Набор реагентов «ДС-ИФА-НВsAg-0,01» Тест-система иммуноферментная для выявления или подтверждения поверхностного антигена вируса гепатита В, набор диагностический по ТУ 9398-091-05941003-2006 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2010/07301 · класс риска 3

Производитель: ООО "НПО "Диагностические системы" (Россия)

Вид изделия: Вирус гепатита В поверхностный антиген ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 191 контракт, медианная цена за единицу 11 385 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
ш
Н А У Ч Н О -П Р О И З В О Д С Т В Е Н Н О Е  О Б Ъ Е Д И Н Е Н И Е
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ СИСТЕМЫ
ВЕР
ВЕР
ВЕР
ВЕР
.1
.1
96
192
480
УТВЕРЖДАЮ
Заместитель п 1ьного директора
ООСИЯЯЮ"^ эстические системы»
О.Н. Шлюндин
96 (для выявления) 
или
48 (для подтверждения)
2018 г.
ИНСТРУКЦИЯ  
по применению
Набор реагентов  
«ДС-ИФА-НВ8А§-0,01»
Тест -  система иммуноферментная  
для выявления или подтверждения поверхностного антигена  
вируса гепатита В, набор диагностический


--- стр. 2 ---
Содержание
НАЗНАЧЕНИЕ.....................................................................................................................................................3
ПРИНЦИП ТЕСТА..............................................................................................................................................3
I. СОСТАВ НАБОРА «ДС-ИФА-НВ8Аё-0,01»................................................................................................3
АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ.....................................................5
^ МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ....................................................................................................................5
/I. УТИЛИЗАЦИЯ И УНИЧТОЖЕНИЕ..............................................................................................................6
V ^ II. НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЕ! И ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ПОСТАВЛЯЕМБ1Е С НАБОРОМ
РЕАГЕНТОВ........................................................................................................................................................6
VIII. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ...........................................................................................................6
IX. ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ...........................................................................................................................6
X. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА................................................................................................................................7
XI. УЧЕТ РЕЗУЛБТАТОВ........................................................................................................................................9
XII. ОГРАНИЧЕНИЯ ТЕСТА................................................................................................................................
XIII. СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ.........................................Ю
XIV. ОБЪЯСНЕНИЕ СИМВОЛОВ..........................................................................................................................И1  ЛПриложение I...............................................................................................................................................................


--- стр. 3 ---
№
« •
1
^^р регентов выпускается в виде четырех комплектов.
мплекты 1,2,3  - для выявления поверхностного антигена вируса гепатита В:
•мплект 1 рассчитан на проведение 96 (один разборный планшет) определений, включая  
нтрольные; предназначен как для ручной поетановки, так и для постановки на ИФА-анализаторах 
•крытого типа с возможностью дробного использования.
омплект 2 рассчитан на проведение 192 (два разборных планшета) определений, включая  
онтрольные; предназначен как для ручной поетановки, так и для постановки на ИФА-анализаторах 
ггкрытого типа с возможностью дробного использования.
Комплект 3 рассчитан на проведение 480 (пять разборных планшетов) определений, включая  
контрольные; предназначен как для ручной постановки, так и для постановки на ИФА-анализаторах 
открытого типа с возможностью дробного использования.
Комплект 4 -  для выявления и/или подтверждения поверхностного антигена вируса гепатита В
рассчитан на проведение 96 (один разборный планшет) определений для выявления или 48 определений 
для подтверждения наличия НВзАё, включая контрольные, предназначен как для ручной постановки, 
так и для постановки на ИФА-анализаторах открытого типа с возможностью дробного использования 
(по одному стрипу - в случае выявления или по два стрипа -  в случае подтверждения наличия НВ8А§).
I. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «ДС-ИФА-НВ8А§-0,01» предназначен для выявления или подтверждения  
поверхностного антигена вируса гепатита В в сыворотке (плазме) и препаратах крови (альбумине,  
фибринолизине, лейкоцитарном интерфероне, иммуноглобулинах) методом иммуноферментного  
анализа. Возможно выявление и/или подтверждение реакцией нейтрализации как диких типов, так и 
мутантных вариантов поверхностного антигена вируса гепатита В.
Чувствительность набора при выявлении поверхностного антигена вируса гепатита В - 0,01 МЕ/мл.
II. ПРИНЦИП ТЕСТА
«ДС-ИФА-НВ8А§-0,01» основан на твердофазном ИФА (одностадийный «сэндвич»-вариант).  
Н В 8 А §  в исследуемом образце одновременно связывается с антителами к НВ8А§, еорбированными в  
лунках планшета, и с меченными биотином антителами к НВ8А§. В данный комплекс включается  
стрептавидин, меченный пероксидазой хрена. Несвязавшиеся реагенты удаляются в ходе отмывки.  
После этого добавляется субстратный раствор на основе ТМБ. Реакция останавливается добавлением 
серной кислоты. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации НВ8А§ в исследуемом 
образце. Подтверждение наличия НВзАё в образце основано на реакции нейтрализации. К  
исследуемому образцу добавляется нейтрализующий реагент, содержащий поликлональные антитела к 
НВзАё, которые связывают НВ8А§ и делают невозможным образование комплекса НВ8А§ с антителами 
в составе Иммуносорбента и Конъюгата-1.
III. СОСТАВ НАБОРА «ДС-ИФА-НВ8А§-0,01»
Таблица 1
Характеристики реагентов
Форма выпуска*
комплект 1
V »
комплект 2 комплект 3 комплект 4 
^ 9 6
Иммуносорбент - планщет полистироловый  
96-луночный разборный до стрипов (или до лунок), в 
лунках которого сорбированы антитела к НВ8А§ 
(анти-НВ8).
1
планшет
2
планшета
5
планшетов
1
планшет
Конъюгат-1 (концентратхП) - антитела к НВ8А§  
(анти-НВз), конъюгированные с биотином.  
Прозрачная или слегка опалесцирующая фиолетового 
цвета жидкость.
1 флакон 
1,4 мл
1 флакон 
1,4 мл
1 флакон 
3,5 мл
1 флакон 
1,4 мл
Конъюгат-2 (концентратхП) - стрептавидин,  
конъюгированный е пероксидазой хрена. Прозрачная 
или елегка опалесцирующая голубого цвета  
жидкость.
1 флакон 
1,4 мл
1 флакон 
1,4 мл
1  флакон 
3,5 мл
1  флакон 
1,4 мл
РРК-1 (раствор для разведения Конъюгата-1) -  
непрозрачная зеленого цвета жидкость, допустимо 
образование осадка, полностью растворяющегося 
при встряхивании.
1 флакон 
14,0 мл
1 флакон 
14,0 мл
2 флакона 
по 18,0 мл
1 флакон 
14,0 мл


--- стр. 4 ---
1
в-2 ^(раствор для разведения Конъюгата-2) -  
шрачная желтого цвета жидкость, допустимо  
фазование осадка, полностью растворяющегося 
ри встряхивании.
1 флакон 
14,0 мл
1 флакон 
14,0 мл
2 флакона 
по 18,0 мл
1  флакон 
14,0 мл
С1+ (контрольный положительный образец) -  
Иактивированный. Прозрачная или слегка  
кпалесцирующая красного цвета жидкость.
1 флакон 
2,5 мл
1 флакон 
2,5 мл
1 флакон 
2,5 мл
1 флакон 
2,5 мл
К2+ (контрольный слабоположительный образец) - 
инактивированный, с концентрацией НВзА§  
1(0,02 ± 0,01) МЕ/мл.
1К2+ - лиофилизированный, сухая пористая аморфная 
масса белого или светло-желтого цвета.
1 флакон 2 флакона 5 флаконов 1  флакон
или или или или или
К2+ - жидкий, готовый к применению. 1 флакон 1  флакон 1 флакон 1  флакон
опалесцирующая оранжевого цвета жидкость. 2,5 мл 2,5 мл 2,5 мл 2,5 мл
К- (контрольный отрицательный образец) -  
инактивированный. Прозрачная или  
опалесцирующая зеленого цвета жидкость.
1 флакон 
2,5 мл
1 флакон 
2,5 мл
1 флакон 
4,5 мл
1 флакон 
2,5 мл
ПР (промывочный раствор) -  концентрат  
фосфатноюолевого буферного раствора с твином 
(ФСБ-Т).
Прозрачная или слегка опалесцирующая бесцветная 
или светло-жёлтого цвета жидкость, допустимо  
образование осадка, полностью растворяющегося 
при температуре от 35 до 39 °С и встряхивании.
1 флакон 
50,0 мл
1 флакон 
120,0 мл
2 флакона 
по 120,0 мл
1 флакон 
50,0 мл
Стоп-реагент - раствор серной кислоты.  
Прозрачная, бесцветная жидкость.
1 флакон 
25,0 мл
1  флакон 
50,0 мл
2 флакона 
по 50,0 мл
1  флакон 
25,0 мл
ТМБ-Субстратный раствор, готовый к 
применению.
Прозрачная бесцветная жидкость.
или
1 флакон 
14,0 мл
или
1  флакон 
25,0 мл
или
1  флакон 
60,0 мл
или
1 флакон 
14,0 мл
или
СБ - субстратный буферный раствор, цитратный 
буфер, содержащий раствор перекиси водорода. 
Прозрачная бесцветная жидкость.
1 флакон 
25,0 мл
1  флакон 
25,0 мл
2 флакона 
по 50,0 мл
1  флакон 
25,0 мл
ТМБ (хромоген) - раствор, содержащий  
3,3',5,5'-тетраметилбензидин.
Прозрачная бесцветная жидкость
1  флакон 
2,5 мл
1 флакон 
2,5 мл
2 флакона 
по 3,5 мл
1  флакон 
2,5 мл
АНТИ-НВ8-ПЛЮС (нейтрализующий реагент) -  
инактивированный, козьи антитела, содержащие 
антитела к НВзАё.
Прозрачная розового цвета жидкость.
- - - 1 флакон 
2,0 мл
АНТИ-НВ8-МИНУС (контрольный реагент) -  
инактивированный, козьи антитела, не содержащие 
антитела к НВзА^.
Прозрачная голубого цвета жидкость.
- - - 1  флакон 
2,0 мл
*6азовая комтектацт
Набор комплектуется готовыми реагентами или концентрированными растворами. Имеется  
цветовая кодировка реагентов, а также маркировка посредством штрих-кодов. Реагенты помещают в 
коробку картонную или пакет полиэтиленовый, куда вкладывают инструкцию по применению.
Допускается изменение базовой комплектации набора (число индивидуальных упаковок с  
реагентами и их объем), при этом количество каждого реагента набора должно быть достаточным для
Дополнительно 
в комплект 
поставки могут 
быть
включены
Крышка к полистироловым  
96-луночным планшетам или  
защитная плёнка для ИФА-  
планшетов
1 шт. 2 шт. 3 шт. 1 шт.
3 шт. 6 шт. 15 шт. 3 шт.
Одноразовые наконечники 16 шт. 32 шт. 80 шт. 16 шт.
Пластиковая ванночка для жидких  
реагентов 2 шт. 4 шт. 10 шт. 2 шт.
Пластиковая скрепка для закрывания 
пакета с иммуносорбентом или пакет 
полиэтиленовый с замком 21р-Ьоск
1 шт. 2 шт. 3 шт. 1 шт.


--- стр. 5 ---
фАНА^ТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ  
Диагностическая чувствительность оценивалась при тестировании образцов 453 пациентов с  
ры м и хроническим гепатитом В, образцы были протестированы с помощью набора реагентов  
3-ИФА-НВ8А§-0,01». Чувствительность набора по позитивным образцам составляет 100%.
Аналитическая чувствительность оценивалась с использованием «Второго международного  
вдарта для НВзАё субтипа ас1\у2, генотипа А» (К1В8С, Великобритания, код 00/588).
Уровень чувствительности тест-системы при детекции поверхностного антигена гепатита В  
Ш8А§) составляет 0,01 МЕ/мл.
Специфичность оценивалась по результатам внешних исследований на случайной выборке  
бразцов сывороток крови доноров в количестве 5348 и составила 99,8% (95%С1: (99,63-99,89).
I
и.
5.2.
5.3.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Потенциальный риск применения набора -  класс 3 (Приказ Минздрава России от 06.06.2012 г. N 4н). 
Набор предназначен для профессионального использования в клинической лабораторной  
диагностике специально обученным персоналом. При работе с набором реагентов следует  
соблюдать ГОСТ Р 52905-2007 «Лаборатории медицинские. Требования к безопасности»
Реагенты набора не содержат вредных веществ в опасных концентрациях, за исключением  
реагентов, обозначенных символом «Внимание». При использовании по назначению вероятность 
негативного воздействия на организм незначительна. Растворы в объёмах и концентрациях,  
представленных в наборе, не представляют опасности при вдыхании.
Меры первой помощи (при необходимости): При попадании на кожу/в глаза -  промыть большим 
количеством воды. Загрязненную одежду снять. При необходимости обратиться за медицинской 
помощью.
Паспорт безопасности набора реагентов может быть представлен по запросу клиента 
Достоверность результатов зависит от выполнения следующих правил лабораторной практики:
• ИФА следует проводить в помещении с комнатной температурой (18 - 25) °С
• Нельзя использовать реагенты из наборов разных серий или смешивать их при приготовлении 
растворов, кроме:
- неспецифических компонентов (ПР, СБ), которые взаимозаменяемы во веех тест-системах  
производства ООО «НПО «Диагностические системы»;
- Стоп-реагента, который может быть взаимозаменяемым в зависимости от молярности
раствора;________________________________
Не изменять процедуру проведения анализа.
Не использовать реагенты после истечения срока годности, 
указанного на упаковке.
Не проводить ферментную реакцию в присутствии 
реактивных паров (киелота, щелочь, альдегиды) или пыли.
Тщательно промывать лабораторную посуду.
Рабочие растворы готовить осторожно, исключая какое-либо 
загрязнение.
Не использовать одну и ту же ванночку для внееения 
Конъюгатов и ТМБ-Субстратного раствора
Перед использованием пластиковые ванночки для жидких 
реагентов ополоенуть водой дистиллированной 
(деионизированной). Многоразовые ванночки для 
автоматических анализаторов сразу после работы ополоснуть 
водой дистиллированной. Затем промьпь 70% растюром 
этилового спирта и снова ополоснуть юдой дистиллированной.
Нельзя допускать высыхания лунок планшета 
Иммуносорбента между отдельными операциями.
Не допускать контакта металлических предметов с 
растворами Конъюгатов, субстратов или ТМБ-Субстратного 
раствора.
Соблюдатъ рекомендованное количестю циклов промывки и 
убедиться, что лунки полностью заполнены, не допускать 
остатка жидкости в лунках после промывки.
Использовать валидированные пипетки и оборудование, 
новые наконечники для каждого образца.
Не подвергать реагенты воздействию высокой температуры 
или прямого солнечного света ю  время инкубации и хранения.
Сыюротки крови, используемые при 
приготовлении К-, К 1-н , Кг+,
АНТИ-НВ8-ПЛЮС и АНТИ-НВз-МИНУС не 
содержат НВзА§, антиген р24 ВИЧ-1 и антител 
к ВИЧ-1,2 и вирусу гепатита С.
При работе с реагентами набора (К-, К]-)-, К2+, 
АНТИ-НВ8-ПЛЮС, АНТИ-НВз-МИНУС) и 
исследуемыми образцами нужно обращаться 
как с потенциально опасными материалами, т.к. 
ни один известный метод тестирования не 
может гарантировать отсутствие
инфекционных агентов.__________________
В помещении с иммунодиагностическими 
материалами нельзя употреблять пищу, пить, 
курить, применять косметику.
При работе с набором реагентов и 
исследуемыми образцами использовать 
спецодежду и одноразовые перчатки.
Не пипетировать ртом.
Промывать руки после работы с набором 
реагентов и исследуемыми образцами 
Избегать контакта ТМБ-Субстратного 
раствора, субстратного буфера, хромогена. 
Стоп-реагента с кожей и слизистыми._________
При расплескивании образцов немедленно дезинфицировать поверхность 3% раствором хлорамина Б.
' Отходы, содержащие биологические образцы, нужно нейтрализовать до сброса в канализацию. Твердые отходы 
должны быть обеззаражены автоклавированием в течение часа при температуре от 124 до 128 °С под давлением 
1,5 кГ/ем^ (0,15 МПа). Допустимо обеззараживание твердых отходов способом погружения в 3% раствор хлорамина Б 
(длительность дезинфекции не менее 1  часа) или другого разрешенного к промышленному выпуску и применению в 
РФ дезинфицирующего средства. Жидкие отходы (промывочные воды, остатки проб, растворов) обеззараживать 
добавлением еухого хлорамина Б из расчета 30 г/л (длительность дезинфекции -  не менее 2 ч) или другого 
хлореодержащего средства. Инструменты и оборудование до и после работы необходимо протирать 2 раза 
70% этиловым спиртом.___________________________________________________________________________________
_


--- стр. 6 ---
0УТа)ШЗАЦИЯ и УНИЧТОЖЕНИЕ
При утилизации и уничтожении все реагенты и материалы, являющиеся отходами, должны быть 
^аботаны в соответствии с действующими нормативами (СанПиН 2.1.7.2790-10, СП 1.3.2322-08,  
У  287-113). -
П . НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ПОСТАВЛЯЕМЫЕ С  
НАБОРОМ РЕАГЕНТОВ
Вода дистиллированная или деионизированная.
I  Автоматические или полуавтоматические, регулируемые или предварительно устанавливаемые  
одноканальные или многоканальные пипетки с изменяемым объемом для отбора жидкостей.
' Наконечники одноразовые для пипеток переменного объема;
Инкубатор микропланшетный (термостат) или термостатируемый шейкер - (42,0 ± 1,0) “С или  
(37,0 ± 1,0) “С.
Устройство для промывания планщетов (вощер);
Микропланшетный ридер (анализатор иммунологический) (фильтры 450 нм и 620-680 нм)
Бумага фильтровальная лабораторная;
Перчатки медицинские;
Для постановки ИФА в автоматическом режиме - любая модель ИФА-анализаторов открытого  
типа
УШ. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ
Сбор образцов крови проводить в соответствии с текущей практикой методом венопункции. Для 
анализа использовать неразведенную сыворотку\плазму. Во избежание гемолиза нужно как можно  
быстрее отделить плазму от эритроцитов или сыворотку от сгустка. Образцы, содержащие агрегаты или 
осадок, осветлять центрифугированием при 1000-2000 об/мин (15 мин, 2-8 °С).
Жидкие препараты крови исследовать неразведенными; лиофильно высушенные препараты крови 
перед исследованием развести в соответствии с инструкцией по применению данного препарата.
Образцы можно хранить в соответствии с требованиями существующих нормативных документов. 
Длительное хранение допустимо при температуре не выше минус 20 °С (замораживание\оттаивание не 
более 3 раз). Во избежание осаждения фибрина плазму размораживать в течение нескольких минут при 
температуре (39,0 ± 1,0) °С на водяной бане.
IX. ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ
1. Реагенты, готовые к применению:
• Иммуносорбент. Каждый планшет, состоящий из 12 стрипов, упакован в фольгированный  
пакет. Вскрыть фольгированный пакет и вынуть планшет.
• К- , К}+, Кг+ (при комплектации набора жидким Кг+), РРК-1, РРК-2, АНТИ-НВ8-ПЛЮС,  
АНТИ-НВ8-МИНУС, Стоп-реагент (0,2 моль/л), ТМБ-Субстратный раствор (при комплектации  
набора ТМБ-Субстратным раствором).
Перед использованием флаконы с реагентами перемешать, не допуская вспенивания.
2. Реагенты, требующие предварительного приготовления
• Рабочий промывочный раствор (ПР). Содержимое флакона с концентратом ПР (х25)  
тщательно перемешать. Необходимый объем концентрата развести в 25 раз соответствующим объемом 
воды дистиллированной или деионизированной (см. табл. № 2 и 3) и тщательно перемешать. Хранить в 
чистой плотно закрытой емкости не более 14 сут. при температуре от 18 до 25 °С или не более 28 сут.  
при температуре от 2 до 8 °С.
• Рабочий раствор Конъюгата-1. Концентрат Конъюгата-1  развести в 11 раз раствором РРК-1 
(см. табл. 2 и 3), осторожно перемешать, не допуская вспенивания. Хранить не более 12 ч в  
защищённом от света месте при температуре от 18 до 25 °С.
• Рабочий раствор Конъюгата-2. Концентрат Конъюгата-2 развести в 11 раз раствором РРК-2 
(см. табл. 2 и 3), осторожно перемещать, не допуская вспенивания. Хранить не более 12 ч в  
защищённом от света месте при температуре от 18 до 25 °С.
• Контрольный слабоположительный образец (Кг+) (при комплектации набора  
лиофилизированным К 2+). Содержимое флакона растворить в объеме воды дистиллированной или  
деионизированной, указанном на этикетке. Осторожно перемешать и выдержать до использования  
5-10 мин. Хранить не более 6 ч при температуре от 18 до 25 °С.
• Субстратная смесь (СС). Концентрат ТМБ развести в И раз раствором СБ и тщательно  
перемешать. Хранить не более 10 ч в защищённом от света месте при температуре от 18 до 25 °С в  
химически чистых флаконах или специальной емкости, предназначенной для постановки ИФА на  
автоматических анализаторах.
6


--- стр. 7 ---
Таблица 2
1 Количество  
1  используемых 
1  стрипов/лунок
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1лунка
Ьбочий 
1 ПР
ПР (х 25), мл 3.0 6,0 9,0 12,0 15,0 18,0 21,0 24,0 27,0 30,0 33,0 40,0 0,2
Вода, мл 72,0 144,0 216,0 288,0 360,0 432,0 504,0 576,0 648,0 720,0 792,0 960,0 4,8
пбочий
раствор
виъюгата-
1
Конъюгат- 
1,2 (х И), мл 0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30 0,35 0,40 0,45 0,50 0,55 0,7 0,005
РРК-1,2,мл 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0 5,5 7,0 0,05
' СС
ТМБ, мл 0.1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 1,1 1,2 0,01
СБ, мл 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 8,0 9,0 10,0 11,0 12,0 0,1
II Хранение неиспользованных реагентов:
После вскрытия флаконов оставшиеся не использованными жидкие компоненты набора плотно 
Ьакрыть винтовыми крышками и хранить в упаковке производителя в течении срока годности тест- 
системы при температуре от 2 до 8 “С.
После вскрытия неиспользованные стрипы Иммуносорбента без рамки поместить в  
фольгированный пакет (не удаляя силикагель!) и тщательно герметизировать. Для этого край пакета 
следует свернуть 2-3 раза и закрепить, надев сверху скрепку для фольгированного пакета, или поместить 
фольгированный пакет со стрипами в полиэтиленовый пакет с замком 2 1р-Ьоск.
После первого вскрытия пакета Иммуносорбент стабилен в течение срока годности тест-системы 
при температуре от 2 до 8 °С, при условии соблюдения герметизации.
X. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Перед использованием набор выдержать 30 мин при комнатной температуре.
Возможны четыре альтернативные процедуры инкубации планшета. Очень важно, чтобы  
каждый этап постановки реакции осуществлялся по одной и той же процедуре. Сочетание  
процедур инкубации не допускается.
Проведение ИФА при ручной постановке:
^<1^едура
Э тап П р о ц е д ур а 1 П р о ц ед ур а 2 П р о ц ед ур а 3 П р о ц е д ур а 4
1.1 Внести в лунки планшета по 100 мкл контрольных и исследуемых образцов.
1 -2 стрипа: 2 лунки - К-, 1  лунка - К]+, 2 лунки - Кг+ .
3 стрипа и более: 4 лунки - К-, 1  лунка - К[+, 3 лунки - К2+.
*Кг+ используют для контроля чувствительности тест-системы. При дробном  
использовании планшета достаточно однократной постановки К2+.
1.1. Для постановки подтверждающего теста
льных и исследуемых образцов. 
- К2+.
Внести в лунки планшета по 100 мкл контро 
2 стпипа: 4 л у н к и  - К-. 3 л у н к и  - К|+, 1 лунка
3 стрипа и более: 5 лунок - К-, 3 лунки - К[+, 2 лунки - К2+ .
*К2+ используют для контроля чувствительности тест-системы. При дробном  
использовании планшета достаточно однократной постановки Кг+.
В остальные лунки внести по 100 мкл повторно реактивных образцов, каждый образец  
внести в 2 лунки планшета.
В одну лунку с К-, КД и каждым исследуемым образцом внести АНТИ-НВз-МИНУС.
В другую лунку с К-, К]+ и каждым исследуемым образцом внести АНТИ-НВз-ПЛЮС. 
АНТИ-НВз-МИНУС и АНТИ-НВя-ПЛЮС внести по 25 мкл в лунки Иммуносорбента.
2 Планшет покрыть крышкой или защитной 
плёнкой и выдержать в термостате: См. пункт 3.
30 мин
(42,0 ± 1,0) °С
60 мин
(37,0 ± 1,0) °С
3 Не удаляя содержимое лунок и не промывая планщет, во все лунки внести пипеткой  
по 50 мкл рабочего раствора Конъюгата-1. При этом, содержимое лунок изменяет свой цвет 
с зеленого на серый. Допускается изменение цвета раствора в лунке на ярко-желтый, если 
тестируемый образец имеет кислое значение рН.
При добавлении Конъюгата-1 не допускать заноса образца из одной лунки в другую через  
наконечники.  Содержимое лунок тщательно перемешать осторожным постукиванием по  
краям планшета.


--- стр. 8 ---
11
1
Планшет покрыть крышкой или защитной 
плёнкой и выдержать в термостате:
Планшет без крышки или защитной плёнки
выдержать в термошейкере при 500 об/мин:
45 мин
(42,0 ± 1,0) °С.
60 мин
(37,0 ± 1,0) °С.
40 мин
(42,0 ± 1,0) °С.
60 мин
(37,0 ± 1,0) °С.
Не удаляя содержимое лунок и не промывая планшет, во все лунки внести пипеткой  
по 50 мкл рабочего раствора Конъюгата-2.
При добавлении Конъюгата-2 не допускать заноса образца из одной лунки в другую через  
наконечники.  Содержимое лунок тщательно перемешать осторожным постукиванием по  
кпаям планшета.
Планшет покрыть крышкой или защитной 
плёнкой и выдержать в термостате:
Планшет без крышки или защитной плёнки
выдержать в термошейкере при 500 об/мин:
45 мин
(42,0 ± 1,0) °С.
30 мин
(37,0 ± 1,0) °С
20 мин
(42,0 ± 1,0) °С.
30 мин
(37,0 ± 1,0) °С.
Г
||||111 |1
С помощью промывочного устройства удалить содержимое лунок и промыть планшет  
4 раза рабочим раствором ПР. Для этого осторожно внести рабочий ПР в лунки планшета 
до краев (не менее 380 мкл в лунку), выдержать 40 сек, затем удалить в емкость с  
дезинфицирующим раствором. Рекомендуется использовать автоматический  
микропланшетный вошер. Недостаточнее промывка мож ет неблагоприятно повлиять на  
точность анализа.  Удалить остатки влаги путем отстукивания по сложенной в несколько 
слоев фильтровальной бумаге.
|8 Во все лунки внести по 100 мкл субстратной смеси или готового к применению  
ТМБ - Субстратного раствора. Планшет выдержать 20 мин в защищенном от света месте 
при температуре от 18 до 25 “С.
9 Во все лунки внести по 150 мкл Стоп-реагента и через 2-3 мин провести учет результатов 
при 450/620-680 нм. Допустим учет результатов при одной длине волны - 450 нм.
При комплектации набора готовым к применению ТМБ-Субстратным раст вором учет  
результатов мож но проводить в течение 10 минут.
Примечание: При тестировании альбуминов рекомендуется использовать процедуру -  
термостатируемый шейкер, (42,0 ± 1,0) °С. Чувствительность набора при выявлении поверхностного  
антигена вируса гепатита В в альбуминах —  0,02 МЕ/мл.
Проведение ИФА в автоматическом режиме.
Таблица 3
Количество используемых стрипов 4
(только для комплекта № 1)
8
(только для комплекта № 1)
12
(целый
планшет)
Рабочий ПР ПР (х 25), мл 16,0 32,0 40,0
Вода, мл 384,0 768,0 960,0
Рабочий
раствор Конъюгата
Конъюгат-1,2 (х 11), мл 0,45 ^ 0,70 0,70
РРК-1,2,мл 4,5 7,0 7,0
СС ТМБ, мл 0,7 1,2 1,2
СБ, мл 7,0 12,0 12,0
• Включить анализатор и провести подготовку к работе согласно инструкции по эксплуатации  
анализатора**.
• Загрузить в анализатор компоненты тест-системы (планшеты, контрольные образцы, рабочие растворы в 
специальных контейнерах или емкостях).
• Загрузить в анализатор исследуемые образцы (не менее 300 мкл).
• Запустить программу проведения ИФА, адаптированную для данной тест-системы.
• По окончании анализа прибор вьщает протокол по результатам исследования, в котором дается  
характеристика каждого исследуемого образца и контрольных образцов К]+, Кг+ и К-.
• Результаты анализа учитывать, если значение ОП в лунке с контрольным положительным образцом (К1+) 
не менее 0,6, а среднее значение в лунках с контрольным отрицательным образцом (К-) не более 0,12. 
Далее учет результатов проводить согласно разделу XI..
**при отсутствии в программе промывающего устройства стандартных опций, таких как придонная и перекрёстная 
аспирация, регулировка позиций донной аспирации, скорости промывки и силы потока наливаемой жидкости, времени 
замачивания и времени аспирации, а также екорости встряхивания, во избежание получения не корректных результатов, 
допускается введение в процедуру дополнительной отмывки планшета.
• Далее учет результатов проводить аналогично раздела XI.
8


--- стр. 9 ---
грофотометрический контроль внесения с ы в о р о т о к  и  реагентов при постановке  
г-систеМы «ДС-ИФА-НВяАе-0.01» на автоматических ИФА-анализаторах:
Контроль внесения образца рекомендуется проводить при длине волны 450 нм, критерий;  
0П> 0,125.
Контроль внесения Конъюгата-1 рекомендуется проводить при длине волны 620 нм, критерий:  
ОП> 0,265.
Контроль внесения Конъюгата-2 рекомендуется проводить при длине волны 405 нм, критерий:  
ОП> 1,200.
Щ . УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
Результаты анализа учитывать, если значение ОП в лунке с К]+ не менее 0,6, а среднее значение в 
кнках с К- не более 0,12. Если одно из значений ОП К- выходит за этот предел, его следует исключить 
расчета среднего значения. Если исключению подлежат более одного значения ОП К-, то анализ  
1следует повторить. К2+ должен давать положительную реакцию.
ОПкрит. рассчитывается по формуле:
ОПкрит.= ОП К- ср+ А,
где А- коэффициент, определяемый методом статистической обработки результатов постановки 
IИФА на предприятии-изготовителе, величину которого указывают для каждой серии в инструкции по 
применению, вкладываемой в коробку с набором и в паспорте на серию данного набора***.
Исследуемые образцы расцениваются как отрицательные: если ОП образца < ОПкрит.
Исследуемые образцы расцениваются как положительные: если ОП образца > ОПкрит.
Первичнопозитивные образцы должны быть исследованы повторно в двух лунках. Если величина 
ОП образца в обеих лунках меньше ОП крит., то проба расценивается как негативная по ИВзА^. Если 
величина ОП образца в одной из лунок равна или больше ОПкрит., то данный образец должен быть  
протестирован в подтверждающем тесте, основанном на реакции нейтрализации.
*** «Для серии №________ величина коэффициента А= _____»
Для подтверждающего теста
Оценку валидности проведения теста по ОП К-, К1-1- и К2+ проводить как описано выше. Значения 
ОП в лунках с К- после внесения АНТИ-НВз-МИНУС и АНТИ-НВз-ПЛЮС должны быть ниже ОПкрит.
В подтверждающем тесте присутствие поверхностного антигена гепатита В (НВзАё) в  
исследуемых образцах и К1-1- определяется показателем нейтрализации - это соотношение значений ОП 
образца после нейтрализации и значений ОП образца до нейтрализации. Показатель нейтрализации '  
определяется по формуле:
ЮПк-ОПн1 х100%.
(ОПк -  ОП К-ср)
где ОПк - оптическая плотность образца после внесения АНТИ-НВз-МИНУС;
ОПн - оптическая плотность образца после внесения АНТИ-НВз-ПЛЮС;
ОП К-ср - среднее значение оптической плотности контрольного отрицательного образца.
Показатель нейтрализации ОП К1-1- должен быть > 50 %.
Образец считается положительным если показатель нейтрализации > 50 %.
Образцы с ОП > 1,0 могут не подвергаться нейтрализации в цельном виде. Рекомендуется такие  
образцы развести в 100 раз и более (до ОП< 1,0) рабочим раствором ПР и снова провести  
подтверждающий анализ.
Если после разведения образца ОПк > ОПкрит. и показатель нейтрализации >50 %, то образец  
признают положительным, содержащим НВ8А§ (результат подтверждается).
Если после разведения образца ОПк > ОПкрит., а показатель нейтрализации меньше 50 %, то  
образец признают отрицательным, не содержащим НВ5А§ (результат не подтверждается).
Если после разведения образца ОПк < ОПкрит., то образец признают отрицательным, не  
содержащим НВ8А§ (результат не подтверждается).