Реагенты для лабораторной диагностики заболеваний эндокринной системы иммуноферментным методом — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас 1 закупка, где это изделие полностью проходит по требованиям хотя бы в одной позиции.
| Закупка | Окончание подачи | Нач. цена |
|---|---|---|
| Поставка реагентов иммуноферментных
№ 0322300112726000243 · КРАЕВОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ "РАЙОННАЯ БОЛЬНИЦА РАЙОНА ИМЕНИ ЛАЗО" МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ ХАБАРОВСКОГО КРАЯ · Хабаровский край |
08.11.2026 | 402 028 ₽ |
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 4 --- ЗАМЕЧАНИЯ: 1. Все реагенты и образцы должны достичь комнатной температуры (18 - 26° С) перед использованием. Хорошо перемешайте реагенты и образцы перед началом работы, не допуская возникновения пены. Верните все неиспользованные реагенты и образцы в холодильник (2° С - 8° С) так быстро, как это возможно. 2. Рекомендуется все стандарты, контроли и образцы анализировать в дублях. 3. Зарезервируйте 2 лунки под реагентный бланк. Реакционный буфер (без образца), используемый в качестве реагентного бланка, служит точкой «О нг/мл» для построения калибровочной кривой. 4. Одна лунка на каждом микропланшете при каждой постановке должна быть использована для бланка по воде. В эту лунку не добавляются ни образцы, ни реагенты набора. Вместо этого непосредственно перед считыванием ОП в лунку добавляется 200 мкл дистиллированной воды, аналогичной использованной для приготовления реагентов. Микропланшетный ридер должен быть запрограммирован на установку ноля или бланк по этой лунке. 5. Качество промывок сильно влияет на точность выполнения анализа. Наиболее качественной считается промывка, при которой струя промывочного раствора под давлением направлена из пластиковой сжимаемой бутыли через узкий наконечник на дно лунок микропланшета. Попадание промывочного раствора в лунку, предназначенную для бланка по воде не влияет на результаты анализа. Могут быть использованы автоматические промывающие устройства. 6. ВАЖНО; Недостаточно тщательное удаление остатков промывочного раствора может привести к неправильному развитию цветной реакции при добавлении Субстратного раствора. 7. Для получения достоверных результатов очень важно, чтобы время реакции во всех лунках было одинаковым. Рекомендуется использование 8-канальных пипеток там, где это возможно, это ускоряет процесс анализа и стандартизирует время внесения реагентов. 8. Необходимо точно соблюдать время инкубаций на каждом шаге процедуры. Для всех инкубаций время инкубации начинается с момента, когда соответствующий образец или реагент полностью добавлен. 9. Внесение реагентов или образцов должно проводиться в одинаковой последовательности и с одинаковой скоростью от лунки к лунке. 10. Не допускайте загрязнения реагентов при открытии или отборе аликвот из флаконов с исходными реагентами. 11. Не используйте Tween 20 или другие детергенты в этом анализе. 12. Не используйте реагенты с истекшим сроком хранения. 13. Не смешивайте разные лоты и реагенты из разных лотов. ПРИГОТОВЛЕНИЕ И ХРАНЕНИЕ РЕАГЕНТОВ Промывочный раствор (PBS): Разведите 30 мл ЗЗх концентрата промывочного раствора PBS до 1 литра дистиллированной водой. pH конечного раствора должен быть 7.35 ±0.1. Храните не используемый промывочный раствор при температуре 2° С - 8° С. Вылейте раствор, если заметите следы микробного или иного загрязнения. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА 1. Стандарты НА и реагентный бланк необходимо анализировать в дублях. В дублях также рекомендуется анализировать и образцы. Реакционный буфер без добавления сыворотки используется в качестве реагентного бланка, который является стандартом О нг/мл НА. Реагентный бланк проходит все последующие процедуры также, как и остальные --- стр. 5 --- стандарты и образцы. Бланк по воде должен быть включен в каждый микропланшет. Лунка, зарезервированная для бланка по воде, остается пустой до окончания всех инкубаций, 200 мкл дистиллированной воды добавляются по окончании всех процедур анализа, непосредственно перед считыванием ОП лунок микропланшета. Бланк по воде используется для установки ноля или бланкирования микропланшетного ридера. 2. Удалите стрипы, которые не будут использованы прямо сейчас, из рамки-держателя. Неиспользованные стрипы храните в пакете с осушителем. 3. Приготовьте стандарты НА и образцы. Для этого добавьте к 1 части каждого стандарта или образца 10 частей реакционного буфера (голубой раствор). Например, к 30 мкл образца необходимо добавить 300 мкл реакционного буфера, что даст объем, достаточный для проведения анализа данного образца в дубле. 4. Добавьте по 100 мкл каждого разведенного стандарта, образца и реакционного буфера (для реагентного бланка) в соответствующие лунки. Лунку для бланка по воде оставьте пустой. 5. Инкубируйте 60 минут при комнатной температуре (18° С - 26° С). 6. После окончания инкубации аккуратно переверните микропланшет и вылейте содержимое в подходящий контейнер. Не позволяйте образцам попадать в другие лунки. Промойте лунки 4 раза промывочным раствором, полностью удаляя жидкость между промывками. Используйте резкие движения кисти для удаления жидкости из лунок. Попадание промывочного раствора в лунку, предназначенную для бланка по воде, не влияет на результаты анализа. Не позволяйте лункам высыхать! 7. Добавьте 100 мкл конъюгата НАВР-пероксидаза (красный раствор) в каждую лунку, за исключением бланка по воде. 8. Инкубируйте 30 минут при комнатной температуре. 9. После окончания инкубации аккуратно переверните микропланшет и вылейте содержимое в подходящий контейнер. Промойте лунки 4 раза промывочным раствором, полностью удаляя жидкость между промывками, как это описано в п.6. Не позволяйте лункам высыхать! 10. Внесите по 100 мкл субстратного раствора во все лунки, за исключением бланка по воде, и инкубируйте 30 минут при комнатной температуре. Добавляйте субстратный раствор с одинаковой скоротью. В положительных пробах должна развиться голубая окраска. 11. Добавьте по 100 мкл стоп-раствора (0.36 N серная кислота) во все лунки, за исключением бланка по воде. Следите за тем, чтобы добавлять стоп-раствор в лунки в том же порядке и с той же скоростью, как в п. 10. Не добавляйте стоп-раствор в лунку, зарезервированную для бланка по воде. Вместо стоп-раствора добавьте в эту лунку 200 мкл дистиллированной воды, аналогичной использованной для приготовления промывочного раствора. 12. Бланкируйте или обнулите микропланшетный ридер против лунки содержащей воду (бланк по воде). Считайте ОП каждой лунки при длине волны 450 нм (фильтр сравнения 650 нм). Определите оптическую плотность не позднее чем через час после внесения стоп- раствора. РЕЗУЛЬТАТЫ: 1. Посчитайте результаты. Для этого рассчитайте среднее значение ОП для дублей для каждого стандарта, реагентного бланка и образцов. 2. Используя любой способ - 4-х параметрическую регрессию, линейную регрессию или построение вручную, рассчитайте наиболее подходящую кривую, используя средние значения ОП для О нг/мл (реагентный бланк) и стандартов 50 нг/мл, 100 нг/мл, 200 нг/мл, 500 нг/мл, 800 нг/мл. Для каждого анализа должна быть рассчитана своя кривая. Исходя из этой --- стр. 6 --- калибровочной кривой, построенной на 6 точках, рассчитайте значения концентраций НА (нг/мл) в образцах. Пример калибровочной кривой: (Эта калибровочная кривая не может быть использована для расчета результатов) 3. Все образцы с концентрацией, большей, чем у самого высокого стандарта (800 нг/мл), могут быть определены как «концентрация выше 800 нг/мл» или должны быть разбавлены и проанализированы еше раз. При этом умножайте значение полученной концентрации на коэффициент разведения. 4. Убедитесь, что выполнены все параметры контроля качества (см. «Контроль качества») перед тем, как сообщать результаты. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА: 1. Среднее значение СП для реагентного бланка должно быть ниже 0.100. Значения выше 0.100 могут указывать на загрязнение однокомпонентного субстратного раствора другими реагентами. 2. Среднее значение СП для стандарта НА 500 нг/мл должно быть 0.800 или выше. 3. ОП дублей не должна отличаться больше, чем на 20%, для образцов со средним значением ОП 0.300 или более. 4. Каждая лаборатория периодически должна проверять дискриминационный уровень и нормальные значения для своей популяции. См. Характеристики анализа. НОРМ АЛЬНЫ Е ЗНАЧЕНИЯ^^ Образцы сывороток 100 здоровых доноров (популяция А) были протестированы данным методом, наборами тремя различных лотов. Среднее значение НА для данной популяции составило 28.5 нг/мл, со стандартным отклонением 24.0 нг/мл. Нормальный дискриминационный уровень при 95% процентиле для нормальной популяции был установлен на 75 нг/мл. Таким образом. Диапазон нормальных значений НА = 0 - 7 5 нг/мл ОЖИДАЕМ ЫЕ ЗНАЧЕНИЯ: Клиническая специфичность: Здоровые люди Образцы сыворотки, полученные от здоровых доноров, были анализированы данным методом для определения клинической специфичности теста. Вторая популяция (популяция В) из 100 образцов нормальной сыворотки и 180 образцов сыворотки, полученной от здоровых доноров, была анализирована данным методом. В образцах была определена концентрация НА. По отношению к установленному диапазону нормальных значений (до 75 нг/мл), для 9 из 280 сывороток был получен позитивный результат, что в целом дает клиническую специфичность теста 96.8% Клиническая чувствительность: Заболевания печени (цирроз) 62 образца сывороток полученных у пациентов с клинически подтвержденными заболеваниями печени были анализированы данным методом для определения клинической чувствительности данного теста^^: 49 пациентов с диагносцированным циррозом (в основном алкогольным) и 13 пациентов, подвергшихся детоксификации, находящихся на лечении от алкогольной зависимости, но без каких-либо клинических или лабораторных данных о повреждениях печени. В таблице приведены сравнительные данные для образцов с --- стр. 7 --- концентрацией НА > 100 иг/мл для этих двух групп и группы здоровых доноров, взятой в качестве контрольной: Образцы Подтвержденный Цирроз Детоксификация Здоровыедоноры N 49 13 100 Среднее значение НА, нг/мл 371.6 51.4 19.8 % положительных значений 38/49 = 77.6% 2/13 = 15.4% 0/100 = 0% Средние значения концентрации НА в сыворотке для больных с циррозом и пациентов, находящихся на лечении от алкогольной зависимости, достоверно отличались от среднего значения концентрации НА в контрольной группы здоровых доноров (р<0.001) ХАРАКТЕРИСТИКИ АНАЛИЗА Чувствительность анализа Минимально определяемая концентрация НА, которую возможно достоверно измерить с помощью данного метода, составляет 10 нг/мл. См. раздел «Ожидаемые значения». ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ Воспроизводимость данного набора была определена внутри одной серии (16 определений) и между сериями исследований (3 серии по 16 определений каждая), с использованием наборов различных лотов. Значения коэффициентов вариации (CV%) приведены в таблице; К о н ц е н т р а ц и я Н А в п р о б е , н г /м л C V % в н у т р и о д н о й с е р и и C V % м е ж д у с е р и я м и 100 н г/м л 4 .7 % 7 .0 % 2 0 0 н г/м л 3 .6 % 5 .7 % 4 0 0 н г/м л 4 .2 % 6 .2 % ИЗВЛЕЧЕНИЕ ИЗВЛЕЧЕНИЕ в данном методе определялось тестированием 11 проб с известной концентрацией НА тремя наборами из различных лотов. Были приготовлены и протестированы в дублях два ряда разведений. Процент (%) извлечения рассчитывали как отношение среднего значения концентрации НА, полученного при анализе, к известной (ожидаемой) концентрации. Результаты, полученные для трех лотов, приведены в таблице: НА лот №1 НА лот №2 НА лот №3 № пробы Ожидаемое значение С редний % извлечения Ожидаемое значение Средний % извлечения Ожидаемое значение Средний % извлечения 1 600/0 102,1% 600/0 102.0% 600/0 97.7% 2 400/0 99.5% 400/0 100.3% 400/0 98.7% 3 292.2 106.4% 313.3 100.6% 314.9 101.0% 4 250.0 100.3% 250.0 99.2% 250.0 102.3% 5 211.3 107.5% 224.2 99.5% 224.6 102.3% 7 --- стр. 8 --- ~ “io“ ТГ 6 130.3 1 0 0 .0 89.9 6 8 .2 91.7% 101.3% 96.9% 1 0 1 .0 % 135.1 1 0 0 .0 90.6 64.8 97.4% 101.4% 95.7% 105.1% 134.2 1 0 0 .0 89.0 62.7 102.4% 99.9% 104.9% 1 2 2 .6 % 50.0 1 0 0 .6 %50.0 1 0 1 .1 %50.0 99.7% 25.0 95.1% 25.0 96.3% 25.0 96.4% Среднее: 100.2% Среднее: 99.9% Среднее: 102.5% ПОСТРОЕНИЕ КРИВОЙ: Калибровочную кривую определяли на основании рассчета коэффициента коррелляции (г^), полученного при интерполяции кривой, построенной для стандартов НА, от О до 800 нг/мл, поставляемых с набором. При использовании 4-х параметрической рефессии составил >0.999 для множества анализированных наборов различных лотов. ИНТЕРФЕРЕНЦИЯ И СПЕЦИФ ИЧНОСТЬ При анализе следующих компонентов сыворотки/плазмы не было обнаружено какого- либо влияния на определение НА: свободный или связанный биллирубин, гемоглобин, липопротеин плазмы (хиломикроны??), гепарин с концентрацией от 1.0 нг/мл до 1.0 мг/мл. Была исследована перекрестная реактивность НА и других гликозаминогликанов (хондроитин-4-сульфат, хондроитин-6-сульфат, дерматансульфат, гепарансульфат, кератансульфат). Перекрестной реактивности не наблюдалось, что подтверждает специфичность связывания НАВР с НА. Отдельно была исследована перекрестная реактивность НА и IgM к ревматиодному фактору. При измерении уровня IgM к ревматиодному фактору методом ELISA (твердофазного иммуноферментного аназила) было показано отсутствие корреляции между уровнями IgM к ревматиодному фактору и НА (г = 0.145). ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА Уровень гиалуроновой кислоты, полученный данным методом, может быть использован для оценки степени развития фиброза или цирроза у пациентов с хроническими заболеваниями печени. Каждый врач должен интерпретировать результаты данного теста с учетом результатов других диагностических процедур, физического состояния и истории болезни пациента. Уровень НА в сыворотке может повышаться при воспалении суставов, деструкции хрящевой ткани, при ревматоидном артрите, в связи с увеличением продукции и попадания в кровоток НА. «СОГЛАСОВАНО» Зав. Кафедрой клиническо^ Лабораторной диагностик! «РМАПО Росздрава» ^ д.м.н., профессор Долгов В.В. » 2011г. --- стр. 9 ---