Набор реагентов PD-L1 IHC 22C3 pharmDx для определения белка PD-L1 методом иммуногистохимического анализа — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- PD-Ll ШС 22C3 pharmDx Руководство по эксплуатации медицинского изделия Оэко PD-L1 IHC 22СЗ pharmDx Для in vitro диагностики i*# ■ 1 *Л ! X* f V-> ^ Ч*” **t V^' . ' А>*;.гг ^ giiin I— # *"*' Х Ч ^ Д ■ ‘"V / < *« .< ^ 4 'Ч. ..,.w A Agilent Technologies --- стр. 2 --- Назначение....................................................................................................................................5 Введение........................................................................................................................................6 Обзор РО-Ы..................................................................................................................................7 Обзор РО-Ы 1НС 22СЗ рЬагтОх................................................................................................9 Конфигурация набора................................................................................................................10 Технические характеристики....................................................................................................11 Приготовление образца..............................................................................................................11 Ткань для внутреннего контроля..............................................................................................11 Опциональный дополнительный внутренний контроль: ткань миндалин............................12 Обработка ткани.........................................................................................................................12 Процедура окрашивания РО-Ы ШС 22СЗ рЬагтОх...............................................................12 Технический контрольный список...........................................................................................15 Руководство по клинической интерпретации...........................................................................17 Общие положения......................................................................................................................17 ^Критерии оценки ткани..............................................................................................................17 Оценка контрольных образцов..................................................................................................17 Руководство по балльной оценке..............................................................................................24 Оценка окрашивания и определение балльной оценки доли опухоли..................................25 Определение балльной оценки доли опухоли (БДО)..............................................................25 Оценка окрашивания РО-Ы......................................................................................................25 ^Руководство и методы определения балльной оценки доли опухоли....................................25 Предлагаемые методы определения БДО................................................................................26 Выявление пациентов с НМРЛ для проведения лечения.......................................................28 Предоставление отчета по результатам....................................................................................31 Характеристики окрашивания РО-Ы.......................................................................................32 Основные приемы балльной оценки образцов, окрашенных с помощью РО-Ы ШС 22СЗ рЬагшОх.......................................................................................................................................32 Визуальное руководство по интерпретации результатов окрашивания с помощью РО-Ы ШС 22СЗ рЬаппОх.....................................................................................................................33 Отрицательные образцы при окрашивании с помощью РО-Ы ШС 22СЗ рЬагтОх (ПБО <50%)...........................................................................................................................................40 Положительные образцы при окрашивании с помощью РО-Ы ШС 22СЗ рЬаппОх (ПБО >50%)...........................................................................................................................................48 Образцы с пограничными значениями теста РО-Ы ШС 22СЗ рЬагшОх (БДО 40-60%).....55 Артефакты...................................................................................................................................60 Руководство по выявлению и устранению проблем...............................................................67 Список литературы.....................................................................................................................69 Оглавление Руководство по экплуатацпй набора реагентов РО-Ы ШС 22СЗ рЬаппОх --- стр. 3 --- Для диагностического использования in vitro. PD-Ll IHC 22C3 pharmDx является качественным набором реагентов, предназначенным для обнаружения белка PD-L1 методом иммуногистохимического анализа с применением антител моноклональных к PD-L1 мышиных, в зафиксированных в формалине и залитых парафином (FFPE) образцах ткани немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ) с использованием системы визуализации EnVision FLEX, с помощью станции иммуногистохимического окрашивания "Автостейнер Линк 48" (Autostainer Link 48). ■Экспрессию протеина PD-L1 определяют с помошью балльной оценки доли опухоли (БДО), которая представляет собой процент жизнеспособных опухолевых клеток с частичным или полным окрашиванием мембраны. Образец считают положительным по PD- Ll, еели >50% жизнеспособных опухолевых клеток демонстрируют окрашивание мембраны любой интенсивности (БДО >50%). PD-L1 IHC 22СЗ pharmDx предназначен для выявления пациентов с НМРЛ для проведения лечения препаратом КЕЙТРУДА® (KEYTRUDA®) (пембролизумаб). Назначение ■» ^ ' i ^ ^ ^ ... _ ' т ^ .if- Í ' ■■ / ' . 1 ^ . ■'»' у г ■ ' Л, р I л ' ..¿уф. '*/^^7.’ ' t J i- ■ Щ ч S Г Г ' Руководство по экплуатации набора реагентов PD-L1 IHC 22СЗ pharmDx --- стр. 8 --- Primary ii Antibooy i| /АA rtig ery^ y^ yyy^ m ig e n A A A A vA A A A A Application of primary antibody Нанесение первичного антитела Antigen Антиген Primary Antibody Первичное антитело Application of Linker Нанесение Линкера. Linker Линкер Application of Visualization Reagent Нанесение Реагента для визуализации Labeled Polymer Меченый полимер Рисунок 4: Процедура окрашивания PD-Ll IHC 22C3 pharaiDx Конфигурация набора ' PD-Ll IHC 22C3 pharmDx (номер кода изделия SK006) содержит реагенты для проведения 50 тестов, которые могут быть выполнены в 15 индивидуальных прогонах (Рисунок 5). 1) Раствор для демаскировки антигена с низким pH EnVision FLEX (50х) 2) Реагент блокирующий пероксидазу 3) Антитело моноклональное к PD-L1 мышиное, клон 22СЗ 4) Реагент отрицательного контроля 5) Линкер, антимышиный 6) Реагент для визуализации - пероксидаза хрена 7) ДАБ+ забуференный субстрат 8) ДАБ+ хромоген 9) Усилитель ДАБ 10) Предметные стекла с контрольной клеточной линией Промывочный буфер EnVision FLEX, 20х (код К8007) и гематоксилин EnVision FLEX (код К8008) также необходимы, но они не входят в данный набор. Руководство по экплуатации набора реагентов PD-L1 IHC 22СЗ pharmDx --- стр. 9 --- I \ V ©0^ ©0®®® 6 ® Рисунок 5: Компоненты PD-Ll IHC 22C3 pharmDx. 4?i f ^ ^ = г f DAB ОЛЙ DAB DA£i DAB 0 М 0 л , л л л4И Application of DAB+ Substrate Chromogen Solution Нанесение раствора хромогенного субстрата ДАБ+ DAB ДАБ Applieation of DAB Enhancer Нанесение усилителя ДАБ Технические характеристики Технические проблемы при использовании набора реагентов РО-Ы ШС 22СЗ рЬаппОх, как правило, происходят из двух основных источников: проблемы, связанные со сбором и подготовкой образцов перед проведением теста, и проблемы, связанные с проведением самого теста. Технические проблемы, связанные с проведением теста, как правило, связаны с отклонениями от процедуры и поддаются контролю и минимизации путем тренировки и, по необходимости, уточнения инструкций по использованию данного продукта. Приготовление образца Обработка образцов должна осуществляться таким образом, чтобы сохранить ткань для иммуногистохимического окрашивания. Определяют опухолевую ткань с интактной морфологией и достаточным количеством опухолевых клеток для исследования. Ко всем образцам следует применять стандартные методы обработки тканей. Ткань для внутреннего контроля Различия в обработке и фиксации образцов в лаборатории пользователя могут привести к существенной вариабельности резул1>татов. В каждый прогон окрашивания, в дополнение к предметному стеклу с контрольной клеточной линией РО-Ы ШС 22СЗ рЬагтОх, следует включать образцы тканей положительного и отрицательного внутреннего контроля. Руководство по экплуатациь набора реагентов PD-L1 ШС 22СЗ pharmDx --- стр. 10 --- Выберите ткань для положительного и отрицательного конт]юля из свежих образцов такого же типа опухоли, к которому относится образец пациента. Производите фиксацию, обработку и заливку контрольной и ьсследуемой ткани одинаковым образом. Контрольная ткань, обработанная иначе, чем образец пациента, позволяет проверить эффективность реагента, но не приготовления ткани. Идеальная ткань положительного контроля обеспечивает полное динамическое представление различной интенсивности окрашивания мембран от слабой до умеренной. Идеальная ткань отрицательного контроля характеризуется отсутствием окрашивания опухолевых клеток, и при этом содержит связанные с опухолью макрофаги/иммунные клетки, которые могут экспрессировать РО-Ы и служить внутренним положительным контролем. Опциональный дополнительный внутренний контроль: ткань миндалин Ткань миндалин, окрашенная PD-L1, должна быть предварительно проверена на наличие сильного окрашивания в области эпителия крипт и слабого или умеренного окрашивания фолликулярных макрофагов в герминативных центрах. Экспрессия PD-L1 клетками эндотелия, фибробластами, а также поверхностным эпителием должна быть отрицательной. Обработка ткани Зафиксированные в формалине и залитые парафином ткани были валидированы для использования в данном тесте. Ткань делят на блоки толшиной 3 мм или 4 мм, фиксируют в формалине, обезвоживают и очищают путем серии замачиваний в спирте и ксилоле, с последующим пропитыванием расплавленным парафином. Температура парафина не должна превышать 60°С. Были проведены исследования с фиксацией в 10% нейтральном забуференном формалине в течение 12-72 часов. Продолжительность фиксации образцов для окрашивания PD-L1 должна быть более 3 часов. Использование декальцифицированных образцов или образцов, обработанных другими фиксаторами в наборе реагентов PD-L1 IHC 22СЗ pharmDx не было валидировано и не рекомендуется. Готовят срезы образцов толщиной 4-5 мкм. Приготовленные срезы помещают на предметные стекла FLEX IHC (код К8020) или несущие положительный заряд предметные стекла Fisherbrand Superfrost Plus. Срезы ткани хранят в темноте при температуре 2-8°С для сохранения антигенности, и окрашивают в течение 6 месяцев после резки. Процедура окрашивания PD-L1 IHC 22СЗ pharmDx Реагенты и инструкции по использованию PD-L1 IHC 22СЗ pharmDx были разработаны для обеспечения оптимальной эффективности. Дальнейшее разведение реагентов, изменение продолжительности и/или температуры инкубирования или используемых материалов может привести к ошибочным результатам. Все необходимые шаги и время инкубирования для окрашивания запрограммированы в программном обеспечении DakoLink. Хранение реагентов Все компоненты PD-L1 ШС 22СЗ pharmDx, включая предметные стекла с контрольными клеточными линиями, в период неиспользования станции иммуногистохимического окрашивания «Автостейнер Линк 48» (Autostainer Link 48) следует хранить в темноте при температуре 2-8 °С. Приготовление реагентов Руководство г.о экплуатации набора реагентов PD-L1 ШС 22СЗ pharmDx --- стр. 14 --- Контрастное окрашивание микропрепаратов проведено с помощью гематоксилина EnVision FLEX? □ □ Процедура депарафинирования, регидратации и демаскировки («3 в 1») проведена с помощью РТ Link? Предметные стекла оставались увлажнены буфером во время переноса в "Автостейнер Линк 48" (Autostainer Link 48) и перед началом окрашивания? □ □ В "Автостейнер Линк 48" (Autostainer Link 48) был выбран протокол PD-L1 ШС □ 22СЗ pharmDx? Располагаете ли Вы всем необходимым оборудованием для проведения теста □ PD-L1 ШС 22СЗ pharmDx в соответствии с протоколом? Если нет, укажите недостающие позиции в комментариях ниже. Дополнительные наблюдения или комментарии: □ □ Руководство по экплуатациг набора реагентов PD-L1 ШС 22СЗ phannDx --- стр. 15 --- Руководство по клинической интерпретации Общие положения Оценка результатов теста РВ-Ы ШС 22СЗ рЬаппВх должна проводиться квалифицированным патологом с помощью светового микроскопа. Инструкции по балльной оценке РО-1.1 ШС 22СЗ рЬагтОх подробно рассматриваются на странице 18. Перед оценкой окрашивания РВ-Ы образца пациента, важно оценить контрольные образцы для проверки качества окрашивания. Интерпретация экспрессии РВ-Ы лучше всего проводится путем оценки 3 последовательных срезов (окрашивание гематоксилином-эозином [ГЭ], РВ-Ы и реагентом отрицательного контроля [РОК]), таким образом, что если первым оценивается предметное стекло, окрашено ГЭ, и признается приемлемым, то ИГХ окрашивание 2 оставшихся последовательных срезов с достаточной вероятностью будет обладать теми же благоприятными характеристиками ткани. Каждый набор реагентов РВ-Ы ШС 22СЗ рЬагтВх укомплектован предметными стеклами с контрольной клеточной линией, которые следует включать в каждое ИГХ окрашивание. Руководства по интерпретации предметных стекол с контрольной клеточной линией рассматриваются на странице 15. Предметные стекла внутреннего контроля должны оцениваться при каждом ИГХ окрашивании. Критерии оценки ткани Подтвердить наличие, по меньшей мере, 100 жизнеспособных опухолевых клеток Для оценки приемлемого образца требуется срез, окрашенный гематоксилином и эозином (ГЭ). Окрашивание РВ-Ы ШС 22СЗ рЬагтВх и ГЭ должно осуществляться на последовательных срезах одного и того же парафинового блока исследуемого образца. Исследуют предметное стекло, окрашенное ГЭ, чтобы установить, содержит ли образец не менее 100 жизнеспособных опухолевых клеток. » Если в образце присутствует менее 100 жизнеспособных опухолевых клеток, результаты его анализа считают недостоверными. Инструкции по оценке образцов, содержащих менее 100 жизнеспособных опухолевых клеток Ткань из более глубокого слоя блока, или, возможно, другого блока, может содержать достаточное количество жизнеспособных клеток для тестирования с помощью РВ-Ы ШС 22СЗ рЬагтВх. Оценка контрольных образцов Предметное стекло е контрольной клеточной линией РО-Ы ШС 22СЗ рЬагтПх Исследуют предметное стекло с контрольной клеточной линией РВ-Ы ШС 22СЗ рЬагтВх, чтобы убедиться в том, что используемые реагенты действуют надлежащим образом. Каждое предметное стекло содержит срезы сгустков клеток с положительной и отрицательной экспрессией РВ-Ы (рисунок 6). Оценивают процент положительных клеток и интенсивность окрашивания. Если окрашивание предметного етекла с контрольной клеточной линией признают неудов/ етворительным, все результаты по образцу пациента следует считать недостоверными. Не еледует использовать предметное стекло с контрольной клеточной линией в качестве вспомогательного средетва для интерпретации Руководство по экплуатацир' набора реагентов РВ-Ы ШС 22СЗ рЬагтВх --- стр. 16 --- результатов пациента. Оценивают общую интенсивность окрашивания по следующей шкале: О 1+ 2+ 3+ Отсутствует Низкая интенсивность Умеренная интенсивность Высокая интенсивность О N 3 О с X с — « Г! ’л к,.-:,* Ш т.1 ге1:р!м* РВ-Ы ШС 22СЗ рЬагтВх РВ-Ы ШС 22СЗ рЬагтВх РВ-Ы розМуе Клетки, положительные по РВ-Ы РВ-Ы нegative Клетки, отрицательные по РВ-Ы Рисунок 6: Каждое предметное стекло с контрольной клеточной линией содержит скопления клеток с положительной и отрицательной экспрессией РО-Ы. » Не следует использовать предметное стекло с контрольной клеточной линией в качестве вспомогательного средства для интерпретации результатов пациента. Скопление клеток положительного контроля Для скопления клеток, положительных по РО-Ы, приемлемым считается следующий результат окрашивания (рисунок 7): ■ По меньшей мере, 70% клеток имеют окрашивание мембраны средней интенсивностью не ниже «2+» ■ Интенсивность любого фонового окрашивания составляет менее «1+» Рисунок 7: Приемлемое окрашивание скопления клеток положительного контроля предметного стекла с контрольной клеточной линией РВ-Ы ШС 22СЗ рЬапнВх (увеличение 20х). Скопление клеток отрицательного контроля Для скопления клеток, отрицательных по РВ-Ы, приемлемым считается следующий результат окрашивания (рисунок 8): Руководство по экплуатациь набора реагентов РВ-Ы ШС 22СЗ рЬапнВх --- стр. 27 --- г? , ' г * ' ^ '•г -.У' % / ■ -Л ■'■: •к Ч М 0 Х ...ч . •. Ч ^ - 0 Ф %> • , * ■ т ^ . Л5. ♦ ч; I ^ ' )Г ^ % «** • ■'*« |:> ;' !;»:,■ *■ ч* * ч ч '■ , ‘ ^ э ч '»к .■':: .' . 4- Ф-‘ »■, * « V' -• . . . ^ ' ^ .V .. , , „ . ♦ , г Я> '■ * »«. V '" 'Л ЧГЧ,- Рисунок 17: Экспрессия отсутствует БДО <1% (отрицательный по РЭ-Ы) (увеличение 20х, врезка: увеличение 40х). / Ф ■ #, 7Р ^ '' ' ш * # ■ ' I / ’ •« 5 .- , “ * ■ ■ I V.у-у ^ ,>'■ ■ - X •1 ‘1Р1 Рисунок 18: Низкий уровень экспрессии БДО 1-49% (отрицательный по РО-Ы) (увеличение 20х, врезка: увеличение 40х). Руководство ио Элплуатацни набора реагентов РО-Ы ШС 22СЗ рЬагтОх --- стр. 28 --- Характеристики окрашивания РО- Ы Основные приемы балльной оценки образцов, окрашенных с помощью РО-Ы ШС 22СЗ рЬагшВх Для успешной количественной оценки образцов, окрашенных с помошью РО-Ы ШС 22СЗ рЬагшОх, критическое значение имеет выполнение следующих условий: ■ Наличие в исследуемом образце, по меньшей, 100 жизнеспособных опухолевых клеток ■ Оцениваются надлежащие клетки - подсчитывать следует только жизнеспособные опухолевые клетки ■ Оценка проводится с учетом локализации окрашенных компартментов в клетке - учитывают только опухолевые клетки с окрашиванием мембраны ■ Окрашивание правильно интерпретируется Опыт и мнение патолога играют важную роль при оценке окрашивания на РО-Ы. Для оценки иммуногистохимического окрашивания и оценки используют объективы с увеличением 4х, 10х, 20х и 40х (как минимум). Ниже приведено несколько типичных особенностей окрашивания, которые следует учитывать при определении балльной оценки доли опухоли (БДО): ■ При оценке учитывают окрашивание мембраны опухолевых клеток любой интенсивности 1-3+ ■ Учитывают частичное и/или полное окрашивание мембраны ■ Учитывают любое различимое и убедительное окрашивание мембраны ■ Окрашивание цитоплазмы в оценку не включают ■ Иммунные клетки, связанные с опухолью, такие как инфильтрирующие ли.мфоциты или макрофаги, в оценку не включают ■ Зернистое окрашивание для включения в оценку должно сопровождаться различимым и убедительным окрашиванием мембраны На следующих страницах представлено руководство по оценке окрашивания образцов различных типов. Руководство по экплуатации набора реагентов РО-Ы ШС 22СЗ рЬагтОх --- стр. 29 --- Визуальное руководство по интерпретации результатов окрашивания с помощью РВ-Ы ШС 22СЗ рЬагшВх Различимое и убедительное окрашивание мембраны При количественной оценке учитывают любое различимое и убедительное окрашивание мембраны (интенсивностью >1+), видимое на каком-либо увеличении. Для подтверждения наличия различимого и убедительного окрашивания может потребоваться изучение образца на большем увеличении. I • • ^ % % г. ' ' - * ♦ Т'- ' „ Л ' . •** * * ‘ с г ■ ^ . -V ■ ' ф ■. ' • ‘ ' - г ' * * г " * ¡ » * ■ *т ■' ^ * % • •4"-' ## # ' I -,.л, ‘ ¡ . ^ л* * . ч* . «. Л*»’ ,/• \ », V' ' > * » , *л ‘ ..^ , V * '* * • > 4 . - \ ■ . I - Ф *■ ^ .4 i л>Л.**. *4' # ■ г 1г> ■ *I Ч • ' ш '■ '■ « А.* *. ^ * у •* Рисунок 20а: Образец НМРЛ, окрашенный первичным антителом к РО-Ы, демонстрирующий слабое окрашивание мембраны опухолевых клеток (увеличение 10х). Л * •* Ш ш ' . -г,.; ■ # *% .г"' « а ч % '■*т м. ■ <г ” 1 ^ vЭ * . I ^ # Рисунок 20Ь: Образец НМРЛ, окрашенный первичным антителом к РО-Ы, демонстрирующий слабое, но различимое и убедительное окрашивание мембраны опухолевых клеток (стрелка) (увеличение 40х). Ключевой момент: При определении БДО учитывают любое различимое и убедительное окрашивание мембраны опухолевых клеток (интенсивностью >1+) Руководство по экплуатации набора реахентов РО-Ы ШС 22СЗ рЬагтОх