Набор реагентов для определения активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови (метод Райтмана-Френкеля) (АЛТ-РФ-ОЛЬВЕКС) по ТУ 9398-029-44276594-2006 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2011/11681 · класс риска 1

Производитель: ООО "ОЛЬВЕКС ДИАГНОСТИКУМ" (Россия)

Вид изделия: Аланинаминотрансфераза (АЛТ) ИВД, набор, спектрофотометрический анализ

В госконтрактах 44-ФЗ: 57 контрактов, медианная цена за единицу 1 776 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 2 ---
АЛТ катализирует реакцию переаминирования между L-аланином и а-кетоглутаровой 
кислотой с образованием пировиноградной кислоты. Об активности фермента судят по при­
росту пировиноградной кислоты, образующей с 2,4~динитрофенилгидразином окрашенные 
гидразоны.
Активность АЛТ пропорциональна количеству образовавшихся гидразонов, которое 
определяется фотометрически при длине волны 537 (500-560) нм.
Состав набора
В состав набора реагентов входят следующие компоненты:
- реагент 1  (буфер-субстратная смесь), содержащая L-аланин, 100 ммоль/л; альфа- 
кетоглутаровую кислоту, 2,0 ммоль/л; натрий фосфорнокислый однозамещенный,
19 ммоль/л; натрий фосфорнокислый двузамещенный, 81 ммоль/л; азид натрия, 0,5 г/л; на­
трия гидроокись до pH 7,4, готов к применению -1 флакон (250 мл);
- реагент 2 (раствор 2,4-ДНФГ), содержащий 2,4-динитрофенилгидразин, 1,0 ммоль/л; 
соляную кислоту, 1,0 моль/л, готов к применению -  1  флакон (250 мл);
- реагент 3 (натрия гидроокись) концентрат, содержащий гидроокись натрия,
4,0 моль/л -1 флакон (250 мл);
- калибратор, содержащий пируват натрия, 1,0 ммоль/л; азид натрия, 0,5 г/л; готов к 
применению -  1  флакон (5,0 мл).
Аналитические характеристию!
Линейная область определения активности АЛТ - в диапазоне от 0,03 до
1,67 мкмоль/(схл), отклонение от линейности - не более 10%.
Чувствительность определения - не более 0,01 мкмоль/(сх л).
Коэффициент вариации результатов определений - не более 10%.
Окраска стабильна не более 2 часов.
Качество набора может проверяться при помощи отечественных или зарубежных кон­
трольных сывороток, аттестованных данным методом.
Н ормальны е величины актавности АЛТ в сыворотке крови составл5нот от 0,03 
до 0,19 мкмоль/(сх л) или 0,1-0,68 ммоль/(чхл).
Принцип метода


--- стр. 3 ---
Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диалазон значений нормальных вели­
чин для обследуемого контингента.
Анализируемые образцы
Сыворотка крови без следов гемолиза.
М еры предосторожности
Потенциальный риск применения набора -  класс 2а.
Все компоненты набора в используемых концентрадиях являются нетоксичными.
В состав компонентов набора входят азид натрия, соляная кислота и натрия гидро­
окись. Следует избегать их попадания на кожу и слизистые; при попадании немедленно 
промыть пораженное место большим количеством проточной воды. При попадании внутрь 
следует немедленно выпить 0,5 л теплой воды и вызвать рвоту.
При работе с набором необходимо соблюдать "Правила устройства, техники безопас­
ности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при 
работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений 
системы Министерства здравоохранения СССР" (Москва, 1981 г.).
При работе с набором следует использовать одноразовые резиновые или пластиковые 
перчатки, так как образцы крови человека являются потенциально инфицированным мате­
риалом, способным длительное время сохранять или передавать ВИЧ, вирус гепатита или 
любой другой возбудитель инфекции.
Оборудование, материалы и реагенты:
- Спектрофотометр, длина волны 537 нм, или фотоэлектроколориметр, длина волны 
500-560 нм, кювета с длиной оптического пути 1,0 см;
- термостат, поддерживаюпщй температуру +37±1°С;
- колбы вместимостью 100 мл;
- секундомер;
- пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,004-0,6 мл; 2,5 мл и 5,0 мл;
- пробирки стеклянные химические вместимостью 5,0-10 мл;


--- стр. 4 ---
- вода дистиллированная;
- перчатки резиновые или пластиковые.
Подготовка к анализу
Реагенты 1, 2 и калибратор готовы к применению.
Перед определением содержимое флакона 3 (или аликвоту) разводят дистиллированной 
водой, свободной от карбонатов, в соотношении 1:9.
Полученный рабочий раствор реагента 3 можно хранить при комнатной температуре 
(+18-25°С) в плотно закрытом полиэтиленовом флаконе не более 3 месяцев.
Построение калибровочного графика
Подготовить пробы в соответствии с таблицей 1.
Таблица 1
№
пробы
Калибратор,
мл
Вода дис­
тиллиро­
ванная, мл
Реагент 2, 
мл
Ферментативная активность
мкмоль/(схл) ммоль/(чхл)
1 0,004 0,596 0,500 0,022 0,08
2 0,020 0,580 0,500 0,112 0,40
3 0,050 0,550 0,500 0,278 1,00
4 О Д 00 0,500 0,500 0,556 2,00
5 0,200 0,400 0,500 1,112 4,00
6 0,300 0,300 0,500 1,668 6,00
контроль - 0,600 0,500 - -
Пробы тщательно перемешать и выдержать в течение 20 минут при комнатной темпе­
ратуре (+18-25°С), после этого добавить во все пробирки по 5,0 мл рабочего раствора реа­
гента 3 и снова перемешать, оставить на 10 минут для развития окраски и измерить оптиче-


--- стр. 9 ---
Приказом Росздравнадзора 
от 2011 г. №
УТВЕРЖ ДЕНА «УТВЕ 
Г ектор
ностикум
Н. Чавкин
2011 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для определения активности 
аланинаминотрансферазы в сыворотке крови 
(метод Райтмана-Френкеля) 
(АЛТ-РФ-ОЛЬВЕКС)
(Взамен инструкции, утвержденной 04.08.2006 г.)
Назначение
Набор «АЛТ-РФ-ОЛЬВЕКС» предназначен для количественного определения актив­
ности аланинаминотрансферазы (АЛТ) в сыворотке крови человека с фиксированным време­
нем инкубации в клинико-диагностических и биохимических лабораториях и в научно- 
исследовательской практике.
Набор рассчитан на проведение 200, 400 и 1000 определений при конечном объеме 
реакционной смеси 3,05 мл.
Принцип метода
АЛТ катализирует реакцию переаминирования между L-аланином и а-кетоглутаровой 
кислотой с образованием пировиноградной кислоты. Об активности фермента судят по при­
росту пировиноградной кислоты, образующей с 2,4-динитрофенилгидразином окрашенные 
гидразоны.


--- стр. 10 ---
Активность АЛТ пропорциональна количеству образовавшихся гидразонов, которое  
определяется фотометрически при длине волны 537 (500-560) нм.
Состав набора
В состав набора реагентов входят следующ ие компоненты:
- реагент 1  (буфер-субстратная смесь), содержащая L-аланин, 100 ммоль/л; альфа-  
кетоглутаровую кислоту, 2,0 ммоль/л; натрий фосфорнокислый однозамещенный,
19 ммоль/л; натрий фосфорнокислый двузамещенный, 81 ммоль/л; азид натрия, 0,5 г/л; на­
трия гидроокись до pH 7,4, готов к применению -1  флакон (50 мл), или 1  флакон (100 мл),  
или 1  флакон (250 мл), или 2 флакона (по 50 мл);
- реагент 2 (раствор 2,4-ДНФ Г), содержащий 2,4-динитрофенилгидразин, 1,0 ммоль/л;  
соляную кислоту, 1,0 моль/л, готов к применению -  1  флакон (50 мл), или 1  флакон (100 мл),  
или 1  флакон (250 мл);
- реагент 3 (натрия гидроокись) концентрат, содержащий гидроокись натрия,
4,0 моль/л -1  флакон (50 мл), или 1  флакон (100 мл), или 1  флакон (250 мл);
- калибратор, содержащий пируват натрия, 1,0 ммоль/л; азид натрия, 0,5 г/л; готов к  
применению -  1  флакон (2,0 мл) или 1  флакон (5,0 мл).
Аналитические характеристики
Линейная область определения активности АЛТ - в диапазоне от 0,03 до
1,67 мкмоль/(схл), отклонение от линейности - не более 10%.
Чувствительность определения - не более 0,01 мкм оль/(схл).
Коэффициент вариации результатов определений - не более 10%.
Окраска стабильна не более 2 часов.
Качество набора может проверяться при помощи отечественных или зарубежных кон­
трольных сывороток, аттестованных данным методом.
Нормальные величины активности АЛТ в сыворотке крови составляют от 0,03  
до 0,19 мкмоль/(схл) или 0,1-0,68 ммоль/(чхл).
Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных вели­
чин для обследуемого контингента.
Анализируемые образцы
Сыворотка крови без следов гемолиза.


--- стр. 11 ---
Меры предосторожности
Потенциальный риск применения набора -  класс 1.
Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными.
В состав компонентов набора входят азид натрия, соляная кислота и натрия гидро­
окись. Следует избегать их попадания на кожу и слизистые; при попадании немедленно  
промыть пораженное место большим количеством проточной воды. При попадании внутрь  
следует немедленно выпить 0,5 л теплой воды и вызвать рвоту.
При работе с набором необходим о соблюдать "Правила устройства, техники безопас­
ности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при  
работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений  
системы Министерства здравоохранения СССР" (Москва, 1981 г.).
При работе с набором следует использовать одноразовые резиновые или пластиковые  
перчатки, так как образцы крови человека являются потенциально инфицированным мате­
риалом, способным длительное время сохранять или передавать ВИЧ, вирус гепатита или  
любой другой возбудитель инфекции.
Оборудование, материалы и реагенты:
“  Спектрофотометр, длина волны 537 нм, или фотоэлектроколориметр, длина волны  
500-560 нм, кювета с длиной оптического пути 1,0 см;
- термостат, поддерживающий температуру +37±1°С;
- колбы вместимостью 100 мл;
- секундомер;
- пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,004-0,6 мл; 2,5 мл и 5,0 мл;
- пробирки стеклянные химические вместимостью 5,0-10 мл;
- вода дистиллированная;
- перчатки резиновые или пластиковые.
Подготовка к анализу
Реагенты 1, 2 и калибратор готовы к применению.


--- стр. 12 ---
Перед определением содержимое флакона 3 (или аликвоту) разводят дистиллированной  
водой, свободной от карбонатов, в соотношении 1:9.
Полученный рабочий раствор реагента 3 можно хранить при комнатной температуре  
(+18-25°С) в плотно закрытом полиэтиленовом флаконе не более 3 месяцев.
Построение калибровочного графика
Подготовить пробы в соответствии с таблицей 1.
Таблица 1
№
пробы
Калибратор,
мл
В ода дис­
тиллиро­
ванная, мл
Реагент 2,  
мл
Ферментативная активность
мкмоль/(схл) ммоль/(чхл)
1 0,004 0,596 0,500 0,022 0,08
0,020 0,580 0,500 0,112 0,40
0,050 0,550 0,500 0,278 1,00
0,100 0,500 0,500 0,556 2,00
0,200 0,400 0,500 1,112 4,00
0,300 0,300 0,500 1,668 6,00
контроль 0,600 0,500
Пробы тщательно перемешать и выдержать в течение 20 минут при комнатной темпе­
ратуре (+18-25*^0), после этого добавить во все пробирки по 5,0 мл рабочего раствора реа­
гента 3 и снова перемешать, оставить на 10 минут для развития окраски и измерить оптиче­
скую плотность проб против контрольной пробы через 10 минут при длине волны 537 (500-  
560) нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм.
Построить калибровочный график, откладывая на оси ординат значения оптической  
плотности для каждой пробы, а на оси абсцисс -  соответствующие им значения активности  
АЛТ.