Набор реагентов для определения ДНК грибов рода Candida (C.albicans, C.glabrata, C.krusei,_x000D_ C.parapsilosis и C.tropicalis) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) для диагностики in vitro «АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Кандиды» по ТУ 9398-020-09286667-2014 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас 1 закупка, где это изделие полностью проходит по требованиям хотя бы в одной позиции.
| Закупка | Окончание подачи | Нач. цена |
|---|---|---|
| Поставка реагентов для ПЦР исследований в рамках проекта «Валидация метода ранней диагностики инфекционно-септических осложнений у детей на основе морфофункционального тестирования фагоцитов: мультицентровое исследование» ЭТАП 1-ГРАНТ (закупка у субъектов малого предпринимательства, социально ориентированных некоммерческих организаций)
№ 0373200188026000412 · ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ ГОРОДА МОСКВЫ "ДЕТСКАЯ ГОРОДСКАЯ КЛИНИЧЕСКАЯ БОЛЬНИЦА № 9 ИМ. Г.Н. СПЕРАНСКОГО ДЕПАРТАМЕНТА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ ГОРОДА МОСКВЫ" · г. Москва |
11.11.2026 | 1 307 194 ₽ |
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Генеральный директор
_Общества с ограниченной
)стью «НекстБио»
О. О. Лавинюков
2020 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для определения ДНК
грибов рода Candida {С.albicans, C.glabrata, C.krusei,
C.parapsilosis и C.tropicalis) методом полимеразной цепной
реакции (ПЦР) для диагностики in vitro
«Ам пл и П райм® ФЛОРОСКРИН®-Кандиды»
АмплиПрайм
ш 1
ООО «НекстБио»,
Российская Федерация, 111394,
город Москва, улица Полимерная, дом 8, стр. 2
IVD
--- стр. 2 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ...................................................................................................3
НАЗНАЧЕНИЕ.....................................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА.....................................................................................*...................3
ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ......................................................................5
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ...........................................................................6
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ......................................................................8
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ.........................................................................................8
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ.............................................11
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА. 12
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ ДНК........................13
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ
ПРОБ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА............................................................................13
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ...........................................................................13
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ...................................................13
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 1 («ПЦР-комплект» вариант FRT-100)...............................15
СОСТАВ..........................................................................................................................15
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ».............15
A. Подготовка пробирок для амплификации............................................................15
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени»....16
B. Анализ и интерпретация результатов..................................................................17
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 2 («ПЦР-комплект» вариант FRT-100 FN).........................22
СОСТАВ..........................................................................................................................22
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»...........22
A. Подготовка пробирок для амплификации...........................................................22
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени»....23
B. Анализ и интерпретация результатов..................................................................25
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 3 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L)...................................29
СОСТАВ..........................................................................................................................29
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»...........29
A. Подготовка пробирок для амплификации...........................................................29
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени»....30
B. Анализ и интерпретация результатов..................................................................31
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ.....................36
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ПРОИЗВОДИТЕЛЯ..............................................36
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ........................................38
стр. 2 из 39
--- стр. 3 ---
список СОКРАЩЕНИИ
В настоящей инструкции применяются следующие сокращения и обозначения:
BKO-FL - экзогенный внутренний контрольный образец
ГЭ - геномные эквиваленты
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
дНТФ - дезоксирибонуклеотидтрифосфат
К1, К2 - ДНК-калибраторы
К- - отрицательный контроль ПЦР
НК - нуклеиновые кислоты
ОК - отрицательный контроль экстракции
ОКО - отрицательный контрольный образец
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РУ - регистрационное удостоверение
УДГ - ypaцил-ДFIK-гликoзилaзa
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Кандиды» предназначен для
количественного определения ДНК грибов рода Candida: С.albicans, C.glabrata,
C.krusei, C .parapsilosis и C .tropicalis в биологическом материале (отделяемое
слизистой оболочки влагалища) методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной
детекцией продуктов амплификации. Набор реагентов используется в клинической
лабораторной диагностике для исследования биологического материала,
полученного от лиц с подозрением на вульвовагинальный кандидоз.
Материалом для проведения ПЦР служат пробы ДНК, экстрагированные из
исследуемого материала с помощью комплектов реагентов, рекомендованных
Производителем.
ВНИМАНИЕ! В соответствии с федеральным законом от 21.11.2011 №323-Ф3 «Об
основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» ПЦР-исследование
является одним из методов всестороннего обследования пациента, на основании
которых лечащий врач устанавливает диагноз и выбирает мероприятия по лечению
пациента.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Принцип тестирования основывается на экстракции ДНК из образцов
исследуемого материала совместно с внутренним контрольным образцом (BKO-FL^)
и одновременной амплификации участков ДНК выявляемых микроорганизмов и ДНК
BKO-FL с гибридизационно-флуоресцентной детекцией. BKO-FL позволяет
контролировать все этапы ПЦР-исследования для каждого образца и оценивать
■ ' BKO-FL входит в состав комплекта реагентов, рекомендованного Производителем для экстракции
ДНК из каждого исследуемого материала.
стр. 3 из 39
--- стр. 5 ---
дезоксиуридина входит в состав смеси дНТФ в реагентах для амплификации.
Дезоксиуридин делает контаминирующие ампликоны восприимчивыми к разрушению
ферментом УДГ до начала амплификации ДНК-мишени, и, следовательно, они не
могут быть в дальнейшем амплифицированы.
Фермент УДГ термолабилен и инактивируется при нагревании выше 50 °С и
поэтому не разрушает ампликоны мишени, нарабатываемые в процессе ПЦР.
На этапе амплификации одновременно в одной пробирке проводятся 5 реакций -
амплификация участков ДНК С.albicans, C.glabrata, C.krusei, C .parapsilosis и
C.tropicalis, a также амплификация последовательности BKO-FL. Результаты
амплификации ДНК С.albicans, C.glabrata, C.krusei, C .parapsilosis и C.tropicalis, a также
ДНК BKO-FL регистрируются по 5 различным каналам флуоресцентной детекции:
Таблица 1
Канал для
флуорофора FAM JOE ROX Cy5 Cy5.5
ДНК-мишень ДНК
с. albicans
ДНК
c.glabrata
ДНК
c.krusei
ДНК
c.parapsilosis
и C.tropicalis
ДНК BKO-FL
Область
амплификации ITS-2 ITS-2 ITS-2 ITS-^
искусственно
синтезированная
последовательность
ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ
Набор реагентов выпускается в 3 формах комплектации:
Форма 1 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100.
Форма 2 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 FN.
Форма 3 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-L.
Все формы комплектации предназначены для проведения амплификации ДНК с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» и
позволяют выявлять ДНК в количественном формате. Для проведения полного ПЦР-
исследования необходимо использовать комплекты реагентов для экстракции ДНК,
рекомендованные Производителем.
Форма комплектации 2 может быть использована совместно с автоматическими
станциями приготовления реакционных смесей.
стр. 5 из 39
--- стр. 6 ---
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для данного набора реагентов применимы следующие характеристики:
Линейный диапазон измерения и аналитическая чувствительность
Таблица 2
Вид
исследуемого
материала
Транспортная
среда
Комплект для
экстракции ДНК
Комплект
для
амплифика
ции
Микроорга
низм
Аналити
ческая
чувстви
тельность,
ГЭ/мл^
Линейный
диапазон
измерения,
ГЭ/мл
Отделяемое
слизистой
оболочки
влагалища
«АмплиПрайм
ТС» или
«АмплиПрайм
тем» или
«Транспортная
среда ТС-
ЭДЭМ»з
«АмплиПрайм
ДНК-сорб-АМ»
«ПЦР-
комплект»
вариант
FRT-100,
FRT-100 FN,
FRT-L
с. albicans 50
2x102-2x10^
C .glabrata 50
C .krusei 50
C .parapsilosis 50
C .tropicalis 50
Данные значения характеристик достигаются лри соблюдении правил, указанных
в разделах «Взятие, транслортирование и хранение исследуемого материала» и
«Подготовка исследуемого материала к экстракции ДНК».
Аналитическая чувствительность в отношении каждого из микроорганизмов
сохраняется и в присутствии высоких концентраций ДНК других анализируемых
микроорганизмов - до 10^ ГЭ/мл.
Аналитическая специфичность
Набор реагентов обнаруживает фрагменты ДНК заявленных микроорганизмов.
Аналитическая специфичность набора реагентов доказана при исследовании ДНК
следующих микроорганизмов: G ardnerella vaginalis, Lactobacillus spp., Escherichia coli,
Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes. S treptococcus agalactlae. M ycoplasm a
hominis, U reaplasm a urealyticum , Ureaplasm a parvum . C hlam ydia trachom atis. N eisseria
flava. Neisseria subfiava. N eisseria sicca. Neisseria m ucosa. N eisseria gonorrhoeae.
M ycoplasm a genitalium . Trichom onas vaginalis. Treponem a pallidum . Toxoplasm a gondii,
H S V 1 и 2 типа, CMV, HPV, a также геномной ДНК человека.
При тестировании образцов ДНК вышеперечисленных микроорганизмов и ДНК
человека неспецифических реакций выявлено не было.
2 Количество геномных эквивалентов микроорганизма (ГЭ) в биологическом материале (отделяемое
слизистой оболочки влагалища), помещенном в указанную транспортную среду, в пересчете на 1 мл.
^ Форма комплектации 3 или 4 комплекта реагентов «АмплиГ1райм ЭДЭМ»,
стр. 6 из 39
--- стр. 7 ---
/
Воспроизводимость, повторяемость и правильность
Воспроизводимость и повторяемость были определены путем тестирования
модельного образца биоматериала. Модельный образец биоматериала был приготовлен
разведением стандартного образца предприятия, содержащего ДНК пяти
микроорганизмов {C.albicans, C.glabrata, C.krusei, C.parapsilosis, C.tropicalis) в трех
диапазонах концентраций (от 2x10^ до 5x10^, от 1x10'^ до 5x10"^, от 1x10^ до 5x10® ГЭ/мл) в
биологическом материале, не содержащем ДНК каких-либо других возбудителей ИППП.
Правильность была определена путем тестирования стандартных образцов
предприятия в диапазоне концентрации от 2x10® до 2x1 O'* ГЭ/мл.
Таблица 3
Воспроизводимость
Микроорганизм
Исходное
значение
концентрации,
ГЭ/мл
Количество
повторов
Среднее
значение
концентрации,
|д
Стандартное
отклонение
(SD)
Коэффициент
вариации (CV),
%
C.albicans
от 2x10^ до
5x102
80 2,19 0,04 2,02
C.glabrata 80 2,26 0,06 2,80
C.krusei 80 2,22 0,07 3,34
C.parapsilosis,
C.tropicalis 80 2,54 0,05 1,78
C.albicans
от 1х10‘*до
5x10“ »
80 4,08 0,04 1,08
C.glabrata 80 4,17 0,06 1,35
C.krusei 80 4,17 0,04 0,91
C.parapsilosis,
C. tropicalis 80 4,50 0,04 0,81
C.albicans
от 1х10®до
5x10®
80 6,11 0,05 0,88
C.glabrata 80 6,20 0,05 0,89
C.krusei 80 6,13 0,04 0,63
C.parapsilosis,
C.tropicalis 80 6,44 0,09 1,41
Таблица 4
Повторяемость
Микроорганизм
Исходное
значение
концентрации,
ГЭ/мл
Количество
повторов
Среднее
значение
концентрации,
|д
Стандартное
отклонение
(SD)
Коэффициент
вариации (CV),
%
C.albicans
от 2x102 до
5x102
40 2,20 0,04 1,98
C.glabrata 40 2,31 0,05 2,07
C.krusei 40 2,25 0,06 2,45
C.parapsilosis,
C.tropicalis 40 2,54 0,04 1,57
C.albicans
от 1х10''до
5x10'*
40 4,06 0,04 1,05
C.glabrata 40 4,13 0,05 1,09
C.krusei 40 4,17 0,04 0,68
C.parapsilosis,
C.tropicalis 40 4,50 0,04 0,71
C.albicans
от 1х10®до
5x10®
40 6,15 0,03 0,47
C.glabrata 40 6,23 0,04 0,66
C.krusei 40 6,13 0,02 0,36
C.parapsilosis,
C.tropicalis 40 6,52 0,02 0,37
стр. 7 из 39
--- стр. 8 ---
/
Таблица 5
Правильность
Микроорганизм Количество
повторов
Среднее
значение
измерения, 1д
Установленное
значение, 1д
Систематическая
погрешность (В),
|д %
С. albicans 100 3,80 3,67 0,13 3,54
C.qiabrata 100 3,92 3,68 0,24 6,52
C.krusei 100 3,88 3,38 0,5 14,79
C.parapsilosis,
C.tropicalis 100 4,23 3,98 0,25 6,28
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
. Таблица 6
Результаты тестирования набора реагентов «АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-
Кандиды» в сравнении с референтным методом
Тип
образцов
Результаты
применения набора
реагентов
«АмплиПрайм'^’
ФЛОРОСКРИН'®-
Кандиды»
Результаты применения референтного метода*
C .albicans C .glabrata C .kru sei С. p ara f
C.troi
osilosis,
olcalis
положи
тельных
отрица
тельных
положи
тельных
отрица
тельных
положи
тельных
отрица
тельных
положи
тельных
отрица
тельных
Отделяемое
слизистой
оболочки
влагалища
Всего
исследовано
700 образцов
положи
тельных 330 0 160 0 120 0 116 0
отрица
тельных 0 370 0 540 0 580 0 584
Были ислользованы 700 образцов отделяемого слизистой оболочки влагалища,
полученных от женщин с жалобами на выделения, зуд и жжение во влагалище.
Таблица 7
Диагностические характеристики набора реагентов
«АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Кандиды»
Тип
образцов
Диагностическая чувствительность^
(с доверительной вероятностью 95 %),
не менее %
Диагностическая специфичность^,
(с доверительной вероятностью 95 %),
не менее %
C.albicans C.glabrata C .krusei
C .parapsi
losis,
C.tropicalis
C.albicans C.glabrata C.krusei
C .parapsi
losis,
C.tropicalis
Отделяемое
слизистой
оболочки
влагалища
99,1 98,1 97,5 97,5 99,2 99,4 99,5 99,5
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно
биологические (ПЦР) исследования биологического материала на наличие
возбудителей инфекционных болезней, с соблюдением
эпидемиологических правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность
санитарно-
работы с
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями
в качестве референтного метода использовался набор
«АмплиСенс® ФлороЦеноз / Кандиды-FL» (РУ № ФСР 2012/14005).
® Относительная чувствительность в сравнении с использованным референтным методом.
® Относительная специфичность в сравнении с использованным референтным методом.
реагентов
стр. 8 из 39
--- стр. 9 ---
f паразитарных болезней». СанПиН 2;1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические
требования к обращению с медицинскими отходами» и методических указаний
МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы
амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы I-IV групп патогенности».
При работе необходимо всегда выполнять следующие требования:
- Рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные, организовывать
работу и хранение в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с
микроорганизма1у1и III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями
паразитарных болезней».
- Убирать и дезинфицировать разлитые образцы или реагенты, используя
дезинфицирующие средства в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность
работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и
возбудителями паразитарных болезней».
- Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. Анализ проводится в
отдельных помещениях (зонах). Работу следует начинать в Зоне Экстракции,
продолжать в Зоне Амплификации и Детекции. Не возвращать образцы,
оборудование и реагенты в зону, в которой была проведена предыдущая стадия
процесса.
- Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, а также
использованные реагенты, упаковку, биологический материал, включая
материалы, инструменты и предметы, загрязненные биологическим материалом,
следует удалять в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.7.2790-10
«Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими
отходами».
ВНИМАНИЕ! При удалении отходов после амплификации (пробирок, содержащих
продукты ПЦР) недопустимо открывание пробирок и разбрызгивание содержимого,
поскольку это может привести к контаминации продуктами ПЦР лабораторной зоны,
оборудования и реагентов.
- Использовать и менять при каждой операции одноразовые наконечники для
автоматических дозаторов с фильтром^. Одноразовую пластиковую посуду
(пробирки, наконечники) необходимо сбрасывать в специальный контейнер,
содержащий дезинфицирующее средство, которое может быть использовано для
обеззараживания медицинских отходов.
^ Для удаления надосадочной жидкости в процессе экстракции используются одноразовые наконечники
без фильтра.
стр. 9 из 39
--- стр. 19 ---
Таблица 12
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-исследования
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 1. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ______________________
Конт
роль
Контролиру
емый этап
ПЦР-
исследования
Значение порогового цикла по каналу для флуорофора (Cf)
FAM JOE ROX Су5 Су5.5
ОК Экстракция
ДНК отсутствуетотсутствуетотсутствуетотсутствуетопределеноменьшеграничного
К- ПЦР отсутствуетотсутствуетотсутствуетотсутствуетотсутствует
К1 ПЦР ' определеноолределеноопределеноопределеноолределено
К2 ПЦР определеноменьшеграничного
определеноменьшеграничного
определеноменьшеграничного
определеноменьшеграничного
определеноменьшеграничного
Возможные ошибки:
1. Для отрицательного контроля экстракции (ОК)
а) по каналам для флуорофоров РАМ и/или JOE и/или ROX и/или Су5 определено
значение лорогового цикла {Cf). Вероятна контаминация лаборатории
продуктами амплификации или контаминация реагентов, исследуемых
образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо предпринять
меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить ПЦР-
исследование для всех образцов, в которых обнаружена ДНК анализируемых
микроорганизмов, начиная с этапа экстракции ДНК;
б) по каналу для флуорофора Суб.5 значение порогового цикла (Ct) отсутствует
или определено больше граничного. Это означает, что ОК не выполнил
функцию контроля контаминации. Требуется повторное ПЦР-исследование
всех образцов, в которых обнаружена ДНК анализируемых микроорганизмов,
начиная с этапа экстракции ДНК.
2. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для флуорофоров РАМ и/или
JOE и/или ROX и/или Суб и/или Суб.б олределено значение лорогового цикла (Cf).
Вероятна контаминация лаборатории лродуктами амплификации или контаминация
реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования.
Необходимо лредлринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации
и повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в которых обнаружена
ДНК анализируемых микроорганизмов и/или ВКО.
3. Для ДНК-калибратора К1 отсутствует значение порогового цикла (Cf) по какому-
либо из указанных каналов для флуорофоров (см. табл. 12). Необходимо повторить
амплификацию и детекцию для всех образцов.
стр. 20 из 39
--- стр. 20 ---
ФОРМА КОМПЛЬК! АЦИ1И I. I\W J IIM
4. Для ДНК-калибратора К2 значение порогового цикла (Cf) по какому-либо из
указанных каналов для флуорофоров (см. табл. 12) отсутствует или превышает
граничное значение. Необходимо повторить амплификацию и детекцию для всех
образцов.
5. При проведении количественного ПЦР-исследования показатель эффективности Е
при построении калибровочной прямой менее 80 % или более 120 %. Необходимо
проверить правильность заданных концентраций ДНК-калибраторов в соответствии
с вкладышем к набору реагентов и правильность выбранного уровня пороговой
линии. Если при, правильно заданных концентрациях ДНК-калибраторов и уровне
пороговой линии показатель эффективности не укладывается в требуемый
диапазон, следует повторить амплификацию и детекцию для всех образцов.
6. Для исследуемого образца определено значение порогового цикла, при этом на
графике флуоресценции отсутствует участок характерного экспоненциального
подъема (график представляет собой приблизительно прямую линию). Необходимо
проверить правильность выбранного уровня пороговой линии или параметров
расчета базовой линии. Если результат получен при правильном уровне пороговой
линии (базовой линии), требуется повторно провести амплификацию и детекцию
для этого образца.
стр. 21 из 39
I
--- стр. 21 ---
7ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 2 («ПЦР-комплект» вариант FRT-100 FN)
СОСТАВ
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 FN для амплификации
фрагментов ДНК С.albicans, C.glabrata, C.krusei, C .parapsilosis и C.tropicalis с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени»
позволяет проводить ПЦР-исследование в количественном формате. Комплект
реагентов включает:
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 2. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ______________________
Реагейт Описание Объем, мл Количество
ПЦР-смесь Флороскрин-
Кандиды
Прозрачная бесцветная
жидкость 1,2 1 пробирка
ПЦР-буфер-Н Прозрачная бесцветная
жидкость 0,6 1 пробирка
К1 complex Прозрачная бесцветная
жидкость 0,2 1 пробирка
К2 complex Прозрачная бесцветная
жидкость 0,2 1 пробирка
К- Прозрачная бесцветная
жидкость 0,2 1 пробирка
Комплект реагентов рассчитан на проведение 110 реакций амплификации, включая
контроли.
К набору реагентов прилагается диск, содержащий руководство оператора и
программное обеспечение версии 1.0 в формате Microsoft Excel для
автоматической обработки исходных данных и получения результатов.
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»
Выбор пробирок для амплификации зависит от используемого
амплификатора с системой детекции в режиме «реального времени».
Для внесения в пробирки реагентов, проб ДНК и контрольных образцов
используются одноразовые наконечники с фильтрами.
А. Подготовка пробирок для амплификации
Общий объем реакционной смеси-25 мкл, включая объем пробы ДНК-10 мкл.
1. Рассчитать количество каждого реагента, требующееся для приготовления
реакционной смеси. На одну реакцию требуется 10 мкл ПЦР-смеси Флороскрин-
Кандиды и 5 мкл ПЦР-буфера-Н. Смесь готовить на общее число исследуемых и
контрольных образцов (количество контрольных образцов см. в пункте 7) плюс запас
на несколько реакций.
ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси следует смешивать непосредственно
перед проведением ПЦР-исследования.
сто. 22 из 39
--- стр. 26 ---
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 2. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
нормированных значений концентрации ДНК С.albicans,
C.parapsilosis и C .tropicalis производят согласно формуле:
C.glabrata, C.krusei,
число ГЭ Candida в 1 мл .. _ число ГЭ Candida на 10®
Л IU —
число ГЭ ДНК человека в 1 мл клеток человека
где;
- «число ГЭ Candida в 1 мл» - рассчитанные абсолютные значения количества ГЭ
Candida в 1 мл исследуемого образца при использовании набора реагентов
«АмплиПрайл^® ФЛОРОСКРИН®-Кандиды»;
- «число ГЭ ДНК человека в 1 мл» - рассчитанное значение количества ГЭ ДНК
человека в 1 мл исследуемого образца при использовании набора реагентов для
количественного определения ДНК человека.
ВНИМАНИЕ! Подробную информацию по расчету значения «число ГЭ ДНК человека в
1 мл» смотрите в инструкции по применению набора реагентов для количественного
определения ДНК человека.
Результат ПЦР-исследования считается достоверным, если получены
правильные результаты для контролей этапов экстракции и амплификации
ДНК в соответствии с табл. 17 и вкладышем, прилагаемым к набору реагентов.
Таблица 17
Контроль
КонтролиРУе
мый этап
ПЦР-
исследования
Значение порогового цикла по каналу для флуорофора (Ct)
FAM JOE ROX Су5 Су5.5
ОК Экстракция
ДНК отсутствует отсутствует отсутствует отсутствует
определено
меньше
граничного
К- ПЦР отсутствует отсутствует отсутствует отсутствует отсутствует
К1 ПЦР определеноопределеноопределеноопределеноопределено
К2 ПЦР
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
Возможные ошибки:
1. Для отрицательного контроля экстракции (ОК)
а) по каналам для флуорофоров РАМ и/или JOE и/или ROX и/или Суб определено
значение порогового цикла (Ct). Вероятна контаминация лаборатории
продуктами амплификации или контаминация реагентов, исследуемых образцов
на каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо предпринять меры по
выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить ПЦР-
стр. 27 из 39
--- стр. 27 ---
исследование для всех образцов, в которых обнаружена ДНК анализируемых
микроорганизмов, начиная с этала экстракции ДНК.
б) по каналу для флуорофора Суб.5 значение порогового цикла (Ct) отсутствует или
определено больше граничного. Это означает, что ОК не выполнил функцию
контроля контаминации. Требуется повторное ПЦР-исследование всех
образцов, в которых обнаружена ДНК анализируемых микроорганизмов, начиная
с этапа экстракции ДНК.
2. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для флуорофоров FAM и/или
JOE и/или ROX и/или Суб и/или Суб.б определено значение порогового цикла (Ct).
Вероятна контаминация лаборатории лродуктами амплификации или контаминация
реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования.
Необходимо предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации
и повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в которых обнаружена
ДНК анализируемых микроорганизмов и/или ВКО.
3. Для ДНК-калибратора К1 отсутствует значение порогового цикла (Ct) по какому-
либо из указанных каналов для флуорофоров (см. табл. 17). Необходимо повторить
амплификацию и детекцию для всех образцов.
4. Для ДНК-калибратора К2 значение порогового цикла (Ct) по какому-либо из
указанных каналов для флуорофоров (см. табл. 17) отсутствует или превышает
граничное значение. Необходимо повторить амплификацию и детекцию для всех
образцов.
б. При проведении количественного ПЦР-исследования показатель эффективности Е
при построении калибровочной прямой менее 80 % или более 120 %. Необходимо
проверить правильность заданных концентраций ДНК-калибраторов в соответствии
с вкладышем к набору реагентов и правильность выбранного уровня пороговой
линии. Если при правильно заданных концентрациях ДНК-калибраторов и уровне
пороговой линии показатель эффективности не укладывается в требуемый
диапазон, следует повторить амплификацию и детекцию для всех образцов.
6. Для исследуемого образца определено значение порогового цикла, при этом на
графике флуоресценции отсутствует участок характерного экспоненциального
подъема (график представляет собой приблизительно прямую линию). Необходимо
проверить правильность выбранного уровня пороговой линии или параметров
расчета базовой линии. Если результат получен при правильном уровне пороговой
линии (базовой линии), требуется повторно провести амплификацию и детекцию
для этого образца.
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 2. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ______________________
стр. 28 из 39
--- стр. 28 ---
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 3 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L)
СОСТАВ
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-L для амплификации
фрагментов ДНК С.albicans, C.glabrata, C.krusei, C .parapsilosis и C.tropicalis с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени»
позволяет проводить ПЦР-исследование в количественном формате. Комплект
реагентов включает:
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 3. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
Реагент' Описание Объем, мл Количество
ПЦР-смесь
Флороскрин-Кандиды-
Lyo
Порошок белого цвета -
96 пробирок
объемом 0,2 мл или
96-луночный
планшет для ПЦР
К1 complex Прозрачная бесцветная
жидкость 0,5 1 пробирка
К2 complex Прозрачная бесцветная
жидкость 0,5 1 пробирка
К- Прозрачная бесцветная
жидкость 0,5 1 пробирка
Буфер для элюции В Прозрачная бесцветная
жидкость 1,2 8 пробирок
Комплект реагентов рассчитан на проведение 96 реакций амплификации, включая
контроли.
К набору реагентов прилагается диск, содержащий руководство оператора и
программное обеспечение версии 1.0 в формате Microsoft Excel для
автоматической обработки исходных данных и получения результатов.
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»
Для внесения в пробирки реагентов, проб ДНК и контрольных образцов
используются одноразовые наконечники с фильтрами.
А. Подготовка пробирок для амплификации
Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, включая объем пробы ДНК - 25 мкл.
1. Отобрать необходимое количество пробирок или достать 96-луночный планшет
для амплификации с готовой лиофилизированной реакционной ПЦР-смесью
Флороскрин-Кандиды-Lyo для амплификации ДНК исследуемых и контрольных
образцов (количество контрольных образцов см. в пункте 3).
2. В подготовленные пробирки или лунки планшета внести по 25 мкл проб ДНК,
полученных в результате экстракции из исследуемых образцов.
стр. 29 из 39
--- стр. 33 ---
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 3. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
ВНИМАНИЕ! Подробную информацию по расчету значения «число ГЭ ДНК человека в
1 мл» смотрите в инструкции по применению набора реагентов для количественного
определения ДНК человека.
Результат ПЦР-исследования считается достоверным, если получены
правильные результаты для контролей этапов экстракции и амплификации
ДНК в соответствии с табл. 22 и вкладышем, прилагаемым к набору реагентов.
Таблица 22
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-исследования
Контроль
Контролируе
мый этап
ПЦР-
исследования
Значение порогового цикла по каналу для флуорофора (Ct)
FAM JOE ROX Су5 Су5.5
ОК Экстракция
ДНК отсутствуетотсутствуетотсутствуетотсутствуетопределеноменьшеграничного
К- ПЦР отсутствуетотсутствуетотсутствуетотсутствуетотсутствует
К1 ПЦР определеноопределеноопределеноопределеноопределено
К2 ПЦР определеноменьшеграничного
определеноменьшеграничного
определеноменьшеграничного
определеноменьшеграничного
определеноменьшеграничного
Возможные ошибки:
1. Для отрицательного контроля экстракции (ОК)
а) по каналам для флуорофоров FAM и/или JOE и/или ROX и/или Су5 определено
значение порогового цикла {Cf). Вероятна контаминация лаборатории
продуктами амплификации или контаминация реагентов, исследуемых
образцов на каком-либо этале ПЦР-исследования. Необходимо предпринять
меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить ПЦР-
исследование для всех образцов, в которых обнаружена ДНК анализируемых
микроорганизмов, начиная с этапа экстракции ДНК;
б) по каналу для флуорофора Суб.5 значение порогового цикла {Ct) отсутствует
или определено больше граничного. Это означает, что ОК не выполнил
функцию контроля контаминации. Требуется ловторное ПЦР-исследование
всех образцов, в которых обнаружена ДНК анализируемых микроорганизмов,
начиная с этала экстракции ДНК.
2. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для флуорофоров FAM и/или
JOE и/или ROX и/или Суб и/или Суб.б определено значение порогового цикла (Ct).
Вероятна контаминация лаборатории продуктами амплификации или контаминация
реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования.
Необходимо предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации
стр. 34 из 39
--- стр. 34 ---
и повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в которых обнаружена
ДНК анализируемых микроорганизмов и/или ВКО.
3. Для ДНК-калибратора К1 отсутствует значение порогового цикла (СО по какому-
либо из указанных каналов для флуорофоров (см. табл. 22). Необходимо
повторить амплификацию и детекцию для всех образцов.
4. Для ДНК-калибратора К2 значение порогового цикла (СО по какому-либо из
указанных каналов для флуорофоров (см. табл. 22) отсутствует или превышает
граничное значение. Необходимо повторить амплификацию и детекцию для всех
образцов.
5. При проведении количественного ПЦР-исследования показатель эффективности Е
при построении калибровочной прямой менее 80 % или более 120 %. Необходимо
проверить правильность заданных концентраций ДНК-калибраторов в соответствии
с вкладышем к набору реагентов и правильность выбранного уровня пороговой
линии. Если при правильно заданных концентрациях ДНК-калибраторов и уровне
пороговой линии показатель эффективности не укладывается в требуемый
диапазон, следует повторить амплификацию и детекцию для всех образцов.
6. Для исследуемого образца определено значение порогового цикла, при этом на
графике флуоресценции отсутствует участок характерного экспоненциального
подъема (график представляет собой приблизительно прямую линию). Необходимо
проверить правильность выбранного уровня пороговой линии или параметров
расчета базовой линии. Если результат получен при правильном уровне пороговой
линии (базовой линии), требуется повторно провести амплификацию и детекцию
для этого образца.
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 3. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ______________________
_ о t r
--- стр. 35 ---
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 12 мес. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению не
подлежит. Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку годности,
указанному на этикетках для невскрытых реагентов.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до
8 °С не более 5 сут. Допускается транспортирование при температуре от 2 до 25 °С не
более 3 сут. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 и вариант FRT-
100 FN при получении разукомплектовать в соответствии с указанными
температурами хранения.
Хранение.
Форма комплектации 1. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100
хранить при температуре от 2 до 8 °С, кроме ПЦР-буфера-К. ПЦР-буфер-К хранить
при температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-смесь Флороскрин-Кандиды
хранить в защищенном от света месте.
Форма комплектации 2. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 FN
хранить при температуре от 2 до 8 °С, кроме ПЦР-буфера-FI. ПЦР-буфер-FI хранить
при температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-смесь Флороскрин-Кандиды
хранить в защищенном от света месте.
Форма комплектации 3. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-L хранить
при температуре от 2 до 8 °С. ПЦР-смесь Флороскрин-Кандиды-Lyo хранить в пакетах
с влагопоглотителем в защищенном от света месте.
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ПРОИЗВОДИТЕЛЯ
Производитель гарантирует соответствие основных параметров и характеристик
набора реагентов, требованиям, указанным в технической и эксплуатационной
документации, в течение указанного срока годности при соблюдении всех условий
транспортирования, хранения и применения.
Рекламации на качество набора реагентов «АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-
Кандиды» направлять в адрес производителя ООО «Н1екстБио» (111394 г. Москва,
ул. Полимерная, 8 стр. 2) в отдел по работе с рекламациями (тел. (495) 620-08-73, е-
mail; info@nextbio.ru).
При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по применению
набора реагентов, нежелательных реакций при его использовании, фактов и
обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
работников при применении и эксплуатации набора реагентов, рекомендуется
стр, 36 из 39
--- стр. 36 ---
направить сообщение в отдел по работе с рекламациями по адресу, указанному
выше, и в уполномоченную государственную регулирующую организацию (в РФ -
Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения) в соответствии с
действующим законодательством.
стр. 37 из 39
--- стр. 37 ---
'=ЧГ
си м в о л ы , ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ
IVD
VER
I
mJ
I1
Номер в каталоге
Максимальное
число тестов
Код партии
2
Использовать до
. Изделие для in vitro
диагностики са
Обратитесь к
руководству по
эксплуатации
Дата изменения
о'/- Не допускать
попадания
солнечного света
Ограничение
температуры
Дата изготовления
Производитель
f
Беречь от влаги
Хрупкое. Осторожно ft Верх
стр. 38 из 39
--- стр. 38 ---
Лист регистрации изменений
Редакция Место внесения
изменений Суть вносимых изменений
30.06.15
По тексту Исправлены опечатки
Дополнительные
материалы и
оборудование
Уточнено, что комплект расходных материалов для
автоматической станции для экстракции НК должен
соответствовать инструкции Производителя
Меры предосторожности
Дополнены сведения об описание утилизации или
уничтожения упаковки, биологического материала,
включая материалы, инструменты и предметы,
загрязненные биологическим материалом с
отдельным описанием правил
к
Диагностические
характеристики
Изменены значения диагностических
характеристик (специфичности и
чувствительности) на значения, полученные в
результате клинико-лабораторных испытаний, с
доверительной вероятности 95%
Изм. Номера листов Всего листов в документе
Номеризвещения об изменении
Изменения внес Датаизменённы х заменённы х новы ханнулированных
2 - 1-38 1 39-51 39 09286667.024.1/6-2020 Колачевск
ИЙ Н.Н. 26.08.2020
стр. 39 из 39
--- стр. 39 ---
Пронумеровано, скреплено и прошито
лист (а/ов)
альный директор Общества с
енной ответственностью
ид
0.0. Лавинюков
--- стр. 40 ---
X'
УТВЕРЖДАЮ
НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДНК ГРИБОВ РОДА
CANDIDA {С.ALBICANS, C.GLABRATA, C.KRUSEI, C.PARAPSILOSIS \А
C.TROPICALIS) МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ
(ПЦР) ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ IN VITRO
«АМПЛИПРАЙМ® ФЛОРОСКРИН®-КАНДИДЫ»
ПО ТУ 9398-020-09286667-2014
Шаблон вкладыша
Лист утверждения
СОГЛАСОВАНО
Руководитель отдела разработки
производственной документации
ООО «НекстБио»
М. Н. Гарае
Ж .С ^. Z 02 0
Младший специалист по документации
отдела разработки лроизводственной
документации ООО «НекстБио»
Н. Н. Колачевский
O ’ ■
--- стр. 41 ---
КОПИЙ/МЛ ООО «НекстБио»
ВКЛАДЫШ
к набору реагентов «АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Кандиды»
«ПЦР-комплект» вариант FRT-100, FRT-100 FN и FRT-L
Форма X: REF хххх-ххх xx.xx.xx
Настройки для приборов роторного типа
Канал
Calibrate / Gain
Optimisation... /
ОПТ.урОВНЯ СИГН.
Threshold
/ Порог
More Settings/
Outiier Removai/
Устранение выбросов
Siope Correct /
Коррект. уклона
FAM/Green от 5 до 10 FL 0,1 10-20% включена
JOE/Yellow от 4 до 8 FL 0,1 10-20% включена
ROX/Orange от 4 до 8 FL 0,1 5-15 % включена
CyS/Red от 4 до 8 FL 0,1 10-30% включена
Cy5.5/Crimson от 4 до 8 FL 0,1 20-30 % включена
Настройки для приборов планшетного типа
Канал Threshoid / Порог
FAM
Пороговая линия для каждого канала устанавливается на уровне,
соответствующем 10-20 % от максимального уровня флуоресценции,
полученного для образца К1 в последнем цикле амплификации
JOE/HEX
ROX
Су5
Су5.5
Пороговая линия для каждого канала устанавливается на уровне,
соответствующем 10-20 % от максимального уровня флуоресценции,
полученного для образца ОК в последнем цикле амплификации
«CFX96»
Параметр Единая программа амплификации Программа амплификации
Step Options
Шаг этапа
циклирования Ramp Rate Шаг этапа
циклирования
Ramp Rate
95°С 2,5 °C/sec 95°С 2,5 °C/sec
60°С 2,5 °C/sec
60°С 2,5 °C/sec
72“С 2,5 °C/sec
«ДТ-96»
Метод Тип анализа Каналы
Критерий
положительного
результата ПЦР
Величина
Threshoid
Нижняя граница/порог
положительного
результата
Порого
вый (Ct)
Ct(Cp)
ДЛЯ всех
каналов
Fam
90% 10 5
Hex
Rox
Су5
Су5.5
Характеристика ДНК-калибраторов
ДНК-калибратор
Значения концентрации по каналу для флуорофора, ГЭ /мл
FAM JOE ROX CyS CyS.S
К1 complex 600 000 600 000 600 000 600 000 60 000 000
К2 complex 600 600 600 600 60 000
ООО «НекстБио»
ВКЛАДЫШ
к набору реагентов «АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Кандиды»
«ПЦР-комплект» вариант FRT-100, FRT-100 FN и FRT-L
Форма X: ХХХХ-ХХХ ХХ.ХХ.ХХ
Настройки для приборов роторного типа
Канал
Calibrate / Gain
Optimisation... /
ОпТ.урОВНЯ СИГН.
Threshold
/ Порог
More Settings/
Outlier Removal/
Устранение выбросов
Slope Correct /
Коррект. уклона
FAM/Green от 5 до 10 FL 0,1 10-20% включена
JOE/Yellow от 4 до 8 FL o,f 10-20% включена
ROX/Orange от 4 до 8 FL 0,1 5-15 % включена
Cy5/Red от 4 до 8 FL 0,1 10-30% включена
Cy5.5/Crimson от 4 до 8 FL 0,1 20-30 % включена
Настройки для п риборов планшетного типа
Канал Threshold / Порог
FAM
Пороговая линия для каждого канала устанавливается на уровне,
соответствующем 10-20 % от максимального уровня флуоресценции,
полученного для образца К1 в последнем цикле амплификации
JOE/HEX
ROX
Су5
Су5.5
Пороговая линия для каждого канала устанавливается на уровне,
соответствующем 10-20 % от максимального уровня флуоресценции,
полученного для образца ОК в последнем цикле амплификации
«CFX96»
Параметр Единая программа амплификации Программа амплификации
Step Options
Шаг этапа
циклирования Ramp Rate Шаг этапа
циклирования Ramp Rate
95°С 2,5 ”C/sec 95°С 2,5 °C/sec
60°С 2,5 °C/sec
60°С 2,5 °C/sec
72°С 2,5 °C/sec
«ДТ-96»
Метод
Порого
вый (Ct)
Тип анализа
Ct(Cp)
для всех
каналов
Каналы
Fam
Hex
Rox
Су5
Су5.5
Критерий
положительного
результата ПЦР
90 %
Величина
Threshold
10
Нижняя граница/порог
положительного
результата
Характеристика ДНК-калибраторов
ДНК-калибратор
Значения концентрации по каналу для флуорофора, ГЭ /мл
FAM JOE ROX CyS CyS.5
К1 complex 600 000 600 000 600 000 600 000 60 000 000
К2 complex 600 600 600 600 60 000
--- стр. 42 ---
граничные значения порогового цикла jC t)
Образец
Канал для
флуорофора
Граничное значение C t
Прибор роторного типа Прибор планшетного типа
Единая
программа
амплифик
ации
Программа
амплификации
Единая
программа
амплификации
Программа
амплификации
К2
РАМ <38 <33 <41 <36
JOE <38 <33 <41 <36
ROX <38 <33 <41 <36
Су5 <38 <33 <41 <36
Су5.5 <38 <33 <41 <36
Исследуе
мые
образцы,
ОК
Су5.5 <40 <35 <43 <38
Граничные значения порогового цикла (Cf)
Образец
Канал для
флуорофора
Граничное значение C t
Прибор роторного типа Прибор планшетного типа
Единая
программа
амплифик
ации
Программа
амплификации
Единая
программа
амплификации
Программа
амплификации
К2
РАМ <38 <33 <41 <36
JOE <38 <33 <41 <36
ROX <38 <33 <41 <36
Суб <38 • > <33 <41 <36
Су5.5 <38 <33 <41 <36
Исследуе
мые
образцы,
ОК
Су5.5 <40 <35 <43 <38
--- стр. 48 ---
в качестве исходных данных ПОЮ использует значения пороговых циклов
амплификации (Ct), полученные в программном обеспечении прибора для
исследуемых образцов, контролей и калибраторов по пяти соответствующим
каналам детекции.
Для начала работы скопировать соответствующие данные из программного
обеспечения прибора и вставить в соответствующие столбцы «Данные прибора».
Также для проведения корректного расчета в столбце «Обозначение образца»
должны быть соответствующим образом подписаны контрольные образцы (см.
таблицу «Обозна«^ения контрольных образцов»).
По окончанию размещения исходных данных и их обозначения произвести
расчет путем нажатия кнопки «Рассчитать».
ПОЮ, используя исходные данные, проводит автоматическое построение
калибровочных линий и расчет концентрации ДНК микроорганизмов. Программа
автоматически проводит сверку полученных значений контрольных образцов с
заданным диапазоном согласно инструкции к набору реагентов.
УСЛОВИЯ ВЫПОЛНЕНИЯ АВТОМАТИЧЕСКОЙ ОБРАБОТКИ ИСХОДНЫХ
ДАННЫХ И ПОЛУЧЕНИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Для автоматической обработки исходных данных и получения достоверных
результатов необходимо соблюдать следующие условия:
1) Заполнение таблицы «Данные с прибора» должно проводиться без ошибок, с
соответствующим обозначением контрольных образцов.
2) Поле «Вкладыш к набору реагентов» должно быть заполнено в строгом
соответствии с вкладышем к используемой серии набора реагентов.
3) Необходимо убедиться, что система безопасности Microsoft Excel позволяет
использовать макросы. В меню Сервис>Макрос>Безопасность установите
«Средний уровень защиты».
стр. 4 из 17
--- стр. 49 ---
ИЗОБРАЖЕНИЯ НА ЭКРАНЕ МОНИТОРА КОМПЬЮТЕРА ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ
ПРОГРАМНОГО ОБЕСПЕЧЕНИЯ
□01.0 и руководство оператора по применению представлены пользователю
на диске (оптическом носителе - mini CD).
Внешний вид;
Параметры
П аоам бпп
Информация о постановке
Дата постановки
Оператор ПЦР '
Серия rtiix-1
Серия калибраторов
Прибор
Учет результатов
Вкладыш к набору реагентов
- «АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Аэробы»
Вкладмш к набору реагентов
F A M /
б ге е п
ЮЕ/нех/
Y e llo w
R O X /
О г а п о е
С у 5 /
R ed
Граничные значения концентраций для контроля "ОК"
Граничные значения концентраций для контроля "К*"
Граничные значения Ct для калибратора "Kl”
Граничные значения Ct для калибратора "К2''
Г раничные значения Ct для ВКО образцов и контроля "ОК"
«АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Бактериальный вагиноз»
Вкладыш к набору реагентов
FA M /
Green
Ю Е/НЕХ/
Yellow
ROX/
Orange
С у5/
Red
Граничные значения концентраций для контроля "ОК"
Граничные значения концентраций для контроля "К-"
Граничные значения Ct для калибратора ”К1"
Граничные значения С^для калибратора "К2"
«АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Кандиды»
Вкладыш К набору реагентов
F A M /
Green
Ю Е /Н Е Х /
Yellow
R O X /
O rnntje
С у5/
Red
Q u a s a rT lt
Crimson
Граничные значения Ct для контроля "ОК"
Граничные значения Ct для контроля "К-"
Граничные значения Ct для калибратора ”К1"
Граничные значения Ct для калибратора "К2"
Граничные значения Ct для ВКО образцов
- «АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Микоплазмы»
Вкладыш к набору реагентов
Р А М /
Green
Ю Е /Н Е Х /
Y ellow
R O X /
О т п а в
С у 5 /
Red
Граничные значения Ct для контроля "ОК"
Граничные значения Ct для контроля "К-"
Граничные значения Ct для калибратора "К1"
Граничные значения Ct для калибратора ''К2”
Г раничные значения Ct для ВКО образцов
стр. 5 из 17
--- стр. 50 ---
Калибровка
- «АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Аэробы»
Калибровка
Резул
F A M /
Green
Энтеробактерии
ьтаты калибре
Ю Е/Н Е Х /
Yellow
Стафилококки
»вки
К О Х /
Orange
Стрептококки
Эффективность Е (N: 0 ,8-1,2)
С т ат ус калибровки
\ ^
- «АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Бактериальный вагиноз»
Калибровка
Результаты калибровки
РАМ/ ЮЕ/НЕХ/ КОХ/ Су5/
бгееп Yellow Orange Red
ev Av Lacto Bact
эффективность Е (N: 0,8-1,2)
Статус калибровки
- «АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Кандиды»
Калибровка
Результаты калибровки
РАМ/ ЮЕ/НЕХ/ КОХ/ Су5/
Green Yellow Orange Red
Са. С * CJc. С.Рч C.t.
эффективность Е (N : 0,8-1,2)
Статус калибровки
I I
«АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Микоплазмы»
Калибровка
Результаты калибровки
Р А М / Ю Е/НЕХ/ К О Х / С у5/
Green Yellow Orange Red
UP ии МН вко
Эффективность Е (N: 0,8- 1.2)
Статус калибровки
стр. 6 из 17
--- стр. 57 ---
СООБЩ ЕНИЯ ОПЕРАТОРУ
Результаты
Результаты анализа выдаются в следующем виде:
- «АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Аэробы», «АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-
Бактериальный вагиноз», «АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Кандиды»,
«АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Микоплазмы» (при использовании четырех
наборов одновременно).
Результаты
ш л /
Q ntn
C.a»ieiiu
}о е/н € х/
ieUow
Cdabrm
т зх/
Orenfc
CJb v m I
CvS/
м
Т ш /
Gv
ю е /и е х /
Yellow
Aw
a o v
Orenec
lacto
'c w
9 m
FAAf/
Oreen
Азообы
Ю Е /н а /
Yellow
Спфяломжии
Ю Х /
Orange
fA M /
Qreen
UP
JOE/н е Х /
Yellow
UU
ЯОХ/
Orange
MM
ДНК
Р е з у л ь т а т
-?«л .'j- - r, r>wi -» • V .-
S,E*oe 1,£«08 5,E«0S О.ЕЮО Сбой - Кандиды, Аэробы, Микоппазмы
1,£«05 8,tKS 5,E«08 s,e»o2 1.E403 2^E«04 7.E+06
Соотношення концентраций ДНК микроорганизмов
соответствуют бактериальному вагинозу.
Концентрация Candida abicana превышает
10*2ГЭ/мл
2,E408 1,M 7 г.ъ*ол 2,E«08 7.t*C2 Б.Е'КИ 8,E4CS 2,E«06 2,E-K>6
Соотношения концентраций ДНК микроорганизмов
соответствуют бактериальному вагинозу.
Концентраций Ureapiaama parvum превышает
Ю'бГЭ/мл
- «АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Аэробы»
Концеитрацим (мшпм^ам) Комце 1ттрации (ГЭ/мм) Результат
F A M /
G re e n
Эитеообжт.
Ю Е / Н Е Х /
Y e llo w
Стафилококки
O r a n g e
Ct d c iiiu k o w o i
F A M /
G r e e n
Э т е о о б ж т е о ш *
Ю Е / Н Е Х /
Y e llo w
Стафилокок
R O X /
O r a n g e
Стоептоаеокхм Энтеиобмстеимя Стафилококки
с т а т у с
копии/Vn KOn.-H/l.* •’ копии/мл Г 5 /М Л ГЭ.-мл ГЭ/мл Г Э ,'’мл ГЭ.мл ГЭ/«Л
0,Е+00 О.Е+ОО О.Е+ОО О.Е+ОО О.Е+ОО О.Е+00 - - Нвмлидныи
1.Е+03 З.Е+ОЗ О.Е+ОО 5.Е+02 1.Е+03 О.Е+ОО Не обнаружено Не обнаружено Не обнаружено Ок
2.Е+03 1.Е+06 2.Е+06 7.Е+02 5.Е+04 8.Е+06 Не обнаружено 6.Е+04 8.Е+05 Ок
1.Е+03 З.Е+ОЗ О.Е+ОО 5.Е+02 1.Е+03 О.Е+00 Не обнаружено Не обнаружено Не обнаружено Ок
4.Е+03 1.Е+05 З.Е+05 1.Е+03 6.Е+04 1.Е+05 Не обнаружено 6.Е+04 1.Е+05 Ок
- «АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Бактериальный вагиноз»
Результаты
л т т т я т т т
РезультатF A M /
вгееп
О е
Ю Е /Н Е Х /
Yellow
Av
Л О Х /
O ra n g e
Lacto
cys/
Red
M et K C l KC2 1ГСЗ
ГЭ'мл ГЭ - v - ГЭг1ил ’ Ъглг. ст ат ус р е зу л ь т а т р а с и м ф р о а т
8,Е+08 l,Et08 5.E+08 •o x 0,6 •0.2 Ok
CooTHomei— концеифацмй ДЖ<
мимроорганизмоа соотьетстиукп
баитер*в/маму аагинозу.
ХолмW стео O.wackalts н/нлм A.wactn»e гтракгмтссии рамю
или враны ИЯ »т колтместно UKtobaciOus tpp
8 ,Е ^ l,E+08 5,E+08 ■ox 0,6 •0.2 Ok
Соотнош»нм 1нонцвнграций ДНК
iwwpooprn ьезмоа cooiaeTTwyioT
бактериальному иагинозу.
К4ммпвст*о6.уасюа1ам/или Avacinae npHcneitCKH ранив
илнпрень iMiPTwmMiecTHoLHctobacilkgipp
2.Е+08 1,Е+07 2.Е+08 2,EH)8 0,1 0,0 0,0 Ok
Соотношя 11ии1сонцеитраций ДНК
микроорганкзмоа соотеетстеуют
бактериальному оагинозу.
KOMMecTHoG.«afinalbii/MflHAvaginHH пракпыескм ранио
ШУИ праныниат КОЯМИ cTHOlHCtobacilkitbpp
- «АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Кандиды»
Результаты
AM РезультатFAM/
в т п
Cabkans
ЮЕ/НЕХ/
Yellow
Ceiabrata
яох/
Orange
Cknisei
Су5/
Red
Сл.с.1.
ГЭ/ V/ "2 М • Г»/'МЛ ГУезульт от статус росшифровко
Неваяидньт
1.Е+05
ДНК_Са1Ысап$ Ок Обнаружена; ДНК Calbkans
Не обнаружено Ок Не обнаружена ДНК анализируемых видов
4.Е+00 Не обнаружено ок Не обнаружена ДНК анаяизируамих видов
Не обнаружено Ок Не обнаружена ДНК анализируемых вмдое
Не обнаружено ок Не обнаружена ДНК анализмруе1йьн шедов
стр. 13 из 17
--- стр. 58 ---
- «АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Микоплазмы»
Результаты
Концентрации (ГЭ/мл) Концентрации (ГЭ/10*5 клеток) Результат
F A M /
бгееп
UP
Ю Е /Н Е Х /
Y ellow
ии
К О Х /
O range
МН
СУ5/
Red
вко
F A M /
бгееп
UP
Ю Е /Н Е Х /
Y ellow
ии
R O X /
O range
МН
к о л -в о
кл е т о к в м л р е зул ьт а т ст ат ус
0,Е+О0 <50 000 клеток
человека в мл
2,Е+04 7,Е+06 3,ЕЦ)2 7,Е+06 U.parvum Ок
2,ЕК>в 2,ВОБ 8,Е+04 2.Е+06 U.parvum Ок
9,ЕЮ6 4sE407 5,БЮ6 2,ЕЧ)5 8.Е405 U.parvum
M.hominis Ок
3,ЕН)3 9,tK)3 8,Е<06 4,ЕК>1 1,Е+02 8,Е+06 U.parvum
M.hominis Ок
В столбце «статус» выводятся сообщения об успешности проведения анализа
для данного образца. В случае, если образец не укладывается в заданные критерии
валидности, его статус выдается как «Невалидный». В случае получения статуса
«Невалидный», необходим повторный анализ данного образца. В случае плохого
взятия биологического материала с низким содержанием клеток человека, результат
выдается как «<50 000 клеток человека в мл», в этом случае необходим повторный
забор биологического материала для проведения исследования.
В столбце «Концентрация (ГЭ ДНК/мл)» выводятся количественные
результаты для каждого выявляемого возбудителя. В случае, если для образца
получен результат более или менее линейного диапазона измерения,
количественные данные представляются в виде «> линейного диапазона» и
«< линейного диапазона» соответственно. В случае отсутствия возбудителя в
образце соответствующее поле в таблице результатов остается пустым.
Интерпретация контрольных образцов.
В случае успешного прохождения контрольных образцов, в столбце статус
выдается сообщение «Ок». Если контрольный образец не укладывается в заданные
критерии, статус меняется на «Сбой!».
При проведении количественного анализа дополнительно проверяются
параметры построения калибровочных прямых по каждому каналу флуоресцентной
детекции. Статус калибровки «Ок» соответствует успешному построению
калибровочной прямой, статус «Сбой!» означает, что калибровочная прямая не
может быть построена по данному каналу, возможен только качественный анализ
результатов.
стр. 14 из 17
--- стр. 59 ---
«АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Аэробы»
Калибровка
Резул
FAM /
Green
Энтеробактерии
ьтаты калибро
Ю Е/НЕХ/
Yellow
Стаф илоксжк и
ВКИ
ROX/
Orange
Стрептококки
Эф ф ект ивност ь Е (N : 0,8-1,2)
0,963 0,936 0,951
Ст ат ус кал и б р о в ки
Ок 1 Ок Ок
«АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Бактериальный вагиноз»
Калибровка
Результаты калибровки
FAM / Ю Е/НЕХ/ ROX/ CyS/
Green Yellow Orange Red
Ov Av Lacto Dact
Эф ф ект ивност ь Е {N :0 ,S -1 ,2 )
0,995 0,920 1,013 0,933
С т ат ус кал и б р о в ки
Ок Ok Ok Ok
«АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Кандиды»
Калибровка
" 1 :- и П р |т а № к а а и ^ ^ '
FAM/ ЮЕ/НЕХ/ ROX/ СУ5/
Green Yellow Orange Red
Сл. c«. Ck. C.p„Ct.
Эффективность E (N: 0,S -1,2)
0,892 0,S46 0,974 0,BB7
Статус колибровки
Ok Ok Ok Ok
«АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Микоплазмы»
Калибровка
FAM / ЮЕ/НЕХ/ ROX/ CyS/
Green Yellow Orange Red
UP uu MH BKO
Э ф ф ект ивност ь E (N : 0 ,8 -1 ,2 }
0,945 0,936 0,9S4 0,945
С т ат ус кал и б р о в ки
Ok Ok Ok Ok
стр. 15 из 17