Набор реагентов для определения активности лактатдегидрогеназы в сыворотке и плазме крови кинетическим УФ-методом (ЛДГ-УФ-Ново) по ТУ 9398-321-23548172-2012 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2012/13737 от 09.08.2012 · класс риска 1

Производитель: АО "Вектор-Бест" (Россия)

Вид изделия: Лактат дегидрогеназа (ЛДГ) ИВД, набор, ферментный спектрофотометрический анализ

В госконтрактах 44-ФЗ: 543 контракта, медианная цена за единицу 3 512 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДЕНА «УТВЕРЖДАЮ»
Приказом Росздравнадзора Генеральный директор
о т_________201 г. № _____ ЗАО «Вектор-Бест»
^  М.Д. Хусаинов
ИНСТРУКЦИЯ
по применению Набора реагентов для определения активности 
лактатдегидрогеназы в сыворотке и плазме крови кинетическим УФ-методом
(ЛДГ-УФ-Ново)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов ЛДГ-УФ-Ново предназначен для определения активности лактат­
дегидрогеназы (ЛДГ) в сыворотке и плазме крови человека кинетическим УФ-методом. 
Набор может быть использован в клинико-диагностических, биохимических лабораториях и 
научно-исследовательской практике.
1.2. Набор производится в лиофилизированной (варианты 1  и 2) и жидкой (варианты 
3, 4 и 5 авто)  формах.
Набор рассчитан, в зависимости от варианта комплектации, на проведение 80 (вари­
ант 1), 100 (варианты 2 и 3) или 200 (вариант 4) определений при расходе 1,0 мл рабочего 
раствора реагентов на одно определение. Вариант 5 авто  предназначен для проведения ана­
лиза на автоматических биохимических анализаторах, объём компонентов и их расфасовка 
определяется вместимостью картриджей для данной модели анализатора.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1, Принцип метода
Метод определения основан на восстановлении пирувата в лактат под действием ЛДГ. 
Одновременно происходит окисление эквимолярного количества Р-никотинамидаденин- 
динуклеотида, в результате чего происходит уменьшение оптической плотности при длине 
•  волны 340 нм. Скорость уменьшения оптической плотности прямопропорционально актив­
ности ЛДГ.
Инструкция составлена сотрудниками ЗЛО «Вектор-Бест»: нач. отдела биохимии,
’  к.б.н. Л. В. Гаевой и нач. участка Е.Л. Курбатовой.


--- стр. 2 ---
2.2. Состав набора
В состав набора входят;
-  реагент 1: буферный раствор, содержащий трис, 0,07 моль/л; пируват натрия, 1,6 
ммоль/л; натрий хлористый, 0,2 моль/л; натрия азид, 0,05%; pH 7,4 ± 0,1 -  4 флакона (по 
20 мл) (вариант 1) или 2 флакона (по 50 мл) (вариант 2);
-  реагент 1: буферный раствор, содержащий трис, 0,07 моль/л; пируват натрия, 2,0 
ммоль/л; натрий хлористый, 0,25 моль/л; натрия азид, 0,05%; pH 7,4 ± 0,1 -  4 флакона (по 
20 мл) (вариант 3); 2 флакона (по 80 мл) (вариант 4) или 1-4 картриджа (вариант 5 авто).
-  реагент 2: P-NADH. 4,8 мкмоль; трис, 0,088 ммоль -  4 флакона (лиофилизированная 
смесь) (вариант 1); —
-  реагент 2: P-NADH, 12 мкмоль; трис, 0,088 ммоль -  2 флакона (лиофилизированная 
смесь) (вариант 2);
-  реагент 2: раствор, содержащий натрий углекислый, 5 ммоль/л; калий углекислый 
кислый, 5 ммоль/л; P-NADH, 1,2 ммоль/л; натрия азид, 0,05%; pH 10,5 ± 0,1 -  4 флакона (по 
5,0 мл) (вариант 3); 2 флакона (по 20 мл) (вариант 4) или 1-4 картриджа (вариант 5 авто).
Для варианта 5 авто  объём картриджей в наборе определяется моделью анализатора.
Конечные концентрации компонентов в рабочем растворе реагентов:
- P-NADH -  0,24 ммоль/л;
- пируват натрия -  1,6 ммоль/л;
- натрий хлористый -  0,2 моль/л;
- натрия азид -  0,05%;.
- трис-буфер, pH 7,4 -  0,07 моль/л.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Концентрация аскорбиновой кислоты до 160 мг/л, билирубина -  до 20 мг/л, триг­
лицеридов -  до 1000 мг/л, глюкозы -  до 500 мг/л не влияют на точность анализа.
3.2. Линейность. Линейная область определения активности лактатдегидрогеназы -  
в диапазоне от 90 до 1055 Е/л. Отклонение от «линейности» -  не более 5%.
3.3. Чувствительность определения -  не более 75 Е/л.
3.4. Коэффициент вариации результатов определений -  не более 5%.
3.5. Нормальные величины активности лактатдегидрогеназы в сыворотке и плазме 
крови от 195 до 450 Е/л.
3.6. Рекомендуется в каждой лаборатории при использовании набора уточнить диапа­
зон нормальных величин активности ЛДГ для обследуемого контингента людей.


--- стр. 3 ---
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Потенциальный риск применения набора -  класс 1.
4.2. Реагент 1  и реагент 2 (варианты 3, 4 и 5 авто) содержат токсичное соединение -  
датрия азид. При работе с этими реагентами и рабочим раствором реагентов следует избегать 
нх разбрызгивания и попадания на кожу и слизистые. В случае попадания указанных раство­
ров на кожу и слизистые необходимо промыть поражённые участки большим количеством 
проточной воды.
4.3. При работе с исследуемыми образцами следует соблюдать меры предосторожно­
сти, принятые при работе с потенциально инфекционным материалом. Основные правила 
работы изложены в «Инструкции по мерам профилактики распространения инфекционных 
заболеваний при работе в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактичес­
ких учреждений», утвержденной Минздравом СССР 17 февраля 1991 г.
4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые 
перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфици­
рованные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатитов или 
любой другой возбудитель вирусных инфекций.
5, ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ,
НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ:
-  Полуавтоматический или автоматический биохимический анализатор (длина волны 
340 нм, термостатируемая кювета с длиной оптического пути 10 мм);
-  пипетки полуавтоматические одноканальные со сменными наконечниками, позво­
ляющие отбирать объёмы жидкости 25 и 1000 мкл;
-  пробирки стеклянные вместимостью 5,0-10 мл;
-  термостат, поддерживающий температуру +37 ± 0,5 °С;
-  перчатки резиновые или пластиковые;
-  секундомер;
-  вода дистиллированная;
-  физиологический раствор (0,9 % NaCl).
6. АНАЛИЗИРУЕМБ1Е ОБРАЗЦБ1
Для проведения анализа следует использовать свежую сыворотку или гепаринизиро- 
ванную плазму крови без следов гемолиза.
Образцы сыворотки и плазмы крови можно хранить при комнатной температуре (+18- 
25 °С) не более 3 сут. Охлаждение или замораживание образцов не допустимо!


--- стр. 4 ---
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
7.1. Приготовление рабочего раствора реагентов.
7.1.1. Содержимое одного флакона с реагентом 2 растворить в содержимом одного 
ллакона с реагентом 1  при перемешивании вручную, закрыв флакон той же пробкой (вари- 
шты 1  и 2).
7.1.2. Содержимое одного флакона с реагентом 1  объединить с содержимым одного 
^)лакона с реагентом 2, перемешать вручную (варианты 3 и 4).
Приготовленный рабочий раствор реагентов можно хранить в плотно закрытом виде 
при температуре +2-8 °С не более 1  мес.
12.  Перед началом работы кювету полуавтоматического или автоматического биохи­
мического анализатора и рабочий раствор реагентов нагреть до температуры +37+0,5 °С. При 
измерении оптической плотности постоянно поддерживать температуру +37+0,2 °С.
7.3. Проведение анализа на полуавтоматическом биохимическом анализаторе.
Внести в термостатируемую кювету полуавтоматического биохимического анализато­
ра, поддерживающую температуру +37+0,2 °С, 1000 мкл подогретого рабочего раствора реа­
гентов, добавить 25 мкл анализируемой сыворотки или плазмы крови, тщательно переме­
шать и включить секундомер.
Примечание. В зависимости от объема используемой кюветы количество рабочего 
раствора реагентов и анализируемого образца может быть пропорционально изменено (соот­
ношение образца к рабочему раствору реагентов составляет 1:40).
7.3.1. Через 30 сек измерить оптическую плотность анализируемой пробы при длине 
волны 340 нм против воздуха. Повторить измерения 3 раза с интервалом времени 1  мин.
7.3.2. Рассчитать изменение оптической плотности анализируемой пробы за 1  мин 
(АЕ /мин) по формуле;
АЕ /мин = AEn/t,
где: АЕп -  изменение оптической плотности пробы, ед. опт. плотн.; 
t -  интервал времени между измерениями, мин.
Активность ЛДГ (А), Е/л, в анализируемом образце определить по формуле:
A = (A£/. wwh) xF,
где: N E! мин -  среднее арифметическое значение изменения оптической плотно­
сти анализируемой пробы за 1  мин, ед. опт. плотн./мин;
Фактор пересчета (F) определяется по формуле:
F = (V x 1000)/(f xvxO  = (l,025 x 1000)/(22 х0,025х 1) = 6592,
где: V -  конечный объем реагентов в кювете, мл;


--- стр. 5 ---
V -  объем анализируемой пробы, мл;
Е -  коэффициент молярной экстинкции P-NADH (6,22 л х моль"' х см'*); 
i -  длина оптического пути, см;
1000 -  коэффициент пересчета для выражения активности ЛДГ в Е/л. 
Примечание. 1  Е/л = 16,67 нмоль /(лхс).
7.4. Проведение анализа на автоматическом биохимическом анализаторе.
Проведение анализа на автоматическом биохимическом анализаторе проводить по 
юответствующим загрузочным листам, предоставленным предприятием-изготовителем 
1абора, согласно инструкции по применению.
Определение активности лактатдегидрогеназы провести на автоматическом биохими- 
юском анализаторе, используя основные параметры:
Длина волны в диапазоне 340 нм
Измерение против Воздуха или воды
Метод измерения Кинетика
Единица измерения Е/л
Число знаков после запятой 0
Изменение оптической плотности Уменьшается
Температура + 37+0,2 °С
Соотношение образец : рабочий раствор 
реагентов 1  :40
Время инкубации (задержка) 30 с
Время реакции (считывания) 60-180 с
Число считываний >3
Верхний предел абсорбции реагента 
против воды 1,9 А
Нижний предел абсорбции реагента 
против воды 1,2 А
Максимально допустимое изменение 
оптической плотности/мин 0,16А
Фактор 6592
Линейность от 90 до 1055 Е/л
8. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
8.1. Набор реагентов ЛДГ-УФ-Ново должен храниться в упаковке предприятия- 
изготовителя при температуре +2-8 °С в течение всего срока годности (18 мес). Допускается 
хранение набора при температуре до +25 °С не более 10 сут.
8.2. Рабочий раствор реагентов можно хранить в плотно закрытом виде при темпера­
туре +2-8 не более 1  мес.


--- стр. 6 ---
8.3. Для проведения анализа следует использовать свежую сыворотку или гепарини- 
ированную плазму крови без следов гемолиза.
8.4. Образцы сыворотки и плазмы крови можно хранить при комнатной температуре 
+18-25 °С) не более 3 сут. Охлаждение или замораживание образцов не допустимо!
8.5. Качество набора может проверяться по отечественным и зарубежным контроль- 
1ым сывороткам, аттестованным данным методом, например: сыворотка контрольная - ново 
уровень 1), ЗАО «Вектор-Бест», Россия, кат. № В-8213, В-8214, РУ № ФСР 2008/02503 от 
17.04.2008; сыворотка контрольная - ново (уровень 2), ЗАО «Вектор-Бест», Россия, кат. № В- 
^216, В-8217, РУ № ФСР 2008/02503 от 17.04.2008; контрольная сыворотка Contronorm Plus, 
Analyticon, Германия, кат. № 1205, РУ ФСЗ 2009/05322 от 23.10.2009; контрольная сыворотка 
Contropath Plus, Analyticon, Германия, кап № 1305, РУ ФСЗ 2009/05322 от 23.10.2009.
8.6. Если величина активности ЛДГ в анализируемых образцах сыворотки и плазмы 
крови превышает 1055 Е/л, образец следует дополнительно развести физиологическим рас­
твором в 10 раз (20 мкл исследуемого образца + 180 мкл физиологического раствора), повто­
рить анализ и полученный результат умножить на 10.
8.7. Для отбора и добавления анализируемых проб и компонентов набора рекоменду­
ется использовать полуавтоматические пипетки со сменными наконечниками, аттестованные 
по значению средней дозы и сходимости результатов пипетирования.
8.8. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструк­
ции по применению набора.
По вопросам, касающимся качества набора ЛДГ-УФ-Ново, следует обращаться в ЗАО 
«Вектор-Бест» по адресу:
630559, Новосибирская область, Новосибирский район, п. Кольцово, а/я 121, 
тел. (383) 227-67-64, 227-75-50, тел./факс (383) 363-13-46
Начальник участка 
ЗАО «Вектор-Бест»
Начальник отдела биохимии 
ЗАО «Вектор-Бест» .
«СОГЛАСОВАНО»
Зав. кафедрой клинической
лабораторной диагностики
ГБОУ ДПО РМАПО
Минздравсоцразвития России 
м.п.
Е.А. Курбатова
Л.В. Гаевая
ессор В.В. Долгов 
2012 г.
Подпись 
удостоверяю: 
Специалист 
П одпись
.2 0  г о д а