Набор реагентов для количественного определения ДНК Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae методом ПЦР АмплиСенс® Пневмо-квант-FL по ТУ 21.20.23-281-01897593-2017 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Директор Федерального бюджетного
учреждения науки «Центральный
научно-исследовательский институт
эпидемиологии» Федеральной
службы по надзору в сфере защиты
прав потребителей i/ благополучия
человека ■ \
.■ i 'Л
^ 1 а |И * м «I lA iin i* . .й • шгц( 1
в.г. Акимкин
^ 2 0 ^ г.
Чг?У1Я|;^
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
набора реагентов для количественного определения ДНК
Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae
методом ПЦР
АмплиСенс® Пневмо-квант-FL
АмплиСенс’
мЛ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
город Москва, улица Новогиреевская, дом ЗА 1VD
--- стр. 2 ---
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ............................................................................................................3
НАЗНАЧЕНИЕ................................................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА.....................................................................................................................4
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ.........................................................................................................5
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ...................................................................................6
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ .............................................................................9
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ..............................................................................................12
СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ................................................................................................13
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ.................................................14
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА.. 17
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ ДНК...........................21
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ПРОБ
ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА..............................................................................................23
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ.................................................................................25
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ .......................................................25
ФОРМА 1 («ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F; программное обеспечение АмплиСенс®
Пневмо-квант версия 1.1)...........................................................................................................27
СОСТАВ..................................................................................................................................27
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ............28
A. Подготовка проб для амплификации.....................................................................28
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени».. 29
B. Анализ и интерпретация результатов....................................................................30
ФОРМА 2 («ПЦР-КОМПЛЕКТ» ВАРИАНТ FRT-L; ПРОГРАММНОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ
АМПЛИСЕНС® ПНЕВМО-КВАНТ ВЕРСИЯ 1.1)....................................................................35
СОСТАВ..................................................................................................................................35
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ............35
A. Подготовка проб для амплификации.....................................................................36
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени».. 36
B. Анализ и интерпретация результатов....................................................................38
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ ......................42
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ ......................................................43
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ ...........................................44
ПРИЛОЖЕНИЕ 1........................................................................................................................45
ОГЛАВЛЕНИЕ
стр. 2 из 45
--- стр. 3 ---
список СОКРАЩЕНИЙ
В настоящей инструкции применяются следующие
ВКО ST1-87 - экзогенный внутренний контрольный образец
ГЭ - геномный эквивалент (геном)
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
дНТФ - дезоксирибонуклеозидтрифосфат
К1, К2 - ДНК-калибраторы
К- - отрицательный контроль ПЦР
ОК - отрицательный контроль экстракции
ОКО - отрицательный контрольный образец
ПК - положительный контроль экстракции
ПКО - положительный контрольный образец экстракции
ПО ' программное обеспечение
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РУ - регистрационное удостоверение
удг - ypaцил-ДFIK-гликoзилaзa
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
- Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный
научно-исследовательский институт эпидемиологии»
Федеральной службы по надзору в сфере загциты прав
потребителей и благополучия человека
FL - ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов АмплиСенс® Пневмо-квант-FL,
предназначен для количественного определения ДНК
Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae в
биологическом материале (мазки со слизистой оболочки носо-
и ротоглотки, мокрота, бронхо-альвеолярный лаваж (БАЛ),
жидкость из полости среднего уха, спинномозговая жидкость
(ликвор), цельная венозная кровь, тканевой (аутопсийный)
материал) человека методом ПЦР с гибридизационно-
флуоресцентной детекцией продуктов амплификации.
Материалом для проведения ПЦР служат пробы ДНК,
экстрагированные из исследуемого материала.
Набор реагентов используется в клинической лабораторной
диагностике.
Ограничения по применению медицинского изделия в
различных популяционных и демографических группах
отсутствуют.
Набор реагентов используется для исследования
биологического материала, полученного от лиц, больных
1
1
стр. 3 из 45
--- стр. 5 ---
мишени в исследуемом образце и циклом начала
экспоненциального увеличения флуоресцентного сигнала
(пороговый цикл, Cycle threshold, Ct). Амллификацию ДНК из
исследуемых образцов лроводят одновременно с ДНК-
калибраторами - образцами с известными концентрациями
ДНК-мишеней, аттестованными ло методике Изготовителя. По
результатам амплификации ДНК-калибраторов строится
калибровочная прямая, ло которой происходит расчет
концентрации ДНК-мишени в исследуемых образцах.
Набор реагентов содержит систему защиты от контаминации
ампликонами за счет применения фермента урацил-ДНК-
гликозилазы (УДГ) и дезоксиуридинтрифосфата.
На этапе амплификации одновременно в одной пробирке
проводится амплификация трех ДНК-мишеней. Результаты
амплификации регистрируются по следующим каналам
флуоресцентной детекции (см. табл. 1):
Таблица 1
Канал для
флуорофора FAM JOE ROX
ДНК-мишень ДНК ВКО STI-87 ДНК S trep to co ccu s
p n e u m o n ia e
ДНК H a e m o p h ilu s
in flu e n za e
Область
амплификации
искусственная
нуклеотидная
последовательность
локус Spn9802 ген hpd
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ
Форма 1: «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F; программное
обеспечение АмплиСенс® Пневмо-квант версия 1.1
Форма 2: «ПЦР-комплект» вариант FRT-L; программное
обеспечение АмплиСенс® Пневмо-квант версия 1.1
Формы 1 и 2 предназначены для проведения амплификации
ДНК с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме
«реального времени» и позволяют выявлять ДНК в
количественном формате. Для проведения полного ПЦР-
исследования необходимо использовать комплекты реагентов
для экстракции ДНК.
Форма 1 рассчитана на проведение 110 реакций
амплификации, включая контроли. Форма 2 рассчитана на
проведение 96 реакций амплификации, включая контроли.
стр. 5 из 45
--- стр. 6 ---
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для данного набора реагентов применимы следующие
характеристики:
Диапазон измерения и предел обнаружения
__ Таблица 2
Вид
исследуемого
материала
Микроорганизм
Комплект
для
экстракции
ДНК
Комплект
для
амплифи
кации
Предел
обнаружения,
ГЭ/мл
Диапазон
измерения,
ГЭ/мл
Мокрота
Бронхо
альвеолярный
лаваж (БАЛ)
Жидкость из
полости
среднего уха
Мазки со
слизистой
оболочки носо-
и ротоглотки
S trep to co ccu s
p n e u m o n ia e ,
H a e m o p h ilu s
in flu e n za e
«РИБО-преп»
Спинномозговая
жидкость
(ликвор)
«ПЦР-
комплект»
вариант
FRT-100F,
FRT-L
1x10^ 1х10‘^-1х10б
Цельная
венозная кровь
Тканевой
(аутопсийный)
материал
Данные значения характеристик достигаются при
соблюдении правил, указанных в разделах «Взятие,
транспортирование и хранение исследуемого материала» и
«Подготовка исследуемого материала к экстракции ДНК».
Аналитическая специфичность
Экспериментально доказано, что набор реагентов выявляет
участки ДНК заявленных микроорганизмов при исследовании
следующих штаммов из коллекций АТСС (American Туре
Culture Collection, США) и ГКПМ (Государственная коллекция
патогенных микроорганизмов): Streptococcus pneumoniae
АТСС® 49619™, Streptococcus pneumoniae 11/56, Streptococcus
стр. 6 ИЗ 45
--- стр. 7 ---
pneumoniae 74/64, Haemophilus influenzae 423 в концентрации
не менее 1x10^ ГЭ/мл.
Аналитическая специфичность набора реагентов доказана
при исследовании ДНК следующих микроорганизмов, а также
геномной ДНК человека:
- штаммы из коллекции АТСС (American Туре Culture
Collection, США) Streptococcus agalactiae АТСС® 13813™,
Staphylococcus saprophyiticus АТСС® 15305™, Pseudomonas
aeruginosa АТСС® 9027™, Moraxella catarrhalis ATCC® 8193™,
Neisseria flava ATCC® 14221™, Neisseria mucosa
ATCC® 19693™, Enterococcus faecalis ATCC® 19433™,
Corynebacterium pseudodiphtheriticum ATCC® 090282™,
Streptococcus salivarius ATCC® 13419™, Haemophilus
parainfluenzae ATCC® 7901™ в концентрации не менее
1x10® ГЭ/мл и не более 1x10® ГЭ/мл;
- штаммы из коллекции ГКПМ (Государственная коллекция
патогенных микроорганизмов) Streptococcus pyogenes Dick - I,
Proteus mirabilis 3177, Klebsiella pneumoniae 418, Neisseria
sicca 5, Escherichia coli M 17, Salmonella enteritidis 5765,
Salmonella typhimurium 79, Yersinia enterocolitica 134,
Bordetella pertussis 703 L 6, Mycobacterium Bovis Ravenel
№700204 в концентрации не менее 1x10® ГЭ/мл и не более
1x10® ГЭ/мл;
- ДНК человека в концентрации 1 мг/мл.
При тестировании образцов ДНК вышеперечисленных
организмов и ДНК человека неспецифических реакций
выявлено не было. Специфичность тестирования
подтверждалась методом секвенирования детектируемых
фрагментов амплификации.
Информация об интерферирующих веществах указана в
разделе «Интерферирующие вещества и ограничения по
использованию проб исследуемого материала».
Повторяемость и воспроизводимость
Повторяемость и воспроизводимость были определены
путем тестирования образцов мокроты, в которых
предварительно не была выявлена ДНК Streptococcus
pneumoniae и ДНК Haemophilus influenzae, а затем были
добавлены стандартные образцы предприятия, содержащие
ДНК Streptococcus pneumoniae и ДНК Haemophilus influenzae,
стр. 7 из 45
--- стр. 8 ---
до конечных концентраций 1x10^^ и 1x10® ГЭ/мл - при этом
каждый образец содержал одинаковую концентрацию ДНК
возбудителей.
Таблица 3
Повторяемость
<\мплиСенс^
Пневмо-
квант-FL
Микроорганизм
Исходное
значение
концентрации,
ГЭ/мл
Количество
повторов
Среднее
значение
концентрации,
|д
[Стандартное
отклонение
(SD)
Коэффициен!
вариации
(CV), %
Форма 1
Streptococcus
pneumoniae
IxlO*» 10 4,23 0,16 3,85
1x10^ 10 5,81 0,02 0,36
Haemophilus
influenzae
1x10“ 10 4,12 0,10 2,85
1x10^ 10 5,82 0,00 0,45
Форма 2
Streptococcus
pneumoniae
1x10“ 10 4,15 0,08 2,02
1x106 10 5,83 0,02 0,43
Haemophilus
influenzae
1x10“ 10 4,10 0,05 1,27
1x10® 10 5,72 0,03 0,45
Таблица 4
Воспроизводимость
<НмплиСенс^
Пневмо-
квант-FL
Микроорганизм
Исходное
значение
концентрации,
ГЭ/мл
Количество
повторов
Среднее
значение
концентрации,
|д
Стандартное
отклонение
(SD)
Коэффициент
вариации (CV),
%
Форма 1
Streptococcus
pneumoniae
1x10“ 40 4,00 0,24 6,00
1x10® 40 5,85 0,08 1,34
Haemophilus
influenzae
1x10“ 40 3,97 0,17 4,35
1x10® 40 5,86 0,21 3,51
Форма 2
Streptococcus
pneumoniae
1x10“ 40 4,22 0,15 3,48
1x10® 40 5,81 0,03 0,58
Haemophilus
influenzae
1x10“ 40 4,06 0,09 2,13
1x10® 40 5,91 0,25 4,27
Условия повторяемости включали в себя тестирование в
одной и той же лаборатории, одним и тем же оператором, с
использованием одного и того же оборудования в пределах
короткого промежутка времени. Условия воспроизводимости -
тестирование в двух независимых лабораториях, разными
операторами, на различных приборах, на разных сериях
набора реагентов.
Правильность
Правильность была определена путем тестирования
образцов мокроты, в которой предварительно не была
выявлена ДНК Streptococcus pneumoniae и ДНК Haemophilus
influenzae, а затем были добавлены стандартные образцы
предприятия, содержащие ДНК Streptococcus pneumoniae и
стр. 8 из 45
--- стр. 9 ---
ДНК Haemophilus influenzae, до конечной
5x10® ГЭ/мл каждого.
Правильность
концентрации
Таблица 5
АмплиСенс®
Пневмо-квант-FLМикроорганизмКоличество
повторов
Среднее
значение
измерения, Ig
Установленное
значение, Ig
Систематическая
погрешность (В),
%
Форма 1
Streptococcus
pneumoniae 100 5,66 5,67 0,20
Haemophilus
influenzae 100 5,72 5,58 2,51
Форма 2
Streptococcus
pneumoniae 100 5,57 5,67 2,23
Haemophilus
influenzae 100 5,46 5,58 4,15
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для подтверждения диагностических характеристик набора
реагентов АмплиСенс® Пневмо-квант-FL были использованы
образцы биологического материала (мазки со слизистой
оболочки носо- и ротоглотки, мокрота, бронхо-альвеолярный
лаваж (БАЛ), жидкость из полости среднего уха,
спинномозговая жидкость (ликвор), цельная венозная кровь,
тканевой (аутопсийный) материал), полученные от
380 пациентов с пневмококковой инфекцией, содержащие ДНК
Streptococcus pneumoniae в концентрации от 1,02x10'* до
3,78x10'' ГЭ/мл, и от 380 пациентов с гемофильной инфекцией,
содержащие ДНК Haemophilus influenzae в концентрации от
1,01x10'* до 4,58x10''ГЭ/мл, а также от 380 пациентов без
пневмококковой и гемофильной инфекции (контрольная
группа).
Результаты представлены в табл. 6 и 7.
стр. 9 из 45
--- стр. 10 ---
Таблица 6
Результаты тестирования набора реагентов
АмплиСенс® Пневмо-квант-FL
Возбудитель
Вид
исследуемого
материала
Результаты применения
АмплиСенс®
Пневмо-квант-FL
Результаты применения
референтного метода^
положительны)отрицательны)
Streptococcus
pneumoniae
мокрота
Всего
исследовано
180 образцов
положительных 60 0
отрицательных 0 120
бронхо
альвеолярный
лаваж (БАЛ)
Всего
исследовано
90 образцов
положительных 30 0
отрицательных 0 60
жидкость из
полости
среднего уха
Всего
исследовано
90 образцов
положительных 30 0
отрицательных 0 60
мазки со
слизистой
оболочки носо-
и ротоглотки
Всего
исследовано
300 образцов
положительных 100 0
отрицательных 0 200
спинномозговая
жидкость
(ликвор)
Всего
исследовано
90 образцов
положительных 30 0
отрицательных 0 60
цельная
венозная кровь
Всего
исследовано
300 образцов
положительных 100 0
отрицательных 0 200
тканевой
(аутопсийный)
материал
Всего
исследовано
90 образцов
положительных 30 0
отрицательных 0 60
Haemophilus
influenzae
мокрота
Всего
исследовано
180 образцов
положительных 60 0
отрицательных 0 120
бронхо
альвеолярный
лаваж (БАЛ)
Всего
исследовано
90 образцов
положительных 30 0
отрицательных 0 60
жидкость из
полости
среднего уха
Всего
исследовано
90 образцов
положительных 30 0
отрицательных 0 60
мазки со
слизистой
оболочки носо-
и ротоглотки
Всего
исследовано
300 образцов
положительных 100 0
отрицательных 0 200
спинномозговая
жидкость
(ликвор)
Всего
исследовано
90 образцов
положительных 30 0
отрицательных 0 60
цельная
венозная кровь
Всего
исследовано
300 образцов
положительных 100 0
отрицательных 0 200
тканевой
(аутопсийный)
материал
Всего
исследовано
90 образцов
положительных 30 0
отрицательных 0 60
^ В качестве референтного метода использовались культуральные методы исследования и
секвенирование участков генома Streptococcus pneum oniae и Haem ophilus influenzae.
стр, 10 из 45
--- стр. 11 ---
Таблица 7
Диагностические характеристики набора реагентов
АмплиСенс® Пневмо-квант-FL
Возбудитель Вид исследуемого
материала
Диагностическая
чувствительность^
(с доверительной
вероятностью 95 %)
Диагностическая
специфичность^
(с доверительной
вероятностью 95 %)
Streptococcus
pneumoniae
мокрота 100 (94-100) % 100 (97-100) %
бронхо-альвеолярный
лаваж (БАЛ) 100 (88-100) % 100 (94-100) %
жидкость из полости
среднего уха 100 (88-100) % 100 (94-100) %
мазки со слизистой
оболочки носо- и
ротоглотки
100 (96-100) % 100 (98-100) %
спинномозговая жидкость
(ликвор) 100 (88-100) % 100 (94-100) %
цельная венозная кровь 100 (96-100)% 100 (98-100)%
тканевой (аутопсийный)
материал 100 (88-100) % 100 (94-100) %
Haemophilus
influenzae
мокрота 100 (94-100) % 100 (97-100) %
бронхо-альвеолярный
лаваж (БАЛ) 100 (88-100)% 100 (94-100) %
жидкость из полости
среднего уха 100 (88-100) % 100 (94-100) %
мазки со слизистой
оболочки носо- и
ротоглотки
100 (96-100) % 100 (98-100)%
спинномозговая жидкость
(ликвор) 100 (88-100) % 100 (94-100) %
цельная венозная кровь 100 (96-100) % 100 (98-100)%
тканевой (аутопсийный)
материал 100 (88-100)% 100 (94-100) %
Корреляция значений концентрации ДНК Streptococcus
pneumoniae и Haemophilus influenzae со значениями,
полученными с помощью референтного метода'*
Было проанализировано 380 образцов различных видов
биологического материала, содержащих ДНК Streptococcus
pneumoniae в концентрации от 1,02x10'* до 3,78x10^ ГЭ/мл, и
380 образцов различных видов биологического материала,
содержащих ДНК Haemophilus influenzae в концентрации от
1,01x10^ до 4,58x10^ ГЭ/мл.
^ Относительная чувствительность в сравнении с использованным референтным методом.
^Относительная специфичность в сравнении с использованным референтным методом.
“ В качестве референтного метода использовалась система QX100 для проведения
капельной цифровой ПЦР (QX100 droplet digital PCR), РУ № ФСЗ 2012/13278).
стр. 11 из 45
--- стр. 12 ---
Величина достоверности аппроксимации (R^) в отношении
обоих возбудителей для каждого вида биологического
материала составила выше 80%.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей
молекулярно-биологические (ПЦР) исследования
биологического материала на наличие возбудителей
инфекционных болезней, с соблюдением СанПиН 3.3686-21
«Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике
инфекционных болезней», СанПиН 2.1,3684-21 «Санитарно-
эпидемиологические требования к содержанию территорий
городских и сельских поселений, к водным объектам, питьевой
воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху,
почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных,
общественных помещений, организации и проведению
санитарно-противоэпидемических (профилактических)
мероприятий» и МУ 1.3.2569-09 «Организация работы
лабораторий, использующих методы амплификации
нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы I-IV групп патогенности».
Набор реагентов предназначен для одноразового
применения для проведения ПЦР-исследования указанного
количества проб (см. раздел «Состав»).
Набор реагентов готов к применению согласно данной
инструкции. Применять набор реагентов строго по назначению.
При работе необходимо всегда выполнять следующие
требования:
- Температура в помещении лаборатории от 20 до 28 °С,
относительная влажность от 15 до 75%.
- Допускать к работе с набором реагентов только персонал,
обученный методам молекулярной диагностики и правилам
работы в клинико-диагностической лаборатории в
установленном порядке.
- Не использовать набор реагентов, если нарушена
внутренняя упаковка или внешний вид реагента не
соответствует описанию.
- Не использовать набор реагентов, если не соблюдались
условия транспортирования и хранения согласно
стр. 12 из 45
--- стр. 19 ---
стерильным назофарингеальным велюр-тампоном на
пластиковом аппликаторе. Если полость носа заполнена
слизью, перед процедурой рекомендуется провести
высмаркивание. Зонд вводят легким движением по наружной
стенке носа на глубину 2-3 см до нижней раковины. Затем зонд
слегка опускают вниз, вводят в нижний носовой ход под
нижнюю носовую раковину до носоглотки, делают
вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки
носа. Общая глубина введения зонда должна составлять
примерно половину расстояния от ноздри до ушного отверстия
(3-4 см для детей и 5-6 см для взрослых).
После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с
тампоном) помещают до места слома в стерильную
одноразовую пробирку с 500 мкл транспортной среды для
хранения и транспортировки респираторных мазков, при этом
гибкая часть зонда сворачивается спиралью, далее, прикрывая
сверху пробирку крышкой, рукоятку зонда опускают вниз,
добиваясь полного отламывания верхней части зонда.
Пробирку с раствором и рабочей частью зонда герметично
закрывают и маркируют.
Мазки из ротоглотки берут сухими стерильными зондами с
вискозными тампонами вращательными движениями с
поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки
ротоглотки.
После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с
вискозным тампоном) помещают в стерильную одноразовую
пробирку с 500 мкл транспортной среды для хранения и
транспортировки респираторных мазков. Конец зонда
отламывают, движением вниз-вверх-вниз, придерживая
крышкой пробирки с расчетом, чтобы он позволил плотно
закрыть пробирку. Пробирку с раствором и рабочей частью
зонда закрывают, маркируют.
Допускается хранение исследуемого материала до проведения
ПЦР-исследования:
- при температуре от 2 до 8 °С - не более 3 суток;
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - не более
1 недели.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
стр. 19 ИЗ 45
--- стр. 20 ---
Допускается транспортирование материала при температуре
от 2 до 8 °С в течение 3 суток.
Цельная венозная кровь
Взятие крови следует лроизводить натощак или через 3 часа
после лриема пищи одноразовой иглой диаметром 0,8-1,1 мм в
пробирку (специальную вакуумную систему) с раствором ЭДТА
в качестве антикоагулянта. После взятия крови пробирку
следует несколько раз плавно перевернуть вверх дном, чтобы
кровь в пробирке тщательно перемешалась с антикоагулянтом
(в противном случае кровь свернется, и экстракция ДНК станет
невозможной!). После плавного перемешивания пробирку
поместить в штатив.
Допускается хранение исследуемого материала до проведения
ПЦР-исследования;
- при температуре от 18 до 25 °С - в течение 2 часов;
- при температуре от 2 до 8 °С — в течение 6 часов с момента
взятия материала для количественного определения
нуклеиновых кислот.
Допускается транспортирование материала при температуре
от 2 до 8 °С в течение 6 часов.
Спинномозговая жидкость (ликвор)
Спинномозговую жидкость (ликвор) следует получать с
помощью одноразовых игл, в одноразовые пластиковые сухие
пробирки объемом 2,0 мл в количестве не менее 1,0 мл.
Пробирку плотно закрыть крышкой, не допуская зазора и
смятия внутренней части крышки, и промаркировать.
Допускается хранение исследуемого материала до
ПЦР-проведения исследования:
- при температуре от 18 до 25 °С - в течение 6 часов;
- при температуре от 2 до 8 °С - не более 1 суток;
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - не более
1 недели;
- при температуре не выше минус 68°С - длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
Допускается транспортирование материала при температуре
от 2 до 8 °С в течение 1 суток.
Жидкость из полости среднего уха
стр. 20 из 45
--- стр. 21 ---
i
Сбор материала проводит отоларинголог; после очистки и
обработки наружного слухового канала раствором лидокаина с
этиловым спиртом (с экспозицией в течение одной минуты)
делается прокол барабанной перепонки с целью извлечения
жидкости из барабанной полости, которую собирают с
помощью зонда из полистирола с вискозным тампоном. Конец
зонда с тампоном отламывается в пробирку с транспортной
средой (0,5 мл стерильного физиологического раствора или
0,5 мл транспортной среды для хранения и транспортировки
респираторных мазков). При самопроизвольной перфорации
барабанной перепонки жидкость из барабанной полости
собирают аналогичным способом, за исключением того, что
прокол барабанной перепонки не проводится.
Допускается хранение исследуемого материала до проведения
ПЦР-исследования:
- при температуре от 2 до 8 °С - не более 3 суток;
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - не более
1 недели.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
Допускается транспортирование материала при температуре
от 2 до 8 °С в течение 3 суток.
Тканевой (аутопсийный) материал
Материал помещают в стерильные одноразовые контейнеры
и исследуют в течение 1 ч либо замораживают сразу после
взятия.
Допускается хранение исследуемого материала до проведения
ПЦР-исследования:
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - не более
7 суток;
- при температуре не выше минус 68 °С - длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
Допускается транспортирование предварительно
замороженного материала при температуре от 2 до 8 °С в
течение 1 суток.
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К
ЭКСТРАКЦИИ ДНК
Цельная венозная кровь, спинномозговая жидкость (ликвор).
стр. 21 из 45
--- стр. 33 ---
необходимо повторить ПЦР-исследование для всех
образцов, начиная с этапа экстракции ДНК.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по каналам
для флуорофоров JOE и/или ROX определено значение
порогового цикла {Ct). Вероятна контаминация лаборатории
продуктами амплификации или контаминация реагентов,
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-
исследования. Необходимо предпринять меры по выявлению
и ликвидации источника контаминации и повторить ПЦР-
исследование для всех образцов, в которых обнаружена
специфическая ДНК, начиная с этапа экстракции ДНК.
3. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для
флуорофоров РАМ и/или JOE, и/или ROX определено
значение лорогового цикла (Ct). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация
реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе
ПЦР-исследования. Необходимо предпринять меры по
выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в
которых обнаружена специфическая ДНК.
4. Для ДНК-калибраторов К1 и К2 отсутствуют значение
порогового цикла {Ct) по какому-либо из указанных каналов
для флуорофоров (см. табл. 12). Необходимо повторить
амплификацию и детекцию для всех образцов.
5. Показатель эффективности Е при построении
калибровочной прямой менее 80% или более 120%.
Необходимо проверить правильность заданных
концентраций ДНК-калибраторов в соответствии с
вкладышем к набору реагентов и правильность выбранного
уровня пороговой линии. Если при правильно заданных
концентрациях ДНК-калибраторов и уровне пороговой линии
показатель эффективности не укладывается в требуемый
диапазон, следует повторить амплификацию и детекцию
для всех образцов.
6. Для исследуемого образца определено значение порогового
цикла, при этом на графике флуоресценции отсутствует
участок характерного экспоненциального подъема (график
представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня
ФОРМА 1__________________________________________________________________________________
стр. 33 из 45
--- стр. 34 ---
ФОРМА 1
пороговой линии или параметров расчета базовой линии.
Если результат получен при правильном уровне пороговой
линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
< 1
стр. 34 из 45
--- стр. 35 ---
ФОРМА 2
ФОРМА 2 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L; программное
обеспечение АмплиСенс® Пневмо-квант версия 1.1)
СОСТАВ
«ПЦР-комплект» вариант FRT-L - комплект реагентов для
амплификации участков ДНК Streptococcus pneumoniae и
ДНК Haemophilus influenzae с гибридизационно-
флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» -
включает:
Реагент Описание Объем, мл Количество
ПЦР-смесь S. p n e u m o n ia e /
Н . in flu e n z a e -L y o
Порошок белого цвета -
96 пробирок
объемом
0,2 мл
К1 SH Прозрачная
бесцветная жидкость 0,5 1 пробирка
К2 SH Прозрачная
бесцветная жидкость 0,5 1 пробирка
К- Прозрачная
бесцветная жидкость 0.5 1 пробирка
ВКО STI-87 Прозрачная бесцветная
жидкость 1.0 1 пробирка
ОКО Прозрачная
бесцветная жидкость 1.2 2 пробирки
ПКО S .p n e u m o n ia e /
Н .in flu e n z a e
Прозрачная бесцветная
жидкость 0.1 1 пробирка
Комллект реагентов рассчитан на проведение 96 реакций
амплификации, включая контроли.
Программное обеспечение АмплиСенс® Пневмо-квант версия
1.1 и руководство оператора реагентов - на электронном
носителе или на сайте Изготовителя (www.amplisens.ru).
Эксплуатационная документация в составе: инструкция по
применению, паспорт качества набора реагентов, вкладыш к
набору реагентов, краткое руководство к набору реагентов
реагентов - на бумажном носителе и на сайте Изготовителя
(
www.amplisens.ru).
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО
ВРЕМЕНИ»
Для внесения в пробирки реагентов, проб ДНК и
контрольных образцов используются одноразовые
наконечники с фильтрами.
стр. 35 ИЗ 45
--- стр. 40 ---
ФОРМА 2
Таблица 16
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-
исследования
Конт
роль
Контрол и руе м ы й
этап ПЦР-
исследования
Результаты амплификации по каналу для
флуорофора
РАМ JOE ROX
ПК Экстракция ДНК опоеделено
значение C t
значение
концентрации
укладывается в
диапазон
значение
концентрации
укладывается в
диапазон
ОК Экстракция ДНК опоеделено
значение C t
значение C t
отсутствует
значение C t
отсутствует
К- ПЦР значение C t
отсутствует
значение C t
отсутствует
значение C t
отсутствует
К1 ПЦР опоеделено
значение C t
опоеделено
значение C t
опоеделено
значение C t
К2 ПЦР опоеделено
значение C t
опоеделено
значение C t
опоеделено
значение Cf
ВНИМАНИЕ! Граничные значения Ct и диапазон концентрации
указаны во вкладыше, прилагаемом к набору реагентов.
Возможные ошибки:
1. Рассчитанная концентрация ПКО S.pneumoniae / Н.influenzae
не укладываются в диапазон, указанный во вкладыше,
необходимо повторить ПЦР-исследование для всех
образцов, начиная с этапа экстракции ДНК.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по каналам
для флуорофоров JOE и/или ROX определено значение
порогового цикла {Ct). Вероятна контаминация лаборатории
продуктами амплификации или контаминация реагентов,
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-
исследования. Необходимо предпринять меры по выявлению
и ликвидации источника контаминации и повторить ПЦР-
исследование для всех образцов, в которых обнаружена
специфическая ДНК, начиная с этапа экстракции ДНК.
3. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для
флуорофоров РАМ и/или JOE, и/или ROX определено
значение порогового цикла {Ct). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация
реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе
ПЦР-исследования. Необходимо предпринять меры по
выявлению и ликвидации источника контаминации и
стр. 40 из 45
--- стр. 41 ---
ФОРМА 2
повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в
которых обнаружена специфическая ДНК.
4. Для ДНК-калибраторов К1 и К2 отсутствуют значение
порогового цикла (Ct) по какому-либо из указанных каналов
для флуорофоров (см. табл. 16). Необходимо повторить
амплификацию и детекцию для всех образцов.
5. Показатель эффективности Е при построении
калибровочной прямой менее 80% или более 120%.
Необходимо проверить правильность заданных
концентраций ДНК-калибраторов в соответствии с
вкладышем к набору реагентов и правильность выбранного
уровня пороговой линии. Если при правильно заданных
концентрациях ДНК-калибраторов и уровне пороговой линии
показатель эффективности не укладывается в требуемый
диапазон, следует повторить амплификацию и детекцию
для всех образцов.
6. Для исследуемого образца определено значение порогового
цикла, при этом на графике флуоресценции отсутствует
участок характерного экспоненциального подъема (график
представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня
пороговой линии или параметров расчета базовой линии.
Если результат получен при правильном уровне пороговой
линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
стр. 41 из 45
--- стр. 42 ---
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и
ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 12 мес. Набор реагентов с истекшим сроком
годности применению не подлежит. Срок годности вскрытых
реагентов соответствует сроку годности, указанному на
этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не
указано иное.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при
температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут в термоконтейнерах,
содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых
транспортных средств. Допускается транспортирование при
температуре от 2 до 25 °С не более 3 сут.
Хранение.
Форма 1. «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F хранить в
холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С, кроме ПЦР-
буфера-В, полимеразы (TaqF) и ПЦР-смеси-FL S.pneumoniae /
Н.influenzae. ПЦР-буфер-В, полимеразу (TaqF) и ПЦР-смесь-FL
S.pneumoniae / Н.influenzae хранить в морозильной камере при
температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-смесь-FL
S.pneumoniae / Н.influenzae хранить в защищенном от света
месте.
Форма 2. «ПЦР-комплект» вариант FRT-L хранить в
холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С. ПЦР-смесь
S.pneumoniae / H.influenzae-Lyo хранить в пакетах с
влагопоглотителем. ПЦР-смесь S.pneumoniae / H.influenzae-Lyo
хранить в защищенном от света месте.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать
регламентированный температурный режим.
стр. 42 из 45
--- стр. 43 ---
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ
Изготовитель гарантирует соответствие основных
параметров и характеристик набора реагентов требованиям,
указанным в технической и эксплуатационной документации, в
течение указанного срока годности при соблюдении всех
условий транспортирования, хранения и применения.
Медицинское изделие техническому обслуживанию и
ремонту не подлежит.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по
адресу 111123, г. Москва, ул. Новогиреевская, дом ЗА, e-mail:
obtk@pcr.ru
При выявлении побочных действий, не указанных в
инструкции по применению набора реагентов, нежелательных
реакций при его использовании, фактов и обстоятельств,
создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
работников при применении набора реагентов, рекомендуется
направить сообщение по адресу, указанному выше, и в
уполномоченную государственную регулирующую организацию
(в РФ - Федеральная служба по надзору в сфере
здравоохранения) в соответствии с действующим
законодательством.
Директор
ГБУЗ МО МОНИКИ
им. М.Ф. Владимирского
К.Э. Соболев
Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету
потребителя на сайте: www.amplisens.ru.
стр. 43 из 45
--- стр. 44 ---
символы, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ
REF Номер по каталогу
V
Содержимого достаточно для
проведения п тестов
1-----1
[ l o t Код партии
Медицинское
изделие для
Использовать до
IVD 03
\\у
Обратитесь к инструкции по
применениюдиагностики in vitro
VER Дата изменения Не допускать воздействия
1
Предел
температуры
f
Беречь от влаги
mJ
Изготовитель
А
Осторожно!
Дата изготовления
стр, 44 из 45
--- стр. 49 ---
список СОКРАЩЕНИЙ
В настоящем руководстве применяются следующие сокращения и обозначения:
вко - экзогенный внутренний контрольный образец
гэ - геномные эквиваленты
ДНК -дезоксирибонуклеиновая кислота
К1, К2 - ДНК-калибраторы
К- - отрицательный контроль ПЦР
ок - отрицательный контроль экстракции
ПК - положительный контроль экстракции
по - программное обеспечение
ПЦР - полимеразная цепная реакция
по - программное обеспечение
ПЦР - полимеразная цепная реакция
НАЗНАЧЕНИЕ
Программное обеспечение АмплиСенс® Пневмо-квант версия 1.1, предназначено
для автоматической обработки результатов при использовании набора реагентов
АмплиСенс® Пневмо-квант-FL. ПО представляет собой шаблон расчета результатов
в формате Microsoft® Excel.
Дата выпуска: 22.11.18
Класс безопасности: Класс А (невозможны никакие травмы и ущерб здоровью) в
соответствии с п.4.3 ГОСТ Р МЭК 62304.
ПО АмплиСенс® Пневмо-квант и руководство оператора представлены
пользователю на электронном носителе информации или на сайте Изготовителя.
ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ТЕХНИЧЕСКИЕ СРЕДСТВА
Персональный компьютер с предустановленным пакетом приложений Microsoft®
Office 2003 и выше. Системные требования приведены на официальном сайте
http://technet.microsoft.com/ru-ru/librarv/ee624351.asDx
ПРИНЦИП РАБОТЫ
Для работы ПО АмплиСенс® Пневмо-квант необходима программа Microsoft®
Excel. Программа использует встроенный язык программирования Microsoft® Visual
Basic for Applications (MS VBA).
В качестве исходных данных ПО АмплиСенс® Пневмо-квант использует значения
пороговых циклов (Cf), полученные ПО прибора, используемого для проведения
ПЦР с детекцией в режиме «реального времени», для исследуемых образцов,
контролей и калибраторов.
ПО АмплиСенс® Пневмо-квант проводит автоматическое построение графиков
калибровки, расчет концентраций и анализ достоверности результатов.
стр. 3 из 10
--- стр. 50 ---
УСЛОВИЯ ВЫПОЛНЕНИЯ АВТОМАТИЧЕСКОЙ ОБРАБОТКИ РЕЗУЛЬТАТОВ
Для автоматической обработки результатов необходимо соблюдать следующие
условия:
1) Необходимо убедиться, что система безопасности Microsoft® Excel позволяет
использовать макросы. В меню Сервис>Макрос>Безопасность установите
Средний уровень защиты.
2) Исходные данные должны быть получены ПО используемого прибора, в
соответствии с инструкцией по применению к набору реагентов. Данные могут
быть перенесены непосредственно из ПО прибора, либо из файла экспорта
данных в Excel.
3) Ячейки раздела Данные прибора должны быть заполнены без ошибок: значения
Cf должны соответствовать образцу и каналу детекции.
4) Таблицы Нижняя граница ПК, ГЭ/мл, Верхняя граница ПК, ГЭ/мл и
Коэффициенты раздела Параметры должны быть заполнены в строгом
соответствии с вкладышем к используемой серии набора реагентов.
5) Контрольные образцы в столбце Обозначение образца должны быть подписаны
в соответствии с таблицей Обозначение контрольных образцов (вкладка
Инструкция). Регистр букв значения не имеет.
стр. 4 из 10
--- стр. 51 ---
ИЗОБРАЖЕНИЯ НА ЭКРАНЕ МОНИТОРА КОМПЬЮТЕРА ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ
ПРОГРАМНОГО ОБЕСПЕЧЕНИЯ
Вкладка Инструкция:
АмплиСенс^ Пневмо-квант
Hai»<gio»wp
Шаблон предназначен для автоматической обработки реэулотатовпри использовании набора реагентов для диагностики in vitro
АмплиСенс® Пиевмо-квакт-FL.
Описание результата
Статус Описание
Неавлнднын.Сбои ВКО.Требуется повторить анализ.
В исследуемом образце или в образце ПК значение СГ по каналу для
флуорофора FAM отсутствует Требуется повторное ПЦР-нсследование
данного обоазца, начинав с этапа зкстоаяции ЛНК.
ОбнэруженаДНК;5.рлеи1лол/ое и/илиЮт^оелзое
Д И K S tre p to c o c c u 5 p n e u m o n ta e и/илиНветорПЯиз 1л/1и«пдте выявлена
в концентрации меньше нижнего предела линейного диапазона
измеоения набооа оеагентов [менее 1x3O' ГЭ/мл).
Рассчитанное значение концентрации (ГЭ/мл) ДНК Streptococcus
рлеил 10л/ое и / м и H a e m o p h ilu s in p u e n z a e находится в пределах
линейного диапэзонаиэмерения набора реагентов (от ЗхЗО' до
1x10* ГЭ/мл).
ДНК5ггергососсизрпеитол10е и/или Hoemophi/us in^uenzoe выявлена
в концентрации выше верхнего предела линейного диапазона
измеоения набооа оеагентов [более 1x10* ГЭ/мл).
Не обнаружено
ЗначенияCt дляAHKStreptococcuspneurnonioe ^ H a e m o p h ilu s
in flu e n za e отсутствуют или превышает граничное значение, а по
каналу для ВКО ппоелелено значение C t .
ОК
Получены правильные результаты для контролен этапов экстракции
[ПК. ОК) и амплификации [калибраторы К1 и К2. К-)ДНК.
Ошибка. Выходит за гран ицу допустммьос значении.
Для образца ПК значение концентрации выше и/или ниже диапазона,
указанногово вкладыше к данному набору реагентрв.
Контаминация?
Для образца К-присутствует Сг по каналам для флуорофороа FAM
и/или ЮЕи/илиКОХ.
Для образца ОК присутствует Сг по какалэмдляфлуорофоровЗОЕ
и/или ROX.
СбоиВКО! Для образца ОК отсутствует Ct по каналу длнфлуорофора F ^ .
Сбой!
Для образцов квлибраторов К1 и К2 при отсутствии Ct хотя бы по
одному из каналов детекции.
Обозначения контрольных образцов
Тип контрольного образца Возможные обозначения (регигф любой)
Калибраторы (К1, К2)
РУС: К1, К2
ЛАТ: К1.С1, К2. С2
Отрицательный контроль ПЦР
РУС: К-
ЛАТ: К-, F*CA
Отрицательный контрольэкггракции РУС: ОК. ОКО
ЛАТ: ОК. ОКО. NCE
Положительный контрольэкстракции
РУС: ПК
ЛАТ: PC
стр. 5 ИЗ 10
--- стр. 52 ---
Вкладка Результат.
ВЫПОЛНЕНИЕ АВТОМАТИЧЕСКОЙ ОБРАБОТКИ РЕЗУЛЬТАТОВ
1. Проверить, что система безопасности Microsoft® Excel позволяет использовать
макросы.
- Для Microsoft® Excel 2003: во вкладке М е н ю выбрать
С е р в и с > М а к р о с > Б е з о п а с н о с т ь и установить Средний уровень защиты.
- Для Microsoft® Excel 2007; нажать кнопку O ffic e в верхнем левом углу и
выбрать пункт П а р а м е т р ы > Ц е н т р у п р а в л е н и я
б е з о п а с н о с т ь ю > П а р а м е т р ы ц е н т р а у п р а в л е н и я
б е з о п а с н о с т ь ю > П а р а м е т р ы м а к р о с о в > . Поставить галочки напротив
В к л ю ч и т ь в с е м а к р о с ы и Д о в е р я т ь д о с т у п к о б ъ е к т н о й м о д е л и
п р о е к т о в V B A .
- Для Microsoft® Excel 2010 и Microsoft® Excel 2013: в меню Ф а й л выбрать пункт
П а р а м е т р ы > Ц е н т р у п р а в л е н и я 6 е з о п а с н о с т ь ю > П а р а м е т р ы ц е н т р а
у п р а в л е н и я б е з о п а с н о с т ь ю > П а р а м е т р ы м а к р о с о в > . Поставить галочки
напротив В к л ю ч и т ь в с е м а к р о с ы и Д о в е р я т ь д о с т у п к о б ъ е к т н о й
м о д е л и п р о е к т о в V B A .
2. Открыть файл с программой, принять включение макросов.
стр. 6 из 10
--- стр. 53 ---
3. Во вкладке Результат проверить, что активна кнопка Рассчитать.
4. Если таблица заполнена данными из предыдущей постановки, ее можно очистить
путем нажатия кнопки Очистить.
5. Сохранить файл под другим именем.
6. В разделе Параметры ввести информацию о постановке, верхнюю и нижнюю
границу ПК и значение коэффициента В, указанные во вкладыше, прилагаемом
к набору реагентов.
7. Выбрать тип используемого амплификатора, активировав функцию Роторный
или Плашечный в поле Тип прибора.
8. В разделе Данные прибора заполнить столбец Обозначение образца в
соответствии с расположением образцов в реакционном блоке.
9. Обозначить контрольные образцы в соответствии с таблицей Обозначения
контрольных образцов (вкладка Инструкция). Регистр букв значения не
имеет.
10.Заполнить столбец Значения Ct путем копирования значений пороговых циклов
по каждому каналу детекции непосредственно из ПО прибора, либо из файла
экспорта данных в Microsoft® Excel.
11.Нажать кнопку Рассчитать. Будут отображены расчетные концентрации,
результаты, статус образцов и полученные калибровочные графики, значения
эффективности и коэффициента корреляции.
стр. 7 из 10
--- стр. 54 ---
Результаты исследования выдаются в следующем виде:
Раздел Р а с ч е т н ы е к о н ц е н т р а ц и и служит для визуализации промежуточных
вычислений. В ячейках выводятся количественные результаты (ГЭ/мл) для каждого
возбудителя, рассчитанные по калибровочным графикам по соответствующему
каналу детекции. В случае отсутствия возбудителя в образце, соответствующее
поле остается пустым.
Раздел Р е з у л ь т а т ы предназначен для выдачи результатов.
В столбце К о н ц е н т р а ц и и Г Э /м л выводятся количественные результаты (ГЭ/мл)
для каждого возбудителя, рассчитанные с учетом потери ДНК в процессе
экстракции. В случае отсутствия возбудителя в образце, соответствующее поле
остается пустым. Если концентрация выходит за границы линейного диапазона
выводится символ > или < и значение верхней или нижней границы, соответственно.
В столбце С т а т у с выводятся следующие сообщения:
стр. 8 из 10