Компоненты и добавки к сухим питательным средам для микробиологии — инструкция и характеристики

РУ: ФСЗ 2009/04465 от 01.06.2009 · класс риска 2а

Производитель: "ЛАБОРАТОРИОС КОНДА, С.А." (Испания)

Вид изделия: Реагент для проведения микробиологического теста на растворения в желчи ИВД · Питательный бульон базовый/простой питательная среда ИВД · Антимикробная добавка к питательным средам ИВД

В госконтрактах 44-ФЗ: 45 контрактов, медианная цена за единицу 13 315 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 8 ---
-Оборудование для микробиологической лаборатории (стерилизатор, ламинар, 
термостат, качалка и др.).
АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
(см. И Н С ТРУКЦ И И  для каждой среды)
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
-  Приготовление среды.
-  Посев культуры.
-  Инкубирование при определенных условиях.
-  Вьщеление чистой культуры, учет предварительных результатов..
РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Наличие и внешний вид выросших колоний микроорганизмов, характер помутнения и 
газообразования, изменение цвета среды на вносимый реагент, размер области лизиса и др. 
дифференцирующих признаков по окончании срока инкубации. !
I
ФАСОВКА [
Объем фасовки обозначен на этикетке. ?
Сухие питательные среды и их компоненты в фасовках по 115 г, 500 г, 525 г и 575 г. [
Жидкие питательные среды в фасовках: детская (8 х 20 мл) и взрослая (10 х 50 мл или |
12 X 100 мл).
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ f
Сухие питательные среды хранить в прохладном, сухом, защищенном от прямого света !
месте, при температуре не выше 25"С. Некоторые среды необходимо хранить при f
температуре +2°С - +8”С; {
Жидкие среды для гемокультур хранить при температуре +8“С -  +20‘’С. I
Температура хранения для каждой среды обозначена на этикетке. I
Сроки хранения питательных сред и их компонентов при условии их хранения f
в герметично закрытой фабричной упаковке: {
-  для сухих питательных сред и их компонентов -  4 года; !
-  для сред с содержанием селенита -  3 года; г
-  для добавок и хромогенных сред - 2 года; {
-  для жидких сред -1,5 года; |
-  для эмульсии яичного желтка - полгода. I
Во избежание гидратации, после использования питательной среды пластиковую банку
необходимо Н ЕМ ЕД Л ЕН Н О  ЗА КРЫ Т Ь. Гидратированная среда становится комковатой, 
теряет стерильность и дальнейшему использованию не подлежит.
Отработанные питательные среды с выросшими на них микроорганизмами 
подвергаются обезвреживанию путем стерилизации автоклавированием или обрабатываются 
сильнодействующими бактерицидными препаратами.


--- стр. 9 ---
2. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ
О БЩ А Я  Х А Р А К Т Е Р И С Т И К А
Сухие питательные среды представляют собой обезвоженные мелкодисперсные 
порошки. Сухие питательные среды используют для приготовления жидких сред (бульонов), 
а также полутвердых или твердых культуральных сред (агаров). Основы питательных сред не 
содержат всех необходимых компонентов и используются вместе с добавками.
И С П О Л Ь ЗО В А Н И Е
Перед применением сухие питательные среды необходимо восстановить 
дистиллированной или дионизированной водой, простерилизовать и разлить по чашкам 
Петри, колбам, пробиркам или флаконам. Перед использованием следует внимательно 
прочитать инструкцию к среде. Особое внимание нужно обратить на ингредиенты, указания 
по приготовлению и использованию, срок годности и номер партии. Важно убедиться, что 
среда не изменила своих физико-химических свойств и срок годности среды не истек.
Растворение. Для приготовления нужно использовать чистую, неповрежденную 
стеклянную посуду и очищенную (дистиллированную или деионизированную) воду. Объем 
колбы должен в 2-3 раза превышать объем готовой среды. Необходимое количество сухой 
среды следует добавить к половине объема воды и враш;ательными движениями перемешать 
до растворения. Затем постепенно добавить оставшееся количество воды, стараясь смыть со 
стенок колбы остатки среды и, плавно покачивая, перемешать. Оставить смесь на 5 минут до 
полного растворения. Если среда содержит агар, желатин или цистин, для полного 
растворения ее необходимо нагревать при постоянном помешивании, стараясь не доводить 
до кипения и не перегревать.
Стерилизация. Полностью восстановленную среду стерилизовать согласно 
инструкции. Указанные там параметры стерилизации рассчитаны на небольшие объемы 
среды. Для больших объемов время стерилизации возрастает до 30 минут, при этом 
температура стерилизации должна соответствовать указанной в инструкции для данной 
среды и, во избежание перегрева, ни в коем случае не превышать ее. Перед введением 
термолабильных добавок стерильная среда должна быть охлаждена. Добавки асептически 
вводят в жидкую среду, охлажденную до комнатной температуры, либо в агар, охлажденный 
до ЗО-ЗЗ^С.
Хранение. Если среда не использована в день приготовления, ее необходимо хранить в 
плотно закрытой таре. Агаросодержаш;ие среды при этом не следует подвергать воздействию 
высоких температур (40-50°С) во избежание образования комков. Важно помнить, что 
готовые жидкие среды при хранении быстро теряют стабильность.
Жидкие питательные среды
О БЩ А Я Х А Р А К Т Е Р И С Т И К А
Жидкие питательные среды используют для диагностики микробного заражения крови. 
Жидкие питательные среды для кровяных культур представляют собой бульоны, готовые к 
применению. Жидкие питательные среды содержат восстановленную основу и специальный 
компонент - полианетолсульфонат натрия (SP S), предотвращающий свертывание крови. Для 
облегчения внесения крови и культивирования микроорганизмов жидкие среды разливаются 
под вакуумом и наполняются СО 2, N 2, Н 2, Жидкие среды поставляются во флаконах из 
нейтрального стекла. Флаконы герметично закрыты резиновыми пробками и алюминиевыми 
крышками.
И С П О Л Ь ЗО В А Н И Е
Сухие среды для микробиологии и молекулярной биологии


--- стр. 10 ---
Засев крови во флакон надо производить после смены иглы шприца и после 
стерилизации пробки флакона. Для этого снять винтовую пробку, а резиновую обработать 
70% спиртом и настойкой йода. После подсыхания проколоть пробку иглой шприца и ввести 
во флакон кровь в соотношении 1:10 к среде и надеть винтовую пробку.
У  взрослых берется 10-30 мл крови, у детей 1-5 мл. Для взрослых предназначены 
флаконы по 50-100 мл, для детей - по 20 мл.
Флаконы необходимо инкубировать в термостате при 35-37“С не менее 7 дней, 
ежедневно осматривая, для аэробных культур -  периодически встряхивая в первые сутки, а 
оставшиеся 5 дней - однократно.
При наличии видимых признаков роста ежедневно производят микроскопические 
исследования. После исследования окрашенных мазков по Грамму производят высевы 
гемокультур на соответствующие селективные среды с последующей идентификацией.
Визуальные признаки роста гемокультур при посевах крови
Макроскопические изменения среды
Гемолиз
Помутнение
Г  азообразование
Образование пленки
Образование хлопьев
Видимые колонии («д ы м чаты е»)
Возможные микроорганизмы
Стрептококки, стафилококки, Listeria spp., Bacillus spp., клостридии
Аэробные грамотрицательные палочки, стафилококки, Bacteroides spp.
Аэробные грамотрицательные палочки, анаэробы
Bacillus spp., Pseudomonas spp., дрожжи
Stafilococcus aureus
Стрептококки, стафилококки
10


--- стр. 12 ---
2.2. Агар BIGGY (BIGGY Agar)
Д ля вы деления и идентиф икации Candida
Ф О Р М У Л А  В  Г Р А М М А Х  Н А  Л И Т Р
Д екстроза 10.00 Глицин 10.00
Цитрат аммонийного висмута 5.00 Сульфит натрия 3.00
Дрожжевой экстракт 1.00 Бактериологический агар 16.00
Конечная величина pH 6.8 ± 0.2 при 25°С  
Приготовление
Развести 45 г среды в 1  литре дистиллированной воды. Тщательно перемешать и нагреть при 
частом помешивании до полного растворения. Кипятить не более одной минуты. Охладить 
до 45-50°С. Осторожно размешать среду и разлить по 20 мл в стерильные чашки Петри. 
Н Е А ВТ О К Л А ВИ РО В А ТЫ
Использование
Агар B IG G Y  - это агар, содержащий висмут, глицин, глюкозу и дрожжевой экстракт. 
Используется для вьщеления и дифференциации С. albicans и С. tropicalis, а также для 
дифференциации видов по методу Никерсона.
Дрожжевой экстракт служит источником необходимых для роста питательных веществ: 
азота, витаминов и аминокислот; глицин стимулирует рост; декстроза - ферментируемый 
углевод, являющийся источником углерода и энергии. 
Candida spp. восстанавливают 
сульфит натрия до серы с образованием колоний цветом от коричневого до черного; цитрат 
аммонийного висмута и сульфит натрия являются также ингибиторами роста других 
бактерий.
Инокулировать и инкубировать 18-72 часа при 30 ± 2°С. Чашки со средой следует разливать 
непосредственно перед использованием. Посев на скошенные поверхности обычно дает 
неудовлетворительные результаты.
Кандидоз - наиболее часто встречающаяся инфекция, вызываемая оппортунистическими 
грибами. Дифференциация основана на морфологии колоний.
Х А Р А К Т Е Р И С Т И К И  КС>ЛОНИЙ:
С. albicans: Коричневы е или 
черные, с гладкой 
поверхностью, круглые или 
полусферические колонии с 
тонкой каймой мицелия.
С. tropicalis: Темно-коричневые 
дискретные колонии, с черной 
вы пуклостью  в центре и тонкой 
каймой мицелия. Диффузное 
почернение среды происходит только 
у  этого вида приблизительно через 72 
ч  инкубации.
С. parakrusei: Плоские, с частыми 
складками, колонии среднего размера, 
блестящ ие, темно-красновато- 
коричневого цвета, переходящего в 
светло-красновато-коричневый и 
ш ирокую  желтоватую  кайму мицелия.
С. krusei: Большие плоские, 
складчатые колонии 
серебристо-черно-коричневого 
цвета, с переходом в 
коричневую периферию и 
желтое гало.
С. pseudotropicalis: Темные 
красновато-коричневые блестящ ие, 
большие, плоские колонии с тонкой 
каймой мицелия.
С. stellatoidea: Темно-коричневые, 
плоские колонии среднего размера 
при почти полном отсутствии 
развития мицелия.
Литература
Nickerson, W .J. 1953. Reduction o f inorganic substances by yeasts. I. Extracellular reduction o f sulfite by species o f 
Candida. J. Infect. D is. 93:43.
W arren, N .G ., and K .C . Hazen. 1955. Candida, Cryptococcus and other yeasts o f m edical importance, p. 723-737. IN  
P.R . M urray, E .J. Baron, M .A . Pfaller, F.C . Tenover and R .H . Y olken  (ed.) M anual o f clin ical m icrobiology, 6* ed. 
Am erican Society for M icrobiology, W ashington D .C .
М И К Р О Б И О Л О Г И Ч Е С К И Й  Т Е С Т
Следующие результаты были получены при использовании среды на тестовых культурах 
после инкубации при температуре 30 ± 2°С и наблюдались через 18-72 часа.
12


--- стр. 13 ---
Микроорганизмы Poem Цвет
Candida albicans АТСС10231 Хороший От коричневого до черного
Candida pseudotropicalis Хороший От коричневого до красного
Escherichia coli АТСС25922 Замедленный -
Staphylococcus aureus A TCC 25923 Замедленный -
2.3. Агар CLED (CLED Agar)
Для культивирования Грам-положительных и Грам-отрицательных бактерий из мочевых 
путей. Ингибирует развитие Proteus.
Ф О Р М У Л А  В Г Р А М М А Х  Н А  Л И Т Р
Лактоза 10.00 Казеиновый пептон 4.00
Желатинный пептон 4.00 Мясной экстракт 3.00
L-цистеин 0.128 Бромтимоловый синий 0.02
Бактериологический агар 15.00
Конечная величина pH 7,3 ± 0.2 при 25°С  
Приготовление
Развести 36 г среды в 1  литре дистиллированной воды. Вьщержать 10-15 минут, затем 
тщательно перемещать. Медленно нагреть при частом помешивании. Кипятить в течение 
одной минуты. Стерилизовать 15 минут при 121°С. Разлить в чашки Петри. Когда среда 
затвердеет, перевернуть чашки для удаления избытка влаги.
Использование
Агар C LED  - неселективная дифференциальная среда для роста и подсчета 
микроорганизмов мочевых путей. Отсутствие хлорида натрия ингибирует обильное 
разрастание колоний 
Proteus и способствует росту подавляющего большинства бактерий, 
вызывающих инфекции мочевых путей, поэтому среда используется для их дифференциации 
и идентификации. Присутствие бактериальных примесей (лактобациллы и другие 
микроорганизмы) указывает на неосторожность при работе с образцами мочи.
Возбудители инфекций мочевыводящих путей, обычно растут обильно и принадлежат 
только к одному виду. Наиболее часто выделяется 
Е. соИ. Посев пробы можно делать 
методом разведения или посева штрихом на поверхность агара с помощью калиброванной 
петли. Сосчитать колонии через 18 часов инкубации при температуре 35 ± 2°С. Указать 
количество колоний в 1  мл мочи.
Х А Р А К Т Е Р И С Т И К И  К О Л О Н И Й :
Staph, aureus: темно­
желтые колонии 
диаметром 0,75 мм.
Proteus: полупрозрачные, 
синие, меньше, чем Е. 
соН
Escherichia соИ: большие, вы пуклы е, желтые, матовые, 
более интенсивного цвета в центре. Ж елты й агар (ш таммы, 
не ферментирующие лактозу: синие колонии) _______________
Литература
Bebis, Т. D. J. M ed. Lab. Technol., 26-38-41. 1968. M ackey, J. R . and Sandys, G . H . 1965.
B .M .H . 1  1173. M ackey, J. R . and Sandys, G. H . 1966. B .M .H . 1  1173. Guttman, D . A nd N ailer G .R .E ., 1967 B .M .J. 2 
343-345.
М И К Р О Б И О Л О Г И Ч Е С К И Й  Т Е С Т
Следующие результаты были получены при использовании среды на тестовых культурах
Микроорганизмы Рост Цвет колонии
Escherichia coli А ТСС 25922 Хороший Желтый (желтый агар)
Proteus vulgaris АТСС 13315 Замедленный (обильный рост замедлен) Синий -  сине-зеленый
Staphylococcus aureus АТСС 
25923
Хороший Желтый
13


--- стр. 14 ---
2.4. Агар CLED с индикатором Андраде (CLED Agar w/ Andrade’s  
Indicator).
Модификация C LED  агара для увеличения дифференциации колоний
Ф О Р М У Л А  В Г Р А М М А Х  Н А  Л И Т Р
Лактоза 10.00 Казеиновый пептон 4.00
Желатинный пептон 4.00 Мясной экстракт 3.00
L-цистеин 0.128 Индикатор Андраде 0.10
Бромтимоловый синий 0.02 Бактериологический агар 15.00
Конечная величина pH 7.5 ±  0.2 при 25°С  
Приготовление
Развести 36,2 г среды в 1  литре дистиллированной воды. Тщательно перемещать и нагреть 
при частом помешивании до полного растворения. Стерилизовать 15 минут при 121°С. 
Тщательно перемешать и разлить в чашки Петри.
Использование
Агар C LED  с индикатором Андраде имеет такой же состав, как C LED  агар, но с 
добавлением индикатора Андраде. Он способствует обнаружению колоний и идентификации 
микроорганизма при добавлении кислого фуксина.
Среда основана принципе ферментации лактозы, причем pH среды снижается при 
образовании кислоты.
Казеиновый пептон, мясной экстракт и желатиновый пептон являются источниками 
необходимых для роста питательных веществ: азота, витаминов, минеральных солей и 
аминокислот. Лактоза - ферментируемый углевод, обеспечивающий углерод и энергию. L- 
цистеин - добавка для роста цистеин-зависимых колиформ. Бромтимоловый синий и 
индикатор Андраде - индикаторы pH.
Инокулировать и инкубировать при температуре 35 ± 2°С  не более 24 часов, так как в случае 
доминирования организмов, ферментирующих лактозу, вся среда может стать розовой, 
маскируя присутствие организмов, не ферментирующих лактозу.
Х А Р А К Т Е Р И С Т И К И  К О Л О Н И Й :
Escherichia соИ: Ярко-розовые 
полупросвечивающие колонии, 
окруженные розовым гало
Р. mirabilis: Сине- 
зеленые просвечивающ ие 
колонии
Staoh. aureus: ровные, цельные, матовые; 
яркие золотисто-желтые колонии. 
Ф ерм ентирую т лактозу
Литература
Bevis, T.D. (1968) J. Med. Lab. Technol. 25.38-41. Fumiss A.L., Lee J.V . and Donovan T.J. (1978) P.H.L.S. 
Monograph series, London, H.M.S.O., 11.
М И К Р О Б И О Л О Г И Ч Е С К И Й  Т Е С Т
Следующие результаты были получены при использовании среды на тестовых культурах 
после инкубации при 35 ± 2°С  и наблюдались не позднее 24 часов.
Микроорганизм ы Р о с т Ц ве т колонии
Р. mirabilis АТСС10975 Хороший Сине-зеленый, просвечивающий
Escherichia соИ АТСС25922 Хороший Ярко-розовый, полупросвечивающий
Staph, aureus А ТСС 25923 Хороший Золотисто-желтый
14