Набор реагентов для качественного и количественного определения ДНК HSV1, HSV2, CMV в биологическом материале человека методом ПЦР с детекцией в режиме "реального времени" (Amplitech HSV1/HSV2/CMV) по ТУ 21.20.23-021-19926214-2023 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 2 ---
0
АМПЛИТЕК
Amplitech HSV1/HSV2/CMV
Набор реагентов для качественного и количественного
определения ДНК HSV1, HSV2, CMV в биологическом
материале человека методом ПЦР с детекцией в режиме
«реального времени» (Amplitech HSV1/HSV2/CMV)
по ТУ 21.20.23-021-19926214-2023
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
IVD REF Р015-0 96
--- стр. 3 ---
ВВЕДЕНИЕ............................................................... 3
1 НАЗНАЧЕНИЕ.................................................. 4
2 ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ..................................... 4
3 ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ ............................ 4
4 РИСКИ ПРИМЕНЕНИЯ, ПОБОЧНЫЕ ЭФФЕКТЫ 4
5 СОСТАВ ....................................................................... 4
6 ПРИНЦИП МЕТОДА...................................................................................................................5
6.1 Прослеживаемость значений положительного контроля ПК U 6
7 НЕОБХОДИМОЕ ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ.. 6
8 МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ......................................................... 6
9 ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ............................................ 8
10 ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ....................................................................................Ю
10.1 Экстракция ДНК.............................................................................................................Ю
10.2 Подготовка к проведению ПЦР....................................................................................Ю
10.3 Проведение ПЦР и детекции.......................................... 11
11 УЧЁТ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ............................................. 11
12 ВОЗМОЖНЫЕ ОШИБКИ.................................................................................. 13
13 КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА........................................................................................................14
13.1 Контроли, используемые в процессе исследования ..........................................14
13.2 Мониторинг лаборатории на наличие контаминации .........................................14
13.3 Внутренний контроль качества лабораторных исследований............ 14
14 ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА...................................................14
14.1 Предел обнаружения....................................................................................................14
14.2 Диапазон измерения и предел измерения.............................................................15
14.3 Аналитическая специфичность..................................................................................15
14.4 Прецизионность измерения .......................................................................................16
14.5 Правильность измерения............................................................................................17
14.6 Диагностические характеристики.............................................................................17
14.7 Корреляция.......................................................................................................................18
15 УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
...................................................................................................................................................18
15.1 Срок годности..................................................................................................................18
15.2 Хранение..........................................................................................................................18
15.3 Транспортирование......................................................................................................18
15.4 Эксплуатация..................................................................................................................19
16 ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ ...............................................................................................19
17 БИБЛИОГРАФИЯ...................................................................................................................19
18 ПЕРЕЧЕНЬ ПРИМЕНЯЕМЫХ НАЦИОНАЛЬНЫХ СТАНДАРТОВ ..........................19
19 ГАРАНТИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ........................................................................................20
20 ТЕХНИЧЕСКАЯ ПОДДЕРЖКА ..........................................................................................20
21 СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ДОКУМЕНТАЦИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ ..........20
СОДЕРЖАНИЕ
Amplitech HSV1/HSV2/CMV Инструкция в. 11.04.23
--- стр. 4 ---
1. Настоящая инструкция по применению версии 11.04.23 распространяется на
медицинское изделие «Набор реагентов для качественного и количественного
определения ДНК HSV1, HSV2, CMV в биологическом материале человека методом
ПЦР с детекцией в режиме «реального времени» (Amplitech HSV1/HSV2/CMV) по ТУ
21.20.23-021-19926214-2023» (далее- набор).
Краткое наименование набора: Amplitech HSV1/HSV2/CMV.
Набор следует применять в соответствии с действующей версией инструкции по
применению. Для удобства работы в лаборатории допускается использовать
действующую версию краткого руководства по применению набора.
2. Вирусы HSV1, HSV2, CMV являются возбудителями инфекционно
воспалительных заболеваний различных органов и систем (кожи, слизистых, лёгких,
урогенитального тракта и др.). В большинстве случаев для данных микроорганизмов
отсутствуют специфические клинические признаки, на основании которых можно
установить этиологию заболевания. ПЦР в реальном времени обладает высокой
чувствительностью, специфичностью и объективностью полученных результатов.
Набор реагентов «Amplitech HSV1/HSV2/CMV» позволяет выявлять,
дифференцировать и количественно измерять ДНК указанных микроорганизмов в
рамках одной реакции.
ВВЕДЕНИЕ
Amplitech HSV1/HSV2/CMV Инструкция в. 11.04.23
--- стр. 5 ---
1 НАЗНАЧЕНИЕ
Набор предназначен для качественного и количественного определения ДНК
HSV1, HSV2, CMV в биологическом материале человека методом ПЦР с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени».
Материалом для проведения ПЦР-исследования служат образцы ДНК,
экстрагированной из следующих видов биологического материала:
• мазки со слизистой оболочки влагалища, прямой кишки, ротоглотки, с
конъюнктивы, с пузырьковых высыпаний и эрозивно-язвенных поражений кожи и
слизистых оболочек;
• соскобы эпителия со слизистой оболочки цервикального канала, уретры;
• секрет предстательной железы, моча (осадок первой порции утренней мочи).
Набор предназначен для лабораторной диагностики in vitro (выявление и
количественное определение HSV1, HSV2, CMV). Применение набора не зависит от
популяционных и демографических аспектов.
2 ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
Набор предназначен для применения в клинической лабораторной диагностике
для исследования биологического материала, полученного от лиц с подозрением на
наличие герпесвирусных инфекций. Отрицательные результаты исследования с
помощью набора не исключают возможность инфицирования HSV1, HSV2, CMV и не
должны использоваться в качестве единственной основы для принятия решения о
лечении пациента. Отрицательные результаты исследования должны сочетаться с
клиническими наблюдениями, историей болезни и эпидемиологической
информацией.
Набор может применяться в клинико-диагностических лабораториях.
3 ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ
Противопоказания к применению набора отсутствуют.
4 РИСКИ ПРИМЕНЕНИЯ, ПОБОЧНЫЕ ЭФФЕКТЫ
При применении набора по назначению, в соответствии с данной инструкцией
риски и побочные эффекты отсутствуют.
5 СОСТАВ
Состав набора^ указан в таблице 1.
Состав набора
Таблица 1
Компонент Номинальный
объём, мл Кол-во Внешний вид
Смесь-1 HSV1,2/CMV
(Буферный раствор со специфическими
праймерами, флуоресцентно-мечеными
зондами и дНТФ)
0,48 1 пробирка Прозрачная жидкость от светло-
лилового до фиолетового цвета
^ Набор упакован в полиэтиленовый пакет с застёжкой Zip-Lock.
Amplitech HSV1/HSV2/CMV Инструкция в. 11.04.23
--- стр. 6 ---
4
9
Компонент Номинальный
объём, мл Кол-во Внешний вид
Смесь-2 В
(Буферный раствор с сульфатом магния,
термосгабильной ДНК-полимераэой)
0,48 1 пробирка Прозрачная бесцветная
жидкость
вки
(Раствор, содержащий генно-инженерную
конструкцию с ДНК внутреннего контроля)
0,96 1 пробирка Прозрачная бесцветная
жидкость
ОК
(Буферный раствор) 0,8 1 пробирка Прозрачная бесцветная
жидкость
ПК и
(Раствор, содержащий генно-инженерные
конструкции с фрагментами ДНК
выявляемых микроорганизмов)
0,8 1 пробирка Прозрачная бесцветная
жидкость
Инструкция по применению - 1 шт.
В бумажном виде и эпекгронном
виде по адресу:
http://www.amplitech.ru/resources/
Краткое руководство - 1 шт. В бумажном виде
Паспорт - 1 шт. в электронном виде^ по адресу:
http://www.amplitech.ru/qualitv/
Набор рассчитан на проведение исследования 96 образцов, включая контроли.
6 ПРИНЦИП МЕТОДА
Исследование с помощью набора проводится методом ПЦР с гибридизационно-
флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме «реального
времени». Детекция продуктов ПЦР и раздельное выявление мишеней (ДНК
выявляемых микроорганизмов и внутреннего контроля (ВК)) обеспечивается
применением в реакционной смеси для ПЦР флуоресцентно-меченых
олигонуклеотидов, сигналы от которых регистрируются по четырём различным
каналам флуоресцентной детекции (см. таблицу 2).
Таблица 2
Каналы детекции мишеней
Канал детекции сигнала
от флуорофора Мишень Область амплификации
РАМ ДНК HSV2 Гликопротеин В
R6Q3 ДНК HSV1 Гликопротеин В
ROX д н кc м v Ген ДНК-полимеразы
Су5 д н к в к Искусственно синтезированная
последовательность
Линейная зависимость между исходной концентрацией ДНК-мишени в
исследуемом образце и циклом начала экспоненциального увеличения
флуоресцентного сигнала (порогового цикла, Ct) позволяет определять концентрацию
ДНК выявляемых мишеней в образце относительно положительного контроля ПК U
(образца с известной концентрацией ДНК-мишеней), который проходит этап
экстракции ДНК и ПЦР одновременно с исследуемыми образцами. Определение
2 в случае отсутствия доступа к Интернету обратитесь в службу технической поддержки по телефону
(495) 374-13-46 для запроса о предоставлении бумажной версии паспорта.
3 Сигнал от флуорофора R 6G регистрируется по каналу детекции сигнала от аналогичных
флуорофоров Hex и Joe.
Amplitech HSV1/HSV2/CMV Инструкция в. 11.04.23
--- стр. 7 ---
f
концентрации ДНК производится в соответствии с заданными значениями
концентраций ПК U и полученными значениями Ct для ПК U и исследуемых образцов.
6.1 Прослеживаемость значений положительного контроля ПК U
Концентрация клонированных фрагментов ДНК всех выявляемых микроорганизмов
в ПК и составляет 5lg±0,5lg копий/мл. Концентрация определяется с помощью
установленной производителем методики выполнения измерений на основе метода
лимитирующих разведений [1,2].
7 НЕОБХОДИМОЕ ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
Для работы с набором требуются следующие оборудование и материалы:
• ПЦР-бокс;
• центрифуга-вортекс (РУ № ФС № 2005/518);
• дозаторы переменного объёма, механические или электронные, с возможностью
дозирования от 5 до 200 мкл (РУ № ФСР 2009/05681);
• программируемый амплификатор с системой детекции флуоресцентного
сигнала в режиме «реального времени» (ДТпрайм (ООО «НПО ДНК-Технология»; РУ
№ ФСЗ 2011/10229), CFX96 (Bio-Rad Laboratories, Inc.; РУ № ФСЗ 2008/03399), Applied
Biosysterns QuantStudio 5 (Life Technologies Holdings Pte. Ltd.; РУ № P3H 2019/8446),
Rotor-Gene Q (QIAGEN GmbH; РУ № ФСЗ 2010/07595));
• штатив для пробирок объёмом 0,2 и 1,5 мл;
• холодильник с камерой, поддерживающей температуру от 2 °С до 8 ®С;
• пробирки для ПЦР объёмом 0,2 мл с оптически прозрачной крышкой,
одноразовые, свободные от ДНКаз, при использовании амплификаторов планшетного
типа;
• пробирки для ПЦР объёмом 0,2 мл с плоской крышкой, одноразовые, свободные
от ДНКаз, при использовании амплификаторов роторного типа;
• пробирки объёмом 1,5 мл, одноразовые, свободные от ДНКаз, для
приготовления реакционной смеси;
• наконечники для дозаторов переменного объёма, с фильтром, объёмом до 10,
100 и 200 мкл, одноразовые, свободные от ДНКаз;
• ёмкость для сброса использованных материалов;
• перчатки медицинские, одноразовые, неопудренные.
8 МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Класс потенциального риска применения набора (согласно Приказу Министерства
здравоохранения РФ № 4н от 06.06.2012) - 26.
Работа должна проводиться в лаборатории, использующей методы амплификации
нуклеиновых кислот для исследования материала, с соблюдением требований ГОСТ
Р 52905 «Лаборатории медицинские. Требования безопасности», МУ 1.3.2569-09
«Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации
нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV
Amplitech HSV1/HSV2/CMV Инструкция в. 11.04.23
--- стр. 13 ---
концентрацию ДНК выявленного возбудителя в геномных эквивалентах в
одном миллилитре (ГЭ/мл) согласно формуле (1).
СдНК возб “•
100000
2 ДС1 (1)
где Сднквозб - концентрация ДНК выявленного возбудителя, ГЭ/мл;
ACt - разность между значением Ct для исследуемого образца и значением Ct
для ПК и по каналу FAM/R6G/ROX.
Примечание - Коэффициент пересчёта концентрации ДНК HSV1 /HSV2/CMV из копий/мл
в ГЭ/мл равен 1.
11.4 Провести интерпретацию результатов для исследуемых образцов согласно
таблице 8.
Таблица 8
Интерпретация результатов для исследуемых образцов
Результат Интерпретация
Качественное определение ДНК выявляемых возбудителей
1
По каналу Суб значение Ct определено не больше
граничного®.
По каналам РАМ, R 6G, ROX значения Ct отсутствуют.
ДНК HSV1, HSV2, CMV в образце
не выявлены.
2 По каналу Суб значение Ct определено или отсутствует.
По каналу FAM определено значение Ct. В образце выявлена ДНК HSV2.
3 По каналу Суб значение Ct определено или отсутствует.
По каналу R6G определено значение Ct. В образце выявлена ДНК HSV1.
4 По каналу Суб значение Ct определено или отсутствует.
По каналу ROX определено значение Ct. В образце выявлена ДНК CMV.
5 По двум и более каналам для специфических мишеней
{РАМ, R6G, ROX) определено значение Ct.
Интерпретация проводится в
соответствии с пп. 2-4, Например;
В образце выявлены ДНК HSV2,
ДНК CMV.
6
По каналу Суб значение Ct отсутствует или определено
больше граничного.
По каналам РАМ, R 6G, ROX значения Ct отсутствуют.
Невалидный результат
Количественное определение ДНК выявляемых возбудителей
1
По каналу Суб значение Ct определено не больше
граничного.
По каналам РАМ, R 6G, ROX значения Ct отсутствуют.
ДНК HSV1, HSV2, CMV в образце
не выявлены.
2 Рассчитано значение концентрации ДНК возбудителя.
ДНК возбудителя в образце
выявлена в концентрации в
укладывающееся в диапазон измерения набора. пределах диапазона измерения
набора.
3 Рассчитано значение концентрации ДНК возбудителя, не
ДНК возбудителя в образце
выявлена в концентрации вне
укладывающееся в диапазон измерения набора. пределов диапазона измерения
набора.
4
По каналу Суб значение Ct отсутствует или определено
больше граничного.
По каналам РАМ, R 6G, ROX значения Ct отсутствуют.
Невалидный результат
Результат исследования считают достоверным, если получены валидные
результаты для контролей в соответствии с таблицей 9.
® Граничные значения Ct указаны в кратком руководстве по применению набора.
Amplitech HSV1/HSV2/CMV Инструкция в. 11.04.23 12
--- стр. 14 ---
Таблица 9
Критерии оценки для контролей
Контроль Норма
ОК По каналу Суб значение Ct определено не больше граничного®. По
каналам РАМ, R 6G, ROX значение Ct отсутствует
ПК и По каналам РАМ, R 6G, ROX, Суб значение Ct определено
не больше граничного.
12 ВОЗМОЖНЫЕ ОШИБКИ
Рекомендации по устранению возможных ошибок, получаемых для исследуемых
образцов и контролей в процессе исследования с помощью набора, указаны в
таблице 10.
Таблица 10
Рекомендации по устранению ошибок
Ошибка Возможная причина
возникновения Рекомендации по устранению
Для ПК значение Ct по
каналу РАМ и/или R 6G
и/или ROX и/или Су5
отсутствует или
определено больше
гpaничнoгo^■______
Некорректное
проведение экстракции
ДНК и/или ПЦР.
Повторить исследование для всех
образцов, начиная с этапа
экстракции ДНК.
Для ОК по каналу Суб
значение Ct отсутствует
или определено больше
граничного.__________
Некорректное
проведение экстракции
ДНК и/или ПЦР.
Повторить исследование для всех
образцов, начиная с этапа
экстракции ДНК.
Для ОК по каналу РАМ
и/или R 6G и/или ROX
определено значение Ct.
Контаминация реагентов
или исследуемых
образцов продуктами
амплификации.
Предпринять меры по выявлению
и ликвидации источника
контаминации и повторить
исследование для всех образцов,
начиная с этапа экстракции ДНК.
Невалидный результат
для исследуемого образца
(значение Ct по каналу Суб
отсутствует или
определено больше
граничного, по каналам
РАМ, R 6G, ROX значения
Ct отсутствуют).
___________
Некорректное
проведение экстракции
ДНК.
Наличие в образце
ингибиторов ПЦР.
Повторить исследование данного
исследуемого образца, начиная с
этапа экстракции ДНК. В случае
воспроизводимого результата
рекомендуется повторное взятие и
исследование биологического
материала.
Для исследуемого
образца/контролей
определено значение
порогового цикла, при
этом на графике
флуоресценции
отсутствует участок
характерного
экспоненциального
подъёма (график
представляет собой
приблизительно прямую
линию). ________________
Некорректный выбор
уровня пороговой линии
или параметров расчёта
базовой линии.
Некорректное
проведение ПЦР.
Проверить правильность
выбранного уровня пороговой
линии или параметров расчёта
базовой линии. Если результат
получен при правильном уровне
пороговой линии (базовой линии),
требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для
этого образца или, в случае
некорректного вида графика для
контроля, амплификацию и
детекцию для всех исследуемых
образцов и контролей
_____________
® Граничные значения Ct указаны в кратком руководстве по применению набора.
Amplitech HSV1/HSV2/CMV Инструкция в.11.04.23 13
--- стр. 15 ---
13 КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
13.1 Контроли, используемые в процессе исследования
Результаты исследования контролей должны соответствовать критериям оценки,
указанным в разделе 11.
13.1.1 Отрицательный и положительный контроли
Каждая группа экстрагируемых образцов должна включать контрольные образцы:
• ОК для выявления контаминации в процессе проведения исследования;
• ПК и для контроля корректного прохождения исследования, а также для
количественного определения ДНК выявляемых с помощью набора микроорганизмов
в биологическом материале человека.
13.1.2 Внутренний контроль
Для контроля качества экстракции ДНК и оценки влияния ингибиторов на
результаты амплификации используется экзогенный ВК, который добавляется на
этапе экстракции ДНК в каждый исследуемый образец и контроли. Отсутствие
результатов амплификации для ВК и одновременно для выявляемых
микроорганизмов свидетельствует о присутствии ингибиторов ПЦР в образце или
некорректном проведении экстракции ДНК.
13.2 Мониторинг лаборатории на наличие контаминации
Для выявления возможной контаминации лаборатории продуктами амплификации,
исследуемыми и контрольными образцами рекомендуется раз в месяц исследовать
смывы с рабочих поверхностей лабораторной мебели, оборудования и поверхностей
помещений согласно процедуре, указанной в МУ 1.3.2569-09. При обнаружении
контаминации необходимо провести мероприятия по её устранению согласно
указаниям, описанным в МУ 1.3.2569-09.
13.3 Внутренний контроль качества лабораторных исследований
Рекомендуется проводить контроль качества выполнения исследований с
использованием панелей контрольных образцов, предназначенных для проведения
внутреннего и внешнего контролей качества лабораторных исследований по
обнаружению и количественному определению ДНК HSV1, HSV2, CMV, либо
сравнительным исследованием с использованием зарегистрированных в РФ наборов
реагентов для качественного и количественного определения ДНК выявляемых
микроорганизмов в биологическом материале методом ПЦР.
14 ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА^о
14.1 Предел обнаружения
Предел обнаружения набора указан в таблице 11.
Заявленные аналитические характеристики набора, кроме аналитической специфичности,
проверены с использованием стандартных образцов предприятия, содержащих векторы со
специфическими последовательностями ДНК выявляемых микроорганизмов.
Amplitech HSV1/HSV2/CMV Инструкция в. 11.04.23 14
--- стр. 16 ---
Таблица 11
Предел обнаружения
Мишень предел обнаружения, ГЭ/мл 95 %-ый ДИ, ГЭ/мл
ДНК HSV1 1000 341 -2138
ДНК HSV2 1000 329-2201
ДНК CMV 500 204 - 789
14.2 Диапазон измерения и предел измерения
Диапазон измерения и предел измерения набора указаны в таблице 12.
Таблица 12
Диапазон измерения и предел измерения
Мишень Диапазон измерения, ГЭ/мл Предел измерения, ГЭ/мл
ДНК HSV1 4Ю^-5-10« 4-103
ДНК HSV2 4-103-5-10« 4-103
ДНК CMV 4-103-5-103 4-103
14.3 Аналитическая специфичность
Аналитическая специфичность набора оценивалась при тестировании
микроорганизмов, указанных в таблице 13, и геномной ДНК человека. ДНК
микроорганизмов исследовалась в концентрации не менее Т10® копий/мл, геномная
ДНК человека - в концентрации 1 мкг/мл. По итогам тестирования
ложноположительных результатов выявлено не было.
Таблица 13
Микроорганизмы, используемые для оценки аналитической специфичности
Наименование Наименование Наименование
Candida albicans Neisseria flava Ureaplasma parvum
Chlamydia trachomatis Neissena gonorrhoeae Ureaplasma urealyticum
Gardnerella vaginalis Staphylococcus aureus CMV
Enterococcus faecium Staphylococcus epidermidis HSV 1 типа
Escherichia coli Staphylococcus saprophyticus HSV 2 типа
Lactobacillus spp. Toxoplasma gondii HPV
Mycoplasma hominis Treponema pallidum -
Mycoplasma genitalium Trichomonas vaginalis -
14.3.1 Потенциально интерферирующие вещества
Потенциально интерферирующие вещества (ингибиторы ПЦР) и их максимальные
концентрации в образце, для которых оценивалось их ингибирующее влияние на ПЦР,
перечислены в таблице 14.
Amplitech HSV1/HSV2/CMV Инструкция в. 11.04.23 15
--- стр. 17 ---
Таблица 14
Потенциально интерферирующие вещества
Исследуемый
материал Интерферент Активный
компонент
Тип
интерфе-
рента
Концентрация
вещества в
образце
Обоснование
исследованной
концентрации
Мазки со слизи
стой оболочки
влагалища,
соскобы эпителия
со слизистых
оболочек
цервикального
Цельная
кровь
-
Эндогенная
субстанция
5 % V/V
Муцин Очищенный
белок 150 мкг/мл
канала, уретры
Моча (осадок Альбумин Белок Эндогенная
субстанция 500 мг/л
первой порции) Азитромицин Азитромицин Антибиотик-
азалид 1 мг/мл
Секрет
предстательной
железы
Фруктоза - Эндогенная
субстанция 10 мг/мл
Объём в
образце вИбупрофен® Ибупрофен НПВС 300 мкг/мл
Мазки со слизистой
оболочки Мирамистин®
Бензилдиметил
[3-(миристоила-
мино) пропил]
Антисепти
ческое
средство 0,001 %
условиях
«наихудшего
случая»
ротоглотки аммоний хлорид для местного
моногидрат применения
Мазки со слизистой
оболочки прямой
кишки
Фекалии -
Эндогенная
субстанция 5%
Лубрикант Глицерин Лубрикант 15%
Мазки с
конъюнктивы Лидокаим Лидокаина
гидрохлорид Анестетик 0,2 %
Мазки с пузырько-
вых высыпаний и Противови
русный
преларат
эрозивно-язвенных
поражений кожи и
слизистых
оболочек
Ацикловир® Ацикловир 0,1 мкг
Наличие возможного ингибирующего эффекта оценивалось путём проведения
процедуры экстракции ДНК^^ из образцов биологического материала, в которые
добавлялись потенциальные интерференты в концентрациях согласно таблице 14 и
стандартные образцы предприятия, содержащие ДНК выявляемых микроорганизмов
в концентрации 13000 копий/мл. Далее с экстрагированными образцами проводили
ПЦР с детекцией в режиме «реального времени» с использованием набора реагентов
«Amplitech HSV1/HSV2/CMV».
В результате испытаний подтверждено, что влияние исследованных потенциально
интерферирующих веществ на ПЦР, проводимую с использованием набора
«Amplitech HSV1/HSV2/CMV», отсутствует.
14.4 Прецизионность измерения
Коэффициент вариации повторяемости CVn значений концентрации,
характеризующий внутрисерийную повторяемость измерений с использованием
набора, не превышает 5 %.
Экстракция проводилась с использованием набора реагентов «ДНК-100» (ООО «Амплитек»).
Amplitech HSV1/HSV2/CMV Инструкция в.11.04.23 16
--- стр. 18 ---
i
Коэффициент вариации воспроизводимости CVb значений концентрации,
характеризующий межсерийную воспроизводимость измерений с использованием
набора, не превышает 10 %.
14.5 Правильность измерения
Систематическая погрешность, характеризующая правильность измерения с
использованием набора, не превышает 15 %.
14.6 Диагностические характеристики
Значения диагностической чувствительности (ДЧ) и диагностической
специфичности (ДС) набора с доверительной вероятностью 95 % указаны в
таблице 15.
Таблица 15
Диагностические характеристики
Исследуемый Мишень
Количество
образцов дч% дс.%материал положит. отрицат.
flHKHSVI 101 202 97,1-100 98,5-100
Мазки со слизистой ДНК HSV2 100 203 97,0-100 98,5-100
ДНКСМУ 102 201 97,1-100 98,5-100
Мазки со слизистой
ДНК HSV1 102 208 97,1-100 98,6-100
ДНК HSV2 101 209 97,1 -100 98,6-100
ДНКСМУ 102 208 97,1-100 98,6-100
Мазки со слизистой ДНКН5У1 100 109 97,0-100 97,3-100
оболочки прямой
КИШКИ^2 ДНК HSV2 101 108 97,1 -100 97,3-100
ДНК HSV1 101 209 97,1-100 98,6-100
Мазки с конъюнктивы ДНК HSV2 100 210 97,0-100 98,6-100
ДНКСМУ 100 210 97,0-100 98,6-100
Мазки с пузырьковых
высыпаний и ДНК HSV1 101 109 97,1 -100 97,3-100
эрозивно-язвенных
поражений кожи и
слизистых оболочек ^2
ДНК HSV2 100 110 97,0-100 97,3-100
ДНК HSV1 102 203 97,1 - 100 98,5-100
слизистой оболочки ДНК HSV2 101 204 97,1 -100 98,5-100
цервикального канала flHKCMV 102 203 97,1-100 98,5-100
ДНК HSV1 100 203 97,0-100 98,5-100
слизистой оболочки ДHKHSV 2 103 200 97,1-100 98,5-100
уретры днкcмv 100 203 97,0-100 98,5-100
ДНКНЗУ1 100 200 97,0-100 98,5-100
Моча (осадок первой ДНК HSV2 100 200 97,0-100 98,5-100
ДНКСМУ 100 200 97,0-100 98,5-100
ДНК HSV1 104 206 97,2-100 98,6-100
ДНК HSV2 103 207 97,1-100 98,6-100
^2 Оценка диагностических характеристик при выявлении ДНК CMV в данном виде биологического
материала не проводилась в связи с тем, что для CMV не характерна локализация в месте взятия
данного биоматериала.
Amplitech HSV1/HSV2/CMV Инструкция в. 11.04.23 17
--- стр. 19 ---
Исследуемый Мишень
Количество
образцов ДЧ, % ДС, %материал положит, отрицат.
Секрет
предстательной ДНКСМУ 103 207 97,1-100 98,6-100
железы
14.7 Корреляция
Корреляция экспериментальных значений концентраций, полученных при
исследовании образцов биологического материала с использованием набора
реагентов «Amplitech HSV1/HSV2/CMV» и референтного набора реагентов,
Рисунок 1
15 УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
НАБОРА
15.1 Срок годности
Срок годности набора составляет 12 месяцев от даты изготовления.
После вскрытия реагенты использовать до истечения срока годности набора.
15.2 Хранение
Набор хранить при температуре от 2 до 8 °С в защищённом от солнечного света
месте.
Реагенты после вскрытия хранить в тех же условиях, что и реагенты до вскрытия.
15.3 Транспортирование
Набор транспортировать при температуре от 2 до 8 °С всеми видами крытых
транспортных средств в термоконтейнерах с хладоэлементами или в
авторефрижераторах.
Amplitech HSV1/HSV2/CMV Инструкция в. 11.04.23 18
--- стр. 20 ---
15.4 Эксплуатация
Реагенты, входящие в состав набора, готовы к использованию.
Повторное применение использованных для исследования реагентов не
допускается.
Исследование образцов с использованием набора должно проводиться при
температуре от 18 °С до 25 °С и относительной влажности воздуха от 25 % до 75 %.
16 ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ
В настоящей инструкции применены следующие сокращения:
ct - cycle threshold (пороговый цикл)
вк - внутренний контроль
ди - доверительный интервал
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ДНКаза - дезоксирибонуклеаза
ОК - отрицательный контроль
ПК - положительный контроль
ПЦР - полимеразная цепная реакция
17 БИБЛИОГРАФИЯ
1. Taswell С. Limiting dilution assays for the determination of immunocompetent cell
frequencies // J. Immunology. - 1981. - Vol. 126. - P. 1614-1619.
2. Allen G. Rodrigo, Paul C. Goracke, Kiarash Rowhanian, James I. Mullins. Quantitation
of target molecules from polymerase chain reaction-based limiting dilution assays // AIDS
research and human retroviruses. - 1997. - Vol. 13 (9). - P. 737-742.
18 ПЕРЕЧЕНЬ ПРИМЕНЯЕМЫХ НАЦИОНАЛЬНЫХ СТАНДАРТОВ
ГОСТ Р 51088-2013 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Реагенты,
наборы реагентов, тест-системы, контрольные материалы, питательные среды.
Требования к изделиям и поддерживающей документации
ГОСТ Р 51352-2013 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Методы
испытаний
ГОСТ Р ИСО 18113-2-2015 Медицинские изделия для диагностики in vitro.
Информация, предоставляемая изготовителем (маркировка). Часть 2. Реагенты для
диагностики in vitro для профессионального применения
ГОСТ Р ИСО 23640-2015 Изделия медицинские для диагностики in vitro. Оценка
стабильности реагентов для диагностики in vitro
ГОСТ Р ИСО 15223-1-2020 Изделия медицинские. Символы, применяемые при
маркировании на медицинских изделиях, этикетках и в сопроводительной
документации. Часть 1. Основные требования
Amplitech HSV1/HSV2/CMV Инструкция в. 11.04.23 19
--- стр. 21 ---
19 ГАРАНТИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ
Производитель гарантирует соответствие характеристик набора требованиям,
указанным в технической и эксплуатационной документации, в течение указанного
срока годности при соблюдении условий его транспортирования, хранения и
применения.
Рекламации на качество набора направлять в адрес производителя: ООО
«Амплитек», 109235, Москва, ул. 1-я Курьяновская, д. 34, стр. 8, этаж 1 пом. II ком. 42,
тел. (495) 374-13-46, e-mail: support@amplitech.ru .
Сообщения о неблагоприятных событиях (инцидентах), возникших при работе с
набором и не указанных в данной инструкции, следует направлять производителю по
указанному выше адресу и в уполномоченный регуляторный орган согласно
действующему законодательству.
20 ТЕХНИЧЕСКАЯ ПОДДЕРЖКА
Консультацию по вопросам по работе с набором и его качеству можно получить по
контактам, указанным на официальном сайте производителя: www.amplitech.ru .
21 СИМВОЛЫ. ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ДОКУМЕНТАЦИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ
ы Л Изготовитель |REF| Номер по каталогу
гЯ
IVD
□а
Дата изготовления
Медицинское изделие для
диагностики in vitro
Обратитесь к инструкции по
применению
Содержимого достаточно для
проведения п тестов
LOT
ж
Код серии
Использовать до
Предел температуры
Не допускать воздействия
солнечного света
iJ
Общество с ограниченной ответственностью «Амплитек»
(ООО «Амплитек»),
Россия, 109235, Москва,
ул. 1-я Курьяновская, д. 34, стр. 8, этаж 1 пом. II ком. 42
тел. (495) 374-13-46, www.amplitech.ru ,
e-mail: support@amplitech.ru
Amplitech HSV1/HSV2/CMV Инструкция в.11.04.23 20
--- стр. 22 ---
Amplitech HSV1/HSV2/CMV Инструкция 21
--- стр. 27 ---
1 Учёт результатов осуществляется с помощью программного обеспечения используемого
амплификатора согласно инструкции по его применению. Рекомендуется выставлять пороговую
линию на уровне 10 % от разгорания положительного контроля. Кривые флуоресценции,
пересекающие пороговую линию, должны иметь сигмообразную форму.
2 Проверить наличие значений Ct для исследуемого образца по каналам РАМ, R 6G, ROX. Каналы
детекции мишеней указаны в таблице, приведённой ниже.
Канал детекции
РАМ
Мишень
R6G“
ROX
CyS
ДНК HSV2
ДНК HSV1
ДHKCMV
ДНКВК
3 При наличии значений Ct по каналам FAM/R 6G/ROX рассчитать концентрацию ДНК выявленного
возбудителя в геномных эквивалентах в одном миллилитре (ГЭ/мл) согласно формуле (1).
100000
СднкВО^ •“ ■ ДС1 (1)
где Сднк B O S6 - концентрация ДНК выявленного возбудителя, ГЭ/мл;
ACt - разность между значением порогового цикла (Ct) для исследуемого образца и значением
Ct для ПК и по каналу PAM/R 6G/ROX.
Примечание - Коэффициент пересчёта концентрации ДНК HSV1/HSV2/CMV из копий/мл в ГЭ/мл равен 1.
4 Провести интерпретацию результатов для исследуемых образцов согласно таблицам, приведённым
ниже.
^личественное определение ДНК выявляемых возбудителей
Результат ИнтерпреГация
По каналу Су5 значение Ct определено не больше 30
(амплификатор роторного типа)/
35 (амплификатор планшетного типа).
По каналам РАМ, R 6G, ROX значения Gt отсутствуют.
ДНК HSV1, HSV2, CMV в образце не
выявлены.
Рассчитано значение концентрации ДНК возбудителя,
укладывающееся в диапазон измерения набора.
ДНК возбудителя в образце выявлена в
концентрации в пределах диапазона
измерения набора.
Рассчитано значение концентрации ДНК возбудителя, не
^ укладывающееся в диапазон измерения набора.
ДНК возбудителя в образце выявлена в
концентрации вне пределов диапазона
измерения набора.
" По каналу Су5 значение Ct отсутствует или определено
больше 30 (амплификатор роторного типа)/
35 (амплификатор планшетного типа).
По каналам РАМ, R 6G, ROX значения Ct отсутствуют.
Невалидный результат
№
п. РАМ
Качественное определение ДНК выявляемых возбудителей____________
Значение порогового цикла (Ct) по каналу__________ Интерпретация
R6G ROX
1 отсутствует отсутствует
S 30 (амплификатор
отсутствует роторного типа)/
^ ^ S 35 (амплификатор
планшетного типа)
flHKHSVI, HSV2, CMV в
образце не выявлены.
2 определено OTCvrcTBveT отсутствует i определено или отсутствует В образце выявлена ДНК
HSV2.
3 : отсутствует опоеделено отсутствует 1 определено или отсутствует В образце выявлена ДНК
HSV1.
4 отсутствует отсутствует опоеделено опоеделено или отсутствует В образце выявлена ДНК
CMV.
^ Сигнал от флуорофора R6G регистрируется по каналу детекции сигнала от аналогичных флуорофоров Hex и Joe.
Amplitech HSV1/HSV2/CMV КРв.11.04.23
--- стр. 28 ---
g По двум и более каналам для специфических мишеней (FAM, R 6G,
ROX) определено значение Ct.
Интерпретация проводится
в соответствии с пп. 2-4.
Например: В образце
выявлены ДНК HSV2, ДНК
CMV.
> 30 (амплификатор
роторного типа)/
6 отсутствует отсутствует отсутствует > 35 (амплификатор Невалидный результат
планшетного типа) или
отсутствует
Результат исследования считают достоверным, если получены валидные результаты для контролей
в соответствии с таблицей, приведённой ниже.
Контроль
ОК
Тип амплифи* Значение порогового цикла (Ct) по каналу
ПК и
FAM R6G ROX Су5
роторный отсутствует отсутствует отсутствует ^ 30
планшетный отсутствует отсутствует отсутствует £35
роторный ^ 32 S32 S31 <30
планшетный ^ 34 <35 <35 £35
ё
Рекомендации по устранению возможных ошибок в процессе проведения исследования указаны в
таблице, приведённой ниже.
Ошибка
Для ПК значение Ct по каналу
FAM и/или R6G и/или ROX и/или
Су5 отсутствует или определено
больше граничного.
Для ОК по каналу Су5 значение
Ct отсутствует или определено
больше граничного
Для ОК по каналу FAM и/или R6G i Контаминация реагентов
и/или ROX определено значение i или исследуемых образцов
Ct. I продуктами амплификации.
Возможная причина
возникновения_____
Некорректное проведение
экстракции ДНК и/или ПЦР.
Некорректное проведение
экстракции ДНК и/или ПЦР.
Рекомендации по устранению
Повторить исследование для всех образцов,
начиная с этапа экстракции ДНК.
Повторить исследование для всех образцов,
начиная с этапа экстракции ДНК.
Предпринять меры по выявлению и
ликвидации источника контаминации и
повторить исследование для всех образцов,
начиная с этапа эютгракции ДНК. _
Невалидный результат для
исследуемого образца (значение
Ct по каналу Суб отсутствует или
определено больше граничного,
по каналам FAM, R 6G, ROX
начения Ct отсутствуют).
______
Некорректное проведение
экстракции ДНК.
Наличие в образце
ингибиторов ПЦР.
Для исследуемого
образца/контролей определено
значение порогового цикла, при
этом на графике флуоресценции
отсутствует участок характерного
экспоненциального подъёма
(график представляет собой
приблизительно прямую линию).
Некорректный выбор
уровня пороговой линии
или параметров расчёта
базовой линии.
: Некорректное проведение
i ПЦР.
Повторить исследование данного
исследуемого образца, начиная с этапа
экстракции ДНК. В случае воспроизводимого
результата рекомендуется повторное взятие
и исследование биологического материала.
Проверить правильность выбранного уровня
пороговой линии или параметров расчёта
базовой линии. Если результат получен при
правильном уровне пороговой линии (базовой
линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца
или, в случае некорректного вида графика для
контроля, амплификацию и детекцию для
всех исследуемых образцов и контролей
Ampirtech HSV1/HSV2/CMV КР в. 11.04.23
--- стр. 29 ---
Лист регистрации изменений
--- стр. 30 ---
--- стр. 31 ---
ООО «Амплитвк»,
Pocwfl, 109235, Москва, ул. 1-я Курьяновская, д. 34, стр. 8, этаж 1 пом, tl ком. 42
тел, (495) 374-13-46, e-mall: support@amplltech.ru
АМПЛИТЕК
Г
к о п и я
B E R H A
ПАСПОРТ № 465-23
Amplitech HSV1/HSV2/CMV
Набор реагентов для качественного и количественного определения ДНК HSV1, HSV2, CMV в биологическом
материале человека методом ПЦР с детею4ией в режиме «реального времени» (AmpHttech HSV1/HS\^CMV)
по ТУ 21.20.2ЭЧ)21-19926214-2023
REF Р015-0 LOT 0465 2023-04-24 2024-04-24
Условия транспор- при температуре от 2 *С до 8 *С всеми видами крытых транспортных средств в термоконтейнерах
тирования: с хладоэлементами или в авторефрижераторах.
Условия хранения: при температуре от 2 *С до 8 ®С в защищённом от солнечного света месте.
Контроль качества набора проведён по ТУ 21.20.23-021-19926214-2023.
Состав набора и внешний вид компонентов
Лот ком- Норма Результат
понента наименование количество внешний вид контроля
00004 Смесь-1 HSV1.2/CMV 0,48 мл X1 пробирка Прозрачная жидкость от светло-
лилового до фиолетового цвета Соответствует
00008 Смесь-2 В 0,48 мл X1 пробирка Прозрачная бесцветная жидкость Соответствует
00004 вки 0,96 мл X 1 пробирка Прозрачная бесцветная жидкость Соответствует
00026 ОК 0,8 мл X1 пробирка Прозрачная бесцветная жидкость Соответствует
00007 пки 0,8 мл X 1 пробирка Прозрачная бесцветная жидкость Соответствует
- Инструкция по
применению 1 шт.
В бумажном виде и эле1аронном
виде по адресу:
http://www.amplltech.ru/resources/
Соответствует
— Краткое руководство 1 шт. 6 бумажном виде Соответствует
- Паспорт 1 шт. В aneiapoHHOM виде по адресу:
http;//www.amplitech.ru/qua!ity/ Соответствует
Упаковка набора
Показатель Норма Результат контроля
Вид первичной и вторичной упаковки Соответствует требованиям ТУ. Соответствует
Отсутствие видимых дефектов Отсутствие дефектов Соответствует
Маркировка набора
Показатель Норма Результат контроля
Наличие информации на внутренней упаковке
компонентов набора и внешней упаковке
набора в соответствии с требованиями ТУ
Информация соответствует
требованиям ТУ. Соответствует
Функциональные характеристики набора
Показатель Норма Результат контроля
Поедел обнаружения
Выявление ДНК в концентрации:
HSV1,HSV2-1000 ГЭ/мл;
CMV-500 ГЭ/мл,
ДНК HSV1, HSV2, CMV обнаружены. Соответствует
Валидность результатов тестирования
для исследуемых образцов Последовательность ВК обнаружена. Соответствует
Валидность результатов тестирования
для контролей исследования (ОК, ПК)
Результаты соответствуют критериям
оценки, указанным в инструкции по
применению набора.
Соответствует
--- стр. 32 ---
Показатель Норма Результат контроля
Поедел измерения
Количественное определение ДНК
HSV1, HSV2, CMV в концентрации’
13000 ГЭ/мл
Полученное расчётное значение
концентрации ДНК HSV1, HSV2, CMV в
диапазоне от 4000 до 40000 ГЭ/мл.
Соответствует
Валидность результатов тестирования
для исследуемых образцов Последовательность ВК обнаружена. Соответствует
Валидность результатов тестирования
для контролей исследования (ОК, ПК)
Результаты соответствуют критериям
оценки, указанным в инструкции по
применению набора.
Соответствует
Заключение: Набор указанного лота соответствует требованиям ТУ 21.20.23-021-19926214-2023.
Дата выдачи паспорта: 25.04.2023
Руководитель ОКК, Романенкова Е.С.
Нижняя граница диапазона измерения набора плюс 0,5 Ig.