Питательная среда для определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам, сухая (агар Мюллера-Хинтон II) по ТУ 9385-227-78095326-2015 — инструкция и характеристики

РУ: РЗН 2017/5962 от 10.07.2017 · класс риска 2б

Производитель: БУ ГНЦ ПМБ (Россия)

Вид изделия: Агар Мюллера-Хинтона питательная среда для определения чувствительности к антимикробным препаратам ИВД

В госконтрактах 44-ФЗ: 275 контрактов, медианная цена за единицу 4 219 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
«У1'ВЕРЖДАЮ»
Директор ФБУН
Государственный научный центр приклад- 
юбиологии и
и .А. Дятлов 
2017 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению питательной среды для определения чувствительности мик­
роорганизмов к антибактериальным препаратам, сухой  
(агар Мюллера-Хинтон И)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Питательная среда для определения чувствительности микроорганизмов к анти­
бактериальным препаратам, сухая (агар Мюллера-Хинтон II) далее по тексту - агар 
Мюллера-Хинтон II, предназначена для определения чувствительности микроорганиз­
мов к антибактериальным препаратам (АБП) диско-диффузионным методом с целью оп­
ределения терапевтической схемы лечения инфекционных болезней и характеристики 
штаммов.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕПАРАТА
Агар Мюллера-Хинтон II представляет собой мелкодисперсный порошок кремо­
вого цвета, который получают смешиванием сухих компонентов.
Выпускается в полиэтиленовых банках по 250 г.
2.1. Принцип действия
Совокупность компонентов, входящих в состав агара Мюллера-Хинтон II, обес­
печивает рост широкого спектра микроорганизмов. Принцип диско-диффузионного ме­
тода заключается в способности антибактериальных препаратов диффундировать из 
пропитанных ими бумажных дисков в питательную среду, угнетая рост микроорганиз­
мов, посеянных на поверхность агара.


--- стр. 2 ---
Солянокислотный гидролизат казеина, модифицированный............................. 17,5
Мясной экстракт.................................................................................................... 2,0
Крахмал растворимый........................................................................................... 1,5
Агар бактериологический..................................................................................... 13,0±2,0'
'' [варьирование величины связано с  различной прочностью студия агара
2.2. Состав, г/л:
pH от 7,2 до 7,4
Определение pH проводят потенциометрическим методом с применением стеклянного элек­
трода в соответствии с МУК 4.2.2316-08 «Методы контроля бактериологичееких питатель­
ных еред» растворе, приготовленном путем добавления к 2,00 г сухого агара Мюллера- 
Хиитон II 100 мл дистиллированной воды.
Величина pH, определенная по МУК 4.2.2316-08, являетея условной величиной, ко­
торая соответствует значению pH готовой среды и может незначительно меняться после сте­
рилизации. Пределы значения pH, указанные выше, учитывают отклонения pH после стери­
лизации среды.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1.Чувствительность среды и стабильность основных биологических  
свойств микроорганизмов.
Агар Мюллера-Хинтон II обеспечивает через 18-24 ч при посеве по 0,1 мл микробной взвеси 
из разведения 10'* и инкубации при температуре (36±1) °С рост тест-штаммов:
- Escherichia соИ АТСС 25922 в виде круглых слегка выпуклых колоний светло 
желтого цвета с гладкой блеетящей поверхностью,
- Staphylococcus aureus АТСС 29213 в виде круглых, выпуклых, с гладкой блестя­
щей поверхностью непрозрачные колонии желтого цвета,
- Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853 в виде плоских, неправильной формы с вол­
нистыми краями колоний желто-зеленого цвета,
- Enterococcus faecalis АТСС 29212 в виде полупрозрачных, круглых колоний, -
3.2.Показатель чувствительности микроорганизмов к антибактериальным
препаратам.
Агар Мюллера-Хинтон II обеспечивает через 18-24 ч инкубации посевов при температуре 
(36+1) °С равномерный рост тест-штаммов Escherichia соИ  АТСС 25922, Staphylococcus aureus  
АТСС 29213, Pseudomonas aeruginosa  АТСС 27853, Enterococcus faecalis  АТСС 29212 в виде га­
зона с образованием четких соответствующего диаметра зон задержки роста вокруг дисков с ан­
тибактериальными препаратами (см. табл.) при посеве стерильным тампоном из микробной взве­
си, приготовленной по ОСО мутности бактериальных взвесей (5 ME) и разведенной в соотноше­
нии 1:2 (1 мл микробной взвеси и 2 мл стерильного 0,9% раствора натрия хлористого).


--- стр. 3 ---
Таблица. Диаметры зон задержки роста вокруг дисков с АБП
АБП Содер- 
жание 
АБП в 
диске, 
мкг
Диаметры зон задержки роста, мм
Е. соИ
АТСС 25922
S. aureus 
АТСС 29213
Р. aeruginosa  
АТСС 27853
Е. faecal is 
АТСС 29212
Гентамицин 10 19-26 19-25 17-23 _*
Имипенем 10 26-32 _* 20-28 24-30
Левофлоксации 5 29-37 23-29 19-26 19-25
Гетрациклин 30 23-31 _*
Тигециклин 15 20-27 19-25 _* 20-26
Триметоприм- 1,25/23,7 23-29 26-32 26-34
сульфометоксазол 5
Цефепим 30 31-37 24-30 _*
Эритромицин 15 23-29 - -
Примечание: *) определение с данными АБП не производят
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Потенциальный риск применения агара Мюллера-Хинтон II - класс 2 б (Приказ 
МЗРФ №4н от 06.06.2012 г).
Работу по определению чувствительности микроорганизмов к антибактериальным 
препаратам проводить с соблюдением СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроор­
ганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных бо­
лезней».
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
Термостат, обеспечивающий температуру 35 - 37 °С 
Весы лабораторные 2 класса точности 
Автоклав
Ламинарный шкаф
Пипетки стеклянные, позволяющие отбирать объемы жидкости 1  и 2 мл 
Цилиндр стеклянный мерный вместимостью 1000 мл 
Чашки Петри 
Вода дистиллированная 
Колбы
Тампоны стерильные
Диски с антибактериальными препаратами, разрешенные к применению в уста­
новленном порядке
Пинцеты анатомические 
Автоматический диспенсер
Отраслевой стандартный образец мутности (ОСО) 5 единиц соответствующего 
года выпуска.


--- стр. 4 ---
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Взятие анализируемых образцов целееообразно проводить до начала антибакте­
риальной терапии. Образцы берут непосредетвенио из очага инфекции или исследуют 
клинически значимый биологический материал. При взятии образцов следует строго со­
блюдать цравила асептики, избегая контаминацию посторонней микрофлорой. Для взя­
тия анализируемых образцов следует использовать стерильные инструменты, а для их 
транспортирования стерильные пробирки с транспортной средой. Анализируемые об­
разцы хранятся на плотных питательных средах при температуре 4-8 °С не более 7 дней.
Исследованию по оценке чувствительности микроорганизмов к антибактериаль­
ным препаратам подлежат выделенные из клинического материала чистые культуры 
микроорганизмов или материалы изолированных колоний с плотных питательных сред.
Работу с материалом, содержащим культуры микроорганизмов, его хранение и 
обезвреживание проводить с соблюдением СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с мик­
роорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных 
болезней».
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препара­
там диско-диффузионным методом проводят в соответствии с требованиями Клиниче­
ских рекомендаций «Определение чувствительности микроорганизмов к антимикробным 
препаратам» (Межрегиональная ассоциация по клинической микробиологии и антимик­
робной химиотерапии, Москва, 2014).
7Л. Приготовление ереды
Навеску агара Мюллера-Хинтон II в количестве, указанном на этикетке для при­
готовления конкретной серии агара Мюллера-Хинтон II, тщательно размешивают в 1л 
дистиллированной воды, кипятят в течение 1 мин до полного расплавления агара, стери­
лизуют автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин. Затем среду разли­
вают по 20 мл в чашки Петри диаметром 90 мм. Толщины слоя агара Мюллера-Хинтон II 
в чашке Петри должна составлять 4,0±0,5 мм. Перед разливом чашки Петри устанавли­
вают на строго горизонтальную поверхность (выверенную по уровню, без впадин и вы­
пуклостей). После заполнения чашки с агаром закрывают и оставляют при комнатной 
температуре для застывания на 18-24 часов. Готовый агар Мюллера-Хинтон II в чашках 
Петри прозрачный желтого цвета.
Готовый агар Мюллера-Хинтон II в чашках Петри можно хранить в при 4-8 °С в 
течение 7 сут.


--- стр. 5 ---
7.2.1. Приготовление инокулята
Для определения чувствительности микроорганизмов к АБП каждую культуру 
бактериологической петлей переносят в пробирку со стерильным 0,9% раствором натрия 
хлористого и доводят концентрацию микробной взвеси до 5 ME по отраслевому стан­
дартному образцу мутности, соответствующего года выпуска. Стандартную бактериаль­
ную суспензию готовят путем разведения полученных микробных взвесей в соотноше­
нии 1:2 (1 мл микробной взвеси и 2 мл стерильного 0,9 % раствора натрия хлористого)
о
до концентрации 1,5x10 КОЕ/мл.
7.2.2. Инокуляция чашек Петри с агаром Мюллера-Хинтон II
Бактериальную суспензию, приготовленную по п.7.2.1, инокулируют на агар в те­
чение 15 минут после ее приготовления. Для равномерного посева используют стериль­
ные вискозные или стерильные хлопковые тампоны. Тампоны предназначены только для  
однократного применения, повторное их использование приведет к ошибочным резуль­
татам!  Тампон погружают в бактериальную суспензию микроорганизма, избыток ино­
кулята удаляют, отжимая тампон о стенки пробирки. Избыток суспензии может привести 
к избыточному росту микроорганизмов, что особенно характерно для грамотрицатель- 
ных бактерий. Затем тампоном равномерно распределяют суспензию каждого микроор­
ганизма по поверхности чашки Петри с агаром Мюллера-Хинтон 11 в трех направлениях, 
поворачивая чашку Петри на 60° для получения сплошного газона.
Посев чашек дублируют в трех повторностях.
7.2.3. Аппликация дисков
На поверхность агара Мюллера-Хинтон II наносят диски с АБП не позднее, чем 
через 15 мин после инокуляции. Увеличение интервала времени между посевом и ап­
пликацией дисков может привести к искажению результатов. Аппликацию дисков про­
водят с помощью стерильного пинцета или с помощью автоматического диспенсера, ак­
куратно прижимая их к поверхности агара Мюллера-Хинтон II. После нанесения на по­
верхность агара диски нельзя передвигать, т.к. диффузия антибиотика в среду начинает­
ся очень быстро. Расстояние от диска до края чашки и между дисками должно быть 15- 
20 мм. На одну чашку диаметром 90 мм помещают не больше 4 дисков с антимикробны­
ми препаратами. Чашки помешают в термостат не позднее чем через 15 минут после на­
ложения дисков.
7.2.4. Инкубация
Посевы инкубируют при температуре (36±1)°С в течение 18-24 ч.
7.2. Исследование образца


--- стр. 6 ---
у
8. УЧЕТ И РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
После окончания инкубации чашки с АБП помещают кверху дном на темную ма­
товую поверхность так, чтобы свет падал на них под углом в 45° (учет в отраженном 
свете). С помощью штангенциркуля или специальной линейки измеряют диаметр зон 
полной задержки роста с точностью до 1 мм и определяют среднее значение из трех из­
мерений на трех чашках Петри. Диаметры зон, измеренные вокруг дисков с АБП, срав­
нивают со значениями в интерпретационных таблицах, представленных в клинических 
рекомендациях «Определение чувствительности микроорганизмов к антимикробным 
препаратам». Эти таблицы содержат пограничные значения МПК (минимальная погра­
ничная концентрация) и соответствующие им пограничные значения диаметров зон по­
давления роста, которые используются для определения клинической категории чувст­
вительности тестируемых микроорганизмов (чувствительные, умеренно-резистентные и 
резистентные).
9. УТИЛИЗАЦИЯ
Утилизация серий среды с истекшим сроком годности и в случае повреждения 
упаковки производится по СанПиН 2.1.7.2790-10 как медицинские отходы, не требую­
щие специальных мер безопасности, принадлежащие к классу «А» - эпидемиологически 
безопасные отходы или любым методом, предотвращающем повторное использование 
по назначению, например, сжиганием. Все компоненты агара Мюллера-Хинтон И, вхо­
дящие в его еостав, безопасны и не обладают токсическим воздействием.
Уничтожение агара Мюллера-Хинтон II после проведения исследований осущеет- 
вляетея по СанПиН 2.1.7.2790-10 как медицинские отходы, принадлежащие к классу «Б» 
с обязательным предварительным обезвреживанием путем автоклавирования в течение 2 
ч при температуре (126±1) °С.
Обращение е медицинекими отходами следует выполнять еоглаено схеме, приня­
той в конкретной организации, осуществляющей медицинекую и (или) фармацевтиче­
скую деятельность. Данная схема разрабатывается в соответствии с требованиями выше­
указанных санитарных правил и утверждается руководителем организации.
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ
Агар Мюллера-Хинтон II необходимо хранить в герметично закрытой упаковке в 
еухом защищенном от света месте при температуре от 2 °С до 30 °С и относительной 
влажности не более 60 %. После векрытия банку е агаром Мюллера-Хинтон II хранят до 
окончания срока годности при температуре от 2 °С до 30 °С плотно закрытой, в сухом 
месте, избегая попадания влаги.


--- стр. 7 ---
>J\ Агар Мюллера-Хинтон II транспортируют всеми видами крытого транспорта при
температуре от 2 °С до 30 °С или при температуре от -18°С до +40°С не более 7 суток.
Срок годности: 2 года. Среда с истекшим сроком годности и в поврежденной упа­
ковке использованию не подлежит.
Изготовитель гарантирует соответствие агара Мюллера-Хинтон II заявленным в 
ТУ 9385-227-78095326-2015 требованиям и функциональным характеристикам с начала 
использования и в течение всего срока годности при соблюдении условий хранения и 
транспортирования.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоя­
щей инструкции по применению.
По всем вопросам, касающимся качества медицинского изделия «Питательная 
среда для определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препа­
ратам, сухая (агар Мюллера-Хинтон II)», обращаться в адрес предприятия-изготовителя: 
142279 Московская обл., Серпуховский р-н, и. Оболенск, ФБУН «Государственный на­
учный центр прикладной микробиологии и биотехнологии», тел. (4967) 36-00-20, факс 
36-01-16.
Зам. директора
по научно-производственной работе А.П. Шепелин
«Согласовано»
Генеральный директор 
ООО «ВЫМПЕЛ-ЦЕНТР»
__________________П.К.Варнавичус
« Д # *» ________2017 г.


--- стр. 8 ---
-JJk