Набор реагентов для in vitro диагностики наличия мутаций гена PIK3CA методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени в образцах пациентов, фиксированных в формалине и залитых в парафин, 48 реакций — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 3 --- С€Я Для диагностики in- vitro 25 сГ )5“ с Хранить при температуре от 25 °С до-15°С REF PI3K-RT48 Набор реагентов для in vitro диагностики наличия мутаций гена PIK3CA методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени в образцах пациентов, фиксированных в форма. 1ине и залитых в парафин, 48 реакций Набор валидирован д>чя приборов: Амплификатор нуютеиновых кислот Applied Biosystems QuantStudio 5 с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в режиме реального времени РЗН 2019/8446 от 06.06.2019 (бессрочно) Прибор для проведения полимеразной цепной реакции в режиме реального времени Rotor-Gene 0 ФСЗ 2010/07595 от 10.08.2010 (бессрочно) Анализатор LightCycler 480-II для проведения ПЦР- анализа в режиме реального времени ФСЗ 2009/03609 от 06.06.2016 (бессрочно) Термоциклер для амплификации нуклеиновых кислот 1000 с Модулем реакционным оптическим CFX96 ФСЗ 2008/03399 от 21.06.2016 (бессрочно) Инструкция по применению — версия 1.2 Примечание: Далее по тексту также: Набор для определения соматических мутаций гена Р1КЗСА, Набор PIK3CA-RT48. Набор для анализа мутаций гена Р1КЗСА --- стр. 4 --- Содержание I 1. Назначение 2. Реагенты и приборы 2.1 Содержимое упаковки 2.2 Обращение и хранение 2.3 Стабильность изделия 2.4 Контроль качества 2.5 Предостережения и меры предосторожности 3. Необходимые реагенты и оборудование 3.1 Реагенты 3.2 Оборудование 4. Описание набора 4.1 Введение 4.2 Информация о настоящем анализе 5. Инструкция по применению 5.1 Выделение ДНК 5.2 Подготовка реагентов (для всех приборов) 5.3 Настройки прибора 6. Анализ данных 6.1 Интерпретация результатов 7. Рабочие и диагностические характеристики изделия 8. Приложения 8.1 Диагностика и устранение неисправностей 9. Справочная литература 10. Используемые символы 12. Примечание для покупателя 12.1 Условия гарантии 12.2 Ограничение гарантийных обязательств 12.3 Интеллектуальная собственность 13. Контактные данные Приложение 3 4 4 4 5 5 5 6 6 6 7 7 7 8 8 8 10 13 13 16 17 17 19 20 22 22 22 23 24 25 --- стр. 5 --- 1. Назначение Изделие предназначено для определения соматических мутаций гена PIK3CA в геномной ДНК человека Е542К, Е545К, E545Q, H1047R. H1047L. Таблица 1. Перечень мутаций гена PIK3CA, определяемых настоящим набором Мутац ИЯ Нуклеотидная замена Аминокислотная замена Cosmic ID Номер прайме ра Е542К c.l624G>A Глутаминовая кислота (Е) на лизин (К) 760 1 Е545К С.16330А Глутаминовая кислота (Е) на лизин (К) 763 2 E545Q c.l633G>C Г лутаминовая кислота (Е) на глутамин (0) 27133 3 H1047R c.3140A>G Гистидин (Н) на аргинин (R) 775 4 H1047L c.3I40A>T Г истидин (Н) на лейцин (L) 776 5 Предупреждение: Любое непредусмотренное применение данного набора и/или модификация компонентов аннулирует ответственность компании «ЭнтроГен» (EntroGen). --- стр. 11 --- 2Х Реакционный мастер-микс IX 78,8 мкл Смесь положительных контролей ДНК, вода или образец ДНК (10 нг/мкл) 10 нг 5,25 мкл Вода без нуклеаз 42 мкл 2. Перемешать на вортексе и центрифугировать в течение 10 секунд со скоростью 8 500 об/мин. при комнатной температуре. 3. Добавить по 24 мкл мастер-микса в каждую лунку, как показано ниже. 4. Добавить 6 мкл каждой смеси праймеров/проб в соответствующую лунку, как показано ниже. 8 9 10 11 12 о Примечание: каждый образец исследуется в пяти реакциях. Одна 96-луночная ПЦР плашка может вместить до 14 неизвестных образцов, одну смесь положительных контролей и один контроль без матрицы (КБМ). 72-луночный ротор (не показан) может вместить до 12 неизвестных образцов, одну смесь положительных контролей и один контроль без матрицы (КБМ). Рекомендуемый макет плашки показан выше. 5. Перемешать смесь пипетированием несколько раз. 6. Заклетить плашку оптической герметичной пленкой. 7. Быстро центрифугировать плашку, чтобы капли на стенках стекли вниз. --- стр. 12 --- 5.3 Настройки прибора Амплификатор нуклеиновых кислот Applied Biosystems QuantStudio 5 с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в режиме реального времени Создать новый эксперимент: «Файл» (File) > «Новый эксперимент» (New Experiment) > «Расширенная настройка» (Advanced Setup). Раздел «Свойства эксперимента» 1. Ввести название эксперимента и выбрать прибор (QuantStudio 5). 2. Выберите Количественное определение (Quantitation) > - Сравнительный СТ (ДАСТ) (Comparative СТ (ДАСТ)) для типа эксперимента. 3. Выбрать реагенты TaqMan® и стандарт для типа реагентов и скорости нарастания (Ramp speed), соответственно. 4. Нажать «Настройка плашки» (Plate Setup) в левом меню навигации. Раздел «Мишени и Образцы» 5. Нажать «Добавить новую мишень» (Add New Target) и установить следующие значения, показанные в таблице ниже: Наименование Флуорофор Гаситель флуоресценции 1C VIC Без флуоресценции (NFQ) PIK3CA FAM Без фл\'оресценции (NFQ) 1. Добавить «РС» (ПК) для смеси положительных контролей, «NTC» (КБМ) для контроля без матрицы (вода), а также наименования/номера неизвестных образцов. 2. Добавить образцы и детекторы к плашке, как показано на рисунке на предыдущей странице. 3. Установить Пассивный референсный краситель (только на некоторых приборах) на «ОТСУТСТВУЕТ». 4. Создать новый метод анализа со следующими параметрами и выполнить эксперимент. Температура Время Циклы Сбор данных 95 °С 10 мин 1 95 °С 10 сек. 4060 °С 30 сек. FAM, VIC Прибор для проведения полимеразной цепной реакции в режиме реального времени Rotor-Gene Q 1. Выбрать «Файл» (File) > «Новый» (New), в диалоговом окне нажать вкладку «Расщиренные» (Advanced), выбрать «Два Этапа» (Two Step) и нажать «Новый» (New). 2. Выбрать 72-луночный ротор, отметить поле «Запирающее кольцо присоединено» (Locking Ring Attached) и нажать «Далее» (Next), затем пропустить «Мастер» (Wizard). 3. Перейти к «Вид» (View) > «Настройки анализа» (Run Settings), ввести 30 мкл для объема реакционной смеси и нажать «ОК». 10 --- стр. 13 --- 4. Перейти к «Вид» > «Редактор профиля». В поле должно быть указано два цикла; «Инкубация» (Hold) и «Циклирование» (Cycling). 5. Ввести следующие параметры этапа, нажав на каждый этап на панели справа: Инкубация 95 °С 10 минут Не требуется Циклирование 95 °С 10 секунд Не требуется Циклирование 40 циклов 60 °С 30 секунд Запрос данных для Цикла А по «Зеленой» (Green), «Желтой» (Yellow) 6. Нажать ОК. Также можно сохранить этот шаблон для дальнейшего использования с помощью кнопки «Сохранить как» (Save as) в верхней части диалогового окна. 7. Перейти к «Вид» (View) > «Оптимизация сигнала» (Gain Optimization), из раскрывающегося списка «Настройки каналов» (Channel Settings) выбрать «Все каналы» (АН Channels) и отметить поле рядом с «Провести оптимизацию перед 1-м сбором данных» (Perform Optimization Before 1st Acquisition). Примечание: этот этап необходимо выполнять только один раз для каждой новой серии реагентов. После определения параметров уве.личения необходимо использовать те же самые параметры для последующих анализов с реагентами с тем же номером серии. 8. Загрузить стрипы с пробирками в ротор. 9. Перейти к «Анализ» (Run) > «Запустить анализ» (Start Run), затем нажать кнопку «Запустить» (Start), чтобы начать анализ. Примечание: диалоговое окно «Редактировать образцы» (Edit Samples) открывается сразу после запуска анализа. Информацию об образцах можно вводить во время работы прибора или после завершения анализа. Анализатор LightCycler 480-11 для проведения ПЦР-ана, 1иза в режиме реального времени 1. В «Навигации» (Navigator) необходимо нажать «Новый» (New), чтобы запустить новый эксперимент LightCycler® 480. 2. Выбрать «Двухцветная гидролизуемая проба/UPL проба» (Dual Color Hydrolysis Probe/UPL Probe) для «Формата определения» (Detection Format). 3. Нажать «Настроить» (Customize), чтобы убедиться в том, что выбраны FAM (460- 510) и VIC/HEX/Yellow555 (533-580). 4. Изменить реакционный объем на 30 мкл. 5. Добавить следующую программу и целевые температуры: Наименование программы Циклы Режим анализа Денатурация 1 Нет Цикл 40 Количественная оценка Для этапа денатурации: Цель (°С) Режим сбора данных Длительность (чч:мм:сс) 95 Нет 00:10:00 Для этапа циклирование: --- стр. 14 --- Цель (®С) Режим сбора данных Длительность (чч:мм:сс) Скорость линейного изменения (®С/сек.) 95 Нет 00:00:10 4.4 60 Однократное 00:00:30 2.2 6 . 7. Перейти к «Редактору образца» (Sample Editor) и выбрать «Относительный количественный анализ» (Rel Quant) в качестве «Рабочего процесса» (Workflow), затем назначить образцы для плашки. Выбрать кнопку «Эксперимент» (Experiment) и нажать «Запустить анализ» (Start Run), чтобы сохранить файл и начать анализ. Термоциклер для амплификации нуклеиновых кислот 1000 с Модулем реакционным оптическим CFX96 1. В «Мастере запуска» (Startup Wizard) выбрать «Создать новый эксперимент» (Create New Experiment) и убедиться, что в раскрывающемся списке выбрано CFX96. Нажать ОК. 2. Во вкладке «Протокол» (Protocol) окна «Настройка эксперимента» (Experiment Setup) выбрать «Создать новый» (Create New) и ввести следующие параметры программы. Этап Температура Время 1 95 °С 10 мин 2 95 °С 10 сек. 3 60 °С 30 сек. 1 + чтение плашки 4 Повторить с шага 2 еще 39 раз КОНЕЦ 3. Изменить объем образца на 30 мкл. 4. После завершения нажать «ОК», чтобы сохранить шаблон протокола. Обратить внимание на расположение сохраняемого файла шаблона, чтобы использовать его для последующих анализов. Нажать «Дальше» (Next), чтобы перейти к окну «Настройка плашки» (Plate Setup). Во вкладке «Плашка» (Plate) нажать «Создать новый» (Create New), чтобы создать макет плашки. Нажать на кнопку «Выбрать флуорофоры» (Select Fluorophores) и отметить поля рядом с FAM и VIC. Все другие поля должны остаться не отмеченными. Нажать ОК. Ввести наименования образцов, как показано выше на макете плашки. Выбрать каждый образец по отдельности (начиная с первого неизвестного образца) и напечатать наименование образца в поле «Имя образца» (Sample Name). После этого нажать клавишу «Ввод» (Enter) на клавиатуре, чтобы записать наименование образца. Выполнить этот этап для каждого образца. Нажать на «Настройки» (Settings) и выбрать тип используемой плашки (например, BR Белая (White) или BR Прозрачная (Clear)). 10. После этого нажать кнопку ОК, чтобы сохранить макет плашки. 11. Нажать «Дальше» (Next), затем нажать «Запустить анализ» (Start Run), чтобы начать анализ. 9. 12 --- стр. 15 --- ! 1 6. Ана. 1из данных 6.1 Интерпретация результатов Важно: пороговые значения могут корректироваться с учетом индивидуальных флуоресцентных характеристик амплификатора. Амплификатор нуклеиновых кислот Applied Biosystems QuantStudio 5 с гибридизационно-флуоресиентной детекцией продлктов ПЦР в режиме реального времени Проанализировать данные программным обеспечение прибора для ПЦР в режиме реального времени, используя следующие критерии: • Manual threshold (Ручное пороговое значение): РАМ: 100 000; V1C: 20 000 • Auto baseline (Автоматические исходные данные) Прибор для проведения полимеразной цепной реакции в режиме реального времени Rotor-Gene Q Проанализировать данные программным обеспечением прибора для ПЦР в режиме реального времени, используя следующие критерии: • Динамическое изменение кривизны (Dynamic Tube): вкл. • Поправка наклона (Slope Correct): вкл. • Пороговое значение зеленого канала (Green Channel Threshold): 0,06 • Пороговое значение желтого канала (Yellow Channel Threshold): 0,06 Компенсация шумов может быть установлена на уровне от 2% до 5% для удаления фоновых сигналов, которые могут препятствовать анализу. Анализатор LightCycler 480-11 для проведения ПЦР-анализа в режиме реального времени. Проанализировать данные программным обеспечением прибора для ПЦР в режиме реального времени, используя следующие критерии: • Abs Quant/2nd Derivative Max (Абсолютное количественное определение/максимальная 2-я производная) для всех образцов Примечание: использовать Abs Quant/Fit Point (Абсолютную количественную оценку/Базовые точки) для всех образцов для определения значения Ср сигналов выше 35.0. . Термоциклер для амплификации нуклеиновых кислот 1000 с Модулем реакционным оптическим CFX96 Проанализировать данные программным обеспечением прибора для ПЦР в режиме реального времени, используя следующие критерии: • "Ct (Cq) Determination Mode" (Режим определения Ct): "Single Threshold" (Одиночное пороговое значение). • "Baseline Setting" (Настройки исходных данных): "Baseline Subtracted Curve Fit" (Подбор кривой с вычетом исходных условий). • Baseline and Threshold (Исходные данные и пороговое значение): Auto Calculated (Рассчитано автоматически). 1 3 --- стр. 16 --- Приведенные ниже инструкции применимы для всех приборов. 1. Проверьте график амплификации внутреннего контроля (IC/Yellow/VIC) каждого образца, выбрав все 5 лунок реакционной плашки. Ст должен быть аналогичным во всех 5 реакциях с каждым образцом. Однако данное значение в большей степени зависит от количества амплифицируемой ДНК в каждой реакции и может различаться в отдельных FFPE образцах в силу фрагментации ДНК. Нормальный диапазон для 1C Ст для FFPE образцов перечислен в таблице ниже. 2. Выбрать лунки с положительным контролем и проверить каждый канал FAM на наличие сигнала. 3. Выбрать все 5 реакционных лунок с каждым неизвестным образцом поочередно и проверить каналы FAM на наличие сигнала. Отсутствие сигнала означает, что образец не содержит мутацию, соответствуюшую выбранному каналу. Поскольку FFPE образцы могут содержать разное количество опухолевых клеток, значения Ст для образцов с мутацией могут значительно различаться. Образец с мутацией с более высоким содержанием опухолевых ДНК будет иметь меньшие значения Ст, в то время как образцы с мутацией с более низким содержанием опухолевых ДНК будут иметь большие значения Ст. Прибор для проведения полимеразной цепной реакции в режиме реального времени Rotor-Gene Q РАМ®/зеленый Ct: VIC/желтый Ct: Статус мутации любой <24,5 Избыточная начальная концентрация. Повторный анализ с меньшим количеством ДНК, чтобы значение VIC находилось в допустимом диапазоне (24,5-27,5). 35 24.5 ^ VIC ^ 27,5 Положительный >35 или отсутствует Отрицательный любой >27,5 Недостаточная начальная концентрация. Повторный анализ с большим количеством ДНК, чтобы значение VIC находилось в допустимом диапазоне (24,5-27,5). (I Для всех остальных приборов: РАМ®/зеленый Ct: VIC/желтый Ct: Статус мутации < 38 ^ 25 Положительный < 38 25 Избыточная начальная концентрация. Повторный анализ с меньшим количеством ДНК, чтобы значение VIC находилось в допустимом диапазоне (25-31). ^ 38,01 или отсу тству ет ^ 31 Отрицательный ^ 38,01 и ли отсу тству ет ^ 31 Недостаточная начальная концентрация. Повторный анализ с большим количеством ДНК, чтобы значение VIC находилось в допустимом диапазоне (25-31). 14 --- стр. 17 --- SI --- стр. 18 --- 7. Рабочие и диагностические характеристики изделия Рабочие характеристики Характеристика Реакция Мутация Репортер Значение Предел обнаружения 1 Е542К РАМ 1,5% 2 Е545К РАМ 1,2% 3 E545Q РАМ 1,5% 4 HI047R РАМ 1,7% 5 HI047L РАМ 1,5% Характеристика Реакция Мутация Значение Аналитическая специфичность 1 Е542К Образцы считали положительный статус мутации, если соответствующая реакция давала2 Е545К 3 E545Q значение Ct FAM ^38.0 с диапазоном Ct VIC от 25.0 до 31.0. Значение VIC Ct ниже 25.04 H1047R 5 H1047L считается избыточной начальной концентрацией, а значение выше 31.0 - недостаточной начальной концентрацией, и оба условия дают неверный результат. Характеристика Реакция Мутация Значение Прецизионность 1 Е542К Для всех приборов, кроме Rotor-Gene Q: РАМ 2 Е545К S 38 и VIC ^ 25 3 E545Q Для Rotor-Gene Q: 4 H1047R РАМ ^ 35 и 24.5 ^ VIC < 27.5 5 H1047L CV < 5 % < 1 Диагностические характеристики Характеристика Значение Диагностическая чувствительность 100 % (15/15 Ско5% 79,61-100) 16 --- стр. 19 --- 8. Приложения 8.1 Диагностика и устранение неисправностей Проблема: Раствор: Сигнал внутреннего контроля (VIC) для образца имеет значение Ct выше, чем верхнее пороговое значение Ct, указанное в разделе 6. Если положительный целевой сигнал (например, РАМ) возникает до порогового значения Cl, значит образец является мутантным (положительный статус). См. таблицу Ст в разделе 6. Если целевой сигнал возникает после порогового значения или не возникает, реакция была недостаточно насыщена (недостаточно ДНК), необходимо провести повторный анализ с большим количеством ДНК. Если анализ образца, в котором, точно имеются ингибиторы ПЦР (например, образцы меланомы имеют меланин, который является ингибитором ПЦР), необходимо провести повторный анализ образца с меньшим количеством ДНК или разбавить образец водой в соотношении 1:5 и повторно провести анализ. Если увеличение/уменьшение объема ДНК не решает проблему: 1. Выделить ДНК заново (при возможности). 2. Переосадить этанолом и вновь ресуспендировать в .меньшем объеме растворителя. 3. Использовать коммерчески досту'пный концентратор ДНК._____________________ Целевой и внутренний контрольные сигналы являются отрицательными для положительного контроля (ПК). Реагенты могут деградировать. Для получения дополнительной информации необходимо связаться со своим поставщиком. Во избежание последующих сбоев в работе реагента необходимо выполнять инструкции по хранению и обращению, которые содержатся в разделе 2.2 ИПП.___________________________ Аномальный пик на графике усиления образца с помощью прибора Life Technologies. Fluorescence (465-510) Cycle______________ Флуоресценция (465-510) Цикл_________________ Аномальная линия пика может быть результатом пузырьков в лунке, содержащей образец. Центрифугировать плашку перед выполнением анализа образца. Аномальный пик может быть ошибкой детекции флуоресценции прибором. Провести повторный анализ другой плашки, чтобы убедиться в отсутствии воспроизводимости. Если пик воспроизводится необходимо связаться с производителем прибора. Сигнал в контроле КБМ. Отображается контаминация. Оценить лабораторную процедуру. Предложения по сведению к минимуму загрязнения рабочей поверхности см. в разделе 2,5 настоящей инструкции. При наличии только сигнала внутреннего контроля и значении Ct > 36 результаты могут быть использованы для определения статуса мутации образца. При наличии только целевого сигнала результаты могут давать ложно-положительный результат и требуется повторный анализ. _______ 17 --- стр. 20 --- При наличии целевого сигнала и сигнала внутреннего контроля результаты могут давать ложно-положительный результат и требуется повторный анализ._________________________ Целевой сигнал пересекает пороговое значение для образцов КБМ при проведении анализа на приборе Life Technologies. Amplification Plot Cycle____________ График амичификации Цикл_________________ Обеспечить установк) ручных пороговых значений, предложенных в настоящей инструкции. Убедиться в том. что сигнал не является истинной амплификацией путем проверки сигнала на многокомпонентном графике (приборы Life Technologies). Если сигнал горизонтальный, то это не истинная амплификация. Если сигнал на многокомпонентном графике яв.ляется линейным и сигна.1 пересекает пороговое значение необходимо отрегу лировать базовый конечный цикл. Установить нача. 1ьный цикл на: 3 и остановить: самый ранний цикл VIC Ct (если сигнал по-прежнему пересекает пороговое значение, увеличивать число циклов с шагом 3 до тех пор. пока сигнал не перестанет пересекать пороговое значение). Образец дикого типа имеет значение Ct целевого сигнала, которое попадает в параметры для статуса положительной мутации. Если сигнал внутреннего контроля находится в пределах диапазона, тогда образец дикого типа имеет контаминацию мутантным образцом или положительным контролем. Провести анализ повторно с новым образцом дикого типа. Также В03.М0ЖН0. что образец дикого типа не яв.ляется истинным диким типом. 1 8 --- стр. 21 --- 9. Справочная литература 1. Самюэльс Я. и соавт. Мутировавший ген PIK3CA способствуют клеточному росту и инвазии раковых клеток человека. Раковая клетка. 2005 г.; 7:561-73 (Samuels Y. et al., Mutant PIK3CA promotes cell growth and invasion of human cancer cells. Cancer Cell. 2005;7:561-73). 2. Хуан JT. и соавт. Терапия метастатического колоректального рака анти — EGFR (рецептор эпидермального фактора роста) моноклональными антителами: мета анализ воздействия мутаций гена PIK3CA у пациентов с геном KRAS дикого типа. Архивы медицинской науки, 24 февраля 2014 г.; 10(1): 1-9 (Huang L. etal., Anti- epidermal growth factor receptor monoclonal antibody-based therapy for metastatic colorectal cancer: a meta-analysis of the effect of PIK3CA mutations in KRAS wild-type patients. Arch Med Sci. 2014 Feb 24;10(l):l-9). 3. Андре Ф. и соавт. Алпелисиб в отношении гормон-рецептор-положительного распространенный рака молочной железы с мутировавшим геном PIK3CA, Медицинский журнал Новой Англии, 2019 г.; 380:1929-1940 (Andre F. et al., Alpelisib for R/^iC4-Mutated, Hormone Receptor Positive Advanced Breast Cancer. N Eng J Med. 2019; 380:1929-1940). 19 --- стр. 22 --- --- стр. 23 --- Приведенные ниже символы, используемые на маркировке и упаковке данного изделия, отвечают требованиям гармонизированного стандарта EN980. 10. Используемые символы 11. Комплект поставки Комплект поставки медицинского изделия: 20 --- стр. 24 --- Набор реагентов для in vitro диагностики наличия мутаций гена PIK3CA методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени в образцах пациентов, фиксированных в формалине и залитых в парафин. 48 реакций, в составе: 1. Реакционная смесь для определения мутации (2Х), 3 пробирки 2. Смесь праймеров/проб PIK3CA, 5 пробирок 3. Смесь положительных контролей PIK3CA. 1 пробирка 4. Краткая инструкция (при необходимости) 2 1 --- стр. 25 --- 12. Примечание для поку пателя 12.1 Условия гарантии Компания «ЭнтроГен» гарантирует, что данные Изделия не имеют дефектов ни в компонентах, ни в производств и соответствуют спецификациям компании «ЭнтроГен» на момент отгрузки. В соответствии с результатами верификации, проведенной компанией «ЭнтроГен», и на основании письменного уведомления Заказчиком, если какое-либо Изделие не соответствует спецификациям, или обнаруживаются дефекты в компонентах или производстве в течение 30 дней с даты отгрузки, компания «ЭнтроГен» несет полную ответственность, а Заказчик получает исключительную компенсацию в виде проведения ремонта или замены дефектных Изделий, на усмотрение компании «ЭнтроГен»). 12.2 Ограничение гарантийных обязательств Данная гарантия не покрывает какое-либо повреждение Изделий при неправильном применении, неправильном выборе места эксплуатации или использовании Изделий Заказчиком или другими лицами не в соответствии с рекомендуемой инструкцией по применению и параметрами конструкции Изделий. Данная гарантия не распространяется на повреждение или дефекты, вызванные в результате проведения ремонтных работ или перемещения Изделий лицами, не являющимися представителями компании «ЭнтроГен» более того, данное изделие предназначено для проведения реакций с указанной аналитической чувствительностью с учето.м того, что используемая ДНК не является сильно фрагментированной и не содержит материалы, которые могут ингибировать реакцию амплификации. Данная гарантия не распространяется на повреждение, возникшее в результате несчастных случаев, актов вандализма, пожара, потопа и других факторов внещней среды, а также форс-мажора. Кроме того, данная гарантия не включает в себя изделия, поставляемые сторонними производителями, например, компьютеры и соответствующее программное обеспечение. По всем вопросам, касающимся гарантии, обращайтесь в Клиентскую службу компании «ЭнтроГен». ДАННАЯ ГАРАНТИЯ СОСТАВЛЕНА ВЗАМЕН ВСЕХ ПРОЧИХ ГАРАНТИЙ, ЧЕТКО ВЫРАЖЕННЫХ ИЛИ ПОДРАЗУМЕВАЕМЫХ, ВКЛЮЧАЯ, ПОМИМО ПРОЧЕГО, КОСВЕННУЮ ГАРАНТИЮ КОММЕРЧЕСКОЙ ПРИГОДНОСТИ ИЛИ ПРИГОДНОСТИ ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ п о НАЗНАЧЕНИЮ, ЛЮБУЮ ГАРАНТИЮ, ПРОИСТЕКАЮЩУЮ ИЗ УСТАНОВИВШЕГОСЯ ПОРЯДКА ВЕДЕНИЯ ДЕЛ ИЛИ ЗАВЕДЕННОГО ПОРЯДКА, ОБЫЧАЯ ИЛИ УЗАНЦИЯ, А ТАКЖЕ КОСВЕННУЮ ГАРАНТИЮ О НЕНАРУШЕНИИ ПАТЕНТОВ. НИ ПРИ КАКИХ ОБСТОЯТЕЛЬСТВАХ КОМПАНИЯ «ЭНТРОГЕН» НЕ НЕСЕТ ОТВЕТСТВЕННОСТЬ ЗА УЩЕРБ ЛЮБОГО ХАРАКТЕРА, ВКЛЮЧАЯ, ПОМИМО ПРОЧЕГО, ПРЯМОЙ, КОСВЕННЫЙ, СЛУЧАЙНЫЙ, УМЫШЛЕННЫЙ ИЛИ СОПУТСТВУЮЩИЙ УЩЕРБ (ВКЛЮЧАЯ, ПОМИМО ПРОЧЕГО, УПУЩЕННУЮ ВЫГОДУ, ПОТЕРЮ ВЫРУЧКИ или БИЗНЕСА), ВОЗНИКАЮЩИЙ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ИЗДЕЛИЙ ИЛИ СВЯЗАННЫЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДАННЫХ ИЗДЕЛИЙ. 22 --- стр. 26 --- 12.3 Интеллектуальная собственность Данное Изделие является продуктом материальной и интеллектуальной собственности и ноу-хау, разработанными компанией «ЭнтроГен, Инк.» (EntroGen, Inc.) и предоставляется организации заказчика (Заказчик) исключительно для проведения молекулярного диагностического анализа с целью определения целевых мутаций с использованием технологии и методов компании «ЭнтроГен», перечисленных и описанных в прилагаемом Рукоюдстве по эксплуатации изделия. Использование данного Изделия или его компонентов способом, не предусмотренным Руководством по эксплуатации изделия, категорически запрещено компанией «ЭнтроГен». Вскрывая контейнер с Изделием, Заказчик соглашается не раскрывать технологии любых поставляемых компонентов Изделия компании «ЭнтроГен». включая праймеры и пробы, а также не подвергать компоненты Изделия компании «ЭнтроГен» или полученные продукты какому-либо анализу с целью создания схожей технологии, независимо от ее целевого назначения. Кроме того. Заказчик соглашается не перепродавать данное Изделие или его компоненты третьим лицам без письменного разрешения компании «ЭнтроГен». Заказчик обязуется сохранить конфиденциальность информаци, содержащейся в Руководстве по эксплуатации изделия, и относиться к ней, как к коммерческой тайне компании «ЭнтроГен». Если Заказчик не согласен с описанными выше условиями использования, он должен вернуть неиспользованное Изделие компании «ЭнтроГен» с возвратом денежных средств в полном объеме. Патентные права на проведение Процедуры с нуклеазой 5’ не передаются явным, косвенными или на основе правовой презумпции покупателю при приобретении данного Изделия. Дополнительные лицензии и (или) разрешения могут потребоваться для проведения определенных этапов количественного анализа. Ответственность за получение таких лицензий у держателя патента возлагается на покупателя/конечного пользователя. 2 3 --- стр. 35 --- Реагенты Конечная концентрац ИЯ Объем для каждого образца 2Х Реакционный мастер-микс IX 78,8 мкл Смесь положительных контролей ДНК, вода или образец ДНК (10 нг/мкл) 10 нг 5,25 мкл Вода без нуклеаз 42 мкл 2. Перемешать на вортексе и центрифугировать в течение 10 секунд со скоростью 8 500 об/мин. при комнатной температуре. 3. Добавить по 24 мкл мастер-микса в каждую лунку, как показано ниже. 4. Добавить 6 мкл каждой смеси праймеров/проб в соответствующую лунку, как показано ниже. Примечание: каждый образец исследуется в пяти реакциях. Одна 96-луночная ПЦР плашка может вместить до 14 неизвестных образцов, одну смесь положительных контролей и один контроль без матрицы (КБМ). 72-луночный ротор (не показан) может вместить до 12 неизвестных образцов, одну смесь положительных контролей и один контроль без матрицы (КБМ). Рекомендуемый макет плашки показан выше. 5. Перемешать смесь пипетированием несколько раз. 6. Заклетить плашку оптической герметичной пленкой. 7. Быстро центрифугировать плашку, чтобы капли на стенках стекли вниз. --- стр. 36 --- 4.3 Настройки прибора Амплификатор нуклеиновых кислот Applied Biosystems QuantStudio 5 с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в режиме реального времени Создать новый эксперимент: «Файл» (File) > «Новый эксперимент» (New Experiment) > «Расширенная настройка» (Advanced Setup). Раздел «Свойства эксперимента» 1. Ввести название эксперимента и выбрать прибор (QuantStudio 5). 2. Выберите Количественное определение (Quantitation) > - Сравнительный СТ (ДАСТ) (Comparative СТ (ДАСТ)) для типа эксперимента. 3. Выбрать реагенты TaqMan® и стандарт для типа реагентов и скорости нарастания (Ramp speed), соответственно. 4. Нажать «Настройка плашки» (Plate Setup) в левом меню навигации. Раздел «Мишени и Образцы» 5. Нажать «Добавить новую мишень» (Add New Target) и установить следующие значения, показанные в таблице ниже: Наименование Флуорофо р Гасите. 1ь флуоресценции 1C VIC Без флуоресценции (NFQ) PIK3CA FAM Без флуоресценции (NFQ) 1. Добавить «РС» (ПК) для смеси положительных контролей, «NTC» (КБМ) для контроля без матрицы (вода), а также наименования/номера неизвестных образцов. 2. Добавить образцы и детекторы к плашке, как показано на рисунке на предыдущей странице. 3. Установить Пассивный референсный краситель (только на некоторых приборах) на «ОТСУТСТВУЕТ». 4. Создать новый метод анализа со следующими параметрами и выполнить эксперимент. Температура Врем Цик Сбор данных я лы 95 °С 10 мин 1 95 °С 10 сек. 4060 °С 30 FAM, VIC сек. Прибор для проведения полимеразной цепной реакции в режиме реального времени Rotor-Gene Q --- стр. 37 --- 1. Выбрать «Файл» (File) > «Новый» (New), в диалоговом окне нажать вкладку «Расширенные» (Advanced), выбрать «Два Этапа» (Two Step) и нажать «Новый» (New). 2. Выбрать 72-луночный ротор, отметить поле «Запирающее кольцо присоединено» (Locking Ring Attached) и нажать «Далее» (Next), затем пропустить «Мастер» (Wizard). 3. Перейти к «Вид» (View) > «Настройки анализа» (Run Settings), ввести 30 мкл для объема реакционной смеси и нажать «ОК». 4. Перейти к «Вид» > «Редактор профиля». В поле должно быть указано два цикла; «Инкубация» (Hold) и «Циклирование» (Cycling). 5. Ввести следующие параметры этапа, нажав на каждый этап на панели справа: Инкубация 9 5 О с 10 минут Не требуется Циклирован 9 10 Не требуется не 5 О секунд с Циклирован 6 Запрос данных для Цикла не 40 циклов 0 30 А по «Зеленой» (Green), О секунд «Желтой» (Yellow) с 6. 7. 8. 9. Нажать ОК. Также можно сохранить этот шаблон для дальнейшего использования с помощью кнопки «Сохранить как» (Save as) в верхней части диалогового окна. Перейти к «Вид» (View) > «Оптимизация сигнала» (Gain Optimization), из раскрывающегося списка «Настройки каналов» (Channel Settings) выбрать «Все каналы» (АН Channels) и отметить поле рядом с «Провести оптимизацию перед 1-м сбором данных» (Perform Optimization Before 1st Acquisition). Примечание: этот этап необходимо выполнять только один раз для каждой новой серии реагентов. После определения параметров увеличения необходимо использовать те же самые параметры для последующих анализов с реагентами с тем же номером серии. Загрузить стрипы с пробирками в ротор. Перейти к «Анализ» (Run) > «Запустить анализ» (Start Run), затем нажать кнопку «Запустить» (Start), чтобы начать анализ. Примечание: диалоговое окно «Редактировать образцы» (Edit Samples) открьшается сразу после запуска анализа. Информацию об образцах можно вводить во время работы прибора или после завершения анализа. Анализатор LightCycler 480-11 для проведения ПЦР-анализа в режиме реального времени 1. В «Навигации» (Navigator) необходимо нажать «Новый» (New), чтобы запустить новый эксперимент LightCycler® 480. 2. Выбрать «Двухцветная гидролизуемая проба/UPL проба» (Dual Color Hydrolysis Probe/UPL Probe) для «Формата определения» (Detection Format). 10 --- стр. 38 --- 3. Нажать «Настроить» (Customize), чтобы убедиться в том, что выбраны FAM (460- 510) и VIC/HEXA^ellow555 (533-580). 4. Изменить реакционный объем на 30 мкл. 5. Добавить следующую программу и целевые температуры: Наименование программы Ци кл ы Режим анализа Денатурация 1 Нет Цикл 40 Количественна я оценка Для этапа денатурации: Цель (®С) Режим сбора данных Длительность (чч:мм:сс) 95 Нет 00:10:00 Для этапа циклирование: Цель (°С) Режим сбора данных Длительное ть (чч:мм:сс) Скорость линейного изменения (®С/сек.) 95 Нет 00:00:10 4.4 60 Однократное 00:00:30 2.2 6. 7. Перейти к «Редактору образца» (Sample Editor) и выбрать «Относительный количественный анализ» (Rel Quant) в качестве «Рабочего процесса» (Workflow), затем назначить образцы для плашки. Выбрать кнопку «Эксперимент» (Experiment) и нажать «Запустить анализ» (Start Run), чтобы сохранить файл и начать анализ. Термоциклер для амплификации нуклеиновых кислот 1000 с Модулем реакционным оптическим CFX96 1. В «Мастере запуска» (Startup Wizard) выбрать «Создать новый эксперимент» (Create New Experiment) и убедиться, что в раскрывающемся списке выбрано CFX96. Нажать ОК. 2. Во вкладке «Протокол» (Protocol) окна «Настройка эксперимента» (Experiment Setup) выбрать «Создать новый» (Create New) и ввести следующие параметры программы. Этап Температура Время 1 95 °С 10 мин 2 95 °С 10 сек. 3 60 °с 30 сек. + чтение плашки 4 Повторить с щага 2 еще 39 раз 1 1 --- стр. 39 --- КОНЕЦ 3. Изменить объем образца на 30 micji. 4. После завершения нажать «ОК», чтобы сохранить шаблон протокола. Обратить внимание на расположение сохраняемого файла шаблона, чтобы использовать его для последующих анализов. Нажать «Дальше» (Next), чтобы перейти к окну «Настройка плашки» (Plate Setup). Во вкладке «Плашка» (Plate) нажать «Создать новый» (Create New), чтобы создать макет плашки. Нажать на кнопку «Выбрать флуорофоры» (Select Fluorophores) и отметить поля рядом с FAM и VIC. Все другие поля должны остаться не отмеченньтми. Нажать ОК. Ввести наименования образцов, как показано выше на макете плашки. Выбрать каждый образец по отдельности (начиная с первого неизвестного образца) и напечатать наименование образца в поле «Имя образца» (Sample Name). После этого нажать клавишу «Ввод» (Enter) на клавиатуре, чтобы записать наименование образца. Выполнить этот этап для каждого образца. Нажать на «Настройки» (Settings) и выбрать тип используемой плашки (например, BR Белая (White) или BR Прозрачная (Clear)). 10. После этого нажать кнопку ОК, чтобы сохранить макет плашки. 11. Нажать «Дальше» (Next), затем нажать «Запустить анализ» (Start Run), чтобы начать анализ. 9. 1 2 --- стр. 40 --- 5. Ана. 1из данных 5.1 Интерпретация результатов Важно: пороговые значения могут корректироваться с учетом индивидуазьных флуоресцентных характеристик амплификатора. Канал VIC/HEX отражает амплификацию внутреннего контрольного гена, который используется для определения состояния реагентов и содержания достаточного количества ДНК в реакции. Амплификатор нуклеиновых кислот Applied Biosystems QuantStudio 5 с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в режиме реального времени Проанализировать данные программным обеспечение прибора для ПЦР в режиме реального времени, используя следующие критерии: • Manual threshold (Ручное пороговое значение): РАМ: 100 000; VIC: 20 000 • Auto baseline (Автоматические исходные данные) Прибор для проведения полимеразной цепной реакции в режиме реального времени Rotor-Gene Q Проанализировать данные программным обеспечением прибора для ПЦР в режиме реального времени, используя следующие критерии: • Динамическое изменение кривизны (Dynamic Tube): вкл. • Поправка наклона (Slope Correct): вкл. • Пороговое значение зеленого канала (Green Channel Threshold): 0,06 • Пороговое значение желтого канала (Yellow Channel Threshold): 0,06 Компенсация шумов может быть установлена на уровне от 2% до 5% для удаления фоновых сигналов, которые могут препятствовать анализу. Анализатор LightCycler 480-11 для проведения ПЦР-анализа в режиме реального времени. Проанализировать данные программным обеспечением прибора для ПЦР в режиме реального времени, используя следующие критерии: • Abs Quant/2nd Derivative Max (Абсолютное количественное определение/максимальная 2-я производная) для всех образцов Примечание: использовать Abs Quant/Fit Point (Абсолютную количественную оценку/Базовые точки) для всех образцов для определения значения Ср сигналов выше 35.0. Термоциклер для амплификации нуклеиновых кислот 1000 с Модулем реакционным оптическим CFX96 Проанализировать данные программным обеспечением прибора для ПЦР в режиме реального времени, используя следующие критерии: • "Ct (Cq) Determination Mode” (Режим определения Ct): "Single Threshold" (Одиночное пороговое значение). 1 3 --- стр. 41 --- • "Baseline Setting" (Настройки исходных данных): "Baseline Subtracted Curve Fit" (Подбор кривой с вычетом исходных условий). • Baseline and Threshold (Исходные данные и пороговое значение): Auto Calculated (Рассчитано автоматически). Приведенные ниже инструкции применимы для всех приборов. 1. Проверьте график амплификации внутреннего контроля (IC/Yellow/VIC) каждого образца, выбрав все 5 лунок реакционной плашки. Ст должен быть аналогичным во всех 5 реакциях с каждым образцом. Однако данное значение в большей степени зависит от количества амплифицируемой ДНК в каждой реакции и может различаться в отдельных FFPE образцах в силу фрагментации ДНК. Нормальный диапазон для 1C Ст для FFPE образцов перечислен в таблице ниже. 2. Выбрать лунки с положительным контролем и проверить каждый канал FAM на наличие сигнала. 3. Выбрать все 5 реакционных лунок с каждым неизвестным образцом поочередно и проверить каналы FAM на наличие сигнала. Отсутствие сигнала означает, что образец не содержит мутацию, соответствуюшую выбранному каналу. Поскольку FFPE образцы могут содержать разное количество опухолевых клеток, значения Ст для образцов с мутацией могут значительно различаться. Образец с мутацией с более высоким содержанием опухолевых ДНК будет иметь меньшие значения Ст, в то время как образцы с мутацией с более низким содержанием опухолевых ДНК будут иметь большие значения Ст. Прибор для проведения полимеразной цепной реакции в режиме реального времени Rotor-Gene Q ГАМ®/зелены й Ct: VIC/желтый Ct: Статус мутации любой <24,5 Избыточная начальная концентрация. Повторный анализ с меньшим количеством ДНК, чтобы значение VIC находилось в допустимом диапазоне (24,5- 27,5). < 35 24,5 ^ VIC < 27,5 Положительный > 35 или отсутствует Отрицательный любой >27,5 Недостаточная начальная концентрация. Повторный анализ с большим количеством ДНК, чтобы значение VIC находилось в допустимом диапазоне (24.5- 27,5). Для всех остальных приборов: КАМ®/зелены й Ct: VIC/желтый Ct: Статус мутации ^ 38 ^ 25 Положительный 1 4 --- стр. 43 --- 6. ГТрнложения 6.1 Диаг ностика и устранение неисправностей Проблема: Раствор: Сигнал внутреннего контроля (VIC) для образна имеет значение Ct выше, чем верхнее пороговое значение Ct, указанное в разделе 6. Если положительный целевой сигнал (например. РАМ) возникает до порогового значения Cl, значит образец является мутантным (положительный статус). См. табли!^' Ct в разделе 6. Если целевой сигнал возникает после порогового значения или не возникает, реакция была недостаточно насыщена (недостаточно ДНК), необходимо провести повторный анализ с большим количеством ДНК. Если анализ образца, в котором, точно имеются ингибиторы ГЩР (например, образцы меланомы имеют меланин, который является ингибитором ПЦР). необ.ходимо провести повторный анализ образца с меньшим количеством ДНК или разбавить образец водой в соотношении 1:5 и повторно провести анализ. Если увеличение/уменьшение объема ДНК не решает проблему: 1. Выделить ДНК заново (при возможности). 2. Переосадить этанолом и вновь ресуспендировать в меньшем объеме растворителя. 3. Использовать коммерчески доступный концентратор ДНК.____________________ Целевой и внутренний контрольные сигналы являются отрицательными для положительного контроля (ПК). Реагенты могу т деградировать. Дтя получения дополнительной инфор.маиии необходимо связаться со своим поставшико.м. Во избежание последующих сбоев в работе реагента необходимо выполнять инструкции по хранению и обращению, которые содержатся в разделе 2.2 ИПП, ______________ Аномальный пик на графике усиления образца с помощью прибора Life Technologies. Аномальная линия пика может быть результатом пузырьков в лунке, содержащей образец. Центрифугировать плашк}' перед выполнением анализа образца. Аномальный пик может быть ошибкой детекции флуоресценции прибором. Провести повторный анализ другой плашки, чтобы убедиться в отсутствии воспроизводимости. Если пик воспроизводится необходимо связаться с производителем прибора. Fluorescence (465- 510) Cycle__________ Ф.тус^сценция (465-510) Цик1_______________ Сигнал в контроле КБМ, Отображается контаминация. Оценить лабораторную проиед>'ру. Предложения по сведению к минимуму загрязнения рабочей поверхности см. в разделе 2.5 настоящей инструкции. При наличии только сигнала внутреннего контроля и значении Ct > 36 результаты могут быть использованы для определения статуса мутации образца.__________________________ 16 --- стр. 44 --- при наличии только целевого сигнала результаты могут лавать ложно положительный результат и требуется повторный анализ. При наличии целевого сигнала и сигнала внутреннего контроля результаты могут давать ложно-положительный результат и требуется повторный анализ.________________ Целевой сигнал пересекает пороговое значение для образцов КБМ при проведении анализа на приборе Life Technologies. I Amplification Plot Cycle__________ График амплификации Цикл_______________ Обеспечить установку ручных пороговых значений, предложенных в настоящей инструкции. Убедиться в том. что сигна .1 не является истинной амплификацией путем проверки сигнала на многокомпонентном графике (приборы Life Technologies). Если сигнал горизонтальный, то это не истинная амплификация. Если сигнал на многокомпонентном графике яв.тяется линейным и сигнал пересекает пороговое значение необходимо отрегулировать базовый конечный цикл. Установить начальный цикл на: 3 и остановить: самый ранний цикл V1C Ct (если сигнал по-прежнему пересекает пороговое значение, увеличивать число циклов с шагом 3 до тех пор, пока сигнал не перестанет пересекать пороговое значение). Образец дикого типа имеет значение Cl целевого сигнала которое попадает в параметры для статуса по.ложительной мутации. Если сигнал внутреннего контроля находится в пределах диапазона тогда образец дикого типа имеет контаминацию мутантным образцом или положительным контролем. Провести анализ повторно с новым образцо.м дикого типа. Также возможно, что образец дикого типа не является истинным диким типом. 17 --- стр. 45 --- 7. Используемые символы Приведенные ниже символы, используемые на маркировке и упаковке данного изделия, отвечают требованиям гармонизированного стандарта EN980. 1 8 --- стр. 46 --- 8. Примечание для покупателя 8.1 Условия гарантии Компания «ЭнтроГен» гарантирует, что данные Изделия не имеют дефектов ни в компонентах, ни в производств и соответствуют спецификациям компании «ЭнтроГен» на момент отгрузки. В соответствии с результатами верификации, проведенной компанией «ЭнтроГен», и на основании письменного уведомления Заказчиком, если какое-либо Изделие не соответствует спецификациям, или обнаруживаются дефекты в компонентах или производстве в течение 30 дней с даты отгрузки, компания «ЭнтроГен» несет полную ответственность, а Заказчик получает исключительную компенсацию в виде проведения ремонта или замены дефектных Изделий, на усмотрение компании «ЭнтроГен»). 8.2 Ограничение гарантийных обязательств I Данная гарантия не покрывает какое-либо повреждение Изделий при неправильном применении, неправильном выборе места эксплуатации или использовании Изделий Заказчиком или другими лицами не в соответствии с рекомендуемой инструкцией по применению и параметрами конструкции Изделий. Данная гарантия не распространяется на повреждение или дефекты, вызванные в результате проведения ремонтных работ или перемещения Изделий лицами, не являющимися представителями компании «ЭнтроГен» более того, данное изделие предназначено для проведения реакций с указанной аналитической чувствительностью с учетом того, что используемая ДНК не является сильно фрагментированной и не содержит материалы, которые могут ингибировать реакцию амплификации. Данная гарантия не распространяется на повреждение, возникшее в результате несчастных случаев, актов вандализма, пожара, потопа и других факторов внешней среды, а также форс-мажора. Кроме того, данная гарантия не включает в себя изделия, поставляемые сторонними производителями, например, компьютеры и соответствующее программное обеспечение. По всем вопросам, касающимся гарантии, обращайтесь в Клиентскую службу компании «ЭнтроГен». I ДАННАЯ ГАРАНТИЯ СОСТАВЛЕНА ВЗАМЕН ВСЕХ ПРОЧИХ ГАРАНТИЙ, ЧЕТКО ВЫРАЖЕННЫХ ИЛИ ПОДРАЗУМЕВАЕМЫХ, ВКЛЮЧАЯ, ПОМИМО ПРОЧЕГО, КОСВЕННУЮ ГАРАНТИЮ КОММЕРЧЕСКОЙ ПРИГОДНОСТИ ИЛИ ПРИГОДНОСТИ ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ по НАЗНАЧЕНИЮ, ЛЮБУЮ ГАРАНТИЮ, ПРОИСТЕКАЮЩУЮ ИЗ УСТАНОВИВШЕГОСЯ ПОРЯДКА ВЕДЕНИЯ ДЕЛ ИЛИ ЗАВЕДЕННОГО ПОРЯДКА, ОБЫЧАЯ ИЛИ УЗАНЦИЯ, А ТАКЖЕ КОСВЕННУЮ ГАРАНТИЮ О НЕНАРУШЕНИИ ПАТЕНТОВ. НИ ПРИ КАКИХ ОБСТОЯТЕЛЬСТВАХ КОМПАНИЯ «ЭНТРОГЕН» НЕ НЕСЕТ ОТВЕТСТВЕННОСТЬ ЗА УЩЕРБ ЛЮБОГО ХАРАКТЕРА, ВКЛЮЧАЯ, ПОМИМО ПРОЧЕГО, ПРЯМОЙ, КОСВЕННЫЙ, СЛУЧАЙНЫЙ, УМЫШЛЕННЫЙ ИЛИ СОПУТСТВУЮЩИЙ УЩЕРБ (ВКЛЮЧАЯ, ПОМИМО ПРОЧЕГО, УПУЩЕННУЮ ВЫГОДУ, ПОТЕРЮ ВЫРУЧКИ или БИЗНЕСА), ВОЗНИКАЮЩИЙ ПРИ ИСПОЛБЗОВАНИИ ИЗДЕЛИЙ ИЛИ СВЯЗАННЫЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДАННЫХ ИЗДЕЛИЙ. 8.3 Интеллектуальная собственность 1 9 --- стр. 47 --- Данное Изделие является продуктом материальной и интеллектуальной собственности и ноу-хау, разработанными компанией «ЭнтроГен, Инк.» (EntroGen, Inc.) и предоставляется организации заказчика (Заказчик) исключительно для проведения молекулярного диагностического анализа с целью определения целевых мутаций с использованием технологии и методов компании «ЭнтроГен», перечисленных и описанных в прилагаемом Руководстве по эксплуатации изделия. Использование данного Изделия или его компонентов способом, не предусмотренным Руководством по эксплуатации изделия, категорически запрещено компанией «ЭнтроГен». Вскрывая контейнер с Изделием, Заказчик соглашается не раскрывать технологии любых поставляемых компонентов Изделия компании «ЭнтроГен», включая праймеры и пробы, а также не подвергать компоненты Изделия компании «ЭнтроГен» или полученные продукты какому-либо анализу с целью создания схожей технологии, независимо от ее целевого назначения. Кроме того. Заказчик соглашается не перепродавать данное Изделие или его компоненты третьим лицам без письменного разрешения компании «ЭнтроГен». Заказчик обязуется сохранить конфиденциальность информаци, содержащейся в Руководстве по эксплуатации изделия, и относиться к ней, как к коммерческой тайне компании «ЭнтроГен». Если Заказчик не согласен с описанными выше условиями использования, он должен вернуть неиспользованное Изделие компании «ЭнтроГен» с возвратом денежных средств в полном объеме. Патентные права на проведение Процедуры с нуклеазой 5' не передаются явным, косвенными или на основе правовой презумпции покупателю при приобретении данного Изделия. Дополнительные лицензии и (или) разрешения могут потребоваться для проведения определенных этапов количественного анализа. Ответственность за получение таких лицензий у держателя патента возлагается на покупателя/конечного пользователя. 2 0 --- стр. 48 --- [Перевод надписей и нотариального заверения на документе «Инструкция по применению медицинского изделия „Набор реагентов для in vitro диагностики начичия мутаций гена PIK3CA методом полимеразной цепной реакции в режиме реачъного времени в образцах пациентов фиксированных в формапине и залитых в парафин, 48 реакций"», представленном на русском языке.] [Перевод с английского языка на русский язык] 13 декабря 2021 г. /подпись! --- стр. 49 --- НОТАРИАЛЬНОЕ УДОСТОВЕРЕНИЕ ШТАТА КАЛИФОРНИЯ ________________________§ 1189 ГРАЖДАНСКОГО КОДЕКСА Нотариус или иное должностное лицо, заполняющее данное удостоверение, подтверждает только личность лица, подписавшего документ, к которому прилагается настоящее удостоверение, и не удостоверяет верность, точность или действительность упомянутого документа._______________________________ Штат Калифорния ) Округ Лос-Анджелес ) 13 декабря 2021 г. ко мне, Дата ЛИЧНО явился _______ Митре Я. Кати, нотариусу. Указать имя и дазжность дазжноатчого лица Мэтью Минковски,______ И.мя (имена) подписавше.'о(-их) лица (лиц) которьЕЙ подтвердил мне на основании достаточных доказательств, что он является лицом, чья ПОДПИСЬ проставлена на указанном документе, а также что он подписал указанный документ в качестве правомочного лица, и что его подпись на указанном документе означает, что указанный документ подписан физическим или юридическим лицом, от имени которого действовало указанное лицо. [Штамп: Митра Н. Катц Округ Лос-Анджелес, Калифорния Нотариус Лицензия № 2226229 Моя лицензия действительна до 23 декабря 2021 г. NSP1] ТЬктавить нотариазьную печать Я удостоверяю под СТРАХОМ НАКАЗАНИЯ ЗА ЛЖЕСВИДЕТЕЛЬСТВО в соответствии с законодательством штата Калифорния, что изложенное выше является точным и верным. В СВИДЕТЕЛЬСТВО ЧЕГО я ставлю собственноручную подпись и официальную печать. Подпись Inodnucbl Подпись нотариуса СВЕДЕНИЯ, УКАЗЫВАЕМЫЕ ПО ВЫБОРУ_ Указание данной ин(рормации может предотвратить изменение документа или попытки повторного приложения данного бланка к другаму документу в мошеннических целях. Характеристика прилагаемого документа Название или тип документа:____________ медииинского изделия________________ Инструкиия по применению кол-во страниц:.Дата документа:________________________________ Дополнительное(-ые) подписавшее(-ие) лицо(-а):_____________________________ Должностное(-ые) положение(-я), указанное(*ые) подписавшим(-и) лицом(-амн) корпорации — Имя подписавшего лица:_ □ Должностное лицо должность(-и):__________________________ □ Партнер — □ с ограниченной ответственностью □ полный □ Физическое лицо □ Доверенное лицо □ Доверительный собственник □ Законный представитель или арбитражный управляющий □ Прочее:______________________________ Подписавшее лицо представляет интересы:__ корпорации — Имя подписавшего лица:_ □ Должностное лицо должность(-и):_________________________ □ Партнер — □ с ограниченной ответственностью □ полный □ Физическое лицо □ Доверенное лицо □ Доверительный собственник □ Законный представитель или арбитражный управляющий □ Прочее:______________________________ Подписавшее лицо представляет интересы:_ С Национальная ассоинация нотариусов, 2015 г. ♦ www.NationalNotary.org • 1-800-US НОТАРИУС (1-800-876-6827). Документ Xs 5907. --- стр. 50 --- Текст данного документа перевёл переводчик Рахимкулов Эльдар Серкалиевич. Знание иностранного языка подтверждаю. Выполненный перевод является правильным, точным и полным. подпись Российская Федерация Город Москва Двадцать седьмого января две тысячи двадцать второго года Я, Тонкин Дмитрий Вачерьевич, нотариус города Москвы, свидетельствую подлинность подписи переводчика Рахимкулова Эльдара Серкалиевича. Подпись сделана в моем присутствии. Личность подписавшего документ установлена. Зарегистрировано в реестре: N° 77/2079-н/77-2022- •f ^ ^ ^ Уплачено за совершение нотариального действия: 400 руб. ПОДПИСЬ Д.В. Тонкий Гербовая печать нотариуса г.Москвы ТочкинаД.В ________ Всего прошнуровано, пронумеровано и скреплено печатью _48_лист(а)(ов) Нотариус подпись Российскам Федерация Город Москва Дналиагь седьмого января лведь№я*пгдвялиать второго го;^ Я, Точкин Дмитрий свилепельствую i нотариус города Москвы, копии с представленного мне документа. ровано в реестре: № 77/2079-н/77-2022- совершение нотариального действия : 2940 руб. Д.В. Точкин Пронумеровано, скреплено лист(а) (ов)