Наборы культуральных сред и реагентов диагностических in vitro к анализаторам бактериологическим АЛЬФРЕД 60 (ALFRED 60) и серии ЭйчБиЭль (HB&L), модели ЭйчБиЭль Урокватро (HB&L Uroquattro), ЭйчБиЭль Урокватро Лайт (HB&L Uroquattro Light) — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 9 ---
Жидкие бактериальные суспензии в фазе активной репликации, которые содержат
положительные по UR0-QU1CK скрининг тесту (кат.номер SI 390.900) флаконы или суспензии
полученные из изолированных колоний на чашках Петри.
Набор предназначен исключительно для применения с анализаторами HB&L.
О ПИ СА НИ Е Н А Б О Р А И ЕГО КО М П О Н ЕН ТЫ
• 60 флаконов с бульоном обогащения (серебряная алюминиевая пробка) для измерений пог
МакФарланду
• 60 флаконов для референсных образцов (золотая алюминиевая пробка) для
использования референсных образцов
Набор содержит материалы необходимые для проведения до 60 тестов на чувствительность.
Данные флаконы содержат 2 ml жидкого бульона обогащения, содержащего смесь
дегидратированных питательных сред свободных от микробной контаминации.
МЕРЫ П Р Е Д О С ТР О Ж Н О С ТИ
• Для профессиональной диагностики in vitro.
• Часть компонентов питательных сред имеет животное происхождение. Контроль
санитарного состояния животных не полностью гарантирует, что эти компоненты не
содержат каких-либо трансмиссивных патогенных агентов.
• Биологические образцы, бактериальные культуры должны рассматриваться как
потенциальные источники инфекции и обращение с ними должно проходить в соответствии
с национальными законами.
• Рекомендуется использовать средства индивидуальной защиты.
• Во избежание ухудшения показателей работы теста необходимо строго соблюдать
предписанные условия хранения.
• Перед использованием каждый флакон должен быть проверен на отсутствие видимых
повреждений. Не используйте флаконы с повреждениями или с помутнением или
изменением цвета содержимого.
• Не используйте реагенты после истечения их срока годности
• Не используйте реагенты с нарушенной упаковкой
• Обращайтесь осторожно с открытыми флаконами с серебряными крышками
инокулированными бактериальными суспензиями,
• Не используйте флаконы повторно
• Обращайтесь флаконами как с хрупким изделием.
• Избегайте брать флаконы руками ниже напечатанной линии.
т и п ОБРАЗЦА
УС Л О В И Я Х Р А Н Е Н И Я
Образцы:
Флаконы, содержащие баетериальную суспензию (флаконы из URO-QUICK скрининг кита) или
суспензии, приготовленные из изолированных колоний должны быть максимально быстро
исследованы и не должны подвергаться длительному содержанию при комнатной температуре.
Реагенты ;
--- стр. 10 ---
Набор должен храниться в темном месте при 4-30°С до истечения срока годности,
УТИЛИЗАЦ ИЯ О ТХ О Д О В
Утилизация отходов является ответственностью пользователя в соответствии с национальным
законодательством
М ЕТО Д И КА И С С Л Е Д О В А Н И Я ПРИ П РЯ М О М ТЕ С ТЕ НА Ч У В С ТВ И Т Е Л Ь Н О С ТЬ О Б РАЗЦ О В
М ОЧИ
1 - П О Д ГО ТО В КА П О Л О Ж И ТЕ Л Ь Н Ы Х О Б РА ЗЦ О В КУЛ Ь ТУР М О Ч И
Для каждого образцы, выявленного в качестве положительного образца мочевой культуры на
анализаторе HB&L, прежде всего необходимо проделать окраску по Граму для дифференциации
Грам-положительных бактерий от Грам-отрицательных и проверить является данная культура
монокультурой (чистой культурой), в случае полибактериальнйо культуры, необходимо проделать
субкультивирование для выделения колоний и проведения тестов на идентификацию и
чувствительность. В случае монокультуры, возможно непосредственное проведение теста на
чувствительность с использованием ACT наборов и правильных антибиотиков в соответствии с
характеристиками микроорганизма (Грам-положительный или Грам-отрицательный). Каждый
антибиотик инокулируется в соответствующий ACT флакон.
Образцы подходящие для прямого теста на чувствительность (монокультуры) инокулируются во
флаконы с ДОТ бульоном с использованием положительных уринокультуральных бульонов. Чтобы
оптимизировать и стандартизировать рабочую бактериальную концентрацию для теста на
антибиотикочувствительность рекомендуется проводить следующие процедуры с инокулумом:
а- И спол ьзование ф ункции М акФ арл анд А лертер, на анализаторах ALFRED60, HB&L с
версией программного обеспечения 1.1 А и выше.
Если эта функция активирована, прибор показывает уровень мутности МакФарланд
непосредственно в анализируемом образце. При достижении уровня 0.5-0.7 по МакФарланд, э.а
суспензия является готовой для последующего теста на чувствительность (следуйте инструкции
пользователя приборов),
Ь - И спол ьзование ту р б и д и м е тр и ческо го ридера , на анализаторах ALFRED60 с версией
программного обеспечения 1.2А и выше, HB&L с версией программного обеспечения 4.0А и
выше (DOS) или 1.0N и выше (Windows).
В этом случае возможно приготовление оптимизированной по МакФарланд суспензии
посредством разведения концентрированного материала или из изолированных колоний с
использованием функции турбидиметрии (следуйте инструкции пользователя приборов).
Эта методика может быть проделана во время или после культурального теста.
1 - О бразец в процессе и сследования;
a) В процессе работы анализатора выберите необходимую вам позицию образца в анализаторе и
подтвердите окончание анализа для этого образца.
b) По окончании анализа выберите свободную позицию и подтвердите старт режима
турбидиметрии (на дисплее прибора появиться функция турбидиметра).
c) Поставьте положительный флакон в указанную прибором позицию.
d) После того как уровень мутности образца будет посчитан, анализатор сообщит об объемах
разведения для получения бактериальной концентрации на уровне 0,5-0,7 по МакФарланд,
i^ iS .
--- стр. 11 ---
е) Для осуществления разведений бульона используйте флаконы из ACT МакФарланд кита
(кат.номер SI 912-SVR) (серебряная алюминиевая крышка). Во избежание образования пузырей
внутри флакона, используйте шприц, погружая иглу глубоко в содержимое флакона.
Надписи над рисункам и
П О Л О Ж И ТЕ Л Ь Н А Я КУЛ Ь ТУРА П О Д ГО ТО В КА О Б Р А З Ц А ПОСЛЕ
И С П О Л Ь ЗО В А Н И Я ТУР Б И Д И М ЕТР А
f) По окончании турбидиметрического считывания нажмите кнопку «exit» для получения резюме по
анализу уринокультуры.
1 - О бразец в конце исследования:
Начните работу с инокулумом с пункта Ь) предыдущего раздела.
3 - Процедура подгото вки образцо в для теста на аннтим и кр о бн ую чувствительность
изолированной колонии.
Для каждого кпинического образца, который может быть исследован в виде момнкультуры с
чашки Петри, возьмите 2 - 3 колонии и аспетически суспензируйте их во флаконе с культуральным
бульоном (из URO-QUICK скрининг кита) для последующей оценки роста.
При достижении фазы логарифмического роста бактерий (помутнение бульона), аккуратно
перенесите шприцем или пипеткой суспензию во флакон с серебряной алюминиевой крышкой из
AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-SVR) в количенстве, необходимом для получения
значения мутности 0,5-0,7 по МакФарланд (турбидиметрическое считывание проводят как описано
выше).
ЗАГРУЗКА О Б РА ЗЦ О В И П Р О Ц Е Д УР А Н А СТРО Й КИ
Подготовьте флаконы AST с бульоном обогащения (С), с голубыми алюминиевыми крышками для
исследования в количестве равном количеству антибиотиков для оценки чувствительности.
Каждый антибиотик имеет соответствующую цветовую кодировку и каталожный номер на флаконе.
Подготовьте необходимы для вас профиль антибиотиков и инокулируйте в каждый флакон (С) 100
мкл инокулума, приготовленного как описано выше (используйте и открывайте флаконы с
серебрянной алюминиевой крышкой при использовании турбидиметра или используйте
культуральные флаконы при использовании функции МакФарланд алертер) и затем инокулируйте
100 мкл растворенного антибиотика. Убедитесь что заполняемый уровень достиг отметки на
флаконе (С).
Следующий флакон из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-SVR) с золотой алюминиевой
крышкой инокулируют 100 мкл того же инокулума, подготовленного по инструкциям без
использования антибиотиков.
Этот флакон является референсным образцом для оценки бактериального роста; инокулируйте
0.1 mL образца без какого-либо антибиотика.
Надписи над рисункам и
ПИ П ЕТИ Р О В А Н И Е И Н О КУЛ УМ А П И П Е ТИ Р О В А Н И Е А Н ТИ Б И О Т И КО В
Надпись на левом рисунке:
Ф лакон A C T М акФ арл анд
Н адпись на правом рисунке:
Ф лакон с разведенны м натибиотиком
--- стр. 21 ---
ОБРАЗЦЫ (ЗА Б О Р И П О Д ГО ТО В КА )
Качество лабораторных исследований любых клинических образцов определяется качеством
самих образцов.
ЧИСТЫ Й ЗА Б О Р О Б Р А З Ц О В С РЕД Н ЕЙ П О РЦ И И М О ЧИ
Образец должен быть собран с использование стерильной техники забора, уменьшающей риск
контаминации.
Первая порция мочи не забирается для очистки уретры перед забором средней порции мочи.
М ЕШ КИ Д Л Я ЗА Б О Р А М О Ч И У Д ЕТЕЙ
Мешки для забора мочи у детей часто являются причиной ложноположительных результатов
вследствие контаминации.
Соответственно, только негативные культуры из данных мешков не требуют подтверждения, в
противном случае необходима перепроверка.
ЗАБО Р У Б О Л Ь Н Ы Х С П О С ТО Я Н Н Ы М И КА ТЕТЕ РА М И
Образцы мочи от пациентов с постоянными катетерами осуществляют с использованием
стерильной методики забора мочи при помощи иглы, пропускаемой через катетер или
специальной пункгабельной диафрагмы, внедренной в катетер.
Моча в коллекционный мешок может поступать контаминированной через дренажное отверстие и
не должна использоваться.
Предпочитетельно забирать образцы мочи для культивирования после установки нового катетера
для того чтобы избежать контаминации. Принимая во внимание высокий уровень медленно
растущих бактерий {Pseudomonas) этот тип образцов рекомендуется исследовать исключител* нов
режиме стандартного режима программного обеспечения и устанавливать время исследования не
менее чем в течении 4 часов.
ЗАБ О Р М О Ч И И Т Р А Н С П О Р ТН Ы Е УС Т Р О Й С ТВ А С К О Н С ЕРВ А Н Т А М И
Несмотря на то, что транспортные устройства с консервантами могут способствовать росту
микроорганизмов также возможно исследование этих образцов с использованием специального
модуля программного обеспечения (см. руководство пользователя) по методике описанной ниже.
Перед исследованием необходимо запросить компанию Алифакс о подтверждении совмести
устройств для забора и транспортировки с оборудованием.
М ЕТО Д И КА И С С Л ЕД О В А Н И Я
1. Разведение л и о ф ил изи р о в ан н о й бактерии
1.1. Добавьте раствор для разведения (бульон обогащения) во флакон с лифилизатом.
1.2. Закройте и аккуратно перемешайте.
1.3. Инкубируйте при 37°С 5-7 часов.
2. Подготовка разведений
2.1. Перенесите 1 ml разведенного лиофилизата в каждый флакон с бульоном для разведения, что
будет достаточно для проведения 30 РАА тестов.
2.2. В случае, если флаконы не используются сразу же они должны быть заморожены при -кО "С
не более чем на 30 дней.
1 ^ ^
--- стр. 22 ---
3. Инокулирование, З агрузка в прибор и провед ение теста
В случае, если флаконы используются сразу же после разведения проделайте методику как это
описано в п, 3.1. В случае, если они были заморожены, разморозьте их термостате (с водяной
рубашкой) при 37 °С в течении 30 мин или в суховоздушном термостате при 37 °С в течении 45
мин. перед использованием.
Образцы мочи должны быть инокулированы в максимально короткое время после забора (не
более 2 часов) или храниться в холодильнике при 4 °С не более 24 часов.
Образцы собранные с применением консервантов должны быть исследованы в течение 24 часов.
Просьба строго следовать последовательности действий описанной ниже:
3.1 . М етодика работы на приборе HB&L
3.1.1 После маркировки образцов на белой наклейке поставьте флаконы УРО-КВИК СКРИНИНГ
КИТА и УРО-КВИК РАА КИТА в штатив для диспенсирования, в позиции, соответственно 1-15 и 16-
30.
3.1.2 Достаньте полоски фильтровальной бумаги и положите их на штатив.
3.1.3 Инокулируйте 0,2 ml бульона разведения в каждый флакон с красной крышкой (позиции 16-
30).
3.1.4 Замените полоски фильтровальной бумаги.
3.1.5 Затем, инокулируйте флаконы с зеленой крышкой (из УРО-КВИК СКРИНИНГ КИТА) и
соответствующие флаконы с красной крышкой (из УРО-КВИК РАА КИТА) мочой из одного и T O t о же
образца (0,5 ml), меняя наконечники для пипетки перед инокулированием каждого последующего
образца. В случае, если образцы мочи забирались и транспортировались с использованием
консерванта заливайте 0,2 ml.
3.1.6 Флаконы с зеленой крышкой (из УРО-КВИК СКРИНИНГ КИТА) должны быть поставлены в
анализатор в позиции с 1 по 30.
3.1.7 Флаконы с красной крышкой (из УРО-КВИК РАА КИТА) ставятся в анализатор в позиции с 31
по 60.
ВНИМ АНИЕ: И нокул ир ованны е ф лаконы дол ж ны бы ть загруж ены в прибор нем едленно
после пипетиро вания во избеж ание неправил ьного подсчета прибор бактериал ьно го роста.
3.1.8 П р оцедура загрузки
Следуйте указаниям на дисплее прибора в программе UQ RAA;
S creening vials
(И ссл ед уем ы е ф лаконы )
RAA vials
(РАА ф лаконы )
1 31
2 32
etc etc
В случае, если образцы мочи забирались и транспортировались с использованием консерванта
следуйте указаниям в программе для БОРНОЙ КИСЛОТЫ.
3.1.9 Процедура теста
Начните анализ также следуя указаниям на дисплее прибора в программе UQ RAA.
3.2 М етодика работы на приборе А л ьф ред 60
3.2.1 Выберите программу для РАА теста.
--- стр. 23 ---
3.2.2 Поместите неинокулированные флаконы УРО-КВИК во внутрь считывающего устройства в
начальной фазе самопроверки прибора (см. Руководство пользователя).
Флаконы с зеленой крышкой (из УРО-КВИК СКРИНИНГ КИТА) помещают во внутрь считывающего
устройства в позиции с 1 по 30, Флаконы с красной крышкой (из УРО-КВИК РАА КИТА) помещают
во внутрь считывающего устройства в позиции с 31 по 60.
3.2.3 Загрузите пробирки с первичным образцом (максимум 30) в карусель для образцов.
3.2.4 Загрузите флакон с бульоном для разведения соответствующую позицию.
3.2.5 Инокулирование образцов мочи и приготовление разведений начнется автоматически
(см.Руководство пользователя),
3.2.6 В случае необходимости установите в программе процедуры для бороной кислоты.
3.2.7 В конце анализа прибор попросит вынуть проанализированные флаконы,
РЕЗУЛ ЬТАТЫ
По завершению анализа (через 2-4 часа), выдаются результаты как по анализу культуры, так и по
РАА,
Образец распечатки:
Sam ple п° №
образца
V iable co u n t
Р езул ьтат подсчета
ж и зн есп о со бн ы х бактерий
R.A.A.
Р.А.А.
1 >1Е07 KOE/ml — негативный
2 негативный ++ позитивный
3 негативный +- неопределенный
4 1Е05 KOE/ml ++ позитивный
Для дальнейших инструкций см,Руководство пользователя!.
КО НТРО Л Ь КА Ч Е С ТВ А
Для валидирования результатов РАА теста возможен контроль роста разведенной суспензии
лиофилизата Staphylococcus epidermidis как это описано в п.З, но с использованием стерильной
дистиллированной воды вместо мочи.
Минимальный возможный ожидаемый рост более 1,000,000 К0Е/т1.
О ГРАНИ Ч ЕНИ Я М ЕТО Д И КИ
Образцы с высокой степенью мутности обнаруживаются анализатором.
Остаточная антимикробная активность определяется для образцов мочи с количеством бактерий <
1,000,000 К0Е/т1. Для образцов мочи с большими показателями КОЕ, РАА расценивается
автоматически как негативная,
ХА РА КТЕР И С ТИ КИ
НАТИВНАЯ МОЧА: было исследовано 225 образцов нативной мочи на анализаторе ALFRED 60 в
референсной микробиологической лаборатории с использованием в качестве контрольного
метода ручной методики РАА на чашках Петри с культурой чувствительных бактерий {Bacillus
Subtilis).
Были получены следующие результаты:
Чувствительность: 86,1 % Специфичность: 64,2%
Прогнозируемый процент положительных: Прогнозируемый процент отрицательных: 81,4
--- стр. 34 ---
МЕРЫ П Р Е Д О С ТР О Ж Н О С ТИ
Только для профессиональной диагностики in vitro.
Необходимо осторожно обращаться с лиофилизатом антибиотика: избегать попадания
вовнутрь, вдыхания, контакта с кожей, глазами и одеждой. Избегайте длительного
контакта.
Некоторые из компонентов питательных бульонов имеют животное происхождение.
Достоверное знание об источниках происхождение мяса животных и его санитарном
состоянии не гарантирует отсутствия трансмиссивных патогенных агентов. Тем не менее,
рекомендовано обращаться сданными продуктами, как с потенциально инфицированными
и, соответственно соблюдать предписанные меры предосторожности.
Необходимо использование всех предосторожностей, применяемых при работе с
потенциально инфекционными продуктами.
Биологические образцы, бактериальные культуры должны рассматриваться как источники
потенциальной инфекции и в отношении их должны соблюдаться меры предосторожности
в соответствии с национальными законами.
Рекомендуется использовать средства индивидуальной защиты.
Чтобы избежать нарушения качества реагентов, тщательно соблюдайте условия их
хранения.
Перед использованием каждая упаковка должна быть проверена на отсутствие видимых
повреждений.
Не используйте флаконы с повреждениями упаковки, признаками помутнения или
изменения цвета.
Не используйте реагенты после окончания срока годности.
Обращайтесь осторожно с открытыми флаконами с серебряной крышкой с
бактериальными суспензиями.
Не используйте флаконы с бульоном обогащения повторно.
Обращайтесь с флаконами как с хрупкими предметами.
Не прикасайтесь к флаконам с бульоном обогащения ниже отмеченной на них линии.
Используйте штатив для того, чтобы избежать разливания жидкостей в процессе
пипетирования или транспортировки.
УСЛ О В И Я Х Р А Н Е Н И Я
Образцы ;
Флаконы, содержащие бактериальные суспензии для тестирования (флаконы из URO-QUICK
скрининг кита) или приготовленные из изолированных колоний, должны быть быстро исследованы
с одновременным охлаждением, чтобы избежать длительного пребывания при комнатной
температуре перед исследованием.
Реагенты :
Флаконы с лиофилизированными антибиотикамидолжны содержаться в темном месте при
2-8°С, до окончания срока годности, указанной на упаковке.
Раствор для разведения должен храниться в холодильнике при 2-8°С, до окончания срока
годности, указанной на упаковке.
- Флаконы с бульоном обогащения должны храниться при 4-30 °С до окончания срока
годности.
--- стр. 35 ---
Разведенный антибиотик должен храниться в холодильнике при 2-8°С в темноте до 7
дней.
Раствор для разведения , после первого открывания должен храниться при 2-8 °С, до
окончания срока годности, указанной на упаковке.
УТИ Л И ЗА Ц И Я О ТХО Д О В
Утилизация реагентов образцов, растворов для разведения и отходов является ответственностью
пользователя, в соответствии с требованиями национальных законов.
М ЕТО Д И КА Р А З В Е Д Е Н И Я А Н ТИ Б И О Т И КА
Разведите одновременно и в соответствии с вашими потребностями Реагент (А) и Реагент (В)
следующим образом;
1 . Отройте раствор реагента (В), и используя микропипетку добавьте 1000 pL этого раствора во
флакон с лиофилизированным антибиотиком, также предварительно открытому.
2. Аккуратно перемешайте. Это количество разведенного антибиотика позволяет произвести 6
тестов; в случае необходимости в дальнейших тестах повторите вышеописанную процедуру.
3. Используя полученный раствор антибиотика проведите тесты; оставшийся реагент (В) должен
храниться при 2-8°С, в темном месте, не более 7 дней (напишите на этикетке флакона дату
истечения годности,
4. Перед использованием дайте флакону постоять несколько минут при комнатной температуре
или приготовьте новый раствор как это описано в п.1.
П редупреж дения:
Жидкий компонент для разведения специфичен для данного антибиотика.
М ЕТО Д И КА Д Л Я П Р Я М О ГО Т Е С Т А НА А Н Т И Б И О Т И К О Ч У В С Т В И Т Е Л Ь Н О С Т Ь
УРИ Н О КУЛ Ь ТУРЫ
1 - П О Д ГО ТО В КА П О Л О Ж И ТЕ Л Ь Н О ГО О Б Р А З Ц А У Р И Н О КУ Л Ь ТУ Р Ы
Для каждого образца, определенного как положительный на анализаторах HB&L UROQUATTRO
или ALFRED60, необходимо прежде всего проделать окраску по Г раму, для дифференциации
Грам+ от Грам- и для проверки чистоты культуры. В случае полибактериальной культуры,
проведите субкультивирование для выделения колоний и проведения тестов на идентификацию и
чувствительность. В случае монокультуры, возможно непосредственное проведение теста на
антибиотикочувствительности с использованием AST кита и выбор надлежащего антибиотика в
соответствии с характеристиками микроорганизма (Грам+ или Грам-). Каждый антибиотик
инокулируется в соответствующий AST флакон.
Образцы для прямого тестирования антибитикочувствительности (монокультура) инокулируют во
флакон с AST бульоном, используя положительные бульонный уринокультуры.
Чтобы оптимизировать и стандартизировать рабочую бактериальную концентрацию для теста на
антибитикочувствительность, производят следующие операции:
а- И спол ьзование ф ункции М акФ арл анд алертер, на анализатора ALFRED60, HB&L
UROQUATTRO с программным обеспечением Version 1.1А и выше.
Если эта функция используется, прибор показывает степень мутности МакФарланду
1непосредственно в анализируемом образце в процессе теста. При достижении степени мутности
0.5-0.7 суспензия считается готовой для проведения теста на антибиотикочувствительность
(следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
--- стр. 36 ---
b - И спол ьзование тур би д и м етр а, на приборе ALFRED60 с программным обеспечением Version
1.2А и выше, HB&L UROQUATTRO с программным обеспечением Version 4.0А и выше (DOS) или
1.0N и выше (Windows).
Возможно приготовление суспензий оптимизированных по МакФарлнад методом разведения
более концентрированного материала или из изолированных колоний, с использованием
турбидиметра (следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Следующая методика делается вовремя или после культурального теста:
1 ~ О бразец в п роцессе анализа:
a) Когда анализ еще в процессе, выберите позицию образца и подтвердите окончание анализа для
данного образца.
b) По окончании анализа, выберите свободную позицию и подтвердите режим турбидиметра
(функция турбидиметра появляется на экране),
c) Поставьте флакон с положительным образцом в указанную прибором позицию.
d) После получения турбидиметром значения степени мутности, прибор сообщит необходимые
для разведения объемы для получения бактериальной концентрации для получения
бактериальной концентрации в пределах 0,5-0,7 по МакФарланд.
e) Для проведения разведений бульона используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-SVR). Для предотвращения образования
пузырьков внутри флакона, используйте шприц, погружая иглу глубоко в жидкость в пузырьке.
П О Л О Ж И ТЕ Л Ь Н А Я КУЛ Ь ТУРА
ПО Д ГО ТО ВКА О Б Р А З Ц О В ПО СЛ Е С Ч И ТЫ В А Н И Й Т У Р Б И Д И М Е ТР А
f) По окончании сеанса турбидиметрии нажмите кнопку «exit» для получения резюме анализа
уринокультур.
2 - О бразец в конце анал иза:
Начните работу с инокулумом, начиная с пункта Ь) в предыдущем параграфе.
3 - П роцедура под гото вки образцо в для теста на антим и кробную чувствительность из
изолированной колонии.
Для каждого клинического образца из которого получена монокультура на чашке Петри, возьмите
2 - 3 колонии и асептически суспензируйте их во флаконе с культуральным бульоном из URO-
QUICK SCREENING кита, чтобы получить рост в бульоне.
При достижении логарифмической фазы роста бактерий (помутнение бульона), осторожно
перенесите шприцом или пипеткой во флаконы с серебряной алюминиевой крышкой из AST
МакФарлнад кита (кат.номер SI 912-SVR) количество бактериальной суспензии необходимое для
получения степени мутности 0,5-0,7 по МакФарлнад (использование турбидиметра такое же, как
это описано выше).
ЗАГРУЗКА О Б Р А ЗЦ О В В П Р И Б О Р И П Р О Ц Е Д УР А НА С ТР О Й КИ
Подготовьте флаконы с голубой алюминиевой крышкой с AST бульоном обогащения (С), в
количестве, соответствующем количеству исследуемых антибиотиков.
Каждый антибиотик имеет соответствующий ему цвет и кодировку.
Подготовьте ваш профиль антибиотиков и инокулируйте в каждый флакон (С) 100 ml инокулума,
подготовленного, как это описано выше (используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой, если использовался турбидиметр или культуральный флакон, если использовалась
--- стр. 37 ---
функция оценки мутности по МакФарлнад) и затем инокулируйте 100 ml растворенного
антибиотика. Убедитесь, что уровень жидкости достиг линии нанесенной на флаконе (С).
Следующий флакон с золотой алюминиевой крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-
SVR) инокулируют 100 ml того же инокулума, приготовленного в соответствии с инструкциями
выше, без антибиотиков.
Данный флакон является референсным образцом для оценки бактериального роста: инокулируйте
0.1 mL образца без какого-либо антибиотика.
Предупреждения:
Каждый антибиотик идентифицируется по своему собственному цвету флакона или коду,
набираемому на клавиатуре или кнопкой на экране. Цвет или код указаны на следующих
компонентах набора:
(А) Флакон с лиофилизированным антибиотиком, (В) Жидкость для разведения антибиотика, (С)
60 флаконов с бульоном обогащения.
Ф лакон с ф о сф о м иц и но м им еет этикетку с кодом FOS.
В соответствии с потребностями пользователя, возможно набрать необходимую панель
антибиотиков для Грам+ или для Грам- используя программное обеспечение прибора..
При загрузке каждого флакон (С) в прибор следуйте инструкциям, появляющимся на экране.
Схема, представленная ниже в графической форме, показывает процедуру загрузки и
программирования.
Образцы инокулированные с использованием скринингового бульонного теста уринокультур или
бактериальными культурами из изолированных колоний, в соответствии с выше описанными
процедурами разведения, загружаются в прибор. Результаты будут получены через 3 часа.
При завершении анализа через 3 часа, результаты выдаются в виде процента резистентных (R)
или чувствительных (S) для каждого исследованного антибиотика, в сравнении с референсными
значениями.
Пример отчета по ф о сф ом иц и ну.
Перед клиническим использованием реком ендуется и скл ю чить инф екцию вы званную
P .aerogionsa и P .s tu a rtii
Валидирование инокулум а :
Стандартизация инокул ум а явл яется важны м ф актором провед ения теста на
чувствтител ьность.
Чтобы пол учить корр ектны е показатели при использовании A S T -Ф О С Ф О М И Ц И Н кита,
рекомендуется провер ить реф еренсны е значения инокулум а образца.
Значения инокулум а дол ж ны бы ть > 700.000 KOE/m L, в том случае, если они ниже прибор
вы даст соо бщ ение “ N V ” (Not valid). В этом случае тест д ол ж ен бы ть проделан повторно.
Процентные значения группируются по категориям S = Чувствительный , I = Промежуточный , R =
Резистентный.
S 1 R
S Percentage 100-65% 65-50% 50-0%
R Percentage 0-35% 35-50% 50-100%
ВНУТРЕННИМ КО Н ТР О Л Ь КА Ч ЕС ТВ А
--- стр. 38 ---
Для оценки стандартизации и контроля качества получаемых результатов проводят процедуры
при помощи штаммов АТСС. Частота и модальность сессий контроля качества является
ответственностью пользователя и производится в соответствии с существующими в стране
рекомендациями.
Вследствие существующих особых ростовых характеристик образцов, подвергавшихся
процедурам стабилизации и презервации, время исследования антибиотикочувствительности для
таких образцов удлиняется до 5 часов.
Escherichia соИ АТСС 25922 Staphylococcus aureus АТСС
29213
Ожидаемые результаты S S
О ГРА Н И Ч ЕН И Я М Е ТО Д И КИ
• Для прямой оценки чувствительности: время проведения теста существенно удлиняется,
т.к. культуральный тест может оказывать влияние на характеристики образца.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: проведение теста со старыми
колониями с чашек может влиять на результаты теста.
• Длительные паузы между этапами работы (от приготовления инокулума до загрузки в
прибор) могут влиять на результаты.
• Для прямой оценки чувствительности: могут быть исследованы только образцы,
предварительно отобранные по окраске по Граму, для исключения полимикробного
роста.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: инокулум, полученный путем
смешивания разных изолированных колоний или из слабо изолированных колоний может
влиять на результаты.
О Ж И Д А ЕМ Ы Е РЕ ЗУЛ Ь ТА ТЫ
Принимая во внимание, что бактериальная резистентность может варьировать в разных
географических зонах, ожидаемые результаты прямо зависят от локальной микробной экологии
(Виды /Механизмы резистентности).
ПО КА ЗА ТЕЛИ Ч У В С ТВ И Т Е Л Ь Н О С ТИ ПРИ ПРЯХ Т Е С Т А Х В У Р И Н О К У Л Ь Т У Р А Х
Показатели по AST-Фосфомицину оценивались с использованием положительных образцов мочи,
содержавших следующие виды :
Escherichia spp. Proteus spp. Staphylococcus spp.
Klebsiella spp. Citrobacter spp.
Enterobacter spp. Morganella spp.
Эти образцы были получены из института микробиологии и параллельно тестировались
референсным методом Кирби-Бауэра после культивирования на чашках Петри.
УРО В Е Н Ь Д О С Т О В Е Р Н О С Т И
Уровень достоверности результатов, полученных при помощи референсного метода на 75
штаммах составлял 97,33% .
“Большая ошибка” и “очень большая ошибка” в процентном отношении составляли 0% и 1,33%
соответственно.
В О С П РО И ЗВ О Д И М О С ТЬ
--- стр. 39 ---
Уровни воспроизводимости в процентном отношении (чувствительные, промежуточные,
резистентные), полученные в 5 повторностях на 2-х бактериальных штаммах составлял 100%.
ALIFAX S.p.A.
via Petrarca 2/1 - 35020 Polverara (PD) - Italy
tel, +39 049 0992000
web site: www.alifax.com
e-mail: info@alifax.com
СП И С О К Л И ТЕ РА ТУРЫ
1) Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standard for Antimicrobial
Susceptibility Testing; Eighteenth Informational Supplement. Approved Standard CLSI
Document M l 00-S18, Vol. 28, No. 1, Winkler MA et al., January, 2008,
2) Jennifer M. Andrews, “ Determination of minimum inhibitory concentrations", Journal of
A n tim icro b ial C h em oth erapy (2001), 48, SuppI S1, 5-16
3) Livermore D.M., Winstanley T.G., Shannon K.P,, “ Interpretative reading: recognizing the unusual
and inferring resistance mechanisms from resistance phenotypes” , Jou rn al of A ntim icrobial
C h em oth erapy (2001), 48, SuppI S1, 87-102.
4) Chapin K.C, and Murray P.R. "Principles of Stains and Media". Murray P.R, et a l: M anual of
C linical M icrob iology, 8th edition, 258-261, ASM Press 2003
5) Jorgensen H.J. “ Selection Criteria for an Antimicrobial Susceptibility Testing System", Journal of
C linical M icrob iology Nov. 1993; 31(11): 2841-2844.
6) ROCEPHINl I package insert
7) Product R eferen ces :
8) S. Roveta, A. Marchese, E.A. Debbia (Microbiology Institute, Genoa University, Italy),
"Evaluation of the Antibiotic Susceptibility on 412 Pathogens Isolated from Severe Bacterial
Infections Employing the Uro-Quick System", Poster, ICAAC, W ash in g to n , 30 October - 2
November 2004.
9) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in Intensive care units using the Uro-
Quick System", Poster, AM CLI, Padova, 8-11 June 2004.
10) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test of Uropathogens using the Uro-Quick System directly on
urine", Poster, A S M , New O rleans, 23-27 May 2004.
1 1) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in ICU using the Uro-Quick System",
Poster, EC CM ID , Prague, 1-4 May 2004.
12) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, Universita di Genova),
“ Evaluation of the Uroquick, a new rapid automated system, for the detection of well-
characterized antibiotic-resistant bacteria” , Journal o f C h em o th erap y 2004 Apr; 16(2): 107-18.
13) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, University di Genova),
“ Esecuzione rapida di antibiogrammi su campioni di urine mediante sistema Uro-quick” , Poster,
National Congress SIM , Rom e, 19-21 October 2003.
--- стр. 43 ---
Необходимо осторожно обращаться с лиофилизатом антибиотика: избегать попадания
вовнутрь, вдыхания, контакта с кожей, глазами и одеждой. Избегайте длительного
контакта.
Некоторые из компонентов питательных бульонов имеют животное происхождение.
Достоверное знание об источниках происхождение мяса животных и его санитарном
состоянии не гарантирует отсутствия трансмиссивных патогенных агентов. Тем не менее,
рекомендовано обращаться сданными продуктами, как с потенциально инфицированными
и, соответственно соблюдать предписанные меры предосторожности.
Необходимо использование всех предосторожностей, применяемых при работе с
потенциально инфекционными продуктами.
Биологические образцы, бактериальные культуры должны рассматриваться как источники
потенциальной инфекции и в отношении их должны соблюдаться меры предосторожности
в соответствии с национальными законами.
Рекомендуется использовать средства индивидуальной защиты.
Чтобы избежать нарушения качества реагентов, тщательно соблюдайте условия их
хранения.
Перед использованием каждая упаковка должна быть проверена на отсутствие видимых
повреждений.
Не используйте флаконы с повреждениями упаковки, признаками помутнения или
изменения цвета.
Не используйте реагенты после окончания срока годности.
Обращайтесь осторожно с открытыми флаконами с серебряной крышкой с
бактериальными суспензиями.
Не используйте флаконы с бульоном обогащения повторно.
Обращайтесь с флаконами как с хрупкими предметами.
Не прикасайтесь к флаконам с бульоном обогащения ниже отмеченной на них линии.
Используйте штатив для того, чтобы избежать разливания жидкостей в процессе
пипетирования или транспортировки.
УСЛ О В И Я ХР А Н Е Н И Я
Образцы :
Флаконы, содержащие бактериальные суспензии для тестирования (флаконы из URO-QUICK
скрининг кита) или приготовленные из изолированных колоний, должны быть быстро исследованы
с одновременным охлаждением, чтобы избежать длительного пребывания при комнатной
температуре перед исследованием.
Реагенты:
- Флаконы с лиофилизированными антибиотикамидолжны содержаться в темном месте при
2-8°С, до окончания срока годности, указанной на упаковке.
Раствор для разведения должен храниться в холодильнике при 2-8°С, до окончания срока
годности, указанной на упаковке.
- Флаконы с бульоном обогащения должны храниться при 4-30 °С до окончания срока
годности.
Разведенный антибиотик должен храниться в холодильнике при 2-8°С в темноте до 7
дней.
--- стр. 44 ---
Раствор для разведения , после первого открывания должен храниться при 2-8 °С, до
окончания срока годности, указанной на упаковке.
У ТИ Л И ЗА Ц И Я О ТХО Д О В
Утилизация реагентов образцов, растворов для разведения и отходов является ответственностью
пользователя, в соответствии с требованиями национальных законов.
М ЕТО Д И КА РА ЗВ Е Д Е Н И Я А Н Т И Б И О Т И К А
Разведите одновременно и в соответствии с вашими потребностями Реагент (А) и Реагент (В)
следующим образом:
1. Отройте раствор реагента (В), и используя микропипетку добавьте 1000 pL этого раствора во
флакон с лиофилизированным антибиотиком, также предварительно открытому.
2. Аккуратно перемешайте. Это количество разведенного антибиотика позволяет произвести 6
тестов; в случае необходимости в дальнейших тестах повторите вышеописанную процедуру.
3. Используя полученный раствор антибиотика проведите тесты; оставшийся реагент (В) должен
храниться при 2-8°С, в темном месте, не более 7 дней (напишите на этикетке флакона дату
истечения годности.
4. Перед использованием дайте флакону постоять несколько минут при комнатной температуре
или приготовьте новый раствор как это описано в п.1.
Предупреж дения:
Жидкий компонент для разведения специфичен для данного антибиотика.
М ЕТО Д И КА Д Л Я П Р Я М О ГО Т Е С ТА НА А Н Т И Б И О Т И К О Ч У В С Т В И Т Е Л Ь Н О С Т Ь
УРИ Н О КУЛ Ь ТУРЫ
1 - П О Д ГО ТО В КА П О Л О Ж И ТЕ Л Ь Н О ГО О Б РА ЗЦ А УРИ Н О КУ Л Ь ТУ Р Ы
Для каждого образца, определенного как положительный на анализаторах HB&L UROQUATTRO
или ALFRED60, необходимо прежде всего проделать окраску по Граму, для дифференциации
Грам+ от Грам- и для проверки чистоты культуры. В случае полибактериальной культуры,
проведите субкультивирование для выделения колоний и проведения тестов на идентификацию и
чувствительность. В случае монокультуры, возможно непосредственное проведение теста на
антибиотикочувствительности с использованием AST кита и выбор надлежащего антибиотика в
соответствии с характеристиками микроорганизма (Грам+ или Грам-). Каждый антибиотик
инокулируется в соответствующий AST флакон.
Образцы для прямого тестирования антибитикочувствительности (монокультура) инокулируют во
флакон CAST бульоном, используя положительные бульонный уринокультуры.
Чтобы оптимизировать и стандартизировать рабочую бактериальную концентрацию для теста на
антибитикочувствительность, производят следующие операции:
а- И спол ьзование ф ункции М акФ арланд алертер, на анализатора ALFRED60, HB&L
UROQUATTRO с программным обеспечением Version 1.1А и выше.
Если эта функция используется, прибор показывает степень мутности МакФарланду
1непосредственно в анализируемом образце в процессе теста. При достижении степени мутности
0.5-0.7 суспензия считается готовой для проведения теста на антибиотикочувствительность
(следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Ж .
--- стр. 45 ---
b - И спол ьзование тур би д и м етр а, на приборе ALFRED60 с программным обеспечением Version
1.2А и выше, HB&L UROQUATTRO с программным обеспечением Version 4.0А и выше (DOS) или
1.0N и выше (Windows).
Возможно приготовление суспензий оптимизированных по МакФарлнад методом разведения
более концентрированного материала или из изолированных колоний, с использованием
турбидиметра (следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Следующая методика делается вовремя или после культурального теста:
1 - О бразец в процессе анализа:
a) Когда анализ еще в процессе, выберите позицию образца и подтвердите окончание анализа для
данного образца.
b) По окончании анализа, выберите свободную позицию и подтвердите режим турбидиметра
(функция турбидиметра появляется на экране).
c) Поставьте флакон с положительным образцом в указанную прибором позицию.
d) После получения турбидиметром значения степени мутности, прибор сообщит необходимые
для разведения объемы для получения бактериальной концентрации для получения
бактериальной концентрации в пределах 0,5-0,7 по МакФарланд.
e) Для проведения разведений бульона используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-SVR). Для предотвращения образования
пузырьков внутри флакона, используйте шприц, погружая иглу глубоко в жидкость в пузырьке.
П О Л О Ж И ТЕ Л Ь Н А Я КУЛ Ь ТУРА
ПО Д ГО ТО ВКА О Б Р А З Ц О В П О СЛ Е С Ч И ТЫ В А Н И Й ТУР Б И Д И М Е ТР А
f) По окончании сеанса турбидиметрии нажмите кнопку «exit» для получения резюме анализа
уринокультур.
2 - О бразец в конце анал иза:
Начните работу с инокулумом, начиная с пункта Ь) в предыдущем параграфе.
3 - Процедура под гото вки образцо в для теста на антим и кр о бн ую чувствительность из
и золированной колонии.
Для каждого клинического образца из которого получена монокультура на чашке Петри, возьмите
2 - 3 колонии и асептически суспензируйте их во флаконе с культуральным бульоном из URO-
QUICK SCREENING кита, чтобы получить рост в бульоне.
При достижении логарифмической фазы роста бактерий (помутнение бульона), осторожно
перенесите шприцом или пипеткой во флаконы с серебряной алюминиевой крышкой из AST
МакФарлнад кита (кат.номер 81 912-SVR) количество бактериальной суспензии необходимое для
получения степени мутности 0,5-0,7 по МакФарлнад (использование турбидиметра такое же, как
это описано выше).
ЗАГРУЗКА О Б Р А ЗЦ О В В П Р И Б О Р И ПР О Ц Е Д УР А НА С ТР О Й КИ
Подготовьте флаконы с голубой алюминиевой крышкой с AST бульоном обогащения (С), в
количестве, соответствующем количеству исследуемых антибиотиков.
Каждый антибиотик имеет соответствующий ему цвет и кодировку.
Подготовьте ваш профиль антибиотиков и инокулируйте в каждый флакон (С) 100 ml инокулуг.:а,
подготовленного, как это описано выше (используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой, если использовался турбидиметр или культуральный флакон, если использовалась
--- стр. 46 ---
функция оценки мутности по МакФарлнад) и затем ииокулируйте 100 ml растворенного
антибиотика. Убедитесь, что уровень жидкости достиг линии нанесенной на флаконе (С).
Следующий флакон с золотой алюминиевой крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-
SVR) инокулируют 100 ml того же инокулума, приготовленного в соответствии с инструкциями
выше, без антибиотиков.
Данный флакон является референсным образцом для оценки бактериального роста: инокулируйте
0.1 mL образца без какого-либо антибиотика.
Предупреждения:
Каждый антибиотик идентифицируется по своему собственному цвету флакона или коду,
набираемому на клавиатуре или кнопкой на экране. Цвет или код указаны на следующих
компонентах набора:
(А) Флакон с лиофилизированным антибиотиком, (В) Жидкость для разведения антибиотика, (С)
60 флаконов с бульоном обогащения.
Ц ипроф локсацин им еет серы й цвет.
В соответствии с потребностями пользователя, возможно набрать необходимую панель
антибиотиков для Грам+ или для Грам- используя программное обеспечение прибора..
При загрузке каждого флакон (С) в прибор15 следуйте инструкциям, появляющимся на экране.
Схема, представленная ниже в графической форме, показывает процедуру загрузки и
программирования.
Образцы инокулированные с использованием скринингового бульонного теста уринокультур или
бактериальными культурами из изолированных колоний, в соответствии с выше описанными
процедурами разведения, загружаются в прибор. Результаты будут получены через 3 часа.
При завершении анализа через 3 часа, результаты выдаются в виде процента резистентных (R)
или чувствительных (S) для каждого исследованного антибиотика, в сравнении с референсными
значениями.
Пример отчета по ципроф л оксацину.
Валидирование инокулума :
С тандартизация инокулум а явл яется важны м ф актором провед ения теста на
чувствтительность.
Чтобы получить корр ектны е показатели при и сп о л ьзовании! A S T -Ц ипро ф локсацин кита,
реком ендуется п ров ер ить реф еренсны е значения инокулум а образца.
Значения инокулум а дол ж ны бы ть > 700.000 KOE/m L, в том случае, если они ниже прибор
вы даст соо бщ ение “ N V ” (N ot valid). В этом случае те ст д ол ж ен бы ть проделан повторно.
Процентные значения группируются по категориям S = Чувствительный , I = Промежуточный , R =
Резистентный.
S 1 R
S Percentage 100-65 % 65-50% 50-0%
R Percentage 0-35% 35-50% 50-100%
ВН УТРЕННИ Й КО Н ТР О Л Ь КА Ч ЕС ТВ А
Для оценки стандартизации и контроля качества получаемых результатов проводят процедуры
при помощи штаммов АТСС. Частота и модальность сессий контроля качества является
--- стр. 47 ---
ответственностью пользователя и производится в соответствии с существующими в стране
рекомендациями.
Вследствие существующих особых ростовых характеристик образцов, подвергавшихся
процедурам стабилизации и презервации, время исследования антибиотикочувствительности для
таких образцов удлиняется до 5 часов.
Escherichia coll АТСС 25922 Staphylococcus aureus АТСС
29213
Ожидаемые результаты S S
О ГРАНИ Ч ЕНИ Я М ЕТО Д И КИ
• Для прямой оценки чувствительности: время проведения теста существенно удлиняется,
т.к. культуральный тест может оказывать влияние на характеристики образца.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: проведение теста со старыми
колониями с чашек может влиять на результаты теста.
• Длительные паузы между этапами работы (от приготовления инокулума до загрузки в
прибор) могут влиять на результаты.
• Для прямой оценки чувствительности: могут быть исследованы только образцы,
предварительно отобранные по окраске по Граму, для исключения полимикробного
роста.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: инокулум, полученный путем
смешивания разных изолированных колоний или из слабо изолированных колоний может
влиять на результаты.
О Ж И Д А ЕМ Ы Е РЕ ЗУЛ Ь ТА ТЫ
Принимая во внимание, что бактериальная резистентность может варьировать в разных
географических зонах, ожидаемые результаты прямо зависят от локальной микробной экологии
(Виды /Механизмы резистентности).
ПО КА ЗА ТЕЛ И Ч У В С Т В И Т Е Л Ь Н О С Т И ПРИ ПРЯХ Т Е С Т А Х В У Р И Н О К У Л Ь Т У Р А Х
Показатели по AST-Ципрофлоксацину оценивались с использованием положительных образцов
мочи, содержавших следующие виды :
Escherichia spp. Proteus spp. Staphylococcus spp.
Klebsiella spp. Citrobacter spp.
Enterobacter spp. Morganella spp.
Эти образцы были получены из института микробиологии и параллельно тестировались
референсным методом Кирби-Бауэра после культивирования на чашках Петри.
УРО В Е Н Ь Д О С Т О В Е Р Н О С Т И
Уровень достоверности результатов, полученных при помощи референсного метода на 82
штаммах составлял 92,68% ,
“Большая ошибка" и “очень большая ошибка” в процентном отношении составляли 2,44% и 2,44%
соответственно.
В О С П РО И ЗВ О Д И М О С ТЬ
Уровни воспроизводимости в процентном отношении (чувствительные, промежуточные,
резистентные), полученные в 7 повторностях на 2-х бактериальных штаммах составлял 100%.
--- стр. 48 ---
A LIFA X S.p.A.
via Petrarca 2/1 - 35020 Polverara (PD) - Italy
tel. +39 049 0992000
web site: www.alifax.com
e-mail: info@alifax.com
СП И С О К Л И ТЕ Р А ТУР Ы
1) Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standard for Antimicrobial
Susceptibility Testing; Eighteenth Informational Supplement, Approved Standard CLSI
Document M100-S18, Vol. 28, No. 1, Winkler MA et al., January, 2008.
2) Jennifer M. Andrews, “ Determination of minimum inhiibitory concentrations", Journal of
A n tim icrob ial C h em oth erapy (2001), 48, Suppi S1, 5-16.
3) Livermore D.M., Winstanley T.G., Shannon K.P., “ Interpretative reading: recognizing the unusual
and inferring resistance mechanisms from resistance phenotypes” , Jou rn al o f A ntim icrobial
C h em oth erapy (2001), 48, SuppI S1, 87-102.
4) Chapin K.C. and Murray P.R. “ Principles of Stains and Media". Murray P.R. et a l: IVIanual of
Clinical iVlicrobiology, 8th edition, 258-261. ASM Press 2003.
5) Jorgensen H.J. “ Selection Criteria for an Antimicrobial Susceptibility Testing System", Journal of
Clinical M icrob iology Nov. 1993; 31(11): 2841-2844.
6) Product R eferen ces :
7) S. Roveta, A. Marchese, E.A. Debbia (Microbiology Institute, Genoa University, Italy),
"Evaluation of the Antibiotic Susceptibility on 412 Pathogens Isolated from Severe Bacterial
Infections Employing the Uro-Quick System", Poster, ICAAC, W ash in g to n , 30 October - 2
November 2004.
8) S. Roveta, F. Cavaliini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in intensive care units using the Uro-
Quick System", Poster, AM CLI, Padova, 8-11 June 2004.
9) S. Roveta, F. Cavaliini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test of Uropathogens using the Uro-Quick System directly on
urine". Poster, ASM , New O rleans, 23-27 May 2004.
10) S. Roveta, F. Cavaliini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in ICU using the Uro-Quick System",
Poster, EC CM ID , Prague, 1-4 May 2004.
11) S, Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, Universita di Genova),
“ Evaluation of the Uroquick, a new rapid automated system, for the detection of well-
characterized antibiotic-resistant bacteria", Journal o f C h em o th erap y 2004 Apr; 16(2): 107-18.
12 ) S, Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, University di Genova),
“ Esecuzione rapida di antibiogrammi su campioni di urine mediante sistema Uro-quick", Poster,
National Congress SIM , Rom e, 19-21 October 2003.
13) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, University di Genova), “ The "ro-
Quick System for the Identification of Well-chracterized Antibiotic-resistance Strains” ,
M icrobiologia M edica, vol. 18, № I, 2003, p. 49-55
--- стр. 52 ---
Пластиковый или полистереновый штатив для флаконов поставляется производителем по
требованию только в случае использования турбидиметра.
- 60 одноразовых шприцев для работы с бульоном обогащения при получении необходимой
степени мутности по шкале МакФарлнад.
МЕРЫ П Р Е Д О С ТР О Ж Н О С ТИ
Только для профессиональной диагностики in vitro.
Необходимо осторожно обращаться с лиофилизатом антибиотика: избегать попадания
вовнутрь, вдыхания, контакта с кожей, глазами и одеждой. Избегайте длительного
контакта.
Некоторые из компонентов питательных бульонов имеют животное происхождение.
Достоверное знание об источниках происхождение мяса животных и его санитарном
состоянии не гарантирует отсутствия трансмиссивных патогенных агентов. Тем не менее,
рекомендовано обращаться сданными продуктами, как с потенциально инфицированными
и, соответственно соблюдать предписанные меры предосторожности.
Необходимо использование всех предосторожностей, применяемых при работе с
потенциально инфекционными продуктами.
Биологические образцы, бактериальные культуры должны рассматриваться как источники
потенциальной инфекции и в отношении их должны соблюдаться меры предосторожности
в соответствии с национальными законами.
Рекомендуется использовать средства индивидуальной защиты.
Чтобы избежать нарушения качества реагентов, тщательно соблюдайте условия их
хранения.
Перед использованием каждая упаковка должна быть проверена на отсутствие видимых
повреждений.
Не используйте флаконы с повреждениями упаковки, признаками помутнения или
изменения цвета.
Не используйте реагенты после окончания срока годности.
- Обращайтесь осторожно с открытыми флаконами с серебряной крышкой с
бактериальными суспензиями.
Не используйте флаконы с бульоном обогащения повторно.
Обращайтесь с флаконами как с хрупкими предметами.
Не прикасайтесь к флаконам с бульоном обогащения ниже отмеченной на них линии.
Используйте штатив для того, чтобы избежать разливания жидкостей в процессе
пипетирования или транспортировки.
УСЛ О В И Я Х Р А Н Е Н И Я
Образцы :
Флаконы, содержащие бактериальные суспензии для тестирования (флаконы из URO-QUICK
скрининг кита) или приготовленные из изолированных колоний, должны быть быстро исследованы
с одновременным охлаждением, чтобы избежать длительного пребывания при комнатной
температуре перед исследованием.
Реагенты:
“ Флаконы с лиофилизированными антибиотикамидолжны содержаться в темном месте при
2-8“С, до окончания срока годности, указанной на упаковке.
jTj
--- стр. 53 ---
Раствор для разведения должен храниться в холодильнике при 2-8°С, до окончания срока
годности, указанной на упаковке.
- Флаконы с бульоном обогащения должны храниться при 4-30 °С до окончания срока
годности.
Разведенный антибиотик должен храниться в холодильнике при 2-8°С в темноте до 7
дней.
Раствор для разведения , после первого открывания должен храниться при 2-8 °С, до
окончания срока годности, указанной на упаковке.
УТИ Л И ЗА Ц И Я О ТХ О Д О В
Утилизация реагентов образцов, растворов для разведения и отходов является ответственностью
пользователя, в соответствии с требованиями национальных законов.
М ЕТО Д И КА Р А ЗВ ЕД ЕН И Я А Н ТИ Б И О Т И КА
Разведите одновременно и в соответствии с вашими потребностями Реагент (А) и Реагент (В)
следующим образом:
1. Отройте раствор реагента (В), и используя микропипетку добавьте 1000 pL этого раствора во
флакон с лиофилизированным антибиотиком, также предварительно открытому.
2. Аккуратно перемешайте. Это количество разведенного антибиотика позволяет произвести 6
тестов; в случае необходимости в дальнейших тестах повторите вышеописанную процедуру.
3. Используя полученный раствор антибиотика проведите тесты; оставшийся реагент (В) должен
храниться при 2-8°С, в темном месте, не более 7 дней (напишите на этикетке флакона дату
истечения годности.
4. Перед использованием дайте флакону постоять несколько минут при комнатной температуре
или приготовьте новый раствор как это описано в п.1.
Предупреждения:
Жидкий компонент для разведения специфичен для данного антибиотика.
М ЕТО Д И КА Д Л Я П Р Я М О ГО Т Е С ТА НА А Н ТИ В И О Т И К О Ч У В С Т В И Т Е Л Ь Н О С Т Ь
УРИ Н О КУЛ Ь ТУРЫ
1 - ПО Д ГО ТО В КА П О Л О Ж И ТЕ Л Ь Н О ГО О Б РА ЗЦ А УР И Н О КУЛ Ь ТУР Ы
Для каждого образца, определенного как положительный на анализаторах HB&L UROQUATTRO
или ALFRED60, необходимо прежде всего проделать окраску по Граму, для дифференциации
Грам+ от Грам- и для проверки чистоты культуры. В случае полибактериальной культуры,
проведите субкультивирование для выделения колоний и проведения тестов на идентификацию и
чувствительность. В случае монокультуры, возможно непосредственное проведение теста на
антибиотикочувствительности с использованием AST кита и выбор надлежащего антибиотика в
соответствии с характеристиками микроорганизма (Грам+ или Грам-). Каждый антибиотик
инокулируется в соответствующий AST флакон.
Образцы для прямого тестирования антибитикочувствительности (монокультура) инокулируют во
флакон CAST бульоном, используя положительные бульонный уринокультуры.
Чтобы оптимизировать и стандартизировать рабочую бактериальную концентрацию для теста на
антибитикочувствительность, производят следующие операции:
а- И спол ьзование ф ункции М акФ арланд алертер, на анализатора ALFRED60, HB&L
UROQUATTRO с программным обеспечением Version 1.1А и выше.
--- стр. 54 ---
Если эта функция используется, прибор показывает степень мутности МакФарланду
Непосредственно в анализируемом образце в процессе теста. При достижении степени мутности
0.5-0.7 суспензия считается готовой для проведения теста на антибиотикочувствительность
(следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Ь - И спол ьзование тур би д и м етр а, на приборе ALFRED60 с программным обеспечением Version
1.2А и выше, HB&L UROQUATTRO с программным обеспечением Version 4.0А и выше (DOS) или
1.0N и выше (Windows).
Возможно приготовление суспензий оптимизированных по МакФарлнад методом разведения
более концентрированного материала или из изолированных колоний, с использованием
турбидиметра (следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Следующая методика делается вовремя или после культурального теста:
1 - О бразец в процессе анализа:
a) Когда анализ еще в процессе, выберите позицию образца и подтвердите окончание анализа для
данного образца.
b) По окончании анализа, выберите свободную позицию и подтвердите режим турбидиметра
(функция турбидиметра появляется на экране).
c) Поставьте флакон с положительным образцом в указанную прибором позицию.
d) После получения турбидиметром значения степени мутности, прибор сообщит необходимые
для разведения объемы для получения бактериальной концентрации для получения
бактериальной концентрации в пределах 0,5-0,7 по МакФарланд.
e) Для проведения разведений бульона используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-SVR). Для предотвращения образования
пузырьков внутри флакона, используйте шприц, погружая иглу глубоко в жидкость в пузырьке,
П О Л О Ж И ТЕ Л Ь Н А Я КУЛ Ь Т УРА
П О Д ГО ТО В КА О Б Р А З Ц О В П О СЛ Е С Ч И ТЫ В А Н И Й ТУ Р Б И Д И М Е Т Р А
f) По окончании сеанса турбидиметрии нажмите кнопку «exit» для получения резюме анализа
уринокультур.
2 - О бразец в конце анал иза;
Начните работу с инокулумом, начиная с пункта Ь) в предыдущем параграфе.
3 - Процедура под гото вки образцо в для теста на антим и кробную чувствительность из
изолированной колонии.
Для каждого клинического образца из которого получена монокультура на чашке Петри, возьмите
2 - 3 колонии и асептически суспензируйте их во флаконе с культуральным бульоном из URO-
QUICK SCREENING кита, чтобы получить рост в бульоне.
При достижении логарифмической фазы роста бактерий (помутнение бульона), осторожно
перенесите шприцом или пипеткой во флаконы с серебряной алюминиевой крышкой из AST
МакФарлнад кита (кат.номер SI 912-SVR) количество бактериальной суспензии необходимое для
получения степени мутности 0,5-0,7 по МакФарлнад (использование турбидиметра такое же, как
это описано выше).
ЗАГРУЗКА О Б Р А ЗЦ О В В П Р И Б О Р И П Р О Ц Е Д УР А Н А С ТР О Й КИ
Подготовьте флаконы с голубой алюминиевой крышкой с AST бульоном обогащения (С), в
количестве, соответствующем количеству исследуемых антибиотиков.
--- стр. 55 ---
г
Каждый антибиотик имеет соответствующий ему цвет и кодировку.
Подготовьте ваш профиль антибиотиков и инокулируйте в каждый флакон (С) 100 ml инокулума,
подготовленного, как это описано выше (используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой, если использовался турбидиметр или культуральный флакон, если использовалась
функция оценки мутности по МакФарлнад) и затем инокулируйте 100 ml растворенного
антибиотика. Убедитесь, что уровень жидкости достиг линии нанесенной на флаконе (С).
Следующий флакон с золотой алюминиевой крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-
SVR) инокулируют 100 ml того же инокулума, приготовленного в соответствии с инструкциями
выше, без антибиотиков.
Данный флакон является референсным образцом для оценки бактериального роста; инокулируйте
0.1 mL образца без какого-либо антибиотика.
Предупре)кдения:
Каждый антибиотик идентифицируется по своему собственному цвету флакона или коду,
набираемому на клавиатуре или кнопкой на экране. Цвет или код указаны на следующих
компонентах набора:
(А) Флакон с лиофилизированным антибиотиком, (В) Жидкость для разведения антибиотика, (С)
60 флаконов с бульоном обогащения.
Ф лакон с Ц еф урокисм о м им еет этикетку с кодом FUR.
В соответствии с потребностями пользователя, возможно набрать необходимую панель
антибиотиков для Грам+ или для Грам- используя программное обеспечение прибора..
При загрузке каждого флакон (С) в прибор1з следуйте инструкциям, появляющимся на экране.
Схема, представленная ниже в графической форме, показывает процедуру загрузки и
программирования.
Образцы инокулированные с использованием скринингового бульонного теста уринокультур или
бактериальными культурами из изолированных колоний, в соответствии с выше описанными
процедурами разведения, загружаются в прибор. Результаты будут получены через 3 часа.
При завершении анализа через 3 часа, результаты выдаются в виде процента резистентных (R)
или чувствительных (S) для каждого исследованного антибиотика, в сравнении с референсными
значениями.
Пример отчета по цеф уроксим у.
Перед кл иническим использованием реком ендуется и скл ю чить присутствие энтерококков,
WIPGA, M FC, P se u do m on a s spp. и д ругих не-энтеробактерий.
Валидирование инокулум а :
Стандартизация инокулум а явл яется важны м ф актором провед ения теста на
чувствтительность.
Чтобы получить корректны е показатели при испол ьзовании! A S T -Ц еф уроксим кита,
рекомендуется провер ить реф еренсны е значения инокулум а образца.
Значения инокулум а дол ж ны бы ть > 700.000 KOE/nfiL, в том случае, если они ниже прибор
вы даст соо бщ ение “ N V ” (Not valid). В этом случае те ст д ол ж ен бы ть проделан повторно.
Процентные значения группируются по категориям S = Чувствительный , I = Промежуточный , R =
Резистентный.
--- стр. 56 ---
S 1 R
S Percentage 100-65 % 65-50% 50-0%
R Percentage 0-35% 35-50% 50-100%
ВНУТРЕННИМ КО Н ТР О Л Ь КА Ч ЕС ТВ А
Для оценки стандартизации и контроля качества получаемых результатов проводят процедуры
при помощи штаммов АТСС. Частота и модальность сессий контроля качества является
ответственностью пользователя и производится в соответствии с существующими в стране
рекомендациями.
Вследствие существующих особых ростовых характеристик образцов, подвергавшихся
процедурам стабилизации и презервации, время исследования антибиотикочувствительности для
таких образцов удлиняется до 5 часов.
Escherichia coll АТСС 25922 Staphylococcus aureus ATCG
29213
Ожидаемые результаты S S
О ГРАНИ Ч ЕНИ Я М ЕТО Д И КИ
• Для прямой оценки чувствительности: время проведения теста существенно удлиняется,
т.к. культуральный тест может оказывать влияние на характеристики образца.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: проведение теста со старыми
колониями с чашек может влиять на результаты теста.
• Длительные паузы между этапами работы (от приготовления инокулума до загрузки в
прибор) могут влиять на результаты.
• Для прямой оценки чувствительности: могут быть исследованы только образцы,
предварительно отобранные по окраске по Граму, для исключения полимикробного
роста.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: инокулум, полученный путем
смешивания разных изолированных колоний или из слабо изолированных колоний может
влиять на результаты.
О Ж И Д А ЕМ Ы Е РЕ ЗУЛ Ь ТА ТЫ
Принимая во внимание, что бактериальная резистентность может варьировать в разных
географических зонах, ожидаемые результаты прямо зависят от локальной микробной экологии
(Виды /Механизмы резистентности).
ПО КА ЗА ТЕЛИ Ч У В С ТВ И Т Е Л Ь Н О С ТИ ПРИ ПРЯХ ТЕ С Т А Х В У Р И Н О К У Л Ь Т У Р А Х
Показатели по AST-Цефуроксиму оценивались с использованием положительных образцов мечи,
содержавших следующие виды :
Escherichia spp. Proteus spp. Staphylococcus spp.
Klebsiella spp. Citrobacter spp.
Enterobacter spp. Morganella spp.
Эти образцы были получены из института микробиологии и параллельно тестировались
референсным методом Кирби-Бауэра после культивирования на чашках Петри.
УРО В Е Н Ь Д О С Т О В Е Р Н О С Т И
--- стр. 57 ---
Уровень достоверности результатов, полученных при помощи референсного метода на 100
штаммах составлял 92% .
“Большая ошибка” и “очень большая ошибка” в процентном отношении составляли 3% и 2%
соответственно.
В О С П РО И ЗВ О Д И М О С ТЬ
Уровни воспроизводимости в процентном отношении (чувствительные, промежуточные,
резистентные), полученные в 8 повторностях на 2-х бактериальных штаммах составлял 100%.
A LIFA X S.p.A.
Via Petrarca 2/1 - 35020 Polverara (PD) - Italy
tel. +39 049 0992000
web site: www.alifax.com
e-mail: info@alifax.com
С П И С О К Л И ТЕ РА ТУРЫ
1) Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standard for Antimicrobial
Susceptibility Testing; Eighteenth Informational Supplement. Approved Standard CLSI
Document M l 00-SI 8, Vol. 28, No. 1, Winkler MA et al , January, 2008.
2) Jennifer M. Andrews, “ Determiation of minimum inhibitory concentrations", Journal of
A n tim icrob ial C h em oth erapy (2001), 48, Suppi S1, 5-16.
3) Livermore D.M., Winstanley T.G., Shannon K.P., "Interpretative reading: recognizing the unusual
and inferring resistance mechanisms from resistance phenotypes", Jou rn al o f A ntim icrobial
C h em oth erapy (2001), 48, SuppI S1, 87-102.
4) Chapin K.C. and Murray P.R. “ Principles of Stains and Media". Murray P.R. et a l: M anual of
Clinical M icrob iology, 8th edition, 258-261. ASM Press 2003.
5) Jorgensen H.J. "Selection Criteria for an Antimicrobial Susceptibility Testing System", Journal of
C linical M icro b io lo g y Nov. 1993; 31(11): 2841-2844.
6) Product R eferen ces :
7) S. Roveta, A. Marchese, E.A. Debbia (Microbiology Institute, Genoa University, Italy),
"Evaluation of the Antibiotic Susceptibility on 412 Pathogens Isolated from Severe Bacterial
Infections Employing the Uro-Quick System", Poster, ICAAC, W ash in g to n , 30 October - 2
November 2004.
8) S. Roveta, F. Cavallini, A, Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in intensive care units using the Uro-
Quick System", Poster, AM CLI, Padova, 8-11 June 2004.
9) S. Roveta, F. Cavallini, A, Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test of Uropathogens using the Uro-Quick System directly on
urine". Poster, ASM , New O rleans, 23-27 May 2004.
10) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in ICU using the Uro-Quick System",
Poster, EC CM ID , Prague, 1-4 May 2004.
11) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, University di Genova),
“ Evaluation of the Uroquick, a new rapid automated system, for the detection of well-
characterized antibiotic-resistant bacteria", Journal o f C h em o th erap y 2004 Apr; 16(2): 107-18.
J jL
--- стр. 61 ---
МЕРЫ П Р ЕД О С ТР О Ж Н О С ТИ
Только для профессиональной диагностики in vitro.
Необходимо осторожно обращаться с лиофилизатом антибиотика: избегать попаданиг
вовнутрь, вдыхания, контакта с кожей, глазами и одеждой. Избегайте длительного
контакта.
Некоторые из компонентов питательных бульонов имеют животное происхождение.
Достоверное знание об источниках происхождение мяса животных и его санитарном
состоянии не гарантирует отсутствия трансмиссивных патогенных агентов. Тем не менее,
рекомендовано обращаться с данными продуктами, как с потенциально инфицированными
и, соответственно соблюдать предписанные меры предосторожности.
Необходимо использование всех предосторожностей, применяемых при работе с
потенциально инфекционными продуктами.
Биологические образцы, бактериальные культуры должны рассматриваться как иcтo^■■lиxи
потенциальной инфекции и в отношении их должны соблюдаться меры предосторожности
в соответствии с национальными законами.
Рекомендуется использовать средства индивидуальной защиты.
Чтобы избежать нарушения качества реагентов, тщательно соблюдайте условия их
хранения.
Перед использованием каждая упаковка должна быть проверена на отсутствие видимых
повреждений.
Не используйте флаконы с повреждениями упаковки, признаками помутнения или
изменения цвета.
Не используйте реагенты после окончания срока годности.
Обращайтесь осторожно с открытыми флаконами с серебряной крышкой с
бактериальными суспензиями.
Не используйте флаконы с бульоном обогащения повторно.
Обращайтесь с флаконами как с хрупкими предметами.
Не прикасайтесь к флаконам с бульоном обогащения ниже отмеченной на них линии.
Используйте штатив для того, чтобы избежать разливания жидкостей в процессе
пипетирования или транспортировки,
УС Л О В И Я Х Р А Н Е Н И Я
Образцы ;
Флаконы, содержащие бактериальные суспензии для тестирования (флаконы из URO-QUICK
скрининг кита) или приготовленные из изолированных колоний, должны быть быстро исследованы
с одновременным охлаждением, чтобы избежать длительного пребывания при комнатной
температуре перед исследованием.
Реагенты:
- Флаконы с лиофилизированными антибиотикамидолжны содержаться в темном месте при
2-8°С, до окончания срока годности, указанной на упаковке.
- Раствор для разведения должен храниться в холодильнике при 2-8°С, до окончания срока
годности, указанной на упаковке.
- Флаконы с бульоном обогащения должны храниться при 4-30 °С до окончания срока
годности.
--- стр. 62 ---
- Разведенный антибиотик должен храниться в холодильнике при 2-8°С в темноте до 7
дней,
- Раствор для разведения , после первого открывания должен храниться при 2-8 “С, до
окончания срока годности, указанной на упаковке,
УТИ Л И ЗА Ц И Я О ТХО Д О В
Утилизация реагентов образцов, растворов для разведения и отходов является ответственностью
пользователя, в соответствии с требованиями национальных законов.
М ЕТО Д И КА РА ЗВ Е Д Е Н И Я А Н ТИ Б И О Т И КА
Разведите одновременно и в соответствии с вашими потребностями Реагент (А) и Реагент (В)
следующим образом:
1 . Отройте раствор реагента (В), и используя микропипетку добавьте 1000 pL этого раствора во
флакон с лиофилизированным антибиотиком, также предварительно открытому,
2. Аккуратно перемешайте. Это количество разведенного антибиотика позволяет произвести 6
тестов; в случае необходимости в дальнейших тестах повторите вышеописанную процедуру.
3. Используя полученный раствор антибиотика проведите тесты; оставшийся реагент (В) должен
храниться при 2-8°С, в темном месте, не более 7 дней (напишите на этикетке флакона дату
истечения годности.
4. Перед использованием дайте флакону постоять несколько минут при комнатной температуре
или приготовьте новый раствор как это описано в п.1.
П редупреж дения:
Жидкий компонент для разведения специфичен для данного антибиотика.
М ЕТО Д И КА Д Л Я П Р Я М О ГО Т Е С ТА НА А Н Т И Б И О Т И К О Ч У В С Т В И Т Е Л Ь Н О С Т Ь
УРИ Н О КУЛ Ь ТУРЫ
1 - П О Д ГО ТО В КА П О Л О Ж И ТЕ Л Ь Н О ГО О Б РА ЗЦ А УРИ Н О КУ Л Ь ТУ Р Ы
Для каждого образца, определенного как положительный на анализаторах HB&L UROQUATTRO
или ALFRED60, необходимо прежде всего проделать окраску по Граму, для дифференциации
Грам+ от Грам- и для проверки чистоты культуры. В случае полибактериальной культуры,
проведите субкультивирование для выделения колоний и проведения тестов на идентификацию и
чувствительность. В случае монокультуры, возможно непосредственное проведение теста на
антибиотикочувствительности с использованием AST кита и выбор надлежащего антибиотика в
соответствии с характеристиками микроорганизма (Грам+ или Грам-). Каждый антибиотик
инокулируется в соответствующий AST флакон.
Образцы для прямого тестирования антибитикочувствительности (монокультура) инокулируют во
флакон с AST бульоном, используя положительные бульонный уринокультуры.
Чтобь! оптимизировать и стандартизировать рабочую бактериальную концентрацию для теста на
антибитикочувствительность, производят следующие операции:
а- И спол ьзование ф ункции М акФ арл анд алертер, на анализатора ALFRED60, HB&L
UROQUATTRO с программным обеспечением Version 1.1А и выше.
Если эта функция используется, прибор показывает степень мутности МакФарланду
Непосредственно в анализируемом образце в процессе теста. При достижении степени мутности
0.5-0.7 суспензия считается готовой для проведения теста на антибиотикочувствительность
(следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
--- стр. 63 ---
г
b - И спол ьзование тур би д и м етр а, на приборе ALFRED60 с программным обеспечением Version
1.2А и выше, HB&L UROQUATTRO с программным обеспечением Version 4.0А и выше (DOS) или
1.0N и выше (Windows).
Возможно приготовление суспензий оптимизированных по МакФарлнад методом разведения
более концентрированного материала или из изолированных колоний, с использованием
турбидиметра (следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Следующая методика делается вовремя или после культурального теста:
1 - О бразец в процессе анализа:
a) Когда анализ еще в процессе, выберите позицию образца и подтвердите окончание анализа для
данного образца,
b) По окончании анализа, выберите свободную позицию и подтвердите режим турбидиметра
(функция турбидиметра появляется на экране).
c) Поставьте флакон с положительным образцом в указанную прибором позицию,
d) После получения турбидиметром значения степени мутности, прибор сообщит необходимые
для разведения объемы для получения бактериальной концентрации для получения
бактериальной концентрации в пределах 0,5-0,7 по МакФарланд.
e) Для проведения разведений бульона используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-SVR). Для предотвращения образования
пузырьков внутри флакона, используйте шприц, погружая иглу глубоко в жидкость в пузырьке.
П О Л О Ж И ТЕ Л Ь Н А Я КУЛ Ь ТУРА
ПО Д ГО ТО ВКА О Б Р А З Ц О В П О СЛ Е С Ч И ТЫ В А Н И Й Т У Р Б И Д И М Е ТР А
f) По окончании сеанса турбидиметрии нажмите кнопку «exit» для получения резюме анализа
уринокультур.
2 - О бразец в конце анал иза:
Начните работу с инокулумом, начиная с пункта Ь) в предыдущем параграфе.
3 - Процедура под гото вки образцо в для теста на антим и кр о бн ую чувствительность из
изолированной колонии.
Для каждого клинического образца из которого получена монокультура на чашке Петри, возьмите
2 - 3 колонии и асептически суспензируйте их во флаконе с культуральным бульоном из URO-
QUICK SCREENING кита, чтобы получить рост в бульоне.
При достижении логарифмической фазы роста бактерий (помутнение бульона), осторожно
перенесите шприцом или пипеткой во флаконы с серебряной алюминиевой крышкой из AST
МакФарлнад кита (кат.номер SI 912-SVR) количество бактериальной суспензии необходимое для
получения степени мутности 0,5-0,7 по МакФарлнад (использование турбидиметра такое же, как
это описано выше).
ЗА ГРУЗКА О Б Р А З Ц О В В П Р И Б О Р И П Р О Ц Е Д УР А Н А С ТР О Й КИ
Подготовьте флаконы с голубой алюминиевой крышкой с AST бульоном обогащения (С), в
количестве, соответствующем количеству исследуемых антибиотиков.
Каждый антибиотик имеет соответствующий ему цвет и кодировку.
Подготовьте ваш профиль антибиотиков и инокулируйте в каждый флакон (С) 100 ml инокулума,
подготовленного, как это описано выше (используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой, если использовался турбидиметр или культуральный флакон, если использовалась
--- стр. 64 ---
функция оценки мутности по МакФарлнад) и затем инокулируйте 100 ml растворенного
антибиотика. Убедитесь, что уровень жидкости достиг линии нанесенной на флаконе (С).
Следующий флакон с золотой алюминиевой крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-
SVR) инокулируют 100 ml того же инокулума, приготовленного в соответствии с инструкциями
выше, без антибиотиков.
Данный флакон является референсным образцом для оценки бактериального роста: инокулируйте
0.1 mL образца без какого-либо антибиотика.
Предупреждения:
Каждый антибиотик идентифицируется по своему собственному цвету флакона или коду,
набираемому на клавиатуре или кнопкой на экране. Цвет или код указаны на следующих
компонентах набора:
(А) Флакон с лиофилизированным антибиотиком, (В) Жидкость для разведения антибиотика, (С)
60 флаконов с бульоном обогащения.
Ц еф триаксон им еет черны й цвет.
В соответствии с потребностями пользователя, возможно набрать необходимую панель
антибиотиков для Грам+ или для Грам- используя программное обеспечение прибора..
При загрузке каждого флакон (С) в прибор следуйте инструкциям, появляющимся на экране.
Схема, представленная ниже в графической форме, показывает процедуру загрузки и
программирования.
Образцы инокулированные с использованием скринингового бульонного теста уринокультур и."и
бактериальными культурами из изолированных колоний, в соответствии с выше описанными
процедурами разведения, загружаются в прибор. Результаты будут получены через 3 часа.
При завершении анализа через 3 часа, результаты выдаются в виде процента резистентных (R)
или чувствительных (S) для каждого исследованного антибиотика, в сравнении с референсными
значениями.
Пример отчета по цеф триаксону.
Перед кл иническим прим енением необходим о исклю чить присутствие M RSA, MRS и Р.
aeruginosa
В алидирование инокулум а :
С тандартизация инокулум а явл яется важны м ф актором провед ения теста на
чувствтительность.
Чтобы получить корр ектны е показатели при использовании А З Т -Ц Е Ф Т Р И А К С О Н кита,
рекомендуется п ров ер ить реф еренсны е значения инокулум а образца.
Значения инокулум а дол ж ны бы ть > 700.000 KOE/m L, в том случае, если они ниже прибор
вы даст соо бщ ение “ N V ” (N ot valid). В этом случае те ст д ол ж ен бы ть проделан повторно.
Процентные значения группируются по категориям S = Чувствительный , 1 = Промежуточный , R =
Резистентный.
S 1 R
S Percentaqe 100-65 % 65-50% 50-0%
R Percentaqe 0-35% 35-50% 50-100%
в н у т р е н н и й к о н т р о л ь к а ч е с т в а
л .
--- стр. 65 ---
Для оценки стандартизации и контроля качества получаемых результатов проводят процедуры
при помощи штаммов АТСС. Частота и модальность сессий контроля качества является
ответственностью пользователя и производится в соответствии с существующими в стране
рекомендациями.
Вследствие существующих особых ростовых характеристик образцов, подвергавшихся
процедурам стабилизации и презервации, время исследования антибиотикочувствительности для
таких образцов удлиняется до 5 часов.
Escherichia соН АТСС 25922 Staphylococcus aureus АТСС
29213
Ожидаемые результаты S S
О ГРАНИ Ч ЕНИ Я М ЕТО Д И КИ
• Для прямой оценки чувствительности; время проведения теста существенно удлиняется,
т.к. культуральный тест может оказывать влияние на характеристики образца.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: проведение теста со старыми
колониями с чашек может влиять на результаты теста.
• Длительные паузы между этапами работы (от приготовления инокулума до загрузки в
прибор) могут влиять на результаты.
• Для прямой оценки чувствительности: могут быть исследованы только образцы,
предварительно отобранные по окраске по Граму, для исключения полимикробного
роста.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: инокулум, полученный путем
смешивания разных изолированных колоний или из слабо изолированных колоний может
влиять на результаты.
О Ж И Д А ЕМ Ы Е РЕ ЗУЛ Ь ТА ТЫ
Принимая во внимание, что бактериальная резистентность может варьировать в разных
географических зонах, ожидаемые результаты прямо зависят от локальной микробной экологии
(Виды /Механизмы резистентности).
ПО КА ЗА ТЕЛ И Ч У В С ТВ И Т Е Л Ь Н О С ТИ ПРИ ПРЯХ Т Е С Т А Х В У Р И Н О К У Л Ь Т У Р А Х
Показатели по AST-Цефтриаксону оценивались с использованием положительных образцов мочи,
содержавших следующие виды :
Escherichia spp. Proteus spp. Staphylococcus spp.
Klebsiella spp. Citrobacter spp.
Enterobacter spp. Morganella spp.
Эти образцы были получены из института микробиологии и параллельно тестировались
референсным методом Кирби-Бауэра после культивирования на чашках Петри.
УРО ВЕНЬ Д О С Т О В Е Р Н О С Т И
Уровень достоверности результатов, полученных при помощи референсного метода на 48
штаммах составлял 89,58% .
“Большая ошибка” и “очень большая ошибка” в процентном отношении составляли 0% и 2,08%
соответственно.
В О С П РО И ЗВ О Д И М О С ТЬ
--- стр. 66 ---
уровни воспроизводимости в процентном отношении (чувствительные, промежуточные,
резистентные), полученные в 5 повторностях на 2-х бактериальных штаммах составлял 100%.
ALIFA X S.p.A.
via Petrarca 2/1 - 35020 Polverara (PD) - Italy
tel. +39 049 0992000
web site: www.alifax.com
e-mail: info@alifax,com
С П И С О К Л И ТЕ Р А ТУР Ы
1) Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standard for Antimicrobial
Susceptibility Testing; Eighteenth Informational Supplement. Approved Standard CLSI
Document M100-S18, Vol. 28, No. 1, Winkler MA et al., January, 2008,
2) Jennifer M. Andrews, “ Determination of minimum inhibitory concentrations", Journal of
A n tim icrob ial C h em oth erapy (2001), 48, Suppi S1, 5-16.
3) Livermore D.M., Winstanley T.G., Shannon K.P., "Interpretative reading: recognizing the unusual
and inferring resistance mechanisms from resistance phenotypes” . Jou rn al o f Antim icrobial
C h em oth erapy (2001), 48, SuppI S1, 87-102.
4) Chapin K.C. and Murray P.R, “ Principles of Stains and Media". Murray P.R. et a l: M anual of
Clinical M icrob iology, 8th edition, 258-261. ASM Press 2003
5) Jorgensen H.J. “ Selection Criteria for an Antimicrobial Susceptibility Testing System", Journal of
Clinical M icrob iology Nov, 1993; 31(11): 2841-2844.
6) ROCEPHINl package insert
7) Product R eferen ces :
8) S. Roveta, A. Marchese, E.A. Debbia (Microbiology Institute, Genoa University, Italy),
"Evaluation of the Antibiotic Susceptibility on 412 Pathogens Isolated from Severe Bacterial
Infections Employing the Uro-Quick System", Poster, ICAAC, W ashington, 30 October - 2
November 2004.
9) S. Roveta, F, Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in intensive care units using the Uro-
Quick System", Poster, AM CLI, Padova, 8-11 June 2004.
10) S. Roveta, F. Cavallini, A, Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test of Uropathogens using the Uro-Quick System directly on
urine", Poster, A SM , New O rleans, 23-27 May 2004,
11) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in ICU using the Uro-Quick System",
Poster, EC C M ID , Prague, 1-4 May 2004,
12) S, Roveta, E,A, Debbia, A, Marchese, (Istituto di Microbiologia, Universita di Genova),
“ Evaluation of the Uroquick, a new rapid automated system, for the detection of well-
characterized antibiotic-resistant bacteria", Journal o f C h em o th erap y 2004 Apr; 16(2): 107-18.
13) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, University di Genova),
“ Esecuzione rapida di antibiogrammi su campioni di urine mediante sistema Uro-quick", Poster,
National Congress SIM , Rom e, 19-21 October 2003.
--- стр. 70 ---
Пластиковый или полистереновый штатив для флаконов поставляется производителем по
требованию только в случае использования турбидиметра.
- 60 одноразовых шприцев для работы с бульоном обогащения при получении необходимой
степени мутности по шкале МакФарлнад.
МЕРЫ ПРЕДОСТРОЖНОСТИ
Только для профессиональной диагностики in vitro.
Необходимо осторожно обращаться с лиофилизатом антибиотика: избегать попадания
вовнутрь, вдыхания, контакта с кожей, глазами и одеждой. Избегайте длительного
контакта.
Некоторые из компонентов питательных бульонов имеют животное происхождение.
Достоверное знание об источниках происхождение мяса животных и его санитарном
состоянии не гарантирует отсутствия трансмиссивных патогенных агентов. Тем не менее,
рекомендовано обращаться с данными продуктами, как с потенциально инфицированными
и, соответственно соблюдать предписанные меры предосторожности.
Необходимо использование всех предосторожностей, применяемых при работе с
потенциально инфекционными продуктами.
Биологические образцы, бактериальные культуры должны рассматриваться как источники
потенциальной инфекции и в отношении их должны соблюдаться меры предосторожности
в соответствии с национальными законами.
Рекомендуется использовать средства индивидуальной защиты.
Чтобы избежать нарушения качества реагентов, тщательно соблюдайте условия их
хранения.
Перед использованием каждая упаковка должна быть проверена на отсутствие видимых
повреждений.
Не используйте флаконы с повреждениями упаковки, признаками помутнения или
изменения цвета.
Не используйте реагенты после окончания срока годности.
Обращайтесь осторожно с открытыми флаконами с серебряной крышкой с
бактериальными суспензиями.
Не используйте флаконы с бульоном обогащения повторно.
Обращайтесь с флаконами как с хрупкими предметами.
Не прикасайтесь к флаконам с бульоном обогащения ниже отмеченной на них линии.
Используйте штатив для того, чтобы избежать разливания жидкостей в процессе
пипетирования или транспортировки.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
Образцы:
Флаконы, содержащие бактериальные суспензии для тестирования (флаконы из URO-QUICK
скрининг кита) или приготовленные из изолированных колоний, должны быть быстро исследованы
с одновременным охлаждением, чтобы избежать длительного пребывания при комнатной
температуре перед исследованием.
Реагенты:
- Флаконы с лиофилизированными антибиотикамидолжны содержаться в темном месте при
2-8°С, до окончания срока годности, указанной на упаковке.
Ж
--- стр. 71 ---
Раствор для разведения должен храниться в холодильнике при 2-8°С, до окончания срока
годности, указанной на упаковке.
- Флаконы с бульоном обогащения должны храниться при 4-30 °С до окончания срока
годности.
Разведенный антибиотик должен храниться в холодильнике при 2-8°С в темноте до 7
дней.
Раствор для разведения , после первого открывания должен храниться при 2-8 °С, до
окончания срока годности, указанной на упаковке.
УТИЛИЗАЦИЯ ОТХОДОВ
Утилизация реагентов образцов, растворов для разведения и отходов является ответственное! ью
пользователя, в соответствии с требованиями национальных законов.
МЕТОДИКА РАЗВЕДЕНИЯ АНТИБИОТИКА
Разведите одновременно и в соответствии с вашими потребностями Реагент (А) и Реагент (В)
следующим образом:
1 . Отройте раствор реагента (В), и используя микропипетку добавьте 1000 pL этого раствора во
флакон с лиофилизированным антибиотиком, также предварительно открытому.
2 . Аккуратно перемешайте. Это количество разведенного антибиотика позволяет произвести 6
тестов; в случае необходимости в дальнейших тестах повторите вышеописанную процедуру.
3. Используя полученный раствор антибиотика проведите тесты; оставшийся реагент (В) должен
храниться при 2-8°С, в темном месте, не более 7 дней (напишите на этикетке флакона дату
истечения годности.
4 . Перед использованием дайте флакону постоять несколько минут при комнатной температуре
или приготовьте новый раствор как это описано в п.1.
Предупреждения:
Жидкий компонент для разведения специфичен для данного антибиотика.
МЕТОДИКА ДЛЯ ПРЯМОГО ТЕСТА НА АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ
УРИНОКУЛЬТУРЫ
1 - ПОДГОТОВКА ПОЛОЖИТЕЛЬНОГО ОБРАЗЦА УРИНОКУЛЬТУРЫ
Для каждого образца, определенного как положительный на анализаторах HB&L UROQUATTRO
или ALFRED60, необходимо прежде всего проделать окраску по Граму, для дифференциации
Грам+ от Грам- и для проверки чистоты культуры. В случае полибактериальной культуры,
проведите субкультивирование для выделения колоний и проведения тестов на идентификацию и
чувствительность. В случае монокультуры, возможно непосредственное проведение теста на
антибиотикочувствительности с использованием AST кита и выбор надлежащего антибиотика в
соответствии с характеристиками микроорганизма (Грам+ или Грам-). Каждый антибиотик
инокулируется в соответствующий AST флакон.
Образцы для прямого тестирования антибитикочувствительности (монокультура) инокулируют во
флакон с AST бульоном, используя положительные бульонный уринокультуры.
Чтобы оптимизировать и стандартизировать рабочую бактериальную концентрацию для теста на
антибитикочувствительность, производят следующие операции:
а- Использование функции МакФарланд алертер,
на анализатора ALFRED60, HB&L
UROQUATTRO с программным обеспечением Version 1.1 А и выше.
--- стр. 72 ---
Если эта функция используется, прибор показывает степень мутности МакФарланду
1непосредственно в анализируемом образце в процессе теста. При достижении степени мутности
0,5-0.7 суспензия считается готовой для проведения теста на антибиотикочувствительность
(следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Ь - Использование турбидиметра,
на приборе ALFRED60 с программным обеспечением Version
1.2А и выше, HB&L UROQUATTRO с программным обеспечением Version 4.0А и выше (DOS) lju
1.0N и выше (Windows).
Возможно приготовление суспензий оптимизированных по МакФарлнад методом разведения
более концентрированного материала или из изолированных колоний, с использованием
турбидиметра (следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Следующая методика делается вовремя или после культурального теста:
1 - Образец в процессе анализа;
a) Когда анализ еще в процессе, выберите позицию образца и подтвердите окончание анализа для
данного образца.
b) По окончании анализа, выберите свободную позицию и подтвердите режим турбидиметра
(функция турбидиметра появляется на экране),
c) Поставьте флакон с положительным образцом в указанную прибором позицию.
d) После получения турбидиметром значения степени мутности, прибор сообщит необходимые
для разведения объемы для получения бактериальной концентрации для получения
бактериальной концентрации в пределах 0,5-0,7 по МакФарланд.
e) Для проведения разведений бульона используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-SVR). Для предотвращения образования
пузырьков внутри флакона, используйте шприц, погружая иглу глубоко в жидкость в пузырьке.
ПОЛОЖИТЕЛЬНАЯ КУЛЬТУРА
ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ ПОСЛЕ СЧИТЫВАНИЙ ТУРБИДИМЕТРА
f) По окончании сеанса турбидиметрии нажмите кнопку «exit» для получения резюме анализа
уринокультур.
2 - Образец в конце анализа:
Начните работу с инокулумом, начиная с пункта Ь) в предыдущем параграфе.
3 - Процедура подготовки образцов для теста на антимикробную чувствительность из
изолированной колонии.
Для каждого клинического образца из которого получена монокультура на чашке Петри, возьмите
2 - 3 колонии и асептически суспензируйте их во флаконе с культуральным бульоном из URO-
QUICK SCREENING кита, чтобы получить рост в бульоне.
При достижении логарифмической фазы роста бактерий (помутнение бульона), осторожно
перенесите шприцом или пипеткой во флаконы с серебряной алюминиевой крышкой из AST
МакФарлнад кита (кат.номер 8 1 912-SVR) количество бактериальной суспензии необходимое для
получения степени мутности 0,5-0,7 по МакФарлнад (использование турбидиметра такое же, как
это описано выше).
ЗАГРУЗКА ОБРАЗЦОВ В ПРИБОР И ПРОЦЕДУРА НАСТРОЙКИ
Подготовьте флаконы с голубой алюминиевой крышкой с AST бульоном обогащения (С), в
количестве, соответствующем количеству исследуемых антибиотиков.
--- стр. 73 ---
Каждый антибиотик имеет соответствующий ему цвет и кодировку.
Подготовьте ваш профиль антибиотиков и инокулируйте в каждый флакон (С) 100 m l инoкyлy^.a,
подготовленного, как это описано выше (используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой, если использовался турбидиметр или культуральный флакон, если использовалась
функция оценки мутности по МакФарлнад) и затем инокулируйте 100 ml растворенного
антибиотика. Убедитесь, что уровень жидкости достиг линии нанесенной на флаконе (С).
Следующий флакон с золотой алюминиевой крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-
SVR) инокулируют 100 m l того же инокулума, приготовленного в соответствии с инструкциями
выше, без антибиотиков.
Данный флакон является референсным образцом для оценки бактериального роста: инокулируйте
0.1 mL образца без какого-либо антибиотика.
Предупреждения:
Каждый антибиотик идентифицируется по своему собственному цвету флакона или коду,
набираемому на клавиатуре или кнопкой на экране. Цвет или код указаны на следующих
компонентах набора:
(А) Флакон с лиофилизированным антибиотиком, (В) Жидкость для разведения антибиотика, (С)
60 флаконов с бульоном обогащения.
Флакон с Цефтазидимом имеет этикетку белого цвета.
В соответствии с потребностями пользователя, возможно набрать необходимую панель
антибиотиков для Грам+ или для Грам- используя программное обеспечение прибора..
При загрузке каждого флакон (С) в прибор1з следуйте инструкциям, появляющимся на экране.
Схема, представленная ниже в графической форме, показывает процедуру загрузки и
программирования.
Образцы инокулированные с использованием скринингового бульонного теста уринокультур или
бактериальными культурами из изолированных колоний, в соответствии с выше описанными
процедурами разведения, загружаются в прибор. Результаты будут получены через 3 часа.
При завершении анализа через 3 часа, результаты выдаются в виде процента резистентных (R)
или чувствительных (S) для каждого исследованного антибиотика, в сравнении с референсными
значениями.
Пример отчета по цефтазидиму.
Перед клиническим использованием рекомендуется исключить присутствие энтерококков,
WIPCA, MFC и энтеробактерий ESBL.
Валидирование инокулума :
Стандартизация инокулума является важным фактором проведения теста на
чувствтительность.
Чтобы получить корректные показатели при использовании! AST-Цефтазидим кита,
рекомендуется проверить референсные значения инокулума образца.
Значения инокулума должны быть > 700.000 KOE/mL, в том случае, если они ниже прибор
выдаст сообщение “NV” (Not valid). В этом случае тест должен быть проделан повторно.
Процентные значения группируются по категориям S = Чувствительный , I = Промежуточный , R =
Резистентный.
--- стр. 74 ---
S 1 R
S Percentage 100-65% 65-50% 50-0%
R Percentape 0-35% 35-50% 50-100%
ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Для оценки стандартизации и контроля качества получаемых результатов проводят процедуры
при помощи штаммов АТСС. Частота и модальность сессий контроля качества является
ответственностью пользователя и производится в соответствии с существующими в стране
рекомендациями.
Вследствие существующих особых ростовых характеристик образцов, подвергавшихся
процедурам стабилизации и презервации, время исследования антибиотикочувствительности для
таких образцов удлиняется до 5 часов.
Escherichia со // АТСС 25922 Staphylococcus aureus ATCC
29213
Ожидаемые результаты S S
ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДИКИ
• Для прямой оценки чувствительности; время проведения теста существенно удлиняется,
т.к. культуральный тест может оказывать влияние на характеристики образца.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: проведение теста со старыми
колониями с чашек может влиять на результаты теста.
• Длительные паузы между этапами работы (от приготовления инокулума до загрузки в
прибор) могут влиять на результаты.
• Для прямой оценки чувствительности: могут быть исследованы только образцы,
предварительно отобранные по окраске по Граму, для исключения полимикробного
роста.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: инокулум, полученный путем
смешивания разных изолированных колоний или из слабо изолированных колоний может
влиять на результаты.
ОЖИДАЕМЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
Принимая во внимание, что бактериальная резистентность может варьировать в разных
географических зонах, ожидаемые результаты прямо зависят от локальной микробной экологии
(Виды /Механизмы резистентности).
ПОКАЗАТЕЛИ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ПРИ ПРЯХ ТЕСТАХ В УРИНОКУЛЬТУРАХ
Показатели по AST-Цефтазидиму оценивались с использованием положительных образцов мочи,
содержавших следующие виды :
Escherichia spp. Proteus spp. Staphylococcus spp,
Klebsiella spp. Citrobacter spp.
Enterobacter spp. Morganella spp.
Эти образцы были получены из института микробиологии и параллельно тестировались
референсным методом Кирби-Бауэра после культивирования на чашках Петри.
УРОВЕНЬ ДОСТОВЕРНОСТИ
i L
--- стр. 75 ---
Уровень достоверности результатов, полученных при помощи референсного метода на 79
штаммах составлял 94,94% .
“Большая ошибка” и “очень большая ошибка” в процентном отношении составляли 1,27% и 1,27%
соответственно.
ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ
Уровни воспроизводимости в процентном отношении (чувствительные, промежуточные,
резистентные), полученные в 5 повторностях на 2-х бактериальных штаммах составлял 100%.
ALIFAX S.p.A.
via Petrarca 2 /1 - 35020 Polverara (PD) - Italy
tel. +39 049 0992000
web site: www.alifax.com
e-mail: info@alifax.com
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1) Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standard for Antimicrobial
Susceptibility Testing; Eighteenth Informational Supplement. Approved Standard CLSI
Document M100-S18, Vol. 28, No. 1 , Winkler MA et al., January, 2008,
2) Jennifer M. Andrews, “Determiation of minimum inhibitory concentrations", Journal of
Antimicrobial Cliemotlierapy (2001), 48, SuppI S1, 5-16.
3) Livermore D.M., Winstanley T.G., Shannon K.P., "Interpretative reading: recognizing the unusual
and inferring resistance mechanisms from resistance phenotypes", Journal of Antimicrobial
Chemotherapy (2001), 48, SuppI S1, 87-102.
4) Chapin K.C. and Murray P.R. “Principles of Stains and Media". Murray P.R. et a l: Manual of
Clinical Microbiology, 8th edition, 258-261, ASM Press 2003,
5) Jorgensen H.J. “Selection Criteria for an Antimicrobial Susceptibility Testing System”, Journal of
Clinical Microbiology Nov. 1993; 31(11): 2841-2844.
6) Product References :
7) S. Roveta, A. Marchese, E.A. Debbia (Microbiology Institute, Genoa University, Italy),
"Evaluation of the Antibiotic Susceptibility on 412 Pathogens Isolated from Severe Bacterial
Infections Employing the Uro-Quick System", Poster, ICAAC, Washington, 30 October - 2
November 2004.
8) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in intensive care units using the Uro-
Quick System", Poster, AMCLI, Padova, 8-11 June 2004.
9) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), “Antibiotic Susceptibility Test of Uropathogens using the Uro-Quick System directly on
urine", Poster, ASM, New Orleans, 23-27 May 2004.
10) S. Roveta, F, Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in ICU using the Uro-Quick System",
Poster, ECCMID, Prague, 1 -4 May 2004.
11) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, Universita di Genova),
“Evaluation of the Uroquick, a new rapid automated system, for the detection ofw/ell-
characterized antibiotic-resistant bacteria", Journal of Chemotherapy 2004 Apr; 16(2): 107 -1 o.
--- стр. 79 ---
Пластиковый или полистереновый штатив для флаконов поставляется производителем по
требованию только в случае использования турбидиметра.
- 60 одноразовых шприцев для работы с бульоном обогащения при получении необходимой
степени мутности по шкале МакФарлнад.
МЕРЫ ПРЕДОСТРОЖНОСТИ
Только для профессиональной диагностики in vitro.
Необходимо осторожно обращаться с лиофилизатом антибиотика: избегать попадания
вовнутрь, вдыхания, контакта с кожей, глазами и одеждой. Избегайте длительного
контакта.
Некоторые из компонентов питательных бульонов имеют животное происхождение.
Достоверное знание об источниках происхождение мяса животных и его санитарном
состоянии не гарантирует отсутствия трансмиссивных патогенных агентов. Тем не менее,
рекомендовано обращаться сданными продуктами, как с потенциально инфицированными
и, соответственно соблюдать предписанные меры предосторожности.
- Необходимо использование всех предосторожностей, применяемых при работе с
потенциально инфекционными продуктами.
- Биологические образцы, бактериальные культуры должны рассматриваться как источники
потенциальной инфекции и в отношении их должны соблюдаться меры предосторожности
в соответствии с национальными законами.
Рекомендуется использовать средства индивидуальной защиты.
Чтобы избежать нарушения качества реагентов, тщательно соблюдайте условия их
хранения.
Перед использованием каждая упаковка должна быть проверена на отсутствие видимых
повреждений.
Не используйте флаконы с повреждениями упаковки, признаками помутнения или
изменения цвета.
Не используйте реагенты после окончания срока годности.
- Обращайтесь осторожно с открытыми флаконами с серебряной крышкой с
бактериальными суспензиями.
Не используйте флаконы с бульоном обогащения повторно.
Обращайтесь с флаконами как с хрупкими предметами.
Не прикасайтесь к флаконам с бульоном обогащения ниже отмеченной на них линии.
Используйте штатив для того, чтобы избежать разливания жидкостей в процессе
пипетирования или транспортировки.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
Образцы:
Флаконы, содержащие бактериальные суспензии для тестирования (флаконы из URO-QUICK
скрининг кита) или приготовленные из изолированных колоний, должны быть быстро исследованы
с одновременным охлаждением, чтобы избежать длительного пребывания при комнатной
температуре перед исследованием.
Реагенты;
- Флаконы с лиофилизированными антибиотикамидолжны содержаться в темном месте iipn
2-8°С, до окончания срока годности, указанной на упаковке.
--- стр. 80 ---
Раствор для разведения должен храниться в холодильнике при 2-8°С, до окончания срока
годности, указанной на упаковке.
- Флаконы с бульоном обогащения должны храниться при 4-30 °С до окончания срока
годности.
Разведенный антибиотик должен храниться в холодильнике при 2-8°С в темноте до 7
дней.
Раствор для разведения , после первого открывания должен храниться при 2-8 °С, до
окончания срока годности, указанной на упаковке.
УТИЛИЗАЦИЯ ОТХОДОВ
Утилизация реагентов образцов, растворов для разведения и отходов является ответственнос’"ью
пользователя, в соответствии с требованиями национальных законов.
МЕТОДИКА РАЗВЕДЕНИЯ АНТИБИОТИКА
Разведите одновременно и в соответствии с вашими потребностями Реагент (А) и Реагент (В)
следующим образом:
1 . Отройте раствор реагента (В), и используя микропипетку добавьте 1000 pL этого раствора во
флакон с лиофилизированным антибиотиком, также предварительно открытому.
2 . Аккуратно перемешайте. Это количество разведенного антибиотика позволяет произвести 6
тестов; в случае необходимости в дальнейших тестах повторите вышеописанную процедуру.
3 . Используя полученный раствор антибиотика проведите тесты; оставшийся реагент (В) должен
храниться при 2-8°С, в темном месте, не более 7 дней (напишите на этикетке флакона дату
истечения годности.
4. Перед использованием дайте флакону постоять несколько минут при комнатной температуре
или приготовьте новый раствор как это описано в п.1.
Предупреждения:
Жидкий компонент для разведения специфичен для данного антибиотика.
МЕТОДИКА ДЛЯ ПРЯМОГО ТЕСТА НА АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ
УРИНОКУЛЬТУРЫ
1 - ПОДГОТОВКА ПОЛОЖИТЕЛЬНОГО ОБРАЗЦА УРИНОКУЛЬТУРЫ
Для каждого образца, определенного как положительный на анализаторах HB&L UROQUATTRO
или ALFRED60, необходимо прежде всего проделать окраску по Граму, для дифференциации
Грам+ от Грам- и для проверки чистоты культуры. В случае полибактериальной культуры,
проведите субкультивирование для выделения колоний и проведения тестов на идентификацию и
чувствительность. В случае монокультуры, возможно непосредственное проведение теста на
антибиотикочувствительности с использованием AST кита и выбор надлежащего антибиотика в
соответствии с характеристиками микроорганизма (Грам+ или Грам-). Каждый антибиотик
инокулируется в соответствующий AST флакон.
Образцы для прямого тестирования антибитикочувствительности (монокультура) инокулируют во
флакон CAST бульоном, используя положительные бульонный уринокультуры.
Чтобы оптимизировать и стандартизировать рабочую бактериальную концентрацию для теста на
антибитикочувствительность, производят следующие операции:
а- Использование функции МакФарланд алертер,
на анализатора ALFRED60, HB&L
UROQUATTRO с программным обеспечением Version 1.1 А и выше.
Ж .
--- стр. 81 ---
Если эта функция используется, прибор показывает степень мутности МакФарланду
1непосредственно в анализируемом образце в процессе теста. При достижении степени мутности
0.5-0,7 суспензия считается готовой для проведения теста на антибиотикочувствительность
(следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Ь - Использование турбидиметра, на приборе ALFRED 60 с программным обеспечением Version
1.2А и выше, HB&L UROQUATTRO с программным обеспечением Version 4.0А и выше (DOS) или
1.0N и выше (Windows).
Возможно приготовление суспензий оптимизированных по МакФарлнад методом разведения
более концентрированного материала или из изолированных колоний, с использованием
турбидиметра (следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Следующая методика делается вовремя или после культурального теста:
1 - Образец в процессе анализа:
a) Когда анализ еще в процессе, выберите позицию образца и подтвердите окончание анализа для
данного образца,
b) По окончании анализа, выберите свободную позицию и подтвердите режим турбидиметра
(функция турбидиметра появляется на экране).
c) Поставьте флакон с положительным образцом в указанную прибором позицию.
d) После получения турбидиметром значения степени мутности, прибор сообщит необходимые
для разведения объемы для получения бактериальной концентрации для получения
бактериальной концентрации в пределах 0,5-0,7 по МакФарланд.
e) Для проведения разведений бульона используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-SVR), Для предотвращения образования
пузырьков внутри флакона, используйте шприц, погружая иглу глубоко в жидкость в пузырьке.
ПОЛОЖИТЕЛЬНАЯ КУЛЬТУРА
ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ ПОСЛЕ СЧИТЫВАНИЙ ТУРБИДИМЕТРА
f) По окончании сеанса турбидиметрии нажмите кнопку «exit» для получения резюме анализа
уринокультур.
2 - Образец в конце анализа:
Г Начните работу с инокулумом, начиная с пункта Ь) в предыдущем параграфе.
3 - Процедура подготовки образцов для теста на антимикробную чувствительность из
изолированной колонии.
Для каждого клинического образца из которого получена монокультура на чашке Петри, возьмите
2 - 3 колонии и асептически суспензируйте их во флаконе с культуральным бульоном из URO-
QUICK SCREENING кита, чтобы получить рост в бульоне.
При достижении логарифмической фазы роста бактерий (помутнение бульона), осторожно
перенесите шприцом или пипеткой во флаконы с серебряной алюминиевой крышкой из AST
МакФарлнад кита (кат.номер SI 912-SVR) количество бактериальной суспензии необходимое для
получения степени мутности 0,5-0,7 по МакФарлнад (использование турбидиметра такое же, как
это описано выше).
ЗАГРУЗКА ОБРАЗЦОВ В ПРИБОР И ПРОЦЕДУРА НАСТРОЙКИ
Подготовьте флаконы с голубой алюминиевой крышкой с AST бульоном обогащения (С), в
количестве, соответствующем количеству исследуемых антибиотиков.
'J L
--- стр. 82 ---
г
Каждый антибиотик имеет соответствующий ему цвет и кодировку.
Подготовьте ваш профиль антибиотиков и инокулируйте в каждый флакон (С) 100 m l инокулума,
подготовленного, как это описано выше (используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой, если использовался турбидиметр или культуральный флакон, если использовалась
функция оценки мутности по МакФарлнад) и затем инокулируйте 100 ml растворенного
антибиотика. Убедитесь, что уровень жидкости достиг линии нанесенной на флаконе (С).
Следующий флакон с золотой алюминиевой крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-
SVR) инокулируют 100 ml того же инокулума, приготовленного в соответствии с инструкциями
выше, без антибиотиков.
Данный флакон является референсным образцом для оценки бактериального роста: инокулируйте
0.1 mL образца без какого-либо антибиотика.
Предупреждения:
Каждый антибиотик идентифицируется по своему собственному цвету флакона или коду,
набираемому на кпавиатуре или кнопкой на экране. Цвет или код указаны на следующих
компонентах набора:
(А) Флакон с лиофилизированным антибиотиком, (В) Жидкость для разведения антибиотика, (С)
60 флаконов с бульоном обогащения.
Флакон с Цефтазидимом для Enterobacteriaceae имеет этикетку фиолетового цвета.
В соответствии с потребностями пользователя, возможно набрать необходимую панель
антибиотиков для Грам+ или для Грам- используя программное обеспечение прибора..
При загрузке каждого флакон (С) в прибор1з следуйте инструкциям, появляющимся на экране.
Схема, представленная ниже в графической форме, показывает процедуру загрузки и
программирования.
Образцы инокулированные с использованием скринингового бульонного теста уринокультур или
бактериальными культурами из изолированных колоний, в соответствии с выше описанными
процедурами разведения, загружаются в прибор. Результаты будут получены через 3 часа.
При завершении анализа через 3 часа, результаты выдаются в виде процента резистентных (R)
или чувствительных (S) для каждого исследованного антибиотика, в сравнении с референсными
значениями.
Пример отчета по цефтазидиму для Enterobacteriaceae.
Перед клиническим использованием рекомендуется исключить присутствие энтерококков,
МРСА, МРС и энтеробактерий ESBL.
Валидирование инокулума :
Стандартизация инокулума является важным фактором проведения теста на
чувствтительность.
Чтобы получить корректные показатели при использовании1 AST-Цефтазидим для
Enterobacteriaceae кита, рекомендуется проверить референсные значения инокулума
образца.
Значения инокулума должны быть > 700.000 KOE/mL, в том случае, если они ниже прибор
выдаст сообщение “NV” (Not valid). В этом случае тест должен быть проделан повторно.
--- стр. 83 ---
процентные значения группируются по категориям S = Чувствительный , I = Промежуточный , К ^
Резистентный.
S 1 R
S Percentage 100-65 % 65-50% 50-0%
R Percentage 0-35% 35-50% 50-100%
ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Для оценки стандартизации и контроля качества получаемых результатов проводят процедуры
при помощи штаммов АТСС. Частота и модальность сессий контроля качества является
ответственностью пользователя и производится в соответствии с существующими в стране
рекомендациями.
Вследствие существующих особых ростовых характеристик образцов, подвергавшихся
процедурам стабилизации и презервации, время исследования антибиотикочувствительности для
таких образцов удлиняется до 5 часов.
Escherichia coll АТСС 25922 Staphylococcus aureus ATCC
29213
Ожидаемые результаты S S
ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДИКИ
• Для прямой оценки чувствительности: время проведения теста существенно удлиняется,
т.к. культуральный тест может оказывать влияние на характеристики образца.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: проведение теста со старыми
колониями с чашек может влиять на результаты теста,
• Длительные паузы между этапами работы (от приготовления инокулума до загрузки в
прибор) могут влиять на результаты.
• Для прямой оценки чувствительности: могут быть исследованы только образцы,
предварительно отобранные по окраске по Граму, для исключения полимикробного
роста.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: инокулум, полученный путем
смешивания разных изолированных колоний или из слабо изолированных колоний может
влиять на результаты.
ОЖИДАЕМЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
Принимая во внимание, что бактериальная резистентность может варьировать в разных
географических зонах, ожидаемые результаты прямо зависят от локальной микробной экологии
(Виды /Механизмы резистентности).
ПОКАЗАТЕЛИ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ПРИ ПРЯХ ТЕСТАХ В УРИНОКУЛЬТУРАХ
Показатели по AST-Цефтазидиму для Enterobacteriaceae оценивались с использованием
положительных образцов мочи, содержавших следующие виды :
Escherichia spp. Proteus spp. Staphylococcus spp.
Klebsiella spp. Citrobacter spp.
Enterobacter spp. Morganella spp.
Эти образцы были получены из института микробиологии и параллельно тестировались
референсным методом Кирби-Бауэра после культивирования на чашках Петри.
--- стр. 84 ---
УРОВЕНЬ ДОСТОВЕРНОСТИ
Уровень достоверности результатов, полученных при помощи референсного метода на 24
штаммах составлял 100% .
“Большая ошибка” и "очень большая ошибка” в процентном отношении составляли 0% и 0%
соответственно.
ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ
Уровни воспроизводимости в процентном отношении (чувствительные, промежуточные,
резистентные), полученные в 2 повторностях на 2-х бактериальных штаммах составлял 100%.
ALIFAX S.p.A.
via Petrarca 2 /1 - 35020 Polverara (PD) - Italy
tel. +39 049 0992000
web site: www.alifax.com
e-mail: info@alifax.com
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1 ) Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standard for Antimicrobial
Susceptibility Testing; Eighteenth Informational Supplement. Approved Standard CLSI
Document M100-S18, Vol. 28, No. 1 , Winkler MA et al., January, 2008.
2) Jennifer M. Andrews, “Determiation of minimum inhibitory concentrations", Journal of
Antimicrobial Chemotherapy (2001), 48, SuppI S1, 5-16
3) Livermore D.M., Winstanley T.G., Shannon K.P., “Interpretative reading: recognizing the unusual
and inferring resistance mechanisms from resistance phenotypes”, Journal of Antimicrobial
Chemotherapy (2001), 48, SuppI S1, 87-102.
4) Chapin K.C, and Murray P.R. “Principles of Stains and Media". Murray P.R. et a l: Manual of
Clinical Microbiology, 8th edition, 258-261. ASM Press 2003.
5) Jorgensen H.J. “Selection Criteria for an Antimicrobial Susceptibility Testing System", Journal of
Clinical Microbiology Nov. 1993; 31(11): 2841-2844.
6) Product References :
7) S. Roveta, A. Marchese, E.A. Debbia (Microbiology Institute, Genoa University, Italy),
"Evaluation of the Antibiotic Susceptibility on 412 Pathogens Isolated from Severe Bacterial
Infections Employing the Uro~Quick System", Poster, ICAAC, Washington, 30 October - 2
November 2004,
8) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in intensive care units using the Uro-
Quick System", Poster, AMCLI, Padova, 8-11 June 2004.
9) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test of Uropathogens using the Uro-Quick System directly on
urine", Poster, ASM, New Orleans, 23-27 May 2004.
10) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in ICU using the Uro-Quick System",
Poster, ECCMID, Prague, 1 -4 May 2004.
--- стр. 88 ---
Пластиковый или полистереновый штатив для флаконов поставляется производителем по
требованию только в случае использования турбидиметра.
- 60 одноразовых шприцев для работы с бульоном обогащения при получении необходимой
степени мутности по шкале МакФарлнад,
МЕРЫ ПРЕДОСТРОЖНОСТИ
Только для профессиональной диагностики in vitro.
Необходимо осторожно обращаться с лиофилизатом антибиотика: избегать попадания
вовнутрь, вдыхания, контакта с кожей, глазами и одеждой. Избегайте длительного
контакта.
Некоторые из компонентов питательных бульонов имеют животное происхождение.
Достоверное знание об источниках происхождение мяса животных и его санитарном
состоянии не гарантирует отсутствия трансмиссивных патогенных агентов. Тем не менее,
рекомендовано обращаться сданными продуктами, как с потенциально инфицированными
и, соответственно соблюдать предписанные меры предосторожности.
Необходимо использование всех предосторожностей, применяемых при работе с
Г потенциально инфекционными продуктами.
Биологические образцы, бактериальные культуры должны рассматриваться как источники
потенциальной инфекции и в отношении их должны соблюдаться меры предосторожности
в соответствии с национальными законами.
Рекомендуется использовать средства индивидуальной защиты.
Чтобы избежать нарушения качества реагентов, тщательно соблюдайте условия их
хранения.
Перед использованием каждая упаковка должна быть проверена на отсутствие видимых
повреждений.
Не используйте флаконы с повреждениями упаковки, признаками помутнения или
изменения цвета.
Не используйте реагенты после окончания срока годности.
Обращайтесь осторожно с открытыми флаконами с серебряной крышкой с
бактериальными суспензиями.
Не используйте флаконы с бульоном обогащения повторно.
Обращайтесь с флаконами как с хрупкими предметами.
Не прикасайтесь к флаконам с бульоном обогащения ниже отмеченной на них линии.
Используйте штатив для того, чтобы избежать разливания жидкостей в процессе
пипетирования или транспортировки.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
Образцы;
Флаконы, содержащие бактериальные суспензии для тестирования (флаконы из URO-QUICK
скрининг кита) или приготовленные из изолированных колоний, должны быть быстро исследованы
с одновременным охлаждением, чтобы избежать длительного пребывания при комнатной
температуре перед исследованием.
Реагенты:
- Флаконы с лиофилизированными антибиотикамидолжны содержаться в темном месте при
2-8°С, до окончания срока годности, указанной на упаковке.
Ж .
--- стр. 89 ---
Раствор для разведения должен храниться в холодильнике при 2-8°С, до окончания срока
годности, указанной на упаковке.
- Флаконы с бульоном обогащения должны храниться при 4-30 °С до окончания срока
годности.
Разведенный антибиотик должен храниться в холодильнике при 2-8°С в темноте до 7
дней.
Раствор для разведения , после первого открывания должен храниться при 2-8 °С, до
окончания срока годности, указанной на упаковке.
УТИЛИЗАЦИЯ ОТХОДОВ
Утилизация реагентов образцов, растворов для разведения и отходов является ответственностью
пользователя, в соответствии с требованиями национальных законов.
МЕТОДИКА РАЗВЕДЕНИЯ АНТИБИОТИКА
Разведите одновременно и в соответствии с вашими потребностями Реагент (А) и Реагент (В)
следующим образом:
1 . Отройте раствор реагента (В), и используя микропипетку добавьте 1000 |jL этого раствора во
флакон с лиофилизированным антибиотиком, также предварительно открытому.
2 . Аккуратно перемешайте. Это количество разведенного антибиотика позволяет произвести 6
тестов; в случае необходимости в дальнейших тестах повторите вышеописанную процедуру.
3 . Используя полученный раствор антибиотика проведите тесты; оставшийся реагент (В) должен
храниться при 2-8“С, в темном месте, не более 7 дней (напишите на этикетке флакона дату
истечения годности.
4. Перед использованием дайте флакону постоять несколько минут при комнатной температуре
или приготовьте новый раствор как это описано в п.1.
Предупреждения:
Жидкий компонент для разведения специфичен для данного антибиотика.
МЕТОДИКА ДЛЯ ПРЯМОГО ТЕСТА НА АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ
УРИНОКУЛЬТУРЫ
1 - ПОДГОТОВКА ПОЛОЖИТЕЛЬНОГО ОБРАЗЦА УРИНОКУЛЬТУРЫ
Для каждого образца, определенного как положительный на анализаторах HB&L UROQUATTRO
или ALFRED60, необходимо прежде всего проделать окраску по Граму, для дифференциации
Грам+ от Грам- и для проверки чистоты культуры. В случае полибактериальной культуры,
проведите субкультивирование для выделения колоний и проведения тестов на идентификацию и
чувствительность. В случае монокультуры, возможно непосредственное проведение теста на
антибиотикочувствительности с использованием AST кита и выбор надлежащего антибиотика в
соответствии с характеристиками микроорганизма (Грам+ или Грам-). Каждый антибиотик
инокулируется в соответствующий AST флакон.
Образцы для прямого тестирования антибитикочувствительности (монокультура) инокулируют во
флакон CAST бульоном, используя положительные бульонный уринокультуры.
Чтобы оптимизировать и стандартизировать рабочую бактериальную концентрацию для теста на
антибитикочувствительность, производят следующие операции:
а- Использование функции МакФарланд алертер,
на анализатора ALFRED60, HB&L
UROQUATTRO с программным обеспечением Version 1.1 А и выше.
Л .
--- стр. 90 ---
Если эта функция используется, прибор показывает степень мутности МакФарланду
Ыепосредственно в анализируемом образце в процессе теста. При достижении степени мутности
0.5-0.7 суспензия считается готовой для проведения теста на антибиотикочувствительность
(следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Ь - Использование турбидиметра,
на приборе ALFRED 60 с программным обеспечением Version
1.2А и выше, HB&L UROQUATTRO с программным обеспечением Version 4.0А и выше (DOS) или
1.0N и выше (Windows).
Возможно приготовление суспензий оптимизированных по МакФарлнад методом разведения
более концентрированного материала или из изолированных колоний, с использованием
турбидиметра (следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Следующая методика делается вовремя или после культурального теста:
1 - Образец в процессе анализа:
a) Когда анализ еще в процессе, выберите позицию образца и подтвердите окончание анализа для
данного образца.
b) По окончании анализа, выберите свободную позицию и подтвердите режим турбидиметра
(функция турбидиметра появляется на экране).
c) Поставьте флакон с положительным образцом в указанную прибором позицию.
d) После получения турбидиметром значения степени мутности, прибор сообщит необходимые
для разведения объемы для получения бактериальной концентрации для получения
бактериальной концентрации в пределах 0,5-0,7 по МакФарланд.
e) Для проведения разведений бульона используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-SVR). Для предотвращения образования
пузырьков внутри флакона, используйте шприц, погружая иглу глубоко в жидкость в пузырьке.
ПОЛОЖИТЕЛЬНАЯ КУЛЬТУРА
ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ ПОСЛЕ СЧИТЫВАНИЙ ТУРБИДИМЕТРА
f) По окончании сеанса турбидиметрии нажмите кнопку «exit» для получения резюме анализа
уринокультур.
2 - Образец в конце анализа:
Начните работу с инокулумом, начиная с пункта Ь) в предыдущем параграфе.
3 - Процедура подготовки образцов для теста на антимикробную чувствительность из
изолированной колонии.
Для каждого клинического образца из которого получена монокультура на чашке Петри, возьмите
2 - 3 колонии и асептически суспензируйте их во флаконе с культуральным бульоном из URO-
QUICK SCREENING кита, чтобы получить рост в бульоне.
При достижении логарифмической фазы роста бактерий (помутнение бульона), осторожно
перенесите шприцом или пипеткой во флаконы с серебряной алюминиевой крышкой из AST
МакФарлнад кита (кат.номер SI 912-SVR) количество бактериальной суспензии необходимое для
получения степени мутности 0,5-0,7 по МакФарлнад (использование турбидиметра такое же, как
это описано выше).
ЗАГРУЗКА ОБРАЗЦОВ В ПРИБОР И ПРОЦЕДУРА НАСТРОЙКИ
Подготовьте флаконы с голубой алюминиевой крышкой с AST бульоном обогащения (С), в
количестве, соответствующем количеству исследуемых антибиотиков.
--- стр. 91 ---
Каждый антибиотик имеет соответствующий ему цвет и кодировку.
Подготовьте ваш профиль антибиотиков и инокулируйте в каждый флакон (С) 100 m l инокулума,
подготовленного, как это описано выше (используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой, если использовался турбидиметр или культуральный флакон, если использовалась
функция оценки мутности по МакФарлнад) и затем инокулируйте 100 m l растворенного
антибиотика. Убедитесь, что уровень жидкости достиг линии нанесенной на флаконе (С).
Следующий флакон с золотой алюминиевой крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-
SVR) инокулируют 100 m l того же инокулума, приготовленного в соответствии с инструкциями
выше, без антибиотиков.
Данный флакон является референсным образцом для оценки бактериального роста: инокулируйте
0.1 mL образца без какого-либо антибиотика.
Предупреждения:
Каждый антибиотик идентифицируется по своему собственному цвету флакона или коду,
набираемому на клавиатуре или кнопкой на экране. Цвет или код указаны на следующих
компонентах набора:
(А) Флакон с лиофилизированным антибиотиком, (В) Жидкость для разведения антибиотика, (С)
60 флаконов с бульоном обогащения.
Цефотаксим имеет код СТХ.
В соответствии с потребностями пользователя, возможно набрать необходимую панель
антибиотиков для Грам+ или для Грам- используя программное обеспечение прибора.,
При загрузке каждого флакон (С) в прибор1з следуйте инструкциям, появляющимся на экране.
Схема, представленная ниже в графической форме, показывает процедуру загрузки и
программирования.
Образцы инокулированные с использованием скринингового бульонного теста уринокультур или
бактериальными культурами из изолированных колоний, в соответствии с выше описанными
процедурами разведения, загружаются в прибор. Результаты будут получены через 3 часа.
При завершении анализа через 3 часа, результаты выдаются в виде процента резистентных (R)
или чувствительных (S) для каждого исследованного антибиотика, в сравнении с референсными
значениями.
Пример отчета по цефотаксиму.
Перед клиническим использованием рекомендуется исключить присутствие энтерококков,
МРСА, энтеробактерий ESBL и псевдомонад.
Валидирование инокулума :
Стандартизация инокулума является важным фактором проведения теста на
чувствтительность.
Чтобы получить корректные показатели при использовании! AST-Цефотаксим кита,
рекомендуется проверить референсные значения инокулума образца.
Значения инокулума должны быть > 700.000 KOE/mL, в том случае, если они ниже прибор
выдаст сообщение “NV” (Not valid). В этом случае тест должен быть проделан повторно.
Процентные значения группируются по категориям S = Чувствительный , I = Промежуточный , R =
Резистентный.
Ж .
--- стр. 92 ---
S 1 R
S Percentage 100-65 % 65-50% 50-0%
R Percentage 0-35% 35-50% 50-100%
ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Для оценки стандартизации и контроля качества получаемых результатов проводят процедург
при помощи штаммов АТСС. Частота и модальность сессий контроля качества является
ответственностью пользователя и производится в соответствии с существующими в стране
рекомендациями.
Вследствие существующих особых ростовых характеристик образцов, подвергавшихся
процедурам стабилизации и презервации, время исследования антибиотикочувствительности для
таких образцов удлиняется до 5 часов.
Escherichia coli АТСС 25922 Staphylococcus aureus ATCC
29213
Ожидаемые результаты S S
ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДИКИ
• Для прямой оценки чувствительности: время проведения теста существенно удлиняется,
т.к. культуральный тест может оказывать влияние на характеристики образца.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: проведение теста со старыми
колониями с чашек может влиять на результаты теста.
• Длительные паузы между этапами работы (от приготовления инокулума до загрузки в
прибор) могут влиять на результаты.
• Для прямой оценки чувствительности: могут быть исследованы только образцы,
предварительно отобранные по окраске по Граму, для исключения полимикробного
роста.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: инокулум, полученный путем
смешивания разных изолированных колоний или из слабо изолированных колоний может
влиять на результаты.
ОЖИДАЕМЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
Принимая во внимание, что бактериальная резистентность может варьировать в разных
географических зонах, ожидаемые результаты прямо зависят от локальной микробной экологии
(Виды /Механизмы резистентности).
ПОКАЗАТЕЛИ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ПРИ ПРЯХ ТЕСТАХ В УРИНОКУЛЬТУРАХ
Показатели по AST-Цефотаксиму оценивались с использованием положительных образцов мочи,
содержавших следующие виды :
Escherichia spp. Proteus spp. Staphylococcus spp.
Klebsiella spp. Citrobacter spp.
Enterobacter spp. Morganella spp.
Эти образцы были получены из института микробиологии и параллельно тестировались
референсным методом Кирби-Бауэра после культивирования на чашках Петри.
УРОВЕНЬ ДОСТОВЕРНОСТИ
Ж
--- стр. 93 ---
Уровень достоверности результатов, полученных при помощи референсного метода на 87
штаммах составлял 95,4% .
“Большая ошибка” и “очень большая ошибка" в процентном отношении составляли 1,15% и 0%
соответственно.
ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ
Уровни воспроизводимости в процентном отношении (чувствительные, промежуточные,
резистентные), полученные в 8 повторностях на 2-х бактериальных штаммах составлял 100%.
ALIFAX S.P.A.
via Petrarca 2 /1 - 35020 Polverara (PD) - Italy
tel. +39 049 0992000
web site: www.alifax.com
e-mail: info@alifax.com
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1 ) Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standard for Antimicrobial
Susceptibility Testing; Eighteenth Informational Supplement. Approved Standard CLSI
Document Ml 00-SI 8, Vol. 28, No. 1 , Winkler MA et al., January, 2008.
2) Jennifer M, Andrews,
“Determination of minimum inhibitory concentrations", Journal of
Antimicrobial Chemotherapy (2001), 48, Suppi S1, 5-16.
3) Livermore D.M., Winstanley T.G., Shannon K,P,, "Interpretative reading: recognizing the unusual
and inferring resistance mechanisms from resistance phenotypes”, Journal of Antimicrobial
Chemotherapy (2001), 48, SuppI S1, 87-102,
4) Chapin K.C. and Murray P.R. “Principles of Stains and Media". Murray P.R, et a l: IVIanual of
Clinical Microbiology, 8th edition, 258-261. ASM Press 2003.
5) Jorgensen H.J. “Selection Criteria for an Antimicrobial Susceptibility Testing System", Journal of
Clinical Microbiology Nov. 1993; 31(11): 2841-2844.
6) Product References :
7) S. Roveta, A. Marchese, E.A. Debbia (Microbiology Institute, Genoa University, Italy),
"Evaluation of the Antibiotic Susceptibility on 412 Pathogens Isolated from Severe Bacterial
Infections Employing the Uro-Quick System", Poster, ICAAC, Washington, 30 October - 2
November 2004.
8) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in intensive care units using the Uro-
Quick System", Poster, AMCLI, Padova, 8-11 June 2004.
9) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test of Uropathogens using the Uro-Quick System directly on
urine", Poster, ASM, New Orleans, 23-27 May 2004.
10) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in ICU using the Uro-Quick System",
Poster, ECCMID, Prague, 1 -4 May 2004.
11) S. Roveta, E.A. Debbia, A, Marchese, (Istituto di Microbiologia, Universita di Genova),
“Evaluation of the Uroquick, a new rapid automated system, for the detection of well-
characterized antibiotic-resistant bacteria”, Journal of Chemotherapy 2004 Apr; 16(2): 107-18.
--- стр. 97 ---
Только для профессиональной диагностики in vitro.
Необходимо осторожно обращаться с лиофилизатом антибиотика: избегать попадания
вовнутрь, вдыхания, контаета с кожей, глазами и одеждой. Избегайте длительного
контакта.
Некоторые из компонентов питательных бульонов имеют животное происхождение.
Достоверное знание об источниках происхождение мяса животных и его санитарном
состоянии не гарантирует отсутствия трансмиссивных патогенных агентов. Тем не менее,
рекомендовано обращаться с данными продуктами, как с потенциально инфицированными
и, соответственно соблюдать предписанные меры предосторожности.
Необходимо использование всех предосторожностей, применяемых при работе с
потенциально инфекционными продуктами,
- Биологические образцы, бактериальные культуры должны рассматриваться как источники
потенциальной инфекции и в отношении их должны соблюдаться меры предосторожности
в соответствии с национальными законами.
Рекомендуется использовать средства индивидуальной защиты.
Чтобы избежать нарушения качества реагентов, тщательно соблюдайте условия их
хранения.
Перед использованием каждая упаковка должна быть проверена на отсутствие видимых
повреждений.
Не используйте флаконы с повреждениями упаковки, признаками помутнения или
изменения цвета.
Не используйте реагенты после окончания срока годности.
- Обращайтесь осторожно с открытыми флаконами с серебряной крышкой с
бактериальными суспензиями.
Не используйте флаконы с бульоном обогащения повторно.
Обращайтесь с флаконами как с хрупкими предметами.
Не прикасайтесь к флаконам с бульоном обогащения ниже отмеченной на них линии.
Используйте штатив для того, чтобы избежать разливания жидкостей в процессе
пипетирования или транспортировки.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
Образцы;
Флаконы, содержащие бактериальные суспензии для тестирования (флаконы из URO-OUICK
скрининг кита) или приготовленные из изолированных колоний, должны быть быстро исследованы
с одновременным охлаждением, чтобы избежать длительного пребывания при комнатной
температуре перед исследованием.
Реагенты:
- Флаконы с лиофилизированными антибиотикамидолжны содержаться в темном месте при
2'8“С, до окончания срока годности, указанной на упаковке.
Раствор для разведения должен храниться в холодильнике при 2-8°С, до окончания срока
годности, указанной на упаковке.
- Флаконы с бульоном обогащения должны храниться при 4-30 °С до окончания срока
годности.
--- стр. 98 ---
Разведенный антибиотик должен храниться в холодильнике при 2-8°С в темноте до 7
дней.
Раствор для разведения , после первого открывания должен храниться при 2-8 °С, до
окончания срока годности, указанной на упаковке.
УТИЛИЗАЦИЯ ОТХОДОВ
Утилизация реагентов образцов, растворов для разведения и отходов является ответственностью
пользователя, в соответствии с требованиями национальных законов.
МЕТОДИКА РАЗВЕДЕНИЯ АНТИБИОТИКА
Разведите одновременно и в соответствии с вашими потребностями Реагент (А) и Реагент (В)
следующим образом:
1 . Отройте раствор реагента (В), и используя микропипетку добавьте 1000 pL этого раствора во
флакон с лиофилизированным антибиотиком, также предварительно открытому.
2 . Аккуратно перемешайте. Это количество разведенного антибиотика позволяет произвести 6
тестов; в случае необходимости в дальнейших тестах повторите вышеописанную процедуру.
3 . Используя полученный раствор антибиотика проведите тесты; оставшийся реагент (В) должен
храниться при 2-8°С, в темном месте, не более 7 дней (напишите на этикетке флакона дату
истечения годности.
4. Перед использованием дайте флакону постоять несколько минут при комнатной температуре
или приготовьте новый раствор как это описано
в п.1.
Предупреждения:
Жидкий компонент для разведения специфичен для данного антибиотика.
МЕТОДИКА ДЛЯ ПРЯМОГО ТЕСТА НА АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ
УРИНОКУЛЬТУРЫ
1 - ПОДГОТОВКА ПОЛОЖИТЕЛЬНОГО ОБРАЗЦА УРИНОКУЛЬТУРЫ
Для каждого образца, определенного как положительный на анализаторах HB&L UROQUATTRO
или ALFRED60, необходимо прежде всего проделать окраску по Граму, для дифференциации
Грам+ от Грам- и для проверки чистоты культуры. В случае полибактериальной культуры,
проведите субкультивирование для выделения колоний и проведения тестов на идентификацию и
чувствительность. В случае монокультуры, возможно непосредственное проведение теста на
антибиотикочувствительности с использованием AST кита и выбор надлежащего антибиотика в
соответствии с характеристиками микроорганизма (Грам+ или Грам-). Каждый антибиотик
инокулируется в соответствующий AST флакон.
Образцы для прямого тестирования антибитикочувствительности (монокультура) инокулируют во
флакон CAST бульоном, используя положительные бульонный уринокультуры.
Чтобы оптимизировать и стандартизировать рабочую бактериальную концентрацию для теста на
антибитикочувствительность, производят следующие операции;
а- Использование функции МакФарланд алертер,
на анализатора ALFRED60, HB&L
UROQUATTRO с программным обеспечением Version 1.1 А и выше.
Если эта функция используется, прибор показывает степень мутности МакФарланду
Непосредственно в анализируемом образце в процессе теста. При достижении степени мутности
0.5-0.7 суспензия считается готовой для проведения теста на антибиотикочувствительность
(следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов),
_62.
--- стр. 99 ---
b - Использование турбидиметра, на приборе ALFRED 60 с программным обеспечением Version
1.2А и выше, HB&L UROQUATTRO с программным обеспечением Version 4.0А и выше (DOS) или
1.0N и выше (Windows).
Возможно приготовление суспензий оптимизированных по МакФарлнад методом разведения
более концентрированного материала или из изолированных колоний, с использованием
турбидиметра (следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Следующая методика делается вовремя или после культурального теста:
1 - Образец в процессе анализа:
a) Когда анализ еще в процессе, выберите позицию образца и подтвердите окончание анализа для
данного образца.
b) По окончании анализа, выберите свободную позицию и подтвердите режим турбидиметра
(функция турбидиметра появляется на экране),
c) Поставьте флакон с положительным образцом в указанную прибором позицию.
d) После получения турбидиметром значения степени мутности, прибор сообщит необходимые
для разведения объемы для получения бактериальной концентрации для получения
бактериальной концентрации в пределах 0,5-0,7 по МакФарланд.
e) Для проведения разведений бульона используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-SVR). Для предотвращения образования
пузырьков внутри флакона, используйте шприц, погружая иглу глубоко в жидкость в пузырьке,
ПОЛОЖИТЕЛЬНАЯ КУЛЬТУРА
ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ ПОСЛЕ СЧИТЫВАНИЙ ТУРБИДИМЕТРА
f) По окончании сеанса турбидиметрии нажмите кнопку «exit» для получения резюме анализа
уринокультур.
2 - Образец в конце анализа:
Начните работу с инокулумом, начиная с пункта Ь) в предыдущем параграфе,
3 - Процедура подготовки образцов для теста на антимикробную чувствительность из
изолированной колонии.
Для каждого клинического образца из которого получена монокультура на чашке Петри, возьмите
2 - 3 колонии и асептически суспензируйте их во флаконе с культуральным бульоном из URO-
QUICK SCREENING кита, чтобы получить рост в бульоне.
При достижении логарифмической фазы роста бактерий (помутнение бульона), осторожно
перенесите шприцом или пипеткой во флаконы с серебряной алюминиевой крышкой из AST
МакФарлнад кита (кат.номер 8 1 912-SVR) количество бактериальной суспензии необходимое для
получения степени мутности 0,5-0,7 по МакФарлнад (использование турбидиметра такое же, кок
это описано выше).
ЗАГРУЗКА ОБРАЗЦОВ В ПРИБОР И ПРОЦЕДУРА НАСТРОЙКИ
Подготовьте флаконы с голубой алюминиевой крышкой с AST бульоном обогащения (С), в
количестве, соответствующем количеству исследуемых антибиотиков.
Каждый антибиотик имеет соответствующий ему цвет и кодировку.
Подготовьте ваш профиль антибиотиков и инокулируйте в каждый флакон (С) 100 m l инокулума,
подготовленного, как это описано выше (используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой, если использовался турбидиметр или культуральный флакон, если использовалась
--- стр. 100 ---
функция оценки мутности по МакФарлнад) и затем инокулируйте 100 m l растворенного
антибиотика. Убедитесь, что уровень жидкости достиг линии нанесенной на флаконе (С).
Следующий флакон с золотой алюминиевой крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-
SVR) инокулируют 100 m l того же инокулума, приготовленного в соответствии с инструкциями
выше, без антибиотиков.
Данный флакон является референсным образцом для оценки бактериального роста; инокулируйте
0.1 mL образца без какого-либо антибиотика.
Предупреждения:
Каждый антибиотик идентифицируется по своему собственному цвету флакона или коду,
набираемому на клавиатуре или кнопкой на экране. Цвет или код указаны на следующих
компонентах набора:
(А) Флакон с лиофилизированным антибиотиком, (В) Жидкость для разведения антибиотика, (С)
60 флаконов с бульоном обогащения.
Флакон с Цефокситимом имеет этикетку с кодом FXC.
В соответствии с потребностями пользователя, возможно набрать необходимую панель
антибиотиков для Грам+ или для Грам- используя программное обеспечение прибора..
При загрузке каждого флакон (С) в прибор1з следуйте инструкциям, появляющимся на экране.
Схема, представленная ниже в графической форме, показывает процедуру загрузки и
программирования.
Образцы инокулированные с использованием скринингового бульонного теста уринокультур или
бактериальными культурами из изолированных колоний, в соответствии с выше описанными
процедурами разведения, загружаются в прибор. Результаты будут получены через 3 часа.
При завершении анализа через 3 часа, результаты выдаются в виде процента резистентных (R)
или чувствительных (S) для каждого исследованного антибиотика, в сравнении с референсными
значениями.
Пример отчета по цефокситиму.
Перед клиническим использованием рекомендуется исключить присутствие Грам-
отрицательных бактерий и энтерококков.
Валидирование инокулума :
Стандартизация инокулума является важным фактором проведения теста на
чувствтительность.
Чтобы получить корректные показатели при использовании! AST-Цефокситим кита,
рекомендуется проверить референсные значения инокулума образца.
Значения инокулума должны быть > 700.000 KOE/mL, в том случае, если они ниже прибор
выдаст сообщение “NV” (Not valid). В этом случае тест должен быть проделан повторно.
Процентные значения группируются по категориям S = Чувствительный , I = Промежуточный , R '
Резистентный.
S 1 R
S Percentage 100-65% 65-50% 50-0%
R Percentage 0-35% 35-50% 50-100%
ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
--- стр. 101 ---
Для оценки стандартизации и контроля качества получаемых результатов проводят процедуры
при помощи штаммов АТСС. Частота и модальность сессий контроля качества является
ответственностью пользователя и производится в соответствии с существующими в стране
рекомендациями.
Вследствие существующих особых ростовых характеристик образцов, подвергавшихся
процедурам стабилизации и презервации, время исследования антибиотикочувствительности для
таких образцов удлиняется до 5 часов.
Staphvlococcus eptdermidis
АТСС 12228
Staphylococcus aureus АТСС
29213
Ожидаемые результаты S S
ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДИКИ
• Для прямой оценки чувствительности: время проведения теста существенно удлиняется,
т.к. культуральный тест может оказывать влияние на характеристики образца.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: проведение теста со старыми
колониями с чашек может влиять на результаты теста,
• Длительные паузы между этапами работы (от приготовления инокулума до загрузки в
прибор) могут влиять на результаты.
• Для прямой оценки чувствительности: могут быть исследованы только образцы,
предварительно отобранные по окраске по Граму, для исключения полимикробного
роста.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: инокулум, полученный путем
смешивания разных изолированных колоний или из слабо изолированных колоний может
влиять на результаты.
ОЖИДАЕМЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
Принимая во внимание, что бактериальная резистентность может варьировать в разных
географических зонах, ожидаемые результаты прямо зависят от локальной микробной экологии
(Виды /Механизмы резистентности).
ПОКАЗАТЕЛИ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ПРИ ПРЯХ ТЕСТАХ В УРИНОКУЛЬТУРАХ
Показатели по AST-Цефрокситиму оценивались с использованием положительных образцов мочи,
содержавших следующие виды :
Escherichia spp. Proteus spp. Staphylococcus spp.
Klebsiella spp. Citrobacter spp.
Enterobacter spp. Morganella spp.
Эти образцы были получены из института микробиологии и параллельно тестировались
референсным методом Кирби-Бауэра после культивирования на чашках Петри.
УРОВЕНЬ ДОСТОВЕРНОСТИ
Уровень достоверности результатов, полученных при помощи референсного метода на 2400
штаммах составлял 10093% .
“Большая ошибка” и “очень большая ошибка” в процентном отношении составляли 03% и 03%
соответственно.
ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ
--- стр. 102 ---
Уровни воспроизводимости в процентном отношении (чувствительные, промежуточные,
резистентные), полученные в 8 повторностях на 2-х бактериальных штаммах составлял 100%.
ALIFAX S.p.A.
via Petrarca 2 /1 - 35020 Polverara (PD) - Italy
tel. +39 049 0992000
web site: www.alifax.com
e-mail: info@alifax.com
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1 ) Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standard for Antimicrobial
Susceptibility Testing; Eighteenth Informational Supplement. Approved Standard CLSI
Document M100-S18, Vol. 28, No. 1 , Winkler MA et al,, January, 2008.
2) Jennifer M. Andrews, “Determiation of minimum inhibitory concentrations", Journal of
Antimicrobial Chemotherapy (2001), 48, SuppI S1, 5-16.
3) Livermore D.M., Winstanley T.G., Shannon K.P., “interpretative reading: recognizing the ипизиа!
and inferring resistance mechanisms from resistance phenotypes", Journal of Antimicrobial
Chemotherapy (2001), 48, SuppI S1, 87-102.
4) Chapin K.C, and Murray P.R. “Principles of Stains and Media". Murray P.R. et a l: Manual of
Clinical Microbiology, 8th edition, 258-261. ASM Press 2003
5) Jorgensen H.J. "Selection Criteria for an Antimicrobial Susceptibility Testing System", Journal of
Clinical Microbiology Nov. 1993; 31(11): 2841-2844.
6) Product References :
7) S. Roveta, A. Marchese, E.A. Debbia (Microbiology Institute, Genoa University, Italy),
"Evaluation of the Antibiotic Susceptibility on 412 Pathogens Isolated from Severe Bacterial
Infections Employing the Uro-Quick System", Poster, ICAAC, Washington, 30 October - 2
November 2004.
8) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in intensive care units using the Uro-
Quick System", Poster, AMCLI, Padova, 8-11 June 2004.
9) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test of Uropathogens using the Uro-Quick System directly on
urine", Poster, ASM, New Orleans, 23-27 May 2004.
10) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E,A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in ICU using the Uro-Quick System",
Poster, ECCMID, Prague, 1 -4 May 2004.
11) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, Universita di Genova),
“Evaluation of the Uroquick, a new rapid automated system, for the detection of well-
characterized antibiotic-resistant bacteria”, Journal of Chemotherapy 2004 Apr; 16(2): 107-18.
12) S. Roveta, E.A, Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, Universita di Genova),
"Esecuzione rapida di antibiogrammi su campioni di urine mediante sistema Uro-quick", Poster,
National Congress SIM, Rome, 19-21 October 2003.
/ГУ
--- стр. 106 ---
Только для профессиональной диагностики in vitro.
Необходимо осторожно обращаться с лиофилизатом антибиотика: избегать попадания
вовнутрь, вдыхания, контакта с кожей, глазами и одеждой. Избегайте длительного
контакта.
Некоторые из компонентов питательных бульонов имеют животное происхождение.
Достоверное знание об источниках происхождение мяса животных и его санитарном
состоянии не гарантирует отсутствия трансмиссивных патогенных агентов. Тем не мекэе,
рекомендовано обращаться с данными продуктами, как с потенциально инфицированными
и, соответственно соблюдать предписанные меры предосторожности.
Необходимо использование всех предосторожностей, применяемых при работе с
потенциально инфекционными продуктами.
Биологические образцы, бактериальные культуры должны рассматриваться как источники
потенциальной инфекции и в отношении их должны соблюдаться меры предосторожности
в соответствии с национальными законами.
Рекомендуется использовать средства индивидуальной защиты.
Чтобы избежать нарушения качества реагентов, тщательно соблюдайте условия их
хранения.
Перед использованием каждая упаковка должна быть проверена на отсутствие видимых
повреждений.
Не используйте флаконы с повреждениями упаковки, признаками помутнения или
изменения цвета.
Не используйте реагенты после окончания срока годности.
- Обращайтесь осторожно с открытыми флаконами с серебряной крышкой с
бактериальными суспензиями.
Не используйте флаконы с бульоном обогащения повторно.
Обращайтесь с флаконами как с хрупкими предметами.
Не прикасайтесь к флаконам с бульоном обогащения ниже отмеченной на них линии.
Используйте штатив для того, чтобы избежать разливания жидкостей в процессе
пипетирования или транспортировки.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
Образцы:
Флаконы, содержащие бактериальные суспензии для тестирования (флаконы из URO-QUICK
скрининг кита) или приготовленные из изолированных колоний, должны быть быстро исследованы
с одновременным охлаждением, чтобы избежать длительного пребывания при комнатной
температуре перед исследованием.
Реагенты:
- Флаконы с лиофилизированными антибиотикамидолжны содержаться в темном месте при
2-8°С, до окончания срока годности, указанной на упаковке.
Раствор для разведения должен храниться в холодильнике при 2-8°С, до окончания срока
годности, указанной на упаковке.
- Флаконы с бульоном обогащения должны храниться при 4-30 °С до окончания срока
годности.
--- стр. 107 ---
Разведенный антибиотик должен храниться в холодильнике при 2-8°С в темноте до 7
дней.
Раствор для разведения , после первого открывания должен храниться при 2-8 °С, до
окончания срока годности, указанной на упаковке.
УТИЛИЗАЦИЯ ОТХОДОВ
Утилизация реагентов образцов, растворов для разведения и отходов является ответственностью
пользователя, в соответствии с требованиями национальных законов.
МЕТОДИКА РАЗВЕДЕНИЯ АНТИБИОТИКА
Разведите одновременно и в соответствии с вашими потребностями Реагент (А) и Реагент (В)
следующим образом:
1 . Отройте раствор реагента (В), и используя микропипетку добавьте 1000 |jL этого раствора во
флакон с лиофилизированным антибиотиком, также предварительно открытому.
2 . Аккуратно перемешайте. Это количество разведенного антибиотика позволяет произвести 6
тестов; в случае необходимости в дальнейших тестах повторите вышеописанную процедуру.
3 . Используя полученный раствор антибиотика проведите тесты; оставшийся реагент (В) должен
храниться при 2-8°С, в темном месте, не более 7 дней (напишите на этикетке флакона дату
истечения годности.
4. Перед использованием дайте флакону постоять несколько минут при комнатной температуре
или приготовьте новый раствор как это описано в п.1.
Предупреждения:
Жидкий компонент для разведения специфичен для данного антибиотика.
МЕТОДИКА ДЛЯ ПРЯМОГО ТЕСТА НА АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ
УРИНОКУЛЬТУРЫ
1 - ПОДГОТОВКА ПОЛОЖИТЕЛЬНОГО ОБРАЗЦА УРИНОКУЛЬТУРЫ
Для каждого образца, определенного как положительный на анализаторах HB&L UROQUATTRO
или ALFRED60, необходимо прежде всего проделать окраску по Граму, для дифференциации
Грам+ от Грам- и для проверки чистоты культуры. В случае полибактериальной культуры,
проведите субкультивирование для выделения колоний и проведения тестов на идентификацию и
чувствительность. В случае монокультуры, возможно непосредственное проведение теста на
антибиотикочувствительности с использованием AST кита и выбор надлежащего антибиотика в
соответствии с характеристиками микроорганизма (Грам+ или Г рам-). Каждый антибиотик
инокулируется в соответствующий AST флакон.
Образцы для прямого тестирования антибитикочувствительности (монокультура) инокулируют во
флакон с AST бульоном, используя положительные бульонный уринокультуры.
Чтобы оптимизировать и стандартизировать рабочую бактериальную концентрацию для теста на
антибитикочувствительность, производят следующие операции:
а- Использование функции МакФарланд алертер,
на анализатора ALFRED60, HB&L
UROQUATTRO с программным обеспечением Version 1.1А и выше.
Если эта функция используется, прибор показывает степень мутности МакФарланду
Непосредственно в анализируемом образце в процессе теста. При достижении степени мутности
0,5-0.7 суспензия считается готовой для проведения теста на антибиотикочувствительность
(следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
--- стр. 108 ---
b - Использование турбидиметра, на приборе ALFRED60 с программным обеспечением Version
1.2А и выше, HB&L UROQUATTRO с программным обеспечением Version 4.0А и выше (DOS) или
1.0N и выше (Windows).
Возможно приготовление суспензий оптимизированных по МакФарлнад методом разведения
более концентрированного материала или из изолированных колоний, с использованием
турбидиметра (следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Следующая методика делается вовремя или после культурального теста;
1 - Образец в процессе анализа:
a) Когда анализ еще в процессе, выберите позицию образца и подтвердите окончание анализо для
данного образца.
b) По окончании анализа, выберите свободную позицию и подтвердите режим турбидиметра
(функция турбидиметра появляется на экране).
c) Поставьте флакон с положительным образцом в указанную прибором позицию.
d) После получения турбидиметром значения степени мутности, прибор сообщит необходимые
для разведения объемы для получения бактериальной концентрации для получения
бактериальной концентрации в пределах 0,5-0,7 по МакФарланд.
e) Для проведения разведений бульона используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-SVR). Для предотвращения образования
пузырьков внутри флакона, используйте шприц, погружая иглу глубоко в жидкость в пузырьке.
ПОЛОЖИТЕЛЬНАЯ КУЛЬТУРА
ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ ПОСЛЕ СЧИТЫВАНИЙ ТУРБИДИМЕТРА
f) По окончании сеанса турбидиметрии нажмите кнопку «exit» для получения резюме анализа
уринокультур.
2 - Образец в конце анализа:
Начните работу с инокулумом, начиная с пункта Ь) в предыдущем параграфе.
3 - Процедура подготовки образцов для теста на антимикробную чувствительность из
изолированной колонии.
Для каждого клинического образца из которого получена монокультура на чашке Петри, возьмите
2 - 3 колонии и асептически суспензируйте их во флаконе с культуральным бульоном из URO-
QUICK SCREENING кита, чтобы получить рост в бульоне.
При достижении логарифмической фазы роста бактерий (помутнение бульона), осторожно
перенесите шприцом или пипеткой во флаконы с серебряной алюминиевой крышкой из AST
МакФарлнад кита (кат.номер SI 912-SVR) количество бактериальной суспензии необходимое для
получения степени мутности 0,5-0,7 по МакФарлнад (использование турбидиметра такое же, как
это описано выше).
ЗАГРУЗКА ОБРАЗЦОВ В ПРИБОР И ПРОЦЕДУРА НАСТРОЙКИ
Подготовьте флаконы с голубой алюминиевой крышкой с AST бульоном обогащения (С), в
количестве, соответствующем количеству исследуемых антибиотиков.
Каждый антибиотик имеет соответствующий ему цвет и кодировку.
Подготовьте ваш профиль антибиотиков и инокулируйте в каждый флакон (С) 100 m l инокулума,
подготовленного, как это описано выше (используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой, если использовался турбидиметр или культуральный флакон, если использовалась
--- стр. 109 ---
функция оценки мутности по МакФарлнад) и затем инокулируйте 100 m l растворенного
антибиотика. Убедитесь, что уровень жидкости достиг линии нанесенной на флаконе (С).
Следующий флакон с золотой алюминиевой крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-
SVR) инокулируют 100 ml того же инокулума, приготовленного в соответствии с инструкциями
выше, без антибиотиков.
Данный флакон является референсным образцом для оценки бактериального роста: инокулируйте
0.1 mL образца без какого-либо антибиотика.
Предупреждения.
Каждый антибиотик идентифицируется по своему собственному цвету флакона или коду,
набираемому на клавиатуре или кнопкой на экране. Цвет или код указаны на следующих
компонентах набора:
(А) Флакон с лиофилизированным антибиотиком, (В) Жидкость для разведения антибиотика, (С)
60 флаконов с бульоном обогащения.
Флакон с Цефокситимом имеет этикетку с кодом FXC.
В соответствии с потребностями пользователя, возможно набрать необходимую панель
антибиотиков для Грам+ или для Грам- используя программное обеспечение прибора..
При загрузке каждого флакон (С) в прибор1з следуйте инструкциям, появляющимся на экране.
Схема, представленная ниже в графической форме, показывает процедуру загрузки и
программирования.
Образцы инокулированные с использованием скринингового бульонного теста уринокультур или
бактериальными культурами из изолированных колоний, в соответствии с выше описанными
процедурами разведения, загружаются в прибор. Результаты будут получены через 3 часа.
При завершении анализа через 3 часа, результаты выдаются в виде процента резистентных (R)
или чувствительных (S) для каждого исследованного антибиотика, в сравнении с референсныг-и
значениями.
Пример отчета по цефокситиму.
Перед клиническим использованием рекомендуется исключить присутствие Грам-
отрицательных бактерий и энтерококков.
Валидирование инокулума :
Стандартизация инокулума является важным фактором проведения теста на
чувствтительность.
Чтобы получить корректные показатели при использовании1 AST-Цефокситим кита,
рекомендуется проверить референсные значения инокулума образца.
Значения инокулума должны быть > 700.000 KOE/mL, в том случае, если они ниже прибор
выдаст сообщение “NV” (Not valid). В этом случае тест должен быть проделан повторно.
Процентные значения группируются по категориям S = Чувствительный , I = Промежуточный , R =
Резистентный.
S 1 R
S Percentage 100-65 % 65-50% 50-0%
R Percentaqe 0-35% 35-50% 50-100%
ВНУТРЕННИМ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Упл
--- стр. 110 ---
Для оценки стандартизации и контроля качества получаемых результатов проводят процедуры
при помощи штаммов АТСС. Частота и модальность сессий контроля качества является
ответственностью пользователя и производится в соответствии с существующими в стране
рекомендациями.
Вследствие существующих особых ростовых характеристик образцов, подвергавшихся
процедурам стабилизации и презервации, время исследования антибиотикочувствительности для
таких образцов удлиняется до 5 часов.
Staphvlococcus eoidermidis
АТСС 12228
Staphylococcus aureus АТСС
29213
Ожидаемые результаты S S
ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДИКИ
• Для прямой оценки чувствительности: время проведения теста существенно удлиняется,
т.к. культуральный тест может оказывать влияние на характеристики образца.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: проведение теста со старыми
колониями с чашек может влиять на результаты теста.
• Длительные паузы между этапами работы (от приготовления инокулума до загрузки в
прибор) могут влиять на результаты.
• Для прямой оценки чувствительности: могут быть исследованы только образцы,
предварительно отобранные по окраске по Граму, для исключения полимикробного
роста.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: инокулум, полученный путем
смешивания разных изолированных колоний или из слабо изолированных колоний может
влиять на результаты.
ОЖИДАЕМЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
Принимая во внимание, что бактериальная резистентность может варьировать в разных
географических зонах, ожидаемые результаты прямо зависят от локальной микробной экологии
(Виды /Механизмы резистентности).
ПОКАЗАТЕЛИ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ПРИ ПРЯХ ТЕСТАХ В УРИНОКУЛЬТУРАХ
Показатели по AST-Цефрокситиму оценивались с использованием положительных образцов мочи,
содержавших следующие виды :
Escherichia spp. Proteus spp. Staphylococcus spp.
Klebsiella spp. Citrobacter spp.
Enterobacter spp. Morganella spp.
Эти образцы были получены из института микробиологии и параллельно тестировались
референсным методом Кирби-Бауэра после культивирования на чашках Петри.
УРОВЕНЬ ДОСТОВЕРНОСТИ
Уровень достоверности результатов, полученных при помощи референсного метода на 24^0
штаммах составлял 100Qg% .
“Большая ошибка” и “очень большая ошибка” в процентном отношении составляли 03% и 02%
соответственно.
ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ
--- стр. 111 ---
уровни воспроизводимости в процентном отношении (чувствительные, промежуточные,
резистентные), полученные в 8 повторностях на 2-х бактериальных штаммах составлял 100%,
ALIFAX S.p.A.
via Petrarca 2 /1 - 35020 Polverara (PD) - Italy
tel, + 39 049 0992000
web site: www.alifax.com
e-mail: info@alifax.com
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1 ) Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standard for Antimicrobial
Susceptibility Testing; Eighteenth Informational Supplement. Approved Standard CLSI
Document M100-S18, Vol. 28, No. 1 , Winkler MA et al,, January, 2008.
2) Jennifer M. Andrews, “Determiation of minimum inhibitory concentrations", Journal of
Antimicrobial Chemotherapy (2001), 48, SuppI S1, 5-16
3) Livermore D.M., Winstanley T.G., Shannon K.P., "Interpretative reading: recognizing the unusual
and inferring resistance mechanisms from resistance phenotypes’’, Journal of Antimicrobial
Chemotherapy (2001), 48, SuppI S1, 87-102.
4) Chapin K.C. and Murray P,R. “Principles of Stains and Media”. Murray P.R. et a l: Manual o ."
Clinical Microbiology, 8th edition, 258-261. ASM Press 2003.
5) Jorgensen H.J. “Selection Criteria for an Antimicrobial Susceptibility Testing System", Journal of
Clinical Microbiology Nov. 1993; 31(11): 2841-2844.
6) Product References :
7) S. Roveta, A. Marchese, E.A. Debbia (Microbiology Institute, Genoa University, Italy),
"Evaluation of the Antibiotic Susceptibility on 412 Pathogens Isolated from Severe Bacterial
Infections Employing the Uro-Quick System", Poster, ICAAC, Washington, 30 October - 2
November 2004.
8) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in intensive care units using the Uro-
Quick System", Poster, AMCLI, Padova, 8-11 June 2004.
9) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test of Uropathogens using the Uro-Quick System directly on
urine", Poster, ASM, New Orleans, 23-27 May 2004.
10) S. Roveta, F. Cavallini, A, Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in ICU using the Uro-Quick System",
Poster, ECCMID, Prague, 1 -4 May 2004.
11) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, University di Genova),
“Evaluation of the Uroquick, a new rapid automated system, for the detection of well-
characterized antibiotic-resistant bacteria’’, Journal of Chemotherapy 2004 Apr; 16(2): 107-18.
12) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, Universita di Genova),
“Esecuzione rapida di antibiogrammi su campioni di urine mediante sistema Uro-quick’’, Poster,
National Congress SIM, Rome, 19-21 October 2003.
--- стр. 115 ---
Необходимо осторожно обращаться с лиофилизатом антибиотика: избегать попаданиь
вовнутрь, вдыхания, контакта с кожей, глазами и одеждой. Избегайте длительного
контакта.
Некоторые из компонентов питательных бульонов имеют животное происхождение.
Достоверное знание об источниках происхождение мяса животных и его санитарном
состоянии не гарантирует отсутствия трансмиссивных патогенных агентов. Тем не менее,
рекомендовано обращаться сданными продуетами, как с потенциально инфицированными
и, соответственно соблюдать предписанные меры предосторожности.
Необходимо использование всех предосторожностей, применяемых при работе с
потенциально инфекционными продуктами.
Биологические образцы, бактериальные культуры должны рассматриваться как источники
потенциальной инфекции и в отношении их должны соблюдаться меры предосторожности
в соответствии с национальными законами.
Рекомендуется использовать средства индивидуальной защиты.
Чтобы избежать нарушения качества реагентов, тщательно соблюдайте условия их
хранения.
Перед использованием каждая упаковка должна быть проверена на отсутствие видимых
повреждений.
Не используйте флаконы с повреждениями упаковки, признаками помутнения или
изменения цвета.
Не используйте реагенты после окончания срока годности.
- Обращайтесь осторожно с открытыми флаконами с серебряной крышкой с
бактериальными суспензиями.
Не используйте флаконы с бульоном обогащения повторно.
Обращайтесь с флаконами как с хрупкими предметами.
Не прикасайтесь к флаконам с бульоном обогащения ниже отмеченной на них линии.
Используйте штатив для того, чтобы избежать разливания жидкостей в процессе
пипетирования или транспортировки.
Г ' УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
Образцы:
Флаконы, содержащие бактериальные суспензии для тестирования (флаконы из URO-QUICK
скрининг кита) или приготовленные из изолированных колоний, должны быть быстро исследованы
с одновременным охлаждением, чтобы избежать длительного пребывания при комнатной
температуре перед исследованием.
Реагенты;
- Флаконы с лиофилизированными антибиотикамидолжны содержаться в темном месте при
2-8°С, до окончания срока годности, указанной на упаковке.
Раствор для разведения должен храниться в холодильнике при 2-8°С, до окончания срока
годности, указанной на упаковке.
- Флаконы с бульоном обогащения должны храниться при 4-30 °С до окончания срока
годности.
- Разведенный антибиотик должен храниться в холодильнике при 2-8°С в темноте до 7
дней.
--- стр. 116 ---
- Раствор для разведения , после первого открывания должен храниться при 2-8 °С, до
окончания срока годности, указанной на упаковке.
УТИЛИЗАЦИЯ ОТХОДОВ
Утилизация реагентов образцов, растворов для разведения и отходов является ответственностью
пользователя, в соответствии с требованиями национальных законов.
МЕТОДИКА РАЗВЕДЕНИЯ АНТИБИОТИКА
Разведите одновременно и в соответствии с вашими потребностями Реагент (А) и Реагент (В)
следующим образом:
1 . Отройте раствор реагента (В), и используя микропипетку добавьте 1000 pL этого раствора во
флакон с лиофилизированным антибиотиком, также предварительно открытому.
2 . Аккуратно перемешайте. Это количество разведенного антибиотика позволяет произвести 6
тестов; в случае необходимости в дальнейших тестах повторите вышеописанную процедуру.
3 . Используя полученный раствор антибиотика проведите тесты; оставшийся реагент (В) должен
храниться при 2-8°С, в темном месте, не более 7 дней (напишите на этикетке флакона дату
истечения годности.
4. Перед использованием дайте флакону постоять несколько минут при комнатной температуре
или приготовьте новый раствор как это описано в п.1.
Предупреждения:
Жидкий компонент для разведения специфичен для данного антибиотика.
МЕТОДИКА ДЛЯ ПРЯМОГО ТЕСТА НА АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ
УРИНОКУЛЬТУРЫ
1 - ПОДГОТОВКА ПОЛОЖИТЕЛЬНОГО ОБРАЗЦА УРИНОКУЛЬТУРЫ
Для каждого образца, определенного как положительный на анализаторах HB&L UROQUATTRO
или ALFRED60, необходимо прежде всего проделать окраску по Граму, для дифференциации
Грам+ от Грам- и для проверки чистоты культуры. В случае полибактериальной культуры,
проведите субкультивирование для выделения колоний и проведения тестов на идентификацию и
чувствительность. В случае монокультуры, возможно непосредственное проведение теста на
антибиотикочувствительности с использованием AST кита и выбор надлежащего антибиотика в
соответствии с характеристиками микроорганизма (Грам+ или Грам-). Каждый антибиотик
инокулируется в соответствующий AST флакон.
Образцы для прямого тестирования антибитикочувствительности (монокультура) инокулируют во
флакон с AST бульоном, используя положительные бульонный уринокультуры.
Чтобы оптимизировать и стандартизировать рабочую бактериальную концентрацию для теста на
антибитикочувствительность, производят следующие операции:
а- Использование функции МакФарланд алертер,
на анализатора ALFRED60, HB&L
UROQUATTRO с программным обеспечением Version 1.1А и выше.
Если эта функция используется, прибор показывает степень мутности МакФарланду
1непосредственно в анализируемом образце в процессе теста. При достижении степени мутности
0.5-0.7 суспензия считается готовой для проведения теста на антибиотикочувствительность
(следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
--- стр. 117 ---
b - Использование турбидиметра, на приборе ALFRED60 с программным обеспечением Version
1.2А и выше, HB&L UROQUATTRO с программным обеспечением Version 4.0А и выше (DOS) или
1.0N и выше (Windows).
Возможно приготовление суспензий оптимизированных по МакФарлнад методом разведения
более концентрированного материала или из изолированных колоний, с использованием
турбидиметра (следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Следующая методика делается вовремя или после культурального теста:
1 - Образец в процессе анализа:
a) Когда анализ еще в процессе, выберите позицию образца и подтвердите окончание анализа для
данного образца.
b) По окончании анализа, выберите свободную позицию и подтвердите режим турбидиметра
(функция турбидиметра появляется на экране).
c) Поставьте флакон с положительным образцом в указанную прибором позицию.
d) После получения турбидиметром значения степени мутности, прибор сообщит необходимые
для разведения объемы для получения бактериальной концентрации для получения
бактериальной концентрации в пределах 0,5-0,7 по МакФарланд.
e) Для проведения разведений бульона используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер S1 912-SVR). Для предотвращения образования
пузырьков внутри флакона, используйте шприц, погружая иглу глубоко в жидкость в пузырьке.
ПОЛОЖИТЕЛЬНАЯ КУЛЬТУРА
ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ ПОСЛЕ СЧИТЫВАНИЙ ТУРБИДИМЕТРА
f) По окончании сеанса турбидиметрии нажмите кнопку «exit» для получения резюме анализа
уринокультур.
2 - Образец в конце анализа:
Начните работу с инокулумом, начиная с пункта Ь) в предыдущем параграфе.
3 - Процедура подготовки образцов для теста на антимикробную чувствительность из
изолированной колонии.
Для каждого клинического образца из которого получена монокультура на чашке Петри, возьмите
2 - 3 колонии и асептически суспензируйте их во флаконе с культуральным бульоном из URO-
QUICK SCREENING кита, чтобы получить рост в бульоне.
При достижении логарифмической фазы роста бактерий (помутнение бульона), осторожно
перенесите шприцом или пипеткой во флаконы с серебряной алюминиевой крышкой из AST
МакФарлнад кита (кат.номер SI 912-SVR) количество бактериальной суспензии необходимое для
получения степени мутности 0,5-0,7 по МакФарлнад (использование турбидиметра такое же, как
это описано выше).
ЗАГРУЗКА ОБРАЗЦОВ В ПРИБОР И ПРОЦЕДУРА НАСТРОЙКИ
Подготовьте флаконы с голубой алюминиевой крышкой с AST бульоном обогащения (С), в
количестве, соответствующем количеству исследуемых антибиотиков.
Каждый антибиотик имеет соответствующий ему цвет и кодировку.
Подготовьте ваш профиль антибиотиков и инокулируйте в каждый флакон (С) 100 ml инокулума,
подготовленного, как это описано выше (используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой, если использовался турбидиметр или культуральный флакон, если использовалась
--- стр. 118 ---
функция оценки мутности по МакФарлнад) и затем инокулируйте 100 m l растворенного
антибиотика. Убедитесь, что уровень жидкости достиг линии нанесенной на флаконе (С).
Следующий флакон с золотой алюминиевой крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-
SVR) инокулируют 100 m l того же инокулума, приготовленного в соответствии с инструкциями
выше, без антибиотиков.
Данный флакон является референсным образцом для оценки бактериального роста: инокулируйте
0.1 mL образца без какого-либо антибиотика.
Предупреждения.
Каждый антибиотик идентифицируется по своему собственному цвету флакона или коду,
набираемому на клавиатуре или кнопкой на экране. Цвет или код указаны на следующих
компонентах набора:
(А) Флакон с лиофилизированным антибиотиком, (В) Жидкость для разведения антибиотика, (С)
60 флаконов с бульоном обогащения.
Флакон с оксациллин имеет этикетку цвета азур.
В соответствии с потребностями пользователя, возможно набрать необходимую панель
антибиотиков для Грам+ или для Грам- используя программное обеспечение прибора..
При загрузке каждого флакон (С) в прибор1з следуйте инструкциям, появляющимся на экране.
Схема, представленная ниже в графической форме, показывает процедуру загрузки и
программирования.
Образцы инокулированные с использованием скринингового бульонного теста уринокультур или
бактериальными культурами из изолированных колоний, в соответствии с выше описанными
процедурами разведения, загружаются в прибор. Результаты будут получены через 3 часа.
При завершении анализа через 3 часа, результаты выдаются в виде процента резистентных (R)
или чувствительных (S) для каждого исследованного антибиотика, в сравнении с референсными
значениями.
Пример отчета по оксациллину.
Перед клиническим использованием необходимо исключить положительную идентификацию Грам-
отрицательных бактерий и энтерококков.
Валидирование инокулума :
Стандартизация инокулума является важным фактором проведения теста на
чувствтительность.
Чтобы получить корректные показатели при использовании! AST-Оксациллин кита,
рекомендуется проверить референсные значения инокулума образца.
Значения инокулума должны быть > 700.000 KOE/mL, в том случае, если они ниже прибор
выдаст сообщение “NV” (Not valid). В этом случае тест должен быть проделан повторно.
Процентные значения группируются по категориям S = Чувствительный , I = Промежуточный , R =
Резистентный.
S 1 R
S Percentaqe 100-65 % 65-50% 50-0%
R Percentaqe 0-35% 35-50% 50-100%
ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
--- стр. 119 ---
Для оценки стандартизации и контроля качества получаемых результатов проводят процедуры
при помощи штаммов АТСС. Частота и модальность сессий контроля качества является
ответственностью пользователя и производится в соответствии с существующими в стране
рекомендациями.
Вследствие существующих особых ростовых характеристик образцов, подвергавшихся
процедурам стабилизации и презервации, время исследования антибиотикочувствительности для
таких образцов удлиняется до 5 часов.
Escherichia coli АТСС 25922 Staphylococcus aureus АТСС
29213
Ожидаемые результаты S S
ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДИКИ
• Для прямой оценки чувствительности: время проведения теста существенно удлиняется,
т.к. культуральный тест может оказывать влияние на характеристики образца.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: проведение теста со старыми
колониями с чашек может влиять на результаты теста.
• Длительные паузы между этапами работы (от приготовления инокулума до загрузки в
прибор) могут влиять на результаты.
• Для прямой оценки чувствительности: могут быть исследованы только образцы,
предварительно отобранные по окраске по Граму, для исключения полимикробного
роста.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: инокулум, полученный путем
смешивания разных изолированных колоний или из слабо изолированных колоний может
влиять на результаты.
ОЖИДАЕМЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
Принимая во внимание, что бактериальная резистентность может варьировать в разных
географических зонах, ожидаемые результаты прямо зависят от локальной микробной экологии
(Виды /Механизмы резистентности).
ПОКАЗАТЕЛИ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ПРИ ПРЯХ ТЕСТАХ В УРИНОКУЛЬТУРАХ
Показатели по AST-Оксациллину оценивались с использованием положительных образцов мочи,
содержавших следующие виды :
Escherichia spp. Proteus spp. Staphylococcus spp.
Klebsiella spp. Citrobacter spp.
Enterobacter spp. Morganella spp.
Эти образцы были получены из института микробиологии и параллельно тестировались
референсным методом Кирби-Бауэра после культивирования на чашках Петри.
УРОВЕНЬ ДОСТОВЕРНОСТИ
Уровень достоверности результатов, полученных при помощи референсного метода на 98
штаммах составлял 97,96% .
“Большая ошибка" и “очень большая ошибка” в процентном отношении составляли 0% и 0%
соответственно.
ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ
--- стр. 120 ---
Уровни воспроизводимости в процентном отношении (чувствительные, промежуточные,
резистентные), полученные в 7 повторностях на 2-х бактериальных штаммах составлял 100%.
ALIFAX S.p.A.
via Petrarca 2 /1 - 35020 Polverara (PD) - Italy
tel. + 39 049 0992000
web site: www.alifax.com
e-mail: info@alifax.com
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1 ) Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standard for Antimicrobial
Susceptibility Testing; Eighteenth Informational Supplement. Approved Standard CLSI
Document M100-S18, Vol. 28, No. 1 , Winkler MA et al., January, 2008.
2) Jennifer M. Andrews, “ Determination of minimum inhibitory concentrations", Journal of
Antimicrobial Chemotherapy (2001), 48, SuppI S1, 5-16
3) Livermore D.M., Winstanley T.G., Shannon K.P., Interpretative reading: recognizing the unusual
and inferring resistance mechanisms from resistance phenotypes” , Journal of Antimicrobial
Chemotherapy (2001), 48, SuppI S1, 87-102.
4) Chapin K.C. and Murray P.R, "Principles of Stains and Media". Murray P.R. et a l: Manual of
Clinical Microbiology, 8th edition, 258-261. ASM Press 2003.
5) Jorgensen H.J. “ Selection Criteria for an Antimicrobial Susceptibility Testing System", Journal of
Clinical Microbiology Nov. 1993; 31(11): 2841-2844.
6) Product References :
7) S. Roveta, A. Marchese, E.A. Debbia (Microbiology Institute, Genoa University, Italy),
"Evaluation of the Antibiotic Susceptibility on 412 Pathogens Isolated from Severe Bacterial
Infections Employing the Uro-Quick System", Poster, ICAAC, Washington, 30 October - 2
November 2004.
8) S. Roveta, F. Cavaiiini, A, Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in intensive care units using the Uro-
Quick System", Poster, AMCLI, Padova, 8-11 June 2004.
9) S. Roveta, F. Cavaiiini, A. Marchese, E.A, Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test of Uropathogens using the Uro-Quick System directly on
urine". Poster, ASM, New Orleans, 23-27 May 2004.
10) S. Roveta, F. Cavaiiini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in ICU using the Uro-Quick System",
Poster, ECCMID, Prague, 1 -4 May 2004.
11) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, Universita di Genova),
“ Evaluation of the Uroquick, a new rapid automated system, for the detection of w e / / -
characterized antibiotic-resistant bacteria", Journal of Chemotherapy 2004 Apr; 16(2): 107-18.
12) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, Universita di Genova),
“ Esecuzione rapida di antibiogrammi su campioni di urine mediante sistema Uro-quick", Poster,
National Congress SIM, Rome, 19-21 October 2003.
--- стр. 124 ---
Необходимо осторожно обращаться с лиофилизатом антибиотика: избегать попадания
вовнутрь, вдыхания, контакта с кожей, глазами и одеждой. Избегайте длительного
контакта.
Некоторые из компонентов питательных бульонов имеют животное происхождение.
Достоверное знание об источниках происхождение мяса животных и его санитарном
состоянии не гарантирует отсутствия трансмиссивных патогенных агентов. Тем не менее,
рекомендовано обращаться сданными продуктами, как с потенциально инфицированными
и, соответственно соблюдать предписанные меры предосторожности.
Необходимо использование всех предосторожностей, применяемых при работе с
потенциально инфекционными продуктами.
Биологические образцы, бактериальные культуры должны рассматриваться как источники
потенциальной инфекции и в отношении их должны соблюдаться меры предосторожности
в соответствии с национальными законами.
Рекомендуется использовать средства индивидуальной защиты.
Чтобы избежать нарушения качества реагентов, тщательно соблюдайте условия их
хранения.
Перед использованием каждая упаковка должна быть проверена на отсутствие видимых
повреждений.
Не используйте флаконы с повреждениями упаковки, признаками помутнения или
изменения цвета.
Не используйте реагенты после окончания срока годности.
- Обращайтесь осторожно с открытыми флаконами с серебряной крь1Шкой с
бактериальными суспензиями.
Не используйте флаконы с бульоном обогащения повторно.
Обращайтесь с флаконами как с хрупкими предметами.
Не прикасайтесь к флаконам с бульоном обогащения ниже отмеченной на них линии.
Используйте штатив для того, чтобы избежать разливания жидкостей в процессе
пипетирования или транспортировки.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
Образцы:
Флаконы, содержащие бактериальные суспензии для тестирования (флаконы из URO-QUICK
скрининг кита) или приготовленные из изолированных колоний, должны быть быстро исследованы
с одновременным охлаждением, чтобы избежать длительного пребывания при комнатной
температуре перед исследованием.
Реагенты;
Флаконы с лиофилизированными антибиотикамидолжны содержаться в темном месте при
2-8°С, до окончания срока годности, указанной на упаковке.
Раствор для разведения должен храниться в холодильнике при 2-8®С, до окончания срока
годности, указанной на упаковке.
- Флаконы с бульоном обогащения должны храниться при 4-30 °С до окончания срока
годности.
Разведенный антибиотик должен храниться в холодильнике при 2-8°С в темноте до 7
дней.
1 ^
--- стр. 125 ---
Раствор для разведения , после первого открывания должен храниться при 2-8 "С, до
окончания срока годности, указанной на упаковке.
УТИЛИЗАЦИЯ ОТХОДОВ
Утилизация реагентов образцов, растворов для разведения и отходов является ответственностью
пользователя, в соответствии с требованиями национальных законов.
МЕТОДИКА РАЗВЕДЕНИЯ АНТИБИОТИКА
Разведите одновременно и в соответствии с вашими потребностями Реагент (А) и Реагент (В)
следующим образом:
1 . Отройте раствор реагента (В), и используя микропипетку добавьте 1000 ^jL этого раствора во
флакон с лиофилизированным антибиотиком, также предварительно открытому.
2 . Аккуратно перемешайте. Это количество разведенного антибиотика позволяет произвести 6
тестов; в случае необходимости в дальнейших тестах повторите вышеописанную процедуру.
3 . Используя полученный раствор антибиотика проведите тесты; оставшийся реагент (В) должен
храниться при 2-8°С, в темном месте, не более 7 дней (напишите на этикетке флакона дату
истечения годности.
4. Перед использованием дайте флакону постоять несколько минут при комнатной температуре
или приготовьте новый раствор как это описано в п.1.
Предупреждения:
Жидкий компонент для разведения специфичен для данного антибиотика.
МЕТОДИКА ДЛЯ ПРЯМОГО ТЕСТА НА АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ
УРИНОКУЛЬТУРЫ
1 - ПОДГОТОВКА ПОЛОЖИТЕЛЬНОГО ОБРАЗЦА УРИНОКУЛЬТУРЫ
Для каждого образца, определенного как положительный на анализаторах HB&L UROQUATTRO
или ALFRED60, необходимо прежде всего проделать окраску по Граму, для дифференциации
Грам+ от Грам- и для проверки чистоты культуры. В случае полибактериальной культуры,
проведите субкультивирование для выделения колоний и проведения тестов на идентификацию и
чувствительность. В случае монокультуры, возможно непосредственное проведение теста на
антибиотикочувствительности с использованием AST кита и выбор надлежащего антибиотика в
соответствии с характеристиками микроорганизма (Г рам+ или Г рам-). Каждый антибиотик
инокулируется в соответствующий AST флакон.
Образцы для прямого тестирования антибитикочувствительности (монокультура) инокулируют во
флакон CAST бульоном, используя положительные бульонный уринокультуры.
Чтобы оптимизировать и стандартизировать рабочую бактериальную концентрацию для теста на
антибитикочувствительность, производят следующие операции:
а- Использование функции МакФарланд алертер,
на анализатора ALFRED60, HB&L
UROQUATTRO с программным обеспечением Version 1.1 А и выше.
Если эта функция используется, прибор показывает степень мутности МакФарланду
1непосредственно в анализируемом образце в процессе теста. При достижении степени мутности
0.5-0.7 суспензия считается готовой для проведения теста на антибиотикочувствительность
(следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
/ Г
--- стр. 126 ---
b - Использование турбидиметра, на приборе ALFRED60 с программным обеспечением Version
1.2А и выше, HB&L UROQUATTRO с программным обеспечением Version 4.0А и выше (DOS) или
1.0N и выше (Windows).
Возможно приготовление суспензий оптимизированных по МакФарлнад методом разведения
более концентрированного материала или из изолированных колоний, с использованием
турбидиметра (следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Следующая методика делается вовремя или после культурального теста:
1 - Образец в процессе анализа:
a) Когда анализ еще в процессе, выберите позицию образца и подтвердите окончание анализа для
данного образца,
b) По окончании анализа, выберите свободную позицию и подтвердите режим турбидиметра
(функция турбидиметра появляется на экране).
c) Поставьте флакон с положительным образцом в указанную прибором позицию.
d) После получения турбидиметром значения степени мутности, прибор сообщит необходимые
для разведения объемы для получения бактериальной концентрации для получения
бактериальной концентрации в пределах 0,5-0,7 по МакФарланд,
e) Для проведения разведений бульона используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-SVR). Для предотвращения образования
пузырьков внутри флакона, используйте шприц, погружая иглу глубоко в жидкость в пузырьке.
ПОЛОЖИТЕЛЬНАЯ КУЛЬТУРА
ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ ПОСЛЕ СЧИТЫВАНИЙ ТУРБИДИМЕТРА
f) По окончании сеанса турбидиметрии нажмите кнопку «exit» для получения резюме анализа
уринокультур,
2 - Образец в конце анализа:
Начните работу с инокулумом, начиная с пункта Ь) в предыдущем параграфе,
3 - Процедура подготовки образцов для теста на антимикробную чувствительность из
изолированной колонии.
Для каждого клинического образца из которого получена монокультура на чашке Петри, возьмите
2 - 3 колонии и асептически суспензируйте их во флаконе с культуральным бульоном из URO-
QUICK SCREENING кита, чтобы получить рост в бульоне.
При достижении логарифмической фазы роста бактерий (помутнение бульона), осторожно
перенесите шприцом или пипеткой во флаконы с серебряной алюминиевой крышкой из AST
МакФарлнад кита (кат,номер SI 912-SVR) количество бактериальной суспензии необходимое для
получения степени мутности 0,5-0,7 по МакФарлнад (использование турбидиметра такое же, как
это описано выше).
ЗАГРУЗКА ОБРАЗЦОВ В ПРИБОР И ПРОЦЕДУРА НАСТРОЙКИ
Подготовьте флаконы с голубой алюминиевой крышкой с AST бульоном обогащения (С), в
количестве, соответствующем количеству исследуемых антибиотиков.
Каждый антибиотик имеет соответствующий ему цвет и кодировку.
Подготовьте ваш профиль антибиотиков и инокулируйте в каждый флакон (С) 100 m l инокулума,
подготовленного, как это описано выше (используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой, если использовался турбидиметр или культуральный флакон, если использовалась
--- стр. 127 ---
функция оценки мутности по МакФарлнад) и затем инокулируйте 100 ml растворенного
антибиотика. Убедитесь, что уровень жидкости достиг линии нанесенной на флаконе (С).
Следующий флакон с золотой алюминиевой крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-
SVR) инокулируют 100 m l того же инокулума, приготовленного в соответствии с инструкциями
выше, без антибиотиков.
Данный флакон является референсным образцом для оценки бактериального роста: инокулируйте
0.1 mL образца без какого-либо антибиотика.
Предупреждения:
Каждый антибиотик идентифицируется по своему собственному цвету флакона или коду,
набираемому на клавиатуре или кнопкой на экране. Цвет или код указаны на следующих
компонентах набора;
(А) Флакон с лиофилизированным антибиотиком, (В) Жидкость для разведения антибиотика, (С)
60 флаконов с бульоном обогащения,
Цефтриаксон имеет этикетку оливково зеленого цвета.
В соответствии с потребностями пользователя, возможно набрать необходимую панель
антибиотиков для Грам+ или для Грам- используя программное обеспечение прибора..
При загрузке каждого флакон (С) в прибор следуйте инструкциям, появляющимся на экране.
Схема, представленная ниже в графической форме, показывает процедуру загрузки и
программирования.
Образцы инокулированные с использованием скринингового бульонного теста уринокультур или
бактериальными культурами из изолированных колоний, в соответствии с выше описанными
процедурами разведения, загружаются в прибор. Результаты будут получены через 3 часа.
При завершении анализа через 3 часа, результаты выдаются в виде процента резистентных (R)
или чувствительных (S) для каждого исследованного антибиотика, в сравнении с референсными
значениями.
Пример отчета по норфлоксацину.
Валидирование инокулума :
Стандартизация инокулума является важным фактором проведения теста на
чувствтительность.
Чтобы получить корректные показатели при использовании АЗТ-НОРФЛОКСАЦИН кита,
рекомендуется проверить референсные значения инокулума образца.
Значения инокулума должны быть > 700.000 KOE/mL, в том случае, если они ниже прибор
выдаст сообщение “NV” (Not valid). В этом случае тест должен быть проделан повторно.
Процентные значения группируются по категориям S = Чувствительный , I = Промежуточный , R =
Резистентный.
S 1 R
S Percentage 100-65% 65-50% 50-0%
R Percentage 0-35% 35-50% 50-100%
ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Для оценки стандартизации и контроля качества получаемых результатов проводят процедурь:
при помощи штаммов АТСС. Частота и модальность сессий контроля качества является
--- стр. 128 ---
ответственностью пользователя и производится в соответствии с существующими в стране
рекомендациями.
Вследствие существующих особых ростовых характеристик образцов, подвергавшихся
процедурам стабилизации и презервации, время исследования антибиотикочувствительности для
таких образцов удлиняется до 5 часов.
Escherichia со // АТСС 25922 Staphylococcus aureus АТСС
29213
Ожидаемые результаты S S
ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДИКИ
• Для прямой оценки чувствительности: время проведения теста существенно удлиняется,
т.к. культуральный тест может оказывать влияние на характеристики образца.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: проведение теста со старыми
колониями с чашек может влиять на результаты теста.
• Длительные паузы между этапами работы (от приготовления инокулума до загрузки в
прибор) могут влиять на результаты.
• Для прямой оценки чувствительности: могут быть исследованы только образцы,
предварительно отобранные по окраске по Граму, для исключения полимикробного
роста.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: инокулум, полученный путем
смешивания разных изолированных колоний или из слабо изолированных колоний может
влиять на результаты.
ОЖИДАЕМЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
Принимая во внимание, что бактериальная резистентность может варьировать в разных
географических зонах, ожидаемые результаты прямо зависят от локальной микробной экологии
(Виды /Механизмы резистентности).
ПОКАЗАТЕЛИ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ПРИ ПРЯХ ТЕСТАХ В УРИНОКУЛЬТУРАХ
Показатели по AST-Норфлоксацину оценивались с использованием положительных образцов
мочи, содержавших следующие виды :
Escherichia spp. Proteus spp. Staphylococcus spp.
Klebsiella spp. Citrobacter spp.
Enterobacter spp. Morganella spp.
Эти образцы были получены из института микробиологии и параллельно тестировались
референсным методом Кирби-Бауэра после культивирования на чашках Петри.
УРОВЕНЬ ДОСТОВЕРНОСТИ
Уровень достоверности результатов, полученных при помощи референсного метода на 78
штаммах составлял 97,44% .
"Большая ошибка” и “очень большая ошибка" в процентном отношении составляли 1,28% и 0%
соответственно.
ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ
Уровни воспроизводимости в процентном отношении (чувствительные, промежуточные,
резистентные), полученные в 5 повторностях на 2-х бактериальных штаммах составлял 100%.
--- стр. 129 ---
ALIFAX S.p.A.
via Petrarca 2 /1 - 35020 Polverara (PD) - Italy
tel. +39 049 0992000
web site: www.alifax.com
e-mail: info@alifax.com
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1) Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standard for Antimicrobial
Susceptibility Testing; Eighteenth Informational Supplement. Approved Standard CLSI
Document M100-S18, Vol. 28, No. 1, Winkler MA et al., January, 2008.
2) Jennifer M. Andrews, “Determination of minimum inhibitory concentrations", Journal of
Antimicrobial Chemotherapy (2001), 48, SuppI S1, 5-16
3) Livermore D.M., Winstanley T.G., Shannon K.P., “Interpretative reading: recognizing the unusual
and inferring resistance mechanisms from resistance phenotypes”, Journal of Antimicrobial
Chemotherapy (2001), 48, SuppI S1, 87-102.
4) Chapin K.C. and Murray P.R. “Principles of Stains and Media". Murray P.R. et a l: Manual of
Clinical Microbiology, 8th edition, 258-261. ASM Press 2003.
5) Jorgensen H.J. “Selection Criteria for an Antimicrobial Susceptibility Testing System", Journal of
Clinical Microbiology Nov. 1993; 31(11): 2841-2844.
6) ROCEPHINi i package insert
7) Product References :
8) S. Roveta, A. Marchese, E.A. Debbia (Microbiology Institute, Genoa University, Italy),
"Evaluation of the Antibiotic Susceptibility on 412 Pathogens Isolated from Severe Bacterial
Infections Employing the Uro-Quick System", Poster, ICAAC, Washington, 30 October - 2
November 2004.
9) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in intensive care units using the Uro-
Quick System", Poster, AMCLI, Padova, 8-11 June 2004.
10) S. Roveta, F, Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test of Uropathogens using the Uro-Quick System directly on
urine". Poster, ASM, New Orleans, 23-27 May 2004.
11) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in ICU using the Uro-Quick System",
Poster, ECCMID, Prague, 1-4 May 2004.
12) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, University di Genova),
“Evaluation of the Uroquick, a new rapid automated system, for the detection of well-
characterized antibiotic-resistant bacteria", Journal of Chemotherapy 2004 Apr;16(2):107-18.
13) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (istituto di Microbiologia, University di Genova),
“Esecuzione rapida di antibiogrammi su campioni di urine mediante sistema Uro-quick", Poster,
National Congress SIM, Rome, 19-21 October 2003.
14) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, University di Genova), "The Uro-
Quick System for the Identification of Well-chracterized Antibiotic-resistance Strains",
Microbiologia Medica, vol. 18, № I, 2003, p. 49-55.
--- стр. 133 ---
МЕРЫ ПРЕДОСТРОЖНОСТИ
Только для профессиональной диагностики in vitro.
Необходимо осторожно обращаться с лиофилизатом антибиотика: избегать попадания
вовнутрь, вдыхания, контакта с кожей, глазами и одеждой. Избегайте длительного
контакта.
Некоторые из компонентов питательных бульонов имеют животное происхождение.
Достоверное знание об источниках происхождение мяса животных и его санитарном
состоянии не гарантирует отсутствия трансмиссивных патогенных агентов. Тем не менее,
рекомендовано обращаться сданными продуктами, как с потенциально инфицированными
и, соответственно соблюдать предписанные меры предосторожности.
Необходимо использование всех предосторожностей, применяемых при работе с
потенциально инфекционными продуктами.
Биологические образцы, бактериальные культуры должны рассматриваться как источники
потенциальной инфекции и в отношении их должны соблюдаться меры предосторожности
в соответствии с национальными законами.
Рекомендуется использовать средства индивидуальной защиты.
Чтобы избежать нарушения качества реагентов, тщательно соблюдайте условия их
хранения.
Перед использованием каждая упаковка должна быть проверена на отсутствие видимых
повреждений.
Не используйте флаконы с повреждениями упаковки, признаками помутнения или
изменения цвета.
Не используйте реагенты после окончания срока годности.
- Обращайтесь осторожно с открытыми флаконами с серебряной крышкой с
бактериальными суспензиями.
Не используйте флаконы с бульоном обогащения повторно.
Обращайтесь с флаконами как с хрупкими предметами.
Не прикасайтесь к флаконам с бульоном обогащения ниже отмеченной на них линии.
Используйте штатив для того, чтобы избежать разливания жидкостей в процессе
пипетирования или транспортировки.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
Образцы:
Флаконы, содержащие бактериальные суспензии для тестирования (флаконы из URO-QUICK
скрининг кита) или приготовленные из изолированных колоний, должны быть быстро исследованы
с одновременным охлаждением, чтобы избежать длительного пребывания при комнатной
температуре перед исследованием.
Реагенты:
- Флаконы с лиофилизированными антибиотикамидолжны содержаться в темном месте при
2-8°С, до окончания срока годности, указанной на упаковке.
- Раствор для разведения должен храниться в холодильнике при 2-8°С, до окончания срока
годности, указанной на упаковке.
- Флаконы с бульоном обогащения должны храниться при 4-30 °С до окончания срока
годности.
--- стр. 134 ---
- Разведенный антибиотик должен храниться в холодильнике при 2-8°С в темноте до 7
дней.
Раствор для разведения , после первого открывания должен храниться при 2-8 °С, до
окончания срока годности, указанной на упаковке.
УТИЛИЗАЦИЯ ОТХОДОВ
Утилизация реагентов образцов, растворов для разведения и отходов является ответственностью
пользователя, в соответствии с требованиями национальных законов.
МЕТОДИКА РАЗВЕДЕНИЯ АНТИБИОТИКА
Разведите одновременно и в соответствии с вашими потребностями Реагент (А) и Реагент (В)
следующим образом:
1. Отройте раствор реагента (В), и используя микропипетку добавьте 1000 pL этого раствора во
флакон с лиофилизированным антибиотиком, также предварительно открытому.
2. Аккуратно перемешайте. Это количество разведенного антибиотика позволяет произвести 6
тестов; в случае необходимости в дальнейших тестах повторите вышеописанную процедуру.
3. Используя полученный раствор антибиотика проведите тесты; оставшийся реагент (В) должен
храниться при 2-8°С, в темном месте, не более 7 дней (напишите на этикетке флакона дату
истечения годности.
4. Перед использованием дайте флакону постоять несколько минут при комнатной температуре
или приготовьте новый раствор как это описано в п.1.
Предупреждения:
Жидкий компонент для разведения специфичен для данного антибиотика.
МЕТОДИКА ДЛЯ ПРЯМОГО ТЕСТА НА АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ
УРИНОКУЛЬТУРЫ
1 - ПОДГОТОВКА ПОЛОЖИТЕЛЬНОГО ОБРАЗЦА УРИНОКУЛЬТУРЫ
Для каждого образца, определенного как положительный на анализаторах HB&L UROQUATTRO
или ALFRED60, необходимо прежде всего проделать окраску по Граму, для дифференциации
Грам+ от Грам- и для проверки чистоты культуры. В случае полибактериальной культуры,
проведите субкультивирование для выделения колоний и проведения тестов на идентификацию и
чувствительность. В случае монокультуры, возможно непосредственное проведение теста на
антибиотикочувствительности с использованием AST кита и выбор надлежащего антибиотика а
соответствии с характеристиками микроорганизма (Грам+ или Грам-). Каждый антибиотик
инокулируется в соответствующий AST флакон.
Образцы для прямого тестирования антибитикочувствительности (монокультура) инокулируют во
флакон с AST бульоном, используя положительные бульонный уринокультуры.
Чтобы оптимизировать и стандартизировать рабочую бактериальную концентрацию для теста на
антибитикочувствительность, производят следующие операции:
а- Использование функции МакФарланд алертер,
на анализатора ALFRED60, HB&L
UROQUATTRO с программным обеспечением Version 1.1 А и выше.
Если эта функция используется, прибор показывает степень мутности МакФарланду
Непосредственно в анализируемом образце в процессе теста. При достижении степени мутности
0.5-0.7 суспензия считается готовой для проведения теста на антибиотикочувствительность
(следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
--- стр. 135 ---
г
Ь - Использование турбидиметра, на приборе ALFRED 60 с программным обеспечением Version
1.2А и выше, HB&L UROQUATTRO с программным обеспечением Version 4.0А и выше (DOS) или
1.0N и выше (Windows).
Возможно приготовление суспензий оптимизированных по МакФарлнад методом разведения
более концентрированного материала или из изолированных колоний, с использованием
турбидиметра (следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Следующая методика делается вовремя или после культурального теста:
1 - Образец в процессе анализа:
a) Когда анализ еще в процессе, выберите позицию образца и подтвердите окончание анализа для
данного образца.
b) По окончании анализа, выберите свободную позицию и подтвердите режим турбидиметра
(функция турбидиметра появляется на экране).
c) Поставьте флакон с положительным образцом в указанную прибором позицию.
d) После получения турбидиметром значения степени мутности, прибор сообщит необходимые
для разведения объемы для получения бактериальной концентрации для получения
бактериальной концентрации в пределах 0,5-0,7 по МакФарланд.
e) Для проведения разведений бульона используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-SVR). Для предотвращения образования
пузырьков внутри флакона, используйте шприц, погружая иглу глубоко в жидкость в пузырьке.
ПОЛОЖИТЕЛЬНАЯ КУЛЬТУРА
ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ ПОСЛЕ СЧИТЫВАНИЙ ТУРБИДИМЕТРА
f) По окончании сеанса турбидиметрии нажмите кнопку «exit» для получения резюме анализа
уринокультур.
2 - Образец в конце анализа:
Начните работу с инокулумом, начиная с пункта Ь) в предыдущем параграфе.
3 - Процедура подготовки образцов для теста на антимикробную чувствительность из
изолированной колонии.
Для каждого клинического образца из которого получена монокультура на чашке Петри, возьмите
2 -3 колонии и асептически суспензируйте их во флаконе с культуральным бульоном из URO-
QUICK SCREENING кита, чтобы получить рост в бульоне.
При достижении логарифмической фазы роста бактерий (помутнение бульона), осторожно
перенесите шприцом или пипеткой во флаконы с серебряной алюминиевой крышкой из AST
МакФарлнад кита (кат.номер SI 912-SVR) количество бактериальной суспензии необходимое для
получения степени мутности 0,5-0,7 по МакФарлнад (использование турбидиметра такое же, как
это описано выше).
ЗАГРУЗКА ОБРАЗЦОВ В ПРИБОР И ПРОЦЕДУРА НАСТРОЙКИ
Подготовьте флаконы с голубой алюминиевой крышкой с AST бульоном обогащения (С), в
количестве, соответствующем количеству исследуемых антибиотиков.
Каждый антибиотик имеет соответствующий ему цвет и кодировку.
Подготовьте ваш профиль антибиотиков и инокулируйте в каждый флакон (С) 100 ml инокулума,
подготовленного, как это описано выше (используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой, если использовался турбидиметр или культуральный флакон, если использовалась
y '.a - С
--- стр. 136 ---
г
функция оценки мутности по МакФарлнад) и затем инокулируйте 100 ml растворенного
антибиотика. Убедитесь, что уровень жидкости достиг линии нанесенной на флаконе (С).
Следующий флакон с золотой алюминиевой крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-
SVR) инокулируют 100 ml того же инокулума, приготовленного в соответствии с инструкциями
выше, без антибиотиков.
Данный флакон является референсным образцом для оценки бактериального роста: инокулируйте
0.1 mL образца без какого-либо антибиотика.
Предупреждения;
Каждый антибиотик идентифицируется по своему собственному цвету флакона или коду,
набираемому на клавиатуре или кнопкой на экране. Цвет или код указаны на следующих
компонентах набора;
(А) Флакон с лиофилизированным антибиотиком, (В) Жидкость для разведения антибиотика, (С)
60 флаконов с бульоном обогащения.
Меропенем имеет код МЕМ.
В соответствии с потребностями пользователя, возможно набрать необходимую панель
антибиотиков для Грам+ или для Грам- используя программное обеспечение прибора..
При загрузке каждого флакон (С) в прибор1з следуйте инструкциям, появляющимся на экране.
Схема, представленная ниже в графической форме, показывает процедуру загрузки и
программирования.
Образцы инокулированные с использованием скринингового бульонного теста уринокультур или
бактериальными культурами из изолированных колоний, в соответствии с выше описанными
процедурами разведения, загружаются в прибор. Результаты будут получены через 3 часа.
При завершении анализа через 3 часа, результаты выдаются в виде процента резистентных (R)
или чувствительных (S) для каждого исследованного антибиотика, в сравнении с референсными
значениями.
Пример отчета по меропеиему.
Перед клиническим применением рекомендуется исключить присутствие МРСА и
энтерококков.
Валидирование инокулума :
Стандартизация инокулума является важным фактором проведения теста на
чувствтительность.
Чтобы получить корректные показатели при использовании! AST-Меропенем кита,
рекомендуется проверить референсные значения инокулума образца.
Значения инокулума должны быть > 700.000 KOE/mL, в том случае, если они ниже прибор
выдаст сообщение “ NV” (Not valid). В этом случае тест должен быть проделан повторно.
Процентные значения группируются по категориям S = Чувствительный , I = Промежуточный , R =
Резистентный.
S 1 R
S Percentage 100-65 % 65-50% 50-0%
R Percentage 0-35% 35-50% 50-100%
ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
--- стр. 137 ---
Для оценки стандартизации и контроля качества получаемых результатов проводят процедуры
при помощи штаммов АТСС. Частота и модальность сессий контроля качества является
ответственностью пользователя и производится в соответствии с существующими в стране
рекомендациями.
Вследствие существующих особых ростовых характеристик образцов, подвергавшихся
процедурам стабилизации и презервации, время исследования антибиотикочувствительности для
таких образцов удлиняется до 5 часов.
Escherichia со//АТСС 25922 Staph. Aureus
АТСС 29213
Ожидаемые результаты S S
ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДИКИ
• Для прямой оценки чувствительности: время проведения теста существенно удлиняется,
т.к. культуральный тест может оказывать влияние на характеристики образца.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: проведение теста со старыми
колониями с чашек может влиять на результаты теста.
• Длительные паузы между этапами работы (от приготовления инокулума до загрузки в
прибор) могут влиять на результаты.
• Для прямой оценки чувствительности: могут быть исследованы только образцы,
предварительно отобранные по окраске по Граму, для исключения полимикробного
роста.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: инокулум, полученный путем
смешивания разных изолированных колоний или из слабо изолированных колоний может
влиять на результаты.
ОЖИДАЕМЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
Принимая во внимание, что бактериальная резистентность может варьировать в разных
географических зонах, ожидаемые результаты прямо зависят от локальной микробной экологии
(Виды /Механизмы резистентности).
ПОКАЗАТЕЛИ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ПРИ ПРЯХ ТЕСТАХ В УРИНОКУЛЬТУРАХ
Показатели по AST-Меропенему оценивались с использованием положительных образцов мочи,
содержавших следующие виды :
Escherichia spp. Proteus spp. Staphylococcus spp.
Klebsiella spp. Citrobacter spp.
Enterobacter spp. Morganella spp.
Эти образцы были получены из института микробиологии и параллельно тестировались
референсным методом Кирби-Бауэра после культивирования на чашках Петри.
УРОВЕНЬ ДОСТОВЕРНОСТИ
Уровень достоверности результатов, полученных при помощи референсного метода на 57
штаммах составлял 84,21% .
“Большая ошибка” и “очень большая ошибка” в процентном отношении составляли 10,53% и
1,75% соответственно.
ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ
--- стр. 138 ---
Уровни воспроизводимости в процентном отнош ении (чувствительны е, промежуточные,
резистентны е), полученны е в 8 повторностях на 2-х бактериальны х ш там м ах составлял 100% .
ALIFAX S.p.A.
via Petrarca 2/1 - 35020 Polverara (PD) - Italy
tel. +39 049 0992000
web site: www.alifax.com
e-mail: info@alifax.com
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1) Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standard for Antimicrobial
Susceptibility Testing; Eighteenth informational Supplement. Approved Standard CLSI
Document M 100-SI 8, Vol. 28, No. 1, Winkler MA et al., January, 2008.
2) Jennifer M. Andrews,
“Determination of minimum inhibitory concentrations", Journal of
Antim icrobial Chemotherapy (2001), 48, Suppi S1, 5-16
3) Livermore D.M., Winstanley T.G., Shannon K.P., “Interpretative reading: recognizing the unusual
and inferring resistance mechanisms from resistance phenotypes", Journal of Antimicrobial
Chemotherapy (2001), 48, Suppi S1, 87-102.
4) Chapin K.C. and Murray P.R. “Principles of Stains and Media". Murray P.R. et a l: Manual of
Clinical Microbiology, 8th edition, 258-261. ASM Press 2003.
5) Jorgensen H.J. “Selection Criteria for an Antimicrobial Susceptibility Testing System", Journal of
Clinical Microbiology Nov 1993; 31(11): 2841-2844.
6) Product References :
7) S. Roveta, A. Marchese, E.A. Debbia (Microbiology institute, Genoa University, Italy),
"Evaluation of the Antibiotic Susceptibility on 412 Pathogens Isolated from Severe Bacterial
Infections Employing the Uro-Quick System", Poster, ICAAC, Washington, 30 October - 2
November 2004.
8) S. Roveta, F. Cavallini, A, Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), ’’ Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in intensive care units using the Uro-
Quick System", Poster, AMCLI, Padova, 8-11 June 2004,
9) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test of Uropathogens using the Uro-Quick System directly on
urine". Poster, ASM, New Orleans, 23-27 May 2004.
10) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in ICU using the Uro-Quick System",
Poster, ECCMID, Prague, 1-4 May 2004.
1 1) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, University di Genova),
“Evaluation of the Uroquick, a new rapid automated system, for the detection of well-
characterized antibiotic-resistant bacteria", Journal of Chemotherapy 2004 Apr; 16(2): 107-18.
12) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, Universita di Genova),
“Esecuzione rapida di antibiogrammi su campioni di urine mediants sistema Uro-quick", Poster,
National Congress SIM, Rome, 19-21 October 2003.
--- стр. 142 ---
Только для профессиональной диагностики in vitro.
Необходимо осторожно обращаться с лиофилизатом антибиотика: избегать попадания
вовнутрь, вдыхания, контакта с кожей, глазами и одеждой. Избегайте длительного
контакта.
Некоторые из компонентов питательных бульонов имеют животное происхождение.
Достоверное знание об источниках происхождение мяса животных и его санитарном
состоянии не гарантирует отсутствия трансмиссивных патогенных агентов. Тем не менее,
рекомендовано обращаться сданными продуктами, как с потенциально инфицированными
и, соответственно соблюдать предписанные меры предосторожности,
Необходимо использование всех предосторожностей, применяемых при работе с
потенциально инфекционными продуктами.
Биологические образцы, бактериальные культуры должны рассматриваться как источники
потенциальной инфекции и в отношении их должны соблюдаться меры предосторожности
в соответствии с национальными законами.
Рекомендуется использовать средства индивидуальной защиты.
- Чтобы избежать нарушения качества реагентов, тщательно соблюдайте условия их
хранения.
Перед использованием каждая упаковка должна быть проверена на отсутствие видимых
повреждений.
Не используйте флаконы с повреждениями упаковки, признаками помутнения или
изменения цвета.
Не используйте реагенты после окончания срока годности.
Обращайтесь осторожно с открытыми флаконами с серебряной крышкой с
бактериальными суспензиями.
Не используйте флаконы с бульоном обогащения повторно.
Обращайтесь с флаконами как с хрупкими предметами.
Не прикасайтесь к флаконам с бульоном обогащения ниже отмеченной на них линии.
Используйте штатив для того, чтобы избежать разливания жидкостей в процессе
^ пипетирования или транспортировки.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
Образцы:
Флаконы, содержащие бактериальные суспензии для тестирования (флаконы из URO-QUICK
скрининг кита) или приготовленные из изолированных колоний, должны быть быстро исследованы
с одновременным охлаждением, чтобы избежать длительного пребывания при комнатной
температуре перед исследованием.
Реагенты:
- Флаконы с лиофилизированными антибиотикамидолжны содержаться в темном месте при
2-8°С, до окончания срока годности, указанной на упаковке.
Раствор для разведения должен храниться в холодильнике при 2-8°С, до окончания срока
годности, указанной на упаковке.
- Флаконы с бульоном обогащения должны храниться при 4-30 °С до окончания срока
годности.
--- стр. 143 ---
Разведенный антибиотик должен храниться в холодильнике при 2-8°С в темноте до 7
дней.
Раствор для разведения , после первого открывания должен храниться при 2-8 °С, до
окончания срока годности, указанной на упаковке.
УТИЛИЗАЦИЯ ОТХОДОВ
Утилизация реагентов образцов, растворов для разведения и отходов является ответственностью
пользователя, в соответствии с требованиями национальных законов.
МЕТОДИКА РАЗВЕДЕНИЯ АНТИБИОТИКА
Разведите одновременно и в соответствии с вашими потребностями Реагент (А) и Реагент (В)
следующим образом:
1. Отройте раствор реагента (В), и используя микропипетку добавьте 1000 pL этого раствора во
флакон с лиофилизированным антибиотиком, также предварительно открытому.
2. Аккуратно перемешайте. Это количество разведенного антибиотика позволяет произвести 6
тестов; в случае необходимости в дальнейших тестах повторите вышеописанную процедуру.
3. Используя полученный раствор антибиотика проведите тесты; оставшийся реагент (В) должен
храниться при 2-8°С, в темном месте, не более 7 дней (напишите на этикетке флакона дату
истечения годности.
4. Перед использованием дайте флакону постоять несколько минут при комнатной температуре
или приготовьте новый раствор как это описано в п.1.
Предупреждения:
Жидкий компонент для разведения специфичен для данного антибиотика.
МЕТОДИКА ДЛЯ ПРЯМОГО ТЕСТА НА АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ
УРИНОКУЛЬТУРЫ
1 - ПОДГОТОВКА ПОЛОЖИТЕЛЬНОГО ОБРАЗЦА УРИНОКУЛЬТУРЫ
Для каждого образца, определенного как положительный на анализаторах HB&L UROQUATTRO
или ALFRED60, необходимо прежде всего проделать окраску по Граму, для дифференциации
Грам+ от Грам- и для проверки чистоты культуры. В случае полибактериальной культуры,
проведите субкультивирование для выделения колоний и проведения тестов на идентификацию и
чувствительность, В случае монокультуры, возможно непосредственное проведение теста на
антибиотикочувствительности с использованием AST кита и выбор надлежащего антибиотика в
соответствии с характеристиками микроорганизма (Грам+ или Грам-). Каждый антибиотик
инокулируется в соответствующий AST флакон.
Образцы для прямого тестирования антибитикочувствительности (монокультура) инокулируют во
флакон CAST бульоном, используя положительные бульонный уринокультуры.
Чтобы оптимизировать и стандартизировать рабочую бактериальную концентрацию для теста на
антибитикочувствительность, производят следующие операции:
а- Использование функции МакФарланд алертер,
на анализатора ALFRED60, HB&L
UROQUATTRO с программным обеспечением Version 1.1А и выше.
Если эта функция используется, прибор показывает степень мутности МакФарланду
1непосредственно в анализируемом образце в процессе теста. При достижении степени мутности
0.5-0.7 суспензия считается готовой для проведения теста на антибиотикочувствительность
(следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
--- стр. 144 ---
г
b - Использование турбидиметра, на приборе ALFRED 60 с программным обеспечением Version
1.2А и выше, HB&L UROQUATTRO с программным обеспечением Version 4.0А и выше (DOS) или
1.0N и выше (Windows).
Возможно приготовление суспензий оптимизированных по МакФарлнад методом разведения
более концентрированного материала или из изолированных колоний, с использованием
турбидиметра (следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Следующая методика делается вовремя или после культурального теста:
1 - Образец в процессе анализа:
a) Когда анализ еще в процессе, выберите позицию образца и подтвердите окончание анализа для
данного образца.
b) По окончании анализа, выберите свободную позицию и подтвердите режим турбидиметра
(функция турбидиметра появляется на экране).
c) Поставьте флакон с положительным образцом в указанную прибором позицию.
d) После получения турбидиметром значения степени мутности, прибор сообщит необходимые
для разведения объемы для получения бактериальной концентрации для получения
бактериальной концентрации в пределах 0,5-0,7 по МакФарланд.
e) Для проведения разведений бульона используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-SVR). Для предотвращения образования
пузырьков внутри флакона, используйте шприц, погружая иглу глубоко в жидкость в пузырьке.
ПОЛОЖИТЕЛЬНАЯ КУЛЬТУРА
ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ ПОСЛЕ СЧИТЫВАНИЙ ТУРБИДИМЕТРА
О По окончании сеанса турбидиметрии нажмите кнопку «exit» для получения резюме анализа
уринокультур.
2 - Образец в конце анализа:
Начните работу с инокулумом, начиная с пункта Ь) в предыдущем параграфе.
3 - Процедура подготовки образцов для теста на антимикробную чувствительность из
изолированной колонии.
Для каждого клинического образца из которого получена монокультура на чашке Петри, возьмите
2 - 3 колонии и асептически суспензируйте их во флаконе с культуральным бульоном из URO-
QUICK SCREENING кита, чтобы получить рост в бульоне.
При достижении логарифмической фазы роста бактерий (помутнение бульона), осторожно
перенесите шприцом или пипеткой во флаконы с серебряной алюминиевой крышкой из AST
МакФарлнад кита (кат.номер 81 912-SVR) количество бактериальной суспензии необходимое для
получения степени мутности 0,5-0,7 по МакФарлнад (использование турбидиметра такое же, как
это описано выше),
ЗАГРУЗКА ОБРАЗЦОВ В ПРИБОР И ПРОЦЕДУРА НАСТРОЙКИ
Подготовьте флаконы с голубой алюминиевой крышкой с AST бульоном обогащения (С), в
количестве, соответствующем количеству исследуемых антибиотиков.
Каждый антибиотик имеет соответствующий ему цвет и кодировку.
Подготовьте ваш профиль антибиотиков и инокулируйте в каждый флакон (С) 100 ml инокулума,
подготовленного, как это описано выше (используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой, если использовался турбидиметр или культуральный флакон, если использовалась
--- стр. 145 ---
функция оценки мутности по МакФарлнад) и затем инокулируйте 100 ml растворенного
антибиотика. Убедитесь, что уровень жидкости достиг линии нанесенной на флаконе (С).
Следующий флакон с золотой алюминиевой крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-
SVR) инокулируют 100 ml того же инокулума, приготовленного в соответствии с инструкциями
выше, без антибиотиков.
Данный флакон является референсным образцом для оценки бактериального роста: инокулируйте
0.1 m l образца без какого-либо антибиотика.
Предупреждения:
Каждый антибиотик идентифицируется по своему собственному цвету флакона или коду,
набираемому на клавиатуре или кнопкой на экране. Цвет или код указаны на следующих
компонентах набора;
(А) Флакон с лиофилизированным антибиотиком, (В) Жидкость для разведения антибиотика, (С)
60 флаконов с бульоном обогащения.
Линезолид имеет код LZD. В соответствии с потребностями пользователя, возможно набрать
необходимую панель антибиотиков для Грам+ или для Грам- используя программное обеспечение
прибора..
При загрузке каждого флакон (С) в прибор 1з следуйте инструкциям, появляющимся на экране.
Схема, представленная ниже в графической форме, показывает процедуру загрузки и
программирования.
Образцы инокулированные с использованием скринингового бульонного теста уринокультур или
бактериальными культурами из изолированных колоний, в соответствии с выше описанными
процедурами разведения, загружаются в прибор. Результаты будут получены через 3 часа.
При завершении анализа через 3 часа, результаты выдаются в виде процента резистентных (R)
или чувствительных (S) для каждого исследованного антибиотика, в сравнении с референсными
значениями.
Пример отчета по линезолиду.
Валидирование инокулума :
Стандартизация инокулума является важным фактором проведения теста на
чувствтительность.
Чтобы получить корректные показатели при использовании AST-ЛИНЕЗОЛИД кита,
рекомендуется проверить референсные значения инокулума образца.
Значения инокулума должны быть > 700.000 KOE/mL, в том случае, если они ниже прибор
выдаст сообщение “ NV” (Not valid). В этом случае тест должен быть проделан повторно.
Процентные значения группируются по категориям 3 = Чувствительный , I = Промежуточный , R =
Резистентный.
S 1 R
8 Percentage 100-65 % 65-50% 50-0%
R Percentaqe 0-35% 35-50% 50-100%
ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Для оценки стандартизации и контроля качества получаемых результатов проводят процедуры
при помощи штаммов АТСС. Частота и модальность сессий контроля качества является
--- стр. 146 ---
г
ответственностью пользователя и производится в соответствии с существующими в стране
рекомендациями.
Вследствие существующих особых ростовых характеристик образцов, подвергавшихся
процедурам стабилизации и презервации, время исследования антибиотикочувствительности для
таких образцов удлиняется до 5 часов.
Escherichia coli АТСС 25922 Staphylococcus aureus АТСС
29213
Ожидаемые результаты S S
ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДИКИ
• Для прямой оценки чувствительности: время проведения теста существенно удлиняется,
т.к. культуральный тест может оказывать влияние на характеристики образца.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: проведение теста со старыми
колониями с чашек может влиять на результаты теста.
• Длительные паузы между этапами работы (от приготовления инокулума до загрузки в
прибор) могут влиять на результаты.
• Для прямой оценки чувствительности: могут быть исследованы только образцы,
предварительно отобранные по окраске по Граму, для исключения полимикробного
роста.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: инокулум, полученный путем
смешивания разных изолированных колоний или из слабо изолированных колоний может
влиять на результаты.
ОЖИДАЕМЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
Принимая во внимание, что бактериальная резистентность может варьировать в разных
географических зонах, ожидаемые результаты прямо зависят от локальной микробной экологии
(Виды /Механизмы резистентности).
ПОКАЗАТЕЛИ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ПРИ ПРЯХ ТЕСТАХ В УРИНОКУЛЬТУРАХ
Показатели по AST-Линезолиду оценивались с использованием положительных образцов мочи,
содержавших следующие виды :
Escherichia spp, Proteus spp. Staphylococcus spp.
Klebsiella spp. Citrobacter spp.
Enterobacter spp. Morganella spp.
Эти образцы были получены из института микробиологии и параллельно тестировались
референсным методом Кирби-Бауэра после культивирования на чашках Петри,
УРОВЕНЬ ДОСТОВЕРНОСТИ
Уровень достоверности результатов, полученных при помощи референсного метода на 109
штаммах составлял 99,08% .
"Большая ошибка" и “очень большая ошибка" в процентном отношении составляли 0% и 0%
соответственно.
ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ
Уровни воспроизводимости в процентном отношении (чувствительные, промежуточные,
резистентные), полученные в 8 повторностях на 2-х бактериальных штаммах составлял 100%.
--- стр. 147 ---
ALIFAX S.p.A.
via Petrarca 2/1 - 35020 Polverara (PD) - Italy
tel. +39 049 0992000
web site: www.alifax.com
e-mail: info@alifax.com
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1) Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standard for Antimicrobial
Susceptibility Testing; Eighteenth Informational Supplement. Approved Standard CLSI
Document M100-S18, Vol. 28, No. 1, Winkler MA et al., January, 2008.
2) Jennifer M. Andrews,
“Determination ofminimunn inhibitory concentrations", Journal of
Antim icrobial Chemotherapy (2001), 48, SuppI S1, 5-16.
3) Livermore D.M., Winstanley T.G., Shannon K.P., “Interpretative reading: recognizing the unusuai
and inferring resistance mechanisms from resistance phenotypes", Journal of Antimicrobial
Chemotherapy (2001), 48, SuppI S1, 87-102,
4) Chapin K.C. and Murray P.R. "Principles of Stains and Media". Murray P.R. et a l: Manual of
Clinical Microbiology, 8th edition, 258-261. ASM Press 2003.
5) Jorgensen H.J. "Selection Criteria for an Antimicrobial Susceptibility Testing System", Journal of
Clinical Microbiology Nov. 1993; 31(11): 2841-2844.
6) ROCEPHINl 1 package insert
7) Product References :
8) S. Roveta, A. Marchese, E.A. Debbia (Microbiology Institute, Genoa University, Italy),
"Evaluation of the Antibiotic Susceptibility on 412 Pathogens Isolated from Severe Bacterial
Infections Employing the Uro-Quick System", Poster, ICAAC, Washington, 30 October - 2
November 2004.
9) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in intensive care units using the Uro-
Quick System", Poster, AMCLI, Padova, 8-11 June 2004.
10) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test of Uropathogens using the Uro-Quick System directly on
urine". Poster, ASM, New Orleans, 23-27 May 2004.
1 1) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in ICU using the Uro-Quick System",
Poster, ECCMID, Prague, 1-4 May 2004.
12) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, University di Genova),
“Evaluation of the Uroquick, a new rapid automated system, for the detection of well-
characterized antibiotic-resistant bacteria", Journal of Chemotherapy 2004 Apr; 16(2): 107-18.
13) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, Universita di Genova),
“Esecuzione rapida di antibiogrammi su campioni di urine mediante sistema Uro-quick”, Poster,
National Congress SIM, Rome, 19-21 October 2003.
14) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, Universita di Genova), “The Uro-
Quick System for the Identification of Well-chracterized Antibiotic-resistance Strains",
Microbiologia Medica, vol 18, № I, 2003, p. 49-55.
--- стр. 151 ---
Необходимо осторожно обращаться с лиофилизатом антибиотика: избегать попадания
вовнутрь, вдыхания, контакта с кожей, глазами и одеждой. Избегайте длительного
контакта.
Некоторые из компонентов питательных бульонов имеют животное происхождение.
Достоверное знание об источниках происхождение мяса животных и его санитарном
состоянии не гарантирует отсутствия трансмиссивных патогенных агентов. Тем не менее,
рекомендовано обращаться с данными продуктами, как с потенциально инфицированными
и, соответственно соблюдать предписанные меры предосторожности.
Необходимо использование всех предосторожностей, применяемых при работе с
потенциально инфекционными продуктами.
Биологические образцы, бактериальные культуры должны рассматриваться как источники
потенциальной инфекции и в отношении их должны соблюдаться меры предосторожности
в соответствии с национальными законами.
Рекомендуется использовать средства индивидуальной защиты.
Чтобы избежать нарушения качества реагентов, тщательно соблюдайте условия их
хранения.
Перед использованием каждая упаковка должна быть проверена на отсутствие видимых
повреждений.
Не используйте флаконы с повреждениями упаковки, признаками помутнения или
изменения цвета.
Не используйте реагенты после окончания срока годности.
- Обращайтесь осторожно с открытыми флаконами с серебряной крышкой с
бактериальными суспензиями.
Не используйте флаконы с бульоном обогащения повторно.
Обращайтесь с флаконами как с хрупкими предметами.
Не прикасайтесь к флаконам с бульоном обогащения ниже отмеченной на них линии.
Используйте штатив для того, чтобы избежать разливания жидкостей в процессе
пипетирования или транспортировки.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
Образцы:
Флаконы, содержащие бактериальные суспензии для тестирования (флаконы из URO-QUICK
скрининг кита) или приготовленные из изолированных колоний, должны быть быстро исследованы
с одновременным охлаждением, чтобы избежать длительного пребывания при комнатной
температуре перед исследованием.
Реагенты:
- Флаконы с лиофилизированными антибиотикамидолжны содержаться в темном месте при
2-8°С, до окончания срока годности, указанной на упаковке.
Раствор для разведения должен храниться в холодильнике при 2-8°С, до окончания срока
годности, указанной на упаковке.
- Флаконы с бульоном обогащения должны храниться при 4-30 “С до окончания срока
годности.
Разведенный антибиотик должен храниться в холодильнике при 2-8°С в темноте до 7
дней.
/ б Т
--- стр. 152 ---
Раствор для разведения , после первого открывания должен храниться при 2-8 °С, до
окончания срока годности, указанной на упаковке.
УТИЛИЗАЦИЯ ОТХОДОВ
Утилизация реагентов образцов, растворов для разведения и отходов является ответственное, ью
пользователя, в соответствии с требованиями национальных законов.
МЕТОДИКА РАЗВЕДЕНИЯ АНТИБИОТИКА
Разведите одновременно и в соответствии с вашими потребностями Реагент (А) и Реагент (В)
следующим образом:
1. Отройте раствор реагента (В), и используя микропипетку добавьте 1000 pL этого раствора во
флакон с лиофилизированным антибиотиком, также предварительно открытому.
2. Аккуратно перемешайте. Это количество разведенного антибиотика позволяет произвести 6
тестов; в случае необходимости в дальнейших тестах повторите вышеописанную процедуру.
3. Используя полученный раствор антибиотика проведите тесты; оставшийся реагент (В) должен
храниться при 2-8°С, в темном месте, не более 7 дней (напишите на этикетке флакона дату
истечения годности.
4. Перед использованием дайте флакону постоять несколько минут при комнатной температуре
или приготовьте новый раствор как это описано в п.1.
Предупреждения:
Жидкий компонент для разведения специфичен для данного антибиотика.
МЕТОДИКА ДЛЯ ПРЯМОГО ТЕСТА НА АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ
УРИНОКУЛЬТУРЫ
1 - ПОДГОТОВКА ПОЛОЖИТЕЛЬНОГО ОБРАЗЦА УРИНОКУЛЬТУРЫ
Для каждого образца, определенного как положительный на анализаторах HB&L UROQUATTRO
или ALFRED60, необходимо прежде всего проделать окраску по Граму, для дифференциации
Грам+ от Грам- и для проверки чистоты культуры, В случае полибактериальной культуры,
проведите субкультивирование для выделения колоний и проведения тестов на идентификацию и
чувствительность. В случае монокультуры, возможно непосредственное проведение теста на
антибиотикочувствительности с использованием AST кита и выбор надлежащего антибиотика в
соответствии с характеристиками микроорганизма (Грам+ или Грам-), Каждый антибиотик
инокулируется в соответствующий AST флакон.
Образцы для прямого тестирования антибитикочувствительности (монокультура) инокулируют во
флакон CAST бульоном, используя положительные бульонный уринокультуры.
Чтобы оптимизировать и стандартизировать рабочую бактериальную концентрацию для теста на
антибитикочувствительность, производят следующие операции:
а- Использование функции МакФарланд алертер,
на анализатора ALFRED60, HB&L
UROQUATTRO с программным обеспечением Version 1.1А и выше.
Если эта функция используется, прибор показывает степень мутности МакФарланду
Непосредственно в анализируемом образце в процессе теста. При достижении степени мутности
0.5-0,7 суспензия считается готовой для проведения теста на антибиотикочувствительность
(следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
--- стр. 153 ---
b - Использование турбидиметра, на приборе ALFRED 60 с программным обеспечением Version
1.2А и выше, HB&L UROQUATTRO с программным обеспечением Version 4.0А и выше (DOS) или
1.0N и выше (Windows).
Возможно приготовление суспензий оптимизированных по МакФарлнад методом разведения
более концентрированного материала или из изолированных колоний, с использованием
турбидиметра (следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Следующая методика делается вовремя или после культурального теста:
1 - Образец в процессе анализа:
a) Когда анализ еще в процессе, выберите позицию образца и подтвердите окончание анализа для
данного образца.
b) По окончании анализа, выберите свободную позицию и подтвердите режим турбидиметра
(функция турбидиметра появляется на экране).
c) Поставьте флакон с положительным образцом в указанную прибором позицию.
d) После получения турбидиметром значения степени мутности, прибор сообщит необходимые
для разведения объемы для получения бактериальной концентрации для получения
бактериальной концентрации в пределах 0,5-0,7 по МакФарланд,
e) Для проведения разведений бульона используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-SVR). Для предотвращения образования
пузырьков внутри флакона, используйте шприц, погружая иглу глубоко в жидкость в пузырьке.
ПОЛОЖИТЕЛЬНАЯ КУЛЬТУРА
ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ ПОСЛЕ СЧИТЫВАНИЙ ТУРБИДИМЕТРА
f) По окончании сеанса турбидиметрии нажмите кнопку «exit» для получения резюме анализа
уринокультур.
2 - Образец в конце анализа:
Начните работу с инокулумом, начиная с пункта Ь) в предыдущем параграфе.
3 - Процедура подготовки образцов для теста на антимикробную чувствительность из
изолированной колонии.
Для каждого клинического образца из которого получена монокультура на чашке Петри, возьмите
2 - 3 колонии и асептически суспензируйте их во флаконе с культуральным бульоном из URO-
QUICK SCREENING кита, чтобы получить рост в бульоне.
При достижении логарифмической фазы роста бактерий (помутнение бульона), осторожно
перенесите шприцом или пипеткой во флаконы с серебряной алюминиевой крышкой из AST
МакФарлнад кита (кат.номер SI 912-SVR) количество бактериальной суспензии необходимое для
получения степени мутности 0,5-0,7 по МакФарлнад (использование турбидиметра такое же, как
это описано выше).
ЗАГРУЗКА ОБРАЗЦОВ В ПРИБОР И ПРОЦЕДУРА НАСТРОЙКИ
Подготовьте флаконы с голубой алюминиевой крышкой с AST бульоном обогащения (С), в
количестве, соответствующем количеству исследуемых антибиотиков.
Каждый антибиотик имеет соответствующий ему цвет и кодировку.
Подготовьте ваш профиль антибиотиков и инокулируйте в каждый флакон (С) 100 ml инокулума,
подготовленного, как это описано выше (используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой, если использовался турбидиметр или культуральный флакон, если использовалась
--- стр. 154 ---
функция оценки мутности по МакФарлнад) и затем инокулируйте 100 ml растворенного
антибиотика. Убедитесь, что уровень жидкости достиг линии нанесенной на флаконе (С).
Следующий флакон с золотой алюминиевой крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-
SVR) инокулируют 100 ml того же инокулума, приготовленного в соответствии с инструкциями
выше, без антибиотиков.
Данный флакон является референсным образцом для оценки бактериального роста: инокулируйте
0.1 mL образца без какого-либо антибиотика.
Предупреждения:
Каждый антибиотик идентифицируется по своему собственному цвету флакона или коду,
набираемому на клавиатуре или кнопкой на экране. Цвет или код указаны на следующих
компонентах набора:
(А) Флакон с лиофилизированным антибиотиком, (В) Жидкость для разведения антибиотика, (С)
60 флаконов с бульоном обогащения.
Левофлоксацин имеет код LEV.
В соответствии с потребностями пользователя, возможно набрать необходимую панель
антибиотиков для Грам+ или для Грам- используя программное обеспечение прибора..
При загрузке каждого флакон (С) в прибор1з следуйте инструкциям, появляющимся на экране.
Схема, представленная ниже в графической форме, показывает процедуру загрузки и
программирования.
Образцы инокулированные с использованием скринингового бульонного теста уринокультур или
бактериальными культурами из изолированных колоний, в соответствии с выше описанными
процедурами разведения, загружаются в прибор. Результаты будут получены через 3 часа.
При завершении анализа через 3 часа, результаты выдаются в виде процента резистентных (R)
или чувствительных (S) для каждого исследованного антибиотика, в сравнении с референсными
значениями.
Пример отчета по левофлоксацину.
Валидирование инокулума :
Стандартизация инокулума является важным фактором проведения теста на
чувствтительность.
Чтобы получить корректные показатели при использовании! AST-ЛЕВОФЛОКСАЦИН кита,
рекомендуется проверить референсные значения инокулума образца.
Значения инокулума должны быть > 700.000 KOE/mL, в том случае, если они ниже прибор
выдаст сообщение “ NV” (Not valid). В этом случае тест должен быть проделан повторно.
Процентные значения группируются по категориям S = Чувствительный , I = Промежуточный , R =
Резистентный,
S 1 R
S Percentage 100-65 % 65-50% 50-0%
R Percentage 0-35% 35-50% 50-100%
ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Для оценки стандартизации и контроля качества получаемых результатов проводят процедуры
при помощи штаммов АТСС. Частота и модальность сессий контроля качества является
--- стр. 155 ---
ответственностью пользователя и производится в соответствии с существующими в стране
рекомендациями.
Вследствие существующих особых ростовых характеристик образцов, подвергавшихся
процедурам стабилизации и презервации, время исследования антибиотикочувствительности для
таких образцов удлиняется до 5 часов.
Escherichia соН АТСС 25922 Staphylococcus aureus АТСС
29213
Ожидаемые результаты S S
ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДИКИ
• Для прямой оценки чувствительности; время проведения теста существенно удлиняется,
т.к. культуральный тест может оказывать влияние на характеристики образца.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: проведение теста со старыми
колониями с чашек может влиять на результаты теста,
• Длительные паузы между этапами работы (от приготовления инокулума до загрузки в
прибор) могут влиять на результаты.
• Для прямой оценки чувствительности: могут быть исследованы только образцы,
предварительно отобранные по окраске по Граму, для исключения полимикробного
роста.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: инокулум, полученный путем
смешивания разных изолированных колоний или из слабо изолированных колоний может
влиять на результаты.
ОЖИДАЕМЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
Принимая во внимание, что бактериальная резистентность может варьировать в разных
географических зонах, ожидаемые результаты прямо зависят от локальной микробной экологии
(Виды /Механизмы резистентности).
ПОКАЗАТЕЛИ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ПРИ ПРЯХ ТЕСТАХ В УРИНОКУЛЬТУРАХ
Показатели по AST-Левофлоксацину оценивались с использованием положительных образцов
мочи, содержавших следующие виды :
Escherichia spp. Proteus spp. Staphyiococcus spp.
Klebsieila spp. Citrobacter spp.
Enterobacter spp. Morganeiia spp.
Эти образцы были получены из института микробиологии и параллельно тестировались
референсным методом Кирби-Бауэра после культивирования на чашках Петри,
УРОВЕНЬ ДОСТОВЕРНОСТИ
Уровень достоверности результатов, полученных при помощи референсного метода на 72
штаммах составлял 97,22% .
“Большая ошибка” и “очень большая ошибка” в процентном отношении составляли 2,78% и 0%
соответственно.
ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ
Уровни воспроизводимости в процентном отношении (чувствительные, промежуточные,
резистентные), полученные в 5 повторностях на 2-х бактериальных штаммах составлял 100%.
--- стр. 156 ---
ALIFAX S.p.A.
via Petrarca 2/1 - 35020 Polverara (PD) - Italy
tel. +39 049 0992000
web site: www.alifax.com
e-mail: info@alifax.com
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1) Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standard for Antimicrobial
Susceptibility Testing; Eighteenth Informational Supplement, Approved Standard CLSI
Document M100-S18, Vol. 28, No. 1, Winkler MA et al., January, 2008.
2) Jennifer M. Andrews, “ Determination of minimum inhibitory concentrations", Journal of
Antim icrobial Chemotherapy (2001), 48, SuppI S1, 5-16.
3) Livermore D.M., Winstanley T.G., Shannon K.P., Interpretative reading: recognizing the unusual
and inferring resistance mechanisms from resistance phenotypes", Journal of Antimicrobial
Chemotherapy (2001), 48, SuppI S1, 87-102.
^ 4) Chapin K.C. and Murray P.R. “ Principles of Stains and Media". Murray P.R. et a l: Manual of
Clinical IVIicrobiology, 8th edition, 258-261 ASM Press 2003.
5) Jorgensen H,J. “ Selection Criteria for an Antimicrobial Susceptibility Testing System” , Journal of
Clinical Microbiology Nov 1993; 31(11): 2841-2844.
6) ROCEPHINi package insert
7) Product References :
8) S. Roveta, A. Marchese, E.A. Debbia (Microbiology Institute, Genoa University, Italy),
"Evaluation of the Antibiotic Susceptibility on 412 Pathogens Isolated from Severe Bacterial
Infections Employing the Uro-Quick System", Poster, ICAAC, Washington, 30 October - 2
November 2004,
9) S. Roveta, F. Cavallini, A, Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in intensive care units using the Uro-
Quick System", Poster, AMCLI, Padova, 8-11 June 2004.
10) S. Roveta, F. Cavallini, A, Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute. Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test of Uropathogens using the Uro-Quick System directly on
urine", Poster, ASM, New Orleans, 23-27 May 2004.
1 1) S. Roveta, F. Cavallini, A, Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in ICU using the Uro-Quick System",
Poster, ECCMID, Prague, 1-4 May 2004.
12) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, Universita di Genova),
“ Evaluation of the Uroquick, a new rapid automated system, for the detection of well-
characterized antibiotic-resistant bacteria” , Journal of Chemotherapy 2004 Apr; 16(2): 107-18.
13) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, University di Genova),
“ Esecuzione rapida di antibiogrammi su campioni di urine mediante sistema Uro-quick", Poster,
National Congress SIM, Rome, 19-21 October 2003.
14) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, Universita di Genova), “ The Uro-
Quick System for the Identification of Well-chracterized Antibiotic-resistance Strains",
Microbiologia Medica, vol. 18, № I, 2003, p. 49-55,
--- стр. 160 ---
- 60 одноразовых шприцев для работы с бульоном обогащения при получении необходимой
степени мутности по шкале МакФарлнад.
МЕРЫ ПРЕДОСТРОЖНОСТИ
Только для профессиональной диагностики in vitro.
Необходимо осторожно обращаться с лиофилизатом антибиотика: избегать попадания
вовнутрь, вдыхания, контакта с кожей, глазами и одеждой. Избегайте длительного
контакта.
Некоторые из компонентов питательных бульонов имеют животное происхождение.
Достоверное знание об источниках происхождение мяса животных и его санитарном
состоянии не гарантирует отсутствия трансмиссивных патогенных агентов. Тем не менее,
рекомендовано обращаться сданными продуктами, как с потенциально инфицированными
и, соответственно соблюдать предписанные меры предосторожности.
- Необходимо использование всех предосторожностей, применяемых при работе с
потенциально инфекционными продуктами.
Биологические образцы, бактериальные культуры должны рассматриваться как источники
Г потенциальной инфекции и в отношении их должны соблюдаться меры предосторожности
в соответствии с национальными законами.
Рекомендуется использовать средства индивидуальной защиты.
Чтобы избежать нарушения качества реагентов, тщательно соблюдайте условия их
хранения.
Перед использованием каждая упаковка должна быть проверена на отсутствие видимых
повреждений.
Не используйте флаконы с повреждениями упаковки, признаками помутнения или
изменения цвета.
Не используйте реагенты после окончания срока годности,
Обращайтесь осторожно с открытыми флаконами с серебряной крышкой с
бактериальными суспензиями.
Не используйте флаконы с бульоном обогащения повторно.
^ - Обращайтесь с флаконами как с хрупкими предметами.
Не прикасайтесь к флаконам с бульоном обогащения ниже отмеченной на них линии.
Используйте штатив для того, чтобы избежать разливания жидкостей в процессе
пипетирования или транспортировки.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
Образцы:
Флаконы, содержащие бактериальные суспензии для тестирования (флаконы из URO-QUICK
скрининг кита) или приготовленные из изолированных колоний, должны быть быстро исследованы
с одновременным охлаждением, чтобы избежать длительного пребывания при комнатной
температуре перед исследованием.
Реагенты:
- Флаконы с лиофилизированными антибиотикамидолжны содержаться в темном месте при
2-8°С, до окончания срока годности, указанной на упаковке.
- Раствор для разведения должен храниться в холодильнике при 2-8°С, до окончания срока
годности, указанной на упаковке.
--- стр. 161 ---
- Флаконы с бульоном обогащения должны храниться при 4-30 °С до окончания срока
годности.
Разведенный антибиотик должен храниться в холодильнике при 2-8°С в темноте до 7
дней.
Раствор для разведения , после первого открывания должен храниться при 2-8 °С, до
окончания срока годности, указанной на упаковке.
УТИЛИЗАЦИЯ ОТХОДОВ
Утилизация реагентов образцов, растворов для разведения и отходов является ответственностью
пользователя, в соответствии с требованиями национальных законов.
МЕТОДИКА РАЗВЕДЕНИЯ АНТИБИОТИКА
Разведите одновременно и в соответствии с вашими потребностями Реагент (А) и Реагент (В)
следующим образом:
1. Отройте раствор реагента (В), и используя микропипетку добавьте 1000 pL этого раствора во
флакон с лиофилизированным антибиотиком, также предварительно открытому.
^ 2. Аккуратно перемешайте. Это количество разведенного антибиотика позволяет произвести 6
тестов; в случае необходимости в дальнейших тестах повторите вышеописанную процедуру.
3. Используя полученный раствор антибиотика проведите тесты; оставшийся реагент (В) должен
храниться при 2-8°С, в темном месте, не более 7 дней (напишите на этикетке флакона дату
истечения годности.
4. Перед использованием дайте флакону постоять несколько минут при комнатной температуре
или приготовьте новый раствор как это описано в п.1.
Предупреждения:
Жидкий компонент для разведения специфичен для данного антибиотика.
МЕТОДИКА ДЛЯ ПРЯМОГО ТЕСТА НА АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ
УРИНОКУЛЬТУРЫ
1 - ПОДГОТОВКА ПОЛОЖИТЕЛЬНОГО ОБРАЗЦА УРИНОКУЛЬТУРЫ
Для каждого образца, определенного как положительный на анализаторах HB&L UROQUATTRO
^ или ALFRED60, необходимо прежде всего проделать окраску по Граму, для дифференциации
Грам+ от Грам- и для проверки чистоты культуры. В случае полибактериальной культуры,
проведите субкультивирование для выделения колоний и проведения тестов на идентификацию и
чувствительность. В случае монокультуры, возможно непосредственное проведение теста на
антибиотикочувствительности с использованием AST кита и выбор надлежащего антибиотика в
соответствии с характеристиками микроорганизма (Грам+ или Грам-). Каждый антибиотик
инокулируется в соответствующий AST флакон.
Образцы для прямого тестирования антибитикочувствительности (монокультура) инокулируют во
флакон CAST бульоном, используя положительные бульонный уринокультуры.
Чтобы оптимизировать и стандартизировать рабочую бактериальную концентрацию для теста на
антибитикочувствительность, производят следующие операции:
а- Использование функции МакФарланд алертер, на анализатора ALFRED60, HB&L
UROQUATTRO с программным обеспечением Version 1.1 А и выше.
Если эта функция используется, прибор показывает степень мутности МакФарланду
1непосредственно в анализируемом образце в процессе теста. При достижении степени мутности
--- стр. 162 ---
0.5-0.7 суспензия считается готовой для проведения теста на антибиотикочувствительность
(следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Ь - Использование турбидиметра, на приборе ALFRED 60 с программным обеспечением Version
1.2А и выше, HB&L UROQUATTRO с программным обеспечением Version 4.0А и выше (DOS) или
1.0N и выше (Windows).
Возможно приготовление суспензий оптимизированных по МакФарлнад методом разведения
более концентрированного материала или из изолированных колоний, с использованием
турбидиметра (следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Следующая методика делается вовремя или после культурального теста:
1 - Образец в процессе анализа:
a) Когда анализ еще в процессе, выберите позицию образца и подтвердите окончание анализа для
данного образца.
b) По окончании анализа, выберите свободную позицию и подтвердите режим турбидиметра
(функция турбидиметра появляется на экране).
^ с) Поставьте флакон с положительным образцом в указанную прибором позицию.
d) После получения турбидиметром значения степени мутности, прибор сообщит необходимые
для разведения объемы для получения бактериальной концентрации для получения
бактериальной концентрации в пределах 0,5-0,7 по МакФарланд.
e) Для проведения разведений бульона используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-SVR). Для предотвращения образования
пузырьков внутри флакона, используйте шприц, погружая иглу глубоко в жидкость в пузырьке.
ПОЛОЖИТЕЛЬНАЯ КУЛЬТУРА
ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ ПОСЛЕ СЧИТЫВАНИЙ ТУРБИДИМЕТРА
f) По окончании сеанса турбидиметрии нажмите кнопку «exit» для получения резюме анализа
уринокультур.
2 - Образец в конце анализа:
Начните работу с инокулумом, начиная с пункта Ь) в предыдущем параграфе.
3 - Процедура подготовки образцов для теста на антимикробную чувствительность из
изолированной колонии.
Для каждого клинического образца из которого получена монокультура на чашке Петри, возьмите
2 - 3 колонии и асептически суспензируйте их во флаконе с культуральным бульоном из URO-
QUICK SCREENING кита, чтобы получить рост в бульоне.
При достижении логарифмической фазы роста бактерий (помутнение бульона), осторожно
перенесите шприцом или пипеткой во флаконы с серебряной алюминиевой крышкой из AST
МакФарлнад кита (кат.номер SI 912-SVR) количество бактериальной суспензии необходимое для
получения степени мутности 0,5-0,7 по МакФарлнад (использование турбидиметра такое же, к^к
это описано выше).
ЗАГРУЗКА ОБРАЗЦОВ В ПРИБОР И ПРОЦЕДУРА НАСТРОЙКИ
Подготовьте флаконы с голубой алюминиевой крышкой с AST бульоном обогащения (С), в
количестве, соответствующем количеству исследуемых антибиотиков.
Каждый антибиотик имеет соответствующий ему цвет и кодировку.
Г
--- стр. 163 ---
Подготовьте ваш профиль антибиотиков и инокулируйте в каждый флакон (С) 100 ml инокулума,
подготовленного, как это описано выше (используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой, если использовался турбидиметр или культуральный флакон, если использовалась
функция оценки мутности по МакФарлнад) и затем инокулируйте 100 ml растворенного
антибиотика. Убедитесь, что уровень жидкости достиг линии нанесенной на флаконе (С).
Следующий флакон с золотой алюминиевой крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-
SVR) инокулируют 100 ml того же инокулума, приготовленного в соответствии с инструкциями
выше, без антибиотиков.
Данный флакон является референсным образцом для оценки бактериального роста: инокулируйте
0.1 mL образца без какого-либо антибиотика.
Предупреждения:
Каждый антибиотик идентифицируется по своему собственному цвету флакона или коду,
набираемому на клавиатуре или кнопкой на экране. Цвет или код указаны на следующих
компонентах набора:
(А) Флакон с лиофилизированным антибиотиком, (В) Жидкость для разведения антибиотика, (С)
60 флаконов с бульоном обогащения.
Флакон с котримаксазолом имеет красную этикетку.
В соответствии с потребностями пользователя, возможно набрать необходимую панель
антибиотиков для Грам+ или для Грам- используя программное обеспечение прибора..
При загрузке каждого флакон (С) в прибор1з следуйте инструкциям, появляющимся на экране.
Схема, представленная ниже в графической форме, показывает процедуру загрузки и
программирования.
Образцы инокулированные с использованием скринингового бульонного теста уринокультур или
бактериальными культурами из изолированных колоний, в соответствии с выше описанными
процедурами разведения, загружаются в прибор. Результаты будут получены через 3 часа.
При завершении анализа через 3 часа, результаты выдаются в виде процента резистентных (R)
или чувствительных (S) для каждого исследованного антибиотика, в сравнении с референсными
^ значениями.
Пример отчета по котримаксазолу.
Перед клиническим использованием рекомендуется исключить положительную
идентификацию Ps. aerogionosa и энтерококков.
Валидирование инокулума :
Стандартизация инокулума является важным фактором проведения теста на
чувствтительность.
Чтобы получить корректные показатели при использовании! AST-котримаксазол кита,
рекомендуется проверить референсные значения инокулума образца.
Значения инокулума должны быть > 700.000 KOE/mL, в том случае, если они ниже прибор
выдаст сообщение “ NV” (Not valid). В этом случае тест должен быть проделан повторно.
Процентные значения группируются по категориям S = Чувствительный , I = Промежуточный , R =
Резистентный.
S 1 R
M l .
--- стр. 164 ---
S Percentage 100-65% 65-50% 50-0%
R Percentage 0-35% 35-50% 50-100%
г
в н у т р е н н и й к о н т р о л ь к а ч е с т в а
Для оценки стандартизации и контроля качества получаемых результатов проводят процедуры
при помощи штаммов АТСС. Частота и модальность сессий контроля качества является
ответственностью пользователя и производится в соответствии с существующими в стране
рекомендациями.
Вследствие существующих особых ростовых характеристик образцов, подвергавшихся
процедурам стабилизации и презервации, время исследования антибиотикочувствительности для
таких образцов удлиняется до 5 часов.
Escherichia со//'АТСС 25922 Staphylococcus aureus АТСС
29213
Ожидаемые результаты S S
ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДИКИ
• Для прямой оценки чувствительности; время проведения теста существенно удлиняется,
т.к. культуральный тест может оказывать влияние на характеристики образца.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: проведение теста со старыми
колониями с чашек может влиять на результаты теста.
• Длительные паузы между этапами работы (от приготовления инокулума до загрузки в
прибор) могут влиять на результаты.
• Для прямой оценки чувствительности: могут быть исследованы только образцы,
предварительно отобранные по окраске по Граму, для исключения полимикробного
роста.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: инокулум, полученный путем
смешивания разных изолированных колоний или из слабо изолированных колоний может
влиять на результаты.
ОЖИДАЕМЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
Принимая во внимание, что бактериальная резистентность может варьировать в разных
географических зонах, ожидаемые результаты прямо зависят от локальной микробной экологии
(Виды /Механизмы резистентности),
ПОКАЗАТЕЛИ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ПРИ ПРЯХ ТЕСТАХ В УРИНОКУЛЬТУРАХ
Показатели по AST-Котримаксазол оценивались с использованием положительных образцов мочи,
содержавших следующие виды :
Escherichia spp. Proteus spp. Staphylococcus spp,
Klebsiella spp. Cltrobacter spp.
Enterobacter spp. Morganella spp.
Эти образцы были получены из института микробиологии и параллельно тестировались
референсным методом Кирби-Бауэра после культивирования на чашках Петри,
УРОВЕНЬ ДОСТОВЕРНОСТИ
ш .
--- стр. 165 ---
уровень достоверности результатов, полученных при помощи референсного метода на 82
штаммах составлял 96,34% .
"Большая ошибка” и “очень большая ошибка” в процентном отношении составляли 1,22% и 0%
соответственно.
ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ
Уровни воспроизводимости в процентном отношении (чувствительные, промежуточные,
резистентные), полученные в 7 повторностях на 2-х бактериальных штаммах составлял 100%.
ALIFAX S.p.A.
via Petrarca 2/1 - 35020 Polverara (PD) - Italy
tel. -t-S g 049 0992000
web site; www.alifax.com
e-mail; info@alifax.com
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1) Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standard for Antimicrobial
^ Susceptibility Testing; Eighteenth Informational Supplement. Approved Standard CLSI
Document M l 00-SI 8, Vol. 28, No. 1, Winkler MA et al., January, 2008.
2) Jennifer M. Andrews, “ Determiation of minimum inhibitory concentrations", Journal of
Antim icrobial Chemotherapy (2001), 48, SuppI S1, 5-16
3) Livermore D.M., Winstanley T.G., Shannon K.P., “ Interpretative reading: recognizing the unusual
and inferring resistance mechanisms from resistance phenotypes", Journal of Antimicrobial
Chemotherapy (2001), 48, SuppI S1, 87-102.
4) Chapin K.C. and Murray P.R. “ Principles of Stains and Media". Murray P.R. et a l; Manual of
Clinical Microbiology, 8th edition, 258-261. ASM Press 2003.
5) Jorgensen H.J. “ Selection Criteria for an Antimicrobial Susceptibility Testing System", Journal of
Clinical Microbiology Nov. 1993; 31(11); 2841-2844.
6) Product References :
7) 8. Roveta, A. Marchese, E.A. Debbia (Microbiology Institute, Genoa University, Italy),
^ "Evaluation of the Antibiotic Susceptibility on 412 Pathogens Isolated from Severe Bacterial
Infections Employing the Uro-Quick System", Poster, ICAAC, Washington, 30 October - 2
November 2004.
8) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in intensive care units using the Uro-
Quick System", Poster, AMCLI, Padova, 8-11 June 2004.
9) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test of Uropathogens using the Uro-Quick System directly on
urine". Poster, ASM, New Orleans, 23-27 May 2004.
10) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in ICU using the Uro-Quick System",
Poster, ECCMID, Prague, 1-4 May 2004.
11) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, University di Genova),
“ Evaluation of the Uroquick, a new rapid automated system, for the detection of well-
characterized antibiotic-resistant bacteria", Journal of Chemotherapy 2004 Apr; 16(2); 107-18.
Ж
--- стр. 172 ---
г
функция оценки мутности по МакФарлнад) и затем инокулируйте 100 ml растворенного
антибиотика. Убедитесь, что уровень жидкости достиг линии нанесенной на флаконе (С).
Следующий флакон с золотой алюминиевой крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-
SVR) инокулируют 100 ml того же инокулума, приготовленного в соответствии с инструкциями
выше, без антибиотиков.
Данный флакон является референсным образцом для оценки бактериального роста: инокулируйте
0.1 mL образца без какого-либо антибиотика,
Предупреждения:
Каждый антибиотик идентифицируется по своему собственному цвету флакона или коду,
набираемому на клавиатуре или кнопкой на экране. Цвет или код указаны на следующих
компонентах набора:
(А) Флакон с лиофилизированным антибиотиком, (В) Жидкость для разведения антибиотика, (С)
60 флаконов с бульоном обогащения.
Гентамицин имеет желтый цвет.
В соответствии с потребностями пользователя, возможно набрать необходимую панель
антибиотиков для Грам+ или для Грам- используя программное обеспечение прибора..
При загрузке каждого флакон (С) в прибор1з следуйте инструкциям, появляющимся на экране.
Схема, представленная ниже в графической форме, показывает процедуру загрузки и
программирования.
Образцы инокулированные с использованием скринингового бульонного теста уринокультур или
бактериальными культурами из изолированных колоний, в соответствии с выше описанными
процедурами разведения, загружаются в прибор. Результаты будут получены через 3 часа.
При завершении анализа через 3 часа, результаты выдаются в виде процента резистентных (R)
или чувствительных (S) для каждого исследованного антибиотика, в сравнении с референсными
значениями.
Пример отчета по гентамицину.
Перед клиническим применением необходимо исключить присутствие энтерококков.
Валидирование инокулума :
Стандартизация инокулума является важным фактором проведения теста на
чувствтительность.
Чтобы получить корректные показатели при использовании! AST-ГЕНТАМИЦИН кита,
рекомендуется проверить референсные значения инокулума образца.
Значения инокулума должны быть > 700.000 KOE/mL, в том случае, если они ниже прибор
выдаст сообщение “ NV” (Not valid). В этом случае тест должен быть проделан повторно.
Процентные значения группируются по категориям S = Чувствительный , I = Промежуточный , R =
Резистентный.
S 1 R
S Percentaqe 100-65 % 65-50% 50-0%
R Percentage 0-35% 35-50% 50-100%
ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Для оценки стандартизации и контроля качества получаемых результатов проводят процедуры
при помощи штаммов АТСС. Частота и модальность сессий контроля качества является
--- стр. 173 ---
ответственностью пользователя и производится в соответствии с существующими в стране
рекомендациями.
Вследствие существующих особых ростовых характеристик образцов, подвергавшихся
процедурам стабилизации и презервации, время исследования антибиотикочувствительности для
таких образцов удлиняется до 5 часов.
Escherichia соИ АТСС 25922 Staphylococcus aureus АТСС
29213
Ожидаемые результаты S S
ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДИКИ
• Для прямой оценки чувствительности: время проведения теста существенно удлиняется,
т.к. культуральный тест может оказывать влияние на характеристики образца.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: проведение теста со старыми
колониями с чашек может влиять на результаты теста.
^ • Длительные паузы между этапами работы (от приготовления инокулума до загрузки в
прибор) могут влиять на результаты.
• Для прямой оценки чувствительности: могут быть исследованы только образцы,
предварительно отобранные по окраске по Граму, для исключения полимикробного
роста.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: инокулум, полученный путем
смешивания разных изолированных колоний или из слабо изолированных колоний может
влиять на результаты.
ОЖИДАЕМЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
Принимая во внимание, что бактериальная резистентность может варьировать в разных
географических зонах, ожидаемые результаты прямо зависят от локальной микробной экологии
(Виды /Механизмы резистентности).
ПОКАЗАТЕЛИ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ПРИ ПРЯХ ТЕСТАХ В УРИНОКУЛЬТУРАХ
^ Показатели по AST-Гентамицину оценивались с использованием положительных образцов мочи,
содержавших следующие виды :
Escherichia spp. Proteus spp. Stafjhylococcus spp.
Klebsiella spp. Citrobacter spp.
Enterobacter spp. Morganella spp.
Эти образцы были получены из института микробиологии и параллельно тестировались
референсным методом Кирби-Бауэра после культивирования на чашках Петри.
УРОВЕНЬ ДОСТОВЕРНОСТИ
Уровень достоверности результатов, полученных при помощи референсного метода на 72
штаммах составлял 91,67% .
"Большая ошибка” и “очень большая ошибка” в процентном отношении составляли 2,78% и 0%
соответственно.
ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ
Уровни воспроизводимости в процентном отношении (чувствительные, промежуточные,
резистентные), полученные в 5 повторностях на 2-х бактериальных штаммах составлял 100%.
--- стр. 174 ---
ALIFAX S.p.A.
via Petrarca 2/1 - 35020 Polverara (PD) - Italy
tel. +39 049 0992000
web site; www.alifax.com
e-mail: info@alifax.com
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1) Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standard for Antimicrobial
Susceptibility Testing; Eighteenth Informational Supplement. Approved Standard CLSI
Document M100-S18, Vol. 28, No. 1, Winkler MA et al., January, 2008.
2) Jennifer M. Andrews, "Determination of minimum inhibitory concentrations", Journal of
Antim icrobial Chemotherapy (2001), 48, Suppi S1, 5-16.
3) Livermore D.M., Winstanley T.G., Shannon K.P., “ Interpretative reading; recognizing the unusual
and inferring resistance mechanisms from resistance phenotypes", Journal of Antimicrobial
Chemotherapy (2001), 48, SuppI S1, 87-102,
4) Chapin K.C. and Murray P.R. “ Principles of Stains and Media". Murray P.R. et a l: Manual of
Clinical Microbiology, 8th edition, 258-261. ASM Press 2003.
5) Jorgensen H.J. “ Selection Criteria for an Antimicrobial Susceptibility Testing System", Journal of
Clinical Microbiology Nov, 1993; 31(11): 2841-2844.
6) ROCEPHINLJ package insert
7) Product References :
8) S. Roveta, A. Marchese, E.A, Debbia (Microbiology Institute, Genoa University, Italy),
"Evaluation of the Antibiotic Susceptibility on 412 Pathogens Isolated from Severe Bacterial
Infections Employing the Uro-Quick System", Poster, ICAAC, W ashington, 30 October - 2
November 2004,
9) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in intensive care units using the Uro-
Quick System", Poster, AMCLI, Padova, 8-11 June 2004.
10) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test of Uropathogens using the Uro-Quick System directly on
urine". Poster, ASM, New Orleans, 23-27 May 2004.
11) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in ICU using the Uro-Quick System",
Poster, ECCMID, Prague, 1-4 May 2004.
12) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, University di Genova),
“ Evaluation of the Uroquick, a new rapid automated system, for the detection of well-
characterized antibiotic-resistant bacteria", Journal of Chemotherapy 2004 Apr; 16(2): 107-18,
13) S. Roveta, E.A, Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, University di Genova),
“ Esecuzione rapida di antibiogrammi su campioni di urine mediante sistema Uro-quick” , Poster,
National Congress SIM, Rome, 19-21 October 2003.
14) S. Roveta, E.A. Debbia, A, Marchese, (Istituto di Microbiologia, University di Genova), “ The Uro-
Quick System for the Identification of Well-chracterized Antibiotic-resistance Strains",
Microbiologia Medica, vol. 18, № I, 2003, p, 49-55.
--- стр. 178 ---
- 60 одноразовых шприцев для работы с бульоном обогащения при получении необходимой
степени мутности по шкале МакФарлнад.
МЕРЫ ПРЕДОСТРОЖНОСТИ
Только для профессиональной диагностики in vitro.
Необходимо осторожно обращаться с лиофилизатом антибиотика: избегать попадания
вовнутрь, вдыхания, контакта с кожей, глазами и одеждой. Избегайте длительного
контакта.
Некоторые из компонентов питательных бульонов имеют животное происхождение.
Достоверное знание об источниках происхождение мяса животных и его санитарном
состоянии не гарантирует отсутствия трансмиссивных патогенных агентов. Тем не менее,
рекомендовано обращаться с данными продуктами, как с потенциально инфицированными
и, соответственно соблюдать предписанные меры предосторожности.
Необходимо использование всех предосторожностей, применяемых при работе с
потенциально инфекционными продуктами.
Биологические образцы, бактериальные культуры должны рассматриваться как источники
потенциальной инфекции и в отношении их должны соблюдаться меры предосторожности
в соответствии с национальными законами.
Рекомендуется использовать средства индивидуальной защиты.
Чтобы избежать нарушения качества реагентов, тщательно соблюдайте условия их
хранения.
Перед использованием каждая упаковка должна быть проверена на отсутствие видимых
повреждений.
Не используйте флаконы с повреждениями упаковки, признаками помутнения или
изменения цвета.
Не используйте реагенты после окончания срока годности.
Обращайтесь осторожно с открытыми флаконами с серебряной крышкой с
бактериальными суспензиями.
Не используйте флаконы с бульоном обогащения повторно.
Обращайтесь с флаконами как с хрупкими предметами.
Не прикасайтесь к флаконам с бульоном обогащения ниже отмеченной на них линии,
1/1спользуйте штатив для того, чтобы избежать разливания жидкостей в процессе
пипетирования или транспортировки.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
Образцы;
Флаконы, содержащие бактериальные суспензии для тестирования (флаконы из URO-QUICK
скрининг кита) или приготовленные из изолированных колоний, должны быть быстро исследованы
с одновременным охлаждением, чтобы избежать длительного пребывания при комнатной
температуре перед исследованием.
Реагенты:
- Флаконы с лиофилизированными антибиотикамидолжны содержаться в темном месте при
2-8°С, до окончания срока годности, указанной на упаковке.
Раствор для разведения должен храниться в холодильнике при 2-8“С, до окончания срока
годности, указанной на упаковке.
--- стр. 179 ---
- Флаконы с бульоном обогащения должны храниться при 4-30 °С до окончания срока
годности.
- Разведенный антибиотик должен храниться в холодильнике при 2-8“С в темноте до 7
дней.
- Раствор для разведения , после первого открывания должен храниться при 2-8 °С, до
окончания срока годности, указанной на упаковке.
УТИЛИЗАЦИЯ ОТХОДОВ
Утилизация реагентов образцов, растворов для разведения и отходов является ответственностью
пользователя, в соответствии с требованиями национальных законов.
МЕТОДИКА РАЗВЕДЕНИЯ АНТИБИОТИКА
Разведите одновременно и в соответствии с вашими потребностями Реагент (А) и Реагент (В)
следующим образом:
1. Отройте раствор реагента (В), и используя микропипетку добавьте 1000 pL этого раствора во
флакон с лиофилизированным антибиотиком, также предварительно открытому.
2. Аккуратно перемешайте. Это количество разведенного антибиотика позволяет произвести 6
тестов; в случае необходимости в дальнейших тестах повторите вышеописанную процедуру.
3. Используя полученный раствор антибиотика проведите тесты; оставшийся реагент (В) должен
храниться при 2-8°С, в темном месте, не более 7 дней (напишите на этикетке флакона да^у
истечения годности.
4. Перед использованием дайте флакону постоять несколько минут при комнатной температуре
или приготовьте новый раствор как это описано в п,1.
Предупреждения:
Жидкий компонент для разведения специфичен для данного антибиотика.
МЕТОДИКА ДЛЯ ПРЯМОГО ТЕСТА НА АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ
УРИНОКУЛЬТУРЫ
1 - ПОДГОТОВКА ПОЛОЖИТЕЛЬНОГО ОБРАЗЦА УРИНОКУЛЬТУРЫ
Для каждого образца, определенного как положительный на анализаторах HB&L UROQUATTRO
или ALFRED60, необходимо прежде всего проделать окраску по Граму, для дифференциации
Грам+ от Грам- и для проверки чистоты культуры. В случае полибактериальной культуры,
проведите субкультивирование для выделения колоний и проведения тестов на идентификацию и
чувствительность, В случае монокультуры, возможно непосредственное проведение теста на
антибиотикочувствительности с использованием AST кита и выбор надлежащего антибиотика в
соответствии с характеристиками микроорганизма (Грам+ или Грам-). Каждый антибиотик
инокулируется в соответствующий AST флакон.
Образцы для прямого тестирования антибитикочувствительности (монокультура) инокулируют во
флакон с AST бульоном, используя положительные бульонный уринокультуры.
Чтобы оптимизировать и стандартизировать рабочую бактериальную концентрацию для теста на
антибитикочувствительность, производят следующие операции:
а- Использование функции МакФарланд алертер, на анализатора ALFRED60, HB&L
UROQUATTRO с программным обеспечением Version 1.1 А и выше.
Если эта функция используется, прибор показывает степень мутности МакФарланду
1непосредственно в анализируемом образце в процессе теста. При достижении степени мутности
--- стр. 180 ---
0.5-0.7 суспензия считается готовой для проведения теста на антибиотикочувствительность
(следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Ь - Использование турбидиметра, на приборе ALFRED60 с программным обеспечением Version
1.2А и выше, HB&L UROQUATTRO с программным обеспечением Version 4.0А и выше (DOS) или
1.0N и выше (Windows).
Возможно приготовление суспензий оптимизированных по МакФарлнад методом разведения
более концентрированного материала или из изолированных колоний, с использованием
турбидиметра (следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Следующая методика делается вовремя или после культурального теста.
1 - Образец в процессе анализа:
a) Когда анализ еще в процессе, выберите позицию образца и подтвердите окончание анализа для
данного образца.
b) По окончании анализа, выберите свободную позицию и подтвердите режим турбидиметра
(функция турбидиметра появляется на экране).
c) Поставьте флакон с положительным образцом в указанную прибором позицию.
d) После получения турбидиметром значения степени мутности, прибор сообщит необходимые
для разведения объемы для получения бактериальной концентрации для получения
бактериальной концентрации в пределах 0,5-0,7 по МакФарланд.
e) Для проведения разведений бульона используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-SVR). Для предотвращения образования
пузырьков внутри флакона, используйте шприц, погружая иглу глубоко в жидкость в пузырьке.
ПОЛОЖИТЕЛЬНАЯ КУЛЬТУРА
ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ ПОСЛЕ СЧИТЫВАНИЙ ТУРБИДИМЕТРА
f) По окончании сеанса турбидиметрии нажмите кнопку «exit» для получения резюме анализа
уринокультур.
2 - Образец в конце анализа:
Начните работу с инокулумом, начиная с пункта Ь) в предыдущем параграфе.
3 - Процедура подготовки образцов для теста на антимикробную чувствительность из
изолированной колонии.
Для каждого кпинического образца из которого получена монокультура на чашке Петри, возьмите
2 - 3 колонии и асептически суспензируйте их во флаконе с культуральным бульоном из URO-
QU1CK SCREENING кита, чтобы получить рост в бульоне.
При достижении логарифмической фазы роста бактерий (помутнение бульона), осторожно
перенесите шприцом или пипеткой во флаконы с серебряной алюминиевой крышкой из AST
МакФарлнад кита (кат.номер S 1 912-SVR) количество бактериальной суспензии необходимое для
получения степени мутности 0,5-0,7 по МакФарлнад (использование турбидиметра такое же, как
это описано выше).
ЗАГРУЗКА ОБРАЗЦОВ В ПРИБОР И ПРОЦЕДУРА НАСТРОЙКИ
Подготовьте флаконы с голубой алюминиевой крышкой с AST бульоном обогащения (С), в
количестве, соответствующем количеству исследуемых антибиотиков.
Каждый антибиотик имеет соответствующий ему цвет и кодировку.
--- стр. 181 ---
Подготовьте ваш профиль антибиотиков и инокулируйте в каждый флакон (С) 100 ml инокулума,
подготовленного, как это описано выше (используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой, если использовался турбидиметр или культуральный флакон, если использовалась
функция оценки мутности по МакФарлнад) и затем инокулируйте 100 ml растворенного
антибиотика. Убедитесь, что уровень жидкости достиг линии нанесенной на флаконе (С).
Следующий флакон с золотой алюминиевой крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-
SVR) инокулируют 100 ml того же инокулума, приготовленного в соответствии с инструкциями
выше, без антибиотиков.
Данный флакон является референсным образцом для оценки бактериального роста: инокулируйте
0,1 mL образца без какого-либо антибиотика.
Предупреждения.
Каждый антибиотик идентифицируется по своему собственному цвету флакона или коду,
набираемому на клавиатуре или кнопкой на экране. Цвет или код указаны на следующих
компонентах набора;
(А) Флакон с лиофилизированным антибиотиком, (В) Жидкость для разведения антибиотика, (С)
60 флаконов с бульоном обогащения.
Флакон с ванкомицином имеет этикетку с кодом VAN.
В соответствии с потребностями пользователя, возможно набрать необходимую панель
антибиотиков для Грам+ или для Грам- используя программное обеспечение прибора..
При загрузке каждого флакон (С) в прибор следуйте инструкциям, появляющимся на экране.
Схема, представленная ниже в графической форме, показывает процедуру загрузки и
программирования.
Образцы инокулированные с использованием скринингового бульонного теста уринокультур или
бактериальными культурами из изолированных колоний, в соответствии с выше описанными
процедурами разведения, загружаются в прибор. Результаты будут получены через 3 часа.
При завершении анализа через 3 часа, результаты выдаются в виде процента резистентных (R)
или чувствительных (S) для каждого исследованного антибиотика, в сравнении с референсными
значениями.
Пример отчета по ванкомицину.
Перед клиническим использованием рекомендуется исключить инфекцию вызванную
Грам-отрицательными бактериями. В случае резистентности и положительной
идентификации стафилококков, необходимо отправлять каждый штамм в референсный
центр и в случае обнаруженяи энтерококков проводить исследование на резистентность к
ванкомицину.
Валидирование инокулума ;
Стандартизация инокулума является важным фактором проведения теста на
чувствтительность.
Чтобы получить корректные показатели при использовании АЗТ-ВАНКОМИЦИН кита,
рекомендуется проверить референсные значения инокулума образца.
Значения инокулума должны быть > 700.000 KOE/mL, в том случае, если они ниже прибор
выдаст сообщение “ NV” (Not valid). В этом случае тест должен быть проделан повторно.
--- стр. 182 ---
Процентные значения группируются по категориям S = Чувствительный , I = Промежуточный , R
Резистентный.
S 1 R
S Percentage 100-65 % 65-50% 50-0%
R Percentage 0-35% 35-50% 50-100%
ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Для оценки стандартизации и контроля качества получаемых результатов проводят процедурь.
при помощи штаммов АТСС. Частота и модальность сессий контроля качества является
ответственностью пользователя и производится в соответствии с существующими в стране
рекомендациями.
Вследствие существующих особых ростовых характеристик образцов, подвергавшихся
процедурам стабилизации и презервации, время исследования антибиотикочувствительности для
таких образцов удлиняется до 5 часов.
Escherichia со//ATCC 25922 Staphylococcus aureus ATCC
29213
Ожидаемые результаты S S
ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДИКИ
• Для прямой оценки чувствительности; время проведения теста существенно удлиняется,
т.к. культуральный тест может оказывать влияние на характеристики образца.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: проведение теста со старыми
колониями с чашек может влиять на результаты теста.
• Длительные паузы между этапами работы (от приготовления инокулума до загрузки в
прибор) могут влиять на результаты.
• Для прямой оценки чувствительности: могут быть исследованы только образцы,
предварительно отобранные по окраске по Граму, для исключения полимикробного
роста.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний; инокулум, полученный путем
смешивания разных изолированных колоний или из слабо изолированных колоний может
влиять на результаты.
ОЖИДАЕМЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
Принимая во внимание, что бактериальная резистентность может варьировать в разных
географических зонах, ожидаемые результаты прямо зависят от локальной микробной экологии
(Виды /Механизмы резистентности).
ПОКАЗАТЕЛИ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ПРИ ПРЯХ ТЕСТАХ В УРИНОКУЛЬТУРАХ
Показатели по AST-Ванкомицину оценивались с использованием положительных образцов мочи,
содержавших следующие виды :
Escherichia spp. Proteus spp. Staphylococcus spp.
Klebsiella spp. Citrobacter spp.
Enterobacter spp. Morganella spp.
Эти образцы были получены из института микробиологии и параллельно тестировались
референсным методом Кирби-Бауэра после культивирования на чашках Петри.
--- стр. 183 ---
Уровень достоверности результатов, полученных при помощи референсного метода на 119
штаммах составлял 100% .
"Большая ошибка” и “очень большая ошибка" в процентном отношении составляли 0% и 0%
соответственно.
ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ
Уровни воспроизводимости в процентном отношении (чувствительные, промежуточные,
резистентные), полученные в 5 повторностях на 2-х бактериальных штаммах составлял 100%.
ALIFAX S.p.A,
via Petrarca 2/1 - 35020 Polverara (PD) - Italy
tel. +39 049 0992000
web site: www.alifax.com
e-mail: info@alifax.com
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1) Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standard for Antimicrobial
Susceptibility Testing; Eighteenth Informational Supplement. Approved Standard CLSI
Document M100-S18, Vol. 28, No. 1, Winkler MA et al., January, 2008.
2) Jennifer M. Andrews, “ Determination of minimum inhibitory concentrations", Journal of
Antim icrobial Chemotherapy (2001), 48, Suppi S1, 5-16.
3) Livermore D.M., Winstanley T.G., Shannon K.P., "Interpretative reading: recognizing the unusual
and inferring resistance mechanisms from resistance phenotypes” , Journal o f Antimicrobial
Chemotherapy (2001), 48, SuppI S1, 87-102.
4) Chapin K.C. and Murray P.R. “ Principles of Stains and Media” . Murray P.R. et a l: Manual of
Clinical Microbiology, 8th edition, 258-261. ASM Press 2003.
5) Jorgensen H. J. "Selection Criteria for an Antimicrobial Susceptibility Testing System", Journal of
Clinical M icrobiology Nov. 1993; 31(11): 2841-2844.
6) ROCEPHINl I package insert
7) Product References :
8) S. Roveta, A. Marchese, E.A. Debbia (Microbiology Institute, Genoa University, Italy),
"Evaluation of the Antibiotic Susceptibility on 412 Pathogens Isolated from Severe Bacterial
Infections Employing the Uro-Quick System", Poster, ICAAC, Washington, 30 October - 2
November 2004.
9) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in intensive care units using the Uro-
Quick System", Poster, AMCLI, Padova, 8-11 June 2004.
10) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test of Uropathogens using the Uro-Quick System directly on
urine", Poster, ASM, New Orleans, 23-27 May 2004.
11) S. Roveta, F, Cavallini. A, Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in ICU using the Uro-Quick System",
Poster, ECCMID, Prague, 1-4 May 2004.
УРО В ЕН Ь Д О СТО ВЕРНО СТИ
--- стр. 187 ---
г
МЕРЫ ПРЕДОСТРОЖНОСТИ
Только для профессиональной диагностики in vitro.
Необходимо осторожно обращаться с лиофилизатом антибиотика: избегать попадания
вовнутрь, вдыхания, контакта с кожей, глазами и одеждой. Избегайте длительного
контакта.
Некоторые из компонентов питательных бульонов имеют животное происхождение.
Достоверное знание об источниках происхождение мяса животных и его санитарном
состоянии не гарантирует отсутствия трансмиссивных патогенных агентов. Тем не менее,
рекомендовано обращаться с данными продуктами, как с потенциально инфицированными
и, соответственно соблюдать предписанные меры предосторожности.
Необходимо использование всех предосторожностей, применяемых при работе с
потенциально инфекционными продуктами.
Биологические образцы, бактериальные культуры должны рассматриваться как источники
потенциальной инфекции и в отношении их должны соблюдаться меры предосторожности
в соответствии с национальными законами.
Рекомендуется использовать средства индивидуальной защиты.
Чтобы избежать нарушения качества реагентов, тщательно соблюдайте условия их
хранения.
Перед использованием каждая упаковка должна быть проверена на отсутствие видимых
повреждений.
Не используйте флаконы с повреждениями упаковки, признаками помутнения или
изменения цвета.
Не используйте реагенты после окончания срока годности.
Обращайтесь осторожно с открытыми флаконами с серебряной крышкой с
бактериальными суспензиями.
Не используйте флаконы с бульоном обогащения повторно.
Обращайтесь с флаконами как с хрупкими предметами.
Не прикасайтесь к флаконам с бульоном обогащения ниже отмеченной на них линии.
Используйте штатив для того, чтобы избежать разливания жидкостей в процессе
пипетирования или транспортировки.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
Образцы:
Флаконы, содержащие бактериальные суспензии для тестирования (флаконы из URO-QUICK
скрининг кита) или приготовленные из изолированных колоний, должны быть быстро исследованы
с одновременным охлаждением, чтобы избежать длительного пребывания при комнатной
температуре перед исследованием.
Реагенты:
Флаконы с лиофилизированными антибиотикамидолжны содержаться в темном месте при
2-8°С, до окончания срока годности, указанной на упаковке.
Раствор для разведения должен храниться в холодильнике при 2-8“С, до окончания срока
годности, указанной на упаковке.
- Флаконы с бульоном обогащения должны храниться при 4-30 °С до окончания срока
годности.
M L ,
--- стр. 188 ---
- Разведенный антибиотик должен храниться в холодильнике при 2-8°С в темноте до 7
дней.
- Раствор для разведения , после первого открывания должен храниться при 2-8 °С, до
окончания срока годности, указанной на упаковке.
УТИЛИЗАЦИЯ ОТХОДОВ
Утилизация реагентов образцов, растворов для разведения и отходов является ответственностью
пользователя, в соответствии с требованиями национальных законов.
МЕТОДИКА РАЗВЕДЕНИЯ АНТИБИОТИКА
Разведите одновременно и в соответствии с вашими потребностями Реагент (А) и Реагент (В)
следующим образом:
1 . Отройте раствор реагента (В), и используя микропипетку добавьте 1000 pL этого раствор- во
флакон с лиофилизированным антибиотиком, также предварительно открытому.
2. Аккуратно перемешайте. Это количество разведенного антибиотика позволяет произвести 6
тестов; в случае необходимости в дальнейших тестах повторите вышеописанную процедуру.
3. Используя полученный раствор антибиотика проведите тесты; оставшийся реагент (В) должен
храниться при 2-8°С, в темном месте, не более 7 дней (напишите на этикетке флакона дату
истечения годности.
4. Перед использованием дайте флакону постоять несколько минут при комнатной температуре
или приготовьте новый раствор как это описано в п.1.
Предупреждения:
Жидкий компонент для разведения специфичен для данного антибиотика.
МЕТОДИКА ДЛЯ ПРЯМОГО ТЕСТА НА АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ
УРИНОКУЛЬТУРЫ
1 - ПОДГОТОВКА ПОЛОЖИТЕЛЬНОГО ОБРАЗЦА УРИНОКУЛЬТУРЫ
Для каждого образца, определенного как положительный на анализаторах HB&L UROQUATTRO
или ALFRED60, необходимо прежде всего проделать окраску по Граму, для дифференциации
Грам+ от Грам- и для проверки чистоты культуры. В случае полибактериальной культуры,
проведите субкультивирование для выделения колоний и проведения тестов на идентификацию и
чувствительность, В случае монокультуры, возможно непосредственное проведение теста на
антибиотикочувствительности с использованием AST кита и выбор надлежащего антибиотика в
соответствии с характеристиками микроорганизма (Грам+ или Грам-). Каждый антибиотик
инокулируется в соответствующий AST флакон.
Образцы для прямого тестирования антибитикочувствительности (монокультура) инокулируют во
флакон с AST бульоном, используя положительные бульонный уринокультуры.
Чтобы оптимизировать и стандартизировать рабочую бактериальную концентрацию для теста на
антибитикочувствительность, производят следующие операции:
а- Использование функции МакФарланд алертер, на анализатора ALFRED60, HB&L
UROQUATTRO с программным обеспечением Version 1.1 А и выше.
Если эта функция используется, прибор показывает степень мутности МакФарланду
1непосредственно в анализируемом образце в процессе теста. При достижении степени мутности
0.5-0.7 суспензия считается готовой для проведения теста на антибиотикочувствительность
(следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
--- стр. 189 ---
b - Использование турбидиметра, на приборе ALFRED60 с программным обеспечением Version
1.2А и выше, HB&L UROQUATTRO с программным обеспечением Version 4.0А и выше (DOS) или
1.0N и выше (Windows).
Возможно приготовление суспензий оптимизированных по МакФарлнад методом разведения
более концентрированного материала или из изолированных колоний, с использованием
турбидиметра (следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Следующая методика делается вовремя или после культурального теста;
1 - Образец в процессе анализа:
a) Когда анализ еще в процессе, выберите позицию образца и подтвердите окончание анализа для
данного образца.
b) По окончании анализа, выберите свободную позицию и подтвердите режим турбидиметра
(функция турбидиметра появляется на экране),
c) Поставьте флакон с положительным образцом в указанную прибором позицию.
d) После получения турбидиметром значения степени мутности, прибор сообщит необходимые
для разведения объемы для получения бактериальной концентрации для получения
бактериальной концентрации в пределах 0,5-0,7 по МакФарланд.
e) Для проведения разведений бульона используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-SVR). Для предотвращения образования
пузырьков внутри флакона, используйте шприц, погружая иглу глубоко в жидкость в пузырьке.
ПОЛОЖИТЕЛЬНАЯ КУЛЬТУРА
ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ ПОСЛЕ СЧИТЫВАНИЙ ТУРБИДИМЕТРА
f) По окончании сеанса турбидиметрии нажмите кнопку «exit» для получения резюме анализа
уринокультур.
2 - Образец в конце анализа;
Начните работу с инокулумом, начиная с пункта Ь) в предыдущем параграфе.
3 - Процедура подготовки образцов для теста на антимикробную чувствительность из
изолированной колонии.
Для каждого клинического образца из которого получена монокультура на чашке Петри, возьмите
2 - 3 колонии и асептически суспензируйте их во флаконе с культуральным бульоном из URO-
QUICK SCREENING кита, чтобы получить рост в бульоне.
При достижении логарифмической фазы роста бактерий (помутнение бульона), осторожно
перенесите шприцом или пипеткой во флаконы с серебряной алюминиевой крышкой из AST
МакФарлнад кита (кат.номер 81 912-SVR) количество бактериальной суспензии необходимое для
получения степени мутности 0,5-0,7 по МакФарлнад (использование турбидиметра такое же, как
это описано выше).
ЗАГРУЗКА ОБРАЗЦОВ В ПРИБОР И ПРОЦЕДУРА НАСТРОЙКИ
Подготовьте флаконы с голубой алюминиевой крышкой с AST бульоном обогащения (С), в
количестве, соответствующем количеству исследуемых антибиотиков.
Каждый антибиотик имеет соответствующий ему цвет и кодировку.
Подготовьте ваш профиль антибиотиков и инокулируйте в каждый флакон (С) 100 ml инокулума,
подготовленного, как это описано выше (используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой, если использовался турбидиметр или культуральный флакон, если использовалась
--- стр. 190 ---
функция оценки мутности по МакФарлнад) и затем инокулируйте 100 ml растворенного
антибиотика. Убедитесь, что уровень жидкости достиг линии нанесенной на флаконе (С).
Следующий флакон с золотой алюминиевой крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-
SVR) инокулируют 100 ml того же инокулума, приготовленного в соответствии с инструкциями
выше, без антибиотиков.
Данный флакон является референсным образцом для оценки бактериального роста: инокулируйте
0.1 mL образца без какого-либо антибиотика.
Предупреждения:
Каждый антибиотик идентифицируется по своему собственному цвету флакона или коду,
набираемому на клавиатуре или кнопкой на экране. Цвет или код указаны на следующих
компонентах набора:
(А) Флакон с лиофилизированным антибиотиком, (В) Жидкость для разведения антибиотика, (С)
60 флаконов с бульоном обогащения.
Амоксициллин-клавуланат для стафилококков имеет голубой цвет.
В соответствии с потребностями пользователя, возможно набрать необходимую панель
антибиотиков для Грам+ или для Грам- используя программное обеспечение прибора..
При загрузке каждого флакон (С) в прибор1з следуйте инструкциям, появляющимся на экране.
Схема, представленная ниже в графической форме, показывает процедуру загрузки и
программирования.
Образцы инокулированные с использованием скринингового бульонного теста уринокультур или
бактериальными культурами из изолированных колоний, в соответствии с выше описанными
процедурами разведения, загружаются в прибор. Результаты будут получены через 3 часа.
При завершении анализа через 3 часа, результаты выдаются в виде процента резистентных (R)
или чувствительных (S) для каждого исследованного антибиотика, в сравнении с референсными
значениями.
Пример отчета по амоксициллин-клавуланату для стафилококков.
Перед использованием необходимо исключить наличие в образце Грам-отрицательных
бактерий.
Валидирование инокулума ;
Стандартизация инокулума является важным фактором проведения теста на
чувствтительность.
Чтобы получить корректные показатели при использовании1 АЗТ-Амоксициллин-
клавуланат для стафилококков кита, рекомендуется проверить референсные значения
инокулума образца.
Значения инокулума должны быть > 700.000 KOE/mL, в том случае, если они ниже прибор
выдаст сообщение “ NV” (Not valid). В этом случае тест должен быть проделан повторно.
Процентные значения группируются по категориям S = Чувствительный , I = Промежуточный , R =
Резистентный.
S 1 R
S Percentaqe 100-65 % 65-50% 50-0%
R Percentage 0-35% 35-50% 50-100%
ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Х М .
--- стр. 191 ---
Для оценки стандартизации и контроля качества получаемых результатов проводят процедуры
при помощи штаммов АТСС. Частота и модальность сессий контроля качества является
ответственностью пользователя и производится в соответствии с существующими в стране
рекомендациями.
Вследствие существующих особых ростовых характеристик образцов, подвергавшихся
процедурам стабилизации и презервации, время исследования антибиотикочувствительности для
таких образцов удлиняется до 5 часов.
Staphylococcus epidermidis
АТСС 12228
Staphylococcus aureus АТСС
29213
Ожидаемые результаты S S
ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДИКИ
• Для прямой оценки чувствительности: время проведения теста существенно удлиняется,
т.к. культуральный тест может оказывать влияние на характеристики образца.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: проведение теста со старыми
колониями с чашек может влиять на результаты теста.
• Длительные паузы между этапами работы (от приготовления инокулума до загрузки в
прибор) могут влиять на результаты.
• Для прямой оценки чувствительности: могут быть исследованы только образцы,
предварительно отобранные по окраске по Граму, для исключения полимикробного
роста.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: инокулум, полученный путем
смешивания разных изолированных колоний или из слабо изолированных колоний может
влиять на результаты.
ОЖИДАЕМЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
Принимая во внимание, что бактериальная резистентность может варьировать в разных
географических зонах, ожидаемые результаты прямо зависят от локальной микробной экологии
(Виды /Механизмы резистентности).
ПОКАЗАТЕЛИ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ПРИ ПРЯХ ТЕСТАХ В УРИНОКУЛЬТУРАХ
Показатели по АЗТ-Ампициллин-кпавуланата оценивались с использованием положительных
образцов мочи, содержавших следующие виды :
Escherichia spp. Proteus spp. Staphylococcus spp.
Klebsiella spp, Citrobacter spp.
Enterobacter spp. Morganella spp.
Эти образцы были получены из института микробиологии и параллельно тестировались
референсным методом Кирби-Бауэра после культивирования на чашках Петри.
УРОВЕНЬ ДОСТОВЕРНОСТИ
Уровень достоверности результатов, полученных при помощи референсного метода на 57
штаммах составлял 92,98% .
"Большая ошибка” и “очень большая ошибка” в процентном отношении составляли 0% и 3,51%
соответственно.
ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ
--- стр. 192 ---
Уровни воспроизводимости в процентном отношении (чувствительные, промежуточные,
резистентные), полученные в 5 повторностях на 2-х бактериальных штаммах составлял 100%.
ALIFAX S.p.A.
via Petrarca 2/1 - 35020 Polverara (PD) - Italy
tel. +39 049 0992000
web site; www.alifax.com
e-mail: info@alifax.com
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1) Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standard for Antimicrobial
Susceptibility Testing; Eighteentti informational Supplement. Approved Standard CLSI
Document M100-S18, Vol. 28, No, 1, Winkler MA et al., January, 2008.
2) Jennifer M. Andrews, “ Determination of minimum inhibitory concentrations", Journal of
Antim icrobial Chemotherapy (2001), 48, Suppi S1, 5-16,
3) Livermore D.M., Winstanley T.G., Shannon K.P., Interpretative reading: recognizing the unusual
and inferring resistance mechanisms from resistance phenotypes’ ’ , Journal o f Antimicrobial
Chemotherapy (2001), 48, Suppi S1, 87-102.
4) Chapin K.C, and Murray P.R. “ Principles of Stains and IV Iedia". Murray P.R. et a l: Manual of
Clinical Microbiology, 8th edition, 258-261. ASM Press 2003
5) Jorgensen H.J, “ Selection Criteria for an Antimicrobial Susceptibility Testing System", Journal of
Clinical Microbiology Nov. 1993; 31(11): 2841-2844.
6) Product References :
7) S. Roveta, A. Marchese, E.A. Debbia (Microbiology Institute, Genoa University, Italy),
"Evaluation of the Antibiotic Susceptibility on 412 Pathogens Isolated from Severe Bacterial
Infections Employing the Uro-Quick System", Poster, ICAAC, W ashington, 30 October - 2
November 2004,
8) S, Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in intensive care units using the Uro-
Quick System", Poster, AMCLI, Padova, 8-11 June 2004.
9) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A, Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test of Uropathogens using the Uro-Quick System directly on
urine", Poster, ASM, New Orleans, 23-27 May 2004.
10) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E,A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in ICU using the Uro-Quick Syster^",
Poster, ECCMID, Prague, 1-4 May 2004.
11) S, Roveta, E,A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, Universita di Genova),
“ Evaluation of the Uroquick, a new rapid automated system, for the detection of well-
characterized antibiotic-resistant bacteria” , Journal o f Chemotherapy 2004 Apr;16(2):107-18.
12) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, University di Genova),
“ Esecuzione rapida di antibiogrammi su campioni di urine mediante sistema Uro-quick” , Poster,
National Congress SIM, Rome, 19-21 October 2003.
--- стр. 196 ---
Только для профессиональной диагностики in vitro.
Необходимо осторожно обращаться с лиофилизатом антибиотика: избегать попадания
вовнутрь, вдыхания, контакта с кожей, глазами и одеждой. 1/1збегайте длительного
контакта.
Некоторые из компонентов питательных бульонов имеют животное происхождение.
Достоверное знание об источниках происхождение мяса животных и его санитарном
состоянии не гарантирует отсутствия трансмиссивных патогенных агентов. Тем не менее,
рекомендовано обращаться сданными продуктами, как с потенциально инфицироваинчми
и , соответственно соблюдать предписанные меры предосторожности.
Необходимо использование всех предосторожностей, применяемых при работе с
потенциально инфекционными продуктами.
- Биологические образцы, бактериальные культуры должны рассматриваться как источники
потенциальной инфекции и в отношении их должны соблюдаться меры предосторожности
в соответствии с национальными законами.
Рекомендуется использовать средства индивидуальной защиты.
Чтобы избежать нарушения качества реагентов, тщательно соблюдайте условия их
хранения.
Перед использованием каждая упаковка должна быть проверена на отсутствие видимых
повреждений.
Не используйте флаконы с повреждениями упаковки, признаками помутнения или
изменения цвета.
Не используйте реагенты после окончания срока годности.
- Обращайтесь осторожно с открытыми флаконами с серебряной крышкой с
бактериальными суспензиями.
Не используйте флаконы с бульоном обогащения повторно.
Обращайтесь с флаконами как с хрупкими предметами.
Не прикасайтесь к флаконам с бульоном обогащения ниже отмеченной на них линии.
Используйте штатив для того, чтобы избежать разливания жидкостей в процессе
пипетирования или транспортировки.
УСЛ О В И Я ХР А Н Е Н И Я
Образцы :
Флаконы, содержащие бактериальные суспензии для тестирования (флаконы из URO-QUICK
скрининг кита) или приготовленные из изолированных колоний, должны быть быстро исследованы
с одновременным охлаждением, чтобы избежать длительного пребывания при комнатной
температуре перед исследованием.
Реагенты :
Флаконы с лиофилизированными антибиотикамидолжны содержаться в темном месте при
2-8°С, до окончания срока годности, указанной на упаковке.
Раствор для разведения должен храниться в холодильнике при 2-8°С, до окончания срока
годности, указанной на упаковке.
- Флаконы с бульоном обогащения должны храниться при 4-30 °С до окончания срока
годности.
--- стр. 197 ---
- Разведенный антибиотик должен храниться в холодильнике при 2-8°С в темноте до 7
дней.
- Раствор для разведения , после первого открывания должен храниться при 2-8 °С, до
окончания срока годности, указанной на упаковке.
УТИ Л И ЗА Ц И Я О ТХО Д О В
Утилизация реагентов образцов, растворов для разведения и отходов является ответственностью
пользователя, в соответствии с требованиями национальных законов.
М ЕТО Д И КА Р А ЗВ ЕД ЕН И Я А Н ТИ Б И О Т И КА
Разведите одновременно и в соответствии с вашими потребностями Реагент (А) и Реагент (В)
следующим образом;
1 . Отройте раствор реагента (В), и используя микропипетку добавьте 1000 pL этого раствора во
флакон с лиофилизированным антибиотиком, также предварительно открытому.
2 . Аккуратно перемешайте. Это количество разведенного антибиотика позволяет произвести 6
тестов; в случае необходимости в дальнейших тестах повторите вышеописанную процедуру.
3 . Используя полученный раствор антибиотика проведите тесты; оставшийся реагент (В) должен
храниться при 2-8°С, в темном месте, не более 7 дней (напишите на этикетке флакона дату
истечения годности.
4. Перед использованием дайте флакону постоять несколько минут при комнатной температуре
или приготовьте новый раствор как это описано в п.1.
П редупреж дения:
Жидкий компонент для разведения специфичен для данного антибиотика.
М ЕТО Д И КА Д Л Я П Р Я М О ГО Т Е С ТА НА А Н ТИ Б И О Т И К О Ч У В С Т В И Т Е Л Ь Н О С Т Ь
УРИ Н О КУЛ Ь ТУРЫ
1 - П О Д ГО ТО В КА П О Л О Ж И ТЕ Л Ь Н О ГО О Б РА ЗЦ А УРИ Н О КУ Л Ь ТУ Р Ы
Для каждого образца, определенного как положительный на анализаторах HB&L UROQUATTRO
или ALFRED60, необходимо прежде всего проделать окраску по Граму, для дифференциации
Грам+ от Грам- и для проверки чистоты культуры. В случае полибактериальной культуры,
проведите субкультивирование для выделения колоний и проведения тестов на идентификацию и
чувствительность. В случае монокультуры, возможно непосредственное проведение теста на
антибиотикочувствительности с использованием AST кита и выбор надлежащего антибиотика в
соответствии с характеристиками микроорганизма (Грам+ или Грам-). Каждый антибиотик
инокулируется в соответствующий AST флакон.
Образцы для прямого тестирования антибитикочувствительности (монокультура) инокулируют во
флакон CAST бульоном, используя положительные бульонный уринокультуры.
Чтобы оптимизировать и стандартизировать рабочую бактериальную концентрацию для теста на
антибитикочувствительность, производят следующие операции:
а- И спол ьзование ф ункции М акФ арланд алертер,
на анализатора ALFRED60, HB&L
UROQUATTRO с программным обеспечением Version 1.1А и выше.
Если эта функция используется, прибор показывает степень мутности МакФарланду
Непосредственно в анализируемом образце в процессе теста. При достижении степени мутности
0.5-0.7 суспензия считается готовой для проведения теста на антибиотикочувствительность
(следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
--- стр. 198 ---
b - И спол ьзование тур би д и м етр а, на приборе ALFRED60 с программным обеспечением Version
1.2А и выше, HB&L UROQUATTRO с программным обеспечением Version 4.0А и выше (DOS) или
1.0N и выше (Windows).
Возможно приготовление суспензий оптимизированных по МакФарлнад методом разведения
более концентрированного материала или из изолированных колоний, с использованием
турбидиметра (следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Следующая методика делается вовремя или после культурального теста:
1 - О бразец в процессе анал иза:
a) Когда анализ еще в процессе, выберите позицию образца и подтвердите окончание анализа для
данного образца.
b) По окончании анализа, выберите свободную позицию и подтвердите режим турбидиметра
(функция турбидиметра появляется на экране).
c) Поставьте флакон с положительным образцом в указанную прибором позицию,
d) После получения турбидиметром значения степени мутности, прибор сообщит необходимые
для разведения объемы для получения бактериальной концентрации для получения
бактериальной концентрации в пределах 0,5-0,7 по МакФарланд.
e) Для проведения разведений бульона используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-SVR). Для предотвращения образования
пузырьков внутри флакона, используйте шприц, погружая иглу глубоко в жидкость в пузырьке.
П О Л О Ж И ТЕЛ Ь Н А Я КУЛ Ь ТУРА
ПО Д ГО ТО ВКА О Б Р А З Ц О В ПО СЛ Е СЧ И ТЫ В А Н И Й ТУ Р Б И Д И М Е ТР А
f) По окончании сеанса турбидиметрии нажмите кнопку «exit» для получения резюме анализа
уринокультур.
2 - О бразец в конце анализа:
Начните работу с инокулумом, начиная с пункта Ь) в предыдущем параграфе.
3 - П роцедура под гото вки образцов для теста на антим и кробную чувствительность из
изолированной колонии.
Для каждого клинического образца из которого получена монокультура на чашке Петри, возьмите
2-3 колонии и асептически суспензируйте их во флаконе с культуральным бульоном из URO-
QUICK SCREENING кита, чтобы получить рост в бульоне.
При достижении логарифмической фазы роста бактерий (помутнение бульона), осторожно
перенесите шприцом или пипеткой во флаконы с серебряной алюминиевой крышкой из AST
МакФарлнад кита (кат.номер SI 912-SVR) количество бактериальной суспензии необходимое для
получения степени мутности 0,5-0,7 по МакФарлнад (использование турбидиметра такое же, как
это описано выше).
ЗАГРУЗКА О Б Р А З Ц О В В П Р И Б О Р И П Р О Ц Е Д УР А Н А С ТР О Й КИ
Подготовьте флаконы с голубой алюминиевой крышкой с AST бульоном обогащения (С), в
количестве, соответствующем количеству исследуемых антибиотиков.
Каждый антибиотик имеет соответствующий ему цвет и кодировку.
Подготовьте ваш профиль антибиотиков и инокулируйте в каждый флакон (С) 100 m l инокулума,
подготовленного, как это описано выше (используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой, если использовался турбидиметр или культуральный флакон, если использовалась
--- стр. 199 ---
функция оценки мутности по МакФарлнад) и затем инокулируйте 100 m l растворенного
антибиотика. Убедитесь, что уровень жидкости достиг линии нанесенной на флаконе (С).
Следующий флакон с золотой алюминиевой крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-
SVR) инокулируют 100 ml того же инокулума, приготовленного в соответствии с инструкциями
выше, без антибиотиков.
Данный флакон является референсным образцом для оценки бактериального роста; инокулируйте
0.1 mL образца без какого-либо антибиотика.
Предупреждения;
Каждый антибиотик идентифицируется по своему собственному цвету флакона или коду,
набираемому на клавиатуре или кнопкой на экране. Цвет или код указаны на следующих
компонентах набора;
(А) Флакон с лиофилизированным антибиотиком, (В) Жидкость для разведения антибиотика, (С)
60 флаконов с бульоном обогащения.
А м пициллин Гр+ энтеро кокки им еет коричнево -ор анж евую этикетку.
В соответствии с потребностями пользователя, возможно набрать необходимую панель
антибиотиков для Грам+ или для Грам- используя программное обеспечение прибора..
При загрузке каждого флакон (С) в прибор1з следуйте инструкциям, появляющимся на экране.
Схема, представленная ниже в графической форме, показывает процедуру загрузки и
программирования.
Образцы инокулированные с использованием скринингового бульонного теста уринокультур или
бактериальными культурами из изолированных колоний, в соответствии с выше описанными
процедурами разведения, загружаются в прибор. Результаты будут получены через 3 часа.
При завершении анализа через 3 часа, результаты выдаются в виде процента резистентных (R)
или чувствительных (S) для каждого исследованного антибиотика, в сравнении с референсными
значениями.
Прим ер отчета по А м пи ци л л ин.
Перед кл иническим использованием реком ендуется исклю чить полож ительную
ид ентиф икацию Грам -поло ж ительны х бактерий.
Валидирование и нокул ум а :
С тандартизация и нокул ум а является важны м ф актором провед ения теста на
чувствтител ьность.
Чтобы получить корр ектны е показатели при испо л ь зо в ани и ! A S T -Ам п и ц и л л и н кита,
рекомендуется провер ить реф еренсны е значения инокулум а образца.
Значения инокулум а дол ж ны бы ть > 700.000 KOE/m L, в том сл учае, если они ниже прибор
вы даст соо бщ ение “N V ” (Not valid). В этом случае те ст д ол ж ен бы ть проделан повторно.
Процентные значения группируются по категориям S = Чувствительный , I = Промежуточный , R =
Резистентный.
S 1 R
S Percentage 100-65 % 65-50% 50-0%
R Percentage 0-35% 35-50% 50-100%
ВН УТРЕННИЙ КО Н ТР О Л Ь КА Ч ЕС ТВ А
--- стр. 200 ---
Для оценки стандартизации и контроля качества получаемых результатов проводят процедуры
при помощи штаммов АТСС. Частота и модальность сессий контроля качества является
ответственностью пользователя и производится в соответствии с существующими в стране
рекомендациями.
Вследствие существующих особых ростовых характеристик образцов, подвергавшихся
процедурам стабилизации и презервации, время исследования антибиотикочувствительности для
таких образцов удлиняется до 5 часов.
Escherichia соН АТСС 25922 Enterococcus faecalis АТСС
29212
Ожидаемые результаты S S
О ГРАНИ Ч ЕНИ Я М ЕТО Д И КИ
• Для прямой оценки чувствительности: время проведения теста существенно удлиняется,
т.к. культуральный тест может оказывать влияние на характеристики образца.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: проведение теста со старыми
колониями с чашек может влиять на результаты теста.
• Длительные паузы между этапами работы (от приготовления инокулума до загрузки в
прибор) могут влиять на результаты.
• Для прямой оценки чувствительности: могут быть исследованы только образцы,
предварительно отобранные по окраске по Граму, для исключения полимикробного
роста.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: инокулум, полученный путем
смешивания разных изолированнь1х колоний или из слабо изолированных колоний может
влиять на результаты.
О Ж И Д АЕМ Ы Е РЕ ЗУЛ Ь ТА ТЫ
Принимая во внимание, что бактериальная резистентность может варьировать в разных
географических зонах, ожидаемые результаты прямо зависят от локальной микробной экологии
(Виды /Механизмы резистентности).
ПО КА ЗА ТЕЛИ Ч У В С ТВ И Т Е Л Ь Н О С ТИ ПРИ ПРЯХ ТЕ С Т А Х В У Р И Н О К У Л Ь Т У Р А Х
Показатели по АЗТ-Ампициллин оценивались с использованием положительных образцов мочи,
содержавших следующие виды :
Escherichia spp. Proteus spp. Staphylococcus spp.
Klebsiella spp, Citrobacter spp.
Enterobacter spp. Morganella spp.
Эти образцы были получены из института микробиологии и параллельно тестировались
референсным методом Кирби-Бауэра после культивирования на чашках Петри.
УРО ВЕНЬ Д О С Т О В Е Р Н О С Т И
Уровень достоверности результатов, полученных при помощи референсного метода на 99
штаммах составлял 88,89% .
“Большая ошибка” и “очень большая ошибка” в процентном отношении составляли 3,03% и 0%
соответственно.
В О С П РО И ЗВ О Д И М О С ТЬ
--- стр. 201 ---
Уровни воспроизводимости в процентном отношении (чувствительные, промежуточные,
резистентные), полученные в 5 повторностях на 2-х бактериальных штаммах составлял 100%.
A L IF A X S-P.A .
via Petrarca 2 /1 - 35020 Polverara (PD) - Italy
tel. +39 049 0992000
web site: www.alifax.com
e-mail: info@alifax.com
СП И С О К Л И ТЕ РА ТУРЫ
1) Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standard for Antimicrobial
Susceptibility Testing; Eighteenth Informational Supplement. Approved Standard CLSI
Document M100-818. Vol. 28, No. 1 , Winkler MAet al., January, 2008.
2) Jennifer M. Andrews, "Determination of minimum inhibitory concentrations”, Journal of
A n tim icro b ial C h em oth erapy (2001), 48, SuppI S1, 5-16.
3) Livermore D.M., Winstanley T.G., Shannon K.P., "Interpretative reading: recognizing the unusual
and inferring resistance mechanisms from resistance phenotypes”, Jou rn al o f A ntim icrobial
C h em oth erapy (2001), 48, SuppI S1, 87-102.
4) Chapin K.G, and Murray P.R. "Principles of Stains and Media". Murray P.R. et a l: M anual ot
C linical M icrob iology, 8th edition, 258-261, ASM Press 2003
5) Jorgensen H.J. "Selection Criteria for an Antimicrobial Susceptibility Testing System", Journal of
Clinical M icrob iology Nov, 1993; 31(11): 2841-2844.
6) Product R eferen ces :
7) S. Roveta, A. Marchese, E,A. Debbia (Microbiology Institute, Genoa University, Italy),
"Evaluation of the Antibiotic Susceptibility on 412 Pathogens Isolated from Severe Bacterial
Infections Employing the Uro-Quick System", Poster, ICAAC, W ashington, 30 October - 2
November 2004.
8) S. Roveta, F. Cavallini, A, Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in intensive care units using the Uro-
Quick System", Poster, AM CLI, Padova, 8-11 June 2004.
9) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A, Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test of Uropathogens using the Uro-Quick System directly on
urine". Poster, ASM , N ew O rleans, 23-27 May 2004.
10 ) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in ICU using the Uro-Quick System",
Poster, EC CM ID , Prague, 1-4 May 2004.
1 1) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, Universita di Genova),
“Evaluation of the Uroquick, a new rapid automated system, for the detection of well-
characterized antibiotic-resistant bacteria", Jou rn al o f C h em o th erap y 2004 Apr; 16(2): 107-18.
12) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, Universita di Genova),
"Esecuzione rapida di antibiogrammi su campioni di urine mediante sistema Uro-quick", Poster,
National Congress SIM , Rom e, 19-21 October 2003.
--- стр. 205 ---
Только для профессиональной диагностики in vitro.
Необходимо осторожно обращаться с лиофилизатом антибиотика; избегать попадания
вовнутрь, вдыхания, контакта с кожей, глазами и одеждой. Избегайте длительного
контакта.
Некоторые из компонентов питательных бульонов имеют животное происхождение.
Достоверное знание об источниках происхождение мяса животных и его санитарном
состоянии не гарантирует отсутствия трансмиссивных патогенных агентов. Тем не менее,
рекомендовано обращаться с данными продуктами, как с потенциально инфицированными
и, соответственно соблюдать предписанные меры предосторожности.
- Необходимо использование всех предосторожностей, применяемых при работе с
потенциально инфекционными продуктами.
Биологические образцы, бактериальные культуры должны рассматриваться как источники
потенциальной инфекции и в отношении их должны соблюдаться меры предосторожности
в соответствии с национальными законами.
Рекомендуется использовать средства индивидуальной защиты.
Чтобы избежать нарушения качества реагентов, тщательно соблюдайте условия их
хранения.
Перед использованием каждая упаковка должна быть проверена на отсутствие видимых
повреждений.
Не используйте флаконы с повреждениями упаковки, признаками помутнения или
изменения цвета.
Не используйте реагенты после окончания срока годности.
- Обращайтесь осторожно с открытыми флаконами с серебряной крышкой с
бактериальными суспензиями.
Не используйте флаконы с бульоном обогащения повторно.
Обращайтесь с флаконами как с хрупкими предметами.
Не прикасайтесь к флаконам с бульоном обогащения ниже отмеченной на них линии.
Используйте штатив для того, чтобы избежать разливания жидкостей в процессе
пипетирования или транспортировки.
УС Л О В И Я Х Р А Н Е Н И Я
Образцы;
Флаконы, содержащие бактериальные суспензии для тестирования (флаконы из URO-QUICK
скрининг кита) или приготовленные из изолированных колоний, должны быть быстро исследованы
с одновременным охлаждением, чтобы избежать длительного пребывания при комнатной
температуре перед исследованием.
Реагенты:
- Флаконы с лиофилизированными антибиотикамидолжны содержаться в темном месте при
2-8°С, до окончания срока годности, указанной на упаковке.
- Раствор для разведения должен храниться в холодильнике при 2-8°С, до окончания ср ;.> к а
годности, указанной на упаковке.
- Флаконы с бульоном обогащения должны храниться при 4-30 °С до окончания срока
годности.
--- стр. 206 ---
- Разведенный антибиотик должен храниться в холодильнике при 2-8°С в темноте до 7
дней.
Раствор для разведения , после первого открывания должен храниться при 2-8 °С, до
окончания срока годности, указанной на упаковке.
УТИ Л И ЗА Ц И Я О ТХ О Д О В
Утилизация реагентов образцов, растворов для разведения и отходов является ответственностью
пользователя, в соответствии с требованиями национальных законов.
М ЕТО Д И КА Р А ЗВ ЕД ЕН И Я А Н ТИ Б И О Т И КА
Разведите одновременно и в соответствии с вашими потребностями Реагент (А) и Реагент (В)
следующим образом:
1 . Отройте раствор реагента (В), и используя микропипетку добавьте 1000 pL этого раствора во
флакон с лиофилизированным антибиотиком, также предварительно открытому.
2 . Аккуратно перемешайте. Это количество разведенного антибиотика позволяет произвести 6
тестов; в случае необходимости в дальнейших тестах повторите вышеописанную процедуру.
3 . Используя полученный раствор антибиотика проведите тесты; оставшийся реагент (В) должен
храниться при 2-8°С, в темном месте, не более 7 дней (напишите на этикетке флакона да1 у
истечения годности.
4 . Перед использованием дайте флакону постоять несколько минут при комнатной температуре
или приготовьте новый раствор как это описано в п.1,
Предупреж дения;
Жидкий компонент для разведения специфичен для данного антибиотика.
М ЕТО Д И КА Д Л Я П Р Я М О ГО Т Е С Т А НА А Н Т И Б И О Т И К О Ч У В С Т В И Т Е Л Ь Н О С Т Ь
УРИ Н О КУЛ Ь ТУРЫ
1 - П О Д ГО ТО В КА П О Л О Ж И ТЕ Л Ь Н О ГО О Б РА ЗЦ А УРИ Н О КУ Л Ь ТУ Р Ы
Для каждого образца, определенного как положительный на анализаторах HB&L UROQUATTRO
или ALFRED60, необходимо прежде всего проделать окраску по Граму, для дифференциации
Грам+ от ГраМ' и для проверки чистоты культуры. В случае полибактериальной культуры,
проведите субкультивирование для выделения колоний и проведения тестов на идентификацию и
чувствительность. В случае монокультуры, возможно непосредственное проведение теста на
антибиотикочувствительности с использованием AST кита и выбор надлежащего антибиотика в
соответствии с характеристиками микроорганизма (Грам+ или Грам-). Каждый антибиотик
инокулируется в соответствующий AST флакон.
Образцы для прямого тестирования антибитикочувствительности (монокультура) инокулируют во
флакон CAST бульоном, используя положительные бульонный уринокультуры.
Чтобы оптимизировать и стандартизировать рабочую бактериальную концентрацию для теста на
антибитикочувствительность, производят следующие операции:
а- И спол ьзование ф ункции М акФ арл анд алертер, на анализатора ALFRED60, HB&L
UROQUATTRO с программным обеспечением Version 1.1А и выше.
Если эта функция используется, прибор показывает степень мутности МакФарланду
1непосредственно в анализируемом образце в процессе теста. При достижении степени мутности
0.5-0.7 суспензия считается готовой для проведения теста на антибиотикочувствительность
(следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
--- стр. 207 ---
b - И спол ьзование тур би д и м етр а, на приборе ALFRED60 с программным обеспечением Version
1.2А и выше, HB&L UROQUATTRO с программным обеспечением Version 4.0А и выше (DOS) или
1.0N и выше (Windows).
Возможно приготовление суспензий оптимизированных по МакФарлнад методом разведения
более концентрированного материала или из изолированных колоний, с использованием
турбидиметра (следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Следующая методика делается вовремя или после культурального теста:
1 - О бразец в процессе анализа:
a) Когда анализ еще в процессе, выберите позицию образца и подтвердите окончание анализа для
данного образца.
b) По окончании анализа, выберите свободную позицию и подтвердите режим турбидиметра
(функция турбидиметра появляется на экране).
c) Поставьте флакон с положительным образцом в указанную прибором позицию.
d) После получения турбидиметром значения степени мутности, прибор сообщит необходимые
для разведения объемы для получения бактериальной концентрации для получения
бактериальной концентрации в пределах 0,5-0,7 по МакФарланд.
e) Для проведения разведений бульона используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-SVR). Для предотвращения образования
пузырьков внутри флакона, используйте шприц, погружая иглу глубоко в жидкость в пузырьке.
П О Л О Ж И ТЕЛ Ь Н А Я КУЛ Ь ТУРА
ПО Д ГО ТО ВКА О Б Р А З Ц О В ПО СЛ Е С Ч И ТЫ В А Н И Й Т У Р Б И Д И М Е ТР А
f) По окончании сеанса турбидиметрии нажмите кнопку «exit» для получения резюме анализа
уринокультур,
2 - О бразец в конце анал иза:
Начните работу с инокулумом, начиная с пункта Ь) в предыдущем параграфе.
3 - Процедура под гото вки образцов для теста на антим и кробную чувствительность из
изолированной колонии.
Для каждого клинического образца из которого получена монокультура на чашке Петри, возьмите
2 - 3 колонии и асептически суспензируйте их во флаконе с культуральным бульоном из URO-
QUICK SCREENING кита, чтобы получить рост в бульоне.
При достижении логарифмической фазы роста бактерий (помутнение бульона), осторожно
перенесите шприцом или пипеткой во флаконы с серебряной алюминиевой крышкой из AST
МакФарлнад кита (кат.номер 8 1 912-SVR) количество бактериальной суспензии необходимое для
получения степени мутности 0,5-0,7 по МакФарлнад (использование турбидиметра такое же, как
это описано выше),
ЗАГРУЗКА О Б Р А З Ц О В В П Р И Б О Р И ПРО Ц Е Д УР А НА С ТР О Й КИ
Подготовьте флаконы с голубой алюминиевой крышкой с AST бульоном обогащения (С), в
количестве, соответствующем количеству исследуемых антибиотиков.
Каждый антибиотик имеет соответствующий ему цвет и кодировку.
Подготовьте ваш профиль антибиотиков и инокулируйте в каждый флакон (С) 100 m l инокулума,
подготовленного, как это описано выше (используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой, если использовался турбидиметр или культуральный флакон, если использовалась
--- стр. 208 ---
функция оценки мутности по МакФарлнад) и затем инокулируйте 100 m l растворенного
антибиотика. Убедитесь, что уровень жидкости достиг линии нанесенной на флаконе (С).
Следующий флакон с золотой алюминиевой крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-
SVR) инокулируют 100 ml того же инокулума, приготовленного в соответствии с инструкциями
выше, без антибиотиков.
Данный флакон является референсным образцом для оценки бактериального роста: инокулируйте
0.1 mL образца без какого-либо антибиотика.
Предупреждения;
Каждый антибиотик идентифицируется по своему собственному цвету флакона или коду,
набираемому на клавиатуре или кнопкой на экране. Цвет или код указаны на следующих
компонентах набора:
(А) Флакон с лиофилизированным антибиотиком, (В) Жидкость для разведения антибиотика, (С)
60 флаконов с бульоном обогащения.
А м пициллин Гр+ энтеро кокки им еет коричневы й цвет.
В соответствии с потребностями пользователя, возможно набрать необходимую панель
антибиотиков для Грам+ или для Грам- используя программное обеспечение прибора..
При загрузке каждого флакон (С) в прибор1з следуйте инструкциям, появляющимся на экране.
Схема, представленная ниже в графической форме, показывает процедуру загрузки и
программирования.
Образцы инокулированные с использованием скринингового бульонного теста уринокультур или
бактериальными культурами из изолированных колоний, в соответствии с выше описанными
процедурами разведения, загружаются в прибор. Результаты будут получены через 3 часа.
При завершении анализа через 3 часа, результаты выдаются в виде процента резистентных (R)
или чувствительных (S) для каждого исследованного антибиотика, в сравнении с референсными
значениями.
Пример отчета по А м пи ци л л ин Гр+ энтерококки.
Перед кл иническим использованием реком ендуется исклю чить полож ительную
идентиф икацию M RSA и M RS.
В алидирование инокулум а :
С тандартизация инокулум а является важны м ф актором провед ения теста на
чувствтительность.
Чтобы получить корр ектны е показатели при испо л ь зо в ани и ! А З Т -А м п иц и л л и н Гр+
энтерококки кита, реком ендуется проверить реф еренсны е значения инокулум а образца.
Значения инокулум а дол ж ны бы ть > 700.000 KOE/m L, в том случае, если они ниже прибор
вы даст соо бщ ение “ N V ” (Not valid). В этом случае те ст д ол ж ен бы ть проделан повторно.
Процентные значения группируются по категориям В = Чувствительный , I = Промежуточный , R =
Резистентный.
S 1 R
8 Percentaqe 100-65% 65-50% 50-0%
R Percentage 0-35% 35-50% 50-100%
ВН УТРЕННИ Й КО Н ТР О Л Ь КА Ч ЕС ТВ А
--- стр. 209 ---
Для оценки стандартизации и контроля качества получаемых результатов проводят процедуры
при помощи штаммов АТСС. Частота и модальность сессий контроля качества является
ответственностью пользователя и производится в соответствии с существующими в стране
рекомендациями.
Вследствие существующих особых ростовых характеристик образцов, подвергавшихся
процедурам стабилизации и презервации, время исследования антибиотикочувствительности для
таких образцов удлиняется до 5 часов.
Escherichia со//АТСС 25922 Enterococcus faecalis АТСС
29212
Ожидаемые результаты S S
О ГРА Н И Ч ЕН И Я М ЕТО Д И КИ
• Для прямой оценки чувствительности; время проведения теста существенно удлиняется,
т.к. культуральный тест может оказывать влияние на характеристики образца.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: проведение теста со старыми
колониями с чашек может влиять на результаты теста.
• Длительные паузы между этапами работы (от приготовления инокулума до загрузки в
прибор) могут влиять на результаты.
• Для прямой оценки чувствительности: могут быть исследованы только образцы,
предварительно отобранные по окраске по Граму, для исключения полимикробного
роста.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: инокулум, полученный путем
смешивания разных изолированных колоний или из слабо изолированных колоний м-'жет
влиять на результаты.
О Ж И Д А ЕМ Ы Е РЕ ЗУЛ Ь ТА ТЫ
Принимая во внимание, что бактериальная резистентность может варьировать в разных
географических зонах, ожидаемые результаты прямо зависят от локальной микробной экологии
(Виды /Механизмы резистентности).
ПО КА ЗА ТЕЛИ Ч У В С ТВ И Т Е Л Ь Н О С ТИ ПРИ ПРЯХ Т Е С Т А Х В У Р И Н О К У Л Ь Т У Р А Х
Показатели по АЗТ-Ампициллин Гр+ энтерококки оценивались с использованием положительных
образцов мочи, содержавших следующие виды :
Escherichia spp. Proteus spp. Staphylococcus spp.
Klebsiella spp. Citrobacter spp.
Enterobacter spp. Morganella spp.
Эти образцы были получены из института микробиологии и параллельно тестировались
референсным методом Кирби-Бауэра после культивирования на чашках Петри.
УРО ВЕНЬ Д О С Т О В Е Р Н О С Т И
Уровень достоверности результатов, полученных при помощи референсного метода на 64
штаммах составлял 95,31% .
“Большая ошибка” и “очень большая ошибка” в процентном отношении составляли 1,56% и 1,56%
соответственно.
В О С П РО И ЗВ О Д И М О С ТЬ
--- стр. 210 ---
Уровни воспроизводимости в процентном отношении (чувствительные, промежуточные,
резистентные), полученные в 5 повторностях на 2-х бактериальных штаммах составлял 100%.
ALIFAX S.p.A.
via Petrarca 2 /1 - 35020 Polverara (PD) - Italy
tel. +39 049 0992000
web site: www.alifax.com
e-mail: info@alifax.com
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1 ) Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standard for Antimicrobial
Susceptibility Testing; Eighteenth Informational Supplement. Approved Standard CLSI
Document M100-S18, Vol. 28, No. 1 , Winkler MA et al., January, 2008.
2) Jennifer M. Andrews, “Determination o f minimum inhibitory concentrations"
, Journal of
Antimicrobial Chemotherapy (2001), 48, Supp/ S1, 5-16.
3) Livermore D.M., Winstanley T.G., Shannon K.P., “Interpretative reading: recognizing the unusual
and inferring resistance mechanisms from resistance phenotypes", Journal of Antimicrobial
Chemotherapy (2001), 48, SuppI S1, 87-102.
4) Chapin K.C. and Murray P.R. “Principles o f Stains and Media". Murray P.R. et a l: Manual of
Clinical Microbiology, 8th edition, 258-261. ASM Press 2003.
5 ) Jorgensen H.J. “Selection Criteria for an Antim icrobial Susceptibility Testing System", Journal of
Clinical Microbiology Nov. 1993; 31(11): 2841-2844.
6) Product References :
7) S, Roveta, A. Marchese, E.A. Debbia (Microbiology Institute, Genoa University, Italy),
"Evaluation o f the Antibiotic Susceptibility on 412 Pathogens Isolated from Severe Bacterial
Infections Employing the Uro-Quick System", Poster, ICAAC, Washington, 30 October - 2
November 2004.
8) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in intensive care units using the Uro-
Quick System", Poster, AMCLI, Padova, 8-11 June 2004.
9) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A, Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test o f Uropathogens using the Uro-Quick System directly on
urine", Poster, ASM, New Orleans, 23-27 May 2004.
10) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in ICU using the Uro-Quick System",
Poster, ECCMID, Prague, 1 -4 May 2004.
11) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, Universita di Genova),
“Evaluation o f the Uroquick, a new rapid automated system, for the detection o f well-
characterized antibiotic-resistant bacteria", Journal of Chemotherapy 2004 Apr; 16(2): 107-18.
12) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, Universita di Genova),
“Esecuzione rapida di antibiogram m i su campioni di urine mediante sistema Uro-quick", Poster,
National Congress SIM, Rome, 19-21 October 2003.
--- стр. 214 ---
МЕРЫ П Р ЕД О С ТР О Ж Н О С ТИ
Только для профессиональной диагностики in vitro.
Необходимо осторожно обращаться с лиофилизатом антибиотика: избегать попадания
вовнутрь, вдыхания, контакта с кожей, глазами и одеждой, Избегайте длительного
контакта.
Некоторые из компонентов питательных бульонов имеют животное происхождение.
Достоверное знание об источниках происхождение мяса животных и его санитарном
состоянии не гарантирует отсутствия трансмиссивных патогенных агентов. Тем не менее,
рекомендовано обращаться с данными продуктами, как с потенциально инфицированными
и , соответственно соблюдать предписанные меры предосторожности.
Необходимо использование всех предосторожностей, применяемых при работе с
потенциально инфекционными продуктами.
- Биологические образцы, бактериальные культуры должны рассматриваться как источники
потенциальной инфекции и в отношении их должны соблюдаться меры предосторожности
в соответствии с национальными законами.
Рекомендуется использовать средства индивидуальной защиты.
Чтобы избежать нарушения качества реагентов, тщательно соблюдайте условия их
хранения.
Перед использованием каждая упаковка должна быть проверена на отсутствие видимых
повреждений.
Не используйте флаконы с повреждениями упаковки, признаками помутнения или
изменения цвета.
Не используйте реагенты после окончания срока годности.
- Обращайтесь осторожно с открытыми флаконами с серебряной крышкой с
бактериальными суспензиями.
Не используйте флаконы с бульоном обогащения повторно.
Обращайтесь с флаконами как с хрупкими предметами.
Не прикасайтесь к флаконам с бульоном обогащения ниже отмеченной на них линии.
Используйте штатив для того, чтобы избежать разливания жидкостей в процессе
пипетирования или транспортировки,
УСЛ О В И Я ХР А Н Е Н И Я
Образцы ;
Флаконы, содержащие бактериальные суспензии для тестирования (флаконы из URO-QUICK
скрининг кита) или приготовленные из изолированных колоний, должны быть быстро исследованы
с одновременным охлаждением, чтобы избежать длительного пребывания при комнатной
температуре перед исследованием.
Реагенты:
Флаконы с лиофилизированными антибиотикамидолжны содержаться в темном месте .ip irt
2-8°С, до окончания срока годности, указанной на упаковке.
Раствор для разведения должен храниться в холодильнике при 2-8°С, до окончания срока
годности, указанной на упаковке.
- Флаконы с бульоном обогащения должны храниться при 4-30 °С до окончания срока
годности.
А Н .
--- стр. 215 ---
Разведенный антибиотик должен храниться в холодильнике при 2-8°С в темноте до 7
дней.
Раствор для разведения , после первого открывания должен храниться при 2-8 °С, до
окончания срока годности, указанной на упаковке.
УТИ Л И ЗА Ц И Я О ТХ О Д О В
Утилизация реагентов образцов, растворов для разведения и отходов является ответственностью
пользователя, в соответствии с требованиями национальных законов,
М ЕТО Д И КА Р А ЗВ ЕД ЕН И Я А Н ТИ Б И О Т И КА
Разведите одновременно и в соответствии с вашими потребностями Реагент (А) и Реагент (В)
следующим образом:
1 . Отройте раствор реагента (В), и используя микропипетку добавьте 1000 pL этого раствора во
флакон с лиофилизированным антибиотиком, также предварительно открытому.
2 . Аккуратно перемешайте. Это количество разведенного антибиотика позволяет произвести 6
тестов; в случае необходимости в дальнейших тестах повторите вышеописанную процедуру.
3 . Используя полученный раствор антибиотика проведите тесты; оставшийся реагент (В) должен
храниться при 2-8°С, в темном месте, не более 7 дней (напишите на этикетке флакона дату
истечения годности.
4 . Перед использованием дайте флакону постоять несколько минут при комнатной температуре
или приготовьте новый раствор как это описано в п,1.
Предупреж дения;
Жидкий компонент для разведения специфичен для данного антибиотика,
М ЕТО Д И КА Д Л Я П Р Я М О ГО Т Е С ТА НА А Н ТИ Б И О Т И К О Ч У В С Т В И Т Е Л Ь Н О С Т Ь
УРИ Н О КУЛ Ь ТУРЫ
1 - ПО Д ГО ТО В КА П О Л О Ж И ТЕ Л Ь Н О ГО О Б РА ЗЦ А УРИ Н О КУ Л Ь ТУ Р Ы
Для каждого образца, определенного как положительный на анализаторах HB&L UROQUATTRO
или ALFRED60, необходимо прежде всего проделать окраску по Граму, для дифференциации
Грам+ от Грам- и для проверки чистоты культуры. В случае полибактериальной культуры,
проведите субкультивирование для выделения колоний и проведения тестов на идентификацию и
чувствительность, В случае монокультуры, возможно непосредственное проведение теста на
антибиотикочувствительности с использованием AST кита и выбор надлежащего антибиотика в
соответствии с характеристиками микроорганизма (Грам+ или Грам-). Каждый антибиотик
инокулируется в соответствующий AST флакон.
Образцы для прямого тестирования антибитикочувствительности (монокультура) инокулируют во
флакон CAST бульоном, используя положительные бульонный уринокультуры.
Чтобы оптимизировать и стандартизировать рабочую бактериальную концентрацию для теста на
антибитикочувствительность, производят следующие операции:
а- И спол ьзование ф ункции М акФ арл анд алертер,
на анализатора ALFRED60, HB&L
UROQUATTRO с программным обеспечением Version 1.1 А и выше.
Если эта функция используется, прибор показывает степень мутности МакФарланду
1непосредственно в анализируемом образце в процессе теста. При достижении степени мутности
0.5-0.7 суспензия считается готовой для проведения теста на антибиотикочувствительность
(следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
--- стр. 216 ---
b - И спол ьзование тур би д и м етр а, на приборе ALFRED60 с программным обеспечением Version
1.2А и выше, HB&L UROQUATTRO с программным обеспечением Version 4.0А и выше (DOS) или
1.0N и выше (Windows).
Возможно приготовление суспензий оптимизированных по МакФарлнад методом разведения
более концентрированного материала или из изолированных колоний, с использованием
турбидиметра (следуйте руководству пользователя упомянутых анализаторов).
Следующая методика делается вовремя или после культурального теста:
1 - О бразец в процессе анализа:
a) Когда анализ еще в процессе, выберите позицию образца и подтвердите окончание анализа для
данного образца.
b) По окончании анализа, выберите свободную позицию и подтвердите режим турбидиметра
(функция турбидиметра появляется на экране).
c) Поставьте флакон с положительным образцом в указанную прибором позицию.
d) После получения турбидиметром значения степени мутности, прибор сообщит необходимые
для разведения объемы для получения бактериальной концентрации для получения
бактериальной концентрации в пределах 0,5-0,7 по МакФарланд.
e) Для проведения разведений бульона используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-SVR), Для предотвращения образования
пузырьков внутри флакона, используйте шприц, погружая иглу глубоко в жидкость в пузь|рьке.
П О Л О Ж И ТЕ Л Ь Н А Я КУЛ Ь ТУРА
ПО Д ГО ТО ВКА О Б Р А З Ц О В ПО СЛ Е С Ч И ТЫ В А Н И Й Т У Р Б И Д И М Е ТР А
f) По окончании сеанса турбидиметрии нажмите кнопку «exit» для получения резюме анализа
уринокультур.
2 - О бразец в конце анал иза:
Начните работу с инокулумом, начиная с пункта Ь) в предыдущем параграфе.
3 - Процедура подгото вки образцо в для теста на антим и кробную чувствительность из
изолированной колонии.
Для каждого клинического образца из которого получена монокультура на чашке Петри, возьмите
2 - 3 колонии и асептически суспензируйте их во флаконе с культуральным бульоном из URO-
QUICK SCREENING кита, чтобы получить рост в бульоне.
При достижении логарифмической фазы роста бактерий (помутнение бульона), осторожно
перенесите шприцом или пипеткой во флаконы с серебряной алюминиевой крышкой из AST
МакФарлнад кита (кат.номер SI 912-SVR) количество бактериальной суспензии необходимое для
получения степени мутности 0,5-0,7 по МакФарлнад (использование турбидиметра такое же, как
это описано выше).
ЗАГРУЗКА О Б Р А ЗЦ О В В П Р И Б О Р И ПР О Ц Е Д УР А Н А СТРО Й КИ
Подготовьте флаконы с голубой алюминиевой крышкой с AST бульоном обогащения (С), в
количестве, соответствующем количеству исследуемых антибиотиков.
Каждый антибиотик имеет соответствующий ему цвет и кодировку.
Подготовьте ваш профиль антибиотиков и инокулируйте в каждый флакон (С) 100 m l инокулума,
подготовленного, как это описано выше (используйте флаконы с серебряной алюминиевой
крышкой, если использовался турбидиметр или культуральный флакон, если использовалась
--- стр. 217 ---
функция оценки мутности по МакФарлнад) и затем инокулируйте 100 m l растворенного
антибиотика. Убедитесь, что уровень жидкости достиг линии нанесенной на флаконе (С).
Следующий флакон с золотой алюминиевой крышкой из AST МакФарланд кита (кат.номер SI 912-
SVR) инокулируют 100 ml того же инокулума, приготовленного в соответствии с инструкциями
выше, без антибиотиков.
Данный флакон является референсным образцом для оценки бактериального роста: инокулируйте
0.1 mL образца без какого-либо антибиотика.
Предупреждения:
Каждый антибиотик идентифицируется по своему собственному цвету флакона или коду,
набираемому на клавиатуре или кнопкой на экране. Цвет или код указаны на следующих
компонентах набора:
(А) Флакон с лиофилизированным антибиотиком, (В) Жидкость для разведения антибиотика, (С)
60 флаконов с бульоном обогащения.
Азтреонам им еет код ATM .
В соответствии с потребностями пользователя, возможно набрать необходимую панель
антибиотиков для Грам+ или для Грам- используя программное обеспечение прибора..
При загрузке каждого флакон (С) в прибор1з следуйте инструкциям, появляющимся на экране.
Схема, представленная ниже в графической форме, показывает процедуру загрузки и
программирования.
Образцы инокулированные с использованием скринингового бульонного теста уринокультур или
бактериальными культурами из изолированных колоний, в соответствии с выше описанными
процедурами разведения, загружаются в прибор. Результаты будут получены через 3 часа.
При завершении анализа через 3 часа, результаты выдаются в виде процента резистентных (R)
или чувствительных (S) для каждого исследованного антибиотика, в сравнении с референсными
значениями.
Пример отчета по азтреонам у.
Перед клиническим прим енением реком ендуется исклю чить присутствие Грам+ бактерий.
Валидирование инокулум а :
Стандартизация инокулума является важным фактором проведения теста на
чувствтительность.
Чтобы получить корр ектны е показатели при использовании1 А З Т -А зтр ео н ам кита,
рекомендуется провер ить реф еренсны е значения инокулум а образца.
Значения инокулум а дол ж ны бы ть > 700.000 KOE/m L, в том случае, если они ниже прибор
вы даст соо бщ ение “ N V ” (Not valid). В этом случае те ст д ол ж ен бы ть проделан повторно.
Процентные значения группируются по категориям S = Чувствительный , I = Промежуточный , R =
Резистентный.
S 1 R
S Percentage 100-65 % 65-50% 50-0%
R Percentaqe 0-35% 35-50% 50-100%
В Н УТРЕННИ Й КО Н ТР О Л Ь КА Ч ЕС ТВ А
Для оценки стандартизации и контроля качества получаемых результатов проводят процедуры
при помощи штаммов АТСС. Частота и модальность сессий контроля качества является
--- стр. 218 ---
ответственностью пользователя и производится в соответствии с существующими в стране
рекомендациями.
Вследствие существующих особых ростовых характеристик образцов, подвергавшихся
процедурам стабилизации и презервации, время исследования антибиотикочувствительности для
таких образцов удлиняется до 5 часов.
Escherichia со // АТСС 25922 Klebsialla pneumoniae АТСС
33495
Ожидаемые результаты S S
О ГРА Н И Ч ЕН И Я М ЕТО Д И КИ
• Для прямой оценки чувствительности: время проведения теста существенно удлиняется,
т.к. культуральный тест может оказывать влияние на характеристики образца.
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: проведение теста со старыми
колониями с чашек может влиять на результаты теста.
• Длительные паузы между этапами работы (от приготовления инокулума до загрузки в
прибор) могут влиять на результаты,
• Для прямой оценки чувствительности: могут быть исследованы только образцы,
предварительно отобранные по окраске по Граму, для исключения полимикробного
роста,
• Для оценки чувствительности изолированных колоний: инокулум, полученный путем
смешивания разных изолированных колоний или из слабо изолированных колоний может
влиять на результаты.
О Ж И Д А ЕМ Ы Е РЕ ЗУЛ Ь ТА ТЫ
Принимая во внимание, что бактериальная резистентность может варьировать в разных
географических зонах, ожидаемые результаты прямо зависят от локальной микробной экологии
(Виды /Механизмы резистентности).
ПО КА ЗА ТЕЛИ Ч У В С ТВ И Т Е Л Ь Н О С ТИ ПРИ ПРЯХ ТЕ С Т А Х В УР И Н О К У Л Ь Т У Р А Х
Показатели по А8Т-Азтреонаму оценивались с использованием положительных образцов мочи,
содержавших следующие виды :
Escherichia spp. Proteus spp. Staphyiococcus spp,
Klebsieila spp. Citrobacter spp.
Enterobacter spp. Morganella spp.
Эти образцы были получены из института микробиологии и параллельно тестировались
референсным методом Кирби-Бауэра после культивирования на чашках Петри.
УРО В Е Н Ь Д О С Т О В Е Р Н О С Т И
Уровень достоверности результатов, полученных при помощи референсного метода на 94
штаммах составлял 89.36% .
“Большая ошибка” и “очень большая ошибка’ ’ в процентном отношении составляли 4,26% и 0%
соответственно.
В О С П РО И ЗВ О Д И М О С ТЬ
Уровни воспроизводимости в процентном отношении (чувствительные, промежуточные,
резистентные), полученные в 8 повторностях на 2-х бактериальных штаммах составлял 100%.
--- стр. 219 ---
A L IF A X S .p .A .
via Petrarca 2 /1 - 35020 Polverara (PD) - Italy
tel. +39 049 0992000
web site: www.alifax.com
e-mail: info@aiifax.com
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1) Clinical and Laboratory Standards institute. Performance Standard for Antimicrobial
Susceptibility Testing: Eighteenth Informational Supplement. Approved Standard CLSI
Document M100-S18, Vol. 28, No. 1 , Winkler MA et al,, January, 2008.
2) Jennifer M. Andrews, “Determination o f minimum inhibitory concentrations" , Journal of
Antimicrobial Chemotherapy (2001), 48, SuppI S1, 5-16.
3) Livermore D.M., Winstanley T.G., Shannon K.P., "Interpretative reading: recognizing the unusual
and inferring resistance mechanisms from resistance phenotypes", Journal of Antimicrobial
Chemotherapy (2001), 48, SuppI S1, 87-102.
4) Chapin K.C. and Murray P.R. “Principles o f Stains and M edia”. Murray P.R. et a l: Manual of
Clinical Microbiology, 8th edition, 258-261. ASM Press 2003.
5) Jorgensen H.J, “Selection Criteria for an Antim icrobial Susceptibility Testing System", Journal of
Clinical Microbiology Nov. 1993; 31(11): 2841-2844.
6) Product References :
7) S. Roveta, A. Marchese, E.A, Debbia (Microbiology Institute, Genoa University, Italy),
"Evaluation o f the Antibiotic Susceptibility on 412 Pathogens Isolated from Severe Bacterial
Infections Employing the Uro-Quick System", Poster, ICAAC, Washington, 30 October - 2
November 2004.
8) S, Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in intensive care units using the Uro-
Quick System", Poster, AMCLI, Padova, 8-11 June 2004.
9) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test o f Uropathogens using the Uro-Quick System directly on
urine", Poster, ASM, Nevif Orleans, 23-27 May 2004.
1 0) S. Roveta, F. Cavallini, A. Marchese, E.A. Debbia, (Microbiology Institute, Genoa University,
Italy), "Antibiotic Susceptibility Test on pathogens isolated in ICU using the Uro-Quick System",
Poster, ECCMID, Prague, 1 -4 May 2004.
1 1) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, Universita di Genova),
“Evaluation o f the Uroquick, a new rapid automated system, for the detection o f well-
characterized antibiotic-resistant bacteria”, Journal of Chemotherapy 2004 Apr;16(2):107-18.
1 2) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, University di Genova),
“Esecuzione rapida di antibiogram mi su campioni di urine mediante slstema Uro-quick", Poster,
National Congress SIM, Rome, 19-21 October 2003.
13) S. Roveta, E.A. Debbia, A. Marchese, (Istituto di Microbiologia, Universita di Genova), “ The Uro-
Quick System for the Identification o f W ell-chracterized Antibiotic-resistance Strains",
Microbiologia Medica, vol. 18, № I, 2003, p 49-55.