Набор реагентов для количественного определения антител класса G к β2-гликопротеину 1 методом иммуноферментного анализа ("ДС-ИФА-АНТИ-β2-ГЛИКОПРОТЕИН 1-G") по ТУ 21.20.23-245-05941003-2021 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 3 ---
СОДЕРЖАНИЕ
НАЗНАЧЕНИЕ..................................................................................................................................................... 3
II. ПРИНЦИП ТЕСТА....................................................................................................................................; .......3
Ш. СОСТАВ НАБОРА РЕАГЕНТОВ....................................................................................................................3
W. ЭФФЕКТИВНОСТЬ МЕДИЦИНСКОГО ИЗДЕЛИЯ.................................................................................4
V . МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ.....................................................................................................................6
VI. УТИЛИЗАЦИЯ И УНИЧТОЖЕНИЕ...............................................................................................................6
VII. НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ПОСТАВЛЯЕМЫЕ С
НАБОРОМ РЕАГЕНТОВ...................................................................................................................................6
VIII. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ.......................................................................................................... 7
IX. ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ...........................................................................................................................7
X . ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА................................................................................................................................8
Ш УЧЁТ РЕЗУЛЬТАТОВ.........................................................................................................................................8
*11. МЕТОДЫ МАТЕМАТИЧЕСКОЙ ОБРАБОТКИ РЕЗУЛЬТАТОВ...........................................................9
XIII. ОГРАНИЧЕНИЯ ТЕСТА................................................................................................................................... 9
XIV. СРОК ГОДНОСТИ, УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ ......................................Ю
XV. ТЕХНИЧЕСКОЕ ОБСЛУЖИВАНИЕ И РЕМОНТ.....................................................................................Ю
XVI. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА...........................................................................................................11
XVII. OБЪЯCHEHИE ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СИМВОЛОВ...................................................................................11
Приложение................................................................................................................................................................... 12
г1нструкция по прнмененню «д«>-г1Ч'/\-/\п i n-p^-i jir iK u iir v j i с.и п i-o »
--- стр. 4 ---
Инструкиия по применению «ДС-ИФА-АНТИ-Р2-ГЛИКОПРОТЕИН 1-G»
Набор реагентов рассчитан на проведение 96 определений (один разборный планшет), включая
контрольные; предназначен для ручной постановки с возможностью дробного использования.
НАЗНАЧЕНИЕ
«Набор реагентов для количественного определения антител класса G к р2-гликопротеину 1
4С ТО Д О М иммуноферментного анализа» («ДС-ИФА-АНТИ-р2-ГЛИКОПРОТЕИН 1-G») предназначен
ш количественного определения антител класса G к р2-гликопротеину 1, образующихся при
итифосфолипидном синдроме (АФС), в сыворотке или плазме крови человека методом
шмуноферментного анализа (ИФА).
Рекомендуется для клинической лабораторной диагностики АФС и прогнозирования риска
развития тромботических осложнений и акушерской патологии при АФС.
Предназначен для профессионального использования специально обученным персоналом.
Область применения - клиническая лабораторная диагностика.
АФС - системное аутоиммунное состояние гиперкоагуляции, вызванное образованием антител
к фосфолипидам или к фосфолипидсвязанным протеинам. АФС провоцирует образование тромбов
(тромбоз) как в артериях, так и венах, а также связанные с беременностью осложнения, такие как
выкидыш, мертворождение, преждевременные роды и тяжелая преэклампсия. Присутствие антител к
А^-гликопротеину 1 и/или кардиолипину классов G или М в сыворотке/плазме в средних и высоких
титрах наряду с клиническими проявлениями, такими как тромбоз или осложнение беременности,
являются основными диагностическими критериями постановки диагноза АФС. АФС может быть
первичным или вторичным. Первичный АФС (ПАФС) возникает в отсутствие каких-либо других
связанных с ним заболеваний. Вторичный АФС (ВАФС) встречается совместно с другими
аутоиммунными заболеваниями, такими как системная красная волчанка (СКВ).
II. ПРИНЦИП ТЕСТА
Метод определения основан на непрямом двухстадийном иммуноферментном анализе. В лунках
полистиролового планшета иммобилизован очищенный р2-гликопротеин 1. При наличии в
исследуемых образцах специфических антител класса G к р2-гликопротеину 1 образуется иммунный
комплекс антиген-антитело (стадия 1), который детектируется конъюгатом - антитела к IgG человека,
меченные пероксидазой хрена (стадия 2).
При добавлении ТМБ-Субстратного раствора в лунки планшета происходит окрашивание
раствора в синий цвет. Реакцию останавливают добавлением в раствор стоп-реагента. При этом синий
цвет раствора меняется на жёлтый. Интенсивность окрашивания прямо пропорциональна
концентрации антител класса G к р2-гликопротеину 1 в образце. Учет результатов можно проводить
и длине волны 450 нм или 450/620-680 нм.
€II. СОСТАВ НАБОРА РЕАГЕНТОВ
Характеристики реагентов
Форма выпуска
V 96
Иммуносорбент Планшет полистироловый 96-луночный разборный
(до лунок), в лунках которого сорбирован очищенный
|32-гликопротеин 1. Готов к применению.
1 планшет
Конъюгат Антитела к IgG человека, меченные пероксидазой хрена.
Готов к применению. Прозрачная или слегка
опалесцирующая жёлтого цвета жидкость.
1 фл. 12,0 мл
К+ Контрольный положительный образец***.
Готов к применению. Прозрачная или слегка
опалесцирующая красного цвета жидкость.
1 фл. 1,2 мл
К- Контрольный отрицательный образец***.
Готов к применению. Прозрачная или слегка
опалесцирующая зелёного цвета жидкость.
1 фл. 2,5 мл
Калибратор 0
Калибраторы, содержащие известные количества антител
класса G к р2-гликопротеину 1**.
Готовы к применению. Прозрачные или слегка
опалесцирующие светло-жёлтого цвета жидкости.
1 фл. 1,0 мл
Калибратор 1 1 фл. 1,0 мл
Калибратор 2 1 фл. 1,0 мл
Калибратор 3 1 фл. 1,0 мл
Калибратор 4 1 фл. 1,0 мл
Калибратор 5 1 фл. 1,0 мл
--- стр. 5 ---
IP Блок-раствор для разведения сывороток.
Готов к применению. Прозрачная или слегка опалесцирующая
розового цвета жидкость, допустимо образование осадка. ______
Инструкция по применению «ДС-ИФА-АНТИ-р2-ГЛИКОПРОТЕИН 1-G»
1 фл. 12,5 мл
‘PC Раствор для предварительного разведения сывороток.
Г отов к применению. Прозрачная или
опалесцирующая фиолетово-синего цвета жидкость.
слегка 1 фл. 12,5 мл
1Р Промывочный раствор. Концентрат (х25) фосфатно-солевого
буферного раствора с твином (ФСБ-Т). Прозрачная или
слегка опалесцирующая бесцветная или светло-жёлтого цвета
жидкость, допустимо образование осадка, полностью
растворяющегося при температуре от 35 до 39 °С и
встряхивании.
____________________________________________
1 фл. 50,0 мл
топ-реагент Раствор серной кислоты (0,2М)* * * * * * * .
Готов к применению. Прозрачная бесцветная жидкость. 1 фл. 25,0 мл
ГМБ-
1С)'бстратный
£ створ
г отов к применению. Прозрачная бесцветная жидкость,
возможно наличие окраски. 1 фл. 14,0 мл
Планшет для
федварительного
разведения
:ывороток_______
Планшет полистироловый с бесцветными лунками. 1 планшет
Плёнка защитная для ИФА-планшетов 2 шт.
Наконечники одноразовые 16 шт.
Ванночка пластиковая для жидких реагентов 2 шт.
Пакет полиэтиленовый с замком Zip-Lock 1 шт.
Бланк для построения калибровочного графика 1 шт.
Инструкция по применению 1 шт.
* Указано содержание вредных веществ в опасных концентрациях для реагентов, обозначенных символом
|Внимание».
** Калибраторы аттестованы относительно E.N. Harris стандарта, Louisville APL Diagnostics, США и IgG Sapporo
тандарта (HCAL), Werfen, Австралия, с использованием коллекции образцов, аттестованных в референс-тесте компании
3jgentec Diagnostika, Германия. Значения концентраций антител класса G к р2-гликопротеину 1 в Калибраторах указаны
а потребительской упаковке и в паспорте на серию набора.
* * * Диапазоны значений концентраций антител класса G к р2-гликопротеину 1 для К- и К+ указаны на
Щотребительской упаковке и в паспорте на серию набора.
Набор комплектуется готовыми реагентами и концентрированными растворами. Имеется маркировка
юсредством штрих-кодов, а также цветовая кодировка для ряда реагентов. Цветовая кодировка реагентов -
|Словное обозначение цвета/окраски жидких реагентов: К- - зелёный, К+ - красный.
Набор реагентов упакован в потребительскую упаковку (коробку картонную). Паспорт на серию
входит в комплект сопроводительной документации на продукцию.
IV. ЭФФЕКТИВНОСТЬ МЕДИЦИНСКОГО ИЗДЕЛИЯ
4.1. Эквивалентность образцов сыворотки и плазмы крови человека
Исследованием положительных (п=25) и отрицательных (п=25) парных образцов сыворотки и
плазмы крови человека, содержащей различные антикоагулянты (ЭДТА, гепарин, цитрат натрия),
была показана их эквивалентность, что позволяет отнести показатели эффективности медицинского
изделия к обоим видам исследуемых образцов.
4.2. Воспроизводимость и повторяемость
Исследование воспроизводимости проводили внутри планшета (повторяемость), между сериями
и между планшетами одной серии. Коэффициент вариации не превышает 8%.
4.3. Аналитическая чувствительность
Аналитическая чувствительность не превышает 0,5 Ед/мл.
4.4. Диапазон измерения
Нижняя граница диапазона измерения соответствует 0,5 Ед/мл. Верхняя граница определяется
номинацией Калибратора 5.
4
--- стр. 6 ---
4.5. Линейность
Зависимость концентрации антител класса G к р2-гликопротеину 1 имеет линейный характер в
шапазоне концентраций Калибраторов. Значение «линейности» находится в пределах от 90 до 110%.
4.6. Открытие
Значение «открытия» находится в пределах от 90% до 110%.
4.7. Правильность
Данный аналитический параметр определяли путём сравнительной оценки образцов сыворотки
;рови в наборе реагентов «ДС-ИФА-АНТИ-р2-ГЛИКОПРОТЕИН 1-G» и с использованием
Реагентов для лабораторной диагностики аутоиммунных заболеваний in-vitro методом ИФА.
Ытитела к р2-гликопротеину I, IgG/IgM (Anti-beta-2-Glycoprotein I IgG/IgM)», Orgentec Diagnostika,
ермания.
Коэффициент детерминации составил 0,8554, наклон составил 0,9099. Качественное совпадение
:тестом сравнения составило 95,5% (95%С1:92,4% - 97,3%).
4.8. Аналитическая специфичность.
• Влияние интерферирующих веществ
- интерференты эндогенной природы: не выявлена интерференция в образцах с содержанием
^|[ 1лирубина до 0,4 мг/мл, гемоглобина до 8,0 мг/мл, липидов (триглицеридов) до 20,0 мг/мл,
(холестерина до 4,0 мг/мл;
- интерференты экзогенной природы: не выявлена интерференция в образцах с содержанием
щетилсалициловой кислоты до 0,03 мг/мл, преднизолона до 0,012 мг/мл, варфарина до 0,075 мг/мл,
1торвастатина до 0,00075 мг/мл, гидроксихлорохина до 0,0057 мг/мл.
• Перекрестная реактивность
Исследовано 160 образцов сыворотки крови больных аутоиммунными заболеваниями.
Не обнаружено перекрестной реактивности с антителами к системным ревматологическим
иболеваниям: системная склеродермия, болезнь Бехчета, ревматоидный артрит, анкилозирующий
спондилит, полимиозит, а также в образцах, содержащих РФ. При СКВ перекрестная реактивность
составила 1,7% (95% CI: 0,3 - 9,0 %).
4.9. Референтный интервал
Референтный интервал определен с использованием 284 образцов сыворотки крови здоровых
индивидуумов и составил от 1,0 до 7,4 Ед/мл. Рекомендуется в каждой лаборатории при
использовании набора уточнить значения концентраций антител класса G к р2-гликопротеину 1,
соответствующие нормальным значениям для конкретной территории.
_ 4.10. Диагностическая чувствительность
Диагностическая чувствительность набора реагентов «ДС-ИФА-АНТИ-р2-ГЛИКОПРОТЕИН 1-G»
5ь1ла оценена при исследовании:
• 53 образцов сыворотки крови больных ПАФС. Диагностическая чувствительность составила
),6% (95% CI: 79,7-95,9%);
• 62 образцов сыворотки крови больных ВАФС. Диагностическая чувствительность составила
91,9% (95% CI: 82,5-96,5%);
• 38 образцов сыворотки крови беременных с патологией на фоне АФС. Диагностическая
чувствительность составила 94,7% (95% CI: 82,7-98,5%).
Суммарная диагностическая чувствительность составила 92,2% (95% CI: 86.8-95,5%).
4.11. Диагностическая специфичность
Диагностическая специфичность набора реагентов «ДС-ИФА-АНТИ-Р2-ГЛИКОПРОТЕИН 1-G»
была оценена при исследовании:
• 284 образцов сыворотки крови случайной выборки доноров. Специфичность составила 99,6%
{95% CI: 98,0%-99,9%);
• 112 образцов сыворотки крови беременных. Специфичность составила 99,6% (95% CI: 95,9% -
100,0% );
• 69 образцов сыворотки крови госпитальных пациентов с неинфекционными заболеваниями.
Специфичность составила 96,4% (95% CI: 89,0% - 98,9%);
• 286 образцов сыворотки крови пациентов с инфекционными заболеваниями (сифилис, гепатит
В , гепатит С; ВИЧ-инфекция, COVID-19). Специфичность составила 98,4% (95% CI: 96,2% -99,4%).
Суммарная диагностическая специфичность составила 98,9% (95% CI: 97,8% - 99,4%).
Инструкция no применению «ДС-ИФА-АНТИ-Э2-ГЛИКОПГОТЕИН 1-G»
--- стр. 7 ---
j s .
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
1.1. Нестерильное медицинское изделие для диагностики in vitro. Потенциальный риск применения
набора - класс 2а (Приказ Минздрава России от 06.06.2012 г. N 4н).
5.2. Набор предназначен для профессионального использования в клинической лабораторной
диагностике специально обученным персоналом. При работе с набором реагентов следует
соблюдать ГОСТ Р 52905-2007 «Лаборатории медицинские. Требования к безопасности».
53, Реагенты набора не горючие. Внешняя упаковка не является самовоспламеняемой,
взрывоопасной.
М. Реагенты набора не содержат вредных веществ в опасных концентрациях, за исключением
реагентов, обозначенных символом «Внимание». При использовании по назначению
вероятность негативного воздействия на организм человека незначительна. Растворы в
представленных объёмах и концентрациях не опасны при вдыхании.
Меры первой помощи (при необходимости): При попадании на кожу/в глаза - промыть
большим количеством воды. Загрязненную одежду снять. При необходимости обратиться за
медицинской помощью.
Материал человеческого происхождения, использованный для приготовления реагентов набора,
не содержит HBsAg, антиген р24 ВИЧ-1, антитела к ВИЧ-1,2 и вирусу гепатита С (ВГС).
1.6. При работе с реагентами набора (К+, К-, Калибраторами) и исследуемыми образцами нужно
обращаться как с потенциально опасными материалами, т.к. ни один метод тестирования не
может гарантировать отсутствие инфекционных агентов.
1.7. Отдельные реагенты набора приготовлены с использованием биологического материала
животного происхождения.
1.8. Паспорт безопасности для набора реагентов может быть представлен по запросу клиента.
1 .9 . Для получения надежных результатов необходимо:
- обеспечить установленные условия хранения набора;
- строго соблюдать требования Инструкции по применению набора реагентов.
1.10. Не использовать МИ:
- при повреждении целостности упаковки реагентов;
- при несоответствии внешнего вида реагентов (см. п. III Состав набора реагентов);
- при повреждении маркировки.
П. УТИЛИЗАЦИЯ И УНИЧТОЖЕНИЕ
1. Изделия в процессе хранения и транспортирования не выделяют вредных веществ,
загрязняющих окружающую среду. Отходы, образующиеся в результате применения набора
реагентов по назначению, установленному производителем, а также не использованные изделия
(истекший срок годности, поврежденная потребительская упаковка/маркировка, поврежденная
упаковка/маркировка реагентов и т.д.) относятся к медицинским отходам класса «А», «Б» и «Г»
в соответствии со ст. 49 Федерального закона от 21.11.2011 г. N 323-ФЗ «Об основах охраны
здоровья граждан в Российской Федерации».
U. Медицинские отходы подлежат сбору, обезвреживанию, размещению, хранению,
транспортировке, учету и утилизации в соответствии с действующими правилами и
нормативами (СанПиН 2.1.3684-21, СанПиН 3.3686-21, МУ 287-113).
VII. НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ПОСТАВЛЯЕМЫЕ С
НАБОРОМ РЕАГЕНТОВ
Вода дистиллированная (деионизированная);
Дозаторы пипеточные переменного объёма для отбора жидкостей;
Наконечники одноразовые для дозаторов пипеточных;
Устройство для промывания планшетов (вошер);
Планшетный спектрофотометр (ИФА-ридер) с фильтрами 450 нм и 620-680 нм;
Бумага фильтровальная лабораторная;
Средства измерения времени (часы, таймер).
Инструкция no применению «ДС-ИФА-АНТИ-р2-ГЛИКОПРОТЕИН 1-G»
--- стр. 8 ---
VIII. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ
Сбор образцов крови человека проводить в соответствии с текущей практикой методом
венепункции. Для анализа использовать только нативные (неразведенные) образцы сыворотки крови
человека или плазмы крови человека с различными антикоагулянтами (ЭДТА, гепарин, цитрат натрия).
При использовании плазмы с жидким антикоагулянтом (цитрат натрия) полученное значение
концентрации необходимо умножить на фактор разведения.
Фактор разведения = (Объем антикоагулянта в пробирке + Общий объем крови в пробирке) /
Общий объем крови в пробирке.
Во избежание гемолиза необходимо как можно быстрее отделить плазму от эритроцитов или
сыворотку от сгустка. Образцы, содержащие агрегаты или осадок, осветлять центрифугированием.
Термоинактивированные образцы анализу не подлежат.
Образцы с выраженным гемолизом, гиперлипидемией и бактериальным ростом анализу
be подлежат!
Образцы хранить/транспортировать в соответствии с требованиями существующих
ормативных документов. Допустимо однократное замораживание/отгаивание образцов.
ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ
Общие требования и рекомендации:
Нельзя использовать реагенты из наборов разных серий или смешивать их при приготовлении
растворов, кроме:
- ПР, который взаимозаменяем во всех наборах реагентов производства ООО «НПО
«Диагностические системы»;
- Стоп-реагента, который может быть взаимозаменяемым в зависимости от молярности раствора;
- ТМБ-Субстратного раствора, который взаимозаменяем во всех наборах реагентов для
определения антител к р2-гликопротеину 1 и кардиолипину производства ООО «НПО
«Диагностические системы».
- другие реагенты также могут быть взаимозаменяемыми для постановки в большинстве
наборов реагентов ООО «НПО «Диагностические системы»;
- за более детальной информацией относительно других реагентов обратитесь в службу
поддержки пользователей по телефону бесплатной линии 8-800-555-0300 (доб. 7626, 7655)
или по E-mail:
info@npods.ru ; help-ds@npods.ru .
• Рабочие растворы готовить осторожно, исключая какое-либо загрязнение. Использовать
одноразовую или химически чистую лабораторную посуду для приготовления реагентов. Не
допускать контакта металлических предметов с реагентами.
I • Каждая лунка Иммуносорбента предназначена для однократного использования.
• Не подвергать реагенты и рабочие растворы воздействию высоких температур или прямого
солнечного света.
• Перед использованием флаконы с жидкими реагентами перемешать, не допуская вспенивания.
1.2. Реагенты, готовые к использованию:
• Иммуносорбент. Планшет, состоящий из 12 стрипов и рамки, упакован в фольгированный
пакет. Вскрыть фольгированный пакет, отступив 1 см от края пакета, и взять необходимое
количество лунок.
• К+, К-, Калибраторы, Конъюгат, БР, РРС, ТМБ-Субстратный раствор, Стоп-реагент (ОДМ).
93. Реагенты, требующие предварительного приготовления:
• Рабочий ПР: необходимый объём концентрата ПР (х25) развести в 25 раз соответствующим
объёмом воды дистиллированной (деионизированной) (см. Таблицу 1) и тщательно перемешать.
Инструкция по применению «ДС-ИФА-АНТИ-р2-ГЛИКОПРОТЕИН 1-G»
Таблица 1
Расход ПР в зависимости от количества используемых стрипов
Количество
используемых стрипов 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Рабочий
ПР
ПР (х25),
мл 3,0 6,0 9,0 12,0 15,0 18,0 21,0 24,0 27,0 30,0 33,0 40,0
Вода, мл 72,0 144,0 216,0 288,0 360,0 432,0 504,0 576,0 648,0 720,0 792,0 960,0
--- стр. 9 ---
t ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
0.1. Общие требования и рекомендации:
• Использовать валидированные дозаторы и оборудование.
• Использовать новый наконечник для каждого образца.
• Перед использованием набор реагентов выдержать не менее 30 мин при комнатной температуре.
• Перед использованием ванночки пластиковые для жидких реагентов ополоснуть водой
дистиллированной (деионизированной).
• Не использовать одну и ту же ванночку пластиковую для внесения Конъюгата и ТМБ-Субстратного
раствора.
• Избегать расплескивания образцов или растворов, содержащих образцы.
• Не допускать высыхания лунок Иммуносорбента между отдельными операциями.
• Соблюдать требования к промывке (рекомендованное количество циклов, объём раствора при
наполнении, временные интервалы, эффективность отсасывания).
• Плёнки защитные для ИФА планшетов являются одноразовыми и повторному использованию
после снятия не подлежат.
Инструкция по применению «ДС-ИФА-АНТИ-р2-ГЛИКОПРОТЕИН 1-G»
|).2. Проведение ИФА:
Этап Процедура постановки
1
В лунки планшета для предварительного разведения сывороток внести по 90 мкл РРС и по
10 мкл исследуемых образцов, тщательно перемешивая пипетированием. При этом
фиолетово-синий цвет должен измениться на голубовато-зелёный.
2 Внести в лунки Иммуносорбента по 90 мкл БР, за исключением лунок для К+, К-,
Калибраторов.
3 Внести в лунки Иммуносорбента по 100 мкл К+, К-, Калибраторов.
4
В лунки Иммуносорбента, содержащие БР, внести по 10 мкл предварительно разведённых
исследуемых образцов (конечное разведение исследуемых образцов 1:100), тщательно
перемешивая пипетированием.
5 Планшет накрыть защитной плёнкой и выдержать 30 мин при комнатной температуре
(здесь (20-26) °С).
4
Т '
С помощью промывочного устройства удалить содержимое лунок в ёмкость с
дезинфицирующим раствором и промыть планшет 3 раза рабочим раствором ПР. Для этого
осторожно внести рабочий ПР в лунки планшета до краёв (не менее 350 мкл в лунку), затем
удалить в ёмкость с дезинфицирующим раствором. При необходимости удалить остатки
влаги путем отстукивания по сложенной в несколько слоёв фильтровальной бумаге.
Рекомендуется использовать автоматический микропланшетный вошер. Недостаточная
промывка может неблагоприятно повлиять на точность анализа.
7 Во все лунки планшета внести по 100 мкл Конъюгата.
8 Планшет накрыть защитной плёнкой и выдержать 15 мин при комнатной температуре
(здесь (20-26) °С).
9 С помощью промывочного устройства удалить содержимое лунок и промыть планшет 3 раза
рабочим ПР, как описано в п. 6.
10 Во все лунки планшета внести по 100 мкл ТМБ-Субстратного раствора.
11 Планшет выдержать 15 мин в защищённом от света месте при комнатной
температуре (здесь (20-26) ®С).
12
Реакцию остановить добавлением во все лунки по 150 мкл Стоп-реагента и через 1-2 мин, но
не позднее 20 мин, измерить ОП при длине волны 450/620-680 нм. Допустимо измерять
ОП при одной длине волны - 450 нм.
Схема проведения ИФА приведена в Приложении.
XI. УЧЁТ РЕЗУЛЬТАТОВ
Учёт результатов провести спектрофотометрически при двух длинах волн - 450 нм и при
референс-длине волны в диапазоне от 620 до 680 нм с настройкой прибора по «воздуху». Допустим
учёт результатов при одной длине волны - 450 нм.
8
--- стр. 10 ---
При правильной работе набора реагентов должно соблюдаться следующее соотношение:
)П Калибратора О < ОП Калибратора 1 < ОП Калибратора 2 < ОП Калибратора 3 < ОП Калибратора 4 <
ОП Калибратора 5.
На бланке для построения калибровочного графика по оси абсцисс X отложить
соответствующие значения концентрации антител класса G к р2-гликопротеину 1 в Калибраторах,
шраженные в Ед/мл, по оси ординат Y отложить значения средней ОП Калибраторов. По
юлученным точкам построить калибровочный график.
По калибровочному графику определить концентрацию антител в исследуемых образцах.
Исследуемые образцы расценивать как положительные: если содержание антител класса G > 8 Ед/мл.
Исследуемые образцы расценивать как неопределённые или низкопозитивные: если содержание
мтител класса G от 5 до 8 Ед/мл (5 - 8 Ед/мл).
Исследуемые образцы расценивать как отрицательные: если содержание антител класса G < 5 Ед/мл.
Инструкция по применению «ДС-ИФА-АНТИ-Р2-ГЛИКОПРОТЕИН 1-G»
I
Ф^ п
Контрольный положительный образец (К+) и Контрольный отрицательный образец (К-) служат
1ля проверки точности и достоверности результатов. Полученные величины концентраций
пецифических антител класса G к р2-гликопротеину 1 в образцах считать достоверными, если
счисленные по калибровочному графику значения концентраций антител в контрольных образцах
"опадают в пределы, указанные на потребительской упаковке и в паспорте на серию набора.
Если значение ОП образца выходит за пределы калибровки (превышает ОП Калибратора 5), то
ыдается результат «больше номинации Калибратора 5».
ill. МЕТОДЫ МАТЕМАТИЧЕСКОЙ ОБРАБОТКИ РЕЗУЛЬТАТОВ
При учёте результатов с помощью встроенного или внешнего программного обеспечения
пектрофотометра рекомендуется использовать следующие методы математической обработки
езультатов:
Марка спектрофотометра Рекомендуемые методы математической обработки
Statfax 2100, 3200 Point-to-point
Тесап Sunrise Point-to-point
Bio-Rad 680, iMark 4 PL-Cook-Wilkenson, Point-to-point
Multiscan EX, FC Point-to-point
Kill. ОГРАНИЧЕНИЯ ТЕСТА
• Диагностика АФС возможна только при наличии одного клинического (тромбоз или осложнение
^jj^MCHHOcra) и одного серологического критерия (присутствия антител к р2-гликопротеину 1 и/или
~^рдиолипину классов G или М в сыворотке в средних и высоких титрах).
► Для исключения ложноположительных результатов присутствие антител к р2-гликопротеину 1
[/или кардиолипину классов G или М в сыворотке должно быть подтверждено, по крайней мере,
[важды в средних и высоких титрах, определенных в течение 12 недель.
► При отрицательных результатах определения волчаночного коагулянта, антител к р2-
ликопротеину 1 и/или кардиолипину классов G или М и подозрении на наличие АФС рекомендовано
юполнительное исследование на антитела к р2-гликопротеину I и/или кардиолипину класса А.
• АФС исключается, если менее 12 недель или более 5 лет выявляются антифосфолипидные
штитела без клинических проявлений или наблюдаются клинические проявления без
штифосфолипидных антител.
• Повышение уровня антифосфолипидных антител отмечают:
при системных аутоиммунных заболеваниях (СКВ, ревматоидный артрит, системный склероз,
крвичный синдром Шегрена, дермато- и полимиозит, васкулит, узелковый полиартериит,
микроскопический полиартериит, клеточный артериит, болезнь Бехчета, рецидивирующий
аолихондрит, лейкоцитокластический васкулит):
у пациентов с инфекционной патологией, включая бактериальные инфекции (сифилис/лайм/боррелиоз,
лепра, сальмонеллезы, стафилококковые, стрептококковые инфекции, проказа), вирусные инфекции
(ВИЧ-инфекция, цитомегаловирусная инфекция, гепатиты А, В. С, инфекции, вызванные вирусом
Эпштейна-Барр, парвовирусом В19, аденовирусами, вирусами Herpes zoster, кори, краснухи,
парвовирусами; COVID-19), паразитарные инвазии (туберкулез, другие микоплазмозы, малярия,
лейшманиоз, токсоплазмоз, лихорадка Q);