Набор реагентов для диагностики in vitro герпесвирусных инфекций методом иммуноферментного анализа — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 2 --- Anti-HSV-1/2 Pool ELISA (IgA), EUROIMMUN AG Буфер для образцов готов к использованию голубой 1 X 100 мл^ A M P L E B U F ^ 7. Промывочный буфер Юхконцентрат бесцветный 1 X 100 млIWASHBUFFER 10х[ 8. Раствор хромогена/субстрата ТМБ/Н2О2. готов к использованию бесцветный 1 X 12 млIsubstrate I 9. Стоп-реагент 0,5 М серная кислота, готов к использованию бесцветный 1 X 12 млISTOPSOLUTI^ 10. Инструкция по применению 1 буклет 11. Протокол с заданными величинами 1 протокол [E5fl Серия [ggg Для in v itro диагностики Температура хранения 2 Невскрытый набор использовать до______ Хранение и стабильность набора: Набор следует хранить при температуре от +2 °С до +8 °С. Не замораживать. Невскрытые компоненты набора сохраняют стабильность в течение всего указанного срока годности набора. Утилизация отходов: Образцы пациентов, калибраторы, контроли и стрипы после инкубации следует рассматривать как инфицированные отходы и обращаться с ними соответствующим образом. Все реагенты следует утилизировать в соответствии с действующими официальными инструкциями. ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ Примечание: Перед использованием все реагенты должны быть прОфеты до комнатной температуры (18- 25 °С) примерно в течение 30 минут. После первого использования реагенты сохраняют стабильность в течение указанного срока годности, если они хранятся при температуре от +2 °С до +8 °С и защищены от микробной контаминации. Прочие сведения о стабильности отдельных реагентов указаны ниже. Лунки, покрытые антигенами: Готовы к использованию. Вскройте защитную упаковку планшета, расстегнув имеющукэся на пакете самоуплотняющуюся застежку. Во избежание конденсации влаги внутри лунок, не вскрывайте пакет до тех пор, пока он не нагреется до комнатной температуры. Отломив необходимое количество лунок, остальные неиспользованные лунки немедленно вложите вновь в ту же защитную упаковку и плотно закройте ее на застежку (не вынимайте из упаковки пакетик с влагопоглотителем). После первого вскрытия упаковки плотно упакованные вновь лунки с антигенами можно хранить минимум 4 месяца в сухом месте при температуре от +2 **0 до +8 °С. Калибратор и контроли: Готовы к использованию. Тщательно перемешать перед использованием. Ферментный конъюгат: Готов к использованию. Тщательно перемешать перед использованием. Буфер для образцов: Готов к использованию. Промывочный буфер: Поставляется в виде 10-кратного концентрата. Если образовались кристаллы, их можно растворить перед разведением буфера, нагревая концентрат до 37°С и интенсивно взбалть»вая. Необходимое количество концентрата следует отобрать из бутыли чистой пипеткой и растворить деионизированной или дистиллированной водой (1 часть концентрированного реагента плюс 9 частей воды). Например, для проведения анализа на 1 стрипе: к 5 мл концентрата следует добавить 45 мл воды Готовый разведенный промывочный буфер стабилен до 1 месяца, если его хранят при температуре от +2 ”С до +8 С и правильно используют. Раствор х р о м о гв н а /с у в с т р а т а : Готов к использованию. После отбора необходимого количества реагента из флакона немедленно вновь закройте его. так как раствор чувствитепен к свету Во время использования раствор хромогена/субстрата должен быть бесцветным. Не используйте раствор, если он приобрел голубую окраску. Стоп-реагекг. Готов к использованию. Предостережение; Использованная контрольная сыворотка была проверена на антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 и ви р у^ гепатита С. а также на наличие HBsAg, методами иммуиоферментного анализа и непрямой иммунофлуоресценции и показали отрицательные результаты. Тем не менее, все используемые материалы следует считать потенциально опасными и обращаться с ними, соблодая не<Лходим^ меды предосторожности. Нексгторые реагекгы содержат токсичный азид натрия. Избегайте его попадания на S ®Пср«од варус«ий*ш.ЗАО «АНАЛШИКА^Мос™,20.0 ^ 7 т37.0363. ф»с:737Ч>365. e-mail: info@amly5 ^ --- стр. 3 --- Anti-HSV-1/2 Pool ELISA (IgA), EUROIMMUN AG ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ ОБРАЗЦОВ ПАЦИЕНТОВ Материал образцов: Сыворотка или плазма (ЭДТА, гепарин или цитрат) крови человека. Стабильность: Образцы пациентов, предназначенные для исследования этим методом, можно хранить до 14 дней при температуре от +2 °С до +8 °С. Разведенные образцы необходимо использовать в течение одного рабочего дня. Разведение образцов: Образцы пациентов разводят 1:101 буфером для образцов. Например: разведите 10 мкл сыворотки в 1,0 мл буфера для образца и тщательно перемешайте на вортексе (пипетки для этого не подходят). ПРИМЕЧАНИЕ: Калибратор и контрол и готовы к использованию, их разводить не надо. ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ Инкубация с образцом (1 стадия) Внесите по 100 мкл калибратора, положительного контроля, отрицательного контроля или разведенных образцов пациентов в отдельные лунки планшета в соответствии с протоколом. Инкубируйте планшет при комнатной температуре (от +18 °С до + 25 °С ) в течение 30 минут. Промывка Ручная: Удалите жидкость из лунок и затем промойте 3 раза, используя каждый раз по 300 мкл рабочего промывочного буфера на лунку. Автоматическая: проводите в режиме с переполнением (установите в программе для соответствующего автоматического вошера параметр “Overflow”, с 3-мя циклами промывки и внесением в лунки по 400 мкл рабочего промывочного буфера. При каждом цикле промывки после заполнения лунок буфером оставляйте планшет на 30-60 секунд и затем опорожняйте. По окончании промывки (ручной или автоматической) тщательно удалите остатки жидкости из лунок, энергично постукивая перевернутым планшетом по впитывающей бумаге. Примечание: Остаточная жидкость (больше 10 мкп), обычно остающаяся в лунках после промывки, может помешать действию субстрата и снизить оптическую плотность (ОП) раствора в лунках. Недостаточно полное промывание (например, менее 3 раз, или при маленьком объеме добавляемого промывочного буфера, или при коротком времени выдерживания буфера в лунках) может в результате привести к завышенным величинам ОП в лунках. Инкубация с конъю гатом (2 стадия) Внесите в каждую лунку по 100 мкп ферментного конъюгата (меченные пероксидазой антьттела к IgA человека). Инкубируйте в течение 30 минут при комнатной температуре (от +18 ® С до + 25 °С). Промывка Удалите жидкость из лунок. Промойте, как описано ранее. Инкубация с субстратом (3 стадия) Внесите в каждую лунку по 100 мкп раствора хромогена/субстрата. Инкубируйте планшет в течение 15 минут при комнатной температуре (от +18 ® С до +25 '’С) в защищенном от прямого солнечного света месте. Остановка реакции Добавьте в каждую лунку по 100 мкл стоп-реагента (в той же последовательности и с такой же скоростью, как вносился раствор хромогена/субстрата). Измерение Фотометрическое измерение интенсивности окрашивания раствора в лунках проводят при основной длине волны 450 нм и при референтной длине волны между 620 нм и 650 нм в течение 30 минут после добавления стоп>реагента. Перед измерением слегка покачайте планшет, чтобы добиться гомогенного распределения раствора СХЕМА РАЗМЕЩЕНИЯ НА ПЛАНШЕТЕ ОБРАЗЦОВ И КОНТРОЛЕЙ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 А С Р6 Р14 Р22 В PCS Р7 Р15 Р23 С neg ^ РЗ Р16 Р24 D Р1 Р9 Р17 Е Р2 Р10 Р18 F РЗ Р11 Р19 G Р4 Р12 Р20 Н Р5 Р13 Р21 © nqjCBoa на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», М с 2W0 тел.: 737-0363, факс: 737-0365, c -n a il: info@ aoalytica.ni --- стр. 4 --- Anti-HSV-1/2 Pool ELISA (IgA), EUROIMMUN AG Представленная выше схема представляет собой пример размещения на планшете проб для полуколичественного определения IgA-антител в 24 образцах пациентов (от Р 1 до Р 24). В соответствующие лунки вносят и инкубируют калибратор (С), положительный контроль (pos.), отрицательный контроль (neg.), а также образцы пациентов (Р 1 - Р 24). Достоверность анализа можно увеличить, размещая и измеряя каждую анализируемую пробу в двух параллельных лунках (дубликатах). Лунки можно отламывать от стрипов по одной. Это позволяет привести в соответствие используемое количество лунок и количество исследуемых образцов и, таким образом, минимизировать расход реагентов. Положительный и отрицательный контроли выполняют роли внутренних контролей для проверки правильности процедуры тестирования. Их следует использовать при каждой постановке анализа. РАСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ Величина оптической плотности (ОП) в лунке с калибратором задает верхнюю границу референтного интервала неинфицированных людей (уровень отсечения, cut4>ff), рекомендованную фирмой EUROIMMUN. Величины, превышающие указанный cut-off, следует считать положительными, величины ниже cut-off - отрицательными. Полуколичественный анализ: Результаты можно оценить полуколичественно, рассчитывая отношение ОП в лунке с контрольным образцом или в лунке с образцом пациента относительно ОП в лунке с калибратором. Для расчета этого отношения используйте следующую формулу: _ ОП контрольного образца или образца пациентаОтношение (RATIO) = ------------------ — — ------Е------------------ -----------------------—ОП калибратора Фирма EUROIMMUN рекомендует следующую интерпретацию результатов: Отношение (RATIO) < 0,8: Отрицательный результат Отношение (RATIO) в интервале от > 0,8 до < 1,1: Пограничный результат Отношение (RATIO) >1,1: Положительный результат В случае пофаничного результата необходимо взять у пациента дополнительный образец крови через 7 дней и повторить тест в параллели с первым образцом. По результатам теста обоих образцов можно делать заключение об изменениях концентрации антител. Для определений, проводящихся в дубликатах, следует использовать в расчетах среднее значение двух величин. Если з т л две величины существенно расходятся между собой, анализ образца следует повторить. Для установления диагноза всегда, кроме результатов серологических исследований, необходимо учитывать клинические симптомы пациента. ХАРАКТЕРИСТИКИ ТЕСТА Калибровка: Так как в настоящее время не существует Международного стандарта (референтной сыворотки с антителами к ВПГ-2), результаты теста выражаются в форме отношения (RATIO), которое позволяет оценить относительную концентрацию антител в сыворотке или плазме. Для каждой группы тестов, выполненных на наборах определенной серии, величины ОП калибратора и отношения (RATIO), определенные для положительного и отрицательного контролей, должны лежать в границах, установленных для наборов этой серии. Протокол с установленными значениями включается в поставку набора Обнаружение отклонения контрольных значений от указанных в спецификации будет свидетельствовать о неправильной постановке анализа; в этом случае тест следует повторить. Активность фермента, используемого в составе набора, зависит от температуры, поэтому величины ОП могут варьировать, если не используется термостат. Чем выше температура воздуха в помещении во время инкубации с субстратом, тем выше величины ОП. Сходные изменения происходят и со временем инкубации Однако, таким же воздействиям подвергается и сыворотка калибратора, поэтому при расчете результатов возможные колебания в основном компенсируются. Антиген: Лунки планидата покрыты смесью полных антигенов ВПГ-1 и ВПГ-2. Источником антигенов служат инактивированные лизаты клеток BSC-1, инфицированных или штаммом “Macintyre" вируса простого герпеса 1 или штаммом “MS” вируса простого герпеса 2. А н а л и ти ч е с ка я ч у в с т в и т е л ь н о с т ь : Аналитическая чувствительность - эго величина, равная 3SD образца не содержащего аналита, и представляет собой наименьший определяемый т и ф антител Аналитическая чувствительность теста Anti-HSV-1/2 Pool EUSA (IgA) приблизительно равна отношению (RATIO) 0,3. Перекрестная реактивность: Данный иммуноферментный тест не дает перекрестной реактивности. ©Перевод т ^ с с к и & ю ы к ЗАО «АНАЛИТИКА», Моаша,2010 тел.: 737-0363, факс: 737-0365, е ^ : m fo @ a n aly ti^ --- стр. 5 --- Anti-HSV-1/2 Pool ELISA (Ig A ), EUROIMMUN AG Воспроизводимость; Воспроизводимость теста исследовали, определяя коэффициент вариации (CV) результатов анализа трех сывороток с концентрациями антител, попадающими на разные участки калибровочной кривой. Величины CV внутри одного опыта определяли из 20 параллельных измерений каждой сыворотки. Величины CV в разных опытах получали, проводя по 4 параллельных измерения каждой сыворотки в течение б различных дней. Вариабельность внутри одного опыта, п = 20 Сыворотка Среднее CV (Отношение) (%) 1 0,3 3,5 2 1,1 7.4 3 1.4. 8.6. Вариабельность в разных опытах, п = 4 х 6 Сыворотка Среднее CV (Отношение) (%) 1 0.4 5,8 2 и 7.8 3 1.5 ... 8.1... Специфичность и чувствительность: Образцы от 38 пациентов исследовали, используя набор Anti-HSV- 1/2 Pool ELISA (IgA) и другой коммерчески доступный ИФА набор в качестве референтного метода. Специфичность составила 84,6%, а чувствительность - 92,9%. Результаты 11 образцов были пофаничными и не вошли в расчет. Ввиду отсутствия «золотого стандарта» нельзя однозначно утверждать, какие из результатов более корректны по разным параметрам. п=38 Коммерческий ИФА Anti-HSV-Pool-lgA положительный пофаничный отрицательный EUROIMMUN Anti-HSV-Pool-lgA ИФА положительный 13 6 2 отрицательный 1 5 11 Референтный интервал: Уровни антител (IgA) к ВПГ-1/2 анализировали, используя ИФА набор фирмы EUROIMMUN на панели 300 здоровых доноров крови. При уровне отсечения (cut-off), равном 1,0, 34% доноров крови оказались положительными по IgA-антителам к ВПГ-1/2, что отражает известный процент инфицированности взрослого населения. КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ Простой герпес представляет собой заболевание, вызывающее формирование бляшек на коже и слизистых мембранах; оно превалирует во всем мире и обычно протекает легко. Осложнения возникают в том случае, когда затронуты и внутренние органы, в которых возникает некротизирующий воспалительный процесс. Зона поражения вирусом простого герпеса 1 типа охватывает рот и нос, вирусом простого герпеса 2 типа - гениталии. При герпетической инфекции типичными являются провоцируемые рецидивы. Антитела к ВПГ-2 могут бьггь обнаружены в сыворотке почти всех пациентов после того, как заболевание развилось. Более 90% популяции инфицировано ВПГ-1, тогда как антитела к ВПГ-2 находят только у 7-20%. Однако, вырабатываемые организмом антитела не способны предотвратить рецидив заболевания или защитить от реинфекции. При первичном заражении ВПГ-2 часто наблюдаются головная боль и ригидность шеи, в редких случаях - менингит. Если происходит инфицирование вирусом простого герпеса 2 новорожденного ребенка в родовых путях, везикулы часто находят не только на коже, но таюке во рту и на глазах, причем часто это поражение сочетается с увеличением печени и селезенки, с желтухой и энцефалитом. Отсутствие лечения заболевания у младенцев почти всегда приводит к смерти. В ним ание! П еревод сдел а н с английского оригинала инструкции. Начальник отдела продукции К .И . Бланк ©Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛШЖА», Москва, 2010тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@anafytica.ru