ст. откл. 0,004 0,005 0,004 0,004
КВ, % 10,5 12,9 11,2 11,5
N IB SC  0,1 нг/мл
1 Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
1  ОП, 450 нм, ед.опт.пл 0,124 0,129 0,126 0,126
Ст. откл. 0,009 0,012 0,015 0,012
КВ, % 7,2 9,4 11,7 9.4
S/CO 1,5 1,5 1,5 1,5
Изменения диагнозов образцов обнаружено не было.
3.4 Предел детекции
Этот параметр был определен с помощью следующих международных стандартов:
1, Стандарты, полученные из института Пауля Эрлиха (ИПЭ) (с концентрацией 50 и 100 Ед/мл);
2. Второй Британский Рабочий Стандарт (NIBSC, 99/640-005-WI);
3. Международный Стандарт (ВОЗ, 80/549);
4, Второй Международный Стандарт (NIBSC, 00/588).
Результаты контроля качества представлены в нижеследующей таблице:
Наименование стандарта Концентрация, МЕ/мл или нг/мл
ИПЭ
Ad субтип 0,0125
Ау субтип 0,0125
NIBSC, 99/640-005-WI 0,03
Первый Международный Стандарт 0,05
4/11


--- стр. 167 ---
Второй Международный Стандарт 0 ,1 -0 ,0 5
Панель №806 (BBI. США) также использовалась для определения предела детекции. Результаты 
тавлены в нижеследующей таблице;
■  № Субтип HBsAg BBI,
нг/мл
Эббот,
нг/мл
ИПЭ,
Ед/мл
Лот 1, 
S/CO
Лот 2, 
S/CO
Лот 3, 
S/CO
■  в 0 6 -1 ad 2,5 3,1 0,31 9,5 9,4 9,7
■ПЬб-2 ad 1,5 1 ,6 0,17 5.1 5,0 5,3
1  80 6 -3 ad 1 1 0 ,1 3.2 3,2 3.3
ad 0 , 8 0.9 0,09 2 . 6 2,4 2 . 8
1 Тоб-5 ad 0 , 6 0.7 0,07 2,3 2 .1 2.4
f 106-6 ad 0,5 0,5 0,06 2 , 0 1 , 8 1.9
1 ' 806-7 ad 0,4 0,5 0,05 1.7 1 , 6 1 . 8
[ 806-8 ad 0,3 0,3 0,03 1.4 1,3 1.5
Е  806-9 ad 0 , 2 0 , 2 0 , 0 2 1 . 2 1 ,1 1 , 2
:  806-10 ad 0 ,1 0 ,1 0 , 0 1 0 , 8 0,7 0 , 8
806-11 ay 2,4 1 ,8 0 , 2 1 10,5 10,7 1 0 , 6
Г806-12 ay 1,3 1 0 , 1 1 5.3 5.6 5,5
806-13 ay 0,9 0 , 6 0,07 4.7 4.9 4.9
806-14 ay 0 , 8 0,5 0,06 3.9 4.0 4.0
806-15 ay 0 , 6 0,4 0,05 2 . 6 2.7 2.5
806-16 ay 0,5 0,4 0,04 2.4 2.5 2,5
806-17 ay 0,4 0,3 0,03 1.7 1 . 8 1,9
806-18 ay 0,3 0,3 0,03 1 . 6 1.7 1,7
806-19 ay 0 , 2 0 , 2 0 . 0 2 1.4 1 . 6 1,5
806-20 ay 0 ,1 0 ,1 0 , 0 1 1 ,1 1 . 2 1 ,1
806-21 отрицательная 0 0 0 0 , 2 0 , 2 0 , 2
Также была исследована панель для определения чувствительности, полученная из EFS (Франция). 
Результаты представлены ниже:
Образец Концентрация HBsAg, нг/мл ОП 450 нм S/CO ORTHO S/CO
не 1 0 , 1 0 0,039 0,7 0 , 6
НВ2 0 , 2 0 0,082 1.4 1 , 2
н в з 0,30 0,116 2 . 0 1 , 8
не 4 0,45 0,161 2,7 2 , 8
НВ5 0 , 6 6 0 , 2 1 0 3,6 3,9
Н В6 дилюент 0,009 0 , 2 0 , 2
Результаты исследования панели SFTS (Франция) Ад HBs 2004 представлены в нижеследующей таблице:
Образец Субтип Концентрация, нг/мл S/CO
151 Adw2 + ayw3 2,24 ±0,15 1 0 , 8
152 Adw2 + ayw3 1,15 ±0,06 5,8
153 Adw2 + ayw3 0,95 ±0,05 5,0
154 Adw2 + ayw3 0,58 ± 0,04 3,3
155 Adw2 + ayw3 0,50 ±0,03 2 , 6
156 Adw2 + ayw3 0,36 ± 0,02 1,9
157 Adw2 + ayw3 0,23 ±0,02 1,3
158 Adw2 + ayw3 0,13 ±0,02 0,7
159 Adw2 + ayw3 0,06 ± 0 , 0 1 0,4
160 Adw2 + ayw3 0,04 ±0,01 0 , 2
161 Adw2 0,5 ± 1.0 2 , 8
162 Adw4 0,5 ± 1.0 2 , 6
163 Ad г 0,5 ± 1,0 3,0
164 Aywl 0.5 ± 1,0 2,9
165 Ayw2 0,5 ± 1,0 3,9
166 Ayw3 0.5 ± 1.0 4,6
167 Ayw3 0.5 ± 1.0 4,3
168 Ayw4 0,5 ± 1,0 4,2
169 Ayr 0,5 ± 1.0 3,6
5/11


--- стр. 168 ---
170 д и л ю е н т 0,1
М и н
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Для получения достоверны х результатов необходимо соблю дать следующие правила:
-  Не смешивайте реагенты разных серий набора. Не смешивайте их с реагентами других 
(^юизводителей.
-  Разрешается смешивать Промывочный раствор, Раствор ТМБ и Стоп-реагент разных серий 
н а б о р а . Не смешивайте их с реагентами других производителей.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их загрязнение. 
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
слителей.
-  Используйте только дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в 
чистой посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для каждого образца или
ре а ге н та
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и 
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам анализа.
В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует убедиться, 
ч то  все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, спектрофотометр, термостат) 
проходит регулярную проверку и поддерживается в исправном состоянии.
-  Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок или 
автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок может 
привести к неверной интерпретации результатов анализа.
Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению оптической 
плотности образцов и последующим неправильным результатам анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». Если 
температура инкубации откпоняется от 37±2°С, это может привести к снижению чувствительности анализа 
и/или биологической денатурации образцов и реагентов. Следует периодически проверять показания 
датчика температуры.
Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или образцов. 
Несоблюдение температурного режима хранения может привести к биологической денатурации 
компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная идентификация 
может привести к ложным результатам и постановке ошибочного клинического диагноза.
Чтобы исключить заражение персонала и загрязнение окружающей среды, следует  
соблюдать следующие правила:
При работе с потенциально инфекционным материалом и во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
Не разрешается пипетировать ртом.
Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и курение в помещениях, 
предназначенных для работы с наборами.
Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и Стоп-реагентом. Избегать 
попадания в глаза, на кожу и слизистые. В случае контакта тщательно промыть пораженный участок проточной 
водой.
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на присутствие 
HBsAg, антител к ВИЧ и к вирусу гепатита С. Несмотря на полученные отрицательные результаты, 
следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не может гарантировать полное 
отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и другие реагенты, содержащие сыворотку 
крови человека, следует считать потенциально инфекционными.
Следует избегать разбрызгивания реагентов и образования аэрозолей. Места, на которые 
попал пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. Исполь­
зованный при этом протирочный материал следует считать потенциально инфицированным и подвергнуть 
соответствующей обработке перед утилизацией.
- Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных азидов 
металлов в чугунных и медных водопроводных трубах, после слива использованных реагентов следует 
промыть сток большим объемом проточной воды.
6/1:


--- стр. 169 ---
5. МАТЕРИАЛЫ И  ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В НАБОР
5.1. Материалы и оборудование, необходимые при ручной постановке анализа
- Микропипетки, в том числе многоканальные, высокой точности (10-200 мкл, менее 3% ошибки) со сменными 
наконечниками.
Градуированные цилиндры для разведения реагентов.
- Дистиллированная вода.
- Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
- Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления содержимого из лунок. 
-Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность
раствора в лунках в диапазоне 0-3 ед. опт. плотн. при длинах волн 620, 450 и 405нм.
- Миллиметровая бумага.
5.2. Автоматическое проведение анализа  
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа на 
автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC.
В  случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю необходимо 
удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для иммуно- 
ферментного анализа производства RADIM.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
При заборе венозной крови следует соблюдать правила асептики. Сыворотку или плазму крови 
получают по общепринятой методике подготовки образцов для лабораторного анализа. Не было 
W  обнаружено существенного влияния цитрата, солей ЭДТА и гепарина на результаты анализа.
Не допускается добавление в анализируемые образцы консервантов, особенно азида натрия, 
так как они могут повлиять на ферментативную активность конъюгата и способствовать возникновению 
ложноотрицательных результатов.
Образцы должны быть четко маркированы во избежание ошибочной интерпретации 
результатов. Настоятельно рекомендуется применять штрих-кодирование и электронный датчик для 
считывания штрих-кода, в особенности если набор применяется для скрининга донорской крови.
-  Не допускается применять образцы с видимыми признаками гемолиза (красный цвет) и липемии 
(«молочный» оттенок), так как при этом может быть получен ложный результат. По этой же причине не 
допускается применять образцы, содержащие фибрин, твердые частицы или видимые признаки 
микробной контаминации.
Сыворотку и плазму допускается хранить при температуре +2°..8“С в течение 5 суток после 
сбора. При необходимости более длительного хранения образцы допускается хранить при температуре -  
20°С в течение нескольких месяцев. Не допускается повторное замораживание/размораживание 
образцов, так как образовавшиеся при этом включения могут влиять на результат анализа,
При обнаружении твердых частиц, образцы перед проведением анализа центрифугируют в 
течение 2 0  минут при 2 0 0 0 об/мин, либо очищают фильтрованием (диаметр пор фильтра 0 .2 -0 . 8 мкм).
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА*
Щ  -  Доведите реагенты до комнатной температуры (+18.. .25°С).
Тщательно перемешайте образцы перед проведением анализа.
7.1. Перед проведением анализа промойте необходимое количество лунок один раз.
Примечание: Промывка стрипов перед анализом необходима для получения достоверных  
результатов. Ни в коем случае не пропускайте э т о т  этап.
7.2. Промаркируйте лунки для контролей и исследуемых образцов. Оставьте 1  лунку для обнуления 
(Blank), 3 лунки для отрицательного контроля, 2 лунки для калибратора и одну лунку для положительного 
контроля.
7.3. Внесите по 150 мкл контролей в соответствующие лунки.
7.4. Внесите по 150 мкл анализируемых образцов.
Примечание: Убедитесь, ч то  контроли и образцы были действительно добавлены в лунки.
7.5. Внесите во все лунки, кроме лунки А1, по 100 мкл разведенного Конъюгата. Убедитесь, что
I цвет раствора в лунках с образцами изменился с желтоватого на красный. Заклейте планшет клейкой
I  пленкой.
1 Примечание: Во время внесения Конъюгата избегайте прикасаться наконечником пипетки к
I  внутренней стороне лунок во избежание контаминации.
■  7.6. Инкубируйте планшет в течение 120 минут при 37°С.
■  Примечание: Стрипы следует заклеивать специальной пленкой, входящей в состав набора,  
I  только в то м  случав, если анализ проводится вручную. При автоматической постановке анализа
■  клейкая пленка не требуется.
7Л;


--- стр. 170 ---
I
)  I
7.7. Удалите содержимое лунок и с помощью автоматического промывочного устройства промойте 
микропланшет 4-5 раз подготовленным к работе Промывочным раствором. При каждой промывке 
добавляйте по 350 мкл Промывочного раствора в каждую лунку.
7.8. Внесите по 100 мкл Раствора ТМБ в каждую лунку, включая А1. Инкубируйте планшет при 
комнатной температуре (+18...25°С) в течение 30 минут. Избегайте попадания света на планшет во 
избежание высокого фонового сигнала.
7.9. Остановите ферментативную реакцию добавлением 100 мкл Стоп-реагента в каждую лунку. 
Стоп-реагент следует вносить в лунки в той же последовательности, как и Раствор ТМБ. После внесения 
Стоп-реагента окраска Положительного контроля и положительных образцов изменится с голубой на 
желтую.
Примечание: Если для анализа используются образцы, содержащие включения или хранившиеся  
при минусовых температурах, образцы с видимым гемолизом или липемией необходимо проводить  
анализ по следующей схеме:
1 . Внесите по 100 мкл контролей, калибратора и образцов.
2. Инкубируйте 60 мин при +37°С с шейкированием 350±150 грт.
3. Удалите содержимое лунок и промойте согласно п.  7.7.
4. Внесите во все лунки, кроме лунки А1, по 100 мкл разведенного конъюгата.
5. Инкубируйте 30 мин при +37°С с шейкированием 350±150 грт.
6. Удалите содержимое лунок и промойте согласно п. 7.7.
7 . Внесите во все лунки по 100 мкл Раствора ТМБ.
8. Инкубируйте 30 мин при комнатной температуре с шейкированием 350±150 грт.
9. Добавьте во все лунки по 100 мкл Стоп-реагента.
*П ри использовании автоматического анализатора производства RADIM и/или SEAC, действуйте в 
соответствии с его инструкцией.
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 10.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. Референсный 
фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо вычитать величину 
оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех остальных лунок. В случае, 
если значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, считывание результатов проводят 
при длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не позже, чем через 15 минут после остановки 
реакции.
Примечание; При использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или SEAC 
для планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять значения 
автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
Определите среднюю оптическую плотность (ОП) Отрицательного контроля (ОК). Рассчитайте 
значение Cut-off по формуле (1):
Cut-off = ОПсрОК + 0,050 (1)
Примечание: Если расчет результатов проводится операционной системой автоматического  
анализатора, следует убедиться, ч то  задана правильная формула для вычисления значения cut-off и  
последующего расчета результатов.
Присутствие или отсутствие HBsAg определяется путем деления значения ОП образца на Cut-off,
Образцы, для которых при делении на Cut-off получено значение:
- менее 0,9, признают нереактивными (не содержащими HBsAg);
-более 1,1, признают реактивными (содержащими HBsAg);
- 0,9 -  1,1 ,  признают сомнительными.
Отрицательный результат означает, что пациент не был инфицирован вирусом гепатита В и  что 
кровь может использоваться для переливания,
У всех пациентов с сомнительным результатом следует повторить анализ через 1-2 недели, получив 
для этого свежий образец сыворотки или плазмы. Препарат донорской крови, давший сомнительный 
результат, не допускается использовать для переливания.
Положительный результат анализа указывает на наличие ВГВ. Пациент должен получить 
соответствующую медицинскую помощь.
Примечания:
• 
Во избежание ошибок, интерпретацию результатов следует проводить под наблюдением  
^руководителя лаборатории.
• Любой положительный результат должен бы ть подтвержден повторным тестированием  
образца после фильтрации (диаметр пор фильтра 0,2-0,8 мкм). Если повторно будет получен
8/11


--- стр. 171 ---
I
ш ожительный результат, т о  необходимо подтвердить его с помощью подтверждающей тв с т-  
\истемы.
• При сообщении результатов из лаборатории в другие подразделения следует  
Предпринимать меры для исключения ошибок при передаче данных.
• Устанавливать диагноз «вирусный ге п а ти т»  и доводить его до сведения пациента должен  
ррсонал, имеющий высшее медицинское образование и соответствую щ ую  специальную  
тлификацию.
Пример расчета результатов:
'Запрещается использовать приведенные ниже значения вместо реальных энспериментальных  
шх.
О П  репликатов Отрицательного контроля (ед. опт. плотн.): 0,012; 0,008; 0,010  
Среднее значение ОП ОК (ед.опт.плотн.): 0,010  
Критерий достоверности (< 0,050) Выполняется  
О П  Положительного контроля (ед.опт.плотн.): 2,489  
{Критерий достоверности (> 1,000) Выполняется  
Cut-Off =0,010 + 0,050 = 0,060
О П  репликатов Калибратора (ед. опт. плотн.): 0.350; 0,370  
Среднее значение (ед.опт.плотн.): 0,360  
ОП/Cut-off: 0,360/0,060 =6
Отношение On/Cut-off >2,0 Выполняется
О П Образца 1: 0,028 ед. опт. плотн.
О П Образца 2: 1,690 ед.опт.плотн.
Для Образца 1  ОП/Cut-off < 0 ,9 - Образец считается отрицательным  
Цля Образца 2 ОП/Cut-off > 1,1 - Образец считается положительным
9.2. Критерии достоверности
Прежде чем начать обсчет результатов, убедитесь, что ОП контрольных точек соответствуют следующим
Описание Условие
Blank < 0 , 1 0 0
Отрицательный контроль < 0,050
ОП Калибратора ЮмМЕ/мл (ВОЗ) On/Cut-off > 2,0
Положительный контроль > 1 , 0 0 0
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ.
При несоответствии критериям следует немедленно известить руководство лаборатории. 
Некоторые возможные причины несоответствий приведены ниже. Перед повторным проведением анализа 
следует убедиться, что эти причины устранены.
<
9/11


--- стр. 172 ---
Описание ю ф в к т а Возможная причина
СП в лунке для  
обнуления >0,100
Раствор ТМБ был загрязнен в процессе анализа.
СП Отрицательного  
контроля >0,050
1. Не были предварительно подобраны оптимальные параметры промывки 
и/или настройки промывочного устройства;
2. Использован неподходящий промывочный буфер либо магистрали 
промывочного устройства не были промыты соответствующим буфером 
перед началом работы;
3. Ошибка оператора в процессе внесения контролей (положительный 
контроль вместо отрицательного);
4. Контаминация флакона с Отрицательным контролем, либо лунок, в 
которые он был внесен, следами положительных образцов или Конъюгата;
5. Загрязнение пипеток следами положительных образцов или Конъюгата;
6 .  Закупоренные или засоренные иглы автоматического промывочного 
устройства.
Калибровочная проба:  
отношение  
On/Cut-off <2,0
1. Нарушена последовательность выполнения анализа;
2. Ошибка оператора при нанесении Калибровочной пробы (например, 
вместо нее внесен Отрицательный контроль);
3. Параметры промывки или настройки промывочного устройства 
отличаются от предварительно выбранных оптимальных значений;
4. Контаминация Калибровочной пробы.
o n  Положительного  
контроля <1,000
1. Нарушена последовательность выполнения анализа;
2. Ошибка оператора при нанесении Положительного контроля,
3. Параметры промывки или настройки промывочного устройства 
отличаются от предварительно выбранных оптимальных значений;
4. Контаминация Положительного контроля.
9.3. Интерпретация результатов
Нереактивные образцы признают отрицательными по содержанию HBsAg.
Реактивные образцы признают положительными по содержанию HBsAg.
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И  ЭКСПЛУАТАЦИИ
Набор должен храниться при температуре +2.,.8°С.
Срок годности реагентов указан на этике тка х флаконов.
Вскрытые реагенты  стабильны при температуре +2.,.8°С в течение  6 месяцев.
11. ОГРАНИЧЕНИЯ В ПРИМЕНЕНИИ АНАЛИЗА
Повторяющиеся ложноположительные результаты «свежих» образцов встречаются в менее, 
чем 0,1% случаев и чаще всего связаны с высоким титром МАМА. Интерференция в «свежих» образцах 
возможна также, если они содержат включения или в процессе их обработки была нарушена методика.
Влияние интерферирующих факторов почти полностью исключается, если анализ проводится 
по альтернативной (двустадийной) методике.
СХЕМА АНАЛИЗА
Промывка: 1  раз.
------------------------ Лунки
Реагенты ' '
Blank ICONTROLl- |CAL CONTROL 1  + Образцы
CONTROL - ----- 1 5 0  мкл ----- -----
CALl — — 1 5 0  мкп —
CONTROLS — ----- ----- 1 5 0  мкп
Образцы ----- ----- ----- 1 5 0  мкл
Конъюгат CONJI 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл
Инкубация: 37“С, 120 мин. 
Промывка: 4-5 х 350 мкп.
Раствор ТМБ Т М ^ 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл
Инкубация: комнатная температура, 30 мин.
Стоп-реагент STOP] 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл
Считывание: 450-405 нм (референсная длина волны: 620 нм).
10/11


--- стр. 173 ---
Примерная схема нанесения образцов на микропланшет:
1 2 3 4 ■ '" 'a " -8 9 1 0 1 1 1 2
: a BLK 0Б2
в K(-) ОБЗ
с . K(-) 0Б4
K(-) 0Б5
'E КП 0Б6
F КП 0Б7
C G K(+) 0Б8
''H 0Б1 0Б9
Условные обозначения:
BLK = лунка для обнуления (Blank) 
К(-) = отрицательный контроль 
КП = калибровочная проба 
К(+) = положительный контроль 
ОБ - образцы
1гнеральный директор 
|0 0  «Компания Алкор Био»
ко вод ите ль лаборатории разработки ИФА-систем 
ЮО «Компания Алкор Био»
,4Швырев М.В.
Сусорова А.С.
RAD1M S.p.A. - Via del Mare, 125 - 00040 Pomezia (Roma) Italia 
Tel.; +39 06 91.249.1 - Fax: +39 06 91,249.443 
National Order Entry:  +39 06 91.249.702 
Export Department:  +39 06 91.249.701 
Customer Care: +39 06 91.249.700 
info(S)radim.it - www.radim.it
I f  R A D I M


--- стр. 174 ---
П р о ш и т о ,  ц р о н у м е р о в а н о ,  с к р е п л е н о 
печатью^ //-/ ( )  лиcтJOr^
Ге 11е р # в ^ ь й  \ |  л
ООО ((Компания >\дкор ^ о »
______М В ,/й1вьф ев


--- стр. 175 ---
«УТВЕРЖДАЮ  
Г енерад^^1^4 Дйрб1ст^ n
ООО <<Кд(|^нЙй А Ш е ^ ^ о » ^ . 
Ш в ы р в $ ^ .й !—
' ч  * V . I td , ■ ' , / , '
' Ч ^ ’'fr-net®
> * >
2 0 1 1 Г
НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ КАЧЕСТВЕННОГО И/ИЛИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО  
ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ М  
К АНТИГЕНУ ЯДРА ВИРУСА ГЕПАТИТА В  
В СЫВОРОТКЕ И  ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА  
НВс 1дМ
Только для in vitro диагност ики
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Определение антител против коревого антигена вируса гепатита В (анти-НВс) в сыворотке или 
плазме крови человека играет важную роль в мониторинге ВГВ инфекции. Обычно анти-НВс антитела 
появляются в крови после HBsAg и остаются в ней после исчезновения последнего. Присутствие 1дМ  
анти-НВс во время ранней стадии заболевания указывает на первичный иммунный ответ на ВГВ. Эти 
антитела очень полезно определять в фазу так называемого «окна» ВГВ инфекции.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
В наборе реагентов реализован двустадийный «сар1иге»-вариант твердофазного 
иммуноферментного анализа. Если в образце присутствуют иммуноглобулины класса М, то во время 
первой инкубации они связываются с антителами специфичными к 1дМ  человека. Несвязавшиеся 
компоненты удаляются промывкой. Если среди связавшихся 1дМ  присутствуют антитела к 
соответствующему возбудителю, то во время следующей стадии анализа они связываются с комплексом 
специфический антиген-антитело, конъюгированные с пероксидазой хрена. Несвязавшиеся компоненты 
удаляются промывкой. Во время инкубации с ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. Степень 
окраски прямо пропорциональна количеству специфических 1дМ  в анализируемых пробах. Наличие 1дМ  
оценивают относительно значения cut-off.
2.2. СОСТАВ НАБОРА
Реагент Количество Состояние
Планшет
|м тН 1х 96 лунок Готов к использованию 
Ready for use
Промывочный раствор 
VVASH 1  X  50 мл Концентрат
Cone.
Рас
Id il
гвор для разведения образцов
1 X 1 0 0 мл Готов к использованию 
Ready for use
Отр!
NEC
ицательный контроль 1  X  1,0 мл Готов к использованию 
Ready for use
Пол
POJ
ожительный контроль * 1 X  1 , 0 мл Готов к использованию 
Ready for use
Ант1
N
/1ген 1  X  14 мл Готов к использованию 
Ready for use
Конъюгат
Ic o n jI 1  X  14 мл Готов к использованию 
Ready for use
Раствор ТМБ
тмв| 1  X  14 мл Готов к использованию 
Ready for use
Стоп-реагент
ISTOPl 1  X  14 мл Готов к использованию 
Ready for use
2.2.1.Реагенты
• Иммуносорбент -  планшет (МТР) / Coated microplate: 1  планшет из 12 разборных стрипов по 
8  лунок (всего 96 лунок). Лунки стрипов планшета покрыты моноклональными антителами к 1дМ  человека.
1/6


--- стр. 176 ---
пьзованные стрипы хранить при температуре +2...8°С в плотно закрытом пластиковом пакете 
ется),
•  Отрицательный контроль (NEG) I Negative Control: 1  флакон. Раствор на основе сыворотки 
не содержащий HBsAg, антитела к вирусу гепатита С и ВИЧ, Готов к использованию. Консервант:
5 натрия (<0,1 %).
Положительный контроль (POS) I Positive Control: 1  флакон. Раствор на основе сыворотки 
е й  содержащий HBsAg и 1дМ  к коровому антигену вируса гепатита В и не содержащий антитела к вирусу 
вти та  С и ВИЧ. Готов к использованию. Консервант: азид натрия (<0,1%).
Антиген (Ад) / Antigen (HBcAg): 1  флакон. Раствор на основе трисового буфера, содержащий 
| 6С А  и  рекомбинантный НВсАд. Готов к использованию. Консервант: неомицин.
Конъюгат (CONJ) / Enzyme Conjugate: 1  флакон. Раствор на основе трисового буфера 
ержит моноклональные антитела к НВсАд, конъюгированные с пероксидазой хрена (HRPO), и БСА. 
[Г о то в  к использованию. Консервант: неомицин.
•  Раствор для разведения (DIL) / Sample Diluent: 1  флакон. Буферный раствор белков Готов к 
пользованию. Консервант: азид натрия (<0,1 %).
Промывочный раствор (WASH) / Washing Solution (concentrated): 1  флакон. Фосфатный 
'(буф ерны й раствор, содержащий Твин 20. Консервант: Тимеросал (< 0.05%). Перед использованием
[развести необходимое количество концентрата дистиллированной водой в соотношении 1:10. В случае 
/образования нерастворимых кристаллов поместите раствор в термостат (+37°С) на несколько минут, 
[приготовленный промывочный раствор хранить не более 30 суток при +2...8‘’С. Реагент общий для продуктов  
' линий «HEPATITIS В» производства компании RADIM.
Раствор ТМБ (ТМВ): 1  флакон. Раствор тетраметилбензидина в цитратно-фосфатном буфере, 
содержащем DMSO и Н2О2 .  Готов к использованию.
•  Стоп-реагент (STOP) / Blocking Reagent: 1  флакон. 1Н MCI. Готов к использованию
• Бумага для заклеивания планшета (СРА) / Adhesive plate sealers.
• Пластиковый пакет.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И  ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
I
3.1 Диагностическая специф ичность
Диагностическая специфичность данного метода оценивалась на группе более 500 образцов, 
полученных от доноров крови и пациентов не имеющих ВГВ инфекции. Специфичность составляет >98%.
3.2 Диагностическая чувствительность
Диагностическая чувствительность данного метода оценивалась на группе более 200 
положительных образцов. Чувствительность составляет ^98%.
3.3 Аналитическая специф ичность
Аналитическая специфичность определяется как способность анализа точно выявлять 
специфический аналит в присутствии интерферирующих факторов в матриксе образца. Контрольные 
исследования показали, что характеристики анализа не изменяются под действием антикоагулянтов (соли 
ЭДТА и гепарина), аутоантител или родственных вирусов. Дополнительные исследования, проведенные 
на сыворотках беременных женщин, показали, что качество анализа не изменяется под действием 
интерферирующих агентов.
3.4 Аналитическая чувствительность
Аналитическая чувствительность определялась с помощью референсной панели на Анти-НВс IgM, 
полученной из института Пауля Эрлиха. Аналитическая чувствительность составила 52 МЕ/мл.
3.5 Прецизионность
Прецизионность оценивалась на анализаторе производства RAD1M посредством определения 
повторяемости и воспроизводимости анализа (внутри- и межаналитический коэффициенты вариации) на 
трех сыворотках с различной концентрацией иммуноглобулинов класса М против HbcAg. Для того чтобы 
перевести качественный результат в количественный параметр, оптическую плотность (ОП), полученную 
для образцов, делили на значение Cut-off, получая, таким образом, значение S/CO (сигнал/ Cut-off).
Сыворотка Среднее
значение
± S.D. C.V. Кол-во
репликатов
S/CO %
а 0,08 ± 0 , 0 2 21,7 1 0
Ь 1 , 2 2 ± 0,15 12,5 1 0
с 10,84 ± 0,27 2 , 6 1 0
Воспроизводимость (Межаналитический коэффициент вариации)
Сыворотка Среднее
значение
± S.D. C.V. Кол-во
постановок
S/CO %
2/6


--- стр. 177 ---
т
а 1,31 ± 0,09 6,91 1 0
Ь 3,29 ± 0,23 6.9 1 0
с 10,58 ± 0,99 9,3 1 0
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ  
Для получения достоверны х результатов необходимо соблю дать следующие правила:
Не смешивайте специфические реагенты разных серий набора (см. п.2.2,1.)- Не смешивайте их 
с  реагентами других производителей.
Смешивание общих реагентов разных серий (см. п.2.2.1.) допускается,
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их загрязнение.
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте только дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в 
чистой посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для каждого образца или
реагента.
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и 
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам анализа.
В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует убедиться, 
что все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, спектрофотометр, термостат) 
проходит регулярную проверку и поддерживается в исправном состоянии.
Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок или 
автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок может 
привести к неверной интерпретации результатов анализа.
Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению оптической 
плотности образцов и последующим неправильным результатам анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». Если 
температура инкубации отклоняется от 37±2°С, это может привести к снижению чувствительности анализа 
и/или биологической денатурации образцов и реагентов. Следует периодически проверять показания 
датчика температуры.
Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или образцов. 
Несоблюдение температурного режима хранения может привести к биологической денатурации 
компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная идентификация 
может привести к ложным результатам и постановке ошибочного клинического диагноза.
Чтобы исключить заражение персонала и загрязнение окружающей среды, следует  
соблюдать следующие правила:
При работе с потенциально инфекционным материалом и во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
Не разрешается пипетировать ртом.
Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и курение в помещениях, 
предназначенных для работы с наборами.
Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и Стоп-реагентом. Избегать 
попадания в глаза, на кожу и слизистые, В случае контакта тщательно промыть пораженный участок проточной 
водой.
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на присутствие 
HBsAg, антител к ВИЧ и к вирусу гепатита С, Несмотря на полученные отрицательные результаты, 
следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не может гарантировать полное 
отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и другие реагенты, содержащие сыворотку 
крови человека, следует считать потенциально инфекционными.
Следует избегать разбрызгивания реагентов и образования аэрозолей. Места, на которые 
попал пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. Исполь­
зованный при этом протирочный материал следует считать потенциально инфицированным и  подвергнуть 
соответствующей обработке перед утилизацией.
- Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных азидов 
металлов в чугунных и медных водопроводных трубах, после слива использованных реагентов следует 
промыть сток большим объемом проточной воды.
3/6


--- стр. 178 ---
5. МАТЕРИАЛЫ И  ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В НАБОР
5.1. Материалы и оборудование, необходимые при ручной постановке анализа
■  Микропипетки, в том числе многоканальные, высокой точности (10-200 мкл, менее 3% ошибки) со сменными 
наконечниками.
•Градуированные цилиндры для разведения реагентов.
• Дистиллированная вода.
■Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
- Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления содержимого из лунок. 
-Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность 
раствора в лунках в диапазоне 0-3 ед. опт. плотн. при длинах волн 620,450 и 405нм.
5.2. Автоматическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа на 
автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC.
В  случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю необходимо 
удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для иммуно- 
ферментного анализа производства RADIM,
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Данный набор может применяться для исследования образцов сыворотки и плазмы крови человека. 
Сильно гемолизованные или липемичные образцы, а также присутствие в образцах фибрина могут 
I  оказывать влияние на результаты анализа. Перед постановкой анализа следует убедиться в том, что 
образцы прозрачные и не содержат осадка. Допускается хранение образцов при температуре +2,..8°С в 
течение 1  недели. При необходимости более длительного хранения образцы следует заморозить при 
-20°С. Избегайте повторного оттаивания и замораживания образцов,
Перед проведением анализа разведите образцы в соотношении 1:51 с помощью Раствора для 
разведения. Например: 10 мкл образца + 500 мкл Раствора для разведения,
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА*
Д оведит е реагент ы  до комнат ной т ем перат уры  (+18.. .25^0).
Тщ ат ельно перем еш айт е образцы  перед проведением  анализа.
7.1. Промаркируйте лунки. Оставьте 2 лунки для обнуления (Blank).
7.2. Внесите по 10 мкл контролей (отрицательный контроль в тетрапликате, положительный в 
дубликате) и образцов в соответствующие лунки.
Внимание: Контроли готовы к использованию и не требуют разведения.
7.3. Внесите во все лунки по 200 мкл Раствора для разведения образцов, исключая лунки Blank.
7.4. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора).
7.5. Инкубируйте его в течение 60 ± 2 минут при 37± 2 °С.
7.6. Удалите содержимое лунок и промойте лунки 4 раза, внося при каждой промывке по 350 мкл 
разведенного Промывочного раствора. Тщательно удалите жидкость из лунок.
7.7. Внесите во все лунки по 100 мкл Антигена, исключая лунки Blank.
7.8. Внесите во все лунки по 100 мкл Конъюгата, исключая лунки Blank.
7.9. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора),
7.10. Инкубируйте его в течение 60 ± 5 минут при 37± 2 °С.
7.11. Удалите содержимое лунок и промойте лунки 4 раза, внося при каждой промывке по 350 мкл
разведенного Промывочного раствора. Тщательно удалите жидкость из лунок.
7.12. Внесите во все лунки по 100 мкл Раствора ТМБ.
7.13. Инкубируйте в течение 20±2 минут при 37±2°С. Избегайте прямого попадания солнечного
света на планшет.
7.14. Внесите во все лунки по 100 мкл Стоп-реагента.
* При использовании автоматического анализатора производства RADIM и/или SEAC, действуйте в 
соответствии с его инструкцией.
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 6 .
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерьте оптическую плотность (СП) на спектрофотометре при двух длинах волн 450 нм. 
Референсный фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо вычитать 
величину оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех остальных лунок. В  
случае, если значение СП превышает предел линейности спектрофотометра, считывание результатов
J ,
4/6


--- стр. 179 ---
юдят при длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не позже, чем через 15 минут после 
сгановки реакции.
Примечание: при использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или SEAC 
р  планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять значения 
■оматически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм, что позволит расширить область кривой.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1. Определите среднее значение оптической плотности (ОП) Отрицательного Контроля (ОК) и 
южительного контроля (ПК). Рассчитайте значение Cut-off по формуле (1):
Cut-off = ОПсрОК + 0,300
Присутствие или отсутствие 1дМ  против НВсАд определяется путем сравнения ОП образца со 
1чением Cut-off.
Образцы с ОП ниже Cut-off признают нереактивными (не содержащими 1дМ  против НВсАд).
Образцы с ОП выше Cut-off признают реактивными (содержащими 1дМ  против НВсАд) и требуют повторного 
тестирования для подтвермодения положительного результата. Если при повторном тестировании получен 
'отрицательный результат, образец признается не реактивным. Если же при повторном тестировании получен 
положительный результат, образец признается реактивным.
Область значений ОП ± 10% от Cut-off является областью сомнительных значений. Если ОП образца 
попадает в эти пределы, результат считается сомнительным и требует повторного тестирования для 
подтверждения.
i
0.036 -0 ,0 4 0 -0 ,0 3 8  -0,046
Пример расчета результатов:
Запрещ ается использовать приведенные ниже значения вм есто  реальных  
экспериментальных данных.
ОП репликатов О трицательного контроля( ед.опт.плот.):
Среднее значение: 0,040
Критерий достоверности (< 0,070) Выполняется
ОП Положительного контроля( ед. опт. плот.): 1,020 -  1,080
Среднее значение: 1,050
Критерий достоверности (> 0,500) Выполняется
Cut-Off = 0,040 + 0,300  = 0,340
9.2. Критерии достоверности
Прежде чем начать обсчет результатов, убедитесь, что ОП контрольных точек соответствуют следующим
Описание Условие
ОП Отрицательного контроля при 450 нм < 0,070
ОП Положительного контроля при 450 нм > 0,500
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ.
9.3. Интерпретация результатов
-  Нереактивные образцы признают отрицательными по содержанию 1дМ  против НВсАд.
-  Реактивные образцы признают положительными по содержанию 1дМ против НВсАд.
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И  ЭКСПЛУАТАЦИИ
-  Набор должен храниться при температуре  +2.. .8 °С.
-  Срок годности реагентов указан на этике тка х флаконов.
-  Вскрытые реагенты  стабильны при температуре +2...8‘ С в течение 2 месяцев.
11. ОГРАНИЧЕНИЯ В ПРИМЕНЕНИИ АНАЛИЗА
Результаты анализа должны интерпретироваться с осторожностью и подтверждаться 
клиническими данными и дальнейшей диагностикой.
1 1
5/6


--- стр. 180 ---
СХЕМА АНАЛИЗА
-Инкубация: 37±2°С, 60 ± 5 мин. 
-  Промывка: 4 х 350 мкл.
Антиген Ag 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл
Конъюгат ICONJ ----- 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл
-Инкубация: 37±2°C, 60 ± 5 мин. 
-Промывка: 4 x 350 мкл.
Раствор ТМБ ТМВ| 2 0 0 мкл 2 0 0 мкл 2 0 0 мкл 2 0 0 мкл
-Инкубация; 37±2°С, 20±2 мин.
Стоп-реагент STOP 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл
Считывание: 450-405 нм.
)!неральный директор 
Ю «Компания Алкор Био»
|^ководитель лаборатории разработки ИФА-систем 
Ю «Компания Алкор Био»
'ев М.В.
Сусорова А.С.
RADIM S.p.A. - Via del Mare, 125 - 00040 Pomezia (Roma) Italia 
Tel.: +39 06 91.249.1 - Fax: +39 06 91.249.443 
National Order Entry:  +39 06 91.249.702 
Export Department:  +39 06 91.249,701 
Customer Care: +39 06 91.249.700 
info<a)radim.it - www.radim.it


--- стр. 181 ---


--- стр. 182 ---
« УТВ Е Р>ед 
г енерал
ООО «Кои|(1г^ния А п к о р ^ о н \
Ш вы рев!
/tL -» - ^jm pany" / 2 0 1 1 г
НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО  
ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ЯДРУ ВИРУСА ГЕПАТИТА В  
В СЫВОРОТКЕ И  ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА  
НВсАЬ
Только для in vitro диагностики
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Определение антител против корового антигена вируса гепатита В (анти-НВс) играет важную роль 
в мониторинге ВГВ инфекции. Обычно анти-НВс антитела появляются в крови после HBsAg и остаются в 
ней после исчезновения последнего. Таким образом, в фазу так называемого «окна» анти-НВс антитела 
являются единственным серологическим маркером ВГВ. В крови пациента с ВГВ инфекцией 
определяются как 1 д  М так и IgG антитела к коровому белку. 1 д  М антитела появляются первыми, их 
концентрация достигает пика во время острой фазы инфекционного процесса. IgG антитела остаются в 
крови годами, не смотря на отсутствие симптомов ВГВ.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
В наборе реагентов реализован двустадийный вариант конкурентного иммуноферментного 
анализа. Для реализации этого варианта использован НВсДд, который иммобилизован на твердой фазе 
(внутренняя поверхность лунок). В лунках, при добавлении исследуемого образца, происходит связывание 
специфических антител, содержащихся в исследуемом образце. Несвязавшиеся компоненты удаляются 
промывкой. Во время второй инкубации в лунки добавляют анти-НВсДд антитела, конъюгированные с 
пероксидазой, которые связывают «свободный» (не связанный антителами исследуемого образца) антиген 
твердой фазы. Несвязавшиеся компоненты удаляются промывкой. Во время инкубации с раствором ТМБ 
происходит окрашивание раствора в лунках, Степень окраски обратно пропорциональна концентрации 
специфических антител в анализируемых пробах. После измерения оптической плотности раствора в 
лунках наличие специфических иммуноглобулинов оценивают относительно значения cut-off.
2.2. СОСТАВ НАБОРА
Реагент Количество Состояние
1 -й вариант 
комплектации
2 -й вариант 
комплектации
Планшет
мтИ 1х 96 лунок 2х 96 лунок Готов к использованию 
Ready for use
Промь
WASH
1В0 Ч Н Ы Й  раствор 1  X  50 мл 2 X  50 мл Концентрат
Cone.
ЗГЕ цательный контроль 1  X  2,5 мл 1  X  2,5 мл Готов к использованию 
Ready for use
Положительный контроль
posi 1  X  1,5 мл 1  X  1,5 мл Готов к использованию 
Ready for use
Конъюгат
CONJ 1  X  14 мл 2 X  14 мл Готов к использованию 
Ready for use
зор ТМБ 1  X  14 мл 2 X  14 мл Готов к использованию 
Ready for use
В В !Я
Я В Е
зеагент 1  X  14 мл 2 X  14 мл Готов к использованию 
Ready for use
Количество реагентов рассчитано на 96 или на 192 лунки.
2.2.1.Реагенты
• Иммуносорбент -  планшет (МТР) / Coated microplate: 1  или 2 планшета из 12 разборных 
стрипов по 8  лунок (всего 96 лунок). Лунки стрипов планшета покрыты рекомбинантным НВсДд.
1/6


--- стр. 183 ---
пьзованные стрипы хранить при температуре +2...8°С в плотно закрытом пластиковом пакете 
ается).
Отрицательный контроль (NEG) I Negative Control; 1  флакон. Раствор на основе сыворотки 
е й , н е  содержащий HBsAg, антитела к вирусу гепатита С и ВИЧ. Готов к использованию. Консерванты; 
м и ц и н  и  тимеросал (<0,05%).
Положительный контроль (POS) / Positive Control: 1  флакон. Раствор на основе сыворотки 
е й , содержащий IgG к коровому антигену вируса гепатита В и не содержащий HBsAg, антитела к вирусу 
гги т а  С и ВИЧ. Готов к использованию. Консерванты: неомицин и тимеросал (<0,05%).
Конъюгат (CONJ) / Enzyme Conjugate: 1  флакон или 2 флакона. Раствор на основе трисового 
е р а , содержит моноклональные IgG к НВсАд, конъюгированные с пероксидазой хрена (HRPO) и БСА. 
р о г о в  к использованию. Консервант: неомицин.
Промывочный раствор (WASH) / Washing Solution (concentrated): 1  флакон или 2 флакона, 
атный буферный раствор, содержащий Твин 20. Консервант: Тимеросал (< 0.05%). Перед 
пьзованием развести концентрат в 500 мл дистиллированной воды. В случае образования нерастворимых 
таллов поместите раствор в термостат (+37°С) на несколько минут. Приготовленный промывочный раствор 
Канить не более 30 дней при +2... 8 °С. Реагент, общий для п р о д у к т о в л и н и й «HEPATITIS В» производства  
рмпании RADIM.
Раствор ТМБ (ТМВ): 1  флакон или 2 флакона. Раствор тетраметилбензидина в цитратно- 
[)атном буфере, содержащем DMSO и Н 2О2.  Готов к использованию.
Стоп-реагент (STOP) / Blocking Reagent: 1  флакон или 2 флакона. 1Н HCI. Готов к 
Щспользованию.
• Бумага для заклеивания планшета (СРА) / Adhesive plate sealers.
•  Пластиковый пакет.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И  ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1 Диагностическая специф ичность
Диагностическая специфичность данного метода оценивалась на группе более 5000 образцов, 
полученных от доноров крови и пациентов, не имеющих ВГВ инфекции. Специфичность составляет 
99,86%.
3.2 Диагностическая чувствительность
Диагностическая чувствительность данного метода оценивалась на группе более 400 
положительных образцов. Чувствительность составляет 100%.
3.3 Аналитическая специфичность
Аналитическая специфичность определяется как способность анализа точно выявлять 
специфический аналит в присутствии интерферирующих факторов в матриксе образца. Контрольные 
исследования показали, что характеристики анализа не изменяются под действием антикоагулянтов (соли 
ЭДТА и гепарина), аутоантител или родственных вирусов. Дополнительные исследования, проведенные 
на сыворотках беременных женщин, показали, что качество анализа не изменяется под действием 
интерферирующих агентов.
3.4 Аналитическая чувствительность
Аналитическая чувствительность выражается минимальным количеством определяемого аналита, 
выявляемым с помощью данного метода. Аналитическая чувствительность определялась с помощью серии 
разведений Международного Стандарта (МС) на Анти-НВс антитела, полученного из института Пауля 
Эрлиха (Германия). Концентрация МС была выражена в МЕ/мл. Аналитическая чувствительность 
составила 0,45 МЕ/мл.
Концентрация Анти-НВс ОП, ед.опт.пл.
2,5 МЕ/мл 0 , 1 2 0
1,25 МЕ/мл 0 , 1 2 1
0,625 МЕ/мл 0,302
0,312 МЕ/мл 0,685
Отрицательный контроль 1,899
Положительный контроль 0,166
Cut-off 0,379
3.5 Прецизионность
Прецизионность оценивалась на анализаторе производства RADIM посредством определения 
повторяемости и воспроизводимости анализа (внутри- и межаналитический коэффициенты вариации) на 
трех сыворотках с различной концентрацией антител против HbcAg. Для того, чтобы перевести 
качественный результат в количественный параметр, оптическую плотность (ОП), полученную для 
образцов, делили на значение Cut-off, получая, таким образом, значение S/CO (сигнал/ Cut-off).
2/6


--- стр. 184 ---
Повторяемость (Внутрианалитический коэффициент вариации)
|Тсыворотка Среднее ± S.D. C.V. Кол-во
II значение % репликатов
|[ S/CO
f t 3 0,07 ± 0 , 0 2 31,5 1 0
г  b 0,94 ± 0,05 5,7 1 0
IT с 3,97 ± 0,13 3,4 1 0
|| Сыворотка Среднее ± S.D. C.V. Кол-во
1 значение % постановок
| [ S/CO
Г  ^ 0,3 ± 0 1 1 , 6 1 0
1 Г  ь 1,4 ± 0 ,1 8 , 6 1 0
Г с 3,3 ± 0,3 9,6 1 0
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Для получения достоверны х результатов необходимо соблю дать следующие правила;
Не смешивайте реагенты разных серий набора (см, п.2.2.1.). Не смешивайте их с реагентами 
д ругих производителей.
j -  Смешивание общего реагента разных серий (см. п.2.2.1.) допускается.
-  Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их загрязнение.
Используйте только чистую стекпянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте только дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в 
чистой посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для каждого образца или
реагента.
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и 
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам анализа.
В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует убедиться, 
что все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, спектрофотометр, термостат) 
проходит регулярную проверку и поддерживается в исправном состоянии.
-  Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок или 
автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок может 
привести к неверной интерпретации результатов анализа.
Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению оптической 
плотности образцов и последующим неправильным результатам анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». Если 
температура инкубации отклоняется от 37±2°С, это может привести к снижению чувствительности анализа 
и/или биологической денатурации образцов и реагентов. Следует периодически проверять показания 
датчика температуры.
Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или образцов. 
Несоблюдение температурного режима хранения может привести к биологической денатурации 
компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная идентификация 
может привести к ложным результатам и постановке ошибочного клинического диагноза.
Чтобы исключить заражение персонала и загрязнение окружающей среды, следует  
соблюдать следующие правила;
При работе с потенциально инфекционным материалом и во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
Не разрешается пипетировать ртом.
Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и курение в помещениях, 
предназначенных для работы с наборами.
3/6


--- стр. 185 ---
Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и Стоп-реагентом. Избегать 
цания в глаза, на кожу и слизистые. В случае контакта тщательно промыть пораженный участок проточной
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на присутствие 
B sA g , антител к ВИЧ и к вирусу гепатита С. Несмотря на полученные отрицательные результаты, 
цует учесть, что ни один из существующих методов анализа не может гарантировать полное 
тствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и другие реагенты, содержащие сыворотку 
[ф ови человека, следует считать потенциально инфекционными.
Следует избегать разбрызгивания реагентов и образования аэрозолей. Места, на которые 
1 |ю п а л  пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. Исполь- 
[зованный при этом протирочный материал следует считать потенциально инфицированным и подвергнуть 
тветствующей обработке перед утилизацией.
- Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных азидов 
|*еталлов в чугунных и медных водопроводных трубах, после слива использованных реагентов следует 
[промыть сток большим объемом проточной воды.
5. МАТЕРИАЛЫ И  ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В НАБОР
5.1. Материалы и оборудование, необходимые при ручной постановке анализа
- Микропипетки, в том числе многоканальные, высокой точности (10-200 мкл, менее 3% ошибки) со сменными 
наконечниками.
- Градуированные цилиндры для разведения реагентов.
- Дистиллированная вода.
- Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
- Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления содержимого из лунок.
- Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность 
раствора в лунках в диапазоне 0-3 ед. опт. плотн. при длинах волн 620,450 и 405нм.
- Миллиметровая бумага.
5.2. Автоматическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа на 
автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC.
В случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю необходимо 
удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для иммуно- 
ферментного анализа производства RADIM.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Данный набор может применяться для исследования образцов сыворотки и плазмы крови человека. 
Сильно гемолизованные или липемичные образцы, а также присутствие в образцах фибрина могут 
оказывать влияние на результаты анализа. Перед постановкой анализа следует убедиться в том, что 
образцы прозрачные и не содержат осадка. Допускается хранение образцов при температуре +2...8°С в 
течение 1  недели. При необходимости более длительного хранения образцы следует заморозить при - 
20°С. Избегайте повторного оттаивания и замораживания образцов.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА*
Д оведит е реагент ы  до комнат ной т ем перат уры  (+18.. .25°С).
Тщ ат ельно перем еш айт е образцы  перед проведением анализа.
7.1. Промаркируйте лунки. Оставьте 2 лунки для обнуления (Blank).
7.2. Внесите по 100 мкл контролей (отрицательный контроль в тетрапликате, положительный в 
дубликате) и образцов в соответствующие лунки.
7.3. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора).
7.4. Инкубируйте его в течение 60 ± 2 минут при 37±2*С.
7.5. Удалите содержимое лунок и промойте лунки 4 раза, внося при каждой промывке по 350 мкл  
разведенного Промывочного раствора. Тщательно удалите жидкость из лунок.
7.6. Внесите во все лунки по 100 мкл Конъюгата, исключая лунки Blank.
7.7. Закройте планшет клейкой бумагой (входит в состав набора).
7.8. Инкубируйте его в течение 30 ± 2 минуты при 37±2°С.
7.9. Удалите содержимое лунок и промойте лунки 4 раза, внося при каждой промывке по 350 мкл  
разведенного Промывочного раствора. Тщательно удалите жидкость из лунок.
7.10. Внесите во все лунки по 100 мкл Раствора ТМБ.
7.11. Инкубируйте в течение 20±2 минут при 37±2°С. Избегайте попадания света на планшет.
7.12. Внесите во все лунки по 100 мкл Стоп-реагента.
* При использовании автоматического анализатора производства RADIM и/или SEAC, действуйте в 
соответствии с его инструкцией.
4/6


--- стр. 186 ---
8 . РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. Референсный 
ильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо вычитать величину 
ггической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех остальных лунок. В случае, 
п и  значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, считывание результатов проводят 
I  длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не позже, чем через 15 минут после остановки 
еакции.
Примечание: при использовании автоматических анализаторов производства RAD1M и/или SEAC 
л я  планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять значения 
томатически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм, что позволит расширить область кривой.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1 Определите среднее значение оптической плотности (ОП) Отрицательного Контроля (ОК) и 
1оложительного контроля (ПК).
Примечание: для расчета среднего значения ОП ОК не использовать оптические плотности лунок, 
зторые не попадают в диапазон 0,8 -1,2 от ОПср.ОК.
Рассчитайте значение Cut-off по формуле (1):
Cut-off = ОПсрОК X  0,2 (1)
Присутствие или отсутствие антител против НВсАд определяется путем сравнения ОП образца со 
[значением Cut-off.
Образцы с ОП выше Cut-off признают нереактивными (не содержаи^ими антитела против НВсАд).
Образцы с ОП ниже Cut-off признают реактивными (содержащими антитела против НВсАд) и требуют 
повторного тестирования для подтверждения положительного результата. Если при повторном тестировании 
получен отрицательный результат, образец признается нереактивным. Если же при повторном тестировании 
получен положительный результат, образец признается реактивным.
Область значений ОП ± 10% от Cut-off является областью сомнительных значений. Если ОП образца 
попадает в эти пределы, результат считается сомнительным и требует повторного тестирования для 
подтверждения.
Пример расчета результатов:
Запрещается использовать приведенные ниже значения в м е сто  реальных экспериментальных  
Цнных.
ОП репликатов Отрицательного контроля (вд.опт.плотн.): 2,070; 2,105; 2,120; 2,205
Среднее значение ОП ОК (ед.опт.плотн.): 2,125  
ОП Положительного контроля (ед.опт.плотн.): 0,168; 0,180  
Среднее значение ОП ПК (ед.опт.плотн.): 0,174  
Cut-Off = 2 ,125x0,2 = 0,425
9.2. Интерпретация результатов
-  Нереактивные образцы признают отрицательными по содержанию антител против НВсАд,
-  Реактивные образцы признают положительными по содержанию антител против НВсАд.
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И  ЭКСПЛУАТАЦИИ
-  
Набор должен храниться при температуре +2.. .8°С.
-  Срок годности реагентов указан на этике тка х флаконов.
-  Вскрытые реагенты  стабильны при температуре +2...8°С в течение 2 месяцев.
11. ОГРАНИЧЕНИЯ В ПРИМЕНЕНИИ АНАЛИЗА
Результаты анализа должны интерпретироваться с осторожностью и подтверждаться 
клиническими данными и дальнейшей диагностикой.
EM A АНАЛИЗА п р и в е д е н а  н а с т р а н и ц е  6.
СХЕМА АНАЛИЗА
5/6


--- стр. 187 ---
j --------— Л у н к и
JPeareHTbi ~ -------_ _ _
Blank NEG POS Образцы
|№G| ----- 100 МКЛ
Jpos ----- 100 МКЛ
■Образцы — 100 мкл
-Инкубация: 37±2°С, 60 ± 5 мин. 
-Промывка; 4 х 350 мкл.
1|Конъюгат |CONJ| — 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл
J  -  Инкубация: 37±2°C, 30 ± 2 мин.
9  -  Промывка: 4 x 350 мкл.
■ Раствор ТМБ fTMBi 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл
I  -Инкубация: 37±2°C, 20±2 мин.
1 Стоп-реагент STOP 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл
Считывание: 450-405 нм.
еральныи директор
О  «Компания Алкор Био»
«
оводитель лаборатории разработки ИФА-систем
О  «Компания Алкор Био» усорова А.С.
RADIM S.p.A. Via del Mare, 125 - 00040 Pomezia (Roma) Italia 
Tel.; +39 06 91.249.1 - Fax: +39 06 91.249.443 
National Order Entry; +39 06 91.249,702 
Export Department:  +39 06 91.249.701 
Customer Care: +39 06 91.249.700 
info&radim.it - www.radim.it
R A D I M


--- стр. 189 ---
Г енеральны |1;)^||^ ^о р
ООО «Компан^я^Хлкв^Й^^^
Ш вьф ев М . в ( ! о Н ''^ Ч ^ ^ ^ 4 ^  | ; '
« J ^ r >  г ., i e n ^ г
"  'П ^ ге р (ф ^
НАБОР РЕАГЕНТОВ  
ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К  
ВИРУСУ ГЕПАТИТА А В СЫВОРОТКЕ И  ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
HAV АЬ
Только для in vitro диагностики
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Центр по контролю за заболеваниями (CDC), Атланта, США, описывает ситуацию, сложившуюся с 
Гепатитом А, следующим образом:
Гепатит А продолжает оставаться наиболее часто встречающимся заболеванием из числа тех, для 
профилактики которых используется вакцина. И это несмотря на то, что вакцинопрофилактика гепатита 
А проводится с 1995 года. Вакцинация восприимчивого населения способна в значительной степени 
уменьшить количество случаев заболевания и, возможно, остановить распространение Гепатита А.
Вирус Гепатита А (ВГА) -  РНК-содержащий вирус размером 27 нм, относящийся к пикорнавирусам. 
Инкубационный период в среднем 28 дней (может варьировать от 15 до 50 дней), заболевание протекает 
как бесссимптомно, так и с ярко выраженной клиникой. Для ВГА инфекции характерно острое начало, 
сопровождающееся следующими симптомами: лихорадка, слабость, отсутствие аппетита, тошнота, боли 
в животе, темная моча и желтуха. Выраженность симптомов зависит от возраста больного. У детей 
младше 6  лет в большинстве (70%) случаев ВГА инфекция протекает бессимптомно и обычно не 
сопровождается желтухой. У более старших детей и взрослых инфекция обычно протекает с ярко 
выраженной клиникой и в более 70% случаев сопровождается желтухой. Выздоровление обычно 
наступает в течение 2  месяцев, однако у 10-15% больных период реконвалесценции растягивается до 6  
месяцев.
Вирус Гепатита А реплицируется в печени, выделяется с желчью, попадает в кал и таким образом 
выделяется из организма инфицированного человека. Наиболее заразен больной человек в течение 
двух недель до возникновения желтухи или повышения уровня печеночных ферментов, когда 
концентрация вируса в стуле максимальная. После появления желтухи концентрация вируса в стуле 
снижается. Дети и подростки могут выделять вирус в течение более долгого времени (до нескольких 
месяцев после возникновения симптомов заболевания), чем взрослые. Хроническое выделение вируса 
гепатита А не встречается, однако такое возможно у пациентов с рецидивом инфекции. Виремия 
наблюдается вскоре после заражения и сохраняется вплоть до повышения уровня печеночных 
ферментов.
Дифференциальная диагностика с другими видами вирусных гепатитов на основе клинической 
картины или эпидемиологического анамнеза невозможна. Поэтому определение иммуноглобулинов М к 
капсидному белку ВГА необходимо для подтверждения диагноза «острая ВГА-инфекция». У 
большинства пациентов анти-ВГА 1дМ  можно определить за 5-10 дней до появления симптомов, и они 
могут сохраняться в крови в течение 6  месяцев. Анти-ВГА IgG появляются в крови после проявления 
клинической картины и остаются в течение всей жизни человека, формируя пожизненный иммунитет 
против ВГА. Коммерческие тест-системы в основном направлены на выявление 1дМ  и суммарных 
антител (1дМ и IgG) против вируса гепатита А в сыворотке крови человека.
РНК ВГА может быть определена с помощью ПЦР в крови и кале у пациентов во время острой 
фазы. Определение последовательности РНК позволяет отнести вирус к тому или иному изоляту.
ВГА передается фекально-оральным путем, через зараженную пищу и воду. В редких случаях, 
возможно заражение трансмиссивным путем при переливании крови или ее продуктов, полученных от 
донора с ВГА виремией. У зараженных лабораторных животных (приматов) ВГА определялся в слюне во 
время инкубационного периода, однако возможность передачи инфекции через слюну показана не была,
В зависимости от условий, ВГА может быть стабилен в окружающей среде в течение нескольких 
месяцев. Прогрев пищи при температуре 85®С в течение 1  минуты и обработка поверхности 1:100 
разведением гипохлорита натрия в водопроводной воде необходимы для инактивации ВГА.
Так как для большинства детей характерно бессимптомное течение инфекции, они играют важную 
роль в распространении инфекции. В одном из исследований, у 52 % взрослых без
идентифицированного источника заражения имелись дети младше 6  лет, поэтому наличие в доме детей 
младшего возраста было связано с распространением ВГА инфекции. При серологическом тестировании 
детей, бывших в контакте с взрослыми, инфицированными ВГА, было показано, что 25-40% из них имели 
1дМ  к вирусу гепатита А.
1/10


--- стр. 190 ---
Weeks after exposure
Тест-система HAV Ab предназначена для качественного определения иммуноглобулинов против ВГА в 
сыворотке и плазме крови человека.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. ПРИНЦИП д е й с т в и я
В наборе реагентов реализован двустадийный вариант конкурентного иммуноферментного анализа. 
Для реализации этого варианта использован очищенный антиген ВГА, который иммобилизован на твердой 
фазе (внутренняя поверхность лунок). В лунках, при добавлении исследуемого образца, происходит 
связывание специфических антител, содержащихся в исследуемом образце. Несвязавшиеся компоненты 
удаляются промывкой. Во время второй инкубации в лунки добавляют специфические антитела, 
конъюгированные с пероксидазой, которые связывают «свободный» (не связанный антителами исследуемого 
образца) антиген твердой фазы. Несвязавшиеся компоненты удаляются промывкой. Во время инкубации с 
раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски обратно пропорциональна 
количеству специфических антител в анализируемых пробах. После измерения оптической плотности 
раствора в лунках наличие специфических иммуноглобулинов оценивают относительно значения cut-off.
2.2. СОСТАВ НАБОРА
Реагент Количество Состояние
iMICROPLATEl 1  X  96 лунок Готов к использованию
Микропланшет Ready for use
CONTROL 1 - 1  X  4,0 мл Готов к использованию
Отрицательный контроль Ready for use
ICONTROLI + 1  X  2,0 мл Готов к использованию
Положительный контроль Ready for use
CAL
Калибровочная проба
2  флакона Лиофилизованнный препарат
WASHBUF 1  20Х 1  X  50 мл Концентрированный раствор
20х Промывочный буфер Сопс.
|CONJ| 1  X  16 мл Готов к использованию
Конъюгат Ready for use
DILSPE 
Раствор для разведения 
образцов
1  X  8,0 мл Готов к использованию 
Ready for use
Раствор ТМБ 1  X  14 мл Готов к использованию
тмв| Ready for use
Стоп-реагент 1  X  14 мл Готов к использованию
STOP Ready for use
Количество реагентов рассчитано на 96 лунок.
2.2.1. Реагенты
• Иммуносорбент -  планшет (MICROPLATE) / Microplate: 1  планшет из 12 разборных стрипов 
по 8  лунок (всего 96 лунок). Лунки стрипов планшета покрыты инактивированным вирусом гепатита А.
2/10


--- стр. 191 ---
Неиспользованные стрипы хранить при температуре +2...8°С в плотно закрытом пластиковом пакете 
(прилагается).
• Отрицательный контроль (CONTROL -) / Negative Control: 1  флакон. Раствор бледно-желтого 
ц в е т а  на основе 10 мМ фосфатного буфера, pH 7,4±0,1, содержит БОА. Консерванты: 0,02% гентамицина 
сул ь ф а т и  0,1% Катон GC. Готов к использованию.
• Положительный контроль (CONTROL +) / Positive Control: 1  флакон. Раствор зеленого цвета 
н а  основе 10 мМ фосфатного буфера, pH 7,4+0,1, содержит БСА и антитела к вирусу гепатита А в 
юнцентрации выше, чем 100 мМЕ/мл (ВОЗ). Консервант: 0,02% гентамицина сульфат и 0,1% Катон GC 
Г о т о в  к использованию.
•  Калибратор (CAL) I Calibrator: 2 флакона. На основе 10 мМ фосфатного буфера, pH 7,4±0,1, 
содерж ит БСА и антитела к вирусу гепатита А в концентрации около 10 мМЕ/мл (ВОЗ). Консерванты: 0,02% 
гентамицина сульфат и 0,1% Катон GC. Лиофилизован. Перед использованием растворите содержимое 
ф лако на в объеме дистиллированной воды, который указан на этикетке. Восстановленный реагент 
хра ни ть при -20°С. Повторное замораживание не допускается.
Внимание; Объем, необходимый для растворения содержимого флакона, может быть различным 
д л я  разных партий реагента. Обратите внимание, чтобы препарат был растворен именно в том объеме 
в о д ы , который указан на этикетке флакона.
• Промывочный раствор 20х (WASHBUF 20Х) / Washing buffer concentrate: 1  флакон 1х 
Промывочный буфер представляет собой 10 мМ фосфатный буферный раствор, pH 7,0±0,2, содержащий
0,0 5 %  Твин 20 и 0,05% Катон GC, Перед использованием развести необходимое количество концентрата 
дистиллированной водой в соотношении 1:20, В случае образования нерастворимых кристаллов поместите 
р а ств о р  в термостат (37°С) на несколько минут. Приготовленный промывочный раствор хранить не более 7 суток при 
+ 2 ...8 °С .
• Конъюгат (CONJ) / Enzyme Conjugate: 1  флакон. Раствор красного цвета на основе 10 мМ 
трисового буфера, pH 6,8±0,1, содержит антитела к вирусу гепатита А, конъюгированные с пероксидазой 
хрена (HRPO), 2% БСА, 0,02% гентамицина сульфата и 0,1% Катон GC. Готов к использованию.
• Раствор для разведения образцов (DILSPE) / Specimen Diluent: 1  флакон. Раствор темно­
зеленого цвета. Консерванты: 0,09% азид натрия и 0,1% Катон GC. Готов к использованию.
•  Раствор ТМБ (ТМВ): 1  флакон. Раствор тетраметилбензидина в цитратно-фосфатном буфере, 
содержащем DMSO и Н2О2.  Готов к использованию.
• Стоп-реагент (STOP) / Blocking Reagent: 1  флакон. 1Н HCI. Готов к использованию.
•  Бумага для заклеивания планшета (СРА) / Adhesive plate sealers.
• Пластиковый пакет.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И  ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1 Диагностическая специф ичность
Диагностическая специфичность определялась на панели образцов, полученных от доноров и 
пациентов, не имеющих иммунитета к ВГА, которые были определены как отрицательные одобренной 
FD A тест-системой.
Не было обнаружено ложноположительных реакций при тестировании анализируемых образцов 
разных типов.
Не было также обнаружено влияния на специфичность заморозки анализируемых образцов.
Были протестированы образцы пациентов с другими вирусными заболеваниями (ВГС, ВГО, ВГВ, 
ВИЧ) и с гепатитами невирусной природы. Ложноположительных реакций обнаружено не было.
В общей сложности в независимых референсных лабораториях было протестировано более 1000 
образцов. Диагностическая специфичность составила > 98%.
3.2 Диагностическая чувствительность
Диагностическая чувствительность определялась на панели образцов, которые были определены 
как положительные одобренной FDA тест-системой. В общей сложности было протестировано более 200 
образцов. Диагностическая чувствительность составила 100%.
Дополнительно были протестированы сероконверсионные панели и панель для определения 
качества тест-системы (BBI, США). Результаты, полученные при тестировании двух панелей, 
представлены в нижеследующих таблицах.
Образец ОП, 450 нм GO/S 8 /СО DiaSorin
Отрицательный контроль 1,968 0,3 2,89
Положительный контроль 0,084 8,1 0,12
Калибратор 0,470 1,5 0,69
РНТ 902
1 1,878 0,4 2,76 отрицательный
2 1,501 0,5 2 , 2 0 отрицательный
3 0,090 7,6 0,13 положительный
4 0,123 5,6 0,18 положительный
3/10


--- стр. 192 ---
0,120 5,7 0,176 п ол о ж и тел ьн ы й
1 ^ 4 o n, 450 нм CO/S S/CO DiaSorin Образец ОП, 450 нм CO/S S/CO DiaSorin
1 0,169 4,0 0,24 пол 14 0,139 4,9 0,20 пол
2 0,132 5,2 0,19 пол 15 0,115 5,9 0,16 пол
3 0,143 4,8 0,20 пол 16 0,167 4,1 0,24 пол
4 0,104 6,6 0,15 пол 17 0,086 8,0 0,12 пол
5 0,438 1,6 0,63 пол 18 0,160 4.3 0,23 пол
6 0 , 1 2 1 5,7 0,17 пол 19 0,175 3,9 0,25 пол
7 0,127 5,4 0,18 пол 2 0 1,772 0,4 2,58 отр
. !  8 0,150 4,6 0,21 пол 2 1 0,090 7,6 0,13 пол
} 9 0,115 5,9 0,16 пол 2 2 0 , 2 0 1 3,4 0,29 пол
Г 10 0,094 7,3 0,13 пол 23 0,281 2,4 0,40 пол
Г 11 0,070 9,8 0,10 пол 24 0,134 5,1 0,19 пол
Р" 12 1,814 0,4 2,64 отр 25 0,142 4,8 0 , 2 0 пол
f 1 3 0,097 7,1 0,14 пол ОК 1,780 0,4 2,59 отр
3.3 Прецизионность
Два образца (один отрицательный и один слабоположительный) анализировались в трех 
независимых постановках. В каждой из постановок образцы были нанесены в 16 репликатах. Результаты, 
полученные при изучении прецизионности, представлены в нижеследующих таблицах.
Постановка 1
Образец Отрицательный Слабоположительный
ОП, 450 нм, ед.опт.пл 2,425 0,608
Ст. откп. 0,065 0,023
КВ, % 2,7 3,9
Постановка 2
Образец Отрицательный Слабоположительный
ОП, 450 нм, ед.опт.пл 2,373 0,573
Ст. откл. 0,107 0,034
КВ, % 4,5 6 , 0
Постановка 3
Образец Отрицательный Слабоположительный
ОП, 450 нм, ед.опт.пл 2,478 0,554
Ст. откл. 0,108 0,023
КВ, % 4,4 4,2
Изменения диагнозов образцов обнаружено не было.
3.4 Предел детекции
Этот параметр был определен с помощью Второго Международного Стандарта антител и 
Стандарта, полученного из института Пауля Эрлиха. Дополнительно были протестированы контрольные 
образцы, полученные из Boston Biomedica Inc., США (Accurun 52 и Accurun 120). Предел детекции 
составляет < 10 ВОЗ мМЕ/мл или < 5 ИПЭ мЕд/мл. Результаты контроля качества представлены в 
нижеследующей таблице.
ВОЗ мМЕ/мл ОП, 450 нм CO/S S/CO ИПЭ мЕд/мл ОП, 450 нм CO/S S/CO
50 0,099 7,7 0,13 50 0,093 8,2 0,12
25 0,197 3,9 0,25 25 0,137 5,6 0,17
1 0 0,543 1,4 0,71 1 0 0,304 2,5 0,39
5 0,943 0 . 8 1,23 5 0,587 1,3 0,76
2,5 1,015 0,7 1,33 2,5 0,949 0 , 8 1,24
ОК 2,217 — ОК 2,217 ---------
Accurun 52 0,060 12,7 0,078 Accurun 120 0,115 6,6 0,15
На графике это выглядит следующим образом:
4/10


--- стр. 193 ---
•  воз 
•ипэ
м М Е /м л(м Е Д /м л)
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Для получения достоверны х результатов необходимо соблю дать следующие правила;
-  Не смешивайте специфические реагенты ( см.2.2.1.) разных серий набора. Не смешивайте их с
реагентами других производителей.
Разрешается смешивать Промывочный раствор, Раствор ТМБ и Стоп-реагент разных серий 
набора. Не смешивайте их с реагентами других производителей.
-  Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
-  Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их загрязнение.
-  Используйте только чистую стекпянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в чистой
п осуде.
-  Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для ка>кдого образца или 
реагента.
-  Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и  
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам анализа.
-  В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует убедиться, 
что все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, спектрофотометр, термостат) 
проходит регулярную проверку и поддерживается в исправном состоянии.
-  Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок или 
автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок может 
привести к неверной интерпретации результатов анализа.
-  Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению оптической 
плотности образцов и последующим неправильным результатам анализа.
-  Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». Если 
температура инкубации отклоняется от 37±2°С, это может привести к снижению чувствительности анализа 
и/или биологической денатурации образцов и реагентов. Следует периодически проверять показания 
датчика температуры.
Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или образцов. 
Несоблюдение температурного режима хранения может привести к биологической денатурации 
компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
-  Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная идентификация 
может привести к ложным результатам и постановке ошибочного клинического диагноза.
Чтобы исключить заражение персонала и загрязнение окружающей среды, следует  
соблюдать следующие правила;
При работе с потенциально инфекционным материалом и во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
Не разрешается пипетировать ртом.
Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и курение в помещениях, 
предназначенных для работы с наборами.
5/10


--- стр. 194 ---
1
-  Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и Стоп-реагентом. Избегать 
|попадания в глаза, на кожу и слизистые. В случае контакта тщательно промыть пораженный участок проточной
ЦОЙ.
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на присутствие 
iHBsAg, антител к ВИЧ и к вирусу гепатита С. Несмотря на полученные отрицательные результаты, 
1следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не может гарантировать полное 
(отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и другие реагенты, содержащие сыворотку 
[фови человека, следует считать потенциально инфекционными.
Следует избегать разбрызгивания реагентов и образования аэрозолей. Места, на которые 
[попал пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. Исполь­
зованный при этом протирочный материал следует считать потенциально инфицированным и подвергнуть 
[соответствующей обработке перед утилизацией.
- Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных азидов
I  металлов в чугунных и медных водопроводных трубах, после слива использованных реагентов следует
I  промыть сток большим объемом проточной воды.
5. МАТЕРИАЛЫ И  ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В НАБОР
5.1. Материалы и оборудование, необходимые при ручной постановке
- Микропипетки, в том числе многоканальные, высокой точности (10-200 мкл, менее 3% ошибки) со сменными 
наконечниками.
- Градуированные цилиндры для разведения реагентов.
- Дистиллированная вода.
- Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
- Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления содержимого из лунок.
- Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность 
раствора в лунках в диапазоне 0-3 ед. опт, плотн. при длинах волн 620, 450 и 405нм.
5.2. Автоматическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа на
автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC.
В случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю необходимо
удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для иммуно-
ферментного анализа производства RADIM.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
При заборе венозной крови следует соблюдать правила асептики. Сыворотку или плазму крови 
получают по общепринятой методике подготовки образцов для лабораторного анализа. Не было 
обнаружено существенного влияния цитрата, ЭДТА и гепарина на результаты анализа.
Не допускается добавление в анализируемые образцы консервантов, особенно азида натрия, 
так как они могут повлиять на ферментативную активность конъюгата и способствовать возникновению 
ложноотрицательных результатов.
-  Образцы должны быть четко маркированы во избежание ошибочной интерпретации 
результатов. Настоятельно рекомендуется применять штрих-кодирование и электронный датчик для 
считывания штрих-кода, в особенности, если набор применяется для скрининга донорской крови.
Не допускается применять образцы с видимыми признаками гемолиза (красный цвет) и липемии 
(«молочный» оттенок), так как при этом может быть получен ложный результат. По этой же причине не 
допускается применять образцы, содержащие фибрин, твердые частицы или видимые признаки 
микробной контаминации.
Сыворотку и плазму допускается хранить при температуре +2°..8°С в течение 5 суток после 
сбора. При необходимости более длительного хранения образцы допускается хранить при температуре -  
20°С в течение нескольких месяцев. Не допускается повторное замораживание/размораживание 
образцов, так как образовавшиеся при этом включения могут влиять на результат анализа.
При обнаружении твердых частиц, образцы перед проведением анализа центрифугируют в 
течение 2 0 минут при 2 0 0 0 об/мин, либо очищают фильтрованием (диаметр пор фильтра 0 ,2 -0 , 8 мкм),
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА*
- Д оведит е реагент ы  до комнат ной т ем перат уры  (+18...25'‘С).
Тщ ат ельно перем еш айт е образцы  перед проведением  анализа.
7.1. Промаркируйте лунки для контролей и исследуемых образцов. Оставьте 1  лунку для обнуления 
(Blank), 3 лунки для отрицательного контроля, 2 лунки для калибратора и одну лунку для положительного 
контроля.
7.2. Внесите во все лунки с образцами, Контролями и Калибратором по 50 мкл Раствора для 
разведения образцов,
6/10


--- стр. 195 ---
7.3. Внесите по 100 мкл контролен в соответствующие лунки.
Внимание: Контроли готовы к использованию и не требуют разведения.
7.4. Внесите по 100 мкп анализируемых образцов.
Примечание: Убедитесь, ч то  образцы были действительно добавлены в лунки.
7.5. Инкубируйте планшет в течение 60 минут при 37”С.
Примечание: Стрипы следует заклеивать специальной пленкой, входяи^ей в состав набора,
1  только в то м  случае, если анализ проводится вручную. При автоматической постановке анализа
клейкая пленка не требуется.
7.6. Удалите содержимое лунок и с помощью автоматического промывочного устройства, промойте 
микропланшет 4 -5  раз подготовленным к работе Промывочным раствором. При каждой промывке 
добавляйте по 350 мкл Промывочного раствора в каждую лунку.
[  7.7. Внесите во все лунки, кроме лунки А1, по 100 мкл Конъюгата. Убедитесь, что окрашенный
I  раствор внесен во все необходимые лунки. Заклейте планшет клейкой пленкой.
Примечание: Во время внесения Конъюгата избегайте прикасаться наконечником пипетки к  
внутренней стороне лунок во избежание контаминации.
7.8. Инкубируйте микропланшет в течение 60 минут при +37±2°С.
7.9. Удалите содержимое лунок и промойте лунки, как описано в п. 7,6.
7.10. Внесите по 100 мкл Раствора ТМБ в каждую лунку, включая А1. Инкубируйте планшет при 
комнатной температуре (+18...25“С) в течение 20 минут.
Примечание: Во избежание высокого фонового сигнала, не допускайте попадания света на  
планшет.
7.11. Остановите ферментативную реакцию добавлением 100 мкл Стоп-реагента в каждую лунку. 
Стоп-реагент следует вносить в лунки в той же последовательности, как и Раствор ТМБ. После внесения 
Стоп-реагента окраска Отрицательного контроля и отрицательных образцов изменится с голубой на 
желтую.
7.12. Измерьте оптическую плотность раствора в лунках на спею-рофотометре при длине волны 450 
нм. Желательно также провести параллельное измерение при длине волны сравнения 620-630 нм. Для 
обнуления прибора (Blank) используйте лунку А1.
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 9.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. Референсный 
фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо вычитать величину 
оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех остальных лунок. В случае 
если значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, считывание результатов проводят 
при длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не позже, чем через 15 минут после остановки 
реакции.
Примечание: При использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или  
SEAC для планшетного формата (microplates) считывающий спектроф отом етр должен измерять  
значения автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1. Анализ результатов
Определить среднюю оптическую плотность (ОП) Отрицательного контроля (ОК). Рассчитать 
значение Cut-off по формуле (1):
Cut-off = (ОПсрОК + ОП ПК) / 3
Примечание: Если расчет результатов проводится операционной системой автоматического  
анализатора, следует убедиться, ч то  задана правильная формула для вычисления значения cut-off и  
последующего расчета результатов.
Присутствие или отсутствие антител против ВГА определяется путем деления значения Cut-off на 
ОП образца или наоборот.
Образцы, для которых при делении на Cut-off, получено значение:
- более 0,9 - признают нереактивными (не содержащими антитела против ВГЕ);
- менее 1,1- признают реактивными (содержащими антитела против ВГЕ);
- 0,9 -1 ,1 - признают сомнительными.
Образцы, для которых при делении Cut-off на ОПобразца получено значение:
- менее 0,9 - признают нереактивными (не содержащими антитела против ВГЕ);
-более 1,1- признают реактивными (содержащими антитела против ВГЕ);
- 0,9 -  1,1- признают сомнительными.
Отрицательный результат означает, что пациент не был инфицирован вирусом гепатита А.
У всех пациентов с сомнительным результатом следует повторить анализ через 1-2 недели.
Положительный результат анализа указывает на наличие инфекции вирусом гепатита А. Пациент 
должен получить соответствующую медицинскую помощь.
7/10


--- стр. 196 ---
Примечания:
• Во избежание ошибок, интерпретацию результатов следует проводить под наблюдением  
руководителя лаборатории.
• При сообщении результатов из лаборатории в другие подразделения следует
предпринимать меры для исключения ошибок при передаче данных.
• Устанавливать диагноз «вирусный ге п а ти т»  и доводить его до сведения пациента должен
персонал, имеющий высшее медицинское образование и соответствую щ ую  специальную
квалификацию.
Пример расчета результатов:
Запрещается использовать приведенные ниже значения в м е сто  реальных экспериментальных  
ннь/х.
0/7 реппикатов Отрицательного контроля ( ед. опт. плот.): 1,900 -  2, О О О  -2 ,1 0 0
Среднее значение: 2,000
Критерий достоверности(> 0,750) Выполняется
ОП Положительного контроля( ед. опт. плот.): 0,100
Критерий достоверности (< 0,600) Выполняется
Cut-Off = (2,000+0,100)/3 = 0,700
ОП репликатов Калибратора( ед.опт.плот.): 0,400 -  0,360
Среднее значение: 0,380
Отношение Cut-off/ОП >1,0 Выполняется
Отношение ОП/Cut-off <1,0 Выполняется
ОП Образца 1( ед.опт.плот.): 0,050
ОП Образца 2( ед.опт.плот.): 1,900
Для Образца 1  Cut-off/ОП > 1,1; ОП/Cut-off <1,1 Образец считается положительным  
Для Образца 2 Cut-off/ОП < 0,9; ОП/Cut-off >0,9 Образец считается отрицательным
9.2. Критерии достоверности
Пре>кде чем начать обсчет результатов, убедитесь, что ОП контрольных точек соответствуют следующим
Описание Условие
Blank < 0 , 1 0 0
Отрицательный контроль 
ОП Калибратора ЮмМЕ/мл (ВОЗ) 
Положительный контроль
> 0,750, КВ < 30%
Cut-off /ОП >1,0 On/Cut-off < 1,0 
<0,600
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ.
При несоответствии критериям следует немедленно известить руководство лаборатории. 
Некоторые возможные причины несоответствия приведены ниже. Перед повторным проведением анализа 
следует убедиться, что эти причины устранены.
8/10


--- стр. 197 ---
Описание дефекта Возможная причина
ОП в лунке для  
обнуления >0 , 1 0 0
Раствор ТМБ был загрязнен в процессе анализа.
ОП Отрицательного  
контроля <0,750;
КВ >30%
1. Не были предварительно подобраны оптимальные параметры промывки 
и/или настройки промывочного устройства;
2. Использован неподходящий промывочный буфер либо магистрали 
промывочного устройства не были промыты соответствующим буфером 
перед началом работы;
3. Ошибка оператора в процессе внесения контролей (положительный 
контроль вместо отрицательного);
4. Контаминация флакона с Отрицательным контролем, либо лунок, в 
которые он был внесен, следами положительных образцов или Конъюгата;
5. Загрязнение пипеток следами положительных образцов или Конъюгата;
6 .  Закупоренные или засоренные иглы автоматического промывочного 
устройства.
Калибровочная проба:  
отношение  
Cut-off /ОП <1,0 
On/Cut-off >1,0
1. Нарушена последовательность выполнения анализа;
2. Ошибка оператора при нанесении Калибровочной пробы (например, 
вместо нее внесен Отрицательный контроль);
3. Параметры промывки или настройки промывочного устройства 
отличаются от предварительно выбранных оптимальных значений;
4. Контаминация Калибровочной пробы
ОП положительного  
контроля >0,600
1. Нарушена последовательность выполнения анализа;
2. Ошибка оператора при нанесении Положительного контроля;
3. Параметры промывки или настройки промывочного устройства 
отличаются от предварительно выбранных оптимальных значений;
4. Контаминация Положительного контроля.
9.3. Интерпретация результатов
Нереактивные образцы признают отрицательными по содержанию антител против ВГА.
Реактивные образцы признают положительными по содержанию антител против ВГА.
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И  ЭКСПЛУАТАЦИИ
Набор должен храниться при температуре +2...8°С.
Срок годности реагентов указан на этике тка х флаконов.
Вскрытые реагенты  стабильны при температуре +2...8°С в течение 3 месяцев.
11. ОГРАНИЧЕНИЯ В ПРИМЕНЕНИИ АНАЛИЗА
Бактериальная контаминация и термоинактивация могут сказаться на оптической плотности 
образцов, что приведет к неправильному определению уровня аналита.
Тест-система предназначена только для исследования индивидуальных образцов, не следует 
использовать в качестве анализируемого образца пулы.
Постановка диагноза не должна основываться на единичном лабораторном исследовании, 
следует принимать во внимание анамнез и результаты исследования другими методами.
СХЕМА АНАЛИЗА
— -— —______ Лунки
Реагенты ' ' ---------------
Blank ICONTROLl- |CAL CONTROL 1  + Образцы
DILSPE 50 мкл 50 мкл 50 мкл 50 мкл
CONTROL 1- ----- 1 0 0 мкл ----- ----
CALl ----- ----- 1 0 0 мкл -----
CONTROL 1  + ----- 1 0 0 мкл
Образцы ----- ----- ----- 1 0 0 мкл
Инкубация: 37±2 °С, 60 мин. 
Промывка: 4-5 х 350 мкл.
Конъюгат CONJI 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл
Инкубация: 37±2 °С, 60 мин. 
Промывка: 4-5 х 350 мкл
Раствор Т М Б Т Щ 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл
Инкубация; комнатная температура ( +18...25°С), 20  мин.
9/10


--- стр. 198 ---
С топ-реагент 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Считывание: 450-405 нм (референсная длина волны: 620 нм).
Примерная схема нанесения образцов на м икропланш ет:
1 2 3 4 ' 5 - V'ё'-f7 l'8 9 1 01 1 1 2
" Л 'B L K 0Б 2
в K ( - )О Б З
с K ( - ) 0Б 4
D K ( - )0Б5
E К П 0Б 6
F К П0Б 7
G K ( + )0Б 8
H 0Б 1 0Б 9
Условные обозначения:
BLK = лунка для обнуления (Blank) 
К(-) = отрицательный контроль 
КП = калибровочная проба 
К(+) = положительный контроль 
ОБ - образцы
^неральный директор 
ЮО «Компания Алкор Бис»
*.*енно,у 'S4.
■VKOBOflHTenb лаборатории разработки ИФА-систем 
)0 0  «Компания Алкор Био»
Ji^Bbipea М.В.
С усороваА.С .
RADIM S.p.A. - Via del Mare, 125 - 00040 Pomezia (Roma) Italia 
Tel.: +39 06 91.249.1 - Fax: +39 06 91.249.443 
National Order Entrv: +39 06 91.249.702 
Export Department:  +39 06 91.249.701 
Customer Care: +39 06 91.249.700 
info(a)radim.it - www.radim.it


--- стр. 199 ---
П р о ш и т о ,  п р о н у м е р о в а н о ,  с к р е п л е н о 
п е ч а т ь ю  Ю Ч ^tcCtTlb ______)  л и с т ^
/  ‘'Оли- 
Г е н ф а л к1Й т < '^ ^ кт о р %  
О О О  « К о м ч ш г а я  Х л к о р  Б и о » 
М . В . Ш в ы р е в
•\ f ' '  ' *  •Ud.


--- стр. 200 ---
«УТВЕРЖДАЮ  
Г енеральны й^ир^^О р
ООО «КомпгиН|Я!5№ к6р^5>1р>>
Ш вырев м ' в У  
« / У  » 2011 г
■  \  у . \  ■ '•  Of п ра Г V" -
о.;- ь,(
НАБОР РЕАГЕНТОВ  
ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ М К  
ВИРУСУ ГЕПАТИТА А В СЫВОРОТКЕ И  ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
HAV 1дМ
Только для in vitro диагностики
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Центр по контролю за заболеваниями (CDC), Атланта, США, описывает ситуацию, сложившуюся с 
Гепатитом А, следующим образом:
Гепатит А продолжает оставаться наиболее часто встречающимся заболеванием из числа тех, для 
профилактики которых используется вакцина, И это несмотря на то, что вакцинопрофилактика гепатита 
А проводится с 1995 года. Вакцинация восприимчивого населения способна в значительной степени 
уменьшить количество случаев заболевания и, возможно, остановить распространение Гепатита А,
Вирус Гепатита А (ВГА) -  РНК - содержащий вирус размером 27 нм, относящийся к пикорнавирусам. 
Инкубационный период в среднем 28 дней (может варьировать от 15 до 50 дней), заболевание протекает 
как бесссимптомно, так и с ярко выраженной клиникой. Для ВГА инфекции характерно острое начало, 
сопровождающееся следующими симптомами: лихорадка, слабость, отсутствие аппетита, тошнота, боли 
в животе, темная моча и желтуха. Выраженность симптомов зависит от возраста больного, У детей 
младше 6  лет в большинстве (70%) случаев ВГА инфекция протекает бессимптомно и обычно не 
сопровождается желтухой. У более старших детей и взрослых инфекция обычно протекает с ярко 
выраженной клиникой и в более 70% случаев сопровождается желтухой. Выздоровление обычно 
наступает в течение 2 месяцев, однако у 10-15% больных период реконвалесценции растягивается до 6  
месяцев.
Вирус Гепатита А реплицируется в печени, выделяется с желчью, попадает в кал и таким образом 
выделяется из организма инфицированного человека. Наиболее заразен больной человек в течение 
двух недель до возникновения желтухи или повышения уровня печеночных ферментов, когда 
концентрация вируса в стуле максимальная. После появления желтухи концентрация вируса в стуле 
снижается. Дети и подростки могут выделять вирус в течение более долгого времени (до нескольких 
месяцев после возникновения симптомов заболевания), чем взрослые. Хроническое выделение вируса 
гепатита А не встречается, однако такое возможно у пациентов с рецидивом инфекции, Виремия 
наблюдается вскоре после заражения и сохраняется вплоть до повышения уровня печеночных 
ферментов.
Дифференциальная диагностика с другими видами вирусных гепатитов на основе клинической 
картины или эпидемиологического анамнеза невозможна. Поэтому определение иммуноглобулинов М к 
капсидному белку ВГА необходимо для подтверждения диагноза «острая ВГА-инфекция». У 
большинства пациентов анти-ВГА 1дМ  можно определить за 5-10 дней до появления симптомов, и они 
могут сохраняться в крови в течение 6  месяцев. Анти-ВГА IgG появляются в крови после проявления 
клинической картины и остаются в течение всей жизни человека, формируя пожизненный иммунитет 
против ВГА. Коммерческие тест-системы в основном направлены на выявление 1дМ  и суммарных 
антител (1дМ и IgG) против вируса гепатита А в сыворотке крови человека.
РНК ВГА может быть определена с помощью ПЦР в крови и кале у пациентов во время острой 
фазы. Определение последовательности РНК позволяет отнести вирус к тому или иному изоляту.
ВГА передается фекально-оральным путем, через зараженную пищу и воду. В редких случаях, 
возможно заражение трансмиссивным путем при переливании крови или ее продуктов, полученных от 
донора с ВГА виремией. У зараженных лабораторных животных (приматов) ВГА определялся в слюне во 
время инкубационного периода, однако возможность передачи инфекции через слюну показана не была, 
В зависимости от условий, ВГА может быть стабилен в окружающей среде в течение нескольких 
месяцев. Прогрев пищи при температуре 85°С в течение 1  минуты и обработка поверхности 1:100 
разведением гипохлорита натрия в водопроводной воде необходимы для инактивации ВГА.
Так как для большинства детей характерно бессимптомное течение инфекции, они играют важную 
роль в распространении инфекции. В одном из исследований, у 52 % взрослых без
идентифицированного источника заражения имелись дети младше 6  лет, поэтому наличие в доме детей 
младшего возраста было связано с распространением ВГА инфекции. При серологическом тестировании 
детей, бывших в контакте с взрослыми, инфицированными ВГА, было показано, что 25-40% из них имели 
IgM к вирусу гепатита А.
1/10


--- стр. 201 ---
Weeks after exposure
Тест-система HAV IgM предназначена для качественного определения иммуноглобулинов класса М 
против ВГА в сыворотке и плазме крови человека.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
В  наборе реагентов реализован двустадийный «сар1иге»-вариант твердофазного 
иммуноферментного анализа. Если в образце присутствуют иммуноглобулины кпасса М, то во время 
первой инкубации они связываются с антителами, специфичными к IgM человека, которые 
иммобилизованы на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок). Несвязавшиеся компоненты 
удаляются промывкой. Если среди связавшихся IgM присутствуют антитела к соответствующему 
возбудителю, то во время следующей стадии анализа они связываются с комплексом специфический 
антиген-антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена. Несвязавшиеся компоненты удаляются 
промывкой. Во время инкубации с ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо 
пропорциональна количеству специфических IgM в анализируемых пробах. Наличие IgM оценивают 
относительно значения cut-off.
2.2. СОСТАВ НАБОРА
РЕАГЕНТЫ - KIT REAGENTS
I
Реагент Количество Состояние
IMICROPLATEI 1  X 96 лунок Готов к использованию
Микропланшет Ready for use
ICONTROL -
1 X  2 , 0 мл Готов к использованию
Отрицательный контроль Ready for use
CONTROL 1  +
1 х 2 , 0 мл Готов к использованию
Положительный контроль Ready for use
|CAL
Калибровочная проба
2  флакона Лиофилизованнный препарат
VVASHBUF 20X1 1  X 50 мл Концентрированный раствор
20х Промывочный буфер Сопс,
CONJ 20Х 1  X 0,8 мл Концентрированный раствор
Конъюгат Сопс,
Aq НА\^ 1  X 16 мл Готов к использованию
Антиген ВГА Ready for use
DILSPEl 
Раствор для разведения 
образцов
2 X 50 мл Готов к использованию 
Ready for use
Раствор ТМБ 1  X  14 мл Готов к использованию
ТМВ Ready for use
Стоп-реагент 1  X  14 мл Готов к использованию
STOP Ready for use
Количество реагентов рассчитано на 96 лунок.
2/10


--- стр. 202 ---
i
I
1
2.2.1. Реагенты
• Иммуносорбент -  планшет (MICROPLATE) I Microplate: 1  планшет из 12 разборных стрипов 
п о  8 лунок (всего 96 лунок). Лунки стрипов планшета покрыты антителами к 1дМ  человека, 
Нрэтользованные стрипы хранить при температуре +2...8°С в плотно закрытом пластиковом пакете 
(филагается).
•  Отрицательный контроль (CONTROL -) / Negative Control: 1  флакон Бесцветный раствор на 
о с н о в е  10 мМ трисового буфера, pH 6,0±0,1, содержит белки сыворотки козы и 0,1% Твин 20. Готов к 
(йпользованию. Консерванты: 0,09% азид натрия и 0,1% Катон GC.
• Положительный контроль (CONTROL +) / Positive Control: 1  флакон. Раствор зеленого цвета 
н а  основе 10 мМ трисового буфера, pH 6,0±0,1, содержит белки сыворотки козы, 0,1% Твин 20 и 1дМ  к 
в и р у с у  гепатита А в концентрации выше чем 100 мМЕ/мл (ВОЗ). Готов к использованию. Консерванты:
|0,09%  азид натрия и 0,1% Катон GC.
I •  Калибратор (CAL) / Calibrator: 2 флакона. На основе 10 мМ трисового буфера, pH 6,0±0,1, 
Д ержит 2% БСА и 1дМ  к вирусу гепатита А. Консерванты: 0,09% азид натрия и 0,1% Катон GC. 
Глиофилизован. Перед использованием растворите содержимое флакона в объеме дистиллированной 
в о д ы , который указан на этикетке. Восстановленный реагент хранить при -20°С. Повторное 
замораживание не допускается.
Внимание: Объем, необходимый для растворения содержимого флакона, может быть различным 
д л я  разных партий реагента. Обратите внимание, чтобы препарат был растворен именно в том объеме 
в о д ы , который указан на этикетке флакона.
•  Промывочный раствор 20х (WASHBUF 20Х) / Washing buffer concentrate: 1  флакон 1х 
Промывочный раствор представляет собой 10 мМ фосфатный буферный раствор, pH 7,0±0,2, содержащий
,  0,05%  Твин 20 и 0,05% Катон GC. Перед использованием развести необходимое количество концентрата 
дистиллированной водой в соотношении 1:20. В случае образования нерастворимых кристаллов поместите 
ра ство р  в термостат (37°С) на несколько минут. Приготовленный промывочный раствор хранить не более 7 суток при 
+2...8°С .
•  Конъюгат 20х (CONJ) I Enzyme Conjugate 20х: 1  флакон. Раствор на основе 10 мМ трисового 
буф ера, pH 6,8±0,1, содержит антитела к вирусу гепатита А, конъюгированные с пероксидазой хрена 
(HRPO), 2% БСА, 0,02% гентамицина сульфата и 0,1% Катон GC. За 5-10 минут перед использованием  
развести необходимое количество концентрата конъюгата антигеном ВГА в соотношении 1:20.
• Антиген ВГА (Ад HAV) / HAV Antigen: 1  флакон. Раствор красного цвета на основе трисового 
буфера, pH 6,8±0,1, содержащий 2% БСА и инактивированный вирус гепатита А. Консерванты: 0,02% 
гентамицина сульфата и 0,1% Катон GC. Готов к использованию.
•  Раствор для разведения образцов (DILSPE) 
I Specimen Diluent: 2 флакона. Раствор голубого
цвета на основе трисового буфера, pH 6,0±0,1, содержащий белки сыворотки козы и 0,1% Твин 20.
Консерванты: 0,09% азид натрия и 0,1% Катон GC. Готов к использованию.
• Раствор ТМБ (ТМВ): 1  флакон. Раствор тетраметилбензидина в цитратно-фосфатном буфере, 
содержащем DMSO и Н2О2.  Готов к использованию.
• Стоп-реагент (STOP) / Blocking Reagent: 1  флакон. 1Н НС). Готов к использованию.
•  Бумага для заклеивания планшета (СРА) / Adhesive plate sealers.
• Пластиковый пакет.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И  ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1 Диагностическая специф ичность
Диагностическая специфичность определялась на панели образцов, полученных от доноров и 
пациентов, не имеющих иммунитета к ВГА, которые были определены как отрицательные референтной 
тест-системой.
Не было обнаружено ложноположительных реакций при тестировании анализируемых образцов 
разных типов.
Не было также обнаружено влияния на специфичность заморозки анализируемых образцов.
Были протестированы образцы пациентов с другими вирусными заболеваниями (ВГС, ВГО. ВГВ, 
В И Ч ) и с гепатитами невирусной природы. Ложноположительных реакций обнаружено не было.
В общей сложности в независимых референсных лабораториях было протестировано более 500 
образцов. Диагностическая специфичность составила > 98%.
3.2 Диагностическая чувствительность
Диагностическая чувствительность исследовалась на панели образцов, которые были определены 
ка к положительные одобренной FDA тест-системой. Образцы были получены от пациентов с острой ВГА- 
инфекцией, подтвержденной клинической картиной и данными лабораторных исследований.
В общей сложности было протестировано более 100 образцов. Диагностическая чувствительность 
составила 1 0 0%.
Дополнительно была протестирована сероконверсионная панель (BBI, США). Результаты, 
полученные при тестировании, представлены в нижеследующей таблице.
3/10


--- стр. 203 ---
Г  Образец ОП, 450 нм S/CO DiaSohn
S/CO Диагноз
Отрицательный контроль 0,048 0 , 2
■Положительный контроль 1,736 5,8
Г  РНТ 902
Г ^ 0,037 0 ,1 0,3 отрицательный
2 0,042 0 ,1 0,3 отрицательный
3 1,956 6,6 6,8 положительный
4 1,988 6,7 6,7 положительный
5 0,669 2,2 1,5 положительный
3.3 Прецизионность
Два образца (один отрицательный и один слабоположительный) анализировались в трех 
[независимых постановках. В каждой из постановок образцы были нанесены в 16 репликатах. Результаты, 
[полученные при изучении прецизионности, представлены в нижеследующих таблицах.
Постановка 1
Образец Отрицательный Слабоположительный
ОП, 450 нм, ед.опт.пл 0,058 0,719
Ст. откп. 0,008 0,052
КВ, % 14,3 7,2
Постановка 2
Образец Отрицательный Слабоположительный
ОП, 450 нм, ед.опт.пл 0,048 0,709
Ст. откл. 0,007 0,063
КВ, % 13,9 8,9
Постановка 3
Образец Отрицательный Слабоположительный
ОП, 450 нм, ед.опт.пл 0,050 0,713
Ст. откл. 0,007 0,055
КВ, % 13,4 7,7
Изменения диагнозов образцов обнаружено не было.
3.4 Предел детекции
Так как международные стандарты для анти-ВГА 1дМ  отсутствуют, этот параметр был определен с 
помощью контрольных образцов, полученные из Boston Biomedica Inc., США (Accurun №51 и Accurun 
№121). Оба контрольных образца были разведены Раствором для разведения образцов в 100 раз, для 
Accurun 121 были дополнительно приготовлены другие разведения. Результаты определения предела 
детекции представлены в нижеследующей таблице.
Контрольный образец Разведение S/CO
Accurun №121
1 : 1 0 0 5,4
1 : 2 0 0 4,1
1:400 2,8
1:800 1,9
1:1600 1 , 0
Accurun №51 1 : 1 0 0 4,2
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Для получения достоверны х результатов необходимо соблю дать следующие правила:
Не смешивайте специфические реагенты ( см.2.2.1.) разных серий набора. Не смешивайте их с 
реагентами других производителей.
Разрешается смешивать Промывочный раствор, Раствор ТМБ и Стоп-реагент разных серий 
набора. Не смешивайте их с реагентами других производителей.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их загрязнение.
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
4/10


--- стр. 204 ---
-  Используйте только дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в 
шой посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для каждого образца или
р е а г е н т а ,
И -  Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и 
шпературы инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
результатам анализа.
-  Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
ветствующей этикетке, Любое отклонение может привести к неправильным результатам анализа.
-  В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
1зтические пипетки и обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует убедиться,
ч т о  все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, спектрофотометр, термостат) 
1Х0Д И Т  регулярную проверку и поддерживается в исправном состоянии.
Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок или 
автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок может 
привести к неверной интерпретации результатов анализа.
Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению оптической 
; плотности образцов и последующим неправильным результатам анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». Если 
температура инкубации откпоняется от 37±2°С, это может привести к снижению чувствительности анализа 
и/или биологической денатурации образцов и реагентов. Следует периодически проверять показания 
датчика температуры.
Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или образцов. 
Несоблюдение температурного режима хранения может привести к биологической денатурации 
компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная идентификация 
может привести к ложным результатам и постановке ошибочного клинического диагноза.
Чтобы исключить заражение персонала и загрязнение окружающей среды, следует  
соблюдать следующие правила:
При работе с потенциально инфекционным материалом и во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
Не разрешается пипетировать ртом.
Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и курение в помещениях, 
предназначенных для работы с наборами.
Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и Стоп-реагентом. Избегать 
попадания в глаза, на кожу и слизистые. В случае контакта тщательно промыть пораженный участок проточной 
водой.
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на присутствие 
HBsAg, антител к ВИЧ и к вирусу гепатита С. Несмотря на полученные отрицательные результаты, 
следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не может гарантировать полное 
отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и другие реагенты, содержащие сыворотку 
крови человека, следует считать потенциально инфекционными.
Следует избегать разбрызгивания реагентов и образования аэрозолей. Места, на которые 
попал пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. Исполь­
зованный при этом протирочный материал следует считать потенциально инфицированным и подвергнуть 
соответствующей обработке перед утилизацией.
- Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных азидов 
металлов в чугунных и медных водопроводных трубах, после слива использованных реагентов следует 
промыть сток большим объемом проточной воды.
5. МАТЕРИАЛЫ И  ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В НАБОР
5.1. Материалы и оборудование, необходимые при ручной постановке анализа
- Микропипетки, в том числе многоканальные, вьюокой точности (10-200 мкп, менее 3% ошибки) со сменными 
наконечниками.
- Градуированные цилиндры для разведения реагентов.
- Дистиллированная вода.
- Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
- Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления содержимого из лунок.
- Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность 
раствора в лунках в диапазоне 0-3 ед. опт. плотн. при длинах волн 620, 450 и 405нм.
5/10


--- стр. 205 ---
5.2. Автоматическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа на
i автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC.
В  случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю необходимо 
удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для иммуно- 
ферментного анализа производства RADIM.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
При заборе венозной крови следует соблюдать правила асептики. Сыворотку или плазму крови 
получают по общепринятой методике подготовки образцов для лабораторного анализа. Не было 
обнаружено существенного влияния цитрата, солей ЭДТА и гепарина на результаты анализа.
Образцы должны быть четко маркированы во избежание ошибочной интерпретации 
результатов. Настоятельно рекомендуется применять штрих-кодирование и электронный датчик для 
считывания штрих-кода, в особенности, если набор применяется для скрининга донорской крови.
Не допускается применять образцы с видимыми признаками гемолиза (красный цвет) и липемии 
(«молочный» оттенок), так как при этом может быть получен ложный результат. По этой же причине не 
допускается применять образцы, содержащие фибрин, твердые частицы или видимые признаки 
микробной контаминации.
Сыворотку и плазму допускается хранить при температуре +2°..8°С в течение 5 суток после 
сбора. При необходимости более длительного хранения образцы допускается хранить при температуре -  
гО^С в течение нескольких месяцев. Не допускается повторное замораживание/размораживание 
образцов, так как образовавшиеся при этом включения могут влиять на результат анализа.
При обнаружении твердых частиц, образцы перед проведением анализа центрифугируют в 
течение 2 0 минут при 2 0 0 0 об/мин, либо очищают фильтрованием (диаметр пор фильтра 0 ,2 -0 , 8 мкм).
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА*
-  
Доведите реагенты до комнатной температуры (+18.. .25"С).
Тщательно перемешайте образцы перед проведением анализа.
7.1. Разведите анализируемые образцы 1:101 (например, 1000 мкл Раствора для разведения 
образцов + 1 0 мкл образца).
7.2. Промаркируйте лунки для контролей и исследуемых образцов. Оставьте 1  лунку для обнуления 
(Blank), 3 лунки для отрицательного контроля, 2 лунки для калибратора и одну лунку для положительного 
контроля.
7.3. Внесите по 100 мкл контролей в соответствующие лунки.
Внимание: Контроли готовы к использованию и не требуют разведения.
7.4. Внесите по 100 мкл разведенных анализируемых образцов.
Примечание: Убедитесь, ч то  образцы и контроли были действительно добавлены в лунки.
7.5. Инкубируйте планшет в течение 60 минут при 37±2 °С.
Примечание: Стрипы следует заклеивать специальной пленкой, входящей в состав набора,  
только в то м  случае, если анализ проводится вручную. При автоматической постановке анализа  
клейкая пленка не требуется.
7.6. За 5-10 минут до окончания первой инкубации приготовьте иммунокомплекс (Антиген ВГЛ- 
Антитела, конъюгированные с пероксидазой). Для этого разведите необходимое количество концентрата 
конъюгата антигеном ВГА в соотношении 1:20.
7.7. Удалите содержимое лунок и с помощью автоматического промывочного устройства промойте 
микропланшет 4 -5  раз подготовленным к работе Промывочным раствором. При каждой промывке 
добавляйте по 350 мкл Промывочного раствора в каждую лунку.
7.8. Внесите во все лунки, кроме лунки А1, по 100 мкл иммунокомплекса. Убедитесь, что 
окрашенный раствор внесен во все необходимые лунки. Заклейте планшет клейкой пленкой.
Примечание: Во время внесения Конъюгата избегайте прикасаться наконечником пипетки к
внутренней стороне лунок во избежание контаминации.
7.9. Инкубируйте микропланшет в течение 60 минут при 37±2 °С.
7.10. Удалите содержимое лунок и промойте лунки, как описано в п. 7.7.
7.11. Внесите по 100 мкл Раствора ТМБ в каждую лунку, включая А1. Инкубируйте планшет при
комнатной температуре в течение 20 минут.
Примечание: Во избежание высокого фонового сигнала, не допускайте попадания света на  
планшет.
7.12. Остановите ферментативную реакцию добавлением 100 мкл Стоп-реагента в каждую лунку. 
Стоп-реагент следует вносить в лунки в той же последовательности, как и Раствор ТМБ. После внесения 
Стоп-реагента окраска Положительного контроля и положительных образцов изменится с голубой на 
желтую.
СХЕМА АНАЛИЗА п р и в е д е н а  на с т р а н и ц е  9.
6/10


--- стр. 206 ---
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. Референсный 
ильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо вычитать величину 
ической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех остальных лунок. В случае 
л и  значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, считывание результатов проводят 
(длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не позже, чем через 15 минут после остановки 
еакции.
Примечание: При использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или  
для планшетного формата (microplates) считывающий спектроф отом етр должен измерять  
шения автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1. Анализ результатов
Определить среднюю оптическую плотность (ОП) Отрицательного контроля (ОК). Рассчитать
I значение Cut-off по формуле (1):
Cut-off = ОПсрОК + 0,250
Примечание: Если расчет результатов проводится операционной системой автоматического  
анализатора, следует убедиться, ч то  задана правильная формула для вычисления значения cut-off и  
последующего расчета результатов.
Присутствие или отсутствие 1дМ  против ВГА определяется путем деления ОП образца на значение
Cut-off.
Образцы, для которых при делении на Cut-off, получено значение менее 0,8 признают нереактивными (не 
содержащими 1дМ  против ВГА).
Образцы, для которых при делении на Cut-off, получено значение более 1,2, признают реактивными 
(содержащими 1дМ  против ВГА). Пациент должен получить соответствующую медицинскую помощь.
Область 0,8 -  1,2 является областью сомнительных значений. Если ОП образца попадает в эти 
пределы, результат считается сомнительным. Следует повторить анализ через 1-2 недели, получив для 
этого свежий образец сыворотки или плазмы.
Примечания:
• Во избежание ошибок, интерпретацию результатов следует проводить под наблюдением  
руководителя лаборатории.
• Любой положительный резул ьтат анализа должен бы ть подтвержден альтернативным  
методом, прежде чем будет установлен диагноз «вирусный гепа тит» .
• При сообщении результатов из лаборатории в другие подразделения следует  
предпринимать меры для исключения ошибок при передаче данных.
• Устанавливать диагноз «вирусный ге п а ти т»  и доводить его до сведения пациента должен  
персонал, имеющий высшее медицинское образование и соответствую щ ую  специальную  
квалификацию.
Пример расчета результатов:
ф  Запрещается использовать приведенные ниже значения в м е сто  реальных экспериментальных  
рнных.
ОПрепликатов О трицательного контроля ( ед.опт.плот.): 0,050 -  0,0 6 0- 0,070
Среднее значение: 0,060
Критерий достоверности(< 0,150) Выполняется  
ОП Положительного контроля ( ед. опт. плот.): 2,189
Критерий достоверности (> 0,500) Выполняется  
Cut-Off = 0,060+0,250 = 0,310
ОП репликатов Калибратора( ед.опт.плот.): 0,550 -  0,530
Среднее значение: 0,540
Отношение ОП/Cut-off = 1.7
Критерий достоверности(отношение >1,0) Выполняется  
ОП Образца 1  (ед.опт.плот.): 0,070
ОП Образца 2( ед.опт.плот.): 1,690
Для Образца 1  ОП/Cut-off <0,8 Образец считается отрицательным  
Для Образца 2 ОП/Cut-off > 1,2 Образец считается положительным
9.2. Критерии достоверности
Прежде чем начать обсчет результатов, убедитесь, что ОП контрольных точек соответствуют следующим 
критериям.
7/10


--- стр. 207 ---
1
Описание Условие
Blank < 0,050
Отрицательный контроль <0,150; КВ <30%
О П  Калибратора/Cut-off > 1 ,0
Положительный контроль >0,500
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ.
При несоответствии критериям следует немедленно известить руководство лаборатории. 
Некоторые возможные причины несоответствия приведены ниже. Перед повторным проведением анализа 
следует убедиться, что эти причины устранены.
,!?Описание д оф еугГ
О П  в лунке для 
обнуления >0,050
О П  Отрицательного 
контроля > 0,150,
К В  > 30%
Калибровочная проба:
отношение
ОП/Cut-off <1,0
О П  положительного 
контроля < 0,500
В озм Щ йая причина
Раствор ТМБ был загрязнен в процессе анализа.
1. Не были предварительно подобраны оптимальные параметры промывки 
и/или настройки промывочного устройства;
2. Использован неподходящий промывочный буфер либо магистрали 
промывочного устройства не были промыты соответствующим буфером 
перед началом работы;
3. Ошибка оператора в процессе внесения контролей (положительный 
контроль вместо отрицательного);
4. Контаминация флакона с Отрицательным контролем, либо лунок, в 
которые он был внесен, следами положительных образцов или Конъюгата;
5. Загрязнение пипеток следами положительных образцов или Конъюгата;
6 .  Закупоренные или засоренные иглы автоматического промывочного
устройства.
_______________________________________________________________
1. Нарушена последовательность выполнения анализа;
2. Ошибка оператора при нанесении Калибровочной пробы (например, 
вместо нее внесен Отрицательный контроль);
3. Параметры промывки или настройки промывочного устройства 
отличаются от предварительно выбранных оптимальных значений;
4. Контаминация Калибровочной пробы_______________________________
1. Нарушена последовательность выполнения анализа;
2. Ошибка оператора при нанесении Положительного контроля;
3. Параметры промывки или настройки промывочного устройства 
отличаются от предварительно выбранных оптимальных значений;
4. Контаминация Положительного контроля.________________________
В Г А .
9.3. Интерпретация результатов
Нереактивные образцы признают отрицательными по содержанию 1дМ  против ВГА.
Реактивные и сомнительные образцы признают положительными по содержанию 1дМ  против
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
Набор должен храниться при температуре +2...8°С.
Срок годности реагентов указан на эти ке тка х флаконов.
Вскрытые реагенты  стабильны при температуре +2...8°С в течение 3 месяцев.
11. ОГРАНИЧЕНИЯ В ПРИМЕНЕНИИ АНАЛИЗА
Получение ложноположительных результатов возможно в менее 2% случаев и связано с 
высокой концентрацией ревматоидного фактора.
Замороженные образцы, содержащие фибрин, после разморозки могут давать ложные
результаты.
Бактериальная контаминация и термоинактивация могут сказаться на оптической плотности 
образцов, что приведет к неправильному определению уровня аналита.
Тест-система предназначена только для исследования индивидуальных образцов, не следует 
использовать в качестве анализируемого образца пулы.
Постановка диагноза не должна основываться на единичном лабораторном исследовании, 
|Ьедует принимать во внимание анамнез и результаты исследования другими методами.
8/1 0


--- стр. 208 ---
СХЕМА АНАЛИЗА
^Лунки 
Реагенты
Blank Ic o n t r o lN |CAL| CONTROL + Образцы 
(разведенные 
в 1 0 1 раз)
[contro l - ^ — 1 0 0 мкл ----- -----
pAU — ----- 1 0 0 мкл
fcONTROL + ----- ----- ----- 1 0 0 мкл
[Образцы (разведенные в 101 раз) ----- — — 1 0 0 мкл
Инкубация: 37±2°С, 60 мин.
* Промывка; 4-5 х 350 мкл.
I  Иммунокомплекс 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл
Инкубация; 37±2°С, 60 мин. 
Промывка; 4-5 х 350 мкп
Раствор ТМБ ТМВ| 100 мкл 100 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл
* Инкубация; комнатная температура, 20 мин.
Стоп-реагент STOP 100 мкл 100 мкл 1 0 0 мкп 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл
Считывание; 450-405 нм (референсная длина волны; 620 нм).
Примерная схема нанесения образцов на м икропланш ет:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 11 2
' АB L K0Б 2
" ВК ( - )О Б З
С К ( - )0Б 4
D К ( - )0Б 5
Е к п0Б 6
F к п0Б 7
G К(+) 0Б8
Н 0Б1 0Б9
Условные обозначения;
BLK = лунка для обнуления (Blank) 
К(-) = отрицательный контроль 
К(+) = положительный контроль 
ОБ - образцы
9/10


--- стр. 209 ---
вральныи директор 
Р О  «Компания Алкор Био»
оводитель лаборатории разработки ИФА-систем 
«Компания Алкор Био»
"К о м п ш ^
’  "Alkor Bi: 
ч Company"
Ш вырев М.В.
П01 вР^'' Сусорова А.С.
RADIM S.p.A. - Via del Mare, 125 - 00040 Pomezia (Roma) Italia 
Tel.; +39 06 91.249.1 - Fax: +39 06 91,249.443 
National Order Entry:  +39 06 91.249.702 
Export Department:  +39 06 91.249.701 
Customer Care: +39 06 91.249.700 
info(a)radim.it - www.radim.it


--- стр. 210 ---
П р о ш и т о ,  п р о н у м е р о в а н о ,  с к р е п л е н о 
п е ч а т ь ю  lO’  ( ^ _ _ _ _)  л и с т_
О
Г е и ^ ? 1 т . 1 ц ^ й  ^И|р(ёкто1р ,, ,
О О О  « К о м п а н и й  Ш к р р Ё и о »
B j o  М . В .  Ш в ы р е в
/  /
■"•а


--- стр. 211 ---
ГенеральньждЩ з^ктор"
■■^/'Xj4n^  M . \ \ООО «Компа^»ия /^ о р Б й О » ; \ ^ '\
" '■ ' 0 " ! ? rШ вырев IVli^l
« у'^оч 1 г
'^4 io rB io  h j :
:;^етер^?^
НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ  
ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К  
ВИРУСУ ГЕПАТИТА Е В СЫВОРОТКЕ И  ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
HEV АЬ
Только для in vitro диагностики
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Вирус гепатита Е (ВГЕ) - недавно открытый вирус с фекально-оральным путем передачи. ВГЕ не 
имеет оболочки и содержит одноцепочечную РНК. По стороению он похож на калицивирусы и был 
найден в фекалиях больного. ВГЕ - это серьезная проблема во многих развивающихся странах. Первая 
вспышка гепатита Е была зарегистрирована в 1955 году в Нью Дели, Индия. Это заболевание никогда не 
переходит в хроническую форму, однако характеризуется большой частотой неблагоприятных исходов у 
беременных женщин.
Изучение генома ВГЕ позволило разработать тест-системы для определения анти-ВГЕ антител. Они 
основаны на синтетических антигенах из иммунодоминантных консервативных регионов ВГЕ.
Тест-система HEV ЛЬ предназначена для качественного определения иммуноглобулинов против ВГЕ в 
сыворотке и плазме крови человека.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1, ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
Принцип действия данного набора основан на твердофазном иммуноферментном анализе (ИФА). В  
качестве ферментной метки в наборе применяется пероксидаза хрена. В течение первой инкубации 
антитела против ВГЕ (если они есть в образце) связываются с синтетическими антигенами из 
иммунодоминантных консервативных регионов мексиканской и бирманской линий вируса, 
адсорбированными на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок планшета). С помощью промывки 
удаляется несвязавшийся материал. В течение следующей инкубации поликлональные антитела против 
IgG и 1дМ  человека, меченные пероксидазой хрена, взаимодействуют с комплексом антиген ВГЕ -  
антитело. После цикпа промывок в лунки добавляется раствор ТМБ, что приводит к развитию окраски 
под воздействием фермента. Реакция останавливается добавлением Стоп-реагента (HCI). 
Интенсивность окрашивания раствора измеряется на спектрофотометре при длине волны 450 нм или 
405 нм. Содержание специфических антител в образцах и контролях прямо пропорционально 
измеренной оптической плотности раствора в лунках.
2 .2 . СОСТАВ НАБОРА
Реагент Количество Состояние
MICROPLATE
Микропланшет 1  X  96 лунок Готов к использованию 
Ready for use
ICONTROLl- 
Отрицательный контроль 2 X  2,0 мл Готов к использованию 
Ready for use
1C0NTR0L1 + 
Положительный контроль 1  X  2,0 мл Готов к использованию 
Ready for use
|CAL
Калибровочная проба
2  флакона Лиофилизованнный препарат
IWASHBUF 1  20X1 
20х Промывочный буфер 1  X  50 мл Концентрированный раствор 
Сопс.
ICONJl
Конъюгат
1 X  16 мл Готов к использованию 
Ready for use
1  X  8,0 мл Готов к использованию
1/8


--- стр. 212 ---
т
А налитический б у ф е р
Id i l s p eT
Раствор для разведения 
_______образцов ________
Раствор ТМБ
___Ш § _ _
Стоп-реагент 
STO^
1  X  50 м л
1  X  14 мл
1  X  14 мл
R e a d y  for u s e
Готов к использованию 
Ready for use
Готов к использованию 
Ready for use __________
Готов к использованию 
Ready for use
__________
Количество реагентов рассчитано на 96 лунок.
2.2.1 ■  Реагенты
• Иммуносорбент -  планшет (MICROPLATE) / Microplate: 1  планшет из 12 разборных стрипов 
п о  8 лунок (всего 96 лунок). Лунки стрипов планшета покрыты синтетическими антигенами ВГЕ из 
регионов 0RF2 и 0RF3. Неиспользованные стрипы хранить при температуре +2.,.8°С в плотно закрытом 
пластиковом пакете (прилагается).
• Отрицательный контроль (CONTROL -) / Negative Control: 2 флакона. Раствор оливково- 
зеленого цвета на основе 10 мМ Ыа-цитратного буфера, pH 6,0±0,1, содержит 1% белков сыворотки козы и 
0,5%  Твин 20. Готов к использованию. Консерванты; 0,09% азид натрия и 0,1% Катон GC.
• Положительный контроль (CONTROL +) / Positive Control: 1  флакон. Раствор темно-зеленого 
цвета на основе 10 мМ Ма-цитратного буфера, pH 6,0±0,1, содержит 1% белков сыворотки козы, 0,5% Твин 
20 и  антитела человека к ВГЕ. Готов к использованию. Консерванты: 0,09% азид натрия и 0,1% Катон GC.
• Калибратор (CAL) / Calibrator: 2 флакона. На основе Ыа-цитратного буфера, pH 6,0±0,1, 
содержит фетальную бычью сыворотку и антитела человека к ВГЕ в концентрации 4±10% МЕ/мл 
(относительно Первого Международного стандарта для антител к ВГЕ, NIBSC, 95/584). Консерванты: 0,3 
мг/мл гентамицина сульфата и 0,1% Катон GC. Лиофилизован. Перед использованием растворите 
содержимое флакона в объеме дистиллированной воды, указанном на этикетке флакона. 
Восстановленный реагент хранить при -20°С. Повторное замораживание не допускается.
• Промывочный раствор 20х (WASHBUF 20Х) / Washing buffer concentrate: 1  флакон. 1х 
Промывочный раствор представляет собой 10 мМ фосфатный буферный раствор, pH 7,0±0,2, содержащий
0,05% Твин 20 и 0,1% Катон GC. Перед использованием развести необходимое количество концентрата 
дистиллированной водой в соотношении 1:20. В случае образования нерастворимых кристаллов поместите 
раствор в термостат (+37°С) на несколько минут. Приготовленный промывочный раствор хранить не более 7 суток 
при+2...8°С.
• Конъюгат (CONJ) / Enzyme Conjugate: 1  флакон. Раствор красного цвета на основе 10 мМ 
трисового буфера, pH 6,8±0,1, содержит козьи поликлональные антитела к IgG и 1дМ  человека, 
конъюгированные с пероксидазой хрена (HRPO), 5% БОА, 0,02% гентамицина сульфата и 0,1% Катон GC, 
Готов к использованию.
• Аналитический буфер (DILAS) / Assay Diluent: 1  флакон. Раствор на основе 10 мМ трисового 
буфера, pH 8,0±0,1, содержащий 0,1% Катон GC. Для предварительной обработки образцов и контролей 
на плате для блокирования интерференции.
• Раствор для разведения образцов (DILSPE) / Specimen Diluent: 1  флакон. Раствор оливково­
зеленого цвета на основе 10 мМ Na-цитратного буфера, pH 6,0±0,1, содержит 0,5% Твин 20. Готов к 
использованию. Консерванты: 0,09% азид натрия и 0,1% Катон GC.
Внимание: При добавлении образца раствор меняет цвет с оливково-зеленого на темный сине- 
зеленый.
• Раствор ТМБ (ТМБ): 1  флакон. Раствор тетраметилбензидина в цитратно-фосфатном буфере, 
содержащем DMSO и Н 2О2.  Готов к использованию.
• Стоп-реагент (STOP) / Blocking Reagent: 1  флакон. 1Н HCI. Готов к использованию.
• Бумага для заклеивания планшета (СРА) / Adhesive plate sealers.
• Пластиковый пакет.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И  ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1 Диагностическая специфичность
Диагностическая специфичность определялась как способность метода определять образцы, не 
содержащие специфический аналит, как отрицательные. Было протестировано более 500 доноров и 
пациентов, не имеющих иммунитета к ВГЕ. Диагностическая специфичность относительно FDA- 
одобренной тест-системы - составляет > 99,5%.
Было протестировано более 100 образцов с потенциальной интерференцией (пациенты с другими 
инфекционными заболеваниями, с гепатитами невирусной природы, пациенты после диализа, 
беременные женщины, гемолизированные образцы и образцы с липидэмией и т.д.). Специфичность 
составила 1 0 0%.
Не было обнаружено ложноположительных реакций при тестировании анализируемых образцов 
разных типов.
2/8


--- стр. 213 ---
Н е  было также обнаружено влияния на специфичность заморозки анализируемых образцов
3 .2  Диагностическая чувствительность
Диагностическая чувствительность определялась как способность метода определять образцы, 
щие специфический аналит, как положительные. Исследования проводились как на базе RADIM. 
*ина базе других лабораторий. Было протестировано в общей сложности 200 образцов от пациентов, 
« вю щ и х иммунитет к ВГЕ. Диагностическая чувствительность составила 100%.
3.3 Прецизионность
Два образца (один отрицательный и один слабоположительный) анализировались в трех 
1И С И М Ы Х  постановках. В каждой из постановок образцы были нанесены в 16 репликатах 
Полученные значения КВ попадают в диапазон 5-10% и зависят от величины оптической плотности 
п р и  450 нм. Изменения диагнозов образцов обнаружено не было.
3.4 Предел детекции
Этот параметр был определен с помощью Первого Международного Стандарта антител к ВГЕ 
( N I6 S C , 95/584). Предел детекции составляет 2 МЕ/мл.
4 . МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Для получения достоверны х результатов необходимо соблюдать следующие правила:
-  Не смешивайте специфические реагенты разных серий набора (см.п.2.2.1.). Не смешивайте их 
^реагентами других производителей.
Разрешается смешивать Промывочный раствор, Раствор ТМБ и Стоп-реагент разных серий 
набора Не смешивайте их с реагентами других производителей.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке,
Не храните реагенты при вьюоких температурах и/или в местах, где возможно их загрязнение. 
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте только дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в 
чистой посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для ка>вдого образца \лш
реагента.
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа», Несоблюдение временного интервала и 
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам анализа.
В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует убедиться, 
что все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, спектрофотометр, термостат) 
проходит регулярную проверку и поддерживается в исправном состоянии.
-  Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок или 
автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок может 
привести к неверной интерпретации результатов анализа.
Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению оптической 
плотности образцов и последующим неправильным результатам анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». Если 
температура инкубации отклоняется от 37±2°С, это может привести к снижению чувствительности анализа 
и/или биологической денатурации образцов и реагентов. Следует периодически проверять показания 
датчика температуры.
-  Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или образцов. 
Несоблюдение температурного режима хранения может привести к биологической денатурации 
компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
Следует  обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная идентификация 
может привести к ложным результатам и постановке ошибочного клинического  диагноза.
Чтобы исключить заражение персонала  и загрязнение окружающей среды, следует  
соблюдать следующие правила:
-  При работе с потенциально инфекционным материалом и во время проведения анализа  
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
Не разрешается пипетировать ртом.
Не разрешается  прием пищи, использование косметических средств и курение в помещениях 
предназначенных для работы  с наборами.
соблюдать осторожность в обращении с  Раствором ТМБ и Стоп-реагентом. Избегать  
B o S  ^ слизистые. В случае контакта тщательно промыть пораженный участок  проточной
3/8


--- стр. 214 ---
- Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на присутствие 
д , антител к ВИЧ и к вирусу гепатита С. Несмотря на полученные отрицательные результаты, 
е т учесть, что ни один из существующих методов анализа не может гарантировать полное
вие указанных вирусов. По этой причине все образцы и другие реагенты, содержащие сыворотку 
е й  человека, следует считать потенциально инфекционными.
- Следует избегать разбрызгивания реагентов и образования аэрозолей. Места, на которые 
пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. Исполь-
нны й при этом протирочный материал следует считать потенциально инфицированным и подвергнуть 
етствующей обработке перед утилизацией.
- Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных азидов 
аллов в чугунных и медных водопроводных трубах, после слива использованных реагентов следует
|иромыть сток большим объемом проточной воды.
5. МАТЕРИАЛЫ И  ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В НАБОР
5.1. Материалы и оборудование, необходимые при ручной постановке анализа
■Микропипетки, в том числе многоканальные, высокой точности (10-200 мкл, менее 3% ошибки) со сменными 
наконечниками.
■  Градуированные цилиндры для разведения реагентов.
- Дистиллированная вода.
-Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
- Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления содержимого из лунок. 
-Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность
раствора в лунках в диапазоне 0-3 ед. опт. плотн. при длинах волн 620, 450 и 405нм.
- Миллиметровая бумага.
5.2. Автоматическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа на 
автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC.
В случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю необходимо 
удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для иммуно- 
ферментного анализа производства RADIM.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
При заборе венозной крови следует соблюдать правила асептики. Сыворотку или плазму крови 
получают по общепринятой методике подготовки образцов для лабораторного анализа. Не было 
обнаружено существенного влияния цитрата, солей ЭДТА и гепарина на результаты анализа.
Не допускается добавление в анализируемые образцы консервантов, особенно азида натрия, 
так как они могут повлиять на ферментативную активность конъюгата и способствовать возникновению 
ложноотрицательных результатов.
Образцы должны быть четко маркированы во избежание ошибочной интерпретации 
результатов. Настоятельно рекомендуется применять штрих-кодирование и электронный датчик для 
считывания штрих-кода, в особенности если набор применяется для скрининга донорской крови.
Не допускается применять образцы с видимыми признаками гемолиза (красный цвет) и липемии 
(«молочный» оттенок), так как при этом может быть получен ложный результат. По этой же причине не 
допускается применять образцы, содержащие фибрин, твердые частицы или видимые признаки 
микробной контаминации.
Сыворотку и плазму допускается хранить при температуре +2°..8°С в течение 5 суток после 
сбора. При необходимости более длительного хранения образцы допускается хранить при температуре -  
20°С в течение нескольких месяцев. Не допускается повторное замораживание/размораживание 
образцов, так как образовавшиеся при этом вкпючения могут влиять на результат анализа.
При обнаружении твердых частиц, образцы перед проведением анализа центрифугируют в 
течение 2 0 минут при 2 0 0 0 об/мин, либо очищают фильтрованием (диаметр пор фильтра 0 ,2 -0 , 8 мкм).
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА*
-  Доведите реагенты до комнатной температуры (+18.. .25°С).
Тщательно перемешайте образцы перед проведением анализа.
7.1. Промаркируйте лунки для контролей и исследуемых образцов. Оставьте 1  лунку для обнуления 
(Blank), 3 лунки для Отрицательного контроля, 2 лунки для калибратора и одну лунку для Положительного 
контроля.
7.2. Внесите по 200 мкл контролей в соответствующие лунки.
Внимание: Контроли готовы к использованию и не требуют разведения.
4/8


--- стр. 215 ---
7 .3 . Добавьте по 200 мкл раствора для разведения образцов во все лунки для образцов и внесите по 10 
анализируемых образцов. Осторожно перемешайте, избегая расплескивания во избежание
зминации соседних лунок.
Примечание: Убедитесь, ч то  образцы были действительно добавлены в лунки. Э то можно  
ювить по изменению окраски раствора с оливково-зеленой на темную сине-зеленую.
7.4. Внесите во все лунки с образцами, Контролями и Калибратором по 50 мкл Аналитического 
“ра . Убедитесь, что окраска раствора изменилась на синюю.
7.5. Инкубируйте планшет в течение 45 минут при 37± 2°С.
i  I  Примечание: Стрипы следует заклеивать специальной пленкой, входящей в состав набора,
ько в то м  случае, если анализ проводится вручную. При автоматической постановке анализа  
И кая пленка не требуется.
7.6. Удалите содержимое лунок и с помощью автоматического промывочного устройства промойте 
)планшет 4 -5  раз подготовленным к работе Промывочным раствором. При каждой промывке
эвляйте по 300 мкл Промывочного раствора в каждую лунку.
7.7. Внесите во все лунки, кроме лунки А1, по 100 мкл Конъюгата. Убедитесь, что окрашенный 
гвор внесен во все необходимые лунки. Заклейте планшет клейкой пленкой.
Примечание: Во время внесения Конъюгата избегайте прикасаться наконечником пипетки к  
пренней стороне лунок во избежание контаминации.
7.8. Инкубируйте микропланшет в течение 45 минут при +37± 2”С.
7.9. Удалите содержимое лунок и промойте лунки, как описано в п. 7.6.
7.10. Внесите по 100 мкл Раствора ТМБ в каждую лунку, включая А1. Инкубируйте планшет при 
[комнатной температуре (+18...25°С) в течение 15 минут.
Примечание: Во избежание высокого фонового сигнала, не допускайте попадания света на  
wem.
7.11. Остановите ферментативную реакцию добавлением 100 мкл Стоп-реагента в каждую лунку, 
топ-реагент следует вносить в лунки в той же последовательности, как и Раствор ТМБ. После внесения
зп-реагента окраска Положительного контроля и положительных образцов изменится с голубой на 
1тую.
I СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 7.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. Референсный 
фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо вычитать величину 
['оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех остальных лунок. В случае, 
если значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, считывание результатов проводят 
при  длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не позже, чем через 15 минут после остановки 
реакции.
Примечание: При использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или  
SEAC для планшетного формата (microplates) считывающий спектроф отом етр должен измерять  
значения автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1. Анализ результатов Определите среднюю оптическую плотность (ОП) Отрицательного 
контроля (ОК). Расчитайте значение Cut-off по формуле (1):
Cut-off = ОПсрОК + 0,35 (1)
Примечание: Если расчет результатов проводится операционной системой автоматического  
анализатора, следует убедиться, ч то  задана правильная формула для вычисления значения cut-off и  
последующего расчета результатов.
Присутствие или отсутствие антител против ВГЕ определяется путем деления ОП образца на 
значение Cut-off.
Образцы, для которых при делении на Cut-off получено значение менее 0,9, признают нереактивными (не 
содержащими антитела против ВГЕ).
Образцы, для которых при делении на Cut-off получено значение более 1,1, признают реактивными 
(содержащими антитела против ВГЕ).
Область 0,9 -  1,1 является областью сомнительных значений. Если ОП образца попадает в эти 
пределы, результат считается сомнительным.
Отрицательный результат означает, что пациент не был инфицирован ВГЕ и что данный 
препарат донорской крови можно использовать для переливания.
У всех пациентов с сомнительным результатом следует повторить анализ через 1-2 недели, 
получив для этого свежий образец сыворотки или плазмы. Препарат донорской крови, давший 
сомнительный результат, не допускается использовать для переливания.
Положительный результат анализа указывает на наличие инфицирования ВГЕ. Пациент должен 
получить соответствующую медицинскую помощь, а препарат донорской крови должен быть уничтожен.
5/8


--- стр. 216 ---
Примечания:
• Во избежание ошибок, интерпретацию результатов следует проводить под наблюдением  
щоводителя лаборатории.
• Любой положительный резул ьтат анализа должен бы ть подтвержден альтернативным  
етодом (подтверждающим те сто м , предназначенным для определения а н ти те л  класса IgG и 1дМ ),  
ежде чем будет установлен диагноз «вирусный гепатит».
• Поскольку настоящий анализ способен определять в то м  числе и антитела класса 1дМ , его  
езультаты м о гут в ряде случаев не совпадать с результатами других коммерческих наборов для  
пределения а н ти те л  к вирусу ге п а ти та  Е, в состав которых не входит конъю гат а нтител  к 1дМ  
еловека с пероксидазой. Подобные наборы не позволяют обнаруживать антитела класса 1дМ ,
этому в таких случаях для правильной диагностики инфекции вирусом ге п а ти та  Е требуется  
нализ, подтверждающий наличие 1дМ .
• При сообщении результатов из лаборатории в другие подразделения следует  
\предпринимать меры для исключения ошибок при передаче данных.
• Устанавливать диагноз «вирусный ге п а ти т»  и доводить его до сведения пациента должен
I персонал, имеющий высшее медицинское образование и соответствую щ ую  специальную  
[квалификацию.
Пример расчета результатов:
!  Запрещается использовать приведенные ниже значения в м е сто  реальных экспериментальных  
ных.
ОП репликатов О трицательного контроля (ед.опт.плотн.): 0,019 ; 0,020; 0,021  
] Среднее значение ОП ОК (ед.опт.плотн.): 0,020  
Критерий достоверности(< 0,050) Выполняется  
ОП Положительного контроля (ед. опт. плотн.): 2,189  
Критерий достоверности (> 1,000) Выполняется  
Cut-Off = 0,020+0,350  = 0,370
ОП репликатов Калибратора (ед.опт.плотн.,): 0,550; 0,530  
Среднее значение (ед.опт.плотн.): 0,540  
Отношение ОП/Cut-off = 1,4
Критерий достоверности(отношение > 1,0) Выполняется  
ОП Образца 1  (ед.опт.плотн.): 0,070  
ОП Образца 2 (ед.опт.плотн.): 1,690
Для Образца 1  ОП/Cut-off <0,9 - Образец считается отрицательным  
Для Образца 2 ОП/Cut-off > 1,1 - Образец считается положительным
9.2. Критерии достоверности
Прежде чем начать обсчет результатов, убедитесь, что ОП контрольных точек соответствуют следующим
Описание Условие
Blank < 0 , 1 0 0
Отрицательный контроль < 0,050
ОП Калибратора/Cut-off >1 , 0
Положительный контроль > 1 , 0 0 0
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ.
При несоответствии критериям следует немедленно известить руководство лаборатории. 
Некоторые возможные причины несоответствия приведены ниже. Перед повторным проведением анализа 
следует убедиться, что эти причины устранены.
6/8


--- стр. 217 ---
^ Описание дефекта Возможная причина
О П  в лунке для 
^нуления >0 , 1 0 0
Раствор ТМБ был загрязнен в процессе анализа.
Ш  Отрицательного  
юнтроля > 0,050
1
1. Не были предварительно подобраны оптимальные параметры промывки 
и/или настройки промывочного устройства;
2. Использован неподходящий промывочный буфер либо магистрали 
промывочного устройства не были промыты соответствующим буфером 
перед началом работы;
3. Ошибка оператора в процессе внесения контролей (положительный 
контроль вместо отрицательного);
4. Контаминация флакона с Отрицательным контролем, либо лунок, в 
которые он был внесен, следами положительных образцов или Конъюгата;
5. Загрязнение пипеток следами положительных образцов или Конъюгата;
6 .  Закупоренные или засоренные иглы автоматического промывочного 
устройства.
ш либровочная проба:  
отношение 
ОП/Cut-off <1,1
1. Нарушена последовательность выполнения анализа;
2. Ошибка оператора при нанесении Калибровочной пробы (например, 
вместо нее внесен Отрицательный контроль);
3. Параметры промывки или настройки промывочного устройства 
отличаются от предварительно выбранных оптимальных значений;
4. Контаминация Калибровочной пробы
on Положительного  
контроля < 1 , 0 0 0
1. Нарушена последовательность выполнения анализа;
2. Ошибка оператора при нанесении Положительного контроля;
3. Параметры промывки или настройки промывочного устройства 
отличаются от предварительно выбранных оптимальных значений,
4. Контаминация Положительного контроля.
9.3. Интерпретация результатов
Нереактивные образцы признают отрицательными по содержанию антител против ВГЕ. 
Реактивные и сомнительные образцы признают положительными по содержанию антител
против ВГЕ,
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И  ЭКСПЛУАТАЦИИ
Набор должен храниться при температуре +2...8°С.
Срок годности реагентов указан на этике тка х флаконов.
Вскрытые реагенты стабильны при температуре +2...8°С в течение 6 месяцев.
11. ОГРАНИЧЕНИЯ В ПРИМЕНЕНИИ АНАЛИЗА
Повторяющиеся ложноположительные результаты наблюдаются у менее 1% здоровых людей. 
Замороженные образцы, содержащие фибрин, после разморозки могут давать ложные
результаты.
СХЕМА АНАЛИЗА
^ —-------------- Лунки
Реагенты ___
Blank ICONTROLI- CAL CONTROL + Образцы
CONTROL - 2 0 0 М КЛ ----- -----
CALl ----- 200 М КЛ ----- —
CONTROL 1  + ----- 200 МКЛ —
DILSPE ----- ----- 200 М К Л
Образцы ----- — ----- 1 0 М К Л
Id 1  LAS 50 МКЛ 50 МКЛ 50 МКЛ 50 мкп
Инкубация: 37± 2°С, 45 мин. 
Промывка: 4-5 х 300 мкп.
Конъюгат CONJ 1 0 0 мкп 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкп 1
Инкубация: 37± 2'’С, 45 мин. 
Промывка: 4-5 х 300 мкл
Раствор ТМБ ТМВ| 1 0 0 мкп 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл
Инкубация: комнатная температура, 15 мин.
7/8


--- стр. 218 ---
|[гоп-реагент STOP 100 М КЛ 100 М КЛ 100 МКЛ 100 МКЛ 1 0 0  МКЛ
Считывание: 450-405 нм (референсная длина волны: 620 нм).
Примерная схема нанесения образцов на м икропланш ет:
1 2 3 4 5 ‘ 6 ' ■7 8 9 1 0 11 1 2
'A BLK 0Б2
в K(-) ОБЗ
,c K(-) 0Б4
' d ‘ K(-) 0Б5
E КП 0Б6
F КП 0Б7
G K(+) 0Б8
H 0Б1 0Б9
Условные обозначения:
BLK = лунка для обнуления (Blank) 
К(-) = отрицательный контроль 
|КП = калибровочная проба 
|К(+) = положительный контроль 
[ о б- образцы
еральный директор 
30 «Компания Алкор Био»
^  юводитель лаборатории разработки ИФА-систем 
‘ Ю «Компания Алкор Био»
■ le H H o ij
;|рев М.В.
Сусорова А.С.
I
RADIM S.p.A. - Via del Mare, 125 - 00040 Pomezia (Roma) Italia 
Tel.: +39 06 91.249.1 - Fax: +39 06 91.249.443 
National Order Entry:  +39 06 91.249.702 
Export Department:  +39 06 91.249.701 
Customer Care: +39 06 91.249.700 
info(S>.radim.it - www.radim.it


--- стр. 219 ---
П р о ш и т о ,  п р о н з ш е р о в а н о ,  с к р е п л е н о 
п е ч а т ь ю  j  ( _ _ _ _ _ _ )  л и с т ^
Г  е й е р а л ь й Ы й  а й р е к з р П
О О О  « К о м п ^ й й й ' ^ 1 ^ р  Б и о »
В | о  Ш в ы р е в
Л Л ^ р а п у "
— ■ у'


--- стр. 220 ---
Л *  ^/  I *  -  \ '
генеральный ;Дтоектор пания
ООО «Компании о|.
Ш вырев М.В. Л  if\  Л ^ ° '^ Р а п у  /  /•
/ / У  »  ty .\_  Ltd. ^
«УТВ
НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ  
ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ G К ВИРУСУ  
ГЕПАТИТА Е В СЫВОРОТКЕ И  ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
HEV IgG
Только для in vitro диагностики
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Вирус гепатита Е (ВГЕ) - недавно открытый вирус с фекально-оральным путем передачи, ВГЕ не 
имеет оболочки и содержит одноцепочечную РНК. По стороению он похож на калицивирусы и был 
найден в фекалиях больного. ВГЕ это серьезная проблема во многих развивающихся странах. Первая 
вспышка гепатита Е была зарегистрирована в 1955 году в Нью Дели, Индия. Это заболевание никогда не 
переходит в хроническую форму, однако характеризуется большой частотой неблагоприятных исходов у 
беременных женщин.
Изучение генома вируса гепатита Е позволило разработать тест-системы для определения анти-ВГЕ 
антител. Они основаны на синтетических антигенах из иммунодоминантных консервативных регионов 
вируса гепатита Е.
Тест-система HEV IgG предназначена для качественного определения иммуноглобулинов класса G 
против ВГЕ в сыворотке и плазме крови человека.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
Принцип работы данного набора основан на твердофазном иммуноферментном анализе (ИФА). В  
качестве ферментной метки в наборе применяется пероксидаза хрена. В течение первой инкубации 
антитела против ВГЕ (если они есть в образце) связываются с синтетическими антигенами из 
иммунодоминантных консервативных регионов мексиканской и бирманской линий вируса, 
адсорбированными на твердой фазе (в лунках планшета). С помощью промывки удаляется 
несвязавшийся материал. В течение следующей инкубации поликлональные антитела против IgG 
человека, меченные пероксидазой хрена, взаимодействуют с комплексом антиген ВГЕ -  антитело. После 
цикла промывок в лунки добавляется раствор ТМБ, что приводит к развитию окраски под воздействием 
фермента. Реакция останавливается добавлением Стоп-реагента (HCI). Интенсивность окрашивания 
раствора измеряется на спектрофотометре при длине волны 450 нм или 405 нм. Содержание 
специфических IgG антител в образцах и контролях прямо пропорционально измеренной оптической 
плотности раствора в лунках.
2.2. СОСТАВ НАБОРА
Реагент Количество Состояние
IMICROPLATE
Микропланшет 1  X  96 лунок Готов к использованию 
Ready for use
CONTROL ■  
Отрицательный контроль 2 X  2,0 мл Готов к использованию 
Ready for use
C o n t r o l +
Положительный контроль 1  X 2,0 мл Готов к использованию 
Ready for use
|CAL
Калибровочная проба
2  флакона Лиофилизованнный препарат
IWASHBUF 120Х 
20х Промывочный буфер 1  X  50 мл Концентрированный раствор 
Сопс.
Конъюгат 1  X  16 мл Готов к использованию 
Ready for use
1/8


--- стр. 221 ---
Id il a s
питический б у ф е р 1  X  8 ,0 мл Готов к использованию 
Ready for use __________
IDILSPEI 
Р аствор для разведения 
______образцов________
1  X  50 мл Готов к использованию 
Ready for use
Раствор ТМБ
ШвД 1  X  14 мл
Стоп-реагент
STOP
Готов к использованию 
Ready for use __________
1  X  14 мл Готов к использованию 
Ready for use __________
Количество реагентов рассчитано на 96 лунок.
2.2.1 ■  Реагенты
Иммуносорбент -  планшет (MICROPLATE) I Microplate: 1  планшет из 12 разборных стрипов 
п о  8 лунок (всего 96 лунок). Лунки стрипов планшета покрыты синтетическими антигенами вируса 
гепатита Е  из регионов 0RF2 и 0RF3. Неиспользованные стрипы хранить при температуре +2... 8 °С в 
пл отно закрытом пластиковом пакете (прилагается).
• Отрицательный контроль (CONTROL -) / Negative Control: 2 флакона. Раствор оливково­
зеленого цвета на основе 10 мМ Ыа-цитратного буфера, pH 6,0±0,1, содержит 1% белков сыворотки козы и 
0,5 %  Твин 20. Консерванты: 0,09% азид натрия и 0,1% Катон GC. Готов к использованию.
• Положительный контроль (CONTROL +) / Positive Control: 1  флакон. Раствор темно-зеленого 
цвета на основе 10 мМ Ма-цитратного буфера, pH 6,0±0,1, содержит 1% белков сыворотки козы, 0,5% Твин 
20 и  антитела человека к вирусу гепатита Е. Консерванты: 0,09% азид натрия и 0,1% Катон GC. Готов к 
использованию.
• Калибратор (CAL) I Calibrator: 2 флакона. На основе Ма-цитратного буфера, pH 6,0±0,1, 
содержит фетальную бычью сыворотку и антитела человека к вирусу гепатита Е в концентрации 4±10% 
МЕ/мл (относительно Первого Международного стандарта для антител к ВГЕ, NIBSC, 95/584). 
Консерванты: 0,3 мг/мл гентамицина сульфата и 0,1% Катон GC. Лиофилизован. Перед использованием 
растворите содержимое флакона в объеме дистиллированной воды, который указан на этикетке. 
Восстановленный реагент хранить при -20°С. Повторное замораживание не допускается.
Внимание: Объем, необходимый для растворения содержимого флакона, может быть различным 
для разных партий реагента. Обратите внимание, чтобы препарат был растворен именно в том объеме 
воды, который указан на этикетке флакона.
• Промывочный раствор 20х (WASHBUF 20Х) / Washing buffer concentrate: 1  флакон. 1х 
Промывочный буфер представляет собой 10 мМ фосфатный буферный раствор, pH 7,0±0,2, содержащий
0,05% Твин 20 и 0,1% Катон GC. Перед использованием развести необходимое количество концентрата 
дистиллированной водой в соотношении 1:20. В случае образования нерастворимых кристаллов поместите 
раствор в термостат (+37°С) на несколько минут. Приготовленный промывочный раствор хранить не более 7 суток при 
+2 ...8 Х .
• Конъюгат (CONJ) / Enzyme Conjugate: 1  флакон. Раствор красного цвета на основе 10 мМ 
трисового буфера, pH 6,8±0,1, содержит козьи поликлональные антитела к IgG человека, 
конъюгированные с пероксидазой хрена (HRPO), 5% БОА, 0,02% гентамицина сульфата и 0,1% Катон GC. 
Готов к использованию.
• Аналитический буфер (DILAS) / Assay Diluent: 1  флакон. Раствор на основе 10 мМ трисового 
буфера, pH 8,0±0,1, содержащий 0,1% Катон GC. Для предварительной обработки образцов и контролей 
на плате для блокирования интерференции.
• Раствор для разведения образцов (DILSPE) / Specimen Diluent: 1  флакон. Раствор оливково­
зеленого цвета на основе 10 мМ Ма-цитратного буфера, pH 6,0±0,1, содержит 0,5% Твин 20. Готов к 
использованию. Консерванты: 0,09% азид натрия и 0,1% Катон GC.
Внимание: При добавлении образца раствор меняет цвет с оливково-зеленого на темный сине- 
зеленый.
• Раствор ТМБ (ТМВ): 1  флакон. Раствор тетраметилбензидина в цитратно-фосфатном буфере, 
содержащем DMSO и Н 2О2. Готов к использованию.
• Стоп-реагент (STOP) / Blocking Reagent: 1  флакон. 1Н HCI. Готов к использованию.
• Бумага для заклеивания планшета (СРА) / Adhesive plate sealers.
•  Пластиковый пакет.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И  ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1 Диагностическая специф ичность
Диагностическая специфичность - способность метода определять образцы, не содержащие 
специфический аналит, как отрицательные. Было протестировано более 500 доноров и пациентов, не 
имеющих иммунитета к ВГЕ. Диагностическая специфичность относительно FDA-одобренной тест- 
системы составляет > 99,5%.
и 2/8


--- стр. 222 ---
Б ы ло протестировано более 100 образцов с потенциальной интерференцией (пациенты с другими 
ионными заболеваниями, с гепатитами невирусной природы, пациенты после диализа, 
енные женщины, гемолизированные образцы и образцы с липидэмией и т.д.). Специфичность 
а в и л а  1 0 0%.
Н е  было обнаружено ложноположительных реакций при тестировании анализируемых образцов 
ух типов.
Н е было также обнаружено влияния на специфичность заморозки анализируемых образцов.
3 .2  Диагностическая чувствительность
Диагностическая чувствительность - способность метода определять образцы, содержащие 
ифический аналит, как положительные. Исследования проводились как на базе RADIM так и на базе 
и х лабораторий, было протестировано в общей сложности 2 0 0 образцов от пациентов, имеющих 
иунитет к ВГЕ. Диагностическая чувствительность составила 100%.
3.3 Прецизионность
Два образца (один отрицательный и один слабоположительный) анализировались в трех 
ависимых постановках. В каждой из постановок образцы были нанесены в 16 репликатах.
Полученные значения КВ попадали в диапазон 5-10% и зависили от величины оптической плотности 
[лри450 нм. Изменения диагнозов образцов обнаружено не было.
3.4 Предел детекции
Этот параметр был определен с помощью Первого Международного Стандарта антител к ВГЕ 
' (N IB S C , 95/584). Предел детекции составляет 2 МЕ/мл.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Для получения достоверны х результатов необходимо соблю дать следующие правила:
-  Не смешивайте специфические реагенты ( см.2.2.1.) разных серий набора. Не смешивайте их с 
реагентами других производителей.
Разрешается смешивать Промывочный раствор, Раствор ТМБ и Стоп-реагент разных серий 
набора. Не смешивайте их с реагентами других производителей.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их загрязнение.
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте только дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в 
чистой посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для каждого образца или
реагента.
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и 
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам анализа.
В случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует убедиться, 
что все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, спектрофотометр, термостат) 
проходит регулярную проверку и поддерживается в исправном состоянии.
Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок или 
автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок может 
привести к неверной интерпретации результатов анализа.
Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению оптической 
плотности образцов и последующим неправильным результатам анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». Если 
температура инкубации отклоняется от 37±2°С, это может привести к снижению чувствительности анализа 
и/или биологической денатурации образцов и реагентов. Следует периодически проверять показания 
датчика температуры.
Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или образцов. 
Несоблюдение температурного режима хранения может привести к биологической денатурации 
компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная идентификация 
может привести к ложным результатам и постановке ошибочного клинического диагноза.
Чтобы исключить заражение персонала и загрязнение окружающей среды, следует  
соблюдать следующие правила:
При работе с потенциально инфекционным материалом и во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
Не разрешается пипетировать ртом.
3/8


--- стр. 223 ---
- Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и курение в помещениях, 
назначенных для работы с наборами.
- Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и Стоп-реагентом, Избегать 
ания в глаза, на кожу и слизистые. В случае контакта тщательно промыть пораженный участок проточной
л
- Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на присутствие 
ig , антител к ВИЧ и к вирусу гепатита С. Несмотря на полученные отрицательные результаты, 
1ет учесть, что ни один из существующих методов анализа не может гарантировать полное 
ствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и другие реагенты, содержащие сыворотку
ф о в и  человека, следует считать потенциально инфекционными.
-  Следует избегать разбрызгивания реагентов и образования аэрозолей. Места, на которые 
л о п а л  пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. Исполь­
зо ва н н ы й  при этом протирочный материал следует считать потенциально инфицированным и подвергнуть
тствующей обработке перед утилизацией,
- Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных азидов 
[леталлов в чугунных и медных водопроводных трубах, после слива использованных реагентов следует 
пром ы ть сток большим объемом проточной воды.
5. МАТЕРИАЛЫ И  ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В НАБОР
5.1. Материалы и оборудование, необходимые при ручной постановке
- Микропипетки, в том числе многоканальные, высокой точности (10-200 мкл, менее 3% ошибки) со сменными 
наконечниками.
- Градуированные цилиндры для разведения реагентов.
- Дистиллированная вода.
-Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
- Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления содержимого из лунок. 
-Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность
раствора в лунках в диапазоне 0-3 ед. опт. плотн. при длинах волн 620,450 и 405нм.
- Миллиметровая бумага.
5.2. Автоматическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа на 
автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC.
В  случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю необходимо 
удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для иммуно- 
ферментного анализа производства RADIM.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
При заборе венозной крови следует соблюдать правила асептики. Сыворотку или плазму крови 
получают по общепринятой методике подготовки образцов для лабораторного анализа. Не было 
обнаружено существенного влияния цитрата, солей ЭДТА и гепарина на результаты анализа.
Не допускается добавление в анализируемые образцы консервантов, особенно азида натрия, 
так как они могут повлиять на ферментативную активность конъюгата и способствовать возникновению 
ложноотрицательных результатов.
Образцы должны быть четко маркированы во избежание ошибочной интерпретации 
результатов. Настоятельно рекомендуется применять штрих-кодирование и электронный датчик для 
считывания штрих-кода, в особенности если набор применяется для скрининга донорской крови.
Не допускается применять образцы с видимыми признаками гемолиза (красный цвет) и липемии 
(«молочный» оттенок), так как при этом может быть получен ложный результат. По этой же причине не 
допускается применять образцы, содержащие фибрин, твердые частицы или видимые признаки 
микробной контаминации.
Сыворотку и плазму допускается хранить при температуре +2°...8°С в течение 5 суток после 
сбора. При необходимости более длительного хранения образцы допускается хранить при температуре 
-20°С в течение нескольких месяцев. Не допускается повторное замораживание/размораживание 
образцов, так как образовавшиеся при этом включения могут влиять на результат анализа.
При обнаружении твердых частиц, образцы перед проведением анализа центрифугируют в 
течение 2 0 минут при 2 0 0 0 об/мин, либо очищают фильтрованием (диаметр пор фильтра 0 ,2 -0 , 8 мкм).
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА*
-  
Доведите реагенты до комнатной температуры (+18...25°С).
Тщательно перемешайте образцы перед проведением анализа.
4/8


--- стр. 224 ---
7 .1 . Промаркируйте лунки для контролен и исследуемых образцов. Оставьте 1  лунку для обнуления 
,  3 лунки для отрицательного контроля, 2  лунки для калибратора и одну лунку для положительного 
л я .
7 .2 . Внесите по 200 мкл контролей в соответствующие лунки.
Внимание: Контроли готовы к использованию и не требуют разведения.
7 .3 . Добавьте по 200 мкл раствора для разведения образцов во все лунки для образцов и внесите по 10 
анализируемых образцов. Осторожно перемешайте, избегая расплескивания во избежание 
минации соседних лунок.
Примечание: Убедит есь, чт о образцы  были дейст вит ельно добавлены  в лунки. Э т о можно  
вить по изм енению  окраски раст вора с оливково-зеленой на т емную  сине-зеленую.
7.4. Внесите во все лунки с образцами, Контролями и Калибратором по 50 мкл Аналитического 
|^ р а  Убедитесь, что окраска раствора изменилась на синюю.
7.5 . Инкубируйте планшет в течение 45 минут при 37±2°С.
Примечание: Ст р и пы  следует  заклеиват ь специальной пленкой, входящ ей в сост ав набора,  
ыо в том случае, если анализ проводит ся вручную. П р и  авт ом ат ической пост ановке анализа  
< О к а я  пленка не т ребует ся.
7.6. Удалите содержимое лунок и с помощью автоматического промывочного устройства промойте 
опланшет 4-5 раз подготовленным к работе Промывочным раствором. При каждой промывке
авляйте по 300 мкл Промывочного раствора в каждую лунку.
7.7. Внесите во все лунки, кроме лунки А1, по 100 мкл Конъюгата, Убедитесь, что окрашенный 
вор внесен во все необходимые лунки. Заклейте планшет клейкой пленкой.
Примечание: В о  врем я внесения Конъю гат а избегайт е прикасат ься наконечником пипет ки к  
премией ст ороне лунок во избеж ание контаминации.
7.8. Инкубируйте микропланшет в течение 45 минут при +37±2°С.
7.9. Удалите содержимое лунок и промойте лунки, как описано в п. 7.6.
7.10. Внесите по 100 мкл Раствора ТМБ в каждую лунку, включая А1. Инкубируйте планшет при 
!  комнатной температуре (+18...24“С) в течение 15 минут.
Примечание: В о  избеж ание вы сокого ф онового сигнала, не допускайт е попадания свет а на  
аншет.
7.11. Остановите ферментативную реакцию добавлением 100 мкп Стоп-реагента в каждую лунку. 
|Стоп-реагент следует вносить в лунки в той же последовательности, как и Раствор ТМБ. После внесения 
[Стоп-реагента окраска Положительного контроля и положительных образцов изменится с голубой на 
[желтую.
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 7.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. Референсный 
фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо вычитать величину 
оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех остальных лунок. В случае, 
если значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, считывание результатов проводят 
при длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не позже, чем через 15 минут после остановки 
реакции.
Примечание: П р и  использовании авт омат ических анализат оров производст ва R A D IM  и/или  
S E A C  для планш ет ного ф орм ат а (microplates) счит ы ваю щ ий спект роф от ом ет р должен измерять 
значения авт ом ат ически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1. Анализ результатов
Определить среднюю оптическую плотность (ОП) Отрицательного контроля (ОК). Расчитать 
значение Cut-off по формуле (1):
Cut-off = ОПсрОК + 0,35
Примечание: Е сл и  расчет  результ ат ов проводит ся операционной сист ем ой авт омат ического  
анализатора, следует  убедит ься, чт о задана правильная ф орм ула для вы числения значения Cut-off и  
последую щ его расчет а результ ат ов.
Присутствие или отсутствие IgG против ВГЕ определяется путем деления ОП образца на значение 
Cut-off.
Образцы, для которых при делении на Cut-off получено значение менее 0.9 - признают 
нереактивными (не содержащими IgG против ВГЕ).
Образцы, для которых при делении на Cut-off получено значение более 1,1- признают реактивными 
(содержащими IgG против ВГЕ).
Область 0,9 -  1,1 - является областью сомнительных значений. Если ОП образца попадает в эти 
пределы, результат считается сомнительным.
Л
5/8


--- стр. 225 ---
Отрицательный результат означает, что пациент не был инфицирован вирусом гепатита Е и что 
1й  препарат донорской крови можно использовать для переливания.
У всех пациентов с сомнительным результатом следует повторить анализ через 1-2 недели, 
W B  для этого свежий образец сыворотки или плазмы. Препарат донорской крови, давший 
ельный результат, не допускается использовать для переливания.
Положительный результат анализа указывает на наличие инфекции вирусом гепатита Е
II должен получить соответствующую медицинскую помощь, а препарат донорской крови должен 
уничтожен.
Примечания:
•  Во избежание ошибок, интерпретацию результатов следует проводить под наблюдением  
одителя лаборатории.
Любой положительный резул ьтат анализа должен бы ть подтвержден альтернативным  
эм (подтверждающим те сто м , предназначенным для определения а н ти те л  класса IgG), прежде
1  будет установлен диагноз «вирусный гепатит».
•  При сообщении результатов из лаборатории в другие подразделения следует  
^принимать меры для исключения ошибок при передаче данных.
• Устанавливать диагноз «вирусный ге п а ти т»  и доводить его до сведения пациента должен  
онал, имеющий высшее медицинское образование и соответствую щ ую  специальную
пификацию.
Пример расчета результатов:  
ипрещается использовать приведенные ниже значения в м е сто  реальных экспериментальных
WiDСПрепликатов О трицательного контроля( ед.опт.плот.):  
jbedHee значение: 0,020
Щитерий достоверности(< 0,050) Выполняется
О П  Положительного контроля ( ед. опт. плот.): 2,189
терий достоверности (> 1,000) Выполняется
Cut-Off =0,020+0,350 = 0,370
О П  репликатов Калибратора ( ед.опт.плот.): 0,550 -  0,530
Среднее значение: 0,540
Отношение ОП/Cut-off = 1,4
Критерий достоверности(отношение  > 1,0) Выполняется
ОП Образца 1  ( ед.опт.плот.): 0,070
ОП Образца 2 (ед. опт.плот.): 1,690
Для Образца 1  ОП/Cut-off <0,9 Образец считается отрицательным
Для Образца 2 ОП/Cut-off >1,1 Образец считается положительным
0 ,0 1 9-0,0 2 0-0 ,0 21
9.2. Критерии достоверности
Пре>еде чем начать обсчет результатов, убедитесь, что ОП контрольных точек соответствуют следующим 
критериям.
Описание Условие
Blank < 0 , 1 0 0
Отрицательный контроль < 0,050
ОП Калибратора/Cut-off >1 ,0
Положительный контроль > 1 , 0 0 0
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ.
При несоответствии критериям следует немедленно известить руководство лаборатории. 
Некоторые возможные причины несоответствия приведены ниже. Перед повторным проведением анализа 
следует убедиться, что эти причины устранены.
6/8


--- стр. 226 ---
|Г Описание дефекта Возможная причина
Г о п  в лунке для  
обнуления >0,100
Раствор ТМБ был загрязнен в процессе анализа.
О П  Отрицательного 
юнтроля > 0,050
}
1 . Не были предварительно подобраны оптимальные параметры промывки 
и/или настройки промывочного устройства;
2. Использован неподходящий промывочный буфер либо магистрали 
промывочного устройства не были промыты соответствующим буфером 
перед началом работы;
3. Ошибка оператора в процессе внесения контролей (положительный 
контроль вместо отрицательного);
4. Контаминация флакона с Отрицательным контролем, либо лунок, в 
которые он был внесен, следами положительных образцов или Конъюгата;
5. Загрязнение пипеток следами положительных образцов или Конъюгата;
6 .  Закупоренные или засоренные иглы автоматического промывочного 
устройства.
[калибровочная проба:  
отношение 
On/Cut-off < 1,1
1. Нарушена последовательность выполнения анализа;
2. Ошибка оператора при нанесении Калибровочной пробы (например, 
вместо нее внесен Отрицательный контроль);
3. Параметры промывки или настройки промывочного устройства 
отличаются от предварительно выбранных оптимальных значений;
4. Контаминация Калибровочной пробы
О П  положительного 
контроля < 1,000
1. Нарушена последовательность выполнения анализа;
2. Ошибка оператора при нанесении Положительного контроля;
3. Параметры промывки или настройки промывочного устройства 
отличаются от предварительно выбранных оптимальных значений;
4. Контаминация Положительного контроля.
ВГЕ.
9.3. Интерпретация результатов
Нереактивные образцы признают отрицательными по содержанию IgG против ВГЕ,
Реактивные и сомнительные образцы признают положительными по содержанию IgG против
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
Набор должен храниться при температуре +2.,.8°С.
Срок годности реагентов указан на эти ке тка х флаконов.
Вскрытые реагенты стабильны при температуре  +2.. . 8 °С в течение 6 месяцев.
11. ОГРАНИЧЕНИЯ В ПРИМЕНЕНИИ АНАЛИЗА
Повторяющиеся ложноположительные результаты наблюдаются у менее 1% здоровых людей. 
Замороженные образцы, содержащие фибрин, после разморозки могут давать ложные
результаты.
СХЕМА АНАЛИЗА
________ Лунки
Реагенты ' — ■ — _____
Blank ICONTROLM |CAL| CONTROL 1  + Образцы
ICONTROLl- 200 МКЛ ----- —
ICALl 200 МКЛ ----- —
CONTROL 1  + — ----- 200 МКЛ —
IDILSPE — ----- ----- 200 МКЛ
Образцы ----- ----- 10 МКЛ
IDILASI ----- 50 МКЛ 50 МКЛ 50 МКЛ 50 мкл
Инкубация: 37±2°С, 45 мин. 
Промывка: 4-5 х 300 мкп.
Конъюгат CONJ 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл
Инкубация: 37±2°С, 45 мин. 
Промывка: 4-5 х 300 мкл
Раствор ТМБ |ТМВ| 100 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл
Инкубация: комнатная температура, 15 мин.
7/8


--- стр. 227 ---
tron-реагент STOP 100 МКЛ 100 МКЛ 100 МКЛ 100 МКЛ 1 0 0  МКЛ
Считывание; 450-405 нм (референсная длина волны: 620 нм).
Примерная схема нанесения образцов на м икропланш ет:
1 2 3 4 5 6 ' T 8 ' 9 1 0 11 1 2
A BLK 0Б2
В K(-) ОБЗ
С K(-) 0Б4
D K(-) 0Б5
E КП 0Б6
F КП 0Б7
G K(+) 0Б8
H 0Б1 0Б9
^Условные обозначения;
1
8LK = лунка для обнуления (Blank) 
'-) = отрицательный контроль 
П  = калибровочная проба 
[(+ ) = положительный контроль 
Б  - образцы
!ральныи директор 
О  «Компания Алкор Био»
вводитель лаборатории разработки ИФА-систем 
^  «Компания Алкор Био»
"Компания'  
А лк1
Тмйог Bio 
Company" Ш ^ф е в М.В.
7
Сусорова А.С.
RADIM S.p.A. - Via del Mare, 125 - 00040 Pomezia (Roma) Italia 
Tel.: +39 06 91.249.1 - Fax; +39 06 91.249.443 
National Order Entry;  +39 06 91.249.702 
Export Department;  +39 06 91.249,701 
Customer Care; +39 06 91.249.700 
info(S>radinn.it - www.radim.it


--- стр. 228 ---
I  П р о ш и т о ,  п р о н у м е р о в а н о ,  с к р е п л е н о 
j  п е ч а т ь ю  ^  _ _ _ _ _) л и с т _ ^ ^
Г  енер; 
ООО
д й рееторV » \\I \ \'
Апрр Био»
-  о.
Ш вырев
* //


--- стр. 229 ---
«УТВЕРЖДАЮ  
Г енерал^ь|]5кдйрёкт0р^х,
ООО
\ l \ \ 
l i i !
- V ® ' ■
I  ®, Г О  I
Л/ ■  2011 г
НАБОР РЕАГЕНТОВ HEV 1дМ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ М К  
ВИРУСУ ГЕПАТИТА Е В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
HEV 1дМ
Только для in vitro диагностики
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Вирус гепатита Е  (ВГЕ) - недавно открытый вирус с фекально-оральным путем передачи, ВГЕ не 
имеет оболочки и содержит одноцепочечную РНК. По стороению он похож на калицивирусы и  был 
найден в фекалиях больного. ВГЕ это серьезная проблема во многих развивающихся странах. Первая 
вспышка гепатита Е  была зарегистрирована в 1955 году в Нью Дели, Индия. Это заболевание никогда не 
переходит в хроническую форму, однако характеризуется большой частотой неблагоприятных исходов у  
беременных женщин.
Изучение генома вируса гепатита Е  позволило разработать тест-системы для определения анти-ВГЕ 
антител. Они основаны на синтетических антигенах из иммунодоминантных консервативных регионов 
вируса гепатита Е .
Тест-системы для определения 1 д М  используются для дифференциальной диагностики у пациентов 
с симптомами гепатита и  дают возможность исключить другие более тяжелые вирусные инфекции (ВГВ. 
ВГО , ВГС).
Тест-система HEV 1 д М  предназначена для качественного определения иммуноглобулинов класса М  
против ВГЕ в сыворотке и  плазме крови человека.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
Принцип работы данного набора основан на твердофазном иммуноферментном анализе (ИФА), В  
качестве ферментной метки в наборе применяется пероксидаза хрена. В  течение первой инкубации 
антитела против ВГЕ (если они есть в образце) связываются с синтетическими антигенами из 
иммунодоминантных консервативных регионов мексиканской и  бирманской линий вируса, 
адсорбированными на твердой фазе (в лунках планшета). С помощью промывки удаляется 
несвязавшийся материал. В  течение следующей инкубации поликлональные антитела против 1 д М  
человека, меченные пероксидазой хрена, взаимодействуют с комплексом антиген ВГЕ -  антитело. После 
цикла промывок в лунки добавляется раствор ТМБ, что приводит к развитию окраски под воздействием 
фермента. Реакция останавливается добавлением Стоп-реагента (HCI). Интенсивность окрашивания 
раствора измеряется на спектрофотометре при длине волны 450 нм или 405 нм. Содержание 
специфических 1 д М  антител в образцах и  контролях прямо пропорционально измеренной оптической 
плотности раствора в лунках.
Нейтрализация анти-ВГЕ IgG и  ревматоидного фактора, происходящая в  лунке непосредственно во 
время анализа, нужна для того, чтобы блокировать их интерференцию.
2.2. СОСТАВ НАБОРА
Реагент Количество Состояние
iMICROPLATEl
Микропланшет 1  X 96 лунок Готов к использованию 
Ready for use
ICONTROLl- 
Отрицательный контроль 1  X  2,0 мл Готов к использованию 
Ready for use
ICONTROLI +  
Положительный контроль 1  X  2,0 мл Готов к использованию 
Ready for use
tW ASHBUF 1  20xf 
20х Промывочный буфер 1  X  50 мл Концентрированный раствор 
Сопс.
1C 0N J|
Конъюгат 1  X  16 мл Готов к использованию 
Ready for use
1 /8


--- стр. 230 ---
г
IDILSPE 
Р аствор для разведения 
образцов
ISOLN I  NTR
Раствор для нейтрализации
Раствор ТМБ
т Щ
Стоп-реагент
STOP
2 X  50 мл
1  X  8,0 мл
1  X 14 мл
1  X 14 мл
Готов к использованию 
Ready for use
Готов к использованию 
Ready for use
Готов к использованию 
Ready for use_________
Готов к использованию 
Ready for use_________
О
Количество реагентов рассчитано на 96 лунок.
2.2.1. Реагенты
• Иммуносорбент -  планшет (MICROPLATE) / Microplate: 1  планшет из 12 разборных стрипов 
п о  8 лунок (всего 96 лунок). Лунки стрипов планшета покрыты синтетическими антигенами вируса 
ге п а т и т а  Е  из регионов ORF2 и  0RF3. Неиспользованные стрипы хранить при температуре +2..,8°С в  
п л о т н о  закрытом пластиковом пакете (прилагается).
• Отрицательный контроль (CONTROL -) / Negative Control: 1  флакон. Раствор желтого цвета 
н а  основе 10 мМ  Ма-цитратного буфера, pH б,0±0,1, содержит 1%  белков сыворотки козы и  0,5% Твин 20 
К о н се р в а н ты : 0,09% азид натрия и  0,1% Катон GC. Готов к использованию.
• Положительный контроль (CONTROL +) I Positive Control: 1  флакон. Раствор темно-зеленого 
ц в е т а  н а  основе 10 мМ Ма-цитратного буфера, pH 6,0±0,1, содержит 1%  белков сыворотки козы, 0,5% Твин 
2 0  и  1 д М  человека к вирусу гепатита Е . Консерванты: 0.09% азид натрия и  0,1% Катон G C. Готов к 
испол ьзованию .
• Промывочный раствор 20х (WASHBUF 20Х) / Washing buffer concentrate: 1  флакон. 1 х  
П ром ы вочны й раствор представляет собой 10 мМ  фосфатный буферный раствор, pH 7,0+0,2, содержащий
0 ,0 5 %  Твин 20 и  0,1% Катон GC. Перед использованием развести необходимое количество концентрата 
дистиллированной водой в соотношении 1:20. В  случае образования нерастворимых кристаллов поместите 
р а с т в о р  в  термостат (+37°С) на несколько м инут. П риготовленный промывочный раствор хранить не более 7 суток при 
+ 2 ...8 °С .
• Конъюгат (CONJ) / Enzyme Conjugate: 1  флакон. Раствор красного цвета на основе 10 м М  
трисового буфера, pH 6,8±0,1, содержит козьи поликлональные антитела к 1 д М  человека, 
конъюгированные с пероксидазой хрена (HRPO), 5% БОА, 0,02% гентамицина сульфата и  0,1% Катон G C . 
Г о то в  к использованию.
•  Раствор для разведения образцов (DILSPE) I Specimen Diluent: 2 флакона. Раствор на 
основе 10 мМ  Ма-цитратного буфера, pH 6,0±0,1, содержит 2% казеин, 0,1% Твин 20. Консерванты: 0,09% 
а зи д  натрия и  0,1% Катон GC. Готов к использованию.
• Раствор для нейтрализации (SOLN NTR) / Neutralising Solution: 1  флакон. Раствор на основе 
1 0  м М  Ма-цитратного буфера, pH 6,0±0,1, содержит 2% казеин, 0,1% Твин 20 и  козьи антитела к IgG  
человека. Консерванты: 0,09% азид натрия и  0,1% Катон GC. Готов к использованию.
• Раствор ТМБ (ТМВ): 1  флакон. Раствор тетраметилбензидина в цитратно-фосфатном буфере, 
содержащ ем  DMSO и  Н2О2.  Готов к использованию.
• Стоп-реагент (STOP) / Blocking Reagent: 1  флакон. 1Н  HCI. Готов к использованию,
•  Бумага для заклеивания планшета (СРА) I Adhesive plate sealers.
•  Пластиковый пакет.
3 . АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3 .1  Диагностическая специфичность
Диагностическая специфичность - способность метода определять образцы, не содержащие 
специфический аналит, как отрицательные. Было протестировано более 500 доноров и  пациентов, не 
имею щ их иммунитета к ВГЕ. Диагностическая специфичность относительно FDA-одобренной тест- 
системы составляет 2 98%.
Было протестировано более 100 образцов с потенциальной интерференцией (пациенты с другими 
инфекционными заболеваниями, с гепатитами невирусной природы, пациенты после диализа, 
беременные женщины, гемолизированные образцы и  образцы с липидэмией и  т.д.). Специфичность 
составила 1 0 0% .
Не было обнаружено ложноположительных реакций при тестировании анализируемых образцов 
разны х типов.
Не было также обнаружено влияния на специфичность заморозки анализируемых образцов.
Было обнаружено, что образцы с высокой концентрацией ревматоидного фактора, могут давать 
ложноположительные результаты.
3.2 Диагностическая чувствительность
Диагностическая чувствительность - способность метода определять образцы, содержащие 
специфический аналит, как положительные. Исследования проводились как на базе RADIM так и  на базе
2/8


--- стр. 231 ---
д р у г и х  лабораторий, было протестировано в  общей сложности 1 0 0 образцов от пациентов, имеющих 
и м м у н и т е т  к ВГЕ, из Германии, Мексики и  Бирмы. Диагностическая чувствительность составила 2 98% .
3.3 Прецизионность
Два образца (один отрицательный и  один положительный) анализировались в трех независимых 
[постановках. В  каждой из постановок образцы были нанесены в 16 репликатах.
Полученные значения КВ попадали в диапазон 5-15% и  зависили от величины оптической плотности 
п р и  450 нм. Изменения диагнозов образцов обнаружено не было.
3.4 Предел детекции
Этот параметр был определен с помощью Первого Международного Стандарта антител к ВГЕ 
(N IB S C , 95/584). Этот международный стандарт является слабоположительным на 1 д М  к ВГЕ. Значение 
пол ученное при делении его оптической плотности на Cut-off составило >  1,2.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Для получения достоверных результатов необходимо соблюдать следующие правила:
Не смешивайте специфические реагенты ( см.2.2.1.) разных серий набора. Не смешивайте их с 
реа гента м и других производителей.
'  -  Разрешается смешивать Промывочный раствор. Раствор ТМБ и  Стоп-реагент разных серий
н а б о р а . Не смешивайте их с реагентами других производителей.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их загрязнение.
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в  чистой
посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для каждого образца или
р е а ге н та .
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и  
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам анализа.
В  случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и  обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует убедиться, 
ч то  все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, спектрофотометр, термостат) 
проходит регулярную проверку и  поддерживается в исправном состоянии.
Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок или 
автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок может 
привести к неверной интерпретации результатов анализа.
-  Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению оптической 
плотности образцов и  последующим неправильным результатам анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». Если 
температура инкубации отклоняется от 37±2°С, это может привести к снижению чувствительности анализа 
и/или биологической денатурации образцов и  реагентов. Следует периодически проверять показания 
датчика температуры.
Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или образцов. 
Несоблюдение температурного режима хранения может привести к биологической денатурации 
компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная идентификация 
может привести к ложным результатам и  постановке ошибочного клинического диагноза.
Чтобы исключить заражение персонала и загрязнение окружающей среды, следует  
соблюдать следующие правила:
При работе с потенциально инфекционным материалом и  во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
Не разрешается пипетировать ртом.
- Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и  курение в помещениях, 
предназначенных для работы с наборами.
-  Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и  Стоп-реагентом. Избегать 
попадания в глаза, на кожу и  слизистые. В  случае контакта тщательно промыть пораженный участок проточной 
во д о й .
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на присутствие 
H B sA g, антител к ВИЧ и  к вирусу гепатита С . Несмотря на полученные отрицательные результаты, 
следует учесть, что ни один из существующих методов анализа не может гарантировать полное
3/8


--- стр. 232 ---
твие указанных вирусов. По этой причине все образцы и  другие реагенты, содержащие сыворотку 
а д и  человека, следует считать потенциально инфекционными.
- Следует избегать разбрызгивания реагентов и  образования аэрозолей. Места, на которые 
тал пролитый материал, следует тщательно обработать 3%  раствором гипохлорита натрия. Исполь-
[м в а н н ы й  при этом протирочный материал следует считать потенциально инфицированным и  подвергнуть 
|^ютветствующ ей обработке перед утилизацией.
- Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных азидов 
а л л о в  в  чугунных и  медных водопроводных трубах, после слива использованных реагентов следует
[п р о м ы т ь  сток большим объемом проточной воды.
5 . МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В НАБОР
5 .1 . Материалы и оборудование, необходимые при ручной постановке
-М икропипетки, в том числе многоканальные, высокой точности (10-200 мкл, менее 3%  ошибки) со сменными 
наконечникам и.
-Градуированные цилиндры для разведения реагентов.
-Дистиллированная вода.
-Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
- А втом атическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления содержимого из лунок. 
-Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность 
раствора в лунках в диапазоне 0-3 ед. опт. плотн. при длинах волн 620,450 и  405нм.
М иллиметровая бумага.
5.2. Автоматическое проведение анализа
И зготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа на 
автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC.
В  случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю необходимо 
удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для иммуно- 
ф ерментного анализа производства RADIM.
6 . АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
При заборе венозной крови следует соблюдать правила асептики. Сыворотку или плазму крови 
получаю т по общепринятой методике подготовки образцов для лабораторного анализа. Не было 
обнаружено существенного влияния цитрата, ЭДТА и  гепарина на результаты анализа.
Образцы должны быть четко маркированы во избежание ошибочной интерпретации 
результатов. Настоятельно рекомендуется применять штрих-кодирование и  электронный датчик для 
считы вания штрих-кода, в особенности если набор применяется для скрининга донорской крови,
Не допускается применять образцы с видимыми признаками гемолиза (красный цвет) и  липемии 
(«молочный» оттенок), так как при этом может быть получен ложный результат. По этой же причине не 
допускается применять образцы, содержащие фибрин, твердые частицы или видимые признаки 
м икробной контаминации.
Сыворотку и  плазму допускается хранить при температуре +2°..8°С в течение 5  суток после 
сб о р а . При необходимости более длительного хранения образцы допускается хранить при температуре - 
2 0 °С  в  течение нескольких месяцев. Не допускается повторное замораживание/размораживание 
образцов, так как образовавшиеся при этом включения могут влиять на результат анализа.
При обнаружении твердых частиц, образцы перед проведением анализа центрифугируют в  
течение 2 0 минут при 2 0 0 0 об/мин, либо очищают фильтрованием (диаметр пор фильтра 0,2-0 , 8 мкм).
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА*
-  Доведите реагент ы до комнатной температуры (+18.. .25°С).
Тщательно перемеш айт е образцы перед проведением анализа.
7.1. Разведите анализируемые образцы 1:101 (например, 1000 мкл буфера для разведения +  10 мкл 
образца).
7.2. Промаркируйте лунки для контролей и  исследуемых образцов. Оставьте 1  лунку для обнуления 
(B lank), 2 лунки для отрицательного контроля и  одну лунку для положительного контроля.
7.3. Внесите во все лунки для образцов по 50 мкл буфера для нейтрализации. Вносить буфер для 
нейтрализации в лунки для контролей и  в лунку для обнуления не нужно.
7.4. Внесите по 100 мкл контролей в соответствующие лунки.
Внимание: Контроли готовы к использованию и  не требуют разведения.
7.5. Внесите в соответствующие лунки по 100 мкл разведенных анализируемых образцов.
П рим ечание: Стрипы следует заклеивать специальной пленкой, входящей в состав набора,
только в том случае, если анализ проводится вручную. При автоматической постановке анализа  
клейкая пленка не требуется.
4/8


--- стр. 233 ---
7 .6 . Инкубируйте планшет в течение 60 минут при 37±2 “ С.
7 .7 . Удалите содержимое лунок и  с помощью автоматического промывочного устройства промойте 
« и ф о п л а н ш е т 4-5 раз подготовленным к работе Промывочным раствором. При каждой промывке
яйте по 300 мкл Промывочного раствора в каждую лунку.
7 .8 . Внесите во все лунки, кроме лунки А1, по 100 мкл Конъюгата. Убедитесь, что окрашенный 
юр внесен во все необходимые лунки. Заклейте планшет клейкой пленкой.
Примечание: Во время внесения Конъюгата избегайте прикасаться наконечником пипетки к  
ценней стороне лунок во избежание контаминации.
7 .9 . Инкубируйте микропланшет в течение 60 минут при +37±2 "С.
7.10. Удалите содержимое лунок и  промойте лунки, как описано в  п . 7,7.
7.11. Внесите по 100 мкл Раствора ТМБ в каждую лунку, включая А1. Инкубируйте планшет при 
[ю м натной температуре (+18...25“ С) в течение 20 минут
Примечание: Во избежание высокого фонового сигнала, не допускайте попадания света на  
1шет.
7.12. Остановите ферментативную реакцию добавлением 100 мкл Стоп-реагента в каждую лунку, 
п-реагеит следует вносить в лунки в той же последовательности, как и  Раствор ТМБ, После внесения
реагента окраска Положительного контроля и  положительных образцов изменится с голубой на 
й в л ту ю .
С Х Е М А  АНАЛИЗА приведена на странице 7 .
8 . РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
1
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. Референсный 
ф и л ь т р  устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо вычитать величину 
теской плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех остальных лунок. В  случае, 
е с л и  значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, считывание результатов проводят 
п р и  длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не позже, чем через 15 минут после остановки 
р е а кц и и .
Примечание: При использовании автоматических анализаторов производства RADIM  и/или  
SEAC для планшетного ф ормата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять  
значения автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1. Анализ результатов
Определить среднюю оптическую плотность (ОП) Отрицательного контроля (ОК). Расчитать 
значение Cut-off по формуле (1):
Cut-off = ОПсрОК + 0,250
Примечание: Если расчет  результатов проводится операционной системой автоматического  
анализатора, следует убедиться, что задана правильная формула для вычисления значения Cut-off и  
последующего расчет а результатов.
Присутствие или отсутствие 1 д М  против ВГЕ определяется путем деления ОП образца на значение
Cut-off.
О бразцы , для которых при делении на Cut-off получено значение менее 1 ,0  - признают нереаю -ивны м и (н е  
с о д е р ж а и д и м и  1 д М  против ВГЕ).
О бразцы, для которых при делении на Cut-off получено значение более 1 ,2  - признают реактивны м и 
(сод ерж ащ им и 1 д М  против ВГЕ). Пациент должен получить соответствующую медицинскую помощь.
Область 1,0 -  1,2 является областью сомнительных значений. Если ОП образца попадает в  эти 
п р е д е л ы , результат считается сомнительным. Следует повторить анализ через 1-2 недели, получив для 
э то го  свежий образец сыворотки или плазмы.
Примечания;
•  Во избежание ошибок, интерпретацию результатов следует проводить под наблюдением
I  руководителя лаборатории.
• Любой положительный результат анализа должен быть подтвержден альтернативным  
‘ методом, прежде чем будет установлен диагноз «вирусный гепатит».
•  При сообщении результатов из лаборатории в другие подразделения следует  
предпринимать меры для исключения ошибок при передаче данных.
•  Устанавливать диагноз «вирусный гепатит» и доводить его до сведения пациента должен  
персонал, имеющий высшее медицинское образование и соответствующую специальную  
квалификацию.
Пример расчета результатов:
Запрещ ается исп о л ьзо ват ь при в еден н ы е н иж е значения вм ест о р еа л ьн ы х эксперим ент альны х 
Ш ы х.
5/8


--- стр. 234 ---
/on репликатов Отрицательного контроля ( ед.опт.плот.): 0,060 -  0,080
Среднее значение: 0,070
Критерий достоверности(< 0 ,100) Выполняется
ОП Положительного конт роля( ед.опт.плот.): 1,589
Критерий достоверности (> 0.500) Выполняется
Cut-Off = 0,070+0,250  =  0,320
on Образца 1  ( ед.опт.плот.): 0,070
Of! Образца 2 ( ед.опт.плот.): 1,690
Для Образца 1  O n /C u t-o ff<  1,0 Образец считается отрицательным
Для Образца 2 O n /C u t-o ff>  1,2 Образец считается положительным
9.2. Критерии достоверности
Прежде чем начать обсчет результатов, убедитесь, что О П контрольных точек соответствуют следующ им 
критериям .
Описание Условие
Blank < 0,100
Отрицательный контроль 
Положительный контроль
< 0,100 
>0,500
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ.
При несоответствии критериям следует немедленно известить руководство лаборатории. 
Некоторые возможные причины несоответствия приведены ниже. Перед повторным проведением анализа 
следует убедиться, что эти причины устранены.
Описание дефекта Возможная причина
ОП в лунке для 
обнуления >0,100
Раствор ТМБ был загрязнен в процессе анализа.
ОП Отрицательного 
контроля >  0,100
1 . Не были предварительно подобраны оптимальные параметры промывки 
и/или настройки промывочного устройства;
2. Использован неподходящий промывочный буфер либо магистрали 
промывочного устройства не были промыты соответствующим буфером 
перед началом работы;
3. Ошибка оператора в процессе внесения контролей (положительный 
контроль вместо отрицательного);
4. Контаминация флакона с Отрицательным контролем, либо лунок, в  
которые он был внесен, следами положительных образцов или Конъюгата;
5. Загрязнение пипеток следами положительных образцов или Конъюгата;
6.  Закупоренные или засоренные иглы автоматического промывочного 
устройства.
ОП положительного 
контроля <  0,500
1 . Нарушена последовательность выполнения анализа;
2. Ошибка оператора при нанесении Положительного контроля;
3. Параметры промывки или настройки промывочного устройства 
отличаются от предварительно выбранных оптимальных значений;
4. Контаминация Положительного контроля.«
В Г Е .
9.3. Интерпретация результатов
Нереактивные образцы признают отрицательными по содержанию 1 д М  против ВГЕ.
Реактивные и  сомнительные образцы признают положительными по содержанию 1 д М  против
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
Набор должен храниться при температуре +2.. .8°С.
Срок годности реагент ов указан на этикетках флаконов.
Вскрытые реагент ы  стабильны при температуре + 2 ...8 °С в т ечение 6 месяцев.
11. ОГРАНИЧЕНИЯ В ПРИМЕНЕНИИ АНАЛИЗА
Было обнаружено, что образцы с вьюокой концентрацией ревматоидного фактора, могут 
а ва ть ложноположительные результаты, не смотря на присутствие раствора для нейтрализации.
Замороженные образцы, содержащие фибрин, после разморозки могут давать ложные 
аультаты .
6/8


--- стр. 235 ---
СХЕМА АНАЛИЗА
Лунки
Реагенты
Blank ICONTROLl-l ICONTROLI + Образцы
(разведенные
1:1 0 1)
SOLNlNTR — ---- 50 мкл
CONTROL — 1 0 0 мкл ---- ----
CONTROL+ — ---- 1 0 0 мкл
Образцы (разведенные 1:101) ---- 1 0 0 мкл
Инкубация: 37±2°С, 60 мин. 
Промывка: 4-5 х 300 мкл.
КонъюгатCONJ — 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл
-
Инкубация: 37±2°С, 60 мин. 
Промывка: 4-5 х 300 мкл
Раствор ТМБ ТМВ 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл
Инкубация: комнатная температура, 20 мин.
Стоп-реагент |STOP 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл
Считывание: 450-405 нм (референсная длина волны: 620 нм).
Примерная схема нанесения образцов на микропланшет:
1 2 3 4 5 ' 6 '‘'8 ' 9 1 0 11 1 2
’А BLK ОБ5
В К(-) 0Б6
С К(-) 0Б7
D К(+) 0Б8
Е 0Б1 0Б9
F 0Б2 ОБ10
G ОБЗ 0Б11
Н 0Б4 0Б12
Условные обозначения:
BLK =  лунка для обнуления (Blank) 
К(-) = отрицательный контроль 
К(+) =  положительный контроль 
ОБ - образцы
7/8


--- стр. 236 ---
кнеральныи директор 
to o  «Компания Алкор Био»
уководитель лаборатории разработки ИФА-систем 
30 «Компания Алкор Био»
ырев М.В.
Сусорова А.С.
RADIM S.p.A. - Via del Маге, 125 - 00040 Pomezia (Roma) Italia 
Tel.: +39 06 91.249.1 - Fax: +39 06 91.249.443 
National Order Entrv:  +39 06 91.249.702 
Export Department:  +39 06 91.249.701 
Customer Care: +39 06 91.249.700 
info(S)radim.it - www.radim.it
RADIM


--- стр. 238 ---
«УТВЕРЖДАЮ ^
Г енераль1^й'^^^е1П^;^
ООО ^
'i'A
'  “ и ( D  ЧШвьгрев W.^.
« /i2~ »
4 > -л '------'''•> ^ '^ ep f)v p f
НАБОР РЕАГЕНТОВ  
ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ  
АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ГЕПАТИТА С  
В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
HCV АЬ
Только для in vitro диагностики
Набор разрешается применять для скрининга препаратов донорской крови  
и мониторинга пациентов, инфицированных вирусом гепатита С
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Всемирная Организация Здравоохранения (ВОЗ) дает следующее определение Гепатита С ; 
«Гепатит С  представляет собой вирусную инфекцию печени. До того, как в 1989 г. был 
идентифицирован возбудитель, это заболевание было известно как передаваемый парентеральным 
путем «Гепатит ни А, ни В». После того, как вирус Гепатита С (ВГС) был открыт и  охарактеризован, 
стала очевидна его роль в возникновении посттрансфузионных гепатитов и  тенденция вызывать 
персистирующую инфекцию.
ВГС является одной из основных причин острого гепатита и  хронического поражения печени, 
приводящего к циррозу и  раку печени. По некоторым оценкам, 170 миллионов человек во всем мире 
хронически инфицированы ВГС, от 3  до 4 миллионов человек заражаются ежегодно. ВГС 
передается преимущественно при контакте с кровью человека. Основной причиной инфицирования 
во всем мире является переливание необследованной крови и  повторное использование шприцев и  
игл без надлежащей стерилизации. В  настоящее время не существует вакцины против Гепатита С , а  
стоимость лечения хронической формы гепатита слишком высока для большинства жителей 
развивающихся стран. Таким образом, наиболее перспективными методами борьбы с Гепатитом С  в  
общемировом масштабе являются меры по предотвращению риска передачи вируса при 
медицинских процедурах (переливании крови, инъекциях и  т.п.) и  в социальных группах 
повышенного риска (например, при внутривенном употреблении наркотиков)».
ВГС, наряду с вирусами гепатитов А, В  и  D  -  один из группы вирусов, которыми вызвано 
большинство случаев вирусного гепатита. Это покрытый оболочкой вирус семейства Flaviviridae, 
содержащий РНК. Спектр хозяев вируса очень узок. На данный момент достоверно известно о  
способности вируса инфицировать только два вида -  человека и  шимпанзе. У обоих видов после 
инфицирования наблюдается сходная картина заболевания. Важной отличительной чертой вируса 
является достаточно высокая изменчивость его генома, с которой, в свою очередь, может быть 
связана выраженная тенденция возбудителя вызывать хроническую инфекцию (до 80% случаев). 
ВГС подразделяется на несколько генотипов. Определение генотипа важно для прогноза степени 
тяжести заболевания и  эффективности лечения.
Инкубационный период варьирует от 15 до 150 дней. При острой форме инфекции наиболее 
частыми симптомами являются слабость и  желтуха. Однако, большинство случаев (60-70%), 
включая случаи хронической инфекции, протекает бессимптомно. Хроническая инфекция 
развивается примерно у 80% инфицированных. За последующие 20-30 лет у 10-20% пациентов с 
хронической инфекцией развивается цирроз печени, а у 1-5% - рак печени. Большинство пациентов 
с раком печени, у которых не было обнаружено признаков инфицирования вирусом гепатита В , 
имели признаки инфицирования ВГС. Механизм развития рака под воздействием ВГС остается 
неясным. Кроме того, при Гепатите С  существенно усиливается тяжесть других патологий печени. В  
частности, у пациентов с алкогольным поражением печени в сочетании с Гепатитом С  поражение 
печени прогрессирует значительно быстрее.
Преимущественный путь распространения ВГС -  непосредственный контакт с человеческой 
кровью. Имеются многочисленные подтверждения факта передачи вируса через переливание 
необследованной крови, нестерильные многоразовые шприцы, иглы и  т.п. медицинское 
оборудование, а также через общие иглы при внутривенном введении наркотиков. Половой и
1/14


--- стр. 239 ---
перинатальны й путь передачи также возможен, но встречается намного реже. Возможны и  другие 
п у ти  передачи, например через культурные или социальные ритуалы, при которых нарушается 
целостность кожных покровов (татуировки, пирсинг, ритуальное обрезание и  т.п.), если 
используемые инструменты не подвергаются надлежащей стерилизации. ВГС не распространяется 
чер е з кашель и  чихание, пищу и  воду, общие столовые приборы или при бытовых контактах.
Как в развитых, так и  в развивающихся странах группу особого риска составляют 
внутривенные наркоманы, реципиенты необследованной донорской крови, гемофилики, пациенты, 
подвергавшиеся гемодиализу, и  лица, имеющие многочисленные незащищенные половые контакты. 
В  развивающихся странах до 90% пациентов с хронической формой Гепатита С  получали 
необследованную донорскую кровь или продукты крови, либо имели опыт внутривенного 
употребления наркотиков в прошлом или настоящем. По оценке ВОЗ, до 170 миллионов человек 
(3%  мирового населения) инфицированы вирусом Гепатита С  и  характеризуются повышенным 
риском развития цирроза и/или рака печени. По сравнению со странами Северной Америки и  
Европы частота случаев инфицирования вирусом Гепатита С высока в странах Африки. Восточного 
Средиземноморья, Юго-Восточной Азии и  в западной части Тихоокеанского региона.
Диагностические тесты для обнаружения ВГС используются для скрининга донорской крови и  
плазмы (что позволяет предотвратить распространение инфекции), для подтверждения диагноза и  
при выборе стратегии лечения больного. В  настоящее время имеются коммерческие 
иммуноферментные тест-системы для обнаружения специфических антител к ВГС. Эти наборы 
позволяют выявить более 95% случаев хронического инфицирования, но только 50-70% случаев 
острой инфекции. Для подтверждения положительного результата иммуноферментного анализа 
часто используется иммуноблоттинг на основе рекомбинантных белков. Этот метод позволяет 
определить антитела к отдельным антигенам вируса. Для подтверждения результатов 
серологических исследований и  для оценки эффективности противовирусной терапии применяются 
методы, основанные на обнаружении РНК вируса, такие как ПЦР. Положительный результат 
анализа означает наличие активной инфекции и  потенциальный риск распространения инфекции 
и/или развития хронических заболеваний печени.
Для лечения пациентов с хроническим Гепатитом С применяются противовирусные 
препараты, такие как интерферон, либо интерферон в комбинации с рибавирином, однако, 
стоимость лечения в этом случае очень высока. Терапия только интерфероном эффективна у 10- 
20%  пациентов, интерфероном и  рибавирином -  у 30-50%. Применение только рибавирина 
представляется неэффективным.
Вакцины против Гепатита С  не существует. В  этом направлении ведутся интенсивные 
исследования, однако разработку вакцины затрудняет как высокая частота мутаций в геноме вируса, 
так и  отсутствие достоверных сведений о защитном иммунном ответе вследствие инфекции. До сих 
пор неизвестно, способна ли иммунная система организма ликвидировать вирус. Однако 
отдельными исследованиями было показано присутствие нейтрализующих антител у пациентов, 
инфицированных ВГС.
При отсутствии вакцины, основные меры предотвращения инфекции должны включать: (а) 
скрининг доноров крови и  тканей; (Ь) инактивация вируса в препаратах, полученных из плазмы 
крови; (с) внедрение противоэпидемических мероприятий в медицинскую практику (в частности, 
надлежащая стерилизация медицинских и  стоматологических инструментов); (d) пропаганда 
соответствующих стереотипов поведения среди населения в целом и  медработников в частности с 
целью сократить злоупотребление инъекциями (е) просветительская работа в группах высокого 
риска, злоупотребляющих наркотиками и  сексуальными контактами.
В  геноме вируса закодированы отдельные структурные компоненты: белок нуклеокапсида, два 
гликопротеина наружной оболочки и  несколько функциональных белков, ответственных за 
репликацию вируса и  формирование его белков.
При сравнении изолятов вируса, полученных по всему миру, наиболее консервативной 
представляется область генома, кодирующая белок нуклеокапсида.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
На внутренней поверхности лунок микропланшета иммобилизованы антигены ВГС (реком­
бинантные пептиды core, NS3, NS4 и  NS5). Эти пептиды закодированы участками генома “core" и  
"’ns” и  представляют собой консервативные антигенные детерминанты, доминирующие при 
иммунном ответе.
В  лунки планшета вносятся предварительно разведенные образцы. Присутствующие в  
образцах антитела к ВГС связываются с антигенами, иммобилизованными на твердой ф азе.
Несвязавшиеся компоненты удаляются промывкой. После этого в лунки добавляется конъюгат 
поликлональных антител к иммуноглобулинам М  и  G  человека с пероксидазой, который связывается 
с иммобилизованными на твердой фазе антителами.
2/14


--- стр. 240 ---
После промывки в лунки добавляется раствор хромогена в субстратном буфере, что приводит 
к  развитию окраски под воздействием пероксидазы. Интенсивность окрашивания прямо 
пропорциональна концентрации антител к ВГС в образце. Интерпретация полученных результатов 
осущ ествляется с помощью значения Cut-off.
2.2. СОСТАВ НАБОРА
Р еагент Количество Состояние
1-й вариант 
комплектации
2-й вариант 
комплектации
IMICROPLATEI
Микропланшет 1  X  96 лунок 2 X  96 лунок Готов к использованию 
Ready for use
ICONTROL 1 - 
Отрицательный контроль 1  X  4,0 мл 2 X  4,0 мл Готов к использованию 
Ready for use
ICONTROL 1  +  
Положительный контроль 1  X  2,0 мл 1  X  4,0 мл Готов к использованию 
Ready for use
|слд
Калибровочная проба 2 флакона 4 флакона Лиофилизованнный
препарат
^Л/ASHBUF 1  20Х 
20х Промывочный буфер 1  X  50 мл 2 X  50 мл Концентрированный раствор 
Сопс.
IC O N Jl
Конъюгат 1  X  16 мл 2 X  16 мл Готов к использованию 
Ready for use
jSUBSlTMB 
Раствор хромоге 
субстратном б ус1
1на в  
эере
1  X  16 мл 2 X  16 мл Готов к использованию 
Ready for use
Аналит!
DILASI
/1ческий буфер 3 X  3,0 мл 5 X  4,0 мл Готов к использованию 
Ready for use
Раствор
0
DILSPEI
для разведения 
бразцов
1  X  50 мл 1  X  100 мл Готов к использованию 
Ready for use
Н,80д 1  0.3 М | 
Стоп-реагент 1  X  16 мл 2  X  16 мл Готов к использованию 
Ready for use
Количество реагентов рассчитано на 96  или на 192 лунки 
2.2.1. РЕАГЕНТЫ
Микропланшет IMICROPLATE
Набор на 96 определений: 1  штука 
Набор на 192 определения: 2 штуки
1 2  разборных стрипов по 8 лунок каждый. На внутренней поверхности лунок иммобилизованы 
рекомбинантные пептиды core, NS3, NS4 и  NS5. Стрипы упакованы в полиэтиленовый пакет с 
осушителем воздуха.
•  Отрицательный контроль CONTROL
Набор на 96 определений: 1  флакон (4 мл)
Набор на 192 определения: 2 флакона (по 4 мл каждый)
Готов к использованию. Раствор содержит 10 мМ  натрий-цитратный буфер (pH 6.0 +/-0.1), 1%  
белков козьей сыворотки, 0.5% Твин 20 и  консерванты (0.09% азид натрия и  0.1% Kathon GC). 
Раствор желто-зеленого цвета.
Положительный контроль ICONTROL
10 мМ натрий-цитратный буфер (pH 6.0 +/-0.1), 
1%  белков козьей сыворотки, 0.5% Твин 20 и
Набор на 96 определений: 1  флакон (2 мл)
Набор на 192 определения: 1  флакон (4 мл)
Готов к использованию. Раствор содержит 
человеческие антитела к вирусу гепатита С , 
консерванты (0.09% азид натрия и  0.1% Kathon GC).
Раствор темно-зеленого цвета.
•  Калибровочная проба |C AL 
Набор на 96 определений: 2 флакона 
Набор на 192 определения: 4 флакона 
Лиофилизованный препарат,
Перед использованием растворить содержимое флакона в указанном на этикетке объеме 
дистиллированной воды. Препарат содержит 10 мМ  натрий-цитратный буфер (pH 6.0+/-0.1), 
фетальную сыворотку крупного рогатого скота, человеческие антитела к ВГС и  консерванты (0,3
3/14


--- стр. 241 ---
Н Г /1 И Л  гентамицина сульфат и  0.1% Kathon GC). Калибровочная проба аттестована по Британскому 
( Р а б о ч е м у  стандарту антител к ВГС (код NIBSC 99/588-003-WI).
Примечание: Объем дистиллированной воды, необходимый для растворения содержимого  
( ф лакона, может быть различным для разных вариантов комплектаций реагента. Обратите  
имение, чтобы препарат был растворен именно в том  объеме воды, который указан на  
ХШкетке флакона.
20ХКонцентрат промывочного буфера IWASHBUF 
Н абор на 96 определений: 1  флакон (50 мл)
Н абор на 192 определения: 2 флакона (по 50 мл каждый)
Концентрированный раствор (20х).
После разведения 1х раствор представляет собой 10 мМ  
содерж ащ ий 0.05% Твин 20 и  0.1% Kathon GC.
фосфатный буфер (pH 7.0+/-0.2), 
Перед использованием развести необходимое
количество концентрата дистиллированной водой в соотношении 1:2 0.
•  Конъюгат ICONJ
Набор на 96 определений: 1флакон (16 мл)
Набор на 192 определения: 2 флакона (по 16 мл каждый)
Готов к использованию. Раствор содержит 10 мМ буфер Трис (pH 
сывороточного альбумина, конъюгат козьих поликлональных антител к
6.8+/-0.1), 5%  бычьего 
IgG и  1 д М  человека с
перкосидазой и  консерванты (0.1% Kathon ОС и  0.02% гентамицина сульфат). 
Раствор красного цвета.
ТМВ•  Раствор хромогена в субстратном буфере ISUBS
Набор на 96 определений: 1  флакон (16 мл)
Набор на 192 определения; 2 флакона (по 16 мл каждый)
Раствор содержит 50 мМ цитратно-фосфатный буфер (pH 3.5-3.8); 4% диметилсульфоксида,
0.03%  тетраметилбензидина (ТМБ) и  0.02% перекиси водорода(Нг0 2).
Примечание: раствор чувствителен к действию света. Хранить в заш,ищенном о т  света  
месте.
•  Аналитический буфер DILAS
Набор на 96 определений; 3 флакона (по 3 мл каждый)
Набор на 192 определения: 5  флаконов (по 4 мл каждый)
Готов к использованию. Раствор представляет собой 10 мМ буфер Трис (pH 8.0 +/-0.1), 
содержащий 0.1% Kathon О С.
Примечание: Раствор легко подвергается окислению. Израсходуйте все содержимое одного  
флакона, прежде чем вскрывать следующий флакон.
•  Стоп-реагент IH2SO4 |  0.3 М  
Набор на 96 определений: 
Набор на 192 определения:
1%
1 флакон (16 мл)
2 флакона (по 16 мл каждый)
0.3 М  раствор серной кислоты.
Внимание: вызывает раздражение кожи  и  слизистых (Xi R36/38; S2/26/30)
•  Раствор для разведения образцов: IDILSPE
Набор на 96 определений: 1  флакон (50 мл)
Набор на 192 определения: 1  флакон (100 мл)
Готов к использованию. Раствор содержит 10 мМ натрий-цитратный буфер (pH 6.0 +/-0.1), 
белков козьей сыворотки, 0.5% Твин 20 и  консерванты (0.09% азид натрия и  0.1% Kathon ОС).
•  Пленка для заклеивания планшета:
Набор на 96 определений: 2 ш т.
Набор на 192 определения: 4 ш т.
•  Инструкция по применению набора -  1  шт.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1 Диагностическая специфичность
Термин «диагностическая специфичность» означает способность анализа давать отрицательный 
результат при отсутствии специфического аналита в образце. Для определения диагностической 
специфичности исследовали образцы более чем 5000 доноров, сдававших кровь впервые. В  
качестве метода сравнения использовали набор, разрешенный к применению FDA СШ А. П ри 
обследовании 5043 доноров диагностическая специфичность составила 99.5%. При обследовании 
210 госпитализированных пациентов значение диагностической специфичности составило 99.5% .
Кроме того, для оценки диагностической специфичности исследовали 162 образца, потенциально 
способных проявлять интерференцию в настоящем анализе (от пациентов с другими 
инфекционными заболеваниями и  невирусными гепатитами, с высоким титром антител к белкам 
E.coli, после процедуры гемодиализа, от беременных женщин, а также гемолизованные и  
липемичные образцы). Диагностическая специфичность составила 100% .
4/14


--- стр. 242 ---
П р и  исследовании специфичности наряду с образцами сыворотки были использованы образцы 
п л а з м ы  крови, полученные несколькими стандартными методами с использованием цитрата, солей 
Э Д Т А  и  гепарина. Не было отмечено случаев ложноположительных реакций, связанных со способом 
1п а д го то в ки  образцов.
С  целью проверить влияние условий сбора и  хранения образцов на результат были исследованы 
1»мороженные образцы. Влияния замораживания на результат анализа отмечено не было.
3 .2  Диагностическая чувствительность
Терм ин «диагностическая чувствительность» означает способность анализа давать 
|положительный результат при наличии в образце специфического аналита.
Д ля определения диагностической чувствительности 359 образцов были исследованы в  
независим ой лаборатории. Диагностическая чувствительность составила 100%, При исследовании 
5 0  образцов в лаборатории изготовителя диагностическая чувствительность также составила 1 0 0% . 
В  исследование были включены положительные образцы от пациентов, инфицированных разными 
генотипам и ВГС,
Б ы ли также исследованы панели сероконверсии производства компании Boston Biomedica Inc. 
(С Ш А ). Результаты измерения приведены в таблице:
Панель сероконверсии WW HV 301
Образец Результат измерения  
ОП/ Cut-off
Результат  
измерения 
набором 
Ortho 
HCV3  
ОП/ Cut-off
Образец Результат  
измерения 
ОП/ Cut-off
Результат 
измерения 
набором 
Ortho 
HCV 3 
ОП/ Cut-off
01 11.3 > 5.0 1 1 3.2 > 5.0
0 2 11.3 > 5.0 1 2 11.3 > 5.0
03 11.3 >5.0 13 11.3 > 5.0
04 10.7 >5.0 14 11.2 > 5.0
05 0 .1 0 . 0 15 8.0 > 5.0
06 11.2 >5.0 16 6.3 > 5.0
07 4.2 >5.0 17 9.0 > 5.0
08 0 . 2 0.1 18 10.6 >5.0
09 8.5 > 5.0 19 1.6 > 5.0
1 0 11.3 > 5.0 2 0 10.7 > 5.0
5/\4


--- стр. 243 ---
ПанельРНУ 908
Панель PHV 920
Образец Результат  
измерения 
ОП/ Cut-off
Результат  
измерения 
набором 
Ortho 
HCV3  
ОП/ Cut-off
0 1 0.1 0.0
02 0.1 0.0
03 0.2 0.0
04 0.7 0.4
05 2.0 2.1
06 4.4 2.9
07 4.7 >4.8
08 4.9 >4.8
09 5.7 >4.8
10 6.2 >4.8
Образец Результат  
измерения 
ОП/ Cut-off
Результат 
измерения 
набором 
Ortho 
HCV3  
ОП/ Cut-off
01 0.2 0.0
02 0.2 0.0
03 0.2 0.0
04 0.4 0.5
05 0.5 0.7
06 1.4 1.6
07 3.7 3.2
08 5.2 3.7
09 6.0 4.5
10 7.2 4.8
1 1 7.9 4.9
12 8.1 5 .1
13 8.2 5 .1
Панель PHV 905
Образец Результат  
измерения 
ОП/ Cut-off
Результат измерения набором  
Ortho 
HCV3  
ОП/ Cut-off
01 0.2 0.0
02 0.2 0.0
03 0.2 0.0
04 0.4 0.5
05 0,5 0.7
06 1.4 1.6
07 3.7 3.2
08 5.2 3.7
09 6.0 4.5
Кроме того, бы ла исследоиана п анель EFS Ас HCV п роизводства ком пании EtablissemcMit 
Francais Du Sang, Ф ранция, (серия® 01/08.03.22С /01/А ):
Панель EFS Ac HCV
Образец Набор серии № 1 
ОП/ Cut-off
Набор серии№ 2  
ОП/ Cut-off
Набор серии №3  
ОП/ Cut-off
Ожидаемый результат
HCV1 2,2 2,4 2,6 положительный
HCV2 1.6 2,0 2,1 положительный
HCV3 1.5 1.7 1.6 положительный
HCV4 5,2 6,5 5,5 положительный
HCV5 1.6 1,8 1.6 положительный
HCV6 0,4 0,4 0,4 отрицательный
3.3 Аналитическая специфичность
Для определения этого параметра два образца (отрицательный и  слабоположительный) были 
исследованы в 16 репликатах каждый в трех независимых экспериментах:
Набор серии №1202
Средние значения Эксперимент 1 Эксперимент 2 Эксперимент 3 Среднее
значение
6/14


--- стр. 244 ---
О П  при длине волны 
450 нм
0,094 0,099 0,096 0,096
Стандартное
отклонение
0,008 0,007 0,008 0,007
К В , % 8,7 6 , 6 7.9 7,7
КП №2 (N = 16)
Средние значения Эксперимент 1 Эксперимент 2 Эксперимент 3 Среднее
значение
О П  при длине волны 
450 нм
0,396 0,403 0,418 0,406
Стандартное
отклонение
0,023 0,029 0,027 0,026
К В , % 5,9 7,1 6,4 6,5
Отношение
On/Cut-off
1.1 1.1 1 . 2 1,1
Отрицательный образец (N = 16)
; Средние значения Эксперимент 1 Эксперимент 2 Эксперимент 3 Среднее
значение
О П  при длине волны 
450 нм
0.097 0.096 0.094 0.096
1
Стандартное
отклонение
0.009 0 , 0 1 0 0.008 0,009
К В , % 8.9 1 0 .1 8.4 9 .1
КП№2(М = 16)
Средние значения Эксперимент 1 Эксперимент 2 Эксперимент 3 Среднее
значение
О П  при длине волны 
450 нм
0.400 0.395 0.393 0,396
Стандартное
отклонение
0 . 0 2 1 0.025 0.026 0,024
К В , % 5,4 6 , 2 6 , 6 6,1
Отношение
On/Cut-off
1 . 2 1 , 2 1.1 1 .2
Отрицательный образец (N = 16)
Средние значения Эксперимент 1 Эксперимент 2 Эксперимент 3 Среднее
значение
О П при длине волны 
450 нм
0,087 0,091 0,088 0,089
Стандартное
отклонение
0,009 0,007 0,008 0,008
К В , % 1 0 , 0 8 , 2 8 , 6 8,9
КП № 2 (N = 16)
Средние значения Эксперимент 1 Эксперимент 2 Эксперимент 3 Среднее
значение
О П при длине волны 
450 нм
0,386 0,390 0,391 0,389
Стандартное
отклонение
0,023 0 , 0 2 1 0,023 0 , 0 2 2
К В , % 6 , 0 5,3 5,8 5,7
Отношение
On/Cut-off
1,1 1 . 2 1 , 2 1 ,2
Наблюдаемая вариабельность не была вызвана ошибочной идентификацией образцов.
3.4 Аналитическая чувствительность
Аналитическая чувствительность выражается минимальным количеством определяемого аналита, 
выявляемым с помощью данного метода. Этот параметр был определен с помощью Британского 
Рабочего стандарта антител к ВГС (код NIBSC 99/588-003-WI). Были исследованы различные
7/14


--- стр. 245 ---
разведения этого стандарта в плазме крови человека, не содержащей антител к ВГС. Результаты 
измерения (отношение ОП образца/Cut-off) приведены в таблице:
Разведение стандарта Набор серии №1 Набор серии №  2
IX  ■ 2.0 2.0
2Х 1 .1 1.2
4Х 0,7 0 ,8
8 Х 0,5 0,5
Плазма крови, не содержащая антител к ВГС 0,3 0,3
Дополнительно был исследован контрольный образец Accurun 1  series 3000 производства компании 
Boston Biomedica Inc.,США:
Номер серии Номер серии 
Accurun 1
Отношение ОП образца/ Cut-off
1 2 0 1 3000 1.5
0602 3000 1.5
1 2 0 2 3000 1,9
7 образцов, давших положительные результаты при исследовании набором Ortho HCV 3.0 
SAVe (серия №  ЕХЕ065-1), были разведены плазмой крови, не содержащей антител к В ГС . 
Полученные предельные разведения были повторно исследованы наборами Ortho и  RADIM (серия №  
1202). Результаты измерения приведены ниже:
Образец Предельное
разведение
Результат измерения  
набором 
ОП/ Cut-off
Результат измерения  
набором 
Ortho 3.0 
ОП/ Cut-off
256 X li? li?
256 X 1,9 0.7
256 X 2.4 Ж
128 X Ж
85 X 3.3 1.4
128 X 2.2 0,8
135 X 3.2 2.2
J
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Проведение анализа требует специальной квалификации лабораторного персонала. 
Исследование должно выполняться под руководством лица, имеющего высшее медицинское 
образование.
Если набор предполагается использовать для скрининга донорской крови и  ее компонентов, 
лаборатория должна иметь соответствующий сертификат и  разрешение национальных органов власти 
(Министерства здравоохранения или аналогичного учреждения) на проведение такого вида анализов.
При работе с набором персонал должен надевать лабораторную спецодежду, защитные очки и  
резиновые перчатки, не содержащие талька. Следует избегать использования колющих и  режущих 
инструментов (например, игл и  лезвий). Весь персонал должен пройти специальную подготовку по 
м ерам  биологической безопасности в соответствии с рекомендациями Национального института 
здравоохранения (Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, 
противоэпидемического режима и  личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) 
санитарно-эпидемиологических учережений системы Министерства Здравоохранения СССР, 1981).
Весь персонал, имеющий контакт с образцами сыворотки и  плазмы крови, должен быть 
вакцинирован против Гепатитов А и  В .
При вскрытии упаковок с компонентами набора и  во время проведения анализа следует 
приним ать меры по защите от попадания пыли или микроорганизмов из окружающего воздуха. Раствор 
1  хром огена в  субстратном буфере следует беречь от света. Во время проведения анализа следует 
исклю чить вибрацию поверхности рабочего стола.
Не допускается использовать в одном анализе компоненты набора из различных партий. 
Использование в одном анализе компонентов двух разных наборов одной партии не рекомендуется.
Перед проведением анализа следует убедиться, что все реагенты прозрачны и  не содержат 
ви д и м ы х твердых частиц или осадков.
Для предотвращения взаимного загрязнения образцов следует использовать отдельный 
(норазовы й наконечник для каждого образца.
8/14


--- стр. 246 ---
Для предотвращения взаимного загрязнения реагентов следует использовать отдельный 
одноразовы й наконечник для каждого реагента.
Не допускается использовать набор по истечении срока годности, указанного на наружной 
уп а ко вке  и  этикетках флаконов.
Все образцы пациентов следует считать потенциально инфекционными. В  отношении образцов 
сы воротки следует соблюдать требования 26 класса санитарно-противоэпидемической безопасности, как 
рекомендовано в руководстве «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, 
противоэпидемического режима и  личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) 
санитарно-эпидемиологических учережений системы Министерства Здравоохранения» СССР, 1981.
Для предотвращения загрязнения реагентов рекомендуется при приготовлении промывочного 
буф е р а  и  других манипуляциях использовать одноразовую пластиковую лабораторную посуду.
При уничтожении образовавшихся в процессе использования набора отходов следует 
руководствоваться национальными нормативными документами, регламентирующими обращение с 
химическими, биологическими отходами. В  частности, жидкие отходы, образовавшиеся при промывании 
планш етов и  утилизации остатков контролей и  образцов, следует считать потенциально инфекционным 
материалом и  соответственно инактивировать. Рекомендуемые методы инактивации: обработка 
раствором  хлорной извести с конечной концентрацией 1 0%  в течение 16-18 часов, либо 
автоклавирование при температуре 1 21  “С  в течение 2 0 минут.
Случайно пролитый материал следует собрать бумажным полотенцем, смоченным раствором 
хлорной извести. Затем загрязненный участок протереть бумажным полотенцем, смоченным водой. 
Использованный протирочный материал собрать в специальный контейнер для лабораторного мусора и  
утилизировать соответствующим образом.
Стоп-реагент вызывает раздражение кожи слизистых. В  случае разбрызгивания следует 
пром ы ть загрязненный участок большим количеством воды.
Прочие отходы, образовавшиеся при работе с набором (например, использованные 
микропланшеты или наконечники) следует считать потенциально инфекционным материалом и  
утилизировать в соответствии с национальными нормативами по утилизации лабораторных отходов.
5. МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В НАБОР
5.1. Материалы и оборудование, необходимые при ручной постановке анализа
- Микропипетки, в том числе многоканальные, высокой точности (10-200 мкл, менее 3%  ошибки) со 
сменными наконечниками.
- Дистиллированная или деионизованная вода.
-  Таймер, рассчитанный на 60 и  более минут.
-  Бумажные полотенца.
-  Защитные перчатки.
-  Градуированные цилиндры для разведения реагентов.
-  Термостатируемый инкубатор для микропланшетов (суховоздушный или водяной), 
позволяющ ий поддерживать температуру +37°±2С.
-  Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий проводить измерения при 
длинах волн 450 и  405 нм. Желательно наличие дополнительного светофильтра 620-630 нм (длина волны 
сравнения).
-  Автоматическое устройство для промывки микропланшетов.
-  Устройство для перемешивания образцов (вортекс).
-  Миллиметровая бумага.
5.2. Автоматическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа на 
автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC.
В  случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю необходимо 
удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для 
иммуноферментного анализа производства RADIM.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
-  При заборе венозной крови следует соблюдать правила асептики. Сыворотку или плазму крови 
получают по общепринятой методике подготовки образцов для лабораторного анализа. Н е было 
обнаружено существенного влияния цитрата, солей ЭДТА и  гепарина на результаты анализа.
-  Образцы должны быть четко маркированы во избежание ошибочной интерпретации 
результатов. Настоятельно рекомендуется применять штрих-кодирование и  электронный датчик для 
считывания штрих-кода, в особенности если набор применяется для скрининга донорской крови.
-  Не допускается применять образцы с видимыми признаками гемолиза (красный цвет) и  
п и п е м и и  («молочный» оттенок), так как при этом может быть получен ложный результат. По этой же 
п р и ч и н е  не допускается применять образцы, содержащие фибрин, твердые частицы или видимые 
п р и зн а ки  микробной контаминации.
7
J  J
9/14


--- стр. 247 ---
-  Сыворотку и  плазму допускается хранить при температуре +2°..8°С в течение 5  суток после 
сб о р а . При необходимости более длительного хранения образцы допускается хранить при температуре -  
2 0 °С  в течение нескольких месяцев. Не допускается повторное замораживание/размораживание 
образцов, так как образовавшиеся при этом включения могут влиять на результат анализа.
-  При обнаружении твердых частиц, образцы перед проведением анализа центрифугируют в  
течение 2 0 минут при 2 0 0 0 об/мин, либо очищают фильтрованием (диаметр пор фильтра 0,2-0 , 8 мкм).
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА*
7.1. Автоматическая постановка анализа
Если анализ проводится на автоматическом анализаторе, рекомендуется задать настройки 
таким образом, чтобы дозатор сначала отбирал 200 мкп Раствора для разведения образцов, затем 10 
м кл образца и  после этого вся смесь переносилась непосредственно в лунку планшета. Перед отбором 
следующего образца игла дозатора должна быть тщательно промыта во избежание взаимного 
загрязнения образцов. Контроли и  калибровочная проба вносятся в соответствующие лунки в  
количестве 2 0 0 мкл.
Примечания: 
1) Рекомендуется визуально проконтролировать правильность разведения и  
внесения образцов. Следует убедиться, что окраска отрицательного контроля осталась желто-  
зеленой, а окраска всех остальных образцов изменилась на темную сине-зеленую.
2) При автоматической постановке анализа не требуется заклеивать стрипы клейкой  
пленкой.
При выполнении последующих операций следуйте рекомендациям, изложенным в  разделе 
«Ручная постановка анализа».
Настоятельно рекомендуется настроить прибор таким образом, чтобы промежуток времени 
между внесением первого и  последнего образца был зафиксирован и  учтен при последующей 
промывке.
7.2. Ручная постановка анализа
7.2.1. Установите на рамку необходимое количество стрипов. Лунку Д 1  оставьте пустой для 
обнуления прибора (Blank).
7.2.2. Внесите в соответствующие лунки по 200 мкл Отрицательного контроля (в трех 
репликатах), 200 мкл Положительного контроля (в монопликате) и  по 200 мкл Калибровочной пробы (в 
дубликате). Контроли и  Калибровочная проба не требуют предварительного разведения!
7.2.3. Добавьте во все лунки, предназначенные для исследуемых образцов, по 200 мкл 
Раствора для разведения образцов. Затем добавьте в каждую лунку по 10 мкл соответствующего 
образца. Осторожно перемешайте, избегая расплескивания во избежание контаминации соседних 
лунок.
Примечание: 
Убедитесь, что образцы были действительно добавлены в лунки. Это можно  
установить по изменению окраски раствора с желто-зеленой на темную сине-зеленую.
7.2.4. Внесите во все лунки с образцами, Контролями и  Калибровочной пробой по 50 мкл 
Аналитического буфера. Убедитесь, что окраска раствора в лунках изменилась на синюю.
7.2.5. Закпейте стрипы специальной пленкой, входящей в состав набора и  инкубируйте 
микропланшет в течение 45 минут при +37°±2С.
7.2.6. С помощью автоматического промывочного устройства промойте микропланшет 4-5 раз 
подготовленным к работе Промывочным буфером. При каждой промывке добавляйте по 350 мкл 
Промывочного буфера в каждую лунку.
7.2.7. Внесите во все лунки, кроме лунки А1, по 100 мкл Конъюгата. Убедитесь, что окрашенный 
раствор внесен во все необходимые лунки. Заклейте планшет клейкой пленкой.
Примечание: Во время внесения Конъюгата избегайте прикасаться наконечником пипетки к  
внутренней стороне лунок во избежание контаминации.
7.2.8. Инкубируйте микропланшет в течение 45 минут при +37°±2С.
7.2.9. Промойте микропланшет (см. п.7.2.6.).
7.2.10. Внесите по 100 мкл Раствора хромогена в субстратном буфере в каждую лунку, включая
А1.
7.2.11. Инкубируйте планшет при комнатной температуре (+18...25°С) в течение 15 минут 
Примечание: Во избежание высокого фонового сигнала, не допускайте попадания света на
планшет.
7.2.12. Остановите ферментативную реакцию добавлением 100 мкл Стоп-реагента в каждую 
л у н ку . Стоп-реагент следует вносить в лунки в той же последовательности, как и  Раствор хромогена на 
ста д и и  7.2.10. После внесения Стоп-реагента окраска Положительного контроля и  положительных 
5бразцов изменится с голубой на желтую.
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 13.
10/14


--- стр. 248 ---
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. Референсный 
ф ильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо вычитать величину 
оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех остальных лунок. В  
случае, если значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, считывание результатов 
проводят при длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не позже, чем через 15 минут 
после остановки реакции.
Примечание: при использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или SEAC 
для планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять значения 
автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и  620 нм.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1. Критерии достоверности
П ри каждой постановке анализа производится проверка правильности определения, которая 
позволяет удостовериться в том, что аналитические характеристики набора соответствуют заданным 
нормативам.
Следует убедиться, что выполняются следующие условия:
Контролируемый показатель Требуемое значение:
Оптическая плотность (ОП) раствора в лунке для 
обнуления (Blank) <0,100 ( при длине волны 450 нм)
О П  Отрицательного контроля <0,050 (при длине волны 450 нм, после 
обнуления)
О П  Калибровочной пробы Отношение ОП/Cut-off >1,1
О П  Положительного контроля >1,000 (при длине волны 450 нм)
В  том случае, если указанные выше условия выполняются, переходите к расчету результатов.
В  противном случае результат анализа считается недостоверным. При обнаружении 
недостоверного результата следует немедленно известить руководство лаборатории. Некоторые 
возможные причины недостоверных результатов приведены ниже. Перед повторным проведением 
анализа следует убедиться, что эти причины устранены.
11/14


--- стр. 249 ---
Описание дефекта Возможная причина
ОП в лунке для 
обнуления >0,100
Раствор ТМБ в субстратном буфере был загрязнен в процессе анализа.
ОП Отрицательного  
контроля > 0,050
1 . Не были предварительно подобраны оптимальные параметры 
промывки и/или настройки промывочного устройства;
2. Использован неподходящий промывочный буфер либо магистрали 
промывочного устройства не были промыты соответствующим буфером 
перед началом работы;
3 . Ошибка оператора в процессе внесения контролей (положительный 
контроль вместо отрицательного);
4. Контаминация флакона с Отрицательным контролем, либо лунок, в  
которые он был внесен, следами положительных образцов или 
Конъюгата;
5 . Загрязнение пипеток следами положительных образцов или 
Конъюгата;
6.  Закупоренные или засоренные иглы автоматического промывочного
устройства._______________
4
Калибровочная проба:  
отношение 
On/Cut-off < 1,1
1 . Нарушена последовательность выполнения анализа;
2 . Ошибка оператора при нанесении Калибровочной пробы (например, 
вместо нее внесен Отрицательный контроль);
3. Параметры промывки или настройки промывочного устройства 
отличаются от предварительно выбранных оптимальных значений;
4. Контаминация Калибровочной пробы.
ОП Положительного  
контроля < 1,000
1 . Нарушена последовательность выполнения анализа;
2. Ошибка оператора при нанесении Положительного контроля;
3 . Параметры промывки или настройки промывочного устройства 
отличаются от предварительно выбранных оптимальных значений;
4. Контаминация Положительного контроля.
____________________
9.2. Вычисление значения Cut-off
Для расчета результатов применяется значение cut-off, которое определяют по формуле:
Cut-Off = Среднее значение ОП Отрицательного контроля + 0.350
Полученное значение используется для интерпретации результатов (см. далее.)
Примечание: Если расчет результатов проводится операционной системой автоматического  
анализатора, следует убедиться, что задана правильная формула для вычисления значения cut-off  
и последующего расчета результатов.
9.3. Интерпретация результатов
Результаты интерпретируются на основании соотношения ОП образца/Cut-off:
Отношение ОП/ Cut-off
Интерпретация результата
<0,9 Отрицательный
0,9-1,1 Сомнительный
>  1,1 Положительный
Отрицательный результат означает, что пациент не был инфицирован ВГС и  что данный 
препарат донорской крови можно использовать для переливания.
У всех пациентов с сомнительным результатом следует повторить анализ через 1-2 недели, 
получив для этого свежий образец сыворотки или плазмы. Препарат донорской крови, давший 
сомнительный результат, не допускается использовать для переливания.
Положительный результат анализа указывает на наличие инфекции ВГС. Пациент должен 
получить соответствующую медицинскую помощь, а препарат донорской крови должен быть 
уничтожен.
Примечания:
• Во избежание ошибок, интерпретацию результатов следует проводить под наблюдением  
руководителя лаборатории.
• Любой положительный результат анализа должен быть подтвержден альтернативным  
методом (подтверждающим тестом, предназначенным для определения антител класса IgG),  
прежде чем будет установлен диагноз «вирусный гепатит».
• При определении аналитических характеристик набора было показано, что данный анализ  
способен обнаруживать сероконверсию (появление антител к соге-антигену ВГС) ранее некоторых
12/14


--- стр. 250 ---
других коммерческих наборов. Следовательно, положительный результат, не совпадающий с  
результатами других коммерческих тестов, нельзя однозначно считать ложноположительным.  
Такие образцы в любом случае следует исследовать с помощью подтверждающего теста.
• Поскольку настоящий анализ способен определять в том  числе и антитела класса 1д М , его  
результаты могут в ряде случаев не совпадать с результатами других коммерческих наборов для  
определения антител к ВГС, в состав которых не входит конъюгат антител к 1дМ  человека с  
пероксидазой. Подобные наборы не позволяют обнаруживать антитела класса 1дМ , поэтому в  
таких случаях для правильной диагностики инфицирования ВГС требуется анализ,  
подтверждающий наличие 1дМ .
• При сообщении результатов из лаборатории в другие подразделения следует  
предпринимать меры для исключения ошибок при передаче данных.
• Устанавливать диагноз «вирусный гепатит» и доводить его до сведения пациента должен  
персонал, имеющий высшее медицинское образование и соответствующую специальную  
квалификацию.
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
-  Набор должен храниться при температуре +2...8°С.
Срок годности реагентов указан на этикетках флаконов.
Вскрытые реагенты стабильны при температуре +2.,.8°С в течение 2 месяцев.
i
11. ОГРАНИЧЕНИЯ В ПРИМЕНЕНИИ АНАЛИЗА
Менее чем у 1%  нормальной популяции 
ложноположительный результат анализа.
СХЕМА АНАЛИЗА
людей отмечается воспроизводимый
Контроли и  Калибровочная проба 2 0 0 мкл
Раствор для разведения образцов 2 0 0 мкл
Образец 1 0 мкл
Аналитический буфер 50 мкл
1  инкубация 45 минут
При температуре +37°С
Промывка 4-5 раз 
350 мкл
Конъюгат 1 0 0 мкл
2 инкубация 45 минут
При температуре +37°±2С
Промывка 4-5 раз 
350 мкл
Раствор ТМБ в субстратном буфере 1 0 0 мкл
3 инкубация 20 минут
При комнатной температуре
Стоп-реагент 1 0 0 мкл
Измерение оптической плотности при длине волны 450-405 нм и  620-630 нм
13/14


--- стр. 252 ---


--- стр. 253 ---
2011 г
НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНА  
ВИРУСА ГЕПАТИТА D В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
HDVAg
Только для in vitro диагностики
1 . НАЗНАЧЕНИЕ
Вирус Гепатита D  (ВГО) -  РНК-содержащий дефектный вирус, содержащий коровый антиген (HDAg) 
и  поверхностный антиген вируса гепатита В  (HBsAg). Этот вирус при репликации нуждается в хелперной 
функции ВГВ.
ВГО  инфекция встречается у пациентов с острым или хроническим Гепатитом В . П ри 
одновременном заражении ВГВ и  ВГО , заболевание протекает тяжелее, но по клинической картине и  
биохимическим показателям крови коинфекцию не возможно отличить от Гепатита В , У пациентов с 
хронической ВГВ инфекцией, репликация ВГО  может протекать незаметно, сопровождаясь клинической 
картиной, похожей на обострение хронического Гепатита В .
Определение специфических серологических маркеров (ВГО антигена или антител к ВГО) очень 
важно для выявления вируса, вызвавшего инфекцию, и  дальнейшего лечения пациента.
Обнаружение в крови специфических антител позволяет определить стадию заболевания и  следить 
за его течением.
Тест-система HOV Ад предназначена для качественного определения антигена ВГО  в сыворотке и  
плазме крови человека.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
В  наборе реагентов реализован «сэндвич«-вариант твердофазного иммуноферментного анализа 
Для этого использованы антитела с различной эпитопной специфичностью к антигену Гепатита О . Одно 
из них иммобилизовано на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок), второе конъюгировано с 
пероксидазой хрена. В  лунках во время первой инкубации, при добавлении исследуемого образца 
происходит высвобождение антигена из вирусных частиц и  его взаимодействие с антителами твердой 
фазы. При удалении содержимого из лунок и  промывке происходит удаление несвязавшихся 
компонентов. Во время второй инкубации происходит взаимодействие образовавшегося комплекса 
«антитело-антиген» с антителами, конъюгированными с пероксидазой. При удалении содержимого из 
лунок и  промывке происходит удаление избытка конъюгата, не связавшегося с комплексом. Во время 
инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо 
пропорциональна количеству антигена в анализируемых пробах. После измерения оптической плотности 
раствора в лунках наличие HOVAg оценивается относительно значения cut-off (параметр S/CO позволяет 
проводить полуколичественное определение антигена).
2.2. СОСТАВ НАБОРА
Реагент Количество Состояние
MICROPLATE
Ликропланшет 1  X  96 лунок Готов к использованию 
Ready for use
Отрии
ICONTROLl- 
ательный контроль 1  X  2,0 мл Готов к использованию 
Ready for use
Полоя
CONTROL +  
<ительный контроль 2 флакона Лиофилизованнный препарат
^АЦ
Калибровочная проба 2 флакона Лиофилизованнный препарат
IW ASHBUF 2 0 X 1  
20х Промывочный буфер 1  X  50 мл Концентрированный раствор 
Сопс.
IDILSPS
1  Раствор для разведения образцов 1  X  16 мл Готов к использованию 
Ready for use
1/9


--- стр. 254 ---
^ONJl
Конъюгат 1  X  16 мл Готов к использованию 
Ready for use_________
Раствор ТМБ
п т 1  X  14 мл Готов к использованию 
Ready for use_________
Стоп-реагент
STOP 1  X  14 мл Готов к использованию 
Ready for use_________
2.2.1. Реагенты
• Иммуносорбент -  планшет (MICROPLATE) / Microplate: 1  планшет из 12 разборных стрипов 
п о  8 л ун о к (всего 96 лунок). Лунки стрипов планшета покрыты мышиными моноклональными антителами к  
а н т и ге н у  вируса гепатита D . Неиспользованные стрипы хранить при температуре +2...8°С в  плотно 
з а к р ы т о м  пластиковом пакете (прилагается).
•  Отрицательный контроль (CONTROL -) I Negative Control: 1  флакон. Раствор бледно-желтого 
ц в е т а  н а  основе 100 мМ трисового буфера, pH 7,4±0,1, содержит 5% козьего сывороточного альбумина. 
Г о т о в  к использованию. Консерванты: 0,09% азид натрия и  0,1% Катон GC.
• Положительный контроль (CONTROL +) / Positive Control: 2 флакона. На основе 25 мМ  
тр и с о в о го  буфера, pH 7,4±0,1, содержит 5% козьего сывороточного альбумина и  рекомбинантный антиген 
в и р у с а  гепатита D  в высокой концентрации. Лиофилизован. Консерванты: 0,02% гентамицина сульфат и
0 ,1 %  Катон G O . Перед использованием растворить содержимое флакона в 2 мл дистиллированной воды. 
В осстановленны й реагент хранить при -20°С. Повторное замораживание не допускается.
•  Калибратор (CAL) / Calibrator: 2 флакона. Содержит фетальную бычью сыворотку и  
реком бинантны й антиген вируса гепатита D  в низкой концентрации. Консерванты: 0,02% гентамицина 
с ул ь ф а т и  0,1% Катон GC. Лиофилизован. Перед использованием растворите содержимое флакона в  
о б ъ е м е  дистиллированной воды, который указан на этикетке. Восстановленный реагент хранить при 
-20°С . Повторное замораживание не допускается.
Внимание: Объем, необходимый для растворения содержимого флакона, может быть различным 
д л я  разных партий реагента. Обратите внимание, чтобы препарат был растворен именно в  том объеме 
в о д ы , который указан на этикетке флакона.
•  Промывочный раствор 20х (WASHBUF 20Х) / Washing buffer concentrate: 1  флакон 1 х 
П ром ы вочны й буфер представляет собой 10 мМ  фосфатный буферный раствор, pH 7,0±0,2, содержащий
0 ,0 5 %  Твин 20 и  0,1% Катон GC. Перед использованием развести необходимое количество концентрата 
дистиллированной водой в соотношении 1:20. В  случае образования нерастворимых кристаллов поместите 
р а с т в о р  в  термостат (+37°С) на несколько м инут. П риготовленный промывочный раствор хранить не более 7  дней при 
+ 2 ...8 °С .
• Конъюгат (CONJ) / Enzyme Conjugate: 1  флакон. Раствор красного цвета на основе 10 м М  
трисового буфера, pH 6,8±0,1, содержит поликлональные антитела к антигену вируса гепатита D , 
конъюгированные с пероксидазой хрена (HRPO), 5% БСА, 1%  мышиной сыворотки, 0,02% гентамицина 
сульф ата и  0,1% Катон GC. Готов к использованию.
• Раствор для разведения образцов (DILSPE) / Specimen Diluent: 1  флакон, Раствор на основе 
1 0  м М  фосфатного буфера, pH 7,4±0,1, содержит 6%  NP40. Готов к использованию. Консерванты: 0,09% 
а з и д  натрия и  0,1% Катон GC.
• Раствор ТМБ (ТМВ): 1  флакон. Раствор тетраметилбензидина в цитратно-фосфатном буфере, 
сод ерж ащ ем  DMSO и  Н2О2.  Готов к использованию.
• Стоп-реагент (STOP) / Blocking Reagent: 1  флакон. 1Н HCI. Готов к использованию
•  Бумага для заклеивания планшета (СРА) / Adhesive plate sealers.
•  Пластиковый пакет.
3 . АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3 .1  Диагностическая чувствительность и специфичность
Диагностическая чувствительность определялась на панели образцов, которые были определены 
к а к  положительные референсной Европейской тест-системой. Положительные образцы были получены от 
п а ц и е н то в с острой ВГО  инфекцией.
Диагностическая специфичность определялась на панели из 250 образцов, полученных от доноров 
и  пациентов, не имеющих иммунитета к ВГЛ, которые были определены как отрицательные референсной 
тест-систем ой.
Н е было обнаружено ложноположительных реакций при тестировании анализируемых образцов 
;  р а з н ы х  типов.
Н е было также обнаружено влияния на специфичность заморозки анализируемых образцов.
Были протестированы образцы пациентов с другими вирусными заболеваниями (ВГС, ВГА) и  с 
ге п а ти та м и  невирусной природы. Ложноположительных реакций обнаружено не было.
В  общей сложности в независимой референсной лаборатории было протестировано более 300 
о б р а зц о в . Диагностическая специфичность составила > 98%. Диагностическая чувствительность 
со ста ви л а  >  98% ,
2/9


--- стр. 255 ---
3.2 Прецизионность
Три образца, с разной концентрацией антигена ВГО , анализировались в трех независимых 
постановках. В  каждой из постановок образцы были нанесены в 16 репликатах. Результаты, полученные 
п р и  изучении прецизионности трех лотов тест-системы, представлены в нижеследующих таблицах. 
Лот№ 1102
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
О П , 450 нм, ед.опт.пл 0 , 0 2 1 0 , 0 2 0 0,019 0 , 0 2 0
С т. откп. 0,004 0,005 0,004 0,004
КВ, % 17,7 22,7 19,3 19,9
Внутренний Золотой Стандарт (1/8)
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
О П , 450 нм, ед.опт.пл 0,167 0,166 0,169 0,167
С т. откл. 0,006 0,008 0,005 0,006
КВ, % 3,9 4,6 3 ,1 3,9
S/CO 1,3 1,4 1.4 1,4
Внутренний Золотой Стандарт
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
О П , 450 нм, ед.опт.пл 2,416 2,404 2,372 2,397
Ст. откл. 0,150 0,143 0,130 0,141
КВ , % 6 . 2 5,9 5,5 5,9
S/CO 19,9 2 0 , 0 19,9 19,9
Лот № 0103
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
О П , 450 нм, ед.опт.пл 0,019 0 , 0 2 0 0,018 0,019
Ст. откл. 0,003 0,004 0,003 0,003
КВ , % 17,6 19,4 ■ ■  17,7 18,2
Внутренний Золотой Стандарт (1/8)
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
О П , 450 нм, ед.опт.пл 0,180 0,180 0,181 0,180
Ст. откл. 0,007 0,008 0,008 0,008
КВ, % 3,8 4,5 4,4 4,3
S/CO 1,5 1.5 1,5 1,5
Внутренний Золотой Стандарт
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
О П , 450 нм, ед.опт.пл 2,415 2,453 2,437 2,435
Ст. откп. 0,135 0,131 0,153 0,140
КВ, % 5,6 5,3 6,3 5,7
S/CO 20,3 20,4 20,7 20,5
Лот № 0403
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
О П , 450 нм, ед.опт.пл 0,015 0,016 0,015 0,015
Ст. откл. 0,003 0,003 0,003 0,003
КВ, % 17,7 18,8 19,3 18,6
Внутренний Золотой Стандарт (1/8)
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
О П , 450 нм, ед.опт.пл 0,170 0,169 0,172 0,170
Ст. откл. 0,008 0,008 0,008 0,008
КВ, % 4,8 4.7 4,5 4,7
S/CO 1,5 1,5 1,5 1,5
Внутренний Золотой Стандарт
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
О П , 450 нм, ед.опт.пл 2,378 2,370 2,393 2,380
Ст. откп. 0.103 0,094 0,099 0,099
КВ, % 4,4 4,0 4,1 4,2
S/CO 20,9 2 0 , 6 2 1 , 0 2 0 , 8
Изменения диагнозов образцов обнаружено не было.
3.4 Предел детекции
3/9


--- стр. 256 ---
Международные стандарты для антигена ВГО  отсутствуют. Поэтому для определения 
питической чувствительности был приготовлен Внутренний Золотой Стандарт (ВЗС) из образцов 
[п а ц и е н т о в  с острой ВГО инфекцией. Предел детекции определялся на трех лотах тест-системы в
в н е н и и  с коммерческой Европейской тест-системой. Для этого были приготовлены разведения ВЗС в  
|0трица те льной плазме. Результаты определения предела детекции представлены в нижеследующей 
т а б л и ц е .
Разведения
ВЗС
2К
4К
8 К
16 К
Отрицательный
контроль
Лот№ 1102
ОП 450 нм
0^86
0^66
0,151
0,071
0,011
S/CO
4,4
2,4
1,4
0,6
Лот №0103
ОП 450 нм
0^539
0^89
0,144
0.078
0,015
S/CO
4,7
2,5
1,3
0,7
Лот №  0403
ОП 450 нм
0,504
0,304
0,163
0,081
0,008
S/CO
4,7
2,8
1,5
0,8
DiaSorin
S/CO
4,5
2.6
1,3
0,7
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Для получения достоверных результатов необходимо соблюдать следующие правила:
Не смешивайте специфические реагенты (см.2.2.1.) разных серий набора. Не смешивайте их с 
р еагентам и других производителей.
Разрешается смешивать Промывочный раствор, Раствор ТМБ и  Стоп-реагент разных серий 
н а б о р а . Не смешивайте их с реагентами других производителей.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их загрязнение.
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
окислителей.
Используйте дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в  чистой
п о суд е .
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для ка > кц о го  образца или
р е а ге н та .
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и  
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
результатам анализа.
Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам анализа.
В  случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и  обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует убедиться, 
ч то  все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, спектрофотометр, термостат) 
проходит регулярную проверку и  поддерживается в исправном состоянии.
-  Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок или 
автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок может 
привести к неверной интерпретации результатов анализа.
Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению оптической 
плотности образцов и  последующим неправильным результатам анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». Если 
температура инкубации отклоняется от 37±2°С, это может привести к снижению чувствительности анализа 
и/или биологической денатурации образцов и  реагентов. Следует периодически проверять показания 
датчика температуры.
Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или образцов. 
Несоблюдение температурного режима хранения может привести к биологической денатурации 
компонентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная идентификация 
может привести к ложным результатам и  постановке ошибочного клинического диагноза.
Чтобы исключить заражение персонала и загрязнение окружающей среды, следует  
соблюдать следующие правила:
При работе с потенциально инфекционным материалом и  во время проведения анализа 
следует надевать одноразовые защитные перчатки.
Не разрешается пипетировать ртом.
Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и  курение в помещениях, 
предназначенных для работы с наборами.
4/9


--- стр. 257 ---
- Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и  Стоп-реагентом. Избегать 
Д а н и я  в глаза, на кожу и  слизистые. В  случае контакта тщательно промыть пораженный участок проточной
л .
- Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на присутствие 
антител к ВИЧ и  к вирусу гепатита С. Несмотря на полученные отрицательные результаты,
д у е т учесть, что ни один из существующих методов анализа не может гарантировать полное 
тствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и  другие реагенты, содержащие сыворотку 
fip o B H  человека, следует считать потенциально инфекционными.
- Следует избегать разбрызгивания реагентов и  образования аэрозолей. Места, на которые 
а л  пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. Исполь-
[м ванны й при этом протирочный материал следует считать потенциально инфицированным и  подвергнуть 
тветствующей обработке перед утилизацией.
- Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных азидов 
таллов в чугунных и  медных водопроводных трубах, после слива использованных реагентов следует
[п р о м ы ть  сток большим объемом проточной воды.
5 . МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В НАБОР
5.1. Материалы и оборудование, необходимые при ручной постановке
- М икропипетки, в том числе многоканальные, высокой точности (10-200 мкл, менее 3%  ошибки) со сменными 
наконечниками.
- М ерны е цилиндры.
- Дистиллированная вода.
- Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
- Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления содержимого из лунок.
- Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность 
раствора в лунках в диапазоне 0-3 ед. опт. плотн. при длинах волн 620, 450 и  405нм.
5.2. Автоматическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа на
автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC.
В  случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю необходимо
удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для иммуно-
ферментного анализа производства RADIM.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
При заборе венозной крови следует соблюдать правила асептики. Сыворотку или плазму крови 
получают по общепринятой методике подготовки образцов для лабораторного анализа. Не было 
обнаружено существенного влияния цитрата, ЭДТА и  гепарина на результаты анализа,
Не допускается добавление в анализируемые образцы консервантов, особенно азида натрия, 
так как они могут повлиять на ферментативную активность конъюгата и  способствовать возникновению 
ложноотрицательных результатов.
-  Образцы должны быть четко маркированы во избежание ошибочной интерпретации 
результатов. Настоятельно рекомендуется применять штрих-кодирование и  электронный датчик для 
считывания штрих-кода, в особенности, если набор применяется для скрининга донорской крови.
-  Не допускается применять образцы с видимыми признаками гемолиза (красный цвет) и  липемии 
(«молочный» оттенок), так как при этом может быть получен ложный результат. По этой же причине не 
допускается применять образцы, содержащие фибрин, твердые частицы или видимые признаки 
микробной контаминации.
Сыворотку и  плазму допускается хранить при температуре +2°..8°С в течение 5 суток после 
сбора. При необходимости более длительного хранения образцы допускается хранить при температуре 
-20°С в  течение нескольких месяцев. Не допускается повторное замораживание/размораживание 
образцов, так как образовавшиеся при этом включения могут влиять на результат анализа.
При обнаружении твердых частиц, образцы перед проведением анализа центрифугируют в  
течение 2 0 минут при 2 0 0 0 об/мин, либо очищают фильтрованием (диаметр пор фильтра 0,2-0 , 8 мкм).
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА*
-  Довести реагенты до комнатной температуры (+18...25°С).
Тщательно перемешать образцы перед проведением анализа.
7.1. Промаркировать лунки для контролей и  исследуемых образцов. Оставить 1  лунку для 
обнуления (Blank), 3 лунки для отрицательного контроля, 2 лунки для калибратора и  одну лунку для 
положительного контроля.
7.2. Внести по 100 мкл контролей в соответствующие лунки.
7.3. Внести по 100 мкл анализируемых образцов.
Примечание: Убедитесь, что контроли и образцы были действительно добавлены в лунки.
5/9


--- стр. 258 ---
7.4. Внести во все лунки, кроме лунки А1, по 100 мкл Раствора для разведения образцов. Заклеить 
н ш е т клейкой пленкой.
7.5. Инкубировать планшет в течение 120 минут при 37±2 °С.
7.6. Примечание: Стрипы следует заклеивать специальной пленкой, входящей в состав набора,  
пько в том  случае, если анализ проводится вручную. При автоматической постановке анализа  
икая пленка не требуется.
7.7. Удалить содержимое лунок и  с помощью автоматического промывочного устройства промойте 
ропланшет 4-5 раз подготовленным к работе Промывочным раствором. При каждой промывке
бавляйте по 300 мкл Промывочного раствора в каждую лунку.
7.8. Внесте во все лунки, кроме лунки А1, по 100 мкл Конъюгата. Убедиться, что цвет раствора в  
н ка х  с образцами изменился на красный. Заклеить планшет кпейкой пленкой.
Примечание: Во время внесения Конъюгата избегать прикасаться наконечником пипетки к  
щутренней стороне лунок во избежание контаминации.
7.9. Инкубировать планшет в течение 60 минут при 37±2 "С.
Примечание: Стрипы следует заклеивать специальной пленкой, входящей в состав набора,  
Столько в том  случае, если анализ проводится вручную. При автоматической постановке анализа  
[ клейкая пленка не требуется.
7.10. Удалить содержимое лунок и  с помощью автоматического промывочного устройства промыть 
микропланш ет 4-5 раз подготовленным к работе Промывочным раствором. При каждой промывке 
добавлять по 300 мкл Промывочного раствора в каждую лунку.
7.11. Вносить по 100 мкл Раствора ТМБ в каждую лунку, включая А1. Инкубировать планшет при 
комнатной температуре (+18...25°С) в течение 20 минут.
Примечание: Во избежание высокого фонового сигнала, не допускать попадания света на  
планшет.
7.12. Остановить ферментативную реакцию добавлением 100 мкл Стоп-реагента в каждую лунку. 
Стоп-реагент следует вносить в лунки в той же последовательности, как и  Раствор ТМБ. После внесения 
Стоп-реагента окраска Положительного контроля и  положительных образцов изменится с голубой на 
желтую ,
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 8.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерить оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. Референсный 
фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо вычитать величину 
оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех остальных лунок. В  случае, 
если значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, считывание результатов проводят 
при длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не позже, чем через 15 минут после остановки 
реакции.
Примечание: При использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или  
SEAC для планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять  
значения автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1. Анализ результатов
Определить среднюю оптическую плотность (ОП) Отрицательного контроля (ОК). Рассчитать 
значение Cut-off по формуле (1);
Cut-off = ОПсрОК+ 0,100
Примечание: Если расчет результатов проводится операционной системой автоматического  
анализатора, следует убедиться, что задана правильная формула для вычисления значения Cut-off и  
последующего расчета результатов.
Присутствие или отсутствие HDVAg определяется путем деления значения ОП образца на Cut-off.
О бразцы , для которых при делении на Cut-off получено значение;
- менее 0,9, признают нереактивными (не содержащ ими HDVAg);
-более 1 ,1 , признают реактивными (содержащими HDVAg);
-0 ,9 -1,1 признают сомнительными.
Отрицательный результат означает, что пациент не был инфицирован вирусом гепатита D .
У всех пациентов с сомнительным результатом следует повторить анализ через 1-2 недели.
Положительный результат анализа указывает на наличие инфекции вирусом гепатита D . Пациент 
должен получить соответствующую медицинскую помощь.
Примечания:
• Во избежание ошибок, интерпретацию результатов следует проводить под наблюдением  
руководителя лаборатории.
• Любой положительный результат должен быть подтвержден тестированием образца на  
другие маркеры ВГО.
6/9


--- стр. 259 ---
• При сообщении результатов из лаборатории в другие подразделения следует  
[предпринимать меры для исключения ошибок при передаче данных.
• Устанавливать диагноз «вирусный гепатит» и доводить его до сведения пациента должен  
персонал, имеющий высшее медицинское образование и соответствующую специальную  
квалификацию.
Пример расчета результатов:
Запрещается использовать приведенные ниже значения вместо реальных экспериментальных
1 Ы Х .
ОП репликатов Отрицательного контроля ( ед. опт. плот.): 0,020 -0,030-0,025
Среднее значение( ед.опт.плот.): 0,025
Критерий достоверности( ед.опт.плот.) (< 0,100) Выполняется
ОП Положительного контроля(ед.опт.плот.): 2,489
Критерий достоверности (> 1,000) Выполняется
Cut-Off =  0,025 + 0,100 = 0,125
ОП репликатов Калибратора ( ед. опт. плот.): 0,280- 0,290
Среднее значение( ед.опт.плот.): 0,285
ОП/СО 0,285/0,125 = 2,3
Отношение ОП/Cut-off >1,0 Выполняется
4
ОП Образца 1: 0,030
ОП Образца 2: 1,800
Для Образца 1  ОП/Cut-off <0,9 Образец считается отрицательным  
Для Образца 2 ОП/Cut-off > 1,1 Образец считается положительным
9.2. Критерии достоверности
Прежде чем начать обсчет результатов, следует убедиться, что ОП контрольных точек соответствуют
Описание Условие
Blank < 0 , 1 0 0
Отрицательный контроль < 0,1 0 0;
КВ < 30%
О П Калибратора ЮмМЕ/мл (ВОЗ) On/Cut-off > 1 , 0
Положительный контроль > 1 , 0 0 0
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ.
При несоответствии критериям следует немедленно известить руководство лаборатории. 
Некоторые возможные причины несоответствия приведены ниже. Перед повторным проведением анализа 
следует убедиться, что эти причины устранены.
7 /9


--- стр. 260 ---
Описание дефекта . Возможная причина
|рП в лунке для 
И  обнуления >0,100
Раствор ТМБ был загрязнен в процессе анализа.
ОП Отрицательного 
контроля >0,100;
КВ >30%
1 . Не были предварительно подобраны оптимальные параметры промывки 
и/или настройки промывочного устройства;
2. Использован неподходящий промывочный буфер либо магистрали 
промывочного устройства не были промыты соответствующим буфером 
перед началом работы;
3 . Ошибка оператора в процессе внесения контролей (положительный 
контроль вместо отрицательного);
4. Контаминация флакона с Отрицательным контролем, либо лунок, в  
которые он был внесен, следами положительных образцов или Конъюгата;
5. Загрязнение пипеток следами положительных образцов или Конъюгата;
6.  Закупоренные или засоренные иглы автоматического промывочного 
устройства.
Калибровочная проба: 
отношение 
On/Cut-off <1,0
1 . Нарушена последовательность выполнения анализа;
2 . Ошибка оператора при нанесении Калибровочной пробы (например, 
вместо нее внесен Отрицательный контроль);
3 . Параметры промывки или настройки промывочного устройства 
отличаются от предварительно выбранных оптимальных значений;
4. Контаминация Калибровочной пробы
ОП положительного 
контроля <1,000
1 . Нарушена последовательность выполнения анализа;
2. Ошибка оператора при нанесении Положительного контроля;
3. Параметры промывки или настройки промывочного устройства 
отличаются от предварительно выбранных оптимальных значений;
4. Контаминация Положительного контроля.
9.3. Интерпретация результатов
Нереактивные образцы признают отрицательными по содержанию HDVAg.
Реактивные образцы признают положительными по содержанию HDVAg.
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
Набор должен храниться при температуре  +2.. ,8°С.
-  Срок годности реагентов указан на этикетках флаконов.
Вскрытые реагенты стабильны при температуре  +2,.,8°С в течение 3 месяцев.
11. ОГРАНИЧЕНИЯ В ПРИМЕНЕНИИ АНАЛИЗА
Повторяющиеся ложноположительные результаты встречаются в менее, чем 2% случаев и  
чаще всего связаны с высоким титром НАМА,
Замороженные образцы, содержащие частицы фибрина, способны давать 
ложноположительные результаты.
СХЕМА АНАЛИЗА
—-----Лунки
Реагенты ^  -----
Blank CONTROL 1 - CAL ICONTROL + Образцы
CONTROL - — 1 0 0 мкл ---- ----
C A Ll — ---- 1 0 0 мкл ----
CONTROL + — — — 1 0 0 мкл —
Образцы — — ---- — 1 0 0 мкл
iDILSPEl ---- 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 м кл
-Инкубация: 37±2°С, 120 мин. 
-Промывка; 4-5 х 300 мкл.
Конъюгат CONJi ---- 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 м кл
-Инкубация: 37±2°С, 60 мин. 
-Промывка: 4-5 х 300 мкл.
Раствор ТМБ ТМ^ 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 м кл
-Инкубация: комнатная температура (+18...25°С), 20 мин.
Стоп-реагент |STOP 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкп 1 0 0 м кл
Считывание: 450-405 нм (референсная длина волны: 620 нм).
Jl
8/9


--- стр. 261 ---
Примерная схема нанесения образцов на микропланшет:
Условные обозначения:
BLK = лунка для обнуления (Blank) 
К(-) =  отрицательный контроль 
КП  = калибровочная проба 
К(+) =  положительный контроль 
ОБ -  образцы
/енеральный директор 
^ 0 0  «Компания Алкор Бис»
1 " 2 " 3 7 8
Ulg.
1 0 11 1 2
BLK 0Б2
в K(-) ОБЗ
с K(-) 0Б4
D K(-) 0Б5
КП 0Б6u p КП 0Б7
G K (+)0Б8
H 0Б1 0Б9
о  X  "L r X
'уководитель лаборатории разработки ИФА-систем 
ЮО «Компания Алкор Био»
X
|Швырев М.В.
Сусорова А.С.
1 V 4
RADIM S.p.A. - Via del Mare, 125 - 00040 Pomezia (Roma) Italia 
Tel.: +39 06 91,249.1 - Fax: +39 06 91.249.443 
National Order Entry:  +39 06 91.249.702 
Export Department:  +39 06 91.249.701 
Customer Care: +39 06 91.249.700 
info0).radim.it - www.radim.it
f


--- стр. 262 ---
Прошито, пронумеровано, скреплено
( ^ id iY Y lh ) л и с т ^
Сральцвдйдирр^^р  
0 Р Р  «К ов ан и я  Алкрр Био»
•  ~ , У г :” !|М.В. Швырев
- ___JJ^il


--- стр. 263 ---
\ \
«утвер.ид^Аю
//Генера/ГЕ^Йи директор
ООО «Ко ^Мния
Швырев М.^. / в\  “ .Coiripany"
//£у » -
;V-n8Te?5^
2011 г
НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ  
АНТИТЕЛ К АНТИГЕНУ ВИРУСА ГЕПАТИТА D  
В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА  
HDV АЬ
Только для in vitro диагностики
1 . НАЗНАЧЕНИЕ
Вирус Гепатита D  (ВГО) -  РНК содержащий дефектный вирус, содержащий коровый антиген (HDAg) 
и  поверхностный антиген вируса гепатита В  (HBsAg). Этот вирус при репликации нуждается в хелперной 
функции ВГВ.
ВГО  инфекция встречается у пациентов с острым или хроническим Гепатитом В . При 
одновременном заражении ВГВ и  ВГО , заболевание протекает тяжелее, но по клинической картине и  
биохимическим показателям крови коинфекцию не возможно отличить от Гепатита В . У  пациентов с 
хронической ВГВ инфекцией, репликация ВГО  может протекать незаметно, сопровождаясь клинической 
картиной, похожей на обострение хронического Гепатита В .
Определение специфических серологических маркеров (ВГО антигена или антител к ВГО ) очень 
важно для выявления вируса, вызвавшего инфекцию, и  дальнейшего лечения пациента.
Обнаружение в крови специфических антител позволяет определить стадию заболевания и  следить 
за его течением.
Тест-система HOV Л Ь предназначена для качественного определения иммуноглобулинов против ВГО  в  
сыворотке и  плазме крови человека.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
В  наборе реагентов реализован двустадийный вариант конкурентного иммуноферментного анализа. 
Для реализации этого варианта использован рекомбинантный антиген В ГО , который иммобилизован на 
твердой фазе (внутренняя поверхность лунок). В  лунках, при добавлении исследуемого образца, происходит 
связывание специфических антител, содержащихся в исследуемом образце. Несвязавшиеся компоненты 
удаляются промывкой. Во время второй инкубации в лунки добавляют специфические антитела, 
конъюгированные с пероксидазой, которые связывают «свободный» (не связанный антителами исследуемого 
образца) антиген твердой фазы. Несвязавшиеся компоненты удаляются промывкой, Во время инкубации с 
раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски обратно пропорциональна 
количеству специфических антител в  анализируемых пробах. После измерения оптической плотности 
раствора в лунках наличие специфических иммуноглобулинов оценивают относительно значения cut-off 
(параметр S/CO позволяет проводить полуколичественное определение антител).
2.2. СОСТАВ НАБОРА
Реагент Количество Состояние
IMICROPLATE
Микропланшет 1  X 96 лунок Готов к использованию 
Ready for use
Icontrol N
Отрицательный контроль 1  X 2,0 мл Готов к использованию 
Ready for use
1C0NTR0LI +  
Положительный контроль 1  X  2,0 мл Готов к использованию 
Ready for use
|C A L
Калибровочная проба 2 флакона Лиофилизованнный препарат
IW ASHBUF 1 2 0 X 1  
2 0х Промывочный буфер 1  X  50 мл Концентрированный раствор 
Сопс.
1 /8


--- стр. 264 ---
^ONJl
Конъюгат
Раствор ТМБ
___тм1
С топ-реагент
STOP
1  X  16 мл
1  X  14 мл
1  X  14 мл
Готов к использованию 
Ready for use_________
Готов к использованию 
Ready for use_________
Готов к использованию 
Ready for use_________
Количество реагентов рассчитано на 96 лунок.
2.2.1. Реагенты
•  Иммуносорбент -  планшет (MICROPLATE) I Microplate: 1  планшет из 12 разборных стрипов 
J io  8 лунок (всего 96 лунок). Лунки стрипов планшета покрыты рекомбинантным антигеном вируса
1т и т а  D . Неиспользованные стрипы хранить при температуре +2...8°С в плотно закрытом пластиковом 
1к е т е  (прилагается).
Отрицательный контроль (CONTROL -) / Negative Control: 1  флакон. Раствор бледно-желтого 
е т а  на основе 100 мМ трисового буфера, pH 7,4±0,1, содержит белки козьей сыворотки. Готов к 
ьзованию . Консерванты; 0,09% азид натрия и  0,1% Катон GC.
•  Положительный контроль (CONTROL +) / Positive Control: 1  флакон. Раствор зеленого цвета 
а  основе 100 мМ  трисового буфера, pH 7,4±0,1, содержит белки козьей сыворотки и  антитела к вирусу 
!патита D  в вьюокой концентрации. Готов к использованию. Консерванты: 0,09% азид натрия и  0,1% Катон 
С .
•  Калибратор (CAL) / Calibrator: 2 флакона. Содержит фетальную бычью сыворотку и  антитела 
еловека к ВГО  в низкой концентрации. Консерванты: 0,2 мг/мл гентамицина сульфата и  0,1% Катон G C . 
иоф илизован. Перед использованием растворите содержимое флакона в объеме дистиллированной 
ю д ы , указанном на этикетке флакона. Восстановленный реагент хранить при -20°С. Повторное 
вмораживание не допускается.
Промывочный раствор 20х (WASHBUF 20Х)/Washing buffer concentrate: 1  флакон 1 х Промывочный 
б у ф е р  представляет собой 10 мМ фосфатный буферный раствор, pH 7,0±0,2, содержащий 0,05% Твин 20 
и  0,1%  Катон GC. Перед использованием развести необходимое количество концентрата 
дистиллированной водой в соотношении 1:20. В  случае образования нерастворимых кристаллов поместите 
р а с т в о р  в термостат (+37°С) на несколько м инут. П риготовленный промывочный раствор хранить не более 7 суток 
при+ 2...8°С .
t Конъюгат (CONJ) / Enzyme Conjugate: 1  флакон. Раствор красного цвета на основе 10 м М  
Ь рисового буфера, pH 6,8±0,1, содержит поликлональные антитела к антигену ВГО , конъюгированные с 
[пероксидазой хрена (HRPO), 5% БОА, 0,2 мг/мл гентамицина сульфата и  0,1% Катон GC. Готов к  
И спользованию .
Раствор ТМБ (ТМВ): 1  флакон. Раствор тетраметилбензидина в цитратно-фосфатном буфере, 
{од е рж а щ ем  DMSO и  Н2О2.  Готов к использованию.
• Стоп-реагент (STOP) I Blocking Reagent: 1  флакон. 1Н  HCI. Готов к использованию.
•  Бумага для заклеивания планшета (СРА) / Adhesive plate sealers.
•  Пластиковый пакет.
3 . АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3 .1  Диагностическая чувствительность и специфичность
Клинические испытания набора были проведены на базе Гастро-Гепатологического отделения 
больницы  города Торино, Италия, с участием профессора М . Ризетто и  С . Джованни Батиста. Было 
исследовано более 400 образцов (положительные, отрицательные и  содержаи^ие потенциально 
интерф ерирую идие вещества) в сравнении с референсной Европейской тест-системой.
Н е было обнаружено ложноположительных реакций при тестировании анализируемых образцов 
!  р а зн ы х типов.
Диагностическая специфичность составила > 98%. Диагностическая чувствительность составила >
9 8 % .
3.2 Прецизионность
Два образца, с разной концентрацией антител к ВГО , анализировались в трех независимых 
постановках. В  каждой из постановок образцы были нанесены в 16 репликатах. Результаты, полученные 
пр и  изучении прецизионности трех лотов тест-системы, представлены в нижеследующих таблицах:
Лот №1102
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
С П , 450 нм , ед.опт.пл 2,342 2,428 2,433 2,401
С т. откл. 0,113 0,106 0 , 1 2 2 0,114
К В . % 4,8 4,4 5,0 4,7
Калибратор
2/8


--- стр. 265 ---
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
0П ,450 нм , ед.опт.пл 0,298 0,289 0,286 0,291
С т. откп. 0,023 0,027 0,026 0,025
К В , % 7,7 9,3 9,1 8,7
S/CO 1 , 6 1,7 1,7 1,7
Лот №  0103
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
О П ,450 нм , ед.опт.пл 2,208 2,237 2,246 2,230
С т. откл. 0,105 0,108 0,108 0,107
К В , % 4,7 4,8 4,8 4,8
Калибратор
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
О П , 450 нм, ед.опт.пл 0,269 0,277 0^66 0,271
С т. откп. 0,026 0,024 0,025 0,025
К В , % 9,8 8,5 9,5 9,3
S/CO 1,7 1,7 1,7 1,7
Лот №  0403
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
О П , 450 нм, ед.опт.пл 2,246 2 , 2 2 1 2,182 2,216
С т. откл. 0,097 0,103 0,118 0,106
КВ , % 4,3 4,6 5,4 4,8
Калибратор
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
О П , 450 нм, ед.опт.пл 0,286 0,273 0,280 0,280
С т. откл. 0,027 _0^23 0,026 0,025
КВ , % 9,3 8^ 5 9,1 9,0
S/CO 1,6 1,7 1,6 1,6
Изменения диагнозов образцов обнаружено не было.
3.3 Предел детекции
Международные стандарты для анти-ВГ01дМ отсутствуют, поэтому этот параметр был определен с 
п о м о щ ью  контрольного образца, полученного из Boston Biomedica Inc., США (Accurun 127). Были 
приготовлены  разведения контрольного образца в фетальной сыворотке телят, Результаты определения 
п р е д е л а  детекции представлены в нижеследующей таблице.
Разведения 
A ccurum  127
Лот №  1102 Лот №0103 Лот №  0403
ОП 450 нм S/CO ОП 450 нм S/CO ОП 450 нм S/CO
1  X 0,171 3,0 0,163 2.9 0,156 2,8
2 х 0,187 2.7 0,176 2.6 0,179 2,5
4 X 0,230 2.2 0 , 2 2 0 2.1 0 , 2 0 2 2,2
8 х 0,298 1,7 0,285 1.6 0,271 1.6
16 X 0,417 1,2 0,405 1,1 0,402 1 .1
32 X 0,514 1.0 0,490 0,9 0,482 0,9
64 X 0,717 0,7 0,700 0,7 0,705 0 ,6
128 X 1,063 0,5 1,006 0,5 1,015 0,4
Отрицательный
контроль 2,484 - 2,261 - 2,114 -
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Для получения достоверных результатов необходимо соблюдать следующие правила:
- Н е смешивайте специфические реагенты разных серий набора (см.п.2.2.1.). Не смешивайте их 
с  реагентам и других производителей.
- Разрешается смешивать Промывочный раствор, Раствор ТМБ и  Стоп-реагент разных серий 
н а б о р а . Н е смешивайте их с реагентами других производителей.
- Н е используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
- Н е храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их загрязнение.
- Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или 
о ки с л и те л е й .
3/8


--- стр. 266 ---
- Используйте только дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в  
» ш а о й  посуде.
- Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для ка > кд о го  образца или 
р е а г е н т а
- Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и  
те м п е р а ту р ы  инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
р е з у л ь та та м  анализа.
- Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствую щ ей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам анализа.
- В  случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
а вто м а ти ч е ски е  пипетки и  обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует убедиться, 
ч т о  в с е  применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, спектрофотометр, термостат) 
п р о х о д и т  регулярную проверку и  поддерживается в исправном состоянии.
- Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок или 
автом атического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок может
I  п р и в е с т и  к неверной интерпретации результатов анализа.
' - Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного
спектроф отом етра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению оптической
1  п л о тн о с ти  образцов и  последующим неправильным результатам анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». Если 
тем пература инкубации отклоняется от 37±2°С, это может привести к снижению чувствительности анализа 
и /и л и  биологической денатурации образцов и  реагентов. Следует периодически проверять показания 
д а т ч и ка  температуры.
Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или образцов. 
Н есоблю дение температурного режима хранения может привести к биологической денатурации 
ко м понентов. Периодически проверяйте показания датчика температуры.
Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная идентификация 
м о ж е т  привести к ложным результатам и  постановке ошибочного клинического диагноза.
Чтобы исключить заражение персонала и загрязнение окружающей среды, следует  
соблюдать следующие правила:
При работе с потенциально инфекционным материалом и  во время проведения анализа 
с л е д уе т надевать одноразовые защитные перчатки.
Не разрешается пипетировать ртом.
Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и  курение в помещениях, 
предназначенных для работы с наборами.
- Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и  Стоп-реагентом. Избегать 
п о п а д а н и я  в глаза, на кожу и  слизистые. В  случае контакта тщательно промыть пораженный участок проточной 
в о д о й .
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на присутствие 
H B s A g , антител к ВИЧ и  к вирусу гепатита С . Несмотря на полученные отрицательные результаты, 
сл е д уе т учесть, что ни один из существующих методов анализа не может гарантировать полное 
отсутствие указанных вирусов. По этой причине все образцы и  другие реагенты, содержащие сыворотку 
к р о в и  человека, следует считать потенциально инфекционными.
- Следует избегать разбрызгивания реагентов и  образования аэрозолей. Места, на которые 
п о п а л  пролитый материал, следует тщательно обработать 3% раствором гипохлорита натрия. Исполь­
зо ва н н ы й  при этом протирочный материал следует считать потенциально инфицированным и  подвергнуть 
соответствующ ей обработке перед утилизацией.
- Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных азидов 
м еталлов в чугунных и  медных водопроводных трубах, после слива использованных реагентов следует 
пром ы ть сток большим объемом проточной воды.
I
5 . МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В НАБОР
5.1. Материалы и оборудование, необходимые при ручной постановке
- М икропипетки, в том числе многоканальные, вьюокой точности (10-200 мкл, менее 3%  ошибки) со сменными 
наконечникам и.
- Градуированные цилиндры для разведения реагентов.
- Дистиллированная вода.
- Терм остат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
- А втом атическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления содержимого и з лунок. 
-Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность
р аствор а  в  лунках в диапазоне 0-3 ед. опт. плотн. при длинах волн 620, 450 и  405нм.
4/8


--- стр. 267 ---
5.2. Автоматическое проведение анализа
отовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа на 
зматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC. 
случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю необходимо 
достовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для иммуно- 
ерментного анализа производства RADIM.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
При заборе венозной крови следует соблюдать правила асептики. Сыворотку или плазму крови 
1учают по общепринятой методике подготовки образцов для лабораторного анализа. Не было 
Знаруж ено существенного влияния цитрата, солей ЭДТА и  гепарина на результаты анализа.
Не допускается добавление в анализируемые образцы консервантов, особенно азида натрия, 
з к  как они могут повлиять на ферментативную активность конъюгата и  способствовать возникновению 
зжноотрицательных результатов.
Образцы должны быть четко маркированы во избежание ошибочной интерпретации 
[результатов. Настоятельно рекомендуется применять штрих-кодирование и  электронный датчик для 
[считывания штрих-кода, в особенности если набор применяется для скрининга донорской крови.
Не допускается применять образцы с видимыми признаками гемолиза (красный цвет) и  липемии 
|(«молочный» оттенок), так как при этом может быть получен ложный результат. По этой же причине не 
[допускается применять образцы, содержащие фибрин, твердые частицы или видимые признаки 
микробной контаминации.
Сыворотку и  плазму допускается хранить при температуре +2“...8°С в течение 5  суток после 
сбора. При необходимости более длительного хранения образцы допускается хранить при температуре -  
20°С  в течение нескольких месяцев. Не допускается повторное замораживание/размораживание 
образцов, так как образовавшиеся при этом включения могут влиять на результат анализа.
При обнаружении твердых частиц, образцы перед проведением анализа центрифугируют в  
течение 2 0 минут при 2 0 0 0 об/мин, либо очищают фильтрованием (диаметр пор фильтра 0,2-0 , 8 мкм).
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА*
-  
Доведите реагенты до комнатной температуры (+18...25°С).
Тщательно перемешайте образцы перед проведением анализа.
7.1. Промаркируйте лунки для контролей и  исследуемых образцов. Оставьте 1  лунку для обнуления 
(Blank), 3  лунки для Отрицательного контроля, 2 лунки для калибратора и  одну лунку для Положительного 
контроля.
7.2. Внесите по 100 мкл контролей в соответствующие лунки.
Внимание: Контроли готовы к использованию и  не требуют разведения.
7.3. Внесите по 100 мкл анализируемых образцов.
Примечание: Убедитесь, что образцы были действительно добавлены в лунки.
7.4. Инкубируйте планшет в течение 60 минут при 37± 2°С.
Примечание: Стрипы следует заклеивать специальной пленкой, входящей в состав набора,  
только в том  случае, если анализ проводится вручную. При автоматической постановке анализа  
клейкая пленка не требуется.
7.5. Удалите содержимое лунок и  с помощью автоматического промывочного устройства промойте 
микропланшет 4-5 раз подготовленным к работе Промывочным раствором. При каждой промывке 
добавляйте по 300 мкл Промывочного раствора в каждую лунку.
7.6. Внесите во все лунки, кроме лунки А1, по 100 мкл Конъюгата. Убедитесь, что окрашенный 
раствор внесен во все необходимые лунки. Заклейте планшет клейкой пленкой.
Примечание: Во время внесения Конъюгата избегайте прикасаться наконечником пипетки к  
внутренней стороне лунок во избежание контаминации.
7.7. Инкубируйте микропланшет в течение 60 минут при 37± 2°С.
7.8. Удалите содержимое лунок и  промойте лунки, как описано в п. 7.5.
7.9. Внесите по 100 мкл Раствора ТМБ в каждую лунку, включая А1. Инкубируйте планшет при 
комнатной температуре (+18...25°С) в течение 20 минут.
Примечание: Во избежание высокого фонового сигнала, не допускайте попадания света на  
планшет.
7.10. Остановите ферментативную реакцию добавлением 100 мкл Стоп-реагента в каждую лунку. 
Стоп-реагент следует вносить в лунки в той же последовательности, как и  Раствор ТМБ. После внесения 
Стоп-реагента окраска Отрицательного контроля и  отрицательных образцов изменится с голубой на 
желтую.
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 8.
5/8


--- стр. 268 ---
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. Референсный 
п ь т р  устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо вычитать величину 
ической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех остальных лунок. В  случае, 
значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, считывание результатов проводят 
jti длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не позже, чем через 15 минут после остановки 
а кц и и .
Примечание: При использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или  
< ^ С  для планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять  
ачения автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1. Анализ результатов
Определите среднюю оптическую плотность (ОП) Отрицательного контроля (ОК). Расчитайте 
1чение Cut-off по формуле (1):
Cut-off =(ОПсрОК+ОП ПК)/5 (1)
Примечание: Если расчет результатов проводится операционной системой автоматического  
шлизатора, следует убедиться, что задана правильная формула для вычисления значения cut-off и  
следующего расчета результатов.
Присутствие или отсутствие антител против ЕГО  определяется путем деления значения Cut-off на 
Ion образца.
О бразцы, для которых при делении Cut-off на ОПобразца получено значение:
- менее 0,9- признают нереактивными (не содержащ ими антитела против ВГЕ);
- более 1,1- признают реактивными (содержащими антитела против ВГЕ);
- 0,9 -  1,1- признают сомнительными.
Отрицательный результат означает, что пациент не был инфицирован ВГО .
У всех пациентов с сомнительным результатом следует повторить анализ через 1-2 недели, получив 
для этого свежий образец сыворотки или плазмы крови.
Положительный результат анализа указывает на наличие инфицирования ВГО . Пациент должен 
получить соответствующую медицинскую помощь.
Примечания:
• 
Во избежание ошибок, интерпретацию результатов следует проводить под наблюдением  
руководителя лаборатории.
• При сообщении результатов из лаборатории в другие подразделения следует  
предпринимать меры для исключения ошибок при передаче данных.
• Устанавливать диагноз «вирусный гепатит» и доводить его до сведения пациента должен
I персонал, имеющий высшее медицинское образование и соответствующую специальную
квалификацию.
Пример расчета результатов:
| |  Запрещается использовать приведенные ниже значения вместо реальных экспериментальных  
]данных.
ОП репликатов Отрицательного контроля (ед.опт.плотн.): 2,100; 2,200 ; 2,000 
Среднее значение ОП ОК (ед.опт.плотн.) : 2,100  
Критерий достоверности(> 1.000) Выполняется  
ОП Положительного контроля (ед.опт.плотн.): 0,100  
Критерий достоверности (< ОК/10) Выполняется  
Cut-Off = (2,100+0,100)/5 = 0,440  
ОП репликатов Калибратора: 0,300; 0,260  
Среднее значение (ед.опт.плотн.): 0,280
Отношение ОК/10<ОПср.Калибратора<ОК/5 Выполняется
ОП Образца 1  (ед.опт.плотн.): 0,020  
ОП Образца 2 ед.опт.плотн.): 1,900
Для Образца 1  Cut-off/ОП > 1,1 - Образец считается положительным  
Для Образца 2 Cut-off/ОП <0,9- Образец считается отрицательным
9.2. Критерии достоверности
Прежде чем начать обсчет результатов, убедитесь, что О П контрольных точек соответствуют следую щ им 
критериям :
\ Описание Условие
6/8


--- стр. 269 ---
< 0 , 1 0 0
,|ртрицательный контроль >  1,000 (если ОП ОК меньше
1 , 0 0 0 сократите количество
промывок или время промывки),
КВ <  30%
М О П  Калибратора ОК/10<ОПср.калибратора<ОК/5
Положительный контроль <ок/ 1о
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ.
При несоответствии критериям следует немедленно известить руководство лаборатории. 
Н екоторы е возможные причины несоответствия приведены ниже. Перед повторным проведением анализа 
педует убедиться, что эти причины устранены.
Ш  Описание дефекта т  ‘
1  ОП в лунке для 
обнуления >0 , 1 0 0
Раствор ТМБ был загрязнен в процессе анализа.
ОП Отрицательного 
контроля <1,050;
, КВ  >30%
11
1 . Не были предварительно подобраны оптимальные параметры промывки 
и/или настройки промывочного устройства;
2. Использован неподходящий промывочный буфер либо магистрали 
промывочного устройства не были промыты соответствующим буфером 
перед началом работы;
3. Ошибка оператора в процессе внесения контролей (положительный 
контроль вместо отрицательного);
4. Контаминация флакона с Отрицательным контролем, либо лунок, в  
которые он был внесен, следами положительных образцов или Конъюгата;
5. Загрязнение пипеток следами положительных образцов или Конъюгата;
6.  Закупоренные или засоренные иглы автоматического промывочного 
устройства.
Калибровочная проба:  
ОП не попадает в 
заданный диапазон
1 . Нарушена последовательность выполнения анализа;
2. Ошибка оператора при нанесении Калибровочной пробы (например, 
вместо нее внесен Отрицательный контроль);
3. Параметры промывки или настройки промывочного устройства 
отличаются от предварительно выбранных оптимальных значений;
4. Контаминация Калибровочной пробы
ОП Положительного  
контроля >0 к/ 1 0
1 . Нарушена последовательность выполнения анализа;
2. Ошибка оператора при нанесении Положительного контроля;
3. Параметры промывки или настройки промывочного устройства 
отличаются от предварительно выбранных оптимальных значений;
4. Контаминация Положительного контроля.
9.3. Интерпретация результатов
Нереактивные образцы признают отрицательными по содержанию антител против В ГО .
Реактивные образцы признают положительными по содержанию антител против ВГО .
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
Набор должен храниться при температуре +2...8°С .
Срок годности реагентов указан на этикетках флаконов.
Вскрытые реагенты стабильны при температуре  +2...8°С в течение 3 месяцев.
11. ОГРАНИЧЕНИЯ В ПРИМЕНЕНИИ АНАЛИЗА
Бактериальная контаминация и  термоинактивация могут сказаться на оптической плотности 
образцов, что приведет к неправильному определению уровня аналита.
Тест-система предназначена только для исследования индивидуальных образцов, не следует 
использовать в качестве анализируемого образца пулы.
Постановка диагноза не должна основываться на единичном лабораторном исследовании, 
следует принимать во внимание анамнез и  результаты исследования другими методами.
СХЕМА АНАЛИЗА
7/8


--- стр. 270 ---
V  ------— Л у н к и
Ц Реагенты ~
Blank ICONTROLM pAVi |C0NTR0L|+| Образцы
ftoNTROLl- — 100 МКЛ ---- —
I calI ---- 100 МКЛ ----
lfcONTROL| + ---- ---- 100 МКЛ
{Образцы — ---- — 100 мкл
Инкубация: 37± 2°С, 60 мин. 
Промывка: 4-5 х 300 мкл.
Конъюгат CONJI — 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл
Инкубация: 37± 2°C, 60 мин.
Промывка: 4-5 x 300 мкл
Раствор ТМБ ТМ^ 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл
Инкубация: комнатная температура, 20 мин.
Стоп-реагент STOP 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкп
Считывание: 450-405 нм (референсная длина волны: 620 нм).
Примерная схема нанесения образцов на микропланшет:
1 2 3 4 5" "6' 7 ‘ ' 8 9 1 0 11 1 2
А BLK 0Б2
В К(-) ОБЗ
С К(-) 0Б4
D К(-) 0Б5
Е КП 0Б6
F КП 0Б7
G К(+) 0Б8
Н 0Б1 0Б9
Условные обозначения:
BLK = лунка для обнуления (Blank) 
К(-) = отрицательный контроль 
КП  = калибровочная проба 
К(+) = положительный контроль 
О Б - образцы
Генеральный директор
О О О  «Компания Алкор Бис»
|руководитель лаборатории разработки ИФА-систем
О О О  «Компания Алкор Бис»
Ф ' ' ^
)'’/ "Компания 
Алкор Био"
^Ikor Bio 
Company J B  М.В.
Сусорова A.C.
RADIM S.p.A. - Via del Mare, 125 - 00040 Pomezia (Roma) Italia 
Tel.: +39 06 91.249.1 - Fax: +39 06 91.249.443 
National Order Entrv:  +39 06 91.249.702 
Export Department:  +39 06 91.249.701 
Customer Care: +39 06 91.249.700 
info^radim.it - www.radim.it
P


--- стр. 271 ---


--- стр. 272 ---
«УТВЕРЖДАЮ  
>'ыь(й^директор 
оИпант  ^Icpp Био»
*  \'^^Р д п у" о Х  Ltd. ^
2011Г
НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ М К  
ВИРУСУ ГЕПАТИТА D В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
HDV 1дМ
Только для in vitro диагностики
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Вирус Гепатита D  (ВГО) -  РНК-содержащий дефектный вирус, содержащий коровый антиген 
(HDAg) и  поверхностный антиген вируса гепатита В  (HBsAg). Этот вирус при репликации нуждается в  
хелперной функции ВГВ.
В ГО  инфекция встречается у пациентов с острым или хроническим Гепатитом В . При 
одновременном заражении ВГВ и  ВГО , заболевание протекает тяжелее, но по клинической картине и  
биохимическим показателям крови коинфекцию невозможно отличить от Гепатита В , У пациентов с 
хронической ВГВ инфекцией, репликация ВГО  может протекать незаметно, сопровождаясь клинической 
картиной, похожей на обострение хронического Гепатита В .
Определение специфических серологических маркеров (ВГО антигена или антител к ВГО ) очень 
важно для выявлении вируса, вызвавшего инфекцию, и  дальнейшего лечения пациента.
Обнаружение в крови специфических антител классов М  или G позволяет определить стадию 
заболевания и  следить за его течением.
Тест-система M O V IgM предназначена для качественного определения иммуноглобулинов класса М  
против ВГО  в сыворотке и  плазме крови человека.
2 . ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
В  наборе реагентов реализован двустадийный «сар 1иге»-вариант твердофазного 
иммуноферментного анализа. Если в образце присутствуют иммуноглобулины класса М . то во время 
первой инкубации они связываются с антителами, специфичными к IgM человека, которые 
иммобилизованы на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок). Несвязавшиеся компоненты 
удаляются промывкой. Если среди связавшихся IgM присутствуют антитела к соответствующему 
возбудителю, то во время следующей стадии анализа они связываются с комплексом специфический 
антиген-антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена. Несвязавшиеся компоненты удаляются 
промывкой. Во время инкубации с ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо 
пропорциональна количеству специфических IgM  в анализируемых пробах. Наличие IgM  оценивают 
относительно значения cut-off.
2.2. СОСТАВ НАБОРА
Реагент Количество Состояние
IMICROPLATE
Микропланшет 1  X 96 лунок Готов к использованию 
Ready for use
ICONTROLl- 
Отрицательный контроль 1  X 2,0 мл Готов к использованию 
Ready for use
ICONTROLI + 
Положительный контроль 1 х 2 , 0 мл Готов к использованию 
Ready for use
|C A L
Калибровочная проба 2 флакона Лиофилизованнный препарат
WASHBUF 20> 
20х Промывочный б
С
Уфер 1  X 50 мл Концентрированный раствор 
G one.
CONJ 20Х 
Конъюгат 1  X 0,8 мл Концентрированный раствор 
Сопс.
1/9


--- стр. 273 ---
If f  HDVl  
Щг Антиген ВГО 6 флаконов Лиофилизованнный препарат
1 Г  ]^Q DIL 1  X 16 мл Готов к использованию
iJ Д ил ю ен т для антигена Ready for use
■Г DILSPEl 
I I  Р а с тв о р  для разведения 
|1 образцов
2 X  50 мл Готов к использованию 
Ready for use
ЦТ”  Раствор ТМБ 1  X  14 мл Готов к использованию
I I Ready for use
1  Стоп-реагент 1  X  14 мл Готов к использованию
1  STOP Ready for use
{Количество реагентов рассчитано на 96 лунок.
2.2.1. Реагенты
Иммуносорбент -  планшет (MICROPLATE) / Microplate: 1  планшет из 12 разборных стрипов 
[п о  в  лунок (всего 96 лунок). Лунки стрипов планшета покрыты антителами к 1 д М  человека. 
)Иеиспользованны е стрипы хранить при температуре +2...8°С в плотно закрытом пластиковом пакете 
(прилагается).
• Отрицательный контроль (CONTROL -) / Negative Control: 1  флакон. Раствор бледно- 
келтого цвета на основе 0,2М трисового буфера, pH 6,0±0,1, содержит антитела человека, не 
этециф ичны е к вирусу гепатита D , 3% обезжиренное сухое молоко и  0,2% Твин 20. Консерванты: 0.09% 
а зи д  натрия и  0,1% Катон GC. Готов к использованию.
Положительный контроль (CONTROL +) 
I Positive Control: 1  флакон Раствор зеленого цвета 
н а  основе 0.2М трисового буфера, pH 6,0±0,1, содержит 3% обезжиренное сухое молоко, 0,2% Твин 20 и  
1 д М  человека к вирусу гепатита D . Консерванты: 0,09% азид натрия и  0,1% Катон GC. Готов к 
использованию .
•  Калибратор (CAL) I Calibrator: 2 флакона. Содержит фетальную бычью сыворотку и  1 д М  
человека к вирусу гепатита D . Консерванты: 0,2 мг/мл гентамицина сульфата и  0,1% Катон G C . 
Лиоф илизован. Перед использованием растворите содержимое флакона в объеме дистиллированной 
в о д ы , который указан на этикетке. Восстановленный реагент хранить при -20°С. Повторное 
замораживание не допускается.
• Промывочный раствор 20х (WASHBUF 20Х) / Washing buffer concentrate: 1  флакон. 1 х 
П ром ы вочны й буфер представляет собой 10 мМ  фосфатный буферный раствор, pH 7,0±0,2, содержащий
0 ,0 5 %  Твин 20 и  0,05% Катон GC. Перед использованием развести необходимое количество концентрата 
дистиллированной водой в соотношении 1:20. В  случае образования нерастворимых кристаллов поместите 
р а с т в о р  в  термостат (+37°С) на несколько м инут. П риготовленный промывочный раствор хранить не более 7 суток п ри 
+ 2 ...8 °С .
•  Конъюгат 20х (CONJ) / Enzyme Conjugate 20х: 1  флакон. Раствор на основе 10 мМ  трисового 
б уф е р а , pH  6,8±0,1, содержит поликлональные антитела к вирусу гепатита D , конъюгированные с 
пероксидазой хрена (HRPO), 5% БОА, 0,02% гентамицина сульфата и  0,1% Катон GC. Используется для 
приготовления иммунокомплекса. Готов к использованию.
•  Антиген ВГО (Ад HDV) / HDV Antigen: 6 флаконов. Содержит 25 мМ  трисовый буфер, pH  
7 ,8 ± 0 ,1 , 5%  сыворотки человека и  рекомбинантный антиген вируса гепатита D . Лиофилизован. 
И спользуется для приготовления иммунокомплекса.
• Дилюент для антигена ВГО (Ад DIL) / HDV Antigen Diluent: 1  флакон. Красный раствор на 
о сн о ве  0,2 М  трисового буфера, pH 6,0±0,1, содержит 0,1% Катон GC и  0,2% Тритон X I00. Используется 
д л я  восстановления антигена В ГО .
Внимание: Готовить иммунокомплекс нужно только после начала первой инкубации. Добавить во 
ф л а ко н  с лиофилизованным антигеном 2 мл Дилюента для антигена, аккуратно перемешать. Когда 
антиген полностью растворится добавить во флакон 100 мкл 20х концентрата конъюгата. Полученный 
иммунокомплекс хранить при -20°С. Повторное замораживание не допускается.
• Раствор для разведения образцов (DILSPE) 
I Specimen Diluent: 2 флакона. Раствор голубого 
цвета на основе 0,2 М  трисового буфера, pH 6,0±0,1, содержащий 3%  обезжиренное сухое молоко и  0,2% 
Твин 20. Готов к использованию. Консерванты: 0,09% азид натрия и  0,1% Катон G C.
• Раствор ТМБ (ТМВ): 1  флакон. Раствор тетраметилбензидина в цитратно-фосфатном буфере, 
содержащем DMSO и  Н2О2.  Готов к использованию.
• Стоп-реагент (STOP) / Blocking Reagent: 1  флакон. 1Н  Н С 1 . Готов к использованию.
•  Бумага для заклеивания планшета (СРА) / Adhesive plate sealers.
•  Пластиковый пакет.
3 . АНАЛИТИЧЕСКИЕ И  ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3 .1  Диагностическая чувствительность и специфичность
2/9


--- стр. 274 ---
К линические испытания набора были проведены на базе Гастро-Гепатологического отделения 
шцы города Торимо, Италия, с участием профессора М . Ризетто и  С . Джованни Батиста, Было 
д о в а н о  более 400 образцов в сравнении с референсной Европейской тест-системой.
Положительные образцы были получены от пациентов с ВГО  инфекцией
Диагностическая специфичность определялась на панели из 250 образцов, полученных от доноров 
« п а ц и е н т о в , не имеющих иммунитета к ВГО , которые были определены как отрицательные референтной 
ге с т -с и с т е м о й .
Н е  было обнаружено ложноположительных реакций при тестировании анализируемых образцов 
1 3 И Ы Х  типов.
Н е  было также обнаружено влияния на специфичность заморозки анализируемых образцов.
Б ы л и протестированы образцы пациентов с другими вирусными заболеваниями (ВГС, ВГА) и  с 
п зти та м и  невирусной природы. Ложноположительных реакций обнаружено не было.
В  общей сложности в независимых референсных лабораториях было протестировано более 300 
р а зц о в . Диагностическая специфичность составила > 98%. Диагностическая чувствительность 
тавила >  98% .
3.2 Прецизионность
Три образца, с разной концентрацией 1 д М  к ВГО , анализировались в трех независимых постановках. 
IВ  ка ж д о й  из постановок образцы были нанесены в 16 репликатах. Результаты, полученные при изучении
I  прецизионности трех лотов тест-системы, представлены в нижеследующих таблицах.
Лот№ 1102
Отрицательный образец
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
О П , 450 нм, ед.опт.пл 0,061 0,056 0,056 0,058
С т. откл. 0,008 0,007 0,007 0,008
КВ , % 13,9 13,0 12,9 13,3
Калибратор
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
О П , 450 нм, ед.опт.пл 0,796 0,810 0,802 0,803
Ст. откл. 0,044 0,041 0,046 0,044
КВ , % 5,5 5,1 5,7 5,4
S/CO 2 , 6 2 , 6 2 , 6 2 , 6
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
О П , 450 нм, ед.опт.пл 2,133 2,143 2,134 2,137
С т. откл. 0,081 0,081 0,095 0,086
К В , % 3,8 3,8 4,4 4,0
S/CO 6,9 7,0 7,0 7,0
Лот № 0103
образец
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
О П , 450 нм, ед.опт.пл 0,062 0,059 0,066 0,062
С т. откл. 0,008 0,005 0,006 0,006
КВ , % 12,4 9,3 9,2 10,3
Калибратор
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
О П , 450 нм, ед.опт.пл 0,843 0,843 0,826 0,837
С т. откл. 0,051 0,051 0,045 0,049
КВ , % 6 , 0 6 , 0 5,4 5,8
S/CO 2,7 2.7 2,7 2,7
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
О П , 450 нм, ед.опт.пл 2,299 2,278 2,227 2,268
Ст. откл. 0,115 0 , 1 0 2 0 , 1 1 2 0 , 1 1 0
КВ , % 5,0 4,5 5,0 4,8
S/CO 7,4 7,4 7,0 7,3
Лот № 0403
образец
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
О П , 450 нм, ед.опт.пл 0,066 0,070 0,067 0,068
С т. откл. 0,006 0,008 0,008 0,007
КВ , % 9,8 10,7 11,3 1 0 , 6
Калибратор
3/9


--- стр. 275 ---
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
■ О П .4 5 0  нм , ед.опт.пл0,800 0,813 0,815 0,809
■ С т. откл. 0,044 0,046 0,049 0.046
1 К В , % 5,5 5.7 6 , 0 5,7
I f  S/CO 2,5 2,5 .. . 2 . 6 2,5
Положительный контроль
шГ Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Среднее
1[ВП ,450 нм , ед.опт.пл 2,352 2,328 2,339 2,340
I f  С т. откл. 0,093 0,098 0,105 0,099
II К В , % 3,9 4.2 4,5 4.2
1Г  S/CO 7,5 7,3 7,4 7,4
Изменения диагнозов образцов обнаружено не было.
3 .3  Предел детекции
Международные стандарты для анти-ВГ01дМ отсутствуют. Поэтому для определения аналитической 
чувствительности был приготовлен Внутренний Золотой Стандарт (ВЗС) из образцов пациентов с острой 
В Г О  инф екцией. Предел детекции определялся на трех лотах тест-системы в сравнении с коммерческой 
Е в р о п е й ско й  тест-системой. Для этого были приготовлены разведения ВЗС в отрицательной плазме. 
Р е зу л ь та ты  определения предела детекции представлены в нижеследующей таблице.
Р азведения
В З С
1  X
Лот №  1102
ОП 450 нм
0,728
S/CO
2.5
Лот №0103
ОП 450 нм
0,783
S/CO
2,6
Лот №  0403
ОП 450 нм
0,837
S/CO
2.7
DiaSorin
S/CO
2,6
2 х
4х
0,443
0,286 1,0
0^61 1.5 0,471 1.5
0^81 0.9 0,305 1.0 1,0
Зх 0,154 0,5 0,160 0,5 0,185 0,6 0,5
Плазма 0,039 0,1 0,054 0,2 0,065 0,2 0,2
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Для получения достоверных результатов необходимо соблюдать следующие правила:
Не смешивайте специфические реагенты ( см.2.2.1.) разных серий набора. Не смешивайте их с 
реагентам и других производителей.
Разрешается смешивать Промывочный раствор, Раствор ТМБ и  Стоп-реагент разных серий 
н а б о р а . Н е смешивайте их с реагентами других производителей.
- Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на упаковке.
- Не храните реагенты при высоких температурах и/или в местах, где возможно их загрязнение.
Используйте только чистую стеклянную посуду. Избегайте присутствия ионов металлов или
окислителей.
Используйте только дистиллированную или деионизованную воду. Храните воду только в  
чи сто й  посуде.
Избегайте контаминации образцов. Используйте одноразовые наконечники для каждого образца или
р е а ге н та .
Не вносите никаких изменений в «Схему анализа». Несоблюдение временного интервала и  
температуры инкубации, а также объемов вносимых реагентов может привести к неправильным 
результатам анализа.
-  Растворение лиофилизованных компонентов проводите в соответствии с указаниями на 
соответствующей этикетке. Любое отклонение может привести к неправильным результатам анализа,
В  случае проведения анализа вручную необходимо использовать откалиброванные 
автоматические пипетки и  обращать особое внимание на точность внесения реагентов. Следует убедиться, 
ч то  все применяемое оборудование (микропипетки, промывочное устройство, спектрофотометр, термостат) 
проходит регулярную проверку и  поддерживается в исправном состоянии.
Убедитесь в исправности насоса, который используется для удаления жидкости из лунок или 
автоматического промывочного устройства для планшетов. Недостаточная промывка лунок может 
привести к неверной интерпретации результатов анализа.
Убедитесь в исправности спектрофотометра. Использование неоткалиброванного 
спектрофотометра или загрязненные светофильтры могут привести к неверному определению оптической 
плотности образцов и  последующим неправильным результатам анализа.
Убедитесь в исправности термостата, если его применение требуется в «Схеме анализа». Если 
температура инкубации отклоняется от 37±2‘’С, это может привести к снижению чувствительности анализа 
и /и л и  биологической денатурации образцов и  реагентов. Следует периодически проверять показания 
датчика температуры.
4/9


--- стр. 276 ---
- Убедитесь в исправности холодильного оборудования для хранения реагентов и/или образцов. 
Н е с о б л ю д е н и е  температурного режима хранения может привести к биологической денатурации 
ю м п о н е н то в . Периодически проверяйте показания датчика температуры.
- Следует обеспечить надежную идентификацию образцов пациентов. Неверная идентификация 
и о ж е т  привести к ложным результатам и  постановке ошибочного клинического диагноза.
Чтобы исключить заражение персонала и загрязнение окружающей среды, следует  
соблюдать следующие правила:
- При работе с потенциально инфекционным материалом и  во время проведения анализа 
с л е д у е т  надевать одноразовые защитные перчатки.
- Н е разрешается пипетировать ртом.
- Не разрешается прием пищи, использование косметических средств и  курение в помещениях, 
предназначенны х для работы с наборами.
- Следует соблюдать осторожность в обращении с Раствором ТМБ и  Стоп-реагентом. Избегать 
п о п а д а н и я  в глаза, на кожу и  слизистые. В  случае контакта тщательно промыть пораженный участок проточной 
'в о д о й .
Компоненты набора, полученные из сыворотки крови человека, были проверены на присутствие 
H B s A g , антител к ВИЧ и  к вирусу гепатита С . Несмотря на полученные отрицательные результаты, 
с л е д у е т  учесть, что ни один из существующих методов анализа не может гарантировать полное 
о тсутств и е  указанных вирусов. По этой причине все образцы и  другие реагенты, содержащие сыворотку 
к р о в и  человека, следует считать потенциально инфекционными.
Следует избегать разбрызгивания реагентов и  образования аэрозолей. Места, на которые 
п о п а л  пролитый материал, следует тщательно обработать 3%  раствором гипохлорита натрия. Исполь­
зо в а н н ы й  при этом протирочный материал следует считать потенциально инфицированным и  подвергнуть 
соответствую щ ей обработке перед утилизацией.
- Некоторые реагенты содержат азид натрия. Чтобы исключить накопление взрывоопасных азидов 
м е та л л о в в чугунных и  медных водопроводных трубах, после слива использованных реагентов следует 
п р о м ы ть  сток большим объемом проточной воды.
5. МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В НАБОР
5.1. Материалы и оборудование, необходимые при ручной постановке анализа
- М икропипетки, в том числе многоканальные, вьюокой точности (10-200 мкл, менее 3%  ошибки) со сменными 
наконечниками.
- Градуированные цилиндры для разведения реагентов.
- Дистиллированная вода.
- Термостат, позволяющий инкубировать микропланшеты при температуре 37 ± 2°С.
- Автоматическое промывочное устройство для микропланшетов или насос для удаления содержимого из лунок.
- Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность 
раствора в лунках в диапазоне 0-3 ед. опт. плотн. при длинах волн 620, 450 и  405нм.
5.2. Автоматическое проведение анализа
Изготовитель гарантирует возможность применения данного набора для проведения анализа на 
автоматических анализаторах открытого типа производства компании RADIM и/или SEAC.
В  случае использования автоматических анализаторов других фирм, пользователю необходимо 
удостовериться, что конкретный анализатор позволяет применять наборы реагентов для иммуно- 
ферментного анализа производства RADIM.
6 . АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
При заборе венозной крови следует соблюдать правила асептики. Сыворотку или плазму крови 
получаю т по общепринятой методике подготовки образцов для лабораторного анализа. Н е было 
обнаружено существенного влияния цитрата, солей ЭДТА и  гепарина на результаты анализа.
Н е допускается добавление в анализируемые образцы консервантов, особенно азида натрия, 
так как они могут повлиять на ферментативную активность конъюгата и  способствовать возникновению 
ложноотрицательных результатов.
Образцы должны быть четко маркированы во избежание ошибочной интерпретации 
результатов. Настоятельно рекомендуется применять штрих-кодирование и  электронный датчик для 
считывания штрих-кода, в особенности, если набор применяется для скрининга донорской крови.
Не допускается применять образцы с видимыми признаками гемолиза (красный цвет) и  липемии 
(«молочный» оттенок), так как при этом может быть получен ложный результат. По этой же причине не 
допускается применять образцы, содержащие фибрин, твердые частицы или видимые признаки 
микробной контаминации.
Сыворотку и  плазму допускается хранить при температуре +2°...8°С в течение 5  суток после 
сб о р а . При необходимости более длительного хранения образцы допускается хранить при температуре - 
2 0 °С  в  течение нескольких месяцев. Не допускается повторное замораживание/размораживание 
образцов, так как образовавшиеся при этом включения могут влиять на результат анализа.
5/9


--- стр. 277 ---
- При обнаружении твердых частиц, образцы перед проведением анализа центрифугируют в  
е н и е  2 0 минут при 2 0 0 0 об/мин, либо очищают фильтрованием (диаметр пор фильтра 0,2-0 , 8 мкм).
7 . ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА*
- Доведите реагенты до комнатной температуры (+18...25°С).
- Тщательно перемешайте образцы перед проведением анализа.
7.1. Разведите анализируемые образцы 1:200 (например, 1000 мкл Раствора для разведения 
1 3 ц о в  +  5 мкл образца).
7.2. Промаркируйте лунки для контролей и  исследуемых образцов. Оставьте 1  лунку для обнуления 
'(B la n k ), 3 лунки для отрицательного контроля, 2 лунки для калибратора и  одну лунку для положительного
роля.
7.3. Внесите по 100 мкл контролей в соответствующие лунки.
Внимание: Контроли готовы к использованию и  не требуют разведения.
7 .4 . Внесите по 100 мкл разведенных анализируемых образцов.
Примечание: Убедитесь, что образцы и контроли были действительно добавлены в лунки.
7.5. Инкубируйте планшет в течение 60 минут при 37±2°С.
Примечание: Стрипы следует заклеивать специальной пленкой, входящей в состав набора,  
только в том  случае, если анализ проводится вручную. При автоматической постановке анализа  
клейкая пленка не требуется.
7.6. За 5-10 минут до окончания первой инкубации приготовьте иммунокомплекс (Антиген ВГА- 
А нтитела, конъюгированные с пероксидазой) как описано в пункте 2.2.
7.7. Удалите содержимое лунок и  с помощью автоматического промывочного устройства промойте 
микропланш ет 4-5 раз подготовленным к работе Промывочным раствором. При каждой промывке 
добавляйте по 350 мкп Промывочного раствора в каждую лунку.
7.8. Внесите во все лунки, кроме лунки А1, по 100 мкл иммунокомплекса. Заклейте планшет клейкой 
пленкой.
Примечание: Во время внесения Конъюгата избегайте прикасаться наконечником пипетки к  
внутренней стороне лунок во избежание контаминации.
7.9. Инкубируйте микропланшет в течение 60 минут при +37±2‘ ’ С,
7.10. Удалите содержимое лунок и  промойте лунки, как описано в п . 7.7.
7.11. Внесите по 100 мкл Раствора ТМБ в каждую лунку, включая А1. Инкубируйте планшет при 
комнатной температуре (■<-18...25°С) в течение 20 минут.
Примечание: Во избежание высокого фонового сигнала, не допускайте попадания света на  
планшет.
7.12. Остановите ферментативную реакцию добавлением 100 мкл Стоп-реагента в каждую лунку. 
Стоп-реагент следует вносить в лунки в той же последовательности, как и  Раствор ТМБ. После внесения 
Стоп-реагента окраска Положительного контроля и  положительных образцов изменится с голубой на 
желтую.
СХЕМА АНАЛИЗА приведена на странице 8.
В . РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерьте оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре при длине волны 450 нм. Референсный 
фильтр устанавливается на 620 нм. При регистрации результатов необходимо вычитать величину 
оптической плотности в лунке Blank из значений оптических плотностей всех остальных лунок. В  случае, 
если значение ОП превышает предел линейности спектрофотометра, считывание результатов проводят 
при длине волны 405 нм. Измерение должно проводиться не позже, чем через 15 минут после остановки 
реакции.
Примечание: 
При использовании автоматических анализаторов производства RADIM и/или  
SEAC для планшетного формата (microplates) считывающий спектрофотометр должен измерять  
значения автоматически на 3 длинах волн: 450, 405 и 620 нм.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1. Анализ результатов
Определить среднюю оптическую плотность (ОП) Отрицательного контроля (ОК). Рассчитать 
значение Cut-off по формуле (1):
Cut-off = ОПсрОК + 0,250
Примечание: Если расчет результатов проводится операционной системой автоматического  
анализатора, следует убедиться, что задана правильная формула для вычисления значения Cut-off и  
последующего расчета результатов.
Присутствие или отсутствие 1 д М  против ЕГО  определяется путем деления ОП образца на значение
Cut-off,
О бразцы, для ксггоры х при делении на Cut-off получено значение менее 0,9 признаю т нереакгивны м и (н е  
содержащ ими 1 д М  против ВГО ).
6/9


--- стр. 278 ---
[О бразцы, для которых при делении на Cut-off получено значение более 1 ,1 , признают реактивными 
зщ ими 1 д М  против ВГО ). Пациент должен получить соответствующую медицинскую помощь.
Область 0,9 -  1,1, является областью сомнительных значений. Если ОП образца попадает в эти 
р л ы , результат считается сомнительным. Следует повторить анализ через 1-2 недели, получив для 
)  свежий образец сыворотки или плазмы.
Примечания:
Во избежание ошибок, интерпретацию результатов следует проводить под наблюдением  
водителя лаборатории.
При сообщении результатов из лаборатории в другие подразделения следует  
дпринимать меры для исключения ошибок при передаче данных.
• Устанавливать диагноз «вирусный гепатит» и доводить его до сведения пациента должен  
сонал, имеющий высшее медицинское образование и соответствующую специальную  
пификацию.
Пример расчета результатов:
Запрещается использовать приведенные ниже значения вместо реальных экспериментальных
)/Х.
О П  репликатов Отрицательного контроля ( ед. опт.плот.): 0,100-0,120 - 0,080
tpednee значение ( ед.опт.плот.): 0,100
^(ритерий достоверности(< 0,200) Выполняется  
f О П  Положительного контроля ( ед. опт. плот.): 2, О О О
^Критерий достоверности (> 0,900) Выполняется  
lCut-Off= 0,100+0,250 = 0,350
[ О П  репликатов Калибратора: 1 , О О О  -  1,100
I  Среднее значение (ед. опт. плот.): 1,050
Отношение ОП/Cut-off = 3,0
Критерий достоверности(отношение >2,5  ед.опт.плот.) Выполняется  
ОП Образца 1: 0,080
ОП Образца 2: 1,800
Для Образца 1  ОП/Cut-off < 0,9 Образец считается отрицательным  
Для Образца 2 ОП/Cut-off >1,1 Образец считается положительным
9.2. Критерии достоверности
Прежде чем начать обсчет результатов, убедитесь, что О П контрольных точек соответствуют следующим
Описание Условие
Blank < 0 , 1 0 0
Отрицательный контроль <  0,200; КВ < 30%
О П Калибратора/Cut-off >2,5
Положительный контроль >0,900
Если полученные значения не соответствуют условиям, необходимо повторить анализ.
При несоответствии критериям следует немедленно известить руководство лаборатории. 
Некоторые возможные причины несоответствия приведены ниже. Перед повторным проведением анализа 
следует убедиться, что эти причины устранены.
7/9


--- стр. 279 ---
ш ш ш т ш ш г ш Возможнай причина
О П  в лунке для 
«бнуления >0,100
Раствор ТМ Б был загрязнен в процессе анализа.
Ю П  Отрицательного 
||онтроля > 0,200;
: к в  >  30%
11
1. Не были предварительно подобраны оптимальные параметры промывки 
и/или настройки промывочного устройства;
2. Использован неподходящий промывочный буфер либо магистрали 
промывочного устройства не были промыты соответствующим буфером 
перед началом работы;
3. Ошибка оператора в процессе внесения контролей (положительный 
контроль вместо отрицательного);
4. Контаминация флакона с Отрицательным контролем, либо лунок, в  
которые он был внесен, следами положительных образцов или Конъюгата;
5. Загрязнение пипеток следами положительных образцов или Конъюгата;
6. Закупоренные или засоренные иглы автоматического промывочного 
устройства.
,  Калибровочная проба: 
1 отношение 
О П / Cut-off < 2,5
1. Нарушена последовательность выполнения анализа;
2. Ошибка оператора при нанесении Калибровочной пробы (например, 
вместо нее внесен Отрицательный контроль);
3. Параметры промывки или настройки промывочного устройства 
отличаются от предварительно выбранных оптимальных значений;
4. Контаминация Калибровочной пробы
С П  положительного 
контроля < 0,900
1. Нарушена последовательность выполнения анализа;
2. Ошибка оператора при нанесении Положительного контроля;
3. Параметры промывки или настройки промывочного устройства 
отличаются от предварительно выбранных оптимальных значений;
4. Контаминация Положительного контроля.
вго.
9.3. Интерпретация результатов
Нереактивные образцы признают отрицательными по содержанию 1 д М  против В ГО .
Реактивные и  сомнительные образцы признают положительными по содержанию 1 д М  против
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
Набор должен храниться при температуре +2...8°С.
Срок годности реагентов указан на этикетках флаконов.
Вскрытые реагенты стабильны при температуре +2...8°С в течение 3 месяцев.
11. ОГРАНИЧЕНИЯ В ПРИМЕНЕНИИ АНАЛИЗА
Получение ложноположительных результатов возможно в менее 2% случаев и  связано с 
высокой концентрацией ревматоидного фактора.
Замороженные образцы, содержащие фибрин, после разморозки могут давать ложные
результаты,
СХЕМА АНАЛИЗА
Лунки
Реагенты ■ —
Blank bONTROLl- CAL co ntro l!  + Образцы 
(разведенные 
в 2 0 0 раз)
CONTROL 1 - 1 0 0 мкл ----
CAL ---- 1 0 0 мкл
CONTROL + ---- 1 0 0 мкл
Образцы (разведенные в 200 раз) ---- ---- 1 0 0 мкл
Инкубация: 37±2°С, 60 мин, 
Промывка: 4-5 х 350 мкл.
Иммунокомплекс 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкп 1 0 0 мкл
* Инкубация: 37±2°С, 60 мин,
* Промывка: 4-5 х 350 мкл
Раствор ТМБ [Т М В| 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл
* Инкубация: комнатная температура (+18,.,25°С), 20 мин.
8/9


--- стр. 280 ---
топ-реагент STOP 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл 1 0 0 мкл
Считывание: 450-405 нм (референсная длина волны: 620 нм).
Примерная схема нанесения образцов на микропланшет:
1 2 3 4 ^'.5' ■ '6*1 -Q. “ 9 1 0 11 1 2
A BLK 052
В K(-) 0БЗ
С K(-) 0Б4
D K (-) 0Б5
E КП 0Б6
F КП 0Б7
G K (+) 0Б8
H 0Б1 0Б9
Условные обозначения:
BLK = лунка для обнуления (Blank) 
К(-) = отрицательный контроль 
К(+) = положительный контроль 
ОБ - образцы
неральный директор 
О О  «Компания Алкор Био»
У § /
е в  М .В.
/ководитель лаборатории разработки ИФА-систем 
00 «Компания Алкор Био»
RADIM S.p.A. - Via del Mare, 125 - 00040 Pomezia (Roma) Italia 
Tel.: +39 06 91.249.1 - Fax: +39 06 91.249.443 
National Order Entrv:  +39 06 91.249.702 
Export Department:  +39 06 91.249.701 
Customer Care: +39 06 91.249.700 
info(a).raclim.it - www.radim.it


--- стр. 281 ---