Набор реагентов для определения ДНК Ureaplasma parvum, Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) для диагностики in vitro "АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Микоплазмы" по ТУ 9398-019-09286667-2014 — инструкция и характеристики

РУ: РЗН 2015/3164 от 13.10.2015 · класс риска 2б

Производитель: ООО "НекстБио" (Россия)

Вид изделия: Множественные инфекции передающиеся половым путем нуклеиновые кислоты ИВД, набор, анализ нуклеиновых кислот

В госконтрактах 44-ФЗ: 111 контрактов, медианная цена за единицу 23 650 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Генеральный директор 
}ства с ограниченной
)стью «НекстБио»
О. О. Лавинюков 
2020 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для определения ДНК 
Ureaplasma parvum, Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma 
hominis методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) для
диагностики in vitro
«АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Микоплазмы»
АмплиПрайм
ш 1
ООО «НекстБио»,
Российская Федерация, 111394,
город Москва, улица Полимерная, дом 8, стр. 2 IVD
89544
11.11.2020


--- стр. 2 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ...........................................................................................................................3
НАЗНАЧЕНИЕ................................................................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА....................................................................................................................................4
ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ.......................................................................................5
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ.............................................................................................6
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ .......................................................................................8
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ.............................................................................................................8
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ .........................................................10
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА... 12
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ ДН К ...............................12
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ПРОБ
и с с л е д у е м о г о 'М А Т Е Р И А Л А ........................................................................................................... 12
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ.............................................................................................13
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ ................................................................13
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 1 («ПЦР-комплект» вариант FRT-100)........................................14
СОСТАВ.....................................................................................................................................................14
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ..................14
A. Подготовка пробирок для амплификации ..........................................................................14
Б. Проведение амллификации с детекцией в режиме «реального времени» .......15
B. Анализ и интерпретация результатов.......................................................................................16
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 2 («ПЦР-комплект» вариант FRT-100 FN ) ................................21
СОСТАВ.....................................................................................................................................................21
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»..................21
A. Подготовка пробирок для амплификации..........................................................................21
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени» .......22
B. Анализ и интерпретация результатов......................................................................................24
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 3 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L).............................................28
СОСТАВ.....................................................................................................................................................28
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»..................28
A. Подготовка лробирок для амплификации..........................................................................28
Б. Проведение амллификации с детекцией в режиме «реального времени» .......29
B. Анализ и интерпретация результатов......................................................................................30
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ ...........................35
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ПРОИЗВОДИТЕЛЯ ..........................................................35
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ...................................................37
стр. 2 из 38
89544
11.11.2020


--- стр. 3 ---
список СОКРАЩЕНИЙ
В настоящей инструкции применяются следующие сокращения и обозначения;
BKO-FL - экзогенный внутренний контрольный образец
ВКО Glob - эндогенный внутренний контрольный образец (участок |3- 
глобинового гена человека)
ГЭ - геномные эквиваленты
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
дНТФ - дезоксирибонуклеотидтрифосфат
К1, К2 - ДНК-калибраторы
К- - отрицательный контроль ПЦР
НК - нуклеиновые кислоты
ОК - отрицательный контроль экстракции
ОКО - отрицательный контрольный образец
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РУ - регистрационное удостоверение
УДГ - урацил-ДН1К-гликозилаза
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Микоплазмы» предназначен для 
количественного определения ДНК Ureaplasma parvum, Ureaplasma urealyticum  и 
Mycoplasma hominis  в биологическом материале (отделяемое слизистой оболочки 
влагалища) методом мультиплексной ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной 
детекцией продуктов амплификации. Набор реагентов используется в клинической 
лабораторной диагностике для исследования биологического материала, полученного 
от лиц с подозрением на наличие инфекций урогенитального тракта.
Материалом для проведения ПЦР служат пробы ДНК, экстрагированные из 
исследуемого материала с помощью комплектов реагентов, рекомендованных 
Производителем.
ВНИМАНИЕ! В соответствии с федеральным законом от 21.11.2011 № 323-ФЗ «Об 
основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» ПЦР-исследование 
является одним из методов всестороннего обследования пациента, на основании 
которых лечащий врач устанавливает диагноз и выбирает мероприятия по лечению 
пациента.
стр. 3 из 38
89544
11.11.2020


--- стр. 5 ---
дезоксиуридин, но не ДНК, содержащей дезокситимидин. Дезоксиуридин отсутствует в 
природной ДНК, но всегда присутствует в ампликонах, поскольку трифосфат 
дезоксиуридина входит в состав смеси дНТФ в реагентах для амплификации. 
Дезоксиуридин делает контаминирующие ампликоны восприимчивыми к разрушению 
ферментом УДГ до начала амплификации ДНК-мишени, и, следовательно, они не 
могут быть в дальнейшем амплифицированы.
Фермент УДГ термолабилен и инактивируется при нагревании выше 50 °С и 
поэтому не разрушает ампликоны мишени, нарабатываемые в процессе ПЦР.
На этапе амплификации одновременно в одной пробирке проводится 4 реакции -  
амплификация участков ДНК U. рап/ит, U. urealyticum  и М. hominis,  а также 
амплификация фрагмента ДНК человека (ВКО Glob), Результаты амплификации ДНК 
и. parvum, U. urealyticum  и М.hominis, а  также ДНК ВКО Glob регистрируются по 4 
различным каналам флуоресцентной детекции:
Таблица 1
Канал для 
флуорофора FAM JOE ROX CyS
ДНК-мишень ДНК
и. рап/ит
ДНК
и. urealyticum
ДНК
M . hominis
ДНК человека 
(ВКО Glob)
Область
амплификации
urease complex 
component gene
urease complex 
component gene 16SrRNA Э-globin gene
ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ
Набор реагентов выпускается в 3 формах комплектации:
Форма 1 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100.
Форма 2 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 FN.
Форма 3 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-L.
Все формы комплектации предназначены для проведения амплификации ДНК с 
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» и 
позволяют выявлять ДНК в количественном формате. Для проведения полного ПЦР- 
исследования необходимо использовать комплекты реагентов для экстракции ДНК, 
рекомендованные Производителем.
Форма комплектации 2 может быть использована совместно с автоматическими 
станциями приготовления реакционных смесей.
стр. 5 из 38
89544
11.11.2020


--- стр. 6 ---
! АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для данного набора реагентов применимы следующие характеристики: 
Линейный диапазон измерения и аналитическая чувствительность
Таблица 2
Вид
исследуемого
материала
Транспортная
среда
Комплект
для
экстракции
ДНК
Комплект для  
амплификации
Микро­
организм
Аналити­
ческая
чувстви­
тельность,
ГЭ/мл^
Линейный
диапазон
измерения,
ГЭ/мл
Отделяемое
слизистой
оболочки
влагалища
«АмплиПрайм 
ТС» или 
«АмплиПрайм 
тем» или 
«Транспортная 
среда ТС- 
ЭДЭМ» 2
«АмплиПрайм
ДНК-сорб-
АМ»
«ПЦР-комплект» 
вариант 
FRT-100, 
FRT-100 FN, 
FRT-L
и. рап/ит
1x103 1x10'*-
1x10®
и. urealyticum
М. hominis
Данные значения характеристик достигаются при соблюдении правил, указанных в 
разделах «Взятие, транспортирование и хранение исследуемого материала» и 
«Подготовка исследуемого материала к экстракции ДНК».
Аналитическая чувствительность в отношении каждого из микроорганизмов 
сохраняется и в присутствии высоких концентраций ДНК двух других анализируемых 
микроорганизмов -  до 10^ ГЭ/мл.
Аналитическая специфичность
Набор реагентов обнаруживает фрагменты ДНК заявленных микроорганизмов. 
Аналитическая специфичность набора реагентов доказана при исследовании ДНК 
следующих микроорганизмов: Gardnerella vaginalis, Lactobacillus  spp., Escherichia coli,  
Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes. Streptococcus agalactiae. Chlamydia  
trachomatis, Candida albicans, Candida glabrata, Candida krusei. Neisseria flava. Neisseria  
subfiava. Neisseria sicca. Neisseria mucosa. Neisseria gonorrhoeae. M ycoplasma  
genitalium. Trichomonas vaginalis. Treponema pallidum, Toxoplasma gondii, HSV ^  и 2 
типа, CMV, HPV.
При тестировании образцов ДНК вышеперечисленных микроорганизмов 
неспецифических реакций выявлено не было.
^  Количество геномных эквивалентов микроорганизма (ГЭ) в биологическом материале (отделяемое  
слизистой оболочки влагалища), помещенном в указанную транспортную среду, в пересчете на 1 мл.
2 Форма комплектации 3 или 4 комплекта реагентов «АмплиПрайм ЭДЭМ».
стр. 6 из 38
89544
11.11.2020


--- стр. 7 ---
I
Воспроизводимость, повторяемРсть и правильность
Воспроизводимость и повторяемость были определены путем тестирования 
модельного образца биоматериала. Модельный образец биоматериала был 
приготовлен разведением стандартного образца предприятия, содержащего ДНК 
и. рап/ит, и. urealyticum  и M.hominis  в трех диапазонах концентраций (от 3x10“* до 
ЭхЮ'*, от 1x10^ до 5x10^, от 1x10® до 5x10® ГЭ/мл) в биологическом материале, не 
содержащем ДНК каких-либо других возбудителей ИППП.
Правильность была определена путем тестирования стандартных образцов 
предприятия в концентрации 1x10® ГЭ/мл.
Таблица 3
Воспроизводимость
Микроорга­
низм
Исходное
значение
концентрации,
ГЭ/мл
Количество
повторов
Среднее значение  
концентрации, 1д
Стандартное
отклонение
(SD)
Коэффициент  
вариации (CV),  
%
и. рап/ит
3x10“-9x10'’
80 4,84 0,07 1,53
и. urealyticum 80 4,68 0,10 2,17
М. hominis 80 4,89 0,08 1,57
и. рап/ит
1x105-5x105
80 5,20 0,10 1,98
и. urealyticum 80 5,15 0,07 1,42
М. hominis 80 5,69 0,04 0,77
и. рап/ит
1x106-5x106
80 6,42 0,06 0,99
и. urealyticum 80 6,31 0,06 0,94
М. hominis 80 6,46 0,03 0,40
Таблица 4
Повторяемость
Микроорганизм
Исходное
значение
концентрации,
ГЭ/мл
Количество
повторов
Среднее значение  
концентрации,  
ГЭ/мл
Стандартное
отклонение
(SD)
Коэффициент  
вариации (CV),
%
и. рап/ит
3x10“-9x10“
40 4,80 0,05 1,11
и. urealyticum 40 4,66 0,09 1,90
М. hominis 40 4,92 0,04 0,84
и. рап/ит
1x105-5x105
40 5,17 0,09 1,81
и. urealyticum 40 5,21 0,03 0,49
М. hominis 40 5,69 0,04 0,70
и. рап/ит
1x106-5x106
40 6,39 0,06 0,86
и. urealyticum 40 6,33 0,04 0,67
М. hominis 40 6,48 0,02 0,25
Таблица 5
Правильность
Микроорганизм Количество
повторов
Среднее значение  
измерения, 1д
Установленное
значение
Систематическая  
погрешность (В)
1я %
и. рап/ит 100 4,94 4,71 0,23 4,88
и. urealyticum 100 4,72 4,47 0,25 5,59
М. hominis 100 5,30 5,19 0,11 2,12
стр. 7 из 38
89544
11.11.2020


--- стр. 8 ---
Таблица 6
Результаты тестирования набора реагентов «АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-  
Микоплазмы» в сравнении с референтным методом
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Тип
образцов
Результаты применения  
набора реагентов  
«АмплиПрайм®  
ФЛОРОСКРИН®-  
Микоплазмы»
Результаты применения референтного метода^
и. parvum и. urealyticum М. hominis
положи­
тельных
отрица­
тельных
положи­
тельных
отрица­
тельных
положи­
тельных
отрица­
тельных
Отделяемое
слизистой
оболочки
влагалища
Всего
исследовано 
481 образец
положи­
тельных 145 0 137 0 150 0
отрица­
тельных 0 336 0 344 0 331
Были использованы 481 образец отделяемого слизистой оболочки влагалища, 
полученных от пациенток с симптомами урогенитальной инфекции.
Таблица 7
Диагностические характеристики набора реагентов  
«АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®-Микоплазмы»
Тип
образцов
Диагностическая чyвcтвитeльнocть^  
(с доверительной вероятностью 95 %),  
не менее %
Диагностическая cпeцифичнocть^
(с доверительной вероятностью 95 %),  
не менее %
и. parvum и. urealyticum М. hominis и. parvum и. urealyticum М. hominis
Отделяемое
слизистой
оболочки
влагалища
98,0 97,8 98,0 99,1 99,1 99,1
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно­
биологические (ПЦР) исследования биологического материала на наличие 
возбудителей инфекционных болезней, с соблюдением санитарно- 
эпидемиологических правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями 
паразитарных болезней», СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические 
требования к обращению с медицинскими отходами» и методических указаний МУ 
1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации 
нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп 
патогенности».
При работе необходимо всегда выполнять следующие требования:
- Рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные, организовывать
^ в качестве референтного метода использовался набор  
«АмплиСенс® ФлороЦеноз / Микоплазмы-FL» (РУ № ФСР 2012/13535).
'* Относительная чувствительность в сравнении с использованным референтным методом.  
®  Относительная специфичность в сравнении с использованным референтным методом.
реагентов
стр. 8 из 38
89544
11.11.2020


--- стр. 9 ---
f работу и хранение в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с 
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями 
паразитарных болезней».
- Убирать и дезинфицировать разлитые образцы или реагенты, используя 
дезинфицирующие средства в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность 
работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями 
паразитарных болезней».
- Лабораторный лроцесс должен быть однонаправленным. Анализ проводится в 
отдельных помещениях (зонах). Работу следует начинать в Зоне Экстракции, 
продолжать в Зоне Амплификации и Детекции. Не возвращать образцы, оборудование 
и реагенты в зону, в которой была проведена предыдущая стадия процесса.
- Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, а также 
использованные реагенты, упаковку, биологический материал, включая материалы, 
инструменты и предметы, загрязненные биологическим материалом, следует 
удалять в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно- 
эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами».
ВНИМАНИЕ! При удалении отходов после амплификации (пробирок, содержащих
продукты ПЦР) недопустимо открывание пробирок и разбрызгивание содержимого,
поскольку это может привести к контаминации продуктами ПЦР лабораторной зоны,
оборудования и реагентов.
- Использовать и менять при каждой операции одноразовые наконечники для 
автоматических дозаторов с фильтром®. Одноразовую пластиковую посуду 
(пробирки, наконечники) необходимо сбрасывать в специальный контейнер, 
содержащий дезинфицирующее средство, которое может быть использовано для 
обеззараживания медицинских отходов.
- Поверхности столов, а также помещения, в которых проводится постановка ПЦР, до 
начала и после завершения работ необходимо подвергать ультрафиолетовому 
облучению в течение 30 мин.
- Набор реагентов лредназначен для одноразового применения для проведения 
ПЦР-исследования указанного количества проб (см. раздел «Состав»).
- Набор реагентов готов к применению согласно данной инструкции. Применять 
набор реагентов строго по назначению.
- К работе с набором реагентов допускается только персонал, обученный методам 
молекулярной диагностики и правилам работы в клинико-диагностической
®  Для удаления надосадочной жидкости в процессе экстракции используются одноразовые наконечники без  
фильтра.
стр. 9 из 38
89544
11.11.2020


--- стр. 19 ---
Возможные ошибки
1. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по каналам для флуорофоров РАМ 
и/или JOE и/или ROX определено значение порогового цикла (Cf) и/или по каналу 
для флуорофора Суб определено значение концентрации больше граничного. 
Вероятна контаминация лаборатории продуктами амплификации и ДНК человека 
или контаминация реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР- 
исследования. Необходимо предпринять меры по выявлению и ликвидации 
источника контаминации и повторить ПЦР-исследование для всех образцов, в 
которых обнаружена ДНК анализируемых микроорганизмов, начиная с этапа 
экстракции ДНК.
2. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для флуорофоров РАМ и/или 
JOE и/или ROX определено значение порогового цикла (С/) и/или по каналу для 
флуорофора Суб определено значение концентрации больше граничного. Вероятна 
контаминация лаборатории продуктами амплификации и ДНК человека или 
контаминация реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР- 
исследования. Необходимо предпринять меры по выявлению и ликвидации 
источника контаминации и повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, 
в которых обнаружена ДНК анализируемых микроорганизмов.
3. Для ДНК-калибратора К1 отсутствует значение порогового цикла (Cf) по какому- 
либо из указанных каналов для флуорофоров (см. табл. 12). Необходимо повторить 
амплификацию и детекцию для всех образцов.
4. Для ДНК-калибратора К2 значение порогового цикла (Cf) по какому-либо из 
указанных каналов для флуорофоров (см. табл. 12) отсутствует или превышает 
граничное значение. Необходимо повторить амплификацию и детекцию для всех 
образцов.
б. Показатель эффективности Е при построении калибровочной прямой менее 80 % 
или более 120%. Необходимо проверить правильность заданных концентраций 
ДНК-калибраторов в соответствии с вкладышем к набору реагентов и правильность 
выбранного уровня пороговой линии. Если при правильно заданных концентрациях 
калибраторов и уровне пороговой линии показатель эффективности не 
укладывается в требуемый диапазон, следует повторить амплификацию и 
детекцию для всех образцов.
6. Для исследуемого образца определено значение порогового цикла, при этом на 
графике флуоресценции отсутствует участок характерного экспоненциального 
подъема (график представляет собой приблизительно прямую линию). Необходимо
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 1, КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ______________________
стр. 19 из 38
89544
11.11.2020


--- стр. 20 ---
f ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 1. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
проверить правильность выбранного уровня пороговой линии или параметров 
расчета базовой линии. Если результат получен при правильном уровне пороговой 
линии (базовой линии), требуется повторно провести амплификацию и детекцию 
для этого образца.
стр. 20 из 38
89544
11.11.2020


--- стр. 21 ---
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 2 («ПЦР-комплект» вариант FRT-100 FN)
СОСТАВ
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 FN для амплификации 
фрагментов ДНК U. parvum, U. urealyticum, М. hominis  и ДНК человека с 
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» 
позволяет проводить ПЦР-исследование в количественном формате. Комплект 
реагентов включает:
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 2. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ______________________
Реагент Описание Объем, мл Количество
ПЦР-смесь Флороскрин- 
Микоплазмы
Прозрачная бесцветная 
жидкость 1,2 1 пробирка
ПЦР-буфер-Н Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,6 1 пробирка
К1 complex Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,2 1 пробирка
К2 complex Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,2 1 пробирка
К- Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,2 1 пробирка
Комплект реагентов рассчитан на проведение 110 реакций амплификации, включая 
контроли.
К набору реагентов прилагается диск, содержащий руководство оператора и  
программное обеспечение версии 1.0 в формате Microsoft Excel для  
автоматической обработки исходных данных и получения результатов.
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»
Выбор пробирок для амплификации зависит от используемого  
амплификатора с системой детекции в режиме «реального времени».
Для внесения в пробирки реагентов, проб ДНК и контрольных образцов  
используются одноразовые наконечники с фильтрами.
А. Подготовка пробирок для амплификации
Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, включая объем пробы ДНК - 10 мкл.
1. Рассчитать количество каждого реагента, требующееся для приготовления 
реакционной смеси. На одну реакцию требуется 10 мкл ПЦР-смеси Флороскрин-  
Микоплазмы и 5 мкл ПЦР-буфера-Н. Смесь готовить на общее число исследуемых и 
контрольных образцов (см. контрольные реакции в п. 7) плюс запас на несколько 
реакций.
ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси следует смешивать непосредственно 
перед проведением ПЦР-исследования.
стр. 21 из 38
89544
11.11.2020


--- стр. 26 ---
Результат ПЦР-исследования считается достоверным, если получены  
правильные результаты для контролей этапов экстракции и амплификации ДНК  
в соответствии с табл. 17 и вкладышем, прилагаемом к набору реагентов.
Таблица 17
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-исследования
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 2. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ______________________
Конт­
роль
Контролиру­
емый этап 
ПЦР-
исследования
Результаты амплификации по каналу для флуорофора
РАМ JOE ROX Су5
ОК экстракция
ДНК
значение Ct 
отсутствует
значение Ct 
отсутствует
значение Ct 
отсутствует
определена 
концентрация 
меньше граничного
К- ПЦР значение Ct 
отсутствует
значение Ct 
отсутствует
значение Ct 
отсутствует
определена 
концентрация 
меньше граничного
К1 ПЦР определено 
значение Ct
определено 
значение Ct
определено 
значение Ct
определено 
значение Ct
К2 ПЦР
значение Ct 
определено 
меньше 
граничного
значение Ct 
определено 
меньше 
граничного
значение Ct 
определено 
меньше 
граничного
значение Ct 
определено 
меньше граничного
Возможные ошибки
1. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по каналам для флуорофоров РАМ 
и/или JOE и/или ROX определено значение порогового цикла { C t) и/или по каналу 
для флуорофора Суб определено значение концентрации больше граничного. 
Вероятна контаминация лаборатории продуктами амплификации и Д Н К человека 
или контаминация реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР- 
исследования. Необходимо предпринять меры по выявлению и ликвидации 
источника контаминации и повторить ПЦР-исследование для всех образцов, в 
которых обнаружена ДНК анализируемых микроорганизмов, начиная с этапа 
экстракции ДНК.
2. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для флуорофоров РАМ и/или 
JOE и/или ROX определено значение порогового цикла ( C f ) и/или по каналу для 
флуорофора Суб определено значение концентрации больше граничного. Вероятна 
контаминация лаборатории продуктами амплификации и ДНК человека или 
контаминация реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР- 
исследования. Необходимо предпринять меры по выявлению и ликвидации 
источника контаминации и повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, 
в которых обнаружена ДНК анализируемых микроорганизмов.
стр. 26 из 38
89544
11.11.2020


--- стр. 27 ---
3. Для ДНК-калибратора К1 отсутствует значение порогового цикла ( C t) по какому- 
либо из указанных каналов для флуорофоров (см. табл. 17). Необходимо повторить 
амплификацию и детекцию для всех образцов.
4. Для ДНК-калибратора К2 значение порогового цикла { C f ) по какому-либо из 
указанных каналов для флуорофоров (см. табл. 17) отсутствует или превышает 
граничное значение. Необходимо повторить амплификацию и детекцию для всех 
образцов.
5. Показатель эффективности Е при построении калибровочной прямой менее 80 % 
или более 120%.  Необходимо проверить правильность заданных концентраций 
ДНК-калибраторов в соответствии с вкладышем к набору реагентов и правильность 
выбранного уровня пороговой линии. Если при правильно заданных концентрациях 
калибраторов и уровне пороговой линии показатель эффективности не 
укладывается в требуемый диапазон, следует повторить амплификацию и 
детекцию для всех образцов.
6. Для исследуемого образца определено значение порогового цикла, при этом на 
графике флуоресценции отсутствует участок характерного экспоненциального 
подъема (график представляет собой приблизительно прямую линию). Необходимо 
проверить правильность выбранного уровня пороговой линии или параметров 
расчета базовой линии. Если результат получен при правильном уровне пороговой 
линии (базовой линии), требуется повторно провести амплификацию и детекцию 
для этого образца.
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 2. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ______________________
стр. 27 из 38
89544
11.11.2020


--- стр. 28 ---
7
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 3 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L)
СОСТАВ
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-L для амплификации 
фрагментов ДНК U . рап/ит, U. urealyticum, М. hominis  и ДНК человека с 
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» 
позволяет проводить ПЦР-исследование в количественном формате. Комплект 
реагентов включает;
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 3. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ______________________
Реагентк Описание Объем, мл Количество
ПЦР-смесь Флороскрин- 
Микоплазмы-Lyo Порошок белого цвета -
96 пробирок объемом 
0,2 мл или
96-луночный планшет 
для ПЦР
К1 complex Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,5 1 пробирка
К2 complex Прозрачная бесцветная 
жидкость 0.5 1 пробирка
К- Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,5 1 пробирка
Буфер для элюции В Прозрачная бесцветная 
жидкость 1,2 8 пробирок
Комплект реагентов рассчитан на проведение 96 реакций амплификации, включая 
контроли.
К набору реагентов прилагается диск, содержащий руководство оператора и  
программное обеспечение версии 1.0 в формате Microsoft Excel для  
автоматической обработки исходных данных и получения результатов.
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»
Для внесения в пробирки реагентов, проб ДНК и контрольных образцов  
используются одноразовые наконечники с фильтрами.
А. Подготовка пробирок для амплификации
Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, включая объем пробы ДНК - 25 мкл.
1. Отобрать необходимое количество пробирок или достать 96-луночный планшет 
для амплификации с готовой лиофилизированной реакционной ПЦР-смесью 
Флороскрин-Микоплазмы-Lyo для амплификации ДНК исследуемых и 
контрольных образцов (количество контрольных образцов см. в п. 3).
2. В подготовленные пробирки или лунки планшета внести по 25 мкл проб ДНК,  
полученных в результате экстракции из исследуемых образцов.
стр. 28 из 38
89544
11.11.2020


--- стр. 33 ---
tj,
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 3. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
Возможные ошибки
1. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по каналам для флуорофоров РАМ
и/или JOE и/или ROX определено значение порогового цикла (С/) и/или по каналу 
для флуорофора Су5 определено значение концентрации больше граничного. 
Вероятна контаминация лаборатории продуктами амплификации и ДНК человека 
или контаминация реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР- 
исследования. Необходимо предпринять меры по выявлению и ликвидации
источника контаминации и повторить ПЦР-исследование для всех образцов, в 
которых обнаружена ДНК анализируемых микроорганизмов, начиная с этапа 
экстракции ДНК.
2. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для флуорофоров FAM и/или
JOE и/или ROX определено значение порогового цикла (С/) и/или по каналу для 
флуорофора Су5 определено значение концентрации больше граничного. Вероятна 
контаминация лаборатории продуктами амплификации и ДНК человека или 
контаминация реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР- 
исследования. Необходимо предпринять меры по выявлению и ликвидации
источника контаминации и повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, 
в которых обнаружена ДНК анализируемых микроорганизмов.
3. Для ДНК-калибратора К1 отсутствует значение порогового цикла (Cf) по какому- 
либо из указанных каналов для флуорофоров (см. табл. 22). Необходимо повторить 
амплификацию и детекцию для всех образцов.
4. Для ДНК-калибратора К2 значение порогового цикла (С/) по какому-либо из 
указанных каналов для флуорофоров (см. табл. 22) отсутствует или превышает 
граничное значение. Необходимо повторить амплификацию и детекцию для всех 
образцов.
5. Показатель эффективности Е при построении калибровочной прямой менее 80 % 
или более 120%.  Необходимо проверить правильность заданных концентраций 
ДНК-калибраторов в соответствии с вкладышем к набору реагентов и правильность 
выбранного уровня пороговой линии. Если при правильно заданных концентрациях 
калибраторов и уровне пороговой линии показатель эффективности не 
укладывается в требуемый диапазон, следует повторить амплификацию и 
детекцию для всех образцов.
6. Для исследуемого образца определено значение порогового цикла, при этом на 
графике флуоресценции отсутствует участок характерного экспоненциального 
подъема (график представляет собой приблизительно прямую линию). Необходимо
стр. 33 из 38
89544
11.11.2020


--- стр. 34 ---
проверить правильность выбранного уровня пороговой линии или параметров 
расчета базовой линии. Если результат получен при правильном уровне пороговой 
линии (базовой линии), требуется повторно провести амплификацию и детекцию 
для этого образца.
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 3. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ______________________
стр. 34 из 38
89544
11.11.2020


--- стр. 35 ---
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 12 мес. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению не
подлежит. Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку годности, 
указанному на этикетках для невскрытых реагентов.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до 
8 °С не более 5 сут. Допускается транспортирование при температуре от 2 до 25 °С не 
более 3 сут. Комплект реагентов и «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 и вариант FRT- 
100 FN при получении разукомплектовать в соответствии с указанными 
температурами осранения.
Хранение.
Форма комплектации 1. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 
хранить при температуре от 2 до 8 °С, кроме ПЦР-буфера-К. ПЦР-буфер-К хранить 
при температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-смесь Флороскрин-Микоплазмы 
хранить в защищенном от света месте.
Форма комплектации 2. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 FN 
хранить при температуре от 2 до 8 °С, кроме ПЦР-буфера-Н. ПЦР-буфера-Н хранить 
при температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-смесь Флороскрин-Микоплазмы 
хранить в защищенном от света месте.
Форма комплектации 3. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-L хранить 
при температуре от 2 до 8 °С. ПЦР-смесь Флороскрин-Микоплазмы-Lyo хранить в 
пакетах с влагопоглотителем в защищенном от света месте.
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ПРОИЗВОДИТЕЛЯ
Производитель гарантирует соответствие основных параметров и характеристик 
набора реагентов, требованиям, указанным в технической и эксплуатационной 
документации, в течение указанного срока годности при соблюдении всех условий 
транспортирования, хранения и применения.
Рекламации на качество набора реагентов «АмплиПрайм® ФЛОРОСКРИН®- 
Микоплазмы» направлять в адрес производителя ООО «НекстБио» (111394 г. Москва, 
ул. Полимерная, 8 стр. 2) в отдел по работе с рекламациями (тел. (495) 620-08-73, е- 
mail: info@nextbio.ru ).
При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по применению 
набора реагентов, нежелательных реакций лри его использовании, фактов и 
обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских 
работников при применении и эксплуатации набора реагентов, рекомендуется 
направить сообщение в отдел по работе с рекламациями по адресу, указанному
стр. 35 из 38
89544
11.11.2020


--- стр. 36 ---
выше, и в уполномоченную государственную регулирующую организацию (в РФ -  
Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения) в соответствии с 
действующим законодательством.
стр. 36 из 38
89544
11.11.2020


--- стр. 37 ---
символы, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ
REF
LOT
IVD
VER
I
ш1
■
1
Номер в каталоге
V
Максимальное 
число тестов
Код партии Использовать до
Изделие для in vitro 
диагностики т
Обратитесь к 
руководству по 
эксплуатации
Дата изменения
Не допускать 
попадания 
солнечного света
Ограничение
температуры Дата изготовления
Производитель
f
Беречь от влаги
Хрупкое. Осторожно \\ Верх
стр. 37 из 38
89544
11.11.2020


--- стр. 38 ---
Лист регистрации изменений
Редакция Место внесения 
изменений Суть вносимых изменений
24.07.2015
По тексту Исправлены опечатки
Дополнительные 
материалы и 
оборудование
Уточнено, что комплект расходных материалов для 
автоматической станции для экстракции НК должен 
соответствовать инструкции Производителя
Меры предосторожности
Дополнены сведения об описание утилизации или 
уничтожения упаковки, биологического материала, 
включая материалы, инструменты и предметы, 
загрязненные биологическим материалом с 
отдельным описанием правил
Диагностические
характеристики
Изменены значения диагностических 
характеристик (специфичности и 
чувствительности) на значения, полученные в 
результате клинико-лабораторных испытаний, с 
доверительной вероятности 95%
Изм.
Номера листов Всего  
листов в  
документе
Номер
извещения об  
изменении
Измене­
ния внес Датаизменённ
ых
заменён­
ных новых аннулиро­
ванных
2 - 1 -3 8 - 38-50 38 09286667.025.
1/6-2020
Колачевск  
Ий Н.Н. 26.08.2020
L
стр. 38 из 38
89544
11.11.2020


--- стр. 39 ---
Пронумеровано, скреплено и прошито 
лист (а/ов)
ьный директор Общества с 
енной ответственностью
0.0. Лавинюков
89544
11.11.2020