Набор реагентов «Тест-система иммуноферментная для количественного определения альфа-фетопротеина в сыворотке крови человека» "ИФА-АФП" ТУ 9398-218-70423725-2016 — инструкция и характеристики

РУ: РЗН 2017/5430 от 27.02.2017 · класс риска 2б

Производитель: АО "ЭКОлаб" (Россия)

Вид изделия: Альфа-фетопротеин (АФП) ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 4 контракта, медианная цена за единицу 4 001 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
"УТВЕРЖДАЮ"
ИНСТРУКЦИЙ^, _ _ _
по применению набора pearettrSi^ ^  
«Тест-система иммуноферментная  
для количественного определения  
альфа-фетопротеина в сыворотке крови человека»  
"ИФА-АФП"
ктор
В.Ю.Борисов
2020 г.
Регистрационное удостоверение №РЗН 2017/5430 от 27.02.2017г.
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «Тест-система иммуноферментная для количественного определения альфа- 
фетопротеина в сыворотке крови человека»"ИФА-АФП" предназначен для количественного опреде­
ления альфа-фетопротеина (АФП) в сыворотке крови человека с помощью иммуноферментного ана­
лиза (ИФА) на твердофазном носителе.
Для однократного применения набора по назначению.
Для клинической лабораторной диагностики in vitro.
Показания и противопоказания к применению изделия
Изделие предназначено для обследования при подозрении на онкологические заболевания, 
(анализ показан при подозрении на первичную гепатоцеллюлярную карциному, тератобластому яич­
ка, распространение метастазов опухолей других органов в печень) и последующего мониторинга 
лечения.
Противопоказаний не существует.
Потенциальные потребители изделия
Лабораторные подразделения лечебно-профилактических учреждений.
Профессиональный уровень потенциальных пользователей
Врач клинической лабораторной диагностики, медицинский лабораторный техник.
Описание целевого аналита, сведения о его научной обоснованности.
Альфа-фетопротеин (АФП) представляет собой эмбриональный гликопротеин, с молекуляр­
ной массой от 68 до 73 КДа. Этот белок в больших количествах продуцируется клетками желточного 
мешка, печени и желудочно-кишечного тракта во время эмбрионального периода развития организ­
ма. После рождения уровень АФП в крови быстро снижается, и к 8-12 месяцам достигает низких по­
казателей, характерных для взрослых людей. Основная функция АФП в эмбриональных клетках за­
ключается в связывании гормона эстрадиола.
Количественное определение уровня альфа-фетопротеина входит в состав «Тройного теста», 
проводящегося для женщин на 16-18 неделе беременности, и предназначенного для раннего скри­
нинга пороков развития плода. Повышенный уровень АФП ассоциируется с нарушениями развития 
нервной трубки и такими патологиями, как анэнцефалия и расщепление позвоночника. Пониженный 
уровень АФП может свидетельствовать о наличии у плода синдрома Эдвардса или синдрома Дауна.
Альфа-фетопротеин также известен, как «золотой стандарт» опухолеспецифичных молеку­
лярных биомаркеров. Значительное повышение уровня этого белка в крови взрослого человека мо­
жет быть обусловлено различными злокачественными образованиями, среди которых особое поло­
жение занимают гепатоцеллюлярная карцинома (ГЦК) и герминогенные опухоли.


--- стр. 2 ---
СОСТАВ И КОМПЛЕКТАЦИЯ НАБОРА
Лммуносорбент моноклональные антитела к АФП, сорбированные в 
лунках стрипов 96-луночного разборного полистиро­
лового планшета для иммунологических реакций с 
плоским дном.
12 стрипов
допускается раздельная упаковка стрипов (по 1-4 стрипа в пакете)
Калибровочные 
пробы (KHi-e)
буферные растворы’, содержашие известную кон­
центрацию АФП (ориентировочные значения кон­
центрации АФП в КП1 -  0 нг/мл, в КП2 -  5 нг/мл; в 
КПЗ- 20 нг/мл; в КП4 -  50 нг/мл; в КП5 - 150 нг/мл; 
в КП6 —  300 нг/мл; точные значения концентраций 
указываются на этикетках флаконов для каждой се­
рии набора); прозрачная жидкость красного цвета.
KHj -  1,0 мл в 1 фл. 
КПг - 0,4 мл в 1  фл. 
К П з- 0,4 мл в 1  фл. 
КП 4 - 0,4 мл в 1  фл. 
К П5-  0,4 мл в 1 фл. 
КПб -  0,4 мл в 1  фл.
Контрольный поло­
жительный образец 
(К+)
сыворотка крови человека’, содержащая АФП в из­
вестном диапазоне концентраций (указывается на 
этикетке флакона для каждой серии набора); про­
зрачная или слегка опалесцирующая жидкость крас­
ного цвета.
0,4 мл в 1  фл.
Конъюгат мышиные моноклональные антитела к АФП, мечен­
ные пероксидазой хрена; суспензия синего цвета, 
возможно наличие белого или светло-желтого осад­
ка.
15 мл в 1  фл.
Концентрат 40- 
кратный отмываю­
щего раствора 
fOP-(x40)|
прозрачная или слегка опалесцирующая бесцветная 
пенящаяся жидкость, возможно выпадение осадка 
солей белого цвета, растворяющегося при темпера­
туре 37 в течение 30 мин
25 мл в 1  фл.
Раствор индикатор­
ный (РИ)
субстратный раствор, содержащий тетраметилбензи- 
дин (ТМБ) и перекись водорода; прозрачная бес­
цветная жидкость.
15 мл в 1  фл
Стоп-реагент Прозрачная бесцветная жидкость. 15 мл в 1  фл.
Одноразовыми наконечниками для автоматических пипеток 16 шт.
Примечания.
1. Набор включает все реагенты, необходимые для постановки ИФА, кроме очищенной (ди­
стиллированной или деионизированной) воды.
2. Допускается использование неспецифических реагентов из разных серий.
3. В составе изделия отсутствуют материалы, вступающие в непосредственный или опосре­
дованный контакт с организмом пациента и персонала, использующего изделие, при выполнении  
требований эксплуатационной документации (инструкции по применению).
4. В составе изделия отсутствуют лекарственные средства и фармацевтические субстан­
ции.
Набор укомплектован принадлежностями:
- вспомогательными пластиковыми емкостями - (4 шт.),
- клейкой пленкой для планшетов - (4 шт.)
Компоненты набора упакованы в коробку, в коробку вложена инструкция по применению и 
бланк калибровочного графика
ОСНОВНЫЕ ПОТРЕБИТЕЛЬСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Базовый вариант комплектации позволяет одномоментное дублированное исследование 48 
образцов, включая калибровочные и контрольные (на каждый образец используется 2 лунки, при 
этом на калибровочные и контрольные образцы используется 14 лунок). Предусмотрена возможность 
проведения раздельных исследований с использованием необходимого количества стрипов:
*  аттестованны относительно значений Первого международного стандарта ВОЗ 72/225 (NIBSC code: AFP)


--- стр. 3 ---
Применение изделия не имеет популяционных и демографических аспектов.
Методы стерилизации изделия 
Изделие не требует стерилизации.
Программное обеспечение работы изделия 
Отсутствует.
Техническое обслуживание и ремонт изделия
Изделие не требует технического обслуживания и не подлежит ремонту.
ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
Используется «сэндвич» вариант ИФА с двумя видами моноклональных антител, полученных 
к разным эпитопам альфа-фетопротеина. Моноклональные антитела к одному из эпитопов антигена 
нанесены на поверхность лунок иммуносорбента, антитела к другому эпитопу связаны с ферментом 
(пероксидазой) и входят в состав конъюгата. При внесении в лунки иммуносорбента исследуемого 
образца сыворотки и конъюгата происходит образование комплекса /антитело иммуносорбента/- 
/АФП/-/антитело конъюгата/. Наличие этого комплекса выявляется по цветной реакции с ТМБ. Ин­
тенсивность окрашивания реакционной смеси пропорциональна концентрации АФП в образце.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Чувствительность (минимальная определяемая концентрация АФП) -  не более 1,0 нг/мл.
Коэффициент вариации составляет менее 8 %.
Процент открытия составляет 90-110%.
Зависимость ОП от концентрации АФП сохраняет линейный характер в диапазоне от 
5 нг/мл до 300 нг/мл; отклонение от линейности в указанном диапазоне составляет менее 10%.
Интерсепт, 20%: 31,00-43,00 
50%: 90,00-120,00 
80%: 180,00-227,00
"Ноок-эффект" (обратно пропорциональная зависимость ОП от концентрации аналита, возни­
кающая при высоких его концентрациях) не наблюдается до концентрации АФП 5 мкг/мл.
Коэффициент корреляции : 0,998250514.
Коэффициент регрессии : 1,011.
Воспроизводимость результатов: 100%.
ИССЛЕДУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Сыворотка крови человека, объемом не менее 20 мкл.
Образцы до исследования можно хранить не более 3 сут при температуре от 2 до 8°С и 3 мес 
при температуре минус 20°С или более низкой. Допускается только однократное замораживание- 
размораживание образцов. Размороженные образцы перед исследованием тщательно перемешать. Не 
допускается использование для исследования образцов с повышенным содержанием липидов или с 
признаками гемолиза, и с видимым микробным проростом.
Образцы, содержащие осадок, перед анализом центрифугировать в течение 10-15 мин при 
2500-3000 об/мин.
Сбор биологического материала должен прюизводиться в соответствии с ГОСТ Р 53079.4-2008 
«Обеспечение качества клинических лабораторных исследований».
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Набор биологически безопасен, однако с исследуемыми образцами необходимо обращаться 
как с потенциально инфицированным материалом.
Потенциальный риск применения набора -  класс 26 (Приказ №4н от 06.06.12.).
Контрольный положительный образец (К+) содержит проклин в конценлрации \%, данная 
концентрация является безопасной. ^


--- стр. 4 ---
Стоп-реагент при попадании на незащищенную кожу и слизистые может вызывать химиче­
ские ожоги. В случае попадания на кожу - немедленно промойте пораженный участок водой.
Утилизацию или уничтожение, дезинфекцию наборов реагентов следует проводить в соответ­
ствии с СанПиН 2.1.7.2790-10 "Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицин­
скими отходами" и МУ 287-113 "Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной 
очистке и стерилизации изделий медицинского назначения".
Набор реагентов, в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические 
требования к обращению с медицинскими отходами» относится к классу А - отходы, не имеющие 
контакта с биологическими жидкостями пациентов, инфекционными больными. Класс А -  эпиде­
миологически безопасные отходы, приближенные по составу к твердым бытовым отходам (ТБО).
СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ
Достоверность результатов анализа зависит от строгого соблюдения следующих правил:
• Не используйте набор с истекшим сроком годности.
• Не проводите ИФА в присутствии паров кислот, щелочей, альдегидов или пыли, кото­
рые могут менять ферментативную активность конъюгата.
• Стеклянную посуду тщательно мойте и ополаскивайте водой очищенной или исполь­
зуйте одноразовую посуду.
• Аккуратно разводите реагенты, избегая любого загрязнения.
• Ферментативная реакция очень чувствительна к присутствию ионов металла. Поэтому 
не допускайте контактов каких-либо металлических предметов с конъюгатом и растворами субстра­
тов.
• Используйте для внесения каждой пробы сменный одноразовый наконечник.
• Никогда не используйте одну и ту же емкость, для приготовления конъюгата и раствора
ТМБ.
• Проверяйте пипетки и другое оборудование на точность и правильность работы.
Оборудование и материалы
Дозаторы пипеточные (пипетки полуавтоматические одно- и многоканальные переменного 
объема) для внесения реагентов в лунки планшета с погрешностью дозирования не более 5 % с нако­
нечниками полипропиленовыми одноразовыми.
Ручные, или автоматические промыватели, или восьми- и двенадцатиканальные пипеточные 
дозаторы для промывания лунок планшета.
Цилиндр мерный вместимостью 1000 мл.
Спектрофотометр вертикального сканирования для измерения оптической плотности в лунках 
планшета при 450 нм и/или в двухволновом режиме при основной длине волны 450 нм и длине вол­
ны сравнения в диапазоне 620-650 нм.
Центрифуга лабораторная на 2,5-3,0 тыс. об/мин, термостат на 37 ®С, холодильник бытовой, 
фильтровальная бумага.
Анализатор иммуноферментный автоматический.
Вода очищенная (дистиллированная или деионизированная).
70 %-ный раствор спирта этилового и 6 %-ный раствор перекиси водорода или растворы иных 
дезинфектантов, разрешенных к применению СП 1.32322-08, кроме хлорсодержащих.
Приготовление рабочего отмывающего раствора
При выпадении осадка солей в [ОР-(х40)| прогреть его при температуре 37“С до полного рас-
творения осадка.
Конъюгат перед использованием тщательно перемешать в течение 2-3 мин.
При постановке на полном планшете с использованием ИФА-анализаторов 25мл [OP-(x40)J 
довести водой очищенной до 1  л.
При дробной "ручной" постановке использовать соотношения объемов [ОР-(х40)] и воды.
Число Стрипов 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
[ОР-(х40)1, мл 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 25
Вода очищенная, 
мл до 160 до
240
до
320
до
400
до
480
до
560
до
640
до
720
до
800
до
880
до
1000


--- стр. 5 ---
/
/
Готовый рабочий отмывающий раствор хранить при температуре от 2 до 8 °С не более 30 су- 
/ток, при комнатной температуре - не более 15 суток.
Примечание: Все реагенты, кроме отмывающего раствора, готовы х применению.
Проведение анализа ("ручная” постановка)
Перед работой извлечь набор из холодильника, вскрыть упаковку и выдержать все реагенты 
перед проведением анализа не менее 30 мин при температуре от 18 до 25°С (пакет с иммуносорбен­
том выдерживать при указанной температуре до вскрытия!). Жидкие реагенты тщательно переме­
шать. Извлечь из пакета планшет, вскрьш выше замка «zip-lock», и установить на рамку необходи­
мое для проведения ИФА количество стрипов. Неиспользованные стрипы немедленно поместить 
обратно в пакет с влагопоглотителем, удалить из него воздух, плотно закрыть «zip-lock» и поместить 
в холодильник.
Отобранные стрипы вставить в рамку-держатель.
Исследуемые образцы, в которых ранее была определена концентрация АФП более 300 нг/мл, 
предварительно развести в КП1 (концентрация АФП должна попадать в диапазон от 5 нг/мл до 
300 нг/мл)
Внимание! Соблюдение указанных ниже температуры и времени инкубации планшетов  
на каждой стадии постановки крайне важно для получения достоверных результатов.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
А КП1 КП1 И02 И02 ИОЮ ИОЮ ИОЮ ИОЮ И026 И026 И034 И034
В КП2 КП2 ИОЗ ИОЗ ИОН ИОН ИОЮ ИОЮ И027 И027 ИОЗЗ И035
С КПЗ КПЗ И04 И04 И012 И012 ИО20 ИО20 И028 И028 И036 И036
D КП4 КП4 И05 И05 И013 И013 И021 И021 И029 И029 И037 И037
Е КП5 КП5 И06 И06 И014 И014 И022 И022 ИОЗО ИОЗО И038 ИОЗ 8
F КП6 КП6 И07 И07 И015 И015 И023 И023 И031 И031 И039 И039
G к+ к+ И08 И08 И016 ИОЮ И024 И024 И032 И032 ИО40 ИО40
Н И01 И01 И09 И09 И017 И017 И025 И025 ИОЗЗ ИОЗЗ И041 И041
1. Внести в лунки планшета (как можно ближе ко дну каждой лунки) по 10 мкл контрольньк 
проб и исследуемых образцов в соответствии со схемой их внесения.
2. Добавить в каждую лунку по 100 мкл конъюгата.
Внимание! Максимальная воспроизводимость результатов обеспечивается соблюдением  
одного и того же порядка внесения реагентов. Общее время внесения образцов и конъюгата не  
должно превышать 15 мин. В противном случае калибраторы следует вносить в отведенные  
для них лунки после пипетирования первой половины проб. Если для анализа используется  
больше одного планшета^ калибров!^ следует выполнять для каждого планшета.
3. Инкубировать планшет при температуре от 18 до 25°С в течение 60 мин.
4. По окончании инкубации удалить содержимое лунок в контейнер для сбора жидких отходов 
и промыть лунки 5 раз отмывающим буферным раствором, заполняя лунки до краев и выдерживая их 
с водой каждый раз по 30 с. По окончании промывки остатки раствора удалить из лунок, постукивая 
перевернутым планшетом по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге.
5. Внести во все лунки по 100 мкл РИ и выдержать стрипы 15 мин в защищенном от света ме­
сте при температуре от 18 до 25°С.
6. Добавить по 100 мкл стоп-реагента в каждую лунку, соблюдая последовательность и ско­
рость внесения в них РИ и не более чем через 15 мин приступить к учету результатов.
Регистрация и учет результатов
Результаты ИФА регистрировать спектрофотометрически, измеряя оптическую плотность 
(ОП) при двух длинах волн -  450 нм и 620-650 нм. При отсутствии референс-фильтра на 620-650 нм 
оптическую плотность измерять при длине волны 450 нм, а выведение спектрофотометра на нулевой 
уровень ("бланк") осуществлять по воздуху.
Результаты ИФА учитывать при следующих условиях:
ОП450 Н М  КП6- более 0,500
ОП450 Н М  КП1 - менее 0,100.
В противном случае исследование необходимо повторить.


--- стр. 6 ---
/
Построить калибровочную кривую по точкам, ординатами которых являются полученные в 
/ЯФА значения ОП КП, а абсциссами -  концентрации АФП в этих пробах, указанные на этикетках 
флаконов, и определить по данной кривой концентрации АФП в и исследованных образцах (для 
разведенных образцов полученную по графику концентрацию АФП необходимо умножить на сте­
пень разведения образца). При использовании для расчетов концентраций компьютерного или встро­
енного в спектрофотометр программного обеспечения в настройках выбрать подходящий метод ап­
проксимации (кусочно-линейная интерполяция, нелинейные четырехфакторные регрессионные мо­
дели).
Полученные значения концентраций АФП в исследуемых образцах учитывать только при 
условии попадания полученного значения концентрации АФП в в диапазон, концентраций, ука­
занный на этикетке флакона.
Пример калибровочного графика
Интерпретация результатов
Содержание АФП в сыворотке крови здорового взрослого человека не превышает 12 нг/мл. 
При нормальном течении беременности концентрация альфа-фетопротеина в сыворотке крови 
матери изменяется следующим образом:
Срок беременности, неде­
ли:
Медиана концентрации, 
нг/мл:
Толерантные пре­
делы, нг/мл:
15 35 17-70
16 40 19-80
17 46 23-92
18 52 25-105
19 58 29-116
20 64 33-128
Примечание. Указанные выше значения нормальных концентраций АФП приводятся в озна­
комительных целях! Каждой лаборатории следует самостоятельно определить диапазон нормальных 
концентраций АФП с учетом используемого оборудования, способа взятия крови и методики анали­
за.


--- стр. 9 ---
ПРОШИТО
,г»:КодачЕСтвЕ листов
:^^щ ь^р о в а н о , пронумеровано
л е ч а ты ^
ж то ^
ЗАО "ЭКОлаб" 
Борисов В.Ю. 
2020 г.


--- стр. 10 ---
ЗАО "ЭКОлаб"
Инструкция
ПОРЯДОК ПРИГОТОВЛЕНИЯ КАЛИБРОВОЧНЫХ ПРОБ ДЛЯ НАБОРА
РЕАГЕНТОВ «ИФА-АФП» Стр. 1  из 6
Дата введения: / /  Cf. СОП-ПО-15-05 Копия №
Версия № 1, вводится впервые Действительно до: //. О/'
1. Назначение.
Настоящая инструкция описывает порядок приготовления калибровочных проб для набора 
реагентов «ИФА-АФП» и предназначена для микробиолога и лаборантов НПО «Гормоны. 
Онкомаркеры»
2. Персонал.
Исполнители: лаборанты НПО «Гормоны. Онкомаркеры», микробиологи НПО «Гормоны. 
Онкомаркеры»
Ответственный: начальник НПО «Гормоны. Онкомаркеры»
3. Оборудование и инвентарь.
№
позиции
Наименование
оборудования*
Число единиц Материал Технические
характеристики
1 Холодильник бытовой 
«Атлант», Беларусь
1
2 Электронные 
аналитические весы 
Ohaus Adventurer
AR2140, Канада
1 Класс точности 
ДСТУ -  I, 
дискретность 
взвешивания 
0,0001
3 Вошер автоматический 
Bio Rad PW40, США
1
4 Многоканальный 
спектрофотометр Тесап 
Sunrise, Щвейцария
1 Стандартные 
фильтры 450 нм 
и 620 нм
5 Магнитная мешалка 
MR-3000, Германия
1
*Допускается использования аналогов оборудования при соответствии технических 
характеристик.
4. Сырье и материалы.
№ позиции Наименование* НД/Фирма-
производитель
Квалификация,  
каталожный №
Основное сырье
Составил (изменил) Согласовали Утвердил
Долж.: Микробиолог 
ОПР
Долж.: Начальник ОПР Долж.: Генеральный 
директор
ФИО: Пронина,А.С. ФИО: Амелинд ФИО: Борйсе?^?В:^‘ ?'
Подпись: Подпись: Подпись:
Дата: / /  Ог (G Дата: Н.01ш Дата:
Долж.: Начальник ООК
ФИО: Овинникова С.С.
Подпись: / /  О /,
Дата; Л-у


--- стр. 11 ---
ПОРЯДОК ПРИГОТОВЛЕНИЯ КАЛИБРОВОЧНЫХ ПРОБ ДЛЯ НАБОРА
РЕАГЕНТОВ «ИФА-АФП» Стр. 2 из 9
Дата введения: СОП-ПО-15-05 Копия
№Версия № 1, вводится впервые Действительно до:
1 Очищенный
человеческий
альфа-фетопротеин
MyBioSource, США MBS230298
2 Раствор для 
разведения образцов 
для набора реагентов 
«ИФА-АФП»
СОП-ПО-15-07
3 Сухое молоко 
обезжиренное
PanReac AppliChem, 
Германия
А-0830,0500
Вспомогательные материалы
4 Международный 
стандарт WHO AFP
NIBSC,
Великобритания
AFP
5 Микропробирки 
объемом 1  мл
Sarstedt, Германия
6 Мерные стаканы 
объемом 20 мл и 
50 мл
Химлаборприбор,
Россия
7 Флаконы 
пластиковые 
объемом 1  мл
Химлаборприбор,
Россия
8 Пипетки 
автоматические 
объемом от 1  мкл до 
5 мл
Ленпипет, Россия
9 Спирт этиловый 
70%-ный
ФС-42-3071-00
10 Вата медицинская ГОСТ 5556-81
11 Марля медицинская ГОСТ 9412-77
12 Этикетки
самоклеящиеся
Lomond, Россия
13 Пленка Parafilm М® Диа М, Россия РМ996
*Допускается использование стеклянной посуды и флаконов другого объема, а также 
реагентов и вспомогательных материалов от других фирм- производителей.
5. Процедура.
5.1. Подготовка рабочего места.
5.1.1. Лаборанту НПО «Гормоны. Онкомаркеры» получить у микробиолога сменное 
задание.
5.1.2. Убедится в наличии средств по технике безопасности и средств первой 
медицинской помощи.
5.1.3. Получить у кладовщика реактивы, необходимые для приготовления 
калибровочных проб.
5.1.4. Подготовить оборудование в соответствии с инструкцией по эксплуатации.
5.1.5. Подготовить лабораторную посуду и посуду для розлива в соответствии с 
инструкциями по подготовке лабораторной посуды и посуды для розлива.
Составил (изменил) Согласовали Утвердил
Пронина А.С.


--- стр. 13 ---
/ ПОРЯДОК ПРИГОТОВЛЕНИЯ КАЛИБРОВОЧНЫХ ПРОБ ДЛЯ НАБОРА
РЕАГЕНТОВ «ИФА-АФП» Стр. 4 из 9
Дата введения: СОП-ПО-15-05 Копия
№Версия 1, вводится впервые Действительно до:
5.2.9. В каждую из 6 микропробирок отобрать по 100 мкл калибровочной пробы 
соответствующего номера и передать для контроля микробиологу.
5.2.10. Получить у микробиолога разрешение на розлив.
5.2.11. В исключительных случаях калибровочные пробы допускается разливать до 
получения разрешения от микробиолога. В этом случае разлитые во флаконы 
калибровочные пробы следует хранить в маркированном контейнере в 
холодильнике до получения разрешения. На контейнер необходимо наклеить 
этикетку «КАРАНТИН». В маршрутной карте в графе «отметка о хранении» 
наклеить этикетку «КАРАНТИН».
5.3. Контроль методом ИФА.
5.3.1. Контроль калибровочных проб проводить путем их сравнения с международным 
стандартом альфа-фетопротеина ВОЗ в соответствии с инструкцией по 
применению набора реагентов «ИФА-АФП».
5.3.2. В качестве источника данных для построения калибровочной кривой при 
проведении контроля методом ИФА использовать международный стандарт 
альфа-фетопротеина ВОЗ, разведенный до концентраций 0 нг/мл, 5 нг/мл, 20 
нг/мл, 50 нг/мл, 150 нг/мл, 300 нг/мл.
5.3.3. При нанесении международного стандарта альфа-фетопротеина ВОЗ и 
калибровочных проб на иммуносорбент пользоваться приведенной ниже схемой. 
В лунки А1 - F2 вносится международный стандарт альфа-фетопротеина ВОЗ; в 
лунки АЗ -  F4 вносятся образцы контролируемых калибровочных проб.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
А 0 нг/мл 0 нг/мл КП1 КП1
В 5 нг/мл 5 нг/мл КП2 КП2
С 20 нг/мл 20 нг/мл КПЗ КПЗ
D 50 нг/мл 50 нг/мл КП4 КП4
Е 150 нг/мл 150 нг/мл КП5 КП5
F 300 нг/мл 300 нг/мл КП6 КП6
G
Н
5.3.4. После проведения контроля методом ИФА построить калибровочный график, 
отмечая по оси абсцисс концентрации стандарта ВОЗ, а по оси ординат - 
значения оптической плотности в лунках A1-F2. Для получения функциональной 
зависимости концентрации альфа-фетопротеина от оптической плотности 
использовать методы кусочно-линейной интерполяции или нелинейной 
регрессии.
5.3.5. С помощью калибровочного графика рассчитать концентрации альфа- 
фетопротеина, соответствующие пробам КП1-КП6. Коэффициент вариации 
рассчитанных значений относительно фактических (указанных на этикетках) не 
должен превышать 8%.
5.3.6. Результат контроля зафиксировать в маршрутной карте.
5.4. Розлив.
5.4.1. Передать калибровочные пробы на участок розлива с маршрутной картой, 
подписанной ответственным микробиологом
Составил (изменил) Согласовали Утвердил
Пронина А.С.


--- стр. 14 ---
/
1 ПОРЯДОК ПРИГОТОВЛЕНИЯ КАЛИБРОВОЧНЫХ ПРОБ ДЛЯ НАБОРА
РЕАГЕНТОВ «ИФА-АФП» Стр. 5 из 9
Дата введения: СОП-ПО-15-05 Копия
№Версия № 1, вводится впервые Действительно до:
5.4.2. Розлив калибровочных проб производить с помощью пипеток объемом 50- 
1000 мкл в пластиковые флаконы объемом 1  мл. Доза розлива должна 
составлять: 1±0,020 мл для КП1 и 0,400±0,020 мл для КП2, КПЗ, КП4, КП5 и 
КП6. Для контроля погрешности дозировки розлива отбирать не менее 3 
флаконов из серии: в начале, в середине, и в конце розлива
5.4.3. Занести данные в маршрутную карту. Хранить разлитые калибровочные пробы 
при температуре 2^8® С в течение 1  месяца.
5.5. Маркировка.
5.5.1. На каждый флакон необходимо наклеить этикетку в соответствии с 
комплектацией набора.
МЕСТО ДЛЯ 
ОБРАЗЦА 
ЭТИКЕТКИ
5.6. Приготовление концентрата альфа-фетопротеина.
5.6.1. Используя чистую сухую колбу, растворить содержимое ампулы с 
лиофилизированным альфа-фетопротеином в растворе для разведения образцов. 
Объем раствора для разведения образцов рассчитать, учитывая массу, указанную 
в паспорте на ампулу с лиофилизированным альфа-фетопротеином. Конечная 
концентрация альфа-фетопротеина должна составлять 1  мкг/мл.
5.6.2. Оставшееся количество концентрата разлить порционно в микропробирки и 
хранить при -20^С.
5.7. Заключительные работы.
5.7.1. Убрать рабочее место.
Убрать, сдать кладовщику все остатки реактивов и материалов.
Все рабочие поверхности и оборудование обработать дезинфицирующим 
раствором.
5.7.4. Используемую лабораторную посуду помыть и подготовить, согласно 
инструкции по подготовке лабораторной посуды.
5.7.5. Выключить приточно-вытяжную вентиляцию, освещение и электрические 
приборы.
Сообщить микробиологу (в его отсутствие - начальнику отделения) о 
выполнении сменного задания.
5.7.2.
5.7.3.
5.7.6.
6. Документация.
6.1. Документирование процесса «Порядок приготовления калибровочных проб для набора 
реагентов «ИФА-АФП» следует осуществлять в марщрутной карте ЗФ01-ПО-15-05. 
Форма маршрутной карты представлена в Приложении №1.
6.2. Документирование процесса калибровки оборудования следует осуществлять в 
журнале калибровки оборудования.
6.3. Документирование подготовки производственного помещения следует осуществлять в 
графике уборки помещения.
7, Ответственность.
Составил (изменил) Согласовали Утвердил
Пронина А.С.


--- стр. 15 ---
/
1 ПОРЯДОК ПРИГОТОВЛЕНИЯ КАЛИБРОВОЧНЫХ ПРОБ ДЛЯ НАБОРА
РЕАГЕНТОВ «ИФА-АФП» Стр. 5 из 9
Дата введения: СОП-ПО-15-05 Копия
№Версия № 1, вводится впервые Действительно до:
5.4.2. Розлив калибровочных проб производить с помощью пипеток объемом 50- 
1000 мкл в пластиковые флаконы объемом 1 мл. Доза розлива должна 
составлять: 1±0,020 мл для КП1 и 0,400±0,020 мл для КП2, КПЗ, КП4, КП5 и 
КП6. Для контроля погрешности дозировки розлива отбирать не менее 3 
флаконов из серии: в начале, в середине, и в конце розлива
5.4.3. Занести данные в маршрутную карту. Хранить разлитые калибровочные пробы 
при температуре 2^8° С в течение 1  месяца.
5.5. Маркировка.
5.5.1. На каждый флакон необходимо наклеить этикетку в соответствии с 
комплектацией набора.
МЕСТО ДЛЯ 
ОБРАЗЦА 
ЭТИКЕТКИ
5.6. Приготовление концентрата альфа-фетопротеина.
5.6.1. Используя чистую сухую колбу, растворить содержимое ампулы с 
лиофилизированным альфа-фетопротеином в растворе для разведения образцов. 
Объем раствора для разведения образцов рассчитатъ, учитъшая массу, указанную 
в паспорте на ампулу с лиофилизированным альфа-фетопротеином. Конечная 
концентрация альфа-фетопротеина должна составлять 1  мкг/мл.
5.6.2. Оставшееся количество концентрата разлить порционно в микропробирки и 
хранить при -20^С.
5.7. Заключительные работы.
5.7.1. Убрать рабочее место.
Убрать, сдать кладовщику все остатки реактивов и материалов.
Все рабочие поверхности и оборудование обработать дезинфицирующим 
раствором.
5.7.4. Используемую лабораторную посуду помыть и подготовить, согласно 
инструкции по подготовке лабораторной посуды.
5.7.5. Выключить приточно-вытяжную вентиляцию, освещение и электрические 
приборы.
5.7.6. Сообщить микробиологу (в его отсутствие -  начальнику отделения) о 
выполнении сменного задания.
5.7.2.
5.7.3.
6. Документация.
6.1. Документирование процесса «Порядок приготовления калибровочных проб для набора 
реагентов «ИФА-АФП» следует осуществлять в маршрутной карте ЗФ01-ПО-15-05. 
Форма маршрутной карты представлена в Приложении №1.
6.2. Документирование процесса калибровки оборудования следует осуществлять в 
журнале калибровки оборудования.
6.3. Документирование подготовки производственного помещения следует осуществлять в 
графике уборки помещения.
7. Ответственность.
Составил (изменил) Согласовали Утвердил
Пронина А.С.


--- стр. 16 ---
/
ПОРЯДОК ПРИГОТОВЛЕНИЯ КАЛИБРОВОЧНЫХ ПРОБ ДЛЯ НАБОРА
РЕАГЕНТОВ «ИФА-АФП» Стр. 6 из 9
Дата введения: СОП-ПО-15-05 Копия
№Версия № 1, вводится впервые Действительно до:
За несоблюдение требований данной инструкции персонал несет должностную 
ответственность в установленном порядке
8. Литература.
8.1. СОП-ВП-11-01 «Правила подготовки производственных помещений».
8.2. СОП-ВП-11-07 «Правила подготовки персонала для работы в производственных 
помещениях».
8.3. СОП-ТБ-11-09 «Инструкция по охране труда с опасными отходами производства».
8.4. СОП-ИО-12-21 «Эксплуатация весов лабораторных Adventurer».
8.5. СОП-ИО-11-23 «Порядок эксплуатации дозаторов пипеточных с переменным объемом 
«Ленпипет»».
8.6. СОП-АД-01-04 «Порядок составления и оформления инструкций».
9. Распределение инструкции.
Подразделение Экземпляр Число
оок Оригинал 1
НПО «Гормоны. Онкомаркеры» Копия 1 1
ОПР Копия 2 1
Составил (изменил) Согласовали Утвердил
Пронина А.С.


--- стр. 17 ---
/
ПОРЯДОК ПРИГОТОВЛЕНИЯ КАЛИБРОВОЧНЫХ ПРОБ ДЛЯ НАБОРА
РЕАГЕНТОВ «ИФА-АФП» Стр. 7 из 9
Дата введения: СОП-ПО-15-05 Копия
№Версия № 1, вводится впервые Действительно до:
ЗАО «ЭКОлаб»
Приложение №1 
ЗФ 01-ПО-15-05
М аршрутная карта
калибровочных проб для набора реагентов «ИФА-АФП»
1. Приготовление калибровочных проб КП2 -  КП6.
Дата: Серия:
Наименование компонентов Характеристика
компонентов
Расчетное
количество
компонентов
Вносимое в 
раствор 
количество 
компонентов
Калибровочная проба КП2
Альфа-фетопротеин
Сухое молоко
Раствор для разведения 
образцов
Общий объем
Калибровочная проба КПЗ
Альфа-фетопротеин
Сухое молоко
Раствор для разведения 
образцов
Общий объем
Калибровочная проба КП4
Альфа-фетопротеин
Сухое молоко
Раствор для разведения 
образцов
Общий объем
Калибровочная проба КП5
Альфа-фетопротеин
Сухое молоко
Раствор для разведения 
образцов
Общий объем
Калибровочная проба КП6
Альфа-фетопротеи н
Сухое молоко
Раствор для разведения 
образцов
Общий объем
Составил (изменил) Согласовали Утвердил
Пронина А.С.


--- стр. 18 ---
ПОРЯДОК ПРИГОТОВЛЕНИЯ КАЛИБРОВОЧНЫХ ПРОБ ДЛЯ НАБОРА
РЕАГЕНТОВ «ИФА-АФП» Стр. 8 из 9
Дата введения: СОП-ПО-15-05 Копия
№Версия № 1, вводится впервые Действительно до:
2. Приготовление калибровочной пробы КП1.
Наименование компонентов Характеристика
компонентов
Расчетное
количество
компонентов
Вносимое в 
раствор 
количество 
компонентов
Сухое молоко
Раствор для разведения 
образцов
Общий объем
3. Контроль калибровочных проб в ИФА.
Дата:
Протокол № 
Концентрация альфа- 
Концентрация альфа- 
Концентрация альфа- 
Концентрация альфа- 
Концентрация альфа- 
Концентрация альфа-
фетопротеина в 
фетопротеина в 
фетопротеина в 
фетопротеина в 
фетопротеина в 
фетопротеина в
калибровочной
калибровочной
калибровочной
калибровочной
калибровочной
калибровочной
пробе КП1: 
пробе КП2: 
пробе КПЗ: 
пробе КП4: 
пробе КП5: 
пробе КП6:
Заключение:
пригодны не
пригодны
Г оден до:
Ответственный микробиолог: Подпись:
4. Розлив калибровочных проб.
Номер
калибровочной
пробы
№
серии
Объем, мл Тип флакона Доза, мл Количество
флаконов
КП1
КП2
КПЗ
КП4
КП5
КП6
Составил (изменил) Согласовали Утвердил
Пронина А.С.


--- стр. 19 ---
ПОРЯДОК ПРИГОТОВЛЕНИЯ КАЛИБРОВОЧНЫХ ПРОБ ДЛЯ НАБОРА
РЕАГЕНТОВ «ИФА-АФП» Стр. 9 из 9
Дата введения: СОП-ПО-15-05 Копия
№Версия № 1, вводится впервые Действительно до:
Номер
калибровочной
пробы
Тип дозатора Норма дозирования, 
мл
Доза
I II П
КШ 1±0,020 мл
КП2 0,400= *= 0Д 20 м л
КПЗ 0,400±0,020 мл
КП4 0,400±0,020 мл
КП5 0,400±0,020 мл
КП6 0,400±0,020 мл
Ответственный: 
5. Маркировка.
Подпись:
Дата:
Рабочее место подготовлено, этикетки предыдущих серий удалены.  
Ответственный: Подпись
Номер
калибровочной
пробы
серии
Количество 
флаконов до 
этикетирования
Количество
полученных
этикеток
Количество
этикетированных
флаконов
Количество
уничтоженных
этикеток
КП1
КП2
КПЗ
КП4
КП5
К П6
Хранение производится при температуре 2-^-8®  С:
ДА НЕТ
Ответственный: Подпись:
Маршрутная карта заполнена верно.  
Ответственный: Подпись:
Составил (изменил) Согласовали Утвердил 1
Пронина А.С.
1


--- стр. 20 ---
%
Прошнуровано, пронумеровано 
еплено печатью ^
^директора ЗАО "ЭКОлаб” 
Гашенко Т.Ю. 
2021 г.