Набор реагентов для бактериологических исследований «Питательная среда для выделения возбудителей гнойных бактериальных менингитов, сухая» (ГБМ-агар) по ТУ 9398-203-78095326-2013 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- УТВЕРЖДАЮ Директор ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии » И.А. Дятлов 2016 г. ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для бактериологических исследований «Питательная среда для выделения возбудителей гнойных бактериальных менингитов, сухая» (ГБМ-агар) 1. НАЗНАЧЕНИЕ НАБОРА Набор реагентов для бактериологических исследований «Питательная среда для выделения возбудителей гнойных бактериальных менингитов, сухая» (ГБМ-агар) предназначен для бактериологических исследований в клинической микробиологии при анализе клинического материала от больных с подозрением на бактериальный менингит и с другими заболеваниями инфекционной природы, вызываемыми бактериями Haemophilus influenzae. Streptococcus pneumoniae. Neisseria rneningitidis, a также при работе с чистыми культурами Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis. ГБМ-агар предназначен для использования врачами-бактериологами, эпидемиологами и другими специалистами в области бактериологии. 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА ГБМ-агар состоит из сухой основы питательной среды (далее - Основа) - 1 банка и ростовой добавки (далее - РД) - 5 флаконов. Основа представляет собой мелкодисперсный порошок от светло-коричневого до темно-коричневого цвета. Основу получают смешиванием сухих компонентов. РД представляет собой пористую массу розового цвета, которую получают путём лиофильного высушивания раствора компонентов. Допускается неоднородная окраска РД. --- стр. 2 --- З.ПРИНЦИП д е й с т в и я Совокупность компонентов, входящих в состав набора, обеспечивает выделение и рост основных возбудителей гнойных бактериальных менингитов и других требовательных микроорганизмов. В состав Основы ГБМ-агара входит стимулятор роста гемофильных микроорганизмов (СРГМ). СРГМ представляет собой мелко-дисперсный порошок, полученный путём ферментативного гидролиза суспензии чёрного альбумина с последующей сушкой методом распыления. Чёрный альбумин представляет собой либо высушенную дефибринированную кровь, либо высушенную массу форменных элементов крови, включая эритроциты, отделенную от сыворотки (плазмы) крови отстаиванием или сепарированием. В процессе сушки чёрного альбумина под воздействием повышенной температуры происходит разрушение эритроцитов. В связи с этим СРГМ имеет в своём составе термически лизированные эритроциты, а так же служит в питательной среде источником фактора X, необходимым для роста гемофильной палочки. Другой фактор роста бактерий рода Haemophilus (V-фактор - никотинамидадениндинуклеотид), содержится в РД. Кроме того, РД включает ряд веществ, стимулирующих рост пневмококков и менингококков. Исследуемый при диагностике бактериальных менингитов клинический материал (ликвор, кровь) в норме стерилен, поэтому любой выделенный из него микроорганизм может быть этиологическим агентом заболевания. Если использовать питательные среды, содержащие антибактериальные препараты в процессе исследования крови или спинно мозговой жидкости, то возникает вероятность получения ложно-отрицательных результатов. ГБМ-агар не содержит ингибиторов роста микроорганизмов. 4.СОСТАВ Состав Основы на 1 л питательной среды: Панкреатический гидролизат казеина........................................................... 15,0 г Стимулятор роста гемофильных микроорганизмов.................................... 12,0 г Дрожжевой экстракт ...................................................................................... 5,0 г Пептон мясной ................................................................................................ 5,0 г Глюкоза............................................................................................................ 1,0 Натрий хлористый........................................................................................... 1,0 г Крахмал растворимый.................................................................................... 1,0 г Натрий фосфорнокислый двузамещённый, безводный............................... 0,5 г Агар микробиологический............................................................................. (12,0±2,0) ' г Варьирование величины связано с различной прочностью агарового геля 2 --- стр. 3 --- Состав РД, мг/л среды: Цистеина гидрохлорид .................................................................................... 250,0 L-глутамин........................................................................................................ 100,0 Аденин............................................................................................................... 10,0 Никотинамидадениндинуклеотид................................................................... 1,5 Цианокобаламин............................................................................................... 1,0 Тиамина пирофосфат....................................................................................... 1,0 5.АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 5.1. Специфическая активность (чувствительность среды, скорость роста, стабильность основных биологических свойств микроорганизмов). Питательная среда, приготовленная по п. 9.1 настоящей инструкции, через 18-24 ч инкубации при температуре (37±1) °С в атмосфере 5-10 % СО 2 обеспечивает рост следующих контрольных тест-штаммов: Н . influenzae АТСС 49247 - в виде серых слизистых, блестящих колоний диаметром 1,0-2,о мм при посеве 0,1 мл взвеси из разведения 10'^; N. meningitidis АТСС 13102 - в виде полупрозрачных блестящих сероватого цвета колоний диаметром 1,0-2,0 мм с идеально ровными краями при посеве 0,1 мл взвеси из разведения 10'^’ через; S. pneumoniae АТСС 6305 - в виде мелких полупрозрачных чётко очерченных, не склонных к слиянию колоний диаметром 0,4-0,6 мм при посеве 0,1 мл взвеси из разведения 10'^ В зоне роста культуры должно наблюдаться обесцвечивание питательной среды. 5.2. Результаты клинических испытаний. При исследовании 72 образцов носоглоточной слизи для бактериологического выявления назофарингеального носительства в ходе проведения клинических испытаний ГБМ-агара при доверительной вероятности 90%, выделены возбудители (Я. influenzae тип Ь, N . meningitidis тип А, S. pneumoniae) в 19 образцах, выявляемость положительных проб составила 95%±2% как на ГБМ-агаре, так и на контрольной среде - Шоколадный агар. При проведении лабораторных исследований по выделению возбудителей гнойных бактериальных менингитов на ГБМ-агаре с использованием модели клинического материала (сыворотки крови) в 23 образцах, искусственно контаминированных чистыми культурами тест-щтаммов, полученных из Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ-Оболенск», было получено 23 положительных результата, ложно отрицательных ответов не было. 3 --- стр. 4 --- 6.МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Потенциальный риск применения набора реагентов - класс 2 Б (Приказ МЗРФ №4н от 06.06.2012 г). При работе с образцами и микробными культурами необходимо соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами Ш-1У группы патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». Не использовать компоненты ГБМ-агара по истечении срока годности. Не использовать при нарушении целостности флаконов с РД во время транспортировки или хранения! Неиспользованные компоненты набора с истёкшим сроком годности утилизируются любым методом, предотвращающим повторное использование по назначению. Исследования с помощью ГБМ-агара проводить только в условиях специализированных бактериологических лабораторий медицинскими специалистами, имеющими разрешение на работу с микроорганизмами Ш-1У группы патогенности. 7.0Б0РУД0ВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ - весы лабораторные 2 класса точности - автоклав; - чашки Петри; - пипетки стеклянные или механические, позволяющие отбирать объёмы жидкости 5 мл; - вода дистиллированная, стерильная; - колбы стеклянные, объёмом не менее 1 л - термостат, обеспечивающий температуру (37±1) °С; - оборудование и материалы для поддержания атмосферы с содержанием 5- 10% СОг (анаэростат с газогенерирующим пакетом, «свечной» сосуд с парафиновой свечой или С02-инкубатор) 8.АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ Основным биологическим материалом для исследования при бактериальных менингитах служит спинномозговая жидкость и кровь. Для бактериологического выявления назофарингеального носительства исследуют носоглоточную слизь. При выявлении назофарингеального носительства рекомендуем использовать селективные добавки (СД-Г, СД-П и СД-М; см. и. 9.4) в соответствии с Методическими 4 --- стр. 5 --- рекомендациями МР 4.2.0078/1-13 от 21 октября 2013 г «Использование питательных сред для диагностики бактериальных менингитов». Питательную среду можно использовать также при работе с чистыми культурами /7. influenzae, S. pneumoniae, N. meningitidis и другими требовательными микроорганизмами. 9.ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА Исследования образцов проводят в соответствии с рекомендациями, изложенными в МУК 4.2.1887-04 «Лабораторная диагностика менингококковой инфекции и гнойных бактериальных менингитов». 9.1. Подготовка к анализу Приготовление питательной среды. Препарат Основы в количестве, указанном на этикетке для приготовления конкретной серии питательной среды, тщательно размешивают в 1 л дистиллированной воды, нагревают до кипения, стерилизуют в автоклаве при температуре (121 ± 1) °С в течение 15 мин. В асептических условиях вскрывают флакон с РД и растворяют содержимое в 5,0 мл стерильной дистиллированной воды. В охлаждённую до температуры (45-55) °С Основу в асептических условиях вводят раствор РД из расчёта 5,0 мл на 1л Основы (1 флакон РД на 1 л Основы), разливают в стерильные чашки Петри, закрывают крышками и ставят для застывания при температуре 18-25 °С. Раствор РД не хранить, использовать немедленно после приготовления! Готовая к применению питательная среда, разлитая в чашки Петри, прозрачная от светло-коричневого до темно-коричневого цвета. Допускается наличие осадка от тёмно- коричневого до чёрного цвета. Готовую среду можно использовать в течение 7-10 дней при условии хранения её при температуре от 2 до 8 °С. 9.2. Посев и инкубация. Посев анализируемых образцов производят сразу же после их получения на предварительно прогретые в течение 10-15 мин в термостате при температуре (37±1) °С чашки со средами. Чашки с посевами инкубируют в перевёрнутом положении (крышкой вниз) в атмосфере 5-10 % СО 2 при температуре (37±1) °С, время инкубации зависит от типа образца и целей исследования. 9.3. У чёт результатов. Учёт результатов проводят визуально по наличию характерных колоний через 24- 48 ч инкубации. --- стр. 6 --- Н . influenzae формирует серые слизистые блестящие колонии диаметром до 2 мм. Для чистой культуры гемофильной палочки характерно наличие специфического "мышиного" запаха. N . meningitidis формирует полупрозрачные блестящие сероватого цвета колонии с идеально ровными краями диаметром до 2 мм, S. pneumoniae формирует мелкие полупрозрачные чётко очерченные, не склонные к слиянию колонии, обесцвечивающие питательную среду в зоне роста. 9.4. При исследовании носоглоточной слизи рекомендуется использование селективного варианта ГБМ-агара. Для этого во время приготовления питательной среды одновременно с РД вносят селективную добавку. Селективные добавки в состав набора не входят. В соответствии МР 4.2.0078/1-13 от 21 октября 2013 г возможно самостоятельное приготовление и использование селективных добавок СД-Г, СД-П или СД-М, входящих в состав Набора реагентов для бактериологических исследований «Питательная среда для выделения возбудителей гнойных бактериальных менингитов, готовая к применению» (Шоколадный агар, РУ № ФСР 2012/13081) СД-Г предназначена для выделения Н . influenzae. Благодаря природной устойчивости Н . influenzae к бацитрацину, селективная добавка позволяет избирательно выделять гемофильную палочку из контаминированного материала, ингибируя рост широкого спектра микроорганизмов. Состав СД-Г, мг/л среды: Амфотерицин В ................................................................................................ 5,0 Бацитрацин........................................................................................................ 500,0 Ванкомицин...................................................................................................... 3,0 СД-П предназначена для выделения S. pneumoniae. Селективная добавка ингибирует рост грамотрицательных и не подавляет рост грамположительных микроорганизмов. Состав СД-П, мг/л среды: Амфотерицин В .............................................................................................. 5,0 Полимиксин В .................................................................................................. 10,0 Налидиксовая кислота..................................................................................... 17,0 СД-М предназначена для выделения N. meningitidis. Селективная добавка подавляет рост широкого спектра как грамположительных, так и грамотрицательных микроорганизмов, позволяя выделять менингококков из контаминированного материала. Состав СД-М, мг/л среды: 6 --- стр. 7 --- Амфотерицин В ................................................................................................ 5,0 Полимиксин В .................................................................................................. 10,0 Ванкомицин...................................................................................................... 3,0 Все три селективные добавки подавляют рост Candida albicans. Ю.УТИЛИЗАЦИЯ И УНИЧТОЖЕНИЕ. Утилизация серий ГБМ-агара е иетекшим сроком годности и в поврежденной упаковке производитея по СанПиН 2.1.7.2790-10 как медицинекие отходы, принадлежащие к классу «А» - эпидемиологически безопасные отходы. Уничтожение ГБМ-агара после работы с музейными штаммами и образцами клинического и другого инфицированного материала осуществляетея по СанПиН 2.1.7.2790-10 как медицинские отходы, принадлежащие к классу «Б» с обязательным предварительным обезвреживанием путем автоклавирования в течение 2 ч при температуре (126±2) °С. Обращение с медицинскими отходами следует выполнять соглаено ехеме, принятой в конкретной организации, осущеетвляющей медицинекую и (или) фармацевтическую деятельность. Данная схема разрабатывается в соответствии с требованиями вышеуказанных еанитарных правил и утверждается руководителем организации. 11.УСЛОВИЛ ХРАНЕНИЯ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА Набор реагентов транспортируют всеми видами крытого транепорта при соблюдении условий хранения. Хранят в герметично закрытой упаковке в еухом защищённом от евета меете. Основу хранят при температуре от 2 °С до 25 °С, а РД при температуре от 2 до 8 °С. После векрытия банку с Оеновой хранят до окончания срока годности плотно закрытой, в сухом месте, избегая попадания влаги. РД после вскрытия не хранят, используют немедленно поеле приготовления! Срок годности - 2 года. Для получения надёжных результатов необходимо етрогое соблюдение настоящей инетрукции по применению. По вопросам, касающимся качества Набора реагентов для бактериологических исследований «Питательная ереда для выделения возбудителей гнойных бактериальных 7