Набор реагентов для иммуноферментного подтверждения присутствия HBs-антигена вируса гепатита В (HBsAg-подтверждающий-ИФА-БЕСТ) по ТУ 9398-333-23548172-2012 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2012/13920 от 20.11.2012 · класс риска 3

Производитель: АО "Вектор-Бест" (Россия)

Вид изделия: Вирус гепатита В поверхностный антиген ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 161 контракт, медианная цена за единицу 6 417 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДЕНА
Приказом Росздравнадзора
«УТВЕРЖДАЮ».
Генеральный директор
от 201 г.№
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для иммуноферментного подтверждения 
присутствия HBs-антигена вируса гепатита В 
«HBsAg-подтверждающий-ИФА-БЕСТ»
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов HBsAg-подтверждающий-ИФА-БЕСТ (далее по тексту - набор) 
предназначен для подтверждения присутствия HBs-антигена вируса гепатита В методом 
конкурентного иммуноферментного анализа, основанного на принципе нейтрализации 
HBsAg специфическими антителами. Положительный результат, полученный в постановке 
любого комплекта набора реагентов HBsAg-ИФА-БЕСТ, должен быть подтвержден в реак­
ции нейтрализации с использованием набора HBsAg-подтверждающий-ИФА-БЕСТ. Мини­
мальная концентрация HBsAg, выявляемая с помощью данного набора, составляет по стан­
дартному образцу предприятия, содержащему HBsAg (per. № 05-2-433), аттестованному 
ОБТК ЗАО «Вектор-Бест», 0,01 МЕ/мл.
1.2. Набор рассчитан на проведение анализа 44 неизвестных образца, 4 контрольных 
образцов, всего 48 определений при использовании всего планшета. Для исследования не­
большой партии проб предусмотрено использование 2 стрипов по 8 анализов (4 контрольных 
образцов и 4 неизвестных образцов).
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип метода
Метод определения основан на твердофазном иммуноферментном анализе. Во время 
первой инкубации при добавлении в лунки планшета исследуемого образца и биотинилиро-
[
Инструкция составлена сотрудниками ЗАО «Вектор-Бест»: зам. директора НИИ СД  
М.Ю. Рукавишниковым и зав. лабораторией И. Н. Кувшиновой


--- стр. 2 ---
ванных поликлональных антител происходит связывание моноклональных -антител, иммоби­
лизованных на внутренней поверхности лунок, и биотинилированных поликлональных анти­
тел с HBsAg в анализируемом образце. Во время второй инкубации стрептавидин, меченный 
пероксидазой, связывается с биотинилированными поликлональными антителами к HBsAg, 
иммобилизованными в ходе первой инкубации. Во время третьей инкубации с раствором 
тетраметилбензидина происходит окрашивание раствора в лунках, содержащих комплексы 
антиген-антитело. Степень окраски пропорциональна концентрации HBsAg в анализируемых 
пробах. Если во время первой инкубации в лунки дополнительно добавляется раствор под­
тверждающего агента, содержащий антитела к HBs-антигену, происходит нейтрализация 
HBsAg, что в конечном итоге приводит к уменьшению степени окраски (подавлению сигна­
ла) в лунках на последней стадии ИФА. Если % подавления сигнала 50% и более, то иссле­
дуемый образец считают положительным. Таким образом, для подтверждения присутствия 
HBsAg исследуемые образцы анализируют попарно - в прямом ИФА (без добавления под­
тверждающего агента) и в конкурентном ИФА (с добавлением подтверждающего агента).
2.2. Состав набора
В состав набора входят;
- планшет с иммобилизованными на внутренней поверхности лунок моноклональны­
ми антителами к HBsAg, готовый для использования -  1  шт.;
- положительный контрольный образец (К"^), содержащий рекомбинантный HBsAg, 
инактивированный, готовый для использования -1 флакон (2,5 мл);
- слабоположительный контрольный образец (К^слаб), содержащий рекомбинантный 
HBsAg в концентрации (0,04 ±0,02) МЕ/мл, инактивированный, готовый для использования - 
1  флакон (2,5 мл);
- отрицательный контрольный образец (К“), не содержащий HBsAg, инактивирован­
ный, готовый для использования - 1  флакон (2,5 мл);
- конъюгат № 1, концентрат - биотинилированные поликлональные антитела к 
HBsAg - 1  флакон (0,8 мл);
- конъюгат № 2, концентрат - конъюгат стрептавидина с пероксидазой хрена - 1  фла­
кон (1,5 мл);
- 25-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином (ФСБ- 
Тх25) - 1  флакон (28,0 мл);
- раствор для разведения конъюгата №1 (РРК №1) -  1  флакон (7,0 мл);
- раствор для разведения конъюгата №2 (РРК №2) -  1  флакон (13,0 мл);
- раствор подтверждающего агента (РПА) - 1  флакон (3,0 мл);


--- стр. 3 ---
ванных поликлональных антител происходит связывание моноклональных -антител, иммоби­
лизованных на внутренней поверхности лунок, и биотинилированных поликлональных анти­
тел с HBsAg в анализируемом образце. Во время второй инкубации стрептавидин, меченный 
пероксидазой, связывается с биотинилированными поликлональными антителами к HBsAg, 
иммобилизованными в ходе первой инкубации. Во время третьей инкубации с раствором 
тетраметилбензидина происходит окрашивание раствора в лунках, содержащих комплексы 
антиген-антитело. Степень окраски пропорциональна концентрации HBsAg в анализируемых 
пробах. Если во время первой инкубации в лунки дополнительно добавляется раствор под­
тверждающего агента, содержащий антитела к HBs-антигену, происходит нейтрализация 
HBsAg, что в конечном итоге приводит к уменьшению степени окраски (подавлению сигна­
ла) в лунках на последней стадии ИФА. Если % подавления сигнала 50% и более, то иссле­
дуемый образец считают положительным. Таким образом, для подтверждения присутствия 
HBsAg исследуемые образцы анализируют попарно - в прямом ИФА (без добавления под­
тверждающего агента) и в конкурентном ИФА (с добавлением подтверждающего агента).
2.2. Состав набора
В состав набора входят:
- планшет с иммобилизованными на внутренней поверхности лунок моноклональны­
ми антителами к HBsAg, готовый для использования -  1  шт.;
- положительный контрольный образец (К~^), содержащий рекомбинантный HBsAg, 
инактивированный, готовый для использования -1 флакон (2,5 мл);
- слабоположительный контрольный образец (К^слаб), содержащий рекомбинантный 
HBsAg в концентрации (0,04 ±0,02) МЕ/мл, инактивированный, готовый для использования - 
1  флакон (2,5 мл);
- отрицательный контрольный образец (К~), не содержащий HBsAg, инактивирован­
ный, готовый для использования - 1  флакон (2,5 мл);
- конъюгат № 1, концентрат - биотинилированные поликлональные антитела к 
HBsAg - 1  флакон (0,8 мл);
- конъюгат № 2, концентрат - конъюгат стрептавидина с пероксидазой хрена - 1  фла­
кон (1,5 мл);
- 25-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином (ФСБ- 
Тх25) - 1  флакон (28,0 мл);
- раствор для разведения конъюгата №1 (РРК №1) - 1  флакон (7,0 мл);
- раствор для разведения конъюгата №2 (РРК №2) -  1  флакон (13,0 мл);
- раствор подтверждающего агента (РПА) - 1  флакон (3,0 мл);


--- стр. 4 ---
- раствор для разведения образцов (РРО) -  1  флакон (21,0 мл);
- субстратный буферный раствор (СБР) - 1  флакон (13,0 мл);
- тетраметилбензидин, концентрат (ТМБ) - 1  флакон (1,0 мл);
- стоп-реагент, готовый для использования - 1  флакон (12,0 мл).
Набор дополнительно комплектуется:
- пленками для заклеивания планшета -  2 шт.;
- ванночками для реагентов - 4 шт.;
- наконечниками для пипеток на 4— 200 мкл -  32 шт.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Чувствительность: минимальная концентрация HBsAg, определяемая по стан­
дартному образцу предприятия, содержащему HBsAg (per. № 05-2-433), аттестованному 
ОБТК ЗАО «Вектор-Бест», составляет 0,01 МЕ/мл.
3.2. Специфичность: по результатам анализа сывороток стандартной панели предпри­
ятия, не содержащих HBsAg (per. № 05-2-104), аттестованной ОБТК ЗАО «Вектор-Бест», со­
ставляет 100%.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 3 (ГОСТ Р 51609-2000).
4.2. Все компоненты набора являются нетоксичными. Стоп-реагент обладает раздра­
жающим действием. Избегать разбрызгивания и попадания на кожу и слизистые. В случае 
попадания стоп-реагента на кожу и слизистые необходимо промыть поражённый участок 
большим количеством проточной воды.
4.3. При работе с исследуемыми образцами следует соблюдать меры предосторожно­
сти, принятые при работе с потенциально инфекционным материалом. Основные правила 
работы изложены в «Инструкции по мерам профилактики распространения инфекционных 
заболеваний при работе в клинико-диагностических лабораториях лечебно­
профилактических учреждений», утвержденной Минздравом СССР 17 февраля 1991 г.
4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые 
перчатки, так как образцы сыворотки крови человека следует рассматривать как потенциаль­
но инфекционные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирусы гепа­
тита или возбудителей других инфекций.
4.5. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с набором, 
должны быть соответствующим образом промаркированы и храниться отдельно.
4.6. Запрещается приём пищи, использование косметических средств и курение в по-


--- стр. 5 ---
мещениях, предназначенных для работы с наборами.
4.7. Для дезинфекции посуды и материалов, контактировавших с исследуемыми и кон­
трольными образцами, рекомендуем использовать дезинфицирующие средства, не оказыва­
ющие негативного воздействия на качество ИФА, не содержащие активный кислород и хлор, 
например, комбинированные средства на основе ЧАС, спиртов, третичных аминов. Исполь­
зование дезинфицирующих средств, содержащих активный кислород и хлор (Н2О2, деохлор, хло­
рамин), приводит к серьезному искажению результатов.
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ,
НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ
- спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий проводить измерения 
оптической плотности растворов в лунках стрипов при основной длине волны 450 нм и 
длине волны сравнения в диапазоне 620 - 655 нм; допускается измерение при одной длине 
волны —  450 нм;
- холодильник бытовой;
- термостатируемый шейкер орбитального типа на 700-800 об/мин, поддерживающий 
температуру (42±1)°С либо (37±1)°С;
- автоматический промыватель для планшетов;
- пипетки полуавтоматические одноканальные с переменным или фиксированным объ­
емом со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости от 5 до 1000 
мкл;
- пипетка полуавтоматическая многоканальная со сменными наконечниками, позволя­
ющая отбирать объемы жидкостей до 350 мкл;
- перчатки резиновые хирургические;
- бумага фильтровальная лабораторная;
- цилиндр мерный 2-го класса точности вместимостью 100 мл, 1000 мл;
- колба вместимостью 1000 мл, 2000 мл;
- вода дистиллированная.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
6.1. Образцы сыворотки (плазмы) крови можно хранить при температуре от 2 до 8 °С 
ве более 5 суток „ли при температуре минус 20"С (и ниже) не более 3 мес. Допушется пп 
нократиое заморажииаиие-раамораживание „бразнов сыворо™ (плазмы) к  п  
мораживания образцы тщательцо перемешать.
влетишь
М И И  при


--- стр. 9 ---
Хранить не более 6 ч при температуре от 18 до 25 °С.
7.7. Приготовление рабочего раствора тетраметилбензидина
В соответствии с числом используемых стрипов (см. таблицу) в ванночку для реаген­
тов, входящую в состав набора, внести необходимое количество концентрата тетраметилбен­
зидина и добавить необходимое количество субстратного буферного раствора, тщательно 
перемешать.
Хранить не более 6 ч при температуре от 18 до 25 °С в защищенном от света месте.
7.8. Стоп-реагент готов к использованию.
Таблица расхода компонентов набора
Кол-во
исполь­
зуемых
стрипов
Рабочий раствор конъ­
югата № 1
Рабочий раствор конъ­
югата № 2
Рабочий раствор 
тетраметилбензидина
Промывочный раствор
Конъюгат 
№ 1 ,
концентрат,
мкл
Раствор для 
разведения 
конъюгата 
№ 1, мл
Конъюгат
№2,
концентрат,
мкл
Раствор для 
разведения 
конъюгата 
№ 2, мл
Концентрат
тетраметил­
бензидина,
мкл
Субстратный 
буферный 
раствор, мл
25-кратный 
концентрат 
фосфатно­
солевого 
буферного 
раствора с 
твином, мл
Вода ди­
стилли­
рованная.
мл
2 100 1,0 200 2,0 100 2,0 4,0 до 100
4 200 2,0 400 4,0 200 4,0 8,0 до 200
6 300 3,0 600 6,0 300 6,0 12,0 до 300
8 400 4,0 800 8,0 400 8,0 16,0 до 400
10 500 5,0 1000 10,0 500 10,0 20,0 до 500
12 600 6,0 1200 12,0 600 12,0 24,0 до 600
7.9. Внесение контрольных и исследуемых образцов.
7.9.1. Контрольные и анализируемые образцы вносить в дублях в лунки двух стрипов - 
одна лунка используется для постановки прямого ИФА (с добавлением РРО, не содержащего 
нейтрализующих HBsAg антител), вторая - для конкурентного ИФА (с добавлением РПА, 
содержащего нейтрализующие HBsAg антитела). Соответственно, стрипы следует использо­
вать попарно -  один для постановки прямого, другой - для конкурентного ИФА.
7.9.2. Во все лунки стрипов для прямого ИФА (например, с нечетными номерами) вне­
сти по 50 мкл РРО, а во все лунки стрипов для конкурентного ИФА (например, с четными 
номерами) - по 50 мкл РПА.
7.9.3. Внести по 100 мкл контрольных образцов в лунки стрипов для прямого и конку­
рентного ИФА:
• 2 лунки - по 100 мкл К^;


--- стр. 10 ---
7o/J
УТВЕРЖДЕНА
Приказом Росздравнадзора
от
. «УТВЕРЖДАЮ»
^  Генеральный директор
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
набора реагентов для иммуноферментного подтверждения присутствия 
HBs-антигена вируса гепатита В (HBsAg-подтверждающий-ИФА-БЕСТ)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов HBsAg-подтверждающий-ИФА-БЕСТ (далее по тексту -  набор) 
предназначен для подтверждения присутствия HBs-антигена вируса гепатита В методом 
конкурентного иммуноферментного анализа, основанного на принципе нейтрализации 
HBsAg специфическими антителами. Положительный результат, полученный в постановке 
любого комплекта набора реагентов HBsAg-ИФА-БЕСТ, должен быть подтвержден в 
реакции нейтрализации с использованием набора HBsAg-подтверждающий-ИФА-БЕСТ. 
Минимальная концентрация HBsAg, выявляемая с помощью данного набора, составляет по 
отраслевому стандартному образцу HBsAg (ОСО 42-28-311-06П) - 0,01 МЕ/мл.
1.2. Набор рассчитан на проведение анализа 41 неизвестного образца, 7 контрольных 
образцов, всего 48 определений при использовании всего планшета. Для исследования 
небольшой партии проб предусмотрено использование 2 стрипов по 8 анализов (4 
контрольных образцов и 4 неизвестных образцов).
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип действия
Метод определения основан на твердофазном иммуноферментном анализе. Во время 
первой инкубации при добавлении в лунки планшета исследуемого образца и 
биотинилированных поликлональных антител происходит связывание моноклональных 
антител, иммобилизованных на внутренней поверхности лунок, и биотинилированных
Инструкция составлена сотрудниками ЗАО «Вектор-Бест»: зам. Директора НИИ СД  
М.Ю. Рукавишниковым и зав.лабораторией И.К Кувшиновой


--- стр. 11 ---
щ
поликлональных антител с HBsAg в анализируемом образце. Во время второй инкубации 
стрептавидин, меченый пероксидазой, связывается с биотинилированными 
поликлональными антителами к HBsAg, иммобилизованными в ходе первой инкубации. Во 
время третьей инкубации с раствором тетраметилбензидина происходит окрашивание 
раствора в лунках, содержащих комплексы антиген-антитело. Степень окраски 
пропорциональна концентрации HBsAg в анализируемых пробах. Если во время первой 
инкубации в лунки дополнительно добавляется раствор подтверждающего агента, 
содержащий антитела к HBs-антигену, происходит нейтрализация HBsAg, что в конечном 
итоге приводит к уменьшению степени окраски (подавлению сигнала) в лунках на последней 
стадии ИФА. Если степень подавления сигнала 50% и более, то исследуемый образец 
считают положительным. Таким образом, для подтверждения присутствия HBsAg 
исследуемые образцы анализируют попарно -  в прямом ИФА (без добавления 
подтверждающего агента) и в конкурентном ИФА (с добавлением подтверждающего агента).
2.2. Состав набора
В состав набора входят:
- планшет разборный (12 восьмилуночных стрипов) с иммобилизованными на 
внутренней поверхности лунок моноклональными антителами к HBsAg, готовый для 
использования -  1  шт.;
-  положительный контрольный образец (К+) на основе инактивированной сыворотки 
крови человека, содержащий рекомбинантный HBsAg в концентрации (1,0±0,5) МЕ/мл, 
готовый для использования -1 флакон (2,5 мл);
-  слабоположительный контрольный образец (К+слаб) на основе инактивированной 
сыворотки крови человека, содержащий рекомбинантный HBsAg в концентрации (0,05 
±0,02) МЕ/мл, готовый для использования -  1  флакон (2,5 мл);
-  отрицательный контрольный образец (К-) на основе инактивированной сыворотки 
крови человека, не содержащий HBsAg, готовый для использования -  1  флакон (2,5 мл);
- конъюгат № 1, концентрат - биотинилированные поликлональные антитела к 
HBsAg - 1  флакон (1,0 мл);
-  конъюгат № 2, концентрат - конъюгат стрептавидина с пероксидазой хрена - 1  
флакон (1,5 мл);
- 25-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином -  1  флакон 
(40 мл);
- раствор для разведения конъюгата №1-1  флакон (7,0 мл);


--- стр. 12 ---
-  раствор для разведения конъюгата №2 - 1  флакон (13 мл);
- раствор подтверждающего агента - 1  флакон (3,0) мл;
- раствор для разведения образцов - 1  флакон (21,0) мл;
-  субстратный буферный раствор - 1  флакон (13,0 мл);
- тетраметилбензидин, концентрат -  1  флакон (1,0 мл);
- стоп-реагент, готовый для использования -  1  флакон (12,0 мл);
- пленка для заклеивания планшета - 2 шт.;
- ванночка для реагентов -  3 шт.;
- наконечники для пипетки на 4— 200 мкл - 24 шт.;
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Специфичность выявления HBsAg при проверке на панели сывороток, не 
содержащих HBsAg (СОП-06-20), - 100%.
3.2. Чувствительность - минимальная концентрация HBsAg, определяемая набором по 
ОСО 42-28-311-06П, - 0,01 МЕ/мл.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 3 (ГОСТ Р 51609-2000).
4.2. Все компоненты набора, за исключением стоп-реагента (раствор серной кислоты), 
являются нетоксичными.
Раствор серной кислоты обладает раздражающим действием. Избегать 
разбрызгивания и попадания на кожу и слизистые. В случае попадания раствора серной 
кислоты на кожу и слизистые необходимо промыть поражённый участок большим 
количеством проточной воды.
4.3. При работе с набором следует соблюдать «Правила устройства, техники 
безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной 
гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических 
учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).
4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые 
перчатки, так как образцы сыворотки крови человека следует рассматривать как 
потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, 
вирусы гепатита или любые другие возбудители вирусных и бактериальных инфекций.
4.5. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с набором, 
должны быть соответствующим образом промаркированы.


--- стр. 13 ---
7 ^  ,,
4.6. Запрещается приём пищи, использование косметических средств и курение в 
мещениях, предназначенных для работы с наборами.
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ,
НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ:
- спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий проводить измерения 
[тической плотности растворов в лунках стрипов при длине волны 450 нм и/или в 
1ухволновом режиме при основной длине волны 450 нм и длине волны сравнения в 
шпазоне 620 нм - 650 нм;
-  автоматический или ручной промыватель для планщетов любого типа;
- холодильник бытовой;
- щейкер орбитального типа на 700-800 об/мин, либо суховоздущный термостат 
одцерживающие температуру (42±1)°С;
-  пипетки полуавтоматические одноканальные с переменным или фиксированным 
бъёмом со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объёмы жидкости от 5 до 
000 мкл;
- пипетка полуавтоматическая многоканальная со сменными наконечниками, 
юзволяющая отбирать объёмы жидкостей до 350 мкл;
- перчатки резиновые хирургические;
- бумага фильтровальная лабораторная;
- цилиндр мерный 2-го класса точности вместимостью 100 мл, 1000 мл;
-  колба вместимостью 1000 мл, 2000 мл;
- вода дистиллированная;
- 6% раствор перекиси водорода.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Образцы крови у обследуемых лиц в количестве не менее 1  мл отбирают из вены. 
Сыворотку крови тщательно отделяют от сгустка и примеси эритроцитов. Допускается 
хранение сывороток при температуре от 2 до 8 °С в течение 5 суток, либо при температуре 
минус 20 °С не более 3 месяцев. Не рекомендуется оттаивание и замораживание образцов 
более одного раза.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
7.1. Перед работой извлечь набор из холодильника, вскрыть упаковку и вьщержать все 
компоненты при комнатной температуре (18-25) °С в течение 60 мин.


--- стр. 16 ---
7.7. Приготовление рабочего раствора тетраметилбензидина
В соответствии с числом используемых стрипов (см. таблицу) в пластиковую емкость, 
входящую в состав набора, внести необходимое количество концентрата 
тетраметилбензидина и добавить необходимое количество субстратного буферного раствора, 
тщательно перемещать.
Хранить до 3 ч при температуре от (18-25)°С в защищенном от света месте.
7.8. Стоп-реагент готов к использованию.
В таблице цриведен расход реагентов в зависимости от количества используемых 
стрипов:
Таблица расхода компонентов набора
Кол-во
исполь­
зуемых
стрипов
Рабочий раствор 
конъюгата № 1
Рабочий раствор 
конъюгата № 2
Рабочий раствор 
тетраметилбензидина
Рабочий промывочный 
раствор
Конъюгат 
№ 1,
концентрат,
мкл
Раствор для 
разведения 
конъюгата 
№ 1, мл
Конъюгат
№2,
концентрат,
мкл
Раствор для 
разведенр!я 
конъюгата 
№ 2, мл
Концентрат
тетраметил­
бензидина,
мкл
субстратный 
буферный 
раствор, мл
25-кратный 
концентрат 
фосфатно­
солевого 
буферного 
раствора с 
твином, мл
Вода
дистилли­
рованная,
мл
2 100 1,0 200 2,0 140 2,0 6,0 До 150
4 200 2,0 400 4,0 280 4,0 12,0 До 300
6 300 3,0 600 6,0 420 6,0 18,0 До 450
8 400 4,0 800 8,0 560 8,0 27,0 До 675
10 500 5,0 1000 10,0 700 10,0 33,0 До 825
12 600 6,0 1200 12,0 840 12,0 40,0 До 1000
7.9. Внесение контрольньк и исследуемых образцов
Подготовить необходимое количество стрипов к работе. Контрольные и анализируемые 
образцы вносить в дублях в лунки двух стрипов -  одна лунка используется для постановки 
прямого ИФА (с добавлением раствора для разведения образцов, не содержащего 
нейтрализующих HBsAg антител), вторая - для конк)фентного ИФА (с добавлением 
раствора подтверждающего агента, содержащего нейтрализующие HBsAg антитела). 
Соответственно, стрипы используют попарно -  один для постановки прямого, другой -  для 
конкурентного ИФА.
Для внесения контрольных образцов рекомендуется следующая схема:
при использовании
• 2 стрипов -  1  лунка К+ (в дублях), 1  лунка К+слаб (в дублях), 2 лунки К- (в дублях);


--- стр. 17 ---
• 4 стрипов - 1  лунка К+ (в дублях), 1  лунка К+слаб (в дублях), 3 лунки К-(в дублях);
• 6 стрипов и более - 2 лунки К+ (в дублях), 2 лунки К+слаб (в дублях), 3 лунки К- (в 
дублях);
7.10. Во все лунки стрипов для прямого ИФА (например, с нечётными номерами) 
внести по 50 мкл раствора для разведения образцов, а во все лунки стрипов для 
конкурентного ИФА (например, с чётными номерами) -  по 50 мкл раствора 
подтверждающего агента.
7.11. Внести по 100 мкл контрольных и исследуемых образцов одновременно в лунки 
стрипов для прямого и конкурентного ИФА. Например, в лунки А-1 и А-2, В-1 и В-2, С-1 и 
С-2 внести по 100 мкл К-, в лунки D-1 и D-2 , Е-1 и Е-2 -  по 100 мкл К+слаб, в лунки F-1 и F- 
2, 0-1и G-2 -  по 100 мкл К+, в остальные лунки попарно -  по 100 мкл исследуемых образцов.
7.12. Внести во все лунки по 50 мкл рабочего раствора конъюгата № 1  (см. п. 7.5.) -  не 
касаясь наконечниками содержимого лунок и стенок лунок! Для внесения раствора 
конъюгата №1 исполъзоватъ ванночку для реагентов и одноразовые наконечники, входящие 
в состав набора.
7.13. Отрезать пленку требуемого размера. Закрыть лунки планшета, плотно прижав 
пленку. Инкубировать 40 мин при (42±1)°С на шейкере. Оптимальный режим встряхивания 
для шейкеров орбитального типа 700-800 об/мин.
Допускается инкубация в термостате при (42±1)°С в течение 1ч 30 мин.
7.14. По окончании инкубации содержимое лунок удалить отсасыванием в сосуд с 
дезинфицирующим раствором (6% раствор перекиси водорода) и промыть, добавляя во все 
лунки не менее 400 мкл рабочего промывочного раствора (см. п. 7.3). Время между 
заполнением и опорожнением лунок должно быть не менее 30 сек. Процесс промывки 
повторить 5 раз. Необходимо следить за полным опорожнением лунок после каящого  
цикла отмывки. После этого лунки промыть 2 раза дистиллированной водой. Воду из лунок 
тщательно удалить, постукивая планшетом в перевёрнутом положении по фильтровальной 
бумаге.
Примечание: Автоматическую промывку рекомендуется проводить в реж име с  
переполнением (в программе соответствующего автоматического вошера следует  
установить параметр «Overflow» с 5-ю циклами промывки и внесением в лунки по 600-700  
мкл рабочего промывочного раствора).
7.15. Внести во все лунки по 100 мкл рабочего раствора конъюгата № 2 (см п. 7.5.), 
заклеить планшет пленкой и инкубировать в течение 30 мин при температуре (42±1)°С на


--- стр. 18 ---
шейкере орбитального типа при 700-800 об/мин.
Допускается инкубация в термостате при (42±1)°С в течение 30 мин.
Для внесения рабочего раствора конъюгата №2 использовать ванночку для реагентов 
и одноразовые наконечники, входящие в состав набора.
7.16. По окончании второй инкубации удалить содержимое лунок и промыть планшет 
5 раз, как указано в п. 7.14.
7.17. Внести во все лунки по 100 мкл рабочего раствора тетраметилбензидина (см п. 
7.6) и инкубировать в темноте в течение 30 мин при комнатной температуре (18-25°С).
Для внесения раствора тетраметилбензидина использовать ванночку для реагентов и 
одноразовые наконечники, входящие в состав набора.
7.18. Внести во все лунки, по 100 мкл стоп-реагента.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
8.1. Измерить величину оптической плотности растворов в лунках на 
спектрофотометре вертикального сканирования в двухволновом режиме: при основной 
длине волны 450 нм и длине волны сравнения в диапазоне 620 нм -  650 нм; или при длине 
волны 450 нм (выведение спектрофотометра на нулевой уровень («бланк») осуществлять по 
воздуху). Измерение проводить сразу после остановки реакции.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ РЕАКЦИИ
9.1. Рассчитать среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках с 
отрицательным контрольным образцом отдельно для прямого ИФА (ОПсрК-„ряд<) и для 
конкурентного ИФА (ОП^К-конД- ОПсрК-„ря« в дальнейшем используется для подсчета
Открыт-
9.2. Среднее значение оптической плотности в лунках с отрицательным контрольным 
образцом в прямом ИФА не должно превышать 0,1 ед. опт. плотн. при использовании 
двухволнового режима измерения и не превышать 0.15 ед. опт. плотн. при измерении на 
одной длине волны. Среднее значение оптической плотности в лунках с отрицательным 
контрольным образцом в конкурентном ИФА должно быть ниже ОИ^рит-
9.3. Вычислить критическое значение оптической плотности (ОИкр^) по формуле:
О Н к р и т  - ОПср ()^ -п р я м ) + 0,05
где ОПср (К‘ прям) - среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках 
с отрицательным контрольным образцом в прямом ИФА.
9.4. Значение оптической плотности в лунках с положительным контрольным образцом
8


--- стр. 19 ---
с/ 4
Б
УТВЕРЖДЕНА
Приказом Росздравнадзора
«УТВЕРЖДАЮ»
Генеральный директор
от 201 г.№
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для иммуноферментного подтверждения 
приеутствия HBs-антигена вируеа гепатита В 
«HBsAg-подтверждающий-ИФА-БЕСТ»
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов HBsAg-подтверждающий-ИФА-БЕСТ (далее по тексту - набор) 
предназначен для подтверждения присутствия HBs-антигена вируса гепатита В методом 
конкурентного иммуноферментного анализа, основанного на принципе нейтрализации 
HBsAg специфическими антителами. Положительный результат, полученный в постановке 
любого комплекта набора реагентов HBsAg-ИФА-БЕСТ, должен быть подтвержден в реак­
ции нейтрализации с использованием набора HBsAg-подтверждающий-ИФА-БЕСТ. Мини­
мальная концентрация HBsAg, выявляемая с помощью данного набора, составляет по стан­
дартному образцу предприятия, содержащему HBsAg (per. № 05-2-433), аттестованному 
ОБТК ЗАО «Вектор-Бест», 0,01 МЕ/мл.
1.2. Набор рассчитан на проведение анализа 44 неизвестных образца, 4 контрольных 
образцов, всего 48 определений при использовании всего планшета. Для исследования не­
большой партии проб предусмотрено использование 2 стрипов по 8 анализов (4 контрольных 
образцов и 4 неизвестных образцов).
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип метода
Метод определения основан на твердофазном иммуноферментном анализе. Во время 
первой инкубации при добавлении в лунки планшета исследуемого образца и биотинилиро-
Инструкция составлена сотрудниками ЗАО «Вектор-Бест»: зам. директора НИИ СД  
М.Ю. Рукавишниковым и зав. лабораторией И. И. Кувшиновой


--- стр. 20 ---
ванных поликлональных антител происходит связывание моноклональных антител, иммоби­
лизованных на внутренней поверхности лунок, и биотинилированных поликлональных анти­
тел с HBsAg в анализируемом образце. Во время второй инкубации стрептавидин, меченный 
пероксидазой, связывается с биотинилированными поликлональными антителами к HBsAg, 
иммобилизованными в ходе первой инкубации. Во время третьей инкубации с раствором 
тетраметилбензидина происходит окрашивание раствора в лунках, содержащих комплексы 
антиген-антитело. Степень окраски пропорциональна концентрации HBsAg в анализируемых 
пробах. Если во время первой инкубации в лунки дополнительно добавляется раствор под­
тверждающего агента, содержащий антитела к HBs-антигену, происходит нейтрализация 
HBsAg, что в конечном итоге приводит к уменьшению степени окраски (подавлению сигна­
ла) в лунках на последней стадии ИФА. Если % подавления сигнала 50% и более, то иссле­
дуемый образец считают положительным. Таким образом, для подтверждения присутствия 
HBsAg исследуемые образцы анализируют попарно -  в прямом ИФА (без добавления под­
тверждающего агента) и в конкурентном ИФА (с добавлением подтверждающего агента).
2.2. Состав набора
В состав набора входят:
- планшет с иммобилизованными на внутренней поверхности лунок моноклональны­
ми антителами к HBsAg, готовый для использования -  1  шт.;
- положительный контрольный образец (К^), содержащий рекомбинантный HBsAg, 
инактивированный, готовый для использования -1 флакон (2,5 мл);
- слабоположительный контрольный образец {У^слаб), содержащий рекомбинантный 
HBsAg в концентрации (0,04 ±0,02) МЕ/мл, инактивированный, готовый для использования - 
1  флакон (2,5 мл);
- отрицательный контрольный образец (К“), не содержащий HBsAg, инактивирован­
ный, готовый для использования -  1  флакон (2,5 мл);
- конъюгат № 1, концентрат - биотинилированные поликлональные антитела к 
HBsAg - 1  флакон (0,8 мл);
- конъюгат № 2, концентрат - конъюгат стрептавидина с пероксидазой хрена - 1  фла­
кон (1,5 мл);
-  25-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином (ФСБ- 
Тх25)- 1  флакон (28,0 мл);
- раствор для разведения конъюгата №1 (РРК №1) -  1  флакон (7,0 мл);
- раствор для разведения конъюгата №2 (РРК №2) -  1  флакон (13,0 мл);
- раствор подтверждающего агента (РПА) -  1  флакон (3,0 мл);


--- стр. 21 ---
-  раствор для разведения образцов (РРО) - 1  флакон (21,0 мл);
-  субстратный буферный раствор (СБР) - 1  флакон (13,0 мл);
-  тетраметилбензидин, концентрат (ТМБ) - 1  флакон (1,0 мл);
-  стоп-реагент, готовый для использования - 1  флакон (12,0 мл). 
Набор дополнительно комплектуется:
- пленками для заклеивания планшета - 2 шт.;
-  ванночками для реагентов -  4 шт.;
- наконечниками для пипеток на 4— 200 мкл - 32 шт.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Чувствительность: минимальная концентрация HBsAg, определяемая по стан­
дартному образцу предприятия, содержащему HBsAg (per. № 05-2-433), аттестованному 
ОБТК ЗАО «Вектор-Бест», составляет 0,01 МЕ/мл.
3.2. Специфичность: по результатам анализа сывороток стандартной панели предпри­
ятия, не содержащих HBsAg (per. № 05-2-104), аттестованной ОБТК ЗАО «Вектор-Бест», со­
ставляет 100%.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 3 (ГОСТ Р 51609-2000).
4.2. Все компоненты набора являются нетоксичными. Стоп-реагент обладает раздра­
жающим действием. Избегать разбрызгивания и попадания на кожу и слизистые. В случае 
попадания стоп-реагента на кожу и слизистые необходимо промыть поражённый участок 
большим количеством проточной воды.
4.3. При работе с исследуемыми образцами следует соблюдать меры предосторожно­
сти, принятые при работе с потенциально инфекционным материалом. Основные правила 
работы изложены в «Инструкции по мерам профилактики распространения инфекционных 
заболеваний при работе в клинико-диагностических лабораториях лечебно­
профилактических учреждений», утвержденной Минздравом СССР 17 февраля 1991 г.
4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые 
перчатки, так как образцы сыворотки крови человека следует рассматривать как потенциаль­
но инфекционные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирусы гепа­
тита или возбудителей других инфекций.
4.5. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с набором, 
должны быть соответствующим образом промаркированы и храниться отдельно.
4.6. Запрещается приём пищи, использование косметических средств и курение в по­


--- стр. 22 ---
мещениях, предназначенных для работы с наборами.
4.7. Для дезинфекции посуды и материалов, контактировавших с исследуемыми и кон­
трольными образцами, рекомендуем использовать дезинфицирующие средства, не оказыва­
ющие негативного воздействия на качество ИФА, не содержащие активный кислород и хлор, 
например, комбинированные средства на основе ЧАС, спиртов, третичных аминов. Исполь­
зование дезинфицирующих средств, содержащих активный кислород и хлор (Н2О2, деохлор, хло­
рамин), приводит к серьезному искажению результатов.
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ,
НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ
- спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий проводить измерения 
оптической плотности растворов в лунках стрипов при основной длине волны 450 нм и 
длине волны сравнения в диапазоне 620 - 655 нм; допускается измерение при одной длине 
волны - 450 нм;
-  холодильник бытовой;
- термостатируемый щейкер орбитального типа на 700-800 об/мин, поддерживающий 
температуру (42±1)°С либо (37±1)°С;
- автоматический промыватель для планшетов;
- пипетки полуавтоматические одноканальные с переменным или фиксированным объ­
емом со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости от 5 до 1000 
мкл;
- пипетка полуавтоматическая многоканалъная со сменными наконечниками, позволя­
ющая отбирать объемы жидкостей до 350 мкл;
- перчатки резиновые хирургические;
- бумага фильтровалъная лабораторная;
- цилиндр мерный 2-го класса точности вместимостью 100 мл, 1000 мл;
- колба вместимостью 1000 мл, 2000 мл;
- вода дистиллированная.
6. АНАЛИЗИРУЕМБ1Е ОБРАЗЦБ1
6.1. Образцы сыворотки (плазмы) крови можно хранить при температуре от 2 до 8 °С 
не более 5 суток или при температуре минус 20°С (и ниже) не более 3 мес. Допускается од­
нократное замораживание-размораживание образцов сыворотки (плазмы) крови. После раз­
мораживания образцы тщательно перемешать.
6.2. Образцы сыворотки (плазмы) крови, содержащие взвешенные частицы, необходи­
мо очистить центрифугированием при 5000-10000 об/мин в течение 5 мин при температуре
4