Набор реагентов для исследования состава микробиоты толстого кишечника в образцах кала детей методом ПЦР в режиме реального времени (ЭНТЕРОФЛОР® Дети) по ТУ 21.20.23-128-46482062-2021 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 3 --- ^^^ЛНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Л и с т 3 ЭНТЕРОФЛОР® Дети Л и с т о в 39 1 ПРЕДНАЗНАЧЕННОЕ ПРИМЕНЕНИЕ 1.1 Полное наименование набора реагентов: Набор реагентов для исследования состава микробиоты толстого кишечника в образцах кала детей методом ПЦР в режиме реального времени (ЭНТЕРОФЛОР® Дети), далее по тексту - набор реагентов. 1.2 Назначение: Набор реагентов предназначен для определения ДНК кишечно ассоциированных микроорганизмов (отделы Firmicutes, Proteobacteria, Bacteroidetes^ Actinobacteria, Fusobacteria, Verrucomicrobia, Euryarchaeota), в том числе грибов рода Candida, а также гена метициллинрезистентности Staphylococcus spp. (mecA), Cl.difficile с генами энтеротоксинов А и В (tcdA, tcdB), Str.agalactiae с геном инвазивности (srr2) методом ПЦР в режиме реального времени в препаратах ДНК, полученных из образцов кала детей, с целью определения качественного состава и количественной оценки микробиоты толстого кишечника. 1.3 Функциональное назначение: диагностика in vitro. 1.4 Показания к проведению исследования: необходимость определения качественного состава и количественной оценки микробиоты толстого кишечника в ходе проведения лечебно-диагностических мероприятий. Исследование рекомендовано проводить не ранее, чем через два дня после окончания приёма энтеросорбентов, про- и пребиотиков. Противопоказаний к применению нет. 1.5 Популяционные и демографические аспекты: целевая группа пациентов - дети до 14 лет. 1.6 Область применения: набор реагентов может быть использован в клинико- диагностических лабораториях медицинских учреждений. 1.7 Потенциальные пользователи: квалифицированный персонал, обученный методам молекулярной диагностики и правилам работы в клинико-диагностической лаборатории. 1.8 Применять набор реагентов строго по назначению согласно данной инструкции по применению. --- стр. 4 --- ДНК ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Л и с т 4 ЭНТЕРОФЛОР® Дети Л и с т о в 39 2 ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ Набор реагентов ЭНТЕРОФЛОР® Дети выпускается в стандартной фасовке (маркируется «Фасовка S, стрипы») и в фасовке для автоматизированного дозирования (маркируется «Фасовка А»). 2.1 Состав набора реагентов R1-P815-S3/6, фасовка S, стрипы Наименование компонентов Внешний вид Количество пробирок Номинальный объём компонента Смеси для амплификации, запечатанные парафином. Стрип № 1 Прозрачная бесцветная или голубая жидкость под белым воскообразным слоем 12 стрипов по 8 пробирок по 20 мкл Смеси для амплификации, запечатанные парафином. Стрип № 2 Прозрачная бесцветная или голубая жидкость под белым воскообразным слоем 12 стрипов по 8 пробирок по 20 мкл Раствор Taq-полимеразы Прозрачная бесцветная жидкость 4 пробирки по 500 мкл Минеральное масло Прозрачная бесцветная вязкая маслянистая жидкость 4 пробирки по 1,0 мл Положительный контрольный образец Прозрачная бесцветная жидкость 1 пробирка 320 мкл Крышки для Стрипов 24 шт. 1 ^ R1-P815-XA/5, фасовка А Наименование компонентов Внешний вид Количество пробирок Номинальный объём компонента Смеси для амплификации Стрим Прозрачная голубая или светло- розовая жидкость 2 стрипа по 8 пробирок по 120 мкл ПЦР-буфер Стрим-К Прозрачная бесцветная жидкость 2 пробирки по 600 мкл Полимераза TexHoTaq МАХ Прозрачная бесцветная жидкость 2 пробирки по 60 мкл Буфер для разведения ДНК Прозрачная бесцветная жидкость 4 пробирки по 1,0 мл Положительный контрольный образец Прозрачная бесцветная жидкость 2 пробирки 100 мкл Стрипы по 8 пробирок 10 шт. Крышки для стрипов 2 шт. Все компоненты набора реагентов готовы к применению и не требуют дополнительной подготовки к работе. --- стр. 5 --- ^^ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Л и с т 5 ЭНТЕРОФЛОР»® Дети Л и с т о в 39 'I 2.2 Количество анализируемых образцов Набор реагентов предназначен для однократного применения и рассчитан на 12 определений для фасовки S и 24 определения для фасовки А (одна постановка на 24 образца или две постановки по 12 образцов), включая анализ неизвестных образцов, положительных контрольных образцов и отрицательных контрольных образцов. 2.3 Принцип метода Метод: Полимеразная цепная реакция (ПЦР) с детекцией результатов в режиме реального времени; количественный мультиплексный анализ. Результат исследования выражен десятичным логарифмом количества геном-эквивалентов микроорганизмов и факторов патогенности или резистентности в 1,0 г клинического материала (кала). П р и н ц и п метода основан на использовании процесса амплификации ДНК с помощью полимеразной цепной реакции. Процесс амплификации заключается в серии повторяющихся циклов температурной денатурации ДНК, отжига праймеров с комплементарными последовательностями и последующей достройкой полинуклеотидных цепей с этих праймеров Taq-полимеразой. Для повыщения чувствительности и специфичности реакции предусмотрено применение «горячего» старта. Для фасовки S «горячий» старт обеспечивается методикой приготовления реакционной смеси, состоящей из двух слоёв, разделённых прослойкой из парафина. Смешение слоёв и превращение их в амплификационную смесь происходит только после плавления парафина. «Горячий» старт для фасовки А обеспечивается использованием полимеразы, активность которой блокирована антителами, активация фермента происходит только после предварительного прогрева реакционной смеси при 94 ®С в течение 5 минут. Наличие «горячего старта» исключает неспецифический отжиг праймеров на ДНК-мишени при начальном прогреве пробирки. В смеси для амплификации введены ДНК-зонды, каждый из которых содержит флуоресцентную метку и гаситель флуоресценции. При образовании специфичного продукта ДНК-зонд разрушается, действие гасителя на флуоресцентную метку прекращается, что ведёт к возрастанию уровня флуоресценции, который фиксируется детектирующим амплификатором. Количество разрушенных зондов (а, следовательно, и уровень флуоресценции) увеличивается пропорционально количеству образовавшихся специфических ампликонов. Уровень флуоресценции измеряется на каждом цикле амплификации. В состав ДНК-зондов, использующихся для детекции продуктов амплификации фрагментов геномов определяемых микроорганизмов, включены флуоресцентные метки Fam, Rox и Су5. --- стр. 6 --- 'I i ^ ДНК-ТЕХНОЛОГНЯ Инструкция по применению Л и с т 6 ЭНТЕРОФЛОР® Дети Л и с т о в 39 в наборе реагентов в состав всех смесей для амплификации добавлен внутренний контроль (ВК), предназначенный для оценки качества прохождения полимеразной цепной реакции. В состав ДНК-зонда, использующегося для детекции продукта амплификации внутреннего контрольного образца (ВК), входит флуоресцентный краситель Hex. Использование нескольких флуоресцентных красителей позволяет сократить количество пробирок, поскольку появляется возможность одновременно регистрировать результаты разных реакций амплификации, проходящих в одной пробирке. В состав смеси для амплификации в пробирке № 1 стрипа 1 (канал Fam) входит смесь для определения значения Ig ОБМ, которое позволяет установить, достаточно ли полученного количества ДНК для проведения анализа. Для контроля расположения стрипа в термоблоке детектирующего амплификатора, в смеси Щ1Я амплификации пробирки № 1 стрипа 1 и пробирки № 2 стрипа 2 добавлен олигонуклеотид с флуоресцентной меткой Rox - «Маркер». Он используется прибором как маркер определения положения стрипа в термоблоке детектирующего амплификатора. После прохождения амплификации программа сравнивает заданное оператором расположение пробирок с реальным положением маркера, и, если находит несовпадение, то предупреждает оператора об этом несоответствии. Перечень показателей, определяемых набором реагентов, каналы детекции продуктов амплификации и цветовая маркировка смесей приведены в таблице 1. --- стр. 7 --- ^ ЛНКТЕХНОЛОГИЯ Инструкция no применению Л и с т 7 ЭНТЕРОФЛОР® Дети Л и с т о в 39 Таблица 1- Выявляемые показатели, цветовая маркировка и каналы детекции продуктов амплификации Тип стрипа № пробирки в стрипе Канал детекции Цветовая маркировка смесиFam Hex Rox Cy5 Sв S у OEM BK Маркер Candida spp. Голубая 2 Bacteroides spp. BK Lactococcus lactis Bifidobacterium spp. Бесцветная (фасовка S)/ светло- розовая (фасовка А) 3 Faecalibacterium prausnitzii BK Bif.adolescentis Dialister spp./ Allisonella spp./ Megaspherae зррУ Veillonella spp. 4 Methanobrevibacter spp. BK Bif. longum subsp.infantis Parabacteroides spp. 5 Akkermansia muciniphila BK Bif. longum sdosp.longum Butyricimonas spp. 6 Desulfovibrio spp. BK B i f . b i f i d u m Coriobacteriia 7 Clostridium Upturn gr. BK Candida albicans Lactobacillaceae 8 Lachnospiraceae BK Bif. catenulatum subspp. Clostridium difficile gr. (N яS эу 1 - BK Enterococcus spp. Erysipelotrichaceae 2 E.coli BK Маркер Enterobacterales Голубая 3 Peptoniphilaceae BK Bif. animalis subsp. lactis Pseudomonas spp. Бесцветная (фасовка S)/ светло- розовая (фасовка А) 4 Alistipes spp. BK Bif.dentium Fusobacteriaceae 5 Prevotella spp. BK Bif.breve Clostridium perfringens gf- 6 Str. agalactiae BK srr2 Streptococcus spp. 7 St. aureus BK mecA Staphylococcus spp. 8 tcdA, tcdB BK - Clostridioides difficile* о В пробирках со смесями для амплификации фасовки S присутствует парафин * На основании молекулярно-биологического филогенетического анализа и фенотипических данных к 2015 году пересмотрена структура рода Clostridium, создан в том числе новый ^on.Clostridioides, и Clostridium difficile перенесена в него как Clostridioides difficile. (Lawson Р.А., Citron D.M., Tyrrell K.L., Finegold S.M. Reclassification of Clostridium difficile as Clostridioides difficile (Hall and O’Toole 1935)Prevot \9Ъ%. Anaerobe. 2016;40:95-99. doi: 10.1016/j.anaerobe.2016.06.008.) --- стр. 8 --- ^ ДНКТЕХНОЛОГИЯ I Инструкция по применению Л и с т 8 ЭНТЕРОФЛОР® Дети Л и с т о в 39 Определение десятичного логарифма (Ig) концентрации (количество копий ДНК- мишени в 1,0 мл препарата ДНК) проводится с использованием метода сравнения пороговых циклов, также называемым методом AACt. Преимуществом метода AACt является более точное определение соотношения количества ДНК-мишеней даже в условиях субоптимальной эффективности ПЦР без необходимости построения калибровочной кривой (Shefe J. Н. Quantitative real-time RT-PCR data analysis: current concepts and thenovel «gene expression’s Ct difference» formula [Text] / J. H. Shefe, K. E. Lehmann, 1. R. Buschmann, T. Unger, H. Fimke-Kaiser//J. Mol. Med. -2006. -Vol. 84. - P. 901-910 [DOI 10.1007/s00109-006-0097-6]). В расчёте учитывается значения порогового цикла (Ct) и эффективности амплификации. Пороговый цикл - это точка на оси абсцисс графика накопления продуктов в зависимости от номера цикла амплификации. Для нахождения порогового цикла используют метод Crossing point - определение максимума второй производной (Ср) (Ребриков и др., 2014). Эффективность ПЦР - это число, показывающее, во сколько раз за один цикл амплификации изменится количество фрагментов ДНК. Расчет проводится согласно формуле: LogiNOs) = LogiE) х (Ср - Сра), (1) где NOa - исходное количество копий ДНК-мишени в 1,0 мл препарата ДНК исследуемого образца; Е - эффективность ПЦР; Ср - пороговый цикл для образца, содержащего единственную молекулу ДНК; Сра - пороговый цикл ДЛЯ анализируемого образца. Значения Е и Ср являются константами, примерно равными 2 и 45 соответственно. При максимальном значении эффективности ПЦР, равном 2, и при наличии выявляемой ДНК в исследуемом образце количество целевого ампликона увеличивается в 10 раз (на llg) за 3,4 цикла амплификации. Точное значение этих параметров указывается с учётом копийности соответствующей мишени для каждого набора праймеров и зондов в программном обеспечении детектирующего амплификатора (см. Приложение В к Инструкции по применению). Полное исследование состоит из следующих этапов: выделение ДНК (пробоподготовка) и ПЦР-амплификация с использованием набора реагентов ЭНТЕРОФЛОР® Дети. 2.4 Время проведения анализа (без учета пробоподготовки): от 1,5 часов. --- стр. 9 --- ^ ^ ДНКТЕХНОЛОГИЯ k I Инструкция no применению Л и с т 9 ЭНТЕРОФЛОР® Дети Л и с т о в 39 3 АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1 Специфичность анализа В образцах исследуемого материала, содержащего ДНК выявляемых аналитов, во время проведения амплификации программное обеспечение детектирующего амплификатора регистрирует экспоненциальный рост уровня флуоресценции в соответствующей пробирке по заявленным каналам детекции. В образцах исследуемого материала, не содержащего ДНК выявляемых аналитов, при проведении амплификации экспоненциальный рост уровня флуоресценции в соответствующей пробирке по заявленным каналам детекции отсутствует или ниже фонового значения, но присутствует для внутреннего контроля (ВК) по каналу Hex. Подтверждение аналитической специфичности набора реагентов проводилось на образцах ДНК из культур заявленных микроорганизмов, а также ДНК из культур близкородственных или потенциально присутствующих в клиническом образце в высокой концентрации (10^° КОЭ/мл) микроорганизмов: Alistipes flnegoldii, Alistipes ihumii, Allisonella histaminiformans, Anaerococcus spp., Anaerostipes hadrus, Anaerotruncus colihominis, Bacteroides ovatus, Clostridioides difficile N1, Clostridioides difficile N2, Clostridium hathewayi, Clostridium methylpentosum, Clostridium paraputrificum, Collinsella aerofaciens, Collinsella bouchesdurhonensis, Coprobacter fastidiosus, Coprococcus comes, Desulfovibrio piger, Dialister spp., Dorea formicigenerans, Dorea longicatena, Dorea spp., Drancourtella massiliensis, Eggerthella lenta, Eisenbergiella tayi, Enterocloster aldensis, Lactococcus lactis, Faecalibacterium prausnitzii, Fusobacterium mortiferum, Fusobacterium nucleatum, Fusobacterium ulcerans, Peptostreptococcus anaerobius, Anaerococcus vaginalis, Eubacterium limosum, Clostridium clostridioforme, Clostridium symbiosum, Bilophila wadsworthia, Sutterella massiliensis, Pseudomonas aeruginosa, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Campylobacter jejuni, Prevotella sp, Prevotella stercorea, Prevotella copri, Phascolarctobacterium faecium, Raoultibacter massiliensis, Ruminococcus gnavus, Ruminococcus spp., Slackia piriformis, Staphylococcus caprae, Sutterella wadsworthensis, Bacteroides jragilis, Bacteroides intestinalis, Bacteroides vulgatus, Parabacteroides merdae, Alistipes onderdonkii, Akkermansia muciniphila, Catenibacterium mitsuokai, Eubacterium biforme, Lactobacillus salivarius, Aerococcus viridans. Enterococcus faecium. Enterococcus faecalis. Staphylococcus saprophyticus, Streptococcus oralis. Streptococcus pneumonia, Streptococcus pyogenes. Streptococcus agalactiae N1, Streptococcus agalactiae N2, Butyricimonas virosa, Dialister invisus, Atopobium vaginae, Gordonibacter pamelaeae, Gordonibacter urolithinfaciens, Intestinimonas massiliensis, Megasphaera cerevisiae, Megasphaera spp., Methanobrevibacter smithii, Methanosphaera stadtmanae, Olsenella spp., Parabacteroides goldsteinii, Parasutterella --- стр. 10 --- ^ ДНК ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Л и с т 10 ЭНТЕРОФЛОР® Дети Л и с т о в 39 excrementihominis, Blautia coccoides, Ruminococcus obeum, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium longum subsp. longum, Bifidobacterium longum subsp. infantis, Bifidobacterium adolescentis, Bifidobacterium animalis subsp. lactis, Bifidobacterium dentium, Bifidobacteriumpseudocatenulatum. Bifidobacterium catenulatum. Bifidobacterium bifidum, Blautia wexlerae, Escherichia coli, Gardnerella vaginalis. Staphylococcus aureus (c геном метициллинрезистентности mecA), Staphylococcus aureus (без гена метициллинрезистентности mecA), Neisseria fiava. Neisseria sicca, Neisseria gonorrhoeae, Haemophilus influenzae^ Rotavirus, Norovirus, Astrovirus, Enterovirus, Meyerozyma guilliermondii, Candida albicans, Pichia kudriavzevii, Saccharomyces cerevisiae, Candida auris, Candida tropicalis, Clavispora lusitaniae, Debaryomyces hansenii, Candida dubliniensis, Candida glabrata, Candida parapsilosis, Malassezia spp., Malassezia furfur, Kluyveromyces marxianus, и/или ДНК человека в концентрации до 1,0x10^ копий/мл образца. Показано отсутствие перекрестных неспецифических реакций для каждой специфической системы, входящей в состав набора реагентов, к аналитам, выявляемым другими специфическими системами набора реагентов, а также неспецифических положительных результатов амплификации при наличии в образцах ДНК других микроорганизмов и/или ДНК человека в концентрации до 1,0x10* копий/мл образца. 3.2 Интерферирующие вещества Наличие ингибиторов ПЦР в образце биологического материала может быть причиной сомнительных (неопределённых) результатов. Признаком полного ингибирования ПЦР является одновременное отсутствие амплификации внутреннего контроля и специфического продукта (см. 2.3, 9.3). К ингибиторам ПЦР, источником которых может являться образец нуклеиновой ^ кислоты, отнесены следующие вещества: гемоглобин, билирубин, холестерин, триглицериды, слизь (муцин) и лекарственные препараты, оставшиеся в образце ДНК в результате неполного их удаления в ходе вьщеления ДНК из образца биоматериала, а также изопропиловый спирт и метилацетат, которые могут присутствовать в образце ДНК в результате неполного удаления промывочных растворов в ходе пробоподготовки. Максимальные концентрации интерферирующих веществ, при которых не наблюдалось ингибирование ПЦР, представлены в таблице ниже. --- стр. 12 --- ^ ДНК ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Л и с т 12 ЭНТЕРОФЛОР® Дети Л и с то в 39 Название аналита Пределы обнаружения (копий в амлификационной пробирке) Пределы обнаружения (копий в 1 мл выделенной ДНК) Пределы обнаружения (копий в 1 г кала) B i f . l o n g u m subsp./л/ал/к 25 5x10^3 1,5x10^5 P a r a b a c t e r o i d e s spp. 25 5x10^3 1,5х1(Г5 A k k e r m a n s i a m u c i n i p h i l a 25 5x10^3 1,5x10^5 B i f . l o n g u m subsp. l o n g u m 25 5x10^3 1,5x10^5 B u t y r i c i m o n a s spp. 25 5x10^3 1,5x10^5 D e s u l f o v i b r i o spp. 25 5x10^3 1,5x10^5 B i f b i f i d u m 25 5x10^3 1,5x10^5 C o r i o b a c t e r i i a 25 5x10^3 1,5x10^5 C l o s t r i d i u m l e p t u m g r . 25 5x10^3 1,5x10^5 C a n d i d a a l b i c a n s 25 5x10^3 1,5x10^5 L a c t o b a c i l l a c e a e 25 5x10^3 1,5x10^5 L a c h n o s p i r a c e a e 25 5x10^3 1,5x10^5 B i f . c a t e n u l a t u m subspp. 25 5x10^3 1,5x10^5 C l o s t r i d i u m d i f f i c i l e gr. 25 5x10^3 1,5x10^5 E n t e r o c o c c u s spp. 25 5x10^3 1,5x10^5 E r y s i p e l o t r i c h a c e a e 25 5x10^3 1,5х1(Г5 E . c o l i 25 5x10^3 1,5x10^5 E n t e r o b a t e r a l e s 25 5x10^3 1,5x10^5 P e p t o n i p h i l a c e a e 25 5х1(ГЗ 1,5х1(Г5 B i f . a n i m a l i s subsp. l a c i i s 25 5x10^3 1,5х1(Г5 P s e u d o m o n a s spp. 25 5x10^3 1,5х1(Г5 A l i s t i p e s spp. 25 5x10^3 1,5х1(Г5 B i f . d e n t i u m 25 5х10''3 1,5x10^5 F u s o b a c t e r i a c e a e 25 5х1СГЗ 1,5х1СГ5 P r e v o t e l l a spp. 25 5x10^3 1,5x10^5 B i f . b r e v e 25 5хИГЗ 1,5x10^5 C l o s t r i d i u m p e r f r i n g e n s gr. 25 5x1 (ГЗ 1,5x10^5 S t r . a g a l a c t i a e 25 5х1(КЗ 1,5x10^5 srr2 25 5x10^3 1,5х1СГ5 S t r e p t o c o c c u s spp. 25 5x10^3 1,5x10^5 S t . a u r e u s 25 5х1СГЗ 1,5x10^5 mecA 25 5x10^3 1,5x10^5 S t a p h y l o c o c c u s spp. 25 5x10^3 1,5x10^5 tcdA, tcdB 25 5x10^3 1,5x10^5 C l o s t r i d i o i d e s d i f f i c i l e 25 5x10^3 1,5x10^5 предел обнаружения зависит от используемого комплекта/набора реагентов для вьщеления ДНК и конечного объёма элюции (разведения) вьщеленной ДНК. Указанные значения пределов обнаружения набора реагентов ЭНТЕРОФЛОР® Дети для культур микроорганизмов получены при выделении ДНК рекомендуемым набором реагентов для выделения нуклеиновых кислот ПРОБА-МЧ МАКС производства ООО «ДНК-Технология ТС» (объём элюции 300 мкл) и с использованием комплекта ПРОБА-НК-ПЛЮС производства ООО --- стр. 13 --- ^ ^ ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Л и с т 13 ЭНТЕРОФЛОР® Дети Л и с т о в 39 «НПО ДНК-Технология» (объём элюции 300 мкл) с предобработкой набором реагентов ПРОБА-Л производства ООО «ДНК-Технология ТС». 3.4 Диапазон измерения от 10^ до 10*^ КОЕ/г, что соответствует от 5 до 12 Ig ГЭ/г’. Значения ниже 5 Ig ГЭ/г учитываются как положительный качественный результат исследования («обнаружено»). 3.5 Коэффициент вариации результатов (%CV) - не более 20%. 3.6 Метрологическая прослеживаемость К набору реагентов применяются требования метрологической прослеживаемости контрольных образцов (п.5.7 ГОСТ ISO 17511-2011). Для прослеживаемости концентрации в положительном контрольном образце используется метод МакФарланда (McFarland). При проведении конечным потребителем рутинной методики определения концентрации ДНК каждого аналита в положительном контрольном образце значения Ig должны находиться в интервале 5,0 - 7,0 Ig ГЭ/г. Неопределённость измерения составляет 0,4. 3.7 Диагностические характеристики Показатель Диагностические характеристики Диагностическая чувствительность (%) Диагностическая специфичность (%) A k k e r m a n s i a m u c i n i p h i l a 100% (95,26 - 100) 100% (96,61 -100) A l i s t i p e s spp. 100% (95.80- 100) 100% (96,27 - 100) B a c t e r o i d e s spp. 100% (97,16-100) 100% (93,5!-100) B i f i d o b a c t e r i u m a d o l e s c e n t i s 100% (93.84 - 100) 100% (97,07-100) B i f i d o b a c t e r i u m a n i m a l i s subsp. l a c t i s 100% (94,40 - 100) 100% (96,95 - 100) B i f i d o b a c t e r i u m b i f i d u m 100% (95.44-100) 100% (96.52- 100) B i f i d o b a c t e r i u m b r e v e 100% (94.04 - 100) 100% (97.05 - 100) B i f i d o b a c t e r i u m c a t e n u l a t u m subspp. 100% (92,45 - 100) 100% (97,32 - 100) B i f i d o b a c t e r i u m d e n t i u m 100% (93,40 - 100) 100% (97,18-100) B i f i d o b a c t e r i u m l o n g u m subsp. infantis 100% (87,66- 100) 100% (97,65 - 100) B i f i d o b a c t e r i u m l o n g u m subsp. l o n g u m 100% (96,34 - 100) 100% (95,70- 100) B i f i d o b a c t e r i u m spp. 100% (97,79-100) 100% (81.47-100) B u t v r i c i m o n a s spp. 100% (97,20-100) 100% (93,28- 100) C a n d i d a a l b i c a n s 100% (66,37-100) 100% (97.90 - 100) C a n d i d a spp. 100% (94,87- 100) 100% (96,79 - 100) C l o s t r i d i o i d e s d i f f i c i l e 100% (84,56-100) 100% (97,73 - 100) C l o s t r i d i u m d i f f i c i l e fir 100% (97,63- 100) 89.66% (72,65-97,81) C l o s t r i d i u m l e p t u m er. 100% (97,36-100) 100% (92,13- 100) C l o s t r i d i u m p e r f f i n g e n s gr. 100% (96,11-100) 100% (95,98- 100) C o r i o b a c t e r i i a 100% (97,26-100) 100% (92,89-100) ( I ^ Для раапичных видов бактерий максимальные концентрации культур, накопленных в чистом виде, не превышают 10^-10'^ в мл.(Ефимов В.В. Научно-методологические подходы к использованию электрокинетических свойств бактерий для индикации госпитальных штаммов // Фундаментальные исследования. -2 012. -№ 8-1. - С. 68-72) --- стр. 14 --- ^ ^ ДНКТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению ЭНТЕРОФЛОР® Дети Л и с т 14 Л и с т о в 39 Показатель Диагностические характеристики Диагностическая чувствительность (%) Диагностическая специфичность (%) D e s u l f o v i b r i o spp. 100% (95.94- 100) 100% (96,15- 100) Е . c o l i 100% (97,38- 100) 100% (91,96- 100) E n t e r o b a t e r a l e s 100% (97.72- 100) 100% (85.18- 100) E n t e r o c o c c u s spp. 100% (97,71 - 100) 100% (85,75- 100) E r y s i p e l o t r i c h a c e a e 100% (97.49- 100) 100% (90.75- 100) F a e c a l i b a c t e r i u m p r a u s n i t z i i 100% (96.76-100) 100% (94,94- 100) F u s o b a c t e r i a c e a e 100% (90.26-100) 100% (97.52- 100) L a c h n o s p i r a c e a e 100% (97,18-100) 100% (93,40- 100) L a c t o b a c i l l a c e a e 100% (97.49- 100) 100% (90,75- 100) L a c t o c o c c u s l a c t i s 100% (96.41- 100) 100% (95,60- 100) mecA 100% (91,96-100) 100% (97,38- 100) D i a l i s t e r s ^ ^ J A l l i s o n e l l a spp./ M e z a s p h e r a e spp./ V e i l l o n e l l a spp. 100% (97,52- 100) 94,44% (81,34-99,32) M e t h a n o b r e v i b a c t e r spp. 100% (83,16- 100) 100% (97.76 - 100) P a r a b a c t e r o i d e s spp. 100% (96,76- 100) 100% (94,94 - 100) P e p t o n i p h i l a c e a e 100% (95,80- 100) 100% (96,27- 100) P r e v o t e l l a spp. 100% (96.15- 100) 100% (95,94- 100) P s e u d o m o n a s spp. 100% (89.42- 100) 100% (97,57- 100) srr2 100% (59.04- 100) 100% (97,93- 100) S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s 100% (93,02- 100) 100% (97,24- 100) S t a p h y l o c o c c u s spp. 100% (96,58- 100) 100% (95,32- 100) S t r e p t o c o c c u s a g a l a c t i a e 100% (92,13- 100) 100% (97,36- 100) S t r e p t o c o c c u s spp. 100% (97,90- 100) 100% (66,37- 100) tcdA tcdB 100% (69,15- 100) 100% (97,89-100) II 3.8 Внутрисерийная и межсерийная воспроизводимость Совпадение результатов исследования клинических образцов Выявляемый показатель Внутрнсеонйная воспроизводимость Межсерийная воспроизводимость Стандартное отклонение (не более) Коэффициент вариации (не более), % Стандартное отклонение (не более) Коэффициент вариации (не более), % ОБМ 0,21 2 0,28 3 A k k e r m a n s i a m u c i n i p h i l a 0,14 2 0,28 4 A l i s t i p e s spp. 0,21 3 0,35 5 B a c t e r o i d e s spp. 0,21 3 0,28 3 B i f i d o b a c t e r i u m a d o l e s c e n t i s 0,28 4 0,42 4 B i f i d o b a c t e r i u m a n i m a l i s subsp. l a c t i s 0,28 3 0,21 2 B i f i d o b a c t e r i u m b i f i d u m 0,28 3 0,21 3 B i f i d o b a c t e r i u m b r e v e 0.28 7 0,35 7 B i f i d o b a c t e r i u m c a t e n u l a t u m subspp. 0,28 3 0,42 7 B i f i d o b a c t e r i u m d e n t i u m 0.14 3 0,28 4 B i f i d o b a c t e r i u m l o n g u m subsp. infantis 0,21 4 0,28 4 B i f i d o b a c t e r i u m l o n g u m subsp. l o n g u m 0,21 2 0,35 4 B i f i d o b a c t e r i u m spp. 0,28 3 0,35 4 B u t y r i c i m o n a s spp. 0,21 3 0.35 5 C a n d i d a a l b i c a n s 0,14 3 0.14 2 C a n d i d a spp. 0,28 5 0.14 2 C l o s t r i d i o i d e s d i f f i c i l e 0,14 2 0,21 4 C l o s t r i d i u m d i f f i c i l e gr 0,28 7 0,21 3 --- стр. 15 --- ^ ^ ДНК-ТЕХНОЛОГМЯ Инструкция по применению Л и с т 15 ЭНТЕРОФЛОР® Дети Л и с т о в 39 Внугрисерийная воспроизводимость Межсерийная воспроизводимость Выявляемый показатель Стандартное Коэффициент Стандартное Коэффициент отклонение вариации отклонение вариации Сне более) Сне более), % Сне более) Сне более), % C l o s t r i d i u m l e p t u m gr. 0,21 4 0,35 4 C l o s t r i d i u m p e r f r i m e n s gr. 0,21 3 0,35 5 C o r i o b a c t e r i i a 0,21 3 0.35 4 D e s u l f o v i b r i o spp. 0,14 2 0.28 5 E . c o l i 0,14 3 0,28 3 E n t e r o b a t e r a l e s 0,21 3 0,49 6 E n t e r o c o c c u s spp. 0.14 3 0,35 5 E r y s i p e l o t r i c h a c e a e 0.21 3 0,28 4 F a e c a l i b a c t e r i u m p r a u s n i t z i i 0,28 3 0,28 4 F u s o b a c t e r i a c e a e 0,21 3 0,28 4 L a c h n o s p i r a c e a e 0,28 3 0,21 2 L a c t o b a c i l l a c e a e 0.21 4 0,57 8 L a c t o c o c c u s l a c t i s 0,21 4 0,49 6 mecA 0,14 3 0,21 4 D i a l i s t e r s ’ p ^ J A l l i s o n e l l a spp./ 0,21 0,28 M e g a s p h e r a e spp./ V e i l l o n e l l a spp. 4 M e t h a n o b r e v i b a c t e r spp. 0,14 2 0,35 4 P a r a b a c t e r o i d e s spp. 0,42 5 0,49 6 P e p t o n i p h i l a c e a e 0,21 4 0,14 3 P r e v o t e l l a spp. 0,28 4 0,42 5 P s e u d o m o n a s spp. 0,21 4 0,35 7 srr2 0,21 5 0.21 5 S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s 0,14 3 0.28 4 S t a p h y l o c o c c u s spp. 0,21 4 0,28 5 S t r e p t o c o c c u s a g a l a c t i a e 0,21 5 0.78 10 S t r e p t o c o c c u s spp. 0,35 4 0,42 5 tcdA tcdB 0,14 3 0,14 2 'I --- стр. 21 --- ^ ДНКТЕХНОЛОГНЯ Инструкция по применению Л и с т 21 ЭНТЕРОФЛОР® Дети Л и с т о в 39 7 ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА 7.1 Выделение ДНК из исследуемого материала Для выделения ДНК рекомендуется использовать набор реагентов ПРОБА- МЧ МАКС производства ООО «ДНК-Технология ТС» или комплект ПРОБА-НК-ПЛЮС производства ООО «НПО ДНК-Технология» (объём элюции 300 мкл) с обязательной предобработкой набором реагентов ПРОБА-Л производства ООО «ДНК-Технология ТС». Выделение ДНК из исследуемого материала проводят в соответствии с инструкцией к используемому комплекту/набору реагентов. Контроль качества выделенной ДНК осуществляется в ходе ПЦР с помощью системы внутреннего контроля (ВК) (п. 9). ВНИМАНИЕ! Одновременно с выделением ДНК из исследуемого материала необходимо подготовить отрицательный контрольный образец, прошедший все этапы пробоподготовки. В качестве отрицательного контрольного образца рекомендуется использовать физиологический раствор или отрицательный контрольный образец, входящий в состав соответствующего комплекта реагентов, в объёме, указанном в инструкции к комплекту/набору реагентов для выделения нуклеиновых кислот. 7.2 Подготовка и проведение ПЦР. ВНИМАНИЕ! При проведении всех последующих действий следует избегать воздействия прямых солнечных лучей на пробирки со смесями для амплификации! ВНИМАНИЕ! При использовании набора реагентов в варианте исполнения «Фасовка S, Стрипы», строго соблюдать комплектность стрипов и крыщек к ним. Не использовать крыщки к Стрипам из других наборов реагентов! 7.2.1 Фасовка S: Промаркируйте по одному стрипу №1 и по одному стрипу №2 со смесями для амплификации, запечатанными парафином, для каждого исследуемого образца, отрицательного контрольного образца «К-» и положительного контрольного образца «К+». Пример: Необходимо проанализировать два образца. Для этого необходимо промаркировать четыре стрипа №1 и четыре стрипа №2 (всего 8 стрипов): по одному стрипу №1 и №2 для каждого из двух исследуемых образцов, один стрип №1 и один стрип №2 для «К-» и один стрип №1 и один стрип №2 для «К+». (таблица 3). --- стр. 22 --- ,;^днктЕхнология Инструкция по применению Л и с т 22 ЭНТЕРОФЛОР»® Дети Л и с т о в 39 ■ • Таблица 3 - Пример маркировки стрипов и пробирок для проведения ПЦР Образцы № стрипа Идентификатор стрипа Образец 1 1 «стрип №1» 2 «стрип №2» Образец 2 3 «стрип Х 2 1» 4 «стрип №2» К- 5 «стрип №1» 6 «стрип №2» К+ 7 «стрип № 1» 8 «стрип №2» 7.2.2 Встряхните пробирку с раствором Taq-полимеразы в течение 3-5 с на микроцентрифуге- вортексе и центрифугируйте в течение 1-3 с на микроцентрифуге-вортексе. 7.2.3 Добавьте в каждую пробирку промаркированных стрипов, не повреждая слой парафина, по 10 мкл раствора Taq-полимеразы. 7.2.4 Добавьте в каждую пробирку стрипов по одной капле (около 20 мкл) минерального масла. 7.2.5 Встряхните пробирки с препаратом ДНК, отрицательным контрольным образцом и положительным контрольным образцом в течение 3-5 с на микроцентрифуге-вортексе и центрифугируйте в течение 1-3 с на микроцентрифуге-вортексе. ВНИМАНИЕ! 1. При использовании для выделения ДНК набора реагентов ПРОБА-МЧ МАКС необходимо после встряхивания поместить пробирки с препаратом ДНК в магнитный штатив. В случае если после выделения надосадочная жидкость, содержащая выделенную ДНК, была перенесена в новые пробирки, центрифугирование производится в течение 3-5 с на микроцентрифуге-вортексе. 2. Для предотвращения контаминации следует перед внесением ДНК открывать крышки только тех стрипов, в которые будет вноситься данный образец, и закрывать их, перед внесением следующего. Закрывайте стрипы плотно. Препараты ДНК и контрольные образцы следует вносить наконечниками с фильтром. 7.2.6 Внесите в каждую пробирку соответствующих промаркированных стрипов, не повреждая слой парафина, по 5,0 мкл выделенного из образца препарата ДНК (кроме стрипов, промаркированных «К+» и «К-»). --- стр. 23 --- Лднк-ТЕХН О ЛО ГИ Я Инструкция по применению Л и с т 23 ЭНТЕРОФЛОР»® Дети Л и с т о в 39 12.1 Внесите в каждую пробирку стрипов, промаркированных «К-», не повреждая слой парафина, по 5,0 мкл отрицательного контрольного образца, прошедшего этап выделения ДНК (п.7.1). 7.2.8 Внесите в каждую пробирку стрипов, промаркированных «К+», не повреждая слой парафина, по 5,0 мкл положительного контрольного образца. 7.2.9 Центрифугируйте все стрипы в течение 1-3 с на микроцентрифуге-вортексе. 7.2.10 Установите все пробирки в блок детектирующего амплификатора. Запустите программное обеспечение RealTime PCR в режиме «Работа с прибором». При первом проведении ПЦР загрузите файл «Enteroflor_Kiddy.ini»’''. Далее и при последующих постановках добавьте в протокол соответствующий тест, укажите количество и идентификаторы образцов, отметьте расположение стрипов на матрице термоблока в соответствии с их установкой и проведите ПЦР с учетом объёма реакционной смеси, равного 35 мкл. При выборе этих тестов в окне «Запуск программы амплификации» должна отображаться программа, приведённая в таблице А.1 (Приложение А). * Примечание: Тест (Enteroflor_Kiddy.ini) для приборов «ДТпрайм», «ДТлайт», «ДТ-96» можно создать путем ввода параметров в соответствии с приложением В, или данный тест предоставляется производителем набора реагентов. 7.3 Фасовка А. Подготовка и проведение реакции полимеразной цепной реакции с использованием дозирующего устройства ДТстрим. ВНИМАНИЕ! При проведении всех последующих действий следует избегать воздействия прямых солнечных лучей на пробирки со смесями для амплификации Стрим! 7.3.1 Тщательно перемешайте на микроцентрифуге-вортексе содержимое пробирок «ПЦР- буфер Стрим-К» и «Полимераза TexHoTaq МАХ» и центрифугируйте в течение 3-5 с на микроцентрифуге-вортексе. Для проведения 24 определений единовременно используется две пробирки с ПЦР-буфером Стрим-К и две пробирки с полимеразой TexHoTaq МАХ. Для проведения 12 определений единовременно используется одна пробирка с ПЦР-буфер Стрим-К и одна пробирка с полимеразой TexHoTaq МАХ. ВНИМАНИЕ! Полимеразу TexHoTaq МАХ необходимо доставать из морозильной камеры непосредственно перед использованием. 7.3.2 При использовании «Базового способа постановки» подготовьте раствор, полимеразы TexHoTaq МАХ и исследуемые образцы ДНК согласно руководству по эксплуатации дозирующего устройства. При использовании «Интегрального способа постановки» --- стр. 24 --- ^ ДНКТЕХНОЛОГНЯ Инструкция по применению Л и с т 24 ЭНТЕРОФЛОР® Дети Л и с т о в 39 предварительной подготовки раствора полимеразы TexHoTaq МАХ и исследуемых образцов ДНК не требуется. 7.3.3 Центрифугируйте стрипы со смесями для амплификации Стрим в течение 1-3 с на микроцентрифуге-вортексе. 7.3.4 Встряхните пробирки с положительным и отрицательным контрольными образцами в течение 3-5 с на микроцентрифуге-вортексе и центрифугируйте в течение 1-3 с на микроцентрифуге-вортексе. 7.3.5 При использовании «Базового способа постановки» установите стрипы со смесями для амплификации Стрим, ориентируясь на цветовую маркировку смеси (первая пробирка Стрип №1 и вторая пробирка Стрип №2 отмечены голубым буфером), пробирки с подготовленным раствором полимеразы ТехноТац МАХ, положительным контрольным образцом и отрицательным контрольным образцом, а также новый микропланшет 384 лунки на рабочий стол ДТстрим. 7.3.6 При использовании «Интегрального способа постановки» установите стрипы со смесями для амплификации Стрим, ориентируясь на цветовую маркировку смеси (первая пробирка Стрип №1 и вторая пробирка Стрип №2 отмечены голубым буфером), пробирки с ПЦР-буфером Стрим-К, полимеразой TexHoTaq МАХ, буфером для разведения ДНК, положительным контрольным образцом и отрицательным контрольным образцом, а также новый микропланшет 384 лунки на рабочий стол ДТстрим. ВНИМАНИЕ! При использовании для выделения ДНК набора реагентов ПРОБА-МЧ МАКС необходимо после встряхивания поместить пробирки с препаратом ДНК в магнитный штатив. В случае если после выделения надосадочная жидкость, содержащая выделенную ДНК, была перенесена в новые пробирки, центрифугирование производится в течение 3-5 с на микроцентрифуге-вортексе. 7.3.7 Установите пробирки с образцами ДНК на рабочий стол ДТстрим в соответствии с выбранным, «базовым» или «интегральным», способом постановки, согласно руководству по эксплуатации дозирующего устройства. 7.3.8 Откройте стрипы со смесями для амплификации Стрим, аккуратно сняв защитную пленку, и проведите дозирование компонентов согласно руководству по эксплуатации. 7.3.9 Поместите аккуратно, не встряхивая, микропланщет 384 лунки в подложку герметизирующего устройства ДТпак после заверщения программы на дозирующем устройстве ДТстрим. 7.3.10 Проведите процедуру запечатывания микропланщет 384 лунки термопленкой согласно --- стр. 25 --- ^ ЛНКТЕХНОЛОГНЯ Инструкция по применению Л и с т 25 ЭНТЕРОФЛОР® Дети Л и с т о в 39 инструкции к прибору ДТпак. 7.3.11 Центрифугируйте микропланшет 384 лунки при 500 х g в течение 30 с. 7.3.12 Поместите микропланшет 384 лунки в блок детектирующего амплификатора. Запустите программное обеспечение RealTime_PCR в режиме «Работа с прибором». При первом проведении ПЦР загрузите файл «EnteroflorKiddy.ini»*. Далее и при последующих постановках добавьте в протокол соответствующий тест и проведите ПЦР с учетом объёма реакционной смеси, равного 12 мкл. При выборе этих тестов в окне «Запуск программы амплификации» должна отображаться программа, приведённая в таблице А2 (Приложение А). * Примечание: Тест (Enteroflor_K.iddy.ini) для приборов «ДТпрайм», «ДТлайт», «ДТ-96» можно создать путем ввода параметров в соответствии с приложением В, или данный тест предоставляется производителем набора реагентов. --- стр. 26 --- ^ ДНКТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Л и с т 26 ЭНТЕРОФЛОР® Дети Л и с т о в 39 8 РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ АМПЛИФИКАЦИИ Регистрация сигнала флуоресценции проводится прибором автоматически во время амплификации. Детекция результатов осуществляется амплификатором детектирующим автоматически. Оформление протокола и анализ результатов проводится в соответствии с инструкцией к прибору. 9 УЧЁТ РЕЗУЛЬТАТОВ РЕАКЦИИ 9.1 9.2 9.3 Учет результатов реакции осуществляется автоматически с помощью программного обеспечения, поставляемого с детектирующим амплификатором. После прохождения амплификации программное обеспечение сравнивает заданное оператором расположение пробирок с реальным положением маркера (флуоресцентной метки Rox), и, если находит несовпадение, то предупреждает оператора об этом. Оператору следует либо расположить данные из каждой отдельной пробирки в соответствующем порядке вручную, либо повторить исследование данного образца, правильно расположив пробирки в термоблоке. При анализе результатов необходимо учитывать значения общей бактериальной массы (ОБМ, пробирка № 1 стрипа 1, канал Fam) и внутреннего контроля (ВК, пробирки № 1- 8 Стрипов 1 и 2, канал Hex): Для контроля качества взятия исследуемого материала, используется показатель ОБМ, который также позволяет определить, достаточно ли полученного количества ДНК для проведения анализа. Значение ОБМ меньще 6,0 Ig следует интерпретировать как недостаточное количество материала. В этом случае рекомендуется повторное выделение ДНК или повторное взятие материала для исследования (выполняется последовательно). Для оценки качества прохождения полимеразной цепной реакции используется ВК (внутренний контроль). Если ВК отсутствует в одной или нескольких пробирках стрипа, при отсутствии специфических положительных результатов в этих пробирках, результат исследования для данного образца считается недостоверным (нд). Недостоверный результат может быть вызван присутствием ингибиторов в препарате нуклеиновых кислот, полученном из клинического материала; ощибками преаналитического этапа, неверным выполнением протокола анализа, несоблюдением температурного режима амплификации и др. В этом случае требуется либо повторная постановка полимеразной цепной реакции, либо повторное выделение препарата нуклеиновых кислот, либо повторное взятие клинического материала (выполняется --- стр. 30 --- ^ ^ ДНКТЕХНОЛОГМЯ Инструкция по применению Л и с т 30 ЭНТЕРОФЛОР® Дети Л и с т о в 39 10 ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ, ХРАНЕНИЕ И ЭКСПЛУАТАЦИЯ 10.1 Транспортирование 10.1.1 Транспортирование набора реагентов осуществляют в термоконтейнерах с хладоэлементами всеми видами крытого транспорта при температуре внутри контейнера, соответствующей условиям хранения компонентов, входящих в состав набора реагентов. 10.1.2 Допускается транспортирование в термоконтейнерах с хладоэлементами при температуре внутри термоконтейнера от 2 °С до 25 °С не более 5 суток. 10.1.3 Наборы реагентов, транспортированные с нарушением температурного режима, применению не подлежат. 10.2 Хранение 10.2.1 Все компоненты набора реагентов, за исключением полимеразы TexHoTaq МАХ, следует хранить в холодильнике или холодильной камере при температуре от 2 ®С до 8 ®С в течение всего срока годности. 10.2.2 Полимеразу TexHoTaq МАХ следует хранить в морозильной камере при температуре от минус 18 °С до минус 22 ®С в течение всего срока годности набора реагентов. 10.2.3 Смеси для амплификации, запечатанные парафином и смеси для амплификации Стрим следует хранить в холодильнике или холодильной камере при температуре от 2 ®С до 8 °С в защищенном от света месте в течение всего срока годности набора реагентов. 10.2.4 Наборы реагентов, хранившиеся с нарушением регламентированного режима, применению не подлежат. 10.3 Указания по эксплуатации 10.3.1 Набор реагентов должен применяться согласно действующей версии утвержденной инструкции по применению. 10.3.2 Для получения достоверных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора реагентов. 10.3.3 После вскрытия упаковки компоненты набора реагентов следует хранить при следующих условиях: - компоненты набора реагентов (за исключением полимеразы TexHoTaq МАХ) следует хранить в холодильнике или холодильной камере при температуре от 2 °С до 8 °С в течение всего срока годности набора реагентов; --- стр. 31 --- ^^^ДНКТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Л и с т 31 ЭНТЕРОФЛОР® Дети Л и с т о в 39 - смеси для амплификации, запечатанные парафином и смеси для амплификации Стрим, следует хранить в холодильнике или холодильной камере при температуре от 2 °С до 8 °С в защищённом от света месте в течение всего срока годности набора реагентов; - полимеразу ТехноТац МАХ следует хранить в морозильной камере при температуре от минус 18 °С до минус 22 ®С в течение всего срока годности набора реагентов. 10.3.4 Наборы реагентов с истекшим сроком годности применению не подлежат. 11 УКАЗАНИЯ ПО УТИЛИЗАЦИИ 11.1 При использовании набора реагентов в клинико-диагностической лаборатории образуются отходы класса В, которые утилизируются в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.3684 и МУ 1.3.2569. 11.2 Наборы реагентов, пришедшие в непригодность, в связи с истечением срока годности, повреждением упаковки подлежат утилизации в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.3684. 12 ГАРАНТИИ ИЗГОТОВИТЕЛЯ 12.1 Предприятие-изготовитель гарантирует соответствие набора реагентов требованиям технических условий при соблюдении условий транспортирования, хранения и эксплуатации, установленных техническими условиями. 12.2 Срок годности набора реагентов - 12 месяцев при соблюдении всех условий транспортирования, хранения и эксплуатации. 13 РЕМОНТ И ТЕХНИЧЕСКОЕ ОБСЛУЖИВАНИЕ Набор реагентов предназначен для однократного использования и не подлежит техническому обслуживанию и текущему ремонту. 14 СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ПРИ МАРКИРОВКЕ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ||УР| Медицинское изделие для диагностики in vitro т Обратитесь к инструкции по применению Температурный диапазон iREFj Каталожный номер V Количество тестов iJ Адрес изготовителя 2 Годен до Не допускается воздействие солнечного света Серия набора реагентов А Нестерильно d Дата изготовления --- стр. 32 --- ^ дик ТЕХНОЛОГИЯ ф Инструкция по применению Л и с т 32 ЭНТЕРОФЛОР® Дети Л и с т о в 39 15 ПЕРЕЧЕНЬ ПРИМЕНЯЕМЫХ НАЦИОНАЛЬНЫХ СТАНДАРТОВ ГОСТ 2.105-2019 ЕСКД Общие требования к текстовым документам. ГОСТ ISO 14971-2011 Изделия медицинские. Применение менеджмента риска к медицинским изделиям. ГОСТ ISO 17511-2011 Изделия медицинские для диагностики in vitro. Измерение величин в биологических пробах. Метрологическая прослеживаемость значений, приписанных калибраторам и контрольным материалам ГОСТ Р 15.013-2016 Система разработки и постановки продукции на производство (СРПП). Медицинские изделия. ГОСТ 15.309-98 Система разработки и постановки продукции на производство. Испытания и приёмка выпускаемой продукции. Основные положения. ГОСТ Р 51088-2013 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Реагенты, наборы реагентов, тест-системы, контрольные материалы, питательные среды. Требования к изделиям и поддерживающей документации. ГОСТ Р 51352-2013 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Методы испытаний. ГОСТ Р ИСО 18113-1-2015 Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация, предоставляемая изготовителем (маркировка). Часть 1. Термины, определения и общие требования. ГОСТ Р ИСО 18113-2-2015 Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация, предоставляемая изготовителем (маркировка). Часть 2. Реагенты для диагностики in vitro для профессионального применения. ГОСТ Р ИСО 23640-2015 Медицинские изделия для диагностики in vitro. Оценка стабильности реагентов для диагностики in vitro. ГОСТ Р ИСО 15223-1-2020 Изделия медицинские. Символы, применяемые при маркировании медицинских изделий, на этикетках и в сопроводительной документации. Часть 1. Основные требования. ГОСТ Р 52905-2007 (ИСО 15190:2003) Лаборатории медицинские. Требования безопасности. Примечание - Указанные выше стандарты были действующими на момент утверждения инструкции по применению. В дальнейшем, при пользовании документа, целесообразно проверить действие ссылочных нормативных документов на текущий момент. Если ссылочный документ заменён или изменён, то при применении настоящего документа следует пользоваться заменённым (изменённым документом). --- стр. 33 --- ^ ДНК ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Л и с т 33 ЭНТЕРОФЛОР® Дети Л и с т о в 39 16 АДРЕС ДЛЯ ОБРАЩЕНИЯ Производство наборов реагентов имеет сертифицированную систему менеджмента качества и соответствует требованиям стандарта систем менеджмента качества ISO 9001 в области разработки, производства и продажи IVD реагентов и приборов для молекулярно генетической диагностики, и другого лабораторного применения, и EN ISO 13485 в области разработки, производства и продажи IVD реагентов и приборов для медицинской молекулярно генетической диагностики. Производитель: Общество с ограниченной ответственностью «ДНК-Технология ТС», ООО «ДНК-Технология ТС» (Общество с ограниченной ответственностью), Россия. Адрес производителя: Россия, 117246, г. Москва, Научный проезд, д. 20, стр.4. Место производства: 1. ООО «НПО ДНК-Технология»: Россия, 142281, Московская обл. г. Протвино, ул. Железнодорожная, д. 20. 2. ООО «ДНК-Технология ТС»: Россия, 117246, г. Москва, Научный проезд, д. 20, стр.4. По вопросам, касающимся качества набора реагентов ЭНТЕРОФЛОР® Дети, следует обращаться в службу клиентской поддержки. Служба клиентской поддержки: 8-800-200-75-15 (для России, звонок бесплатный), +7 (495) 640-16-93 (для стран СНГ и зарубежья, звонок платный). E-mail: hotline@dna-technology.ru , www.dna-technology.ru Старщий научный сотрудник ООО «НПФ ДНК-Технология» СОГЛАСОВАНО Директор ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России академик РАН, профессор Л.В. Огнева « ^ » 2022 г. « » Г.Т. Сухих 0 ^ 2022 г. --- стр. 34 --- ^ дик ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Л и с т 34 ЭНТЕРОФЛОР® Дети Л и с т о в 39 приложение А ПЦР с детекцией в режиме реального времени, программы амплификации Таблица А.1 - Программа амплификации для детектирующих амплификаторов «ДТпрайм *М*», «ДТлайт», R T - 9 6 (d)асовка S) № блока Температура, ®С мин с Число циклов Режим оптических измерений Тип блока 1 80 0 30 1 Цикл94 30 2 94 0 30 5 Цикл 64 0 15 V 3 94 0 10 45 Цикл 64 0 15 V 4 94 0 5 1 Цикл 5 10 Хранение Хранение ч :режим оптических измерении Таблица А.2 - Программа амплификации для детектирующих амплификаторов № блока Температура, ®С мин с Число циклов Режим оптических измерений Тип блока 1 80 0 30 1 Цикл94 5 00 2 94 0 30 5 Цикл 64 0 15 л/ 3 94 0 10 45 Цикл64 0 15 V 4 94 0 5 1 Цикл 5 10 Хранение Хранение Т-режим оптических измерении Примечание - Параметры, которые вводят при создании нового теста (программа амплификации, используемые каналы детекции, объём реакционной смеси и т.п.) в приборах серии ДТ, можно загрузить в виде готового файла с расширением ini (см. Приложение В). --- стр. 35 --- ^*^ДНК-ТЕХНОЛОГНЯ Инструкция по применению Л и с т 35 ЭНТЕРОФЛОР® Дети Л и с т о в 39 приложение Б (справочное) Принципы интерпретации результатов исследования Учет и регистрация проводятся программным обеспечением автоматически. В данном приложении изложены общие принципы интерпретации результатов. Образцы Канал детекции Интерпретация результатаFam, и/или Rox, и/или Су5 Hex Результат (Ig) 1 Значение Ig указано/не указано по одному или нескольким каналам Значение Ig не учитывается Обнаружен/не обнаружен фрагмент ДНК аналита, определяемого по соответствующему каналу детекции'. 2 Значение Ig не указано по всем каналам Значение Ig указано Не обнаружены фрагменты ДНК аналитов, определяемых по соответствующим каналам детекции. 3 Значение Ig не указано по всем каналам Значение Ig не указано Недостоверный результат^ ’ в строке с названием соответствующего аналита будет указан результат исследования (десятичный логарифм количества геном-эквивалентов в 1,0 г кала (1§ГЭ/г)); ^ требуется повторное проведение ПЦР с имеющимся препаратом ДНК, либо повторное выделение ДНК и постановка ПЦР, либо повторное взятие биологического материала (выполняется последовательно). --- стр. 36 --- ^ ДНК ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Л и с т 36 ЭНТЕРОФЛОР® Дети Л и с т о в 39 приложение В (справочное) Параметры исследования, которые необходимо внести в программное обеспечение детектирующего амплификатора (программа RealTime входит в состав детектирующих амплификаторов) 1) «Тип анализа» - выбрать «Мультиплекс Q+»; 2) Указать количество пробирок в тесте - 16; 3) Указать объём реакционной смеси - 35 мкл; 4) В окне «Программа амплификации», ввести следующие параметры: Программа амплификации для детектирующих амплификаторов «ДТпрайм *М*», «ДТлайт», № блока Температура, ®С мин с Число циклов Режим оптических измерений Тип блока 1 80 0 30 1 Цикл94 30 2 94 0 30 5 Цикл64 0 15 V 3 94 0 10 45 Цикл64 0 15 V 4 94 0 5 1 Цикл 5 10 Хранение Хранение № блока Температура, ®С мин с Число циклов Режим оптических измерений ^-------------- Тип блока 1 80 0 30 Цикл 94 5 00 2 94 0 30 5 Цикл 64 0 15 V 3 94 0 10 45 Цикл 64 0 15 л/ 4 94 0 5 Цикл 5 10 Хранение Хранение --- стр. 37 --- ДНК ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Л и с т 37 ЭНТЕРОФЛОР® Дети Л и с т о в 39 5) «Каналы детекции», внести следующие параметры Тип Стрипа № пробирки в Стрипе Канал детекции Fam Hex Rox CyS 5с S э 1 ОБМ BK Маркер C a n d i d a spp. 2 B a c t e r o i d e s spp. BK L a c t o c o c c u s l a c t i s B i f i d o b a c t e r i u m spp. 3 F a e c a l i b a c t e r i u m p r a u s n i t z i i BK B i f . a d o l e s c e n t i s D i a l i s t e r spp./ A l i s o n e l l a spp./ M e g a s p h e r a e sppy V e l l o n e l l a spp. 4 M e t h a n o b r e v i b a c t e r spp. BK B i f . l o n g u m s u h s ^ p . i n f a n t i s P a r a b a c t e r o i d e s s p p . 5 A k k e r m a n s i a m u c i n i p h i l a BK B i f . l o n g u m subsp. l o n g u m B u t y r i c i m o n a s spp. 6 D e s u l f o v i b r i o spp. BK B i f b i f i d u m C o r i o b a c t e r i i a 7 C l o s t r i d i u m l e p t u m gr. BK C a n d i d a a l b i c a n s L a c t o b a c i l l a c e a e 8 L a c h n o s p i r a c e a e BK B i f . c a t e n u l a t u m subspp. C l o s t r i d i u m d i f f i c i l e g r . fN а S е-у 1 - BK E n t e r o c o c c u s s p p . E r y s i p e l o t r i c h a c e a e 2 E . c o l i BK М а р к е р E n t e r o b a c t e r a l e s 3 P e p t o n i p h i l a c e a e BK B i f . a n i m a l i s s u b s p . l a c t i s P s e u d o m o n a s spp. 4 A l i s t i p e s spp. BK B i f d e n t i u m F u s o b a c t e r i a c e a e 5 P r e v o t e l l a spp. BK B i f . b r e v e C l o s t r i d i u m p e r f r i n g e n s g r . 6 S t r . a g a l a c t i a e BK srr2 S t r e p t o c o c c u s spp. 7 S t . a u r e u s BK mecA S t a p h y l o c o c c u s spp. 8 tcdA, tcdB BK - C l o s t r i d i o i d e s d i f f i c i l e --- стр. 38 --- ^ ^ ДНКТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 38 ЭНТЕРОФЛОР® Дети Листов 39 6) «Параметры амплификации», в окне дополнительных настроек внести коэффициенты и минимальные значения логарифма концентраций для каждого аналита № Канал детекции Показатель N-i E_i Min 1/1 Fam ОБМ 44.8 3.4 4.5 1/2 Hex BK 45.2 3.4 - 1/3 Rox Маркер 0 0 - 1/4 Cv5 C a n d i d a spp. 45.0 3.4 4.0 2/1 Fam B a c t e r o i d e s spp. 42.6 3.4 - 2/2 Hex BK 45.2 3.4 - 2/3 Rox L a c t o c o c c u s l a c t i s 42.2 3.4 4.0 2/4 Cv5 B i f i d o b a c t e r i u m spp. 43.4 3.4 - 3/1 Fam F a e c a l i b a c t e r i u m p r a u s n i t z i i .42.4 3.4 - 3/2 Hex BK 45.2 3.4 - 3/3 Rox B i f . a d o l e s c e n t i s 43.4 3.4 - 3/4 Cy5 M e g a s p h a e r a s p p . / V e i l l o n e l l a s p p . / D i a l i s t e r s p p . / A l l i s o n e l l a s p p . 42.7 3.4 4.0 4/1 Fam M e t h a n o b r e v i b a c t e r spp. 44.0 3.4 - 4/2 Hex BK 45.2 3.4 - 4/3 Rox B i f . l o n s u m subsp. i n f a n t i s 43.4 3.4 - 4/4 Cy5 P a r a b a c t e r o i d e s spp. 42.2 3.4 4.0 5/1 Fam A k k e r m a n s i a m u c i n i p h i l a 43.4 3.4 - 5/2 Hex BK 45.2 3.4 - 5/3 Rox B i f . l o n s u m s u b s p . l o n g u m 43.4 3.4 - 5/4 Cv5 B u t w i c i m o n a s spp. 42.7 3.4 - 6/1 Fam D e s u l f o v i b r i o spp. 43.4 3.4 - 6/2 Hex BK 45.2 3.4 - 6/3 Rox B i f . b i f i d u m 43.4 3.4 - 6/4 Cv5 C o r i o b a c t e r i i a 44.0 3.4 4.0 7 /1 Fam C l o s t r i d i u m U p t u r n gr. 45.0 3.4 4.0 7/2 Hex BK 45.2 3.4 - 7/3 Rox C a n d i d a a l b i c a n s 40.0 3.4 - 7/4 Cv5 L a c t o b a c i l l a c e a e 42.3 3.4 4.0 8/1 Fam L a c h n o s p i r a c e a e 42.7 3.4 4.0 8/2 Hex BK 45.2 3.4 - 8/3 Rox B i f c a t e n u l a t u m subsp. 43.4 3.4 - 8/4 Cy5 C l o s t r i d i u m d i f f i c i l e gr. 41.4 3.4 - 9/2 Hex BK 45.2 3.4 - 9/3 Rox E n t e r o c o c c u s spp. 42.6 3.4 4.0 9/4 Cy5 E r v s i p e l o t r i c h a c e a e 42.0 3.4 4.0 10/1 Fam E x o l i 45.0 3.4 4.0 10/2 Hex BK 45.2 3.4 - 10/3 Rox Маркер 0 0 - 10/4 Cy5 E n t e r o b a c t e r a l e s 42.2 3.4 4.0 11/1 Fam P e p t o n i p h i l a c e a e 43.4 3.4 4.0 11/2 Hex BK 45.2 3.4 - 11/3 Rox B i f a n i m a l i s subsp./ac//s 43.4 3.4 - 11/4 Cy5 P s e u d o m o n a s spp. 42.7 3.4 4.0 12/1 Fam A l i s t i p e s s p p . 44.0 3.4 4.0 12/2 Hex BK 45.2 3.4 - 12/3 Rox B i f d e n t i u m 43.4 3.4 - 12/4 Cy5 F u s o b a c t e r i a c e a e 42.7 3.4 - 13/1 Fam P r e v o t e l l a spp. 43.0 3.4 4.0 13/2 Hex BK 45.2 3.4 - 13/3 Rox B i f . b r e v e 43.4 3.4 - 13/4 Cy5 C l o s t r i d i u m p e r f r i n s e n s gr. 41.2 3.4 4.0 14/1 Fam S t r . a g a l a c t i a e 45.0 3.4 - --- стр. 39 --- ДНК ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 39 ЭНТЕРОФЛОР»® Дети Листов 39 № Канал детекции Показатель N-i EJ Min 14/2 Hex ВК 45.2 3.4 - 14/3 Rox srr2 45.0 3.4 _ 14/4 ___Су5 S t r e p t o c o c c u s spp. 42.2 3.4 4.0 15/1 Fam S t . a u r e u s 48.0 3.4 - 15/2 Hex BK 45.2 3.4 . 15/3 Rox mecA 44.7 3.4 - 15/4 Су5 S t a p h y l o c o c c u s spp. 44.8 3.4 4.0 16/1 Fam tcdA. tcdB 45.0 3.4 . 16/2 Hex BK 45.2 3.4 _ 16/4 СУ5 C l o s t r i d i o i d e s d i f f i c i l e 45.0 3.4 -