Наборы реагентов, калибраторов, контрольные сыворотки и принадлежности для in vitro диагностики к анализаторам Elecsys 2010 (Rack/Disk), Cobas e 411 (Rack/Disk) и платформам модульным MODULAR ANALYTICS, Cobas 6000 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 7 ---
--- стр. 8 ---
РАРР-А
Pregnancy-associated plasma protein A
Ассоциированный c беременностью плазменный протеин A
Для анализаторов Elecsys и cobas е
04854098 200
Тест-система предназначена для анализаторов:
Elecsys 2010 MODULAR ANALYTICS E l70 cobas e 411
100 тестов
cobas e 601
Внимание! Концентрацш РАРР-А в пробах может значительно варьировать в
зависимости от применяемого метода исследования. Бланк с полученными в лаборатории
показателями обязательно должен содержать информацию об используемом методе
определения РАРР-А. Уровни РАРР-А в образце сыворотки крови пациента, полученные
различными методами не могут сравниваться напрямую друг с другом, так как это может
привести к диагностической ошибке.
Если требуется замена теста для определения РАРР-А пациенту в процессе мониторинга
проводимой терапии, то следует произвести параллельное определение концентрации этого
белка новым и старым методом для сопоставления показателей.____________________________
Назначение
Тест-система для количественного определения in vitro ассоциированного с беременностью
плазменного протеина А в сыворотке крови человека.
Набор «Elecsys РАРР-А» применяется как один из компонентов в комплексе параметров для
оценки риска трисомии 21 (синдром Дауна) у плода в первом триместре беременности. Для
диагностики требуется дальнейшее обследование на наличие хромосомных аберраций.
Электрохемилюминесцентный иммунотест “ECLIA - ЭХЛА” предназначен для
использования на иммунохимических анализаторах Elecsys и cobas е.
Общая информация
Ассоциированный с беременностью плазменный протеин А человека (РАРР-А) является
крупным гликопротеином с молекулярной массой 200 kDa, который относится к пептидам
цинка [1]. РАРР-А впервые был выделен из сыворотки беременных женщин, концентрация у
которых постоянно повышалась вплоть до родов. РАРР-А продуцируется трофобластом и
секретируется в материнскую сыворотку где в основном циркулирует в виде комплекса
гетеротетромера 2:2 вместе с двумя субъединицами предшественника большого базального
эозинофильного (ргоМВР) [2,3,4].
В настоящее время доказано, что концентрация РАРР-А в сыворотке является надежны
маркером фетальной анеуплоидии. Многими исследованиями подтверждено, что РАРР-А в
сочетании со свободным В-ХГЧ и ультразвуковым исследованием (УЗИ) толщины
воротникового пространства у плода (nuchal translucency - NT) являются маркером выбора
для идентификации повышенного риска беременности плодом с синдромом Дауна в первом
триместре беременности (11-14 недели) [5]. Вспользование такой комбинации маркеров
позволяет идентифицировать патологию в 70% случаев (только по сывороточным маркерам)
и в 90% - в комбинации с УЗИ, при этом получено 5% ложно положительных результатов
[6,7,8].
Значения медиан сывороточного РАРР-А при беременности плодом с анеуплоидией ниже,
чем медианы при беременности с нормально развивающимся плодом [9].
--- стр. 9 ---
с учетом возраста беременной можно рассчитать риск синдрома Дауна у плода по
специфическому алгоритму, например базируясь на коэффициент вероятности [10].
Принцип теста
Принцип сэндвича. Общая продолжительность анализа: 18 минут.
• 1-ая инкубация: 15 мкл образца, биотинилированное моноклональное специфическое к
РАРР-А антитело и моноклональное специфическое к РАРР-А антитело, меченное
комплексом рутения*, реагируют с образованием «сэндвич»-комплекса.
• 2-я инкубация: после добавления покрытых стрептавидином микрочастиц комплекс
связывается с твердой фазой посредством взаимодействия биотина и стрептавидина.
• Реакционная смесь аспирируется в измерительную ячейку, где микрочастицы оседают на
поверхность электрода вследствие магнитного взаимодействия. Затем удаляются
несвязанные вещества с помощью ПроСелл (ProCell). После этого приложенное к
электроду напряжение вызывает хемилюминесцентную эмиссию, которая измеряется
фотоумножителем.
• Результаты определяются с помощью калибровочной кривой, получаемой специальным
для данного прибора способом калибровки через 2 точки, и эталонной кривой, получаемой
с помощью штрихового кода реактива.
• Комплекс трис(2,2'-бипиридил)рутения(П) (Ru(bpyf^s)
Реактивы - содержание и концентрации
М Микрочастицы, покрытые стрептавидином (прозрачная крышка), 1 флакон, 6,5 мл:
микрочастицы, покрытые стрептавидином 0.72 мг/мл, консервант.
R1 Анти- РАРР-А -антитела~биотин (серая крышка), 1 флакон, 9 мл:
биотинилированные моноклональные анти- РАРР-А антитела (мыши) 2,0 мг/л; TR1S
буфер 50 ммоль/л, pH 7,0; консервант.
R2 Анти- РАРР-А -антитела~Ки(Ьру)^% (черная крышка), 1 флакон, 9 мл:
моноклональные анти- РАРР-А антитела (мыши), меченные комплексом рутения, 1,0
мг/л; фосфатный буфер 50 ммоль/л, pH 7,4; консервант.
Меры предосторожности
Применять только для диагностики in vitro.
Соблюдать обычные правила предосторожности, необходимые при работе со всеми
лабораторными реактивами.
Проводить удаление отработанных материалов в соответствии с установленными
требованиями в лаборатории.
Избегать образования пены во всех типах реагентов и проб (образцы, калибраторы и
контроли).
Работа с реактивами
Реактивы в наборе собраны в готовом к употреблению виде и не должны разделяться. Вся
информация, необходимая для правильной работы, считывается автоматически со
штрихового кода реактива.
Хранение и стабильность
Хранить при 2 - 8°С.
Хранить набор реактивов «Elecsys РАРР-А » в вертикальном положении, чтобы обеспечить
полную доступность микрочастиц во время автоматического смешивания реагента перед
использованием.
Стабильность:
--- стр. 10 ---
|После вскрытия: при 2-8°С Г 4 недели
|la анализаторах: Г 3 недели
Сбор и подготовка образцов
Бш и протестированы и признаны пригодными к использованию только перечисленные ниже
т ипы образцов!
Сыворотка, собранная с использованием стандартных пробирок для сбора образцов или
пробирок, содержащих разделительный гель.
Не использовать плазму.
Образцы стабильны в течение 8 часов при 15-25°С, 3 дней при 2-8°С и 3 месяцев при минус
20“С.
Перечисленные типы образцов были протестированы в выборочных пробирках для сбора
образцов, доступных для закупок во время проведения исследований, то есть протестированы
на пригодность пробирки не всех производителей. Системы для сбора образцов могут
содержать различные материалы, которые могут в отдельных случаях отрицательно повлиять
на результаты теста. При использовании образцов, собранных в стандартных пробирках,
обращайтесь к инструкции производителя пробирок.
Образцы, содержащие осадок, должны быть отцентрифугированы перед проведением анализа.
Не использовать термически инактивированные образцы. Нельзя использовать образцы и
контроли, стабилизированные азидом.
Перед измерением выдержать сыворотки пациентов, калибраторы и контроли при
температуре окружающей среды 20 - 25°С.
Из-за возможного эффекта испарения образцы, калибраторы и контроли следует измерять на
анализаторе в пределах 2-х часов.
Материалы необходимые для проведения анализа
Прилагаемые материалы
Смотри раздел «Реактивы — состав и концентрации»
Необходимые материалы (не прилагаются)
• Кат. № 04854101, «Elecsys РАРР-А Калибровочный набор», 4 флакона х 1 мл
• Кат. № 04899881, PreciControl Maternal Care - контрольная сыворотка для материнского
скрининга, по 3 флакона х 2 мл для PreciControl Maternal Care 1, 2 и 3.
• Кат. № 11732277, Elecsys Diluent Universal, 2 x 18 мл разбавителя для проб
• Кат. № 03183971, Elecsys Diluent Universal, 2 х 40 мл разбавителя для проб
• Кат. № 11776576, Elecsys CalSet Vials, 2 х 56, флаконы для калибраторов
• Обычное лабораторное оборудование
• Анализаторы Elecsys 2010, MODULAR ANALYTICS E l70 или cobas e
Для оценки риска трисомии 21:
• Кат. № 04854071, тест-система «Elecsys свободныц В-ХГЧ», 100 определений
• Кат. № 04854080, калибровочный набор «Elecsys свободным В-ХГЧ CalSet», 4 флакона
X 1 мл
• Подходящая компьютерная программа, например: Кат. № 05126193, «SsdwLab» (версия
5.0 или более)
Аксессуары для Elecsys 2010 и cobas е 411
• Кат. № 11662988, Elecsys ProCell, 6 х 380 мл системного буфера
• Кат. № 11662970, Elecsys CleanCell, 6 х 380 мл моющего раствора для измерительной
ячейки
• Кат. № 11930346, SysWash Elecsys, 1 х 500 мл добавка для дистиллированной воды
• Кат. № 11933159, Adapter for SysClean, адаптер для системного промывающего раствора
--- стр. 11 ---
к
• Кат. № 11706802, Elecsys 2010 Assay Cup, 60 x 60 аналитических пробирок
. Кат. № 11706799, Elecsys 2010 Assay Tip, 30 x 120 наконечников для дозатора
Аксессуары для MODULAR ANALYTICS El 70 и cabas e 601
• Кат. № 04880340, Elecsys ProCell M, 2 бутыли x 2 л системного буфера
• Кат. № 04880293, Elecsys CleanCell М, 2 x 2 л моющего раствора для измерительной
ячейки
• Кат. № 03023141, PC/CC-Cups, 12 пробирок для предварительного прогревания растворов
ProCell М и CleanCell М
. Кат. № 03005712, ProbeWash М, 12 х 70 мл, чистящий раствор для финальной промывки и
промывок в процессе замены реагентов
• Кат. № 12102137, Assay Сир/Assay Tips Combimagazine М, 48 комплектов х 84
реакционных пробирок или наконечников, мещки для отходов
. Кат. № 03023150, WasteLiner, Waste bags, мещки для отходов
• Кат. № 03027651, SysClean Adapter М, адаптер для системного промывающего раствора
Аксессуары для обоих анализаторов:
. Кат. № 11298500, Elecsys SysClean, 5 х 100 мл системный промывающий раствор
Для Химального качества анализа важно следовать инструкциям к анализаторам, и следить
затем чтобы комплектация материалов для тест-системы и других расходуемых материалов
была адекватной. Перемешивание микрочастиц перед использованием и считывание ^
параметров данного теста из штрих-кода реактива происходит автоматически. Никакой
ручной работы не требуется. Если в исключительных случаях штрих-код не считывается,
введите последовательность из 15 цифр вручную.
MODULAR ANALYTICS E l70, Elecsys 2010 и cobas e; Довести температуру охлажденных
реактивов примерно до 20°С и поместить их на диск для реактивов анализатора. Избегать
образования пены. Система автоматически регулирует температуру реактивов и
открывание/закрывание флаконов.
Поместить калибраторы (Call и Са12) в отсек для проб анализатора. Открывать только на
время калибровки. Вся информация, необходимая для калибровки, содержится в штрих-коде
на этикетке флаконов и считывается автоматически. После завершения калибровки хранить
калибраторы (Call и Са12) при 2-8°С или выбросить (MODULAR ANALYTICS Е170 и
cobas е 601).
ДанныГметод стандартизован по отношению к доступному коммерческому тесту, который в
свою очередь стандартизован по Стандарту ВОЗ для РАРР-А - IRP 78/610.
Каждый набор реактивов «Elecsys РАРР-А» имеет этикетки со штриховым кодом,
содержащим полную специфическую информацию, необходимую для калибровки данной
серии реактива. Референсная калибровочная кривая адаптируется к анализатору путем
использования набора калибраторов: «Elecsys РАРР-А Калибровочный набор».
Частота калибровки. Калибровка должна проводиться каждый раз для новой партии
реактивов с использованием свежих реактив (т.е. бывшие в анализаторе не более 24 часов).
Рекомендуется обновлять калибровку следующим образом:
MODULAR ANALYTICS El 70. Elecsys 2010 и cobas e\
. через один месяц (28 дней) когда используется одна и та же партия реактивов
• через 7 дней (когда используется один набор реактивов в анализаторе)
Для всех типов анализаторов:
. по мере необходимости, например, если результаты контроля качества выходят за пределы
надлежащего диапазона.
--- стр. 12 ---
и
Контроль качества
«Elecsys PreciControl Maternal Саге 1, 2 и 3» - контрольная сыворотка для материнского
скрининга 1, 2 и 3. Можно использовать и другие подходящие контроли.
Контроли для различных диапазонов концентраций должны исследоваться как одиночные
определения минимум один раз каждые 24 часа при использовании теста, один раз для
каждой новой упаковки реактивов и после каждой калибровки. Контрольные интервалы
должны соответствовать требованиям конкретных лабораторий. Полученные значения
должны находиться в пределах установленных диапазонов. Каждая лаборатория должна
выработать правила, позволяющие принять корректирующие меры в случае, если значения
выходят за пределы диапазона.
Расчет результатов
Анализаторы автоматически рассчитывают концентрацию аналита в каждом образце в МЕ/л,
мМЕ/л или мМЕ/мл.
Ограничения - интерференция
На анализ не влияют желтуха (билирубин <205 мкмоль/л или <12 мг/дл), гемолиз
(гемоглобин <0,621 ммоль/л или <1,0 г/дл), липемия (Интралипид < 1500 мг/дл) и биотин
< 123 нмоль/л или < 30 нг/мл.
Критерий: открытие в пределах + 10% начального значения.
У пациентов, получающих лечение высокими дозами биотина, (а именно, > 5 мг/день)
следует брать пробы не раньще, чем через 8 часов после последнего введения биотина.
Не обнаружено влияние ревматоидного фактора (до 1000 МЕ/мл).
Отсутствует эффект высокой дозы при концентрации РАРР-А до 120000 мМЕ/мл.
Проведены тесты in vitro на 18 наиболее распространенных лекарственных препаратах.
Влияния на результаты анализа при этом не обнаружено.
В очень редких случаях может происходить интерференция, обусловленная очень высокими
титрами антител к аналит специфическим антителам, стрептавидину или рутению. Тест-
система содержит дополнительные компоненты, сводящие к минимуму такие эффекты.
Для диагностических целей результаты теста всегда следует рассматривать в совокупности с
историей болезни пациента, результатами клинического обследования и другими данными.
Диапазон измерения
4 - 10000 мМЕ/л (диапазон определен по нижнему пределу обнаружения и максимальной
точке референсной калибровочной кривой). Значения ниже аналитической чувствительности
метода обозначаются как <4 мМЕ/л. Значения выще верхнего предела измерения
обозначаются как >10000 мМЕ/л (или более
100000 мМЕ/л для образцов, разведенных в 10 раз).
Разведение
Образцы с концентрацией РАРР-А, превыщающей диапазон измерения, можно развести
Универсальным Раствором для разведения образцов. Рекомендуется разведение 1:10 (в
автоматическом режиме на анализаторах MODULAR ANALYTICS Е170, Elecsys 2010 и
cobase или вручную). Концентрация РАРР-А в разведенном образце должна быть >500
мМЕ/л. После ручного разведения необходимо умножить полученный результат на фактор
разведения. При разведении на анализаторах MODULAR ANALYTICS E l70, Elecsys 2010 и
cobas e прибор произведет расчет концентрации в автоматическом режиме с учетом фактора
разведения.
Ожидаемые значения и клинические исследования
Ниже представлены данные, полученные при использовании тест-системы «Elecsys РАРР-А».
1. Исследование для получения референсных диапазонов на панели образцов сыворотки крови
500 здоровых небеременных доноров (исследование Roche No. R04P026) < 7,15 мМЕ/л (95-я
перцентиль).
--- стр. 13 ---
2. Исследование тест-систем «Elecsys РАРР-А» и «Elecsys свободный (3-ХГЧ» и для оценки
риска трисомии 21 в первом триместре беременности (исследование Roche No.
В05Р020стату Июль 2007).
Исследования проводились в четырех клинических центрах в Бельгии, Швейцарии и
Германии с использованием тест-систем «Elecsys свободный (3-ХГЧ» и «Elecsys РАРР-А».
Показатели медиан (на 11-14 неделях гестации) были рассчитаны по анализу
логарифмически-линейной регрессии (log-linear regression) 3270 показателей РАРР-А в
середине соответствующих недель беременности. Гестационный возраст рассчитывался по
Неделя гестации 11 12 13 14
Количество образцов сыворотки крови 206 623 1384 1057
||едиана (мМЕ/л) 1337 1919 2926 4358
результатов на собственных пациентов и в случае необходимости определить собственные
референсные диапазоны.
Для пренатального тестирования рекомендуется периодически значения медиан
рассчитывать заново.
Клинические аналитические характеристики:
Всего было проанализировано 1079 поступивших на рутинные клинические исследования
образцов сыворотки крови от пациенток с известным исходом.. В этой группе 32 образца
крови были получены от пациенток с подтвержденным синдромом Дауна у плода. Все
образцы были параллельно исследованы методами определения РАРР-А и свободного Р-ХГЧ,
сертифицированными FMF (Fetal Medicine Foundation — Фонд Фетальной Медицины). Оценка
риска производилась с помощью компьютерной программы SsdwLab, версия 5,0. Как уже
сообщалось ранее, в данной программе используется алгоритм, описанный Palomaki и
соавторами [12] с использованием математических расчетов по распределению Гаусса [13].
Оценка риска базируется на возрасте женщины, толщины воротникового пространства плода
и результатах биохимических параметров, скорректированных различными факторами,
такими как вес, курение и этническая принадлежность беременной женщины.
Расчет индивидуального риска:
Расчет индивидуального риска беременности одним плодом с трисомией 21 был произведен
без учета показателей толщины воротникового пространства плода для демонстрации
эффективности биохимических методов. Учитывались вес женщины и курение как факторы
коррекции. Совпадение результатов оценки риска сравнивали с конкурирующими методами
при использованием дискриминационного уровня (cut-off), установленного лабораториями,
участвующими в исследовании [14,15].
Каждый пользователь метода в праве выбрать показатель дискриминационного уровня для
своей лаборатории.
Совпадение данных анализа
А. Совпадение данных анализа у беременных с нормально развивающимся плодом (п - 1047)
Риск > cut-off (Roche*) Риск < cut-off (Roche*)
Риск > cut-off (конкурирующий метод **) 55 (5.2%) 26 (2.5%)
Риск < cut-off (конкурирующий метод **) 6 (0.6%) 960 (91.7%)
D ШЧ/ случалл L / tiu^iviajlbnu paoDMDC*rv/jJU,*^imw/i
.........
выявлено 986 образцов сыворотки крови (специфичность: 94,2%), при этом конкурирующим
--- стр. 14 ---
Риск > cut-off (Roche*) Риск < cut-off (Roche*)
Риск > cut-off (конкурирующий метод **) 21 (65.6%) 0
Риск < cut-off (конкурирующий метод **) 3 (9.4%) 8 (25%)
и i 1\Г1 i v p v u x * -J ------------
выявления этой патологии составил 75% (24/32), а конкурирующим методом - 65,6% (21/32).
^ Комбинация результатов по тест-системам «Elecsys РАРР-А» и «Elecsys свободный р-
ХГЧ»
Комбинация результатов по конкурирующим тест-системам для определения свободного
** РАРР-А иР-ХГЧ
Аналитические характеристики
Ниже приведены репрезентативные данные, полученные на анализаторах. Результаты,
полученные в разных лабораториях, могут несколько различаться.
Воспроизводимость (точность)
Воспроизводимость определяли с использованием реактивов Elecsys, пулов человеческой
сыворотки и контролей в соответствии с модифицированным протоколом (ЕР5-А)
Национального комитета клинических лабораторных стандартов (NCCLS). 6 раз в день в
течение 10 дней (п=60). Воспроизводимость внутри анализа на MODULAR ANALYTICS
El70 рассчитана при п=21.
Результаты анализа представлены ниже.
Анализаторы Elecsys 2010 и cobas е 411
Воспроизводимость
внутри
постановки
Общая
воспроизводи!' аость
Образец
Среднее
значение SD CV SD CV
мМЕ/л мМЕ/л % мМЕ/л %
Сыворотка человека 1 283 6.7 2.4 6.6 2.3
Сыворотка человека 2 521 11.5 2.2 11.5 2.2
Сыворотка человека 3 4181 87.1 2.1 94.7 2.3
КС^ для материнского
скрининга 1
6630 111 1.7 133 2.0
КС для материнского
скрининга 2
3361 55.0 1.6 58.7 1.8
КС для материнского
скрининга 3
144 1.60 1.1 1.6 1.1
Анализаторы MODULAR ANALYTICS E l70 и cobas е 601
Воспроизводимость внутри
постановки
Общая
воспроизводимость
Образец 1Среднее SD CV SD |CV
--- стр. 15 ---
n
Г значение
мМЕ/л мМЕ/л % мМЕ/л %
|Сыворотка человека 1 280 5.55 2.0 7.67 2.8
[Сыворотка человека 2 506 8.33 1.7 9.83 1.9
Сыворотка человека 3 4001 75.5 1.9 92.2 2.3
КС- для материнского скрининга
1
6335 107 1.7 114 1.8
КС для материнского скрининга 2 3229 36.8 1.1 45.3 1.4
КС для материнского скрининга 3 [141 1.94 1.4 2.72 1.9
< 4 мМЕ/л.
Предел обнаружения представляет собой самую низкую концентрацию аналита, которую
можно отличить от нуля. Его вычисляют как значение концентрации, лежащее на два
стандартных отклонения выше от самого низкого стандарта (стандарт I эталонного
калибратора + 2 SD, внутри-групповое сравнение, п = 21).
Метод сравнения
Сравнение метода производилось с использованием сыворотки человека по тест-системе
«Elecsys РАРР-А» (у) и коммерчески доступному методу определения РАРР-А (х). Были
получены следующие корреляции:
Количество проанализированных образцов: 627
Passing/Bablok^ Линейная регрессия
у = 0.968х-4.90 у = 0.988х-64.9
т = 0.918 г = 0.987
Концентрация в образцах находилась приблизительно между 150 и 10000 мМЕ/л.
Аналитическая специфичность
Не выявлена перекрестная реактивность с ангитензиногеном и а2-макроглобулином.
Функциональная чувствительность
< 20 мМЕ/л.
Функциональная чувствительность — наименьшая концентрация аналита, которая может быть
воспроизведена с коэффициентом вариации 20%.
Ссылки
1. Lin ТМ, Halbert SP, Kiefer D, Spellacy WN, Gall S. Characterization of four human pregnancy-
associated plasma proteins.
Am J Obstet Gynecol 1974;! 18(2):223-236.
2. Bischof P. Pregnancy-Associated Plasma Protein-A. Seminars in Reproductive Endocrinology
1992;10(2):127-135.
3. Rosen SW. New Placental Proteins: Chemistry, Physiology and Clinical Use. Placenta
1986;7:575-594.
4. Overgaard MT, Sorensen ES, Stachowiak D, Boldt HB, Kristensen L, Sottrup-Jensen L, Oxvig C.
Complex of Pregnancy-associated Plasma Protein-A and the Proform of Eosinophil Major Basic
Protein. J Biol Chem 2003;278(4):2106-2117.
5. Canick JA, Lambert-Messerlian GM, Palomaki GE, Neveux LM, Malone ED, Ball RH, Nyberg
DA, Comstock CH, Bukowski R, Saade GR, Berkowitz RL, Dar P, Dugoff L, Craigo SD, Timor-
Tritsch IE, Carr SR, Wolfe HM, D’Alton ME. Comparison of Serum Markers in First-Trimester
Down Syndrome Screening. Obstetrics & Gynecology 2006; 108(5): 1192-1199.
--- стр. 22 ---
При -20°С 3 месяца (допускается только однократное замораживание)
После размораживания Использовать только однократно
поверхности открытых крышек.
ШаЬильность реагентов для предварительной подготовки образца
Не вскрытые при 2-8°С До окончания срока годности, указанного на упаковке
После растворения (РТ2) при
2-8Т 2 недели (см.ниже)
После вскрытия на
анализаторах
максимум 5x8 часов при 15-25°С при попеременном
хранении в холодильнике (до 2— х недель) и на анализаторе
----------------^ илп n^jnubupumcjibHou пооготовш образца (гГ2,
содержащий растворенный P T R ) необходимо обязат ел ьно хранить в холодильнике, в то
время пока она не используется в ходе анализа.
Сбор и подготовка образцов
Тестированы только образцы, перечисленные ниже и приняты как пригодные для
использования.
Сыворотка, собранная с использованием стандартных пробирок для сбора образцов или
пробирок, содержащих разделительный гель.
Не использовать липемические и гемолизированные образцы.
Образцы стабильны в течение 3 дней при 2-8°С и по крайней мере один месяц при - 20°С.
Разрешается только однократное замораживание.
Все перечисленные виды образцов были проанализированы в различных типах пробирок
которые можно было приобрести во время процесса тестирования. Пробирки не всех
производителей были исследованы. Пробирки для сбора образца некоторых производителей
могут содержать различные материалы, которые могут повлиять на получаемый результат в
некоторых случаях. Для информации о стабильности сыворотки, полученной в первичных
пробирках, обращайтесь к инструкциям производителя пробирок.
Образцы, содержащие осадок, должны быть отцентрифугированы перед проведением анализа
Не использовать термически инактивированные образцы. Нельзя использовать образцы и
контроли, стабилизированные азидом.
Перед измерением выдержать сыворотки пациентов. Калибраторы и Контроли при
температуре окружающей среды 20 - 25°С. ^
Из-за возможного эффекта испарения образцы, калибраторы и контроли следует измерять на
анализаторе в пределах 2-х часов.
Материалы необходимые для проведения анализа
Предоставляемые материалы
См. раздел “ Реактивы - содержание и концентрации”.
• 2x6 этикеток для флаконов
Необходимые (но не предоставляемые) материалы
• кат. № 05042666190, Набор контрольных сывороток для определения тиреоидных антител
«PreciControl Th^oAB» - «Контроль ТиреоАт», по 1 фл. х 2 мл для двух уровней:
«Контроль ТиреоАт» 1 и 2.
• Кали^аторов^^^^^^^’ CalSet Vials, 2x56 пустых флаконов с крышками для
• Обычное лабораторное оборудование
--- стр. 23 ---
• Автоматические анализаторы Elecsys 2010, MODULAJl AlNALYTICS E l70 или cobas e
analyzer
• Дистиллированная вода.
Вспомогательные материалы для Elecsys 2010 и cobas е 411
• кат. № 11662988122, Elecsys ProCell, 6 х 380 мл -системный буфер
• кат. № 11662970122, Elecsys CleanCell, 6 х 380 мл- раствор для промывки измерительной
ячейки
• кат. № 11930346122, Elecsys SysWash, 1x500 мл- чистящий раствор для добавления в
дистиллированную воду
• кат. № 11933159001, адаптер для SysClean
• кат. № 11706802001, Elecsys 2010 пробирки для анализа, 60 х 60 реакционных пробирок
• кат. № 11706799001, Elecsys 2010 наконечники для анализа, 30 х 120 наконечников для
пипеток
Вспомогательные материалы для MODULAR ANALYTICS E l70 и cobas е 601
• кат. № 04880340190, ProCell М, 2x2 л - системный буфер
• кат. № 04880293190, CleanCell М, 2x2 л - раствор для промывки измерительной ячейки
• кат. № 03023141001, PC/CC-Cups -12 пробирок для предварительного нагревания ProCell
М и CleanCell М
• кат. № 03005712190, ProbeWash М, 12х70мл - раствор для промывки на финальном этапе
работы и при замене реактива
• кат. № 03004899190, PreClean М, 5 х 600 мл - раствор для промывки аналитической пробы
перед оценкой результата анализа
• кат. № 12102137001, Assay Cups/Assay Tips Combimagazine М - 48 упаковок по 84
реакционные пробирки и 84 наконечника для дозатора, мешки для отходов
• кат. № 03023150001, WasteLiner, мешки для отходов
• кат. № 03027651001, Адаптор для SysClean М
Вспомогательные материалы для любых анализаторов
• кат. № 11298500316, Elecsys SysClean, 5x100 мл - средство для промывки системы
Анализ
Для оптимального проведения анализа важно следовать указаниям по работе с используемым
анализатором. Обращайтесь к соответствующим инструкциям для оператора к анализатору и
реагентам.
Перемешивание микрочастиц перед использованием и считывание специфических для
анализа параметров со штрихового кода реактива происходит автоматически. Нет
необходимости в ручном вводе. Если в исключительных случаях невозможно считать
штриховой код, ввести 15-цифровую последовательность чисел.
MODULAJR. AJvIALYTICS Е170, Elecsys 2010 и cobas е: Довести охлажденные реактивы до
температуры примерно 20°С и поместить на диск для реактивов анализатора. Избегать
пенообразования. Система автоматически регулирует температуру реактивов и
открытие/закрытие флаконов.
Поместить растворенные Калибраторы 1 и 2 в зону образцов анализатора. Выполнить только
одну калибровку на аликвоту.
Калибровка
Стандартизация: Данный метод стандартизован по отношению к 1-му Международному
Стандарту 90/672 Национального института Биологических стандартов и контролей (NIBSC -
1st IS 90/672 Standard).
Каждый набор реагентов «Elecsys Анти-ТТГр» имеет этикетку со штрих-кодом, содержашим
специфическую информацию, необходимую для калибровки соответствующей серии
--- стр. 24 ---
реагентов. Результаты предварительно выполненной референсной калибровки адаптируются
анализатором при анализе калибраторов 1 и 2 (Call и Са12) тест-системы «Elecsys Анти-
ТТГр».
Частота калибровки'. Калибровку следует выполнять для каждой упаковки комплекта
реагентов/реагентов для предварительной подготовки образца.
Повторная калибровка для всех типов анализатора:
# Ежедневно
• При необходимости: если показатели контроля качества не укладываются в
доверительный интервал
Контроль качества
Использовать «Контроль ТиреоАт» 1 и 2 и другие соответствующие контроли.
Контроли для различных диапазонов концентраций должны исследоваться как одиночные
определения минимум один раз каждые 24 часа при использовании теста, один раз для
каждой новой упаковки реактивов и после каждой калибровки. Интервалы между
контролями должны соответствовать требованиям конкретных лабораторий. Полученные
значения должны находиться в пределах установленных диапазонов.
Каждая лаборатория должна выработать правила, позволяющие принять корректирующие
меры, если значения выходят за пределы диапазона.
Расчет результатов ,
Анализаторы автоматически рассчитывают концентрацию аналита в каждом образце в МЬ/л.
О граничения - интерф еренция -.г. / \
На анализ не влияют желтуха (билирубин < 667 мкмоль/л или < 39 мг/дл), гемоли
(гемоглобин <0,621 ммоль/л или < 1 г/дл), липемия (интралипид < 2000 мг/дл) и биотин
< 49 нмоль/л или < 12 нг/мл.
Критерий: открытие пределах ± 10% начального значения.
Повышенные результаты были получены в образцах с концентрацией биотина > 49 нмоль/л
Паци^тоГполучающих лечение высокими дозами биотина (> 5 мг/день), следует брать
пробы не раньше, чем через 8 часов после последнего введения биотину
Не обнаружено влияние ревматоидного фактора при концентрации до 1000 МЬ/мл.
Проведены тесты in vitro на 20 наиболее распространенных лекарственных препаратах.
Влияния на результаты анализа при этом не обнаружено для всех препаратов, кроме гепарина.
Возможное нежелательное влияние на результаты, возникающее при иммунологическом
взаимодействии между компонентами набора и редкими сыворотками, сведено к минимуму
за счет использования соответствующих дополнительных веществ.
В редких случаях может происходить интерференция, обусловленная очень высокими
титрами антител к стрептавидину и рутению. Тест-система содержит дополнительные
компоненты, сводящие к минимуму такие эффекты.
Для диагностических целей результаты анализа всегда следует рассматривать в совокупности
с историей болезни пациента, результатами клинического обследования и другими данными.
Диапазон измерения „
0 3-40МЕ/МЛ (определено по значению чувствительности и максимальной точке
референсной калибровочной кривой). Значения ниже чувствительности метода сообщаются
как <0,3 МЕ/мл. Значения выше верхнего предела измерения сообщаются как >40 МЬ/мл.
РяЗВбДбНИС
Образцы с концентрацией анти-ТТГр выше диапазона измерения можно развести в РУЧную
сывороткой человека не содержащей эти антитела. Рекомендуется разведение 1:5 или 1.10.
I
--- стр. 25 ---
1бщентрация разводимого образца должна быть выше > 4 МЕ/л. После разведения
I необходимо полученный результат умножить на фактор разведения.
jr Z e Д^ные ан™тела ямяютс, гетерогенными и при разведении отдельных
I образцов может возникнуть феномен нелинейности.
П^наГизе 1 4 5 праетически здоровых лиц и пациентов с заболеваниями щитовидной
вюы (91- подострый тиреоидит, 45-аденоматозный зоб, 27-болезнь Хашимото, 32
Ыолевой тиреоидит, 7 автономно функционирующие тиреоидные
,НОГОУЗЛОВОЙ зоб, 7-другие) был выявлен дискриминационный уровень (Д/У) 1,75 МЬ/ .
3 W б 1 нроГреи (подтвержден) при обследовании 102 пациентов с не леченной
! " г р е й в с а . При'^использоваиии этого Д/У (си,ой) чувствительность теста сос™^^^^^^
Ж а специфичность 99%, что было продемонстрировано при анализе ROC кривой (Receiver
£ a ™ ? < T s как отрицательные по в"™-ТТГр а у ^ а ™ ^
значения между 1,5-1,75 МЕ/л - как промежуточные, и концентрации 1,75 М
;“ Г л Г ;а “ ^ б ? о Г м := ^ ^
p y Z ™ на собственных пациентов и в случае необходимости определить свои
собственные нормативные диапазоны.
Аналитические характеристики nnnvupHHwe на автоматических анализаторах
Z лабораториях, могут несколько различаться.
сыворотки и контролен в соотв станлаотов (NCCLS); 6 раз в день в
Г ” й ^ :Г ;Т :о е “ и^^^ внализа на MODULAR ANALYTICS Е170
рассчитана при п=21. Результаты анализа представлены ниже.
Воспроизводимость внутри
постановки
Общая
воспроизводимость
Сыворотка
человека 1
Сыворотка
человека 2
Сыворотка
человека 3
«Контроль
ТиреоАт» 1
«Контроль
ТиреоАт» 2
--- стр. 26 ---
Анализаторы MODULAR ANALYTICS E l70 и cobas e 601
Образец
Воспроизводимость внутри
постановки
Общая
воспроизводимость
Среднее значение SD CV Среднее
значение SD CV
МЕ/л МЕ/л % МЕ/л МЕ/л %
выворотка человека 1 2.45 0.127 5.2 2.87 0.149 5.2 >
1Сыворотка человека 210.6 0.162 1.5 11.0 0.184 1.7 !
[Сыворотка человека 322.8 0.218 1.0 25.1 0.292 1-2
ронтроль ТиреоАт» 4.59 0.094 2.0 4.69 0.141 3.0 :
'(контроль ТиреоАт»
2
18.8 0.165 0.9 18.7 0.228
L
1^1шитическая чувствительность (нижний предел обнаружения)
Пмдм обта^ружения представляет еобой самую низкую концентрацию аналита, которая
жстбыть о'бнаружена'как отличная от нуля. Она вычисляется к» коицеитрация^лежащ»
яадва стандартных отклонения выше самого нижнего стандарта (эталонный калибратор,
стандарт 1 + 2 SD (Станд. откл.), сходимость в пределах анализа, п 21).
^ н Т н Т м е т З в «Elecsys Анти-ТТГр» (у) с коммерчески доступными радиоизотопньши
методами определения Анти-ТТГр (х) с использованием клинических образцов сыворот
дало следующие корреляции;
Число исследованных образцов: 221
Passing/Babloki^ Линейная регрессия
у=1,10х + 0.02 у = 0,95х + 0,76
^ 0,939__ Q
Концентрации в образцах сыворотки находились в диапазоне около 0,434 и 35,3 МЕ/л.
ГоГн” в Г н :н :* ™ « со стороны человеческих аутсантител к тнреоглобулину
{ < 4000 МЕ/мл) и к анти-ТПО (< 600 МЕ/мл).
Также не выявлено интерференции с человеческим ТТГ (< 1000 мМЕ/л), человеческим Л
[< 10000 мМЕ/мл), человеческий ФСГ (< 10000 мМЕ/мл) и ХГЧ (< 50000 мМЕ/мл).
Функциональная чувствительность
ф™цнон“ ь 1 чувствительность - это наименьшая концентрация аналнта, которая может
быть воспроизведена с коэффициентом вариации < 20%.
fpfamenstiel Р, Sailer В. Schilddrusenkrankheiten - Diagnose und Therapie, 2nd edition. Berliner
Medizinische Verlagsanstalt. 1995;28-30,141,169-172,200-201.
1 Llntosh RS, Asghar MS, Weetman AP. The antibody response in human autoimmune thyroid
f Schot?M, Seiв\^eГJ’,^ScSrbaum WA. Diagnostic testing for autoimmune thyroid diseases. J Lab
Med 2006;34(4):254-257.
--- стр. 28 ---
ИНСТРУКЦИЯ
по применению изделия медицинского назначения: Контрольные
СЫВОРОТКИ для определения анти-тиреоидных— антител— (Elecsys
PreciControl Thvro-AB)
--- стр. 29 ---
PreciControl ThyroAB
Контроль ТиреоАТ
2 фл.х 2.0 мл
Для анализаторов Elecsys и cobas е
05042666 190
Назначение
«Elecsys Контроль ТиреоАТ» предназначен для контроля качества тест-системы «Elecsys
Анти-ТТГр» для электрохемилюминесцентного анализа на иммунохимических анализаторах
Elecsys и cobas е.
Общая информация
«Elecsys Контроль ТиреоАТ» представляет собой лиофилизированную контрольную
сыворотку в двух диапазонах концентраций на основе сыворотки человека. Контроли
применяются для мониторинга точности и воспроизводимости иммунотеста «Elecsys Анти-
ТТГр»,
Реактивы - содержание и концентрации
• PC Thyrol - - Elecsys Контроль ТиреоАТ 1: - 1 флакон, содержащий 2 мл контрольной
сыворотки
Сыворотка человека, содержащая анти-ТТГр антитела (человека), около 4 МЕ/л.
• PC Thyro 2 - - Elecsys Контроль ТиреоАТ 2: - 1 флакон, содержащий 2 мл контрольной
сыворотки
Сыворотка человека, содержащая анти-ТТГр антитела (человека), около 16 МЕ/л.
Точные значения диапазонов измерения закодированы в штриховых кодах или доступны в
электронном виде.
Точные значения и диапазоны
Точные значения и диапазоны, закодированные в щтриховых кодах, определены и
рассчитаны Roche. Они были получены при использовании реактивов набора «Elecsys
Контроль ТиреоАТ» и доступных на момент исследования анализаторов.
Если целевые концентрации и контрольные диапазоны изменялись в последнее время то
информация об этих изменениях вносится в штрих-коды реагентов или в листы со штрих
кодами, которые вкладываются в упаковки с реагентами. В такие листы включены все серии
контрольных сывороток с измененными целевыми концентрациями и контрольными
диапазонами. Если какой-либо из показателей остался неизменным, то исходные данные
вводятся в память прибора со штрих-кода контроля и листа со штрих-кодами, вложенного в
упаковку с контролями (можно получить в электронном виде)
Результаты должны находиться в пределах указанного в спецификации интервала. При
появлении тенденции к увеличению или снижению значений или при неожиданном
отклонении результатов за пределы установленных лимитов все этапы теста должны быть
проверены. В случае необходимости следует повторно проанализировать образцы пациентов.
Информация о стандартизации находится в инструкции к соотвествующей тест-системе.
Каждая лаборатория должна выработать правила, позволяющие принять корректирующие
меры, если значения выходят за пределы диапазона.
Меры предосторожности
Применять только для диагностики in vitro.
Соблюдать обычные правила предосторожности, необходимые при работе со всеми
лабораторными реактивами.
Удалять отработанные материалы в соответствии с установленными требованиями.
По запросу может быть предоставлен перечень правил профессиональной защиты.
--- стр. 30 ---
Все материалы человеческого происхождения следует рассматривать как потенциально
инфицированные.
Все материалы человеческого происхождения изготовлены исключительно из крови доноров,
которые были индивидуально протестированы одобренными FDA методами или
Европейскими Директивами 98/79/ЕС (Часть II, список А) на отсутствие HBsAg, антител к
HCV и ВИЧ. Результаты анализа были отрицательными.
Однако, до настоящего времени не существует абсолютно достоверных методик выявления
потенциального риска инфицирования крови. Поэтому работать с реактивами следует с
такими же предосторожностями, как и с сыворотками пациентов. В случае контакта с
реактивами или сывороткой необходимо следовать соответствующим инструкциям по охране
здоровья персонала [I, 2].
Избегать образования пены во всех типах реактивов и проб (образцы, калибраторы и
контроли).
Работа с контролями
Осторожно растворить содержимое одного флакона, добавив точно 2,0 мл дистиллированной
воды и оставить стоять закрытым в течение 15 минут до восстановления. Аккуратно
перемещать. Избегать пенообразования.
Перенести растворенный калибратор в пустые маркированные флаконы с закрывающимися
крышками.
Для аликвотирования перенесите контроли в дополнительные флаконы с закрывающимися
крышками (Elecsys CalSet Vials), наклеить соответствующие этикетки со штрих-кодами.
Каждую аликвоту сразу же заморозить и хранить при -20°С.
Выполнять только одну калибровку на аликвоту.
Хранение и стабильность
Хранить при 2 - 8°С.
При этой температуре лиофилизированная контрольная сыворотка стабильна до окончания
указанного срока годности.
Компоненты восстановленной контрольной сыворотки стабильны:
|Н а анализаторе при 20-25°С :до 3 часов
[При -20°С 3 месяца (только однократное размораживание)
После размораживания * • Использовать однократно
Методика
Предоставляемые материалы
• «Elecsys Контроль ТиреоАТ», 2 карты со штриховым кодом, лист со штрих-кодом, 2x2
пустых промаркированных флакона с крышками, 2 x 6 этикетки для флаконов.
Необходимые (но не предоставляемые) материалы
• № по каталогу 11776576322, CalSet Vials, 2 х 56 пустых флаконов с обжимными крышками.
• Система для иммуноанализа Elecsys 2010, MODULAR ANALYTICS E l70 или cobas e и
реактивы для анализа. Дополнительные необходимые материалы указаны в
соответствующих вкладышах в упаковку и в инструкции для оператора.
• дистиллированная или деионизированная вода
Анализ
Для использования на всех типах анализаторов перенести необходимый объем
восстановленной контрольной сыворотки в прилагаемые промаркированные флаконы с
обжимными крышками и провести анализ таким же образом, как и образцов, полученных у
пациента. Введите информацию, имеющуюся на этикетке со штриховым кодом и на картах со
штриховым кодом в анализатор.
--- стр. 36 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Р^^ральн|ь 1И директор
/ЗА р «Рощ-Москва»
...........................
М. Петрович
янвф »^ 008г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению изделия медицинского назначения; Набор реагентов для
определения свободного Ь-ХГЧ (Ь-хорионического __гонадотропина
человека) (Elecsvs Free b-HCG)
--- стр. 37 ---
free p -hCG
свободный p -ХГЧ
free p-subunit of human chorionic gonadotropin
свободная Р-субъединица хорионического гонадотропина человека
Анализаторы Elecsys и cobas е
04854071 200
• Тест-система предназначена для анализаторов:
Elecsys 2010 MODULAR ANALYTICS Е170 cobas е 411
100 tests
cobas e 601
Внимание! Концентрация свободного ^-ХГЧ в пробах может значительно варьировать в
зависимости от применяемого метода исследования. Бланк с полученными в лаборатории
показателями обязательно должен содержать информацию об используемом методе
определения свободного ^-ХГЧ. Уровни свободного ^-ХГЧ в образце сыворотки крови
пациента, полученные различными методами не могут сравниваться напрямую друг с
другом, так как могут привести к диагностической ошибке.
Если требуется замена теста для определения свободного ^-ХГЧ пациенту в процессе
мониторинга проводимой терапии, то следует произвести параллельное определение
концентрации свободного ^-ХГЧ новым и старым методом для сопоставления показателей.
Назначение
Тест-система для количественного определения in vitro свободного Р-ХГЧ (свободная Р-
субъединица хорионического гонадотропина человека) в сыворотке крови человека. Набор
«Elecsys свободный Р-ХГЧ» применяется как один из компонентов в комплексе параметров
для оценки риска трисомии 21 (синдром Дауна) у плода в первом триместре беременности.
Для диагностики требуется дальнейшее обследование на наличие хромосомных аберраций.
Электрохемилюминесцентный иммунотест “ECLIA - ЭХЛА” предназначен для
использования на иммунохимических анализаторах Elecsys и cobas е.
Общая информация
Хорионический гонадотропин человека (ХГЧ) является представителем семейства
гликопротеинов (~37 kDa) и состоит из двух нековалентно связанных субъединиц (а- и Р-
цепей, ~15 и 22 kDa соответственно). Данный белок продуцируется тканью трофобласта и
обеспечивает развитие желтого тела в течение первых недель беременности. Он также влияет
на образование стероидов [1,2].
В норме ХГЧ появляется только в крови и моче беременных женщин. Его концентрация
повышается экспоненциально в первом триместре беременности и достигает своего пика
около 10-й недели гестации. В дальнейшем уровень гормона снижается в сроке между 10-й и
16-й неделями приблизительно на 1/5 часть от пиковой концентрации и остается на таком
уровне до родов. У небеременных женщин ХГЧ может продуцироваться трофобластическими
и нетрофобластическими опухолями, эмбриональными клеточными опухолями с
трофобластическими компонентами [2,3,4,5].
Сыворотка крови беременных женщин в основном содержит интактный ХГЧ. Однако,
мелкие фракции а- и (3-субъединиц циркулируют в несвязанной форме. Пропорция
свободного Р-ХГЧ составляет около 1% от уровня интактного ХГЧ. В результате процесса
деградации белка в крови и моче могут выявляться другие варианты ХГЧ (например:
--- стр. 38 ---
скрещенный ХГЧ, скрещенный Р-ХГЧ, р-ядерный фрагмент). Однако, только интактная
форма гормона биологически активна [2,6].
В настоящее время хорошо известно, что концентрация свободного Р-ХГЧ в сыворотке
является надежным маркером фетальной анеуплоидии. Во многих исследованиях было
подтверждено, что показатели свободного Р-ХГЧ в комбинации с показателями
ассоциированного с беременностью плазменного протеина А (РАРР-А) и ультразвуковым
исследованием (УЗИ) толщины воротникового пространства у плода (nuchal translucency - NT)
являются маркером выбора для идентификации повышенного риска беременности плодом с
синдромом Дауна в первом триместре беременности (11-14 недели) [7]. Было сообщено, что
использование такой комбинации маркеров позволяет идентифицировать патологию в 70%
случаев (только по сывороточным маркерам) и в 90% - в комбинации с УЗИ, при этом
получено 5% ложно положительных результатов [8,9,10].
Пониженные значения свидетельствуют об угрожающем аборте или несостоявшемся
выкидыше, внематочной беременности, гестозе или внутриутробной гибели плода.
У женщины, беременной плодом с синдромом Дауна, уровень свободного [5-ХГЧ превышает
показатель медианы на данный срок нормальной беременности [11].
С учетом возраста беременной можно рассчитать риск синдрома Дауна у плода по
специфическому алгоритму, например базируясь на коэффициент вероятности [12].
Принцип теста
Принцип сэндвича. Общая продолжительность анализа: 18 минут.
• Гая инкубация: 10 мкл образца, биотинилированное моноклональное специфическое к
свободному Р-ХГЧ антитело и моноклональное специфическое к свободному Р-ХГЧ
комплексом рутения*, реагируют с образованием «сэндвич»-антитело, меченное
комплекса.
2-я инкубация: после добавления покрытых стрептавидином микрочастиц комплекс
связывается с твердой фазой посредством взаимодействия биотина и стрептавидина.
Реакционная смесь аспирируется в измерительную ячейку, где микрочастицы оседают на
поверхность электрода вследствие магнитного взаимодействия. Затем удаляются
несвязанные вещества с помощью ПроСелл (ProCell). После этого приложенное к
электроду напряжение вызывает хемилюминесцентную эмиссию, которая измеряется
фотоумножителем.
Результаты определяются с помощью калибровочной кривой, получаемой специальным
для данного прибора способом калибровки через 2 точки, и эталонной кривой, получаемой
с помощью штрихового кода реактива.
* Комплекс трис(2,2'-бипиридил)рутения(П) (Ки(ЬруУ^з)
Реактивы - содержание и концентрации
М Микрочастицы, покрытые стрептавидином (прозрачная крышка), 1 флакон, 6,5 мл.
микрочастицы, покрытые стрептавидином 0.72 мг/мл, консервант.
R1 Анти-Св. Р-ХГЧ -антитела-биотин (серая крышка), 1 флакон, 9 мл:
биотинилированные моноклональные анти- Св. Р-ХГЧ антитела (мыши) 3,5 мг/л,
фосфатный буфер 40 ммоль/л, pH 6,8; консервант.
R2 Анти- Св. Р-ХГЧ -антитела~Ки(Ьру)^’"з (черная крышка), 1 флакон, 10 мл:
моноклональные анти- Св. Р-ХГЧ антитела (мыши), меченные комплексом рутения, 1,6
мг/л; фосфатный буфер 40 ммоль/л, pH 7,0; консервант.
Меры предосторожности
Применять только для диагностики in vitro.
Л
--- стр. 39 ---
И 6
Соблюдать обычные правила предосторожности, необходимые при работе со всеми
лабораторными реактивами.
Проводить удаление отработанных материалов в соответствии с установленными
требованиями в лаборатории.
Избегать образования пены во всех типах реагентов и проб (образцы, калибраторы и
контроли).
Работа с реактивами
Реактивы в наборе собраны в готовом к употреблению виде и не должны разделяться. Вся
информация, необходимая для правильной работы, считывается автоматически со
штрихового кода реактива.
Хранение и стабильность
Хранить при 2 - 8°С.
Хранить набор реактивов «Elecsys свободный Р-ХГЧ» в вертикальном положении, чтобы
обеспечить полную доступность микрочастиц во время автоматического смешивания
реагента перед использованием.
Стабильность:
До вскрытия при 2 - 8°С: j до окончания указанного срока годности.
После вскрытия: при 2-8°С 4 недели
На анализаторах: 4 недели
Сбор и подготовка образцов
Били протестированы и признаны пригодными к использованию только перечисленные ниже
типы образцов!
Сыворотка, собранная с использованием стандартных пробирок для сбора образцов или
пробирок, содержащих разделительный гель.
Не использовать плазму.
Образцы стабильны в течение 8 часов при 15-25°С, 7 дней при 2-8°С и 10 месяцев при минус
20°С.
Перечисленные типы образцов были протестированы в выборочных пробирках для сбора
образцов, доступных для закупок во время проведения исследований, то есть протестированы
на пригодность пробирки не всех производителей. Системы для сбора образцов могут
содержать различные материалы, которые могут в отдельных случаях отрицательно повлиять
на результаты теста. При использовании образцов, собранных в стандартных пробирках,
обращайтесь к инструкции производителя пробирок.
Образцы, содержащие осадок, должны быть отцентрифугированы перед проведением анализа.
Не использовать термически инактивированные образцы. Нельзя использовать образцы и
контроли, стабилизированные азидом.
Перед измерением выдержать сыворотки пациентов, калибраторы и контроли при
температуре окружающей среды 20 - 25°С.
Из-за возможного эффекта испарения образцы, калибраторы и контроли следует измерять на
анализаторе в пределах 2-х часов.
Материалы необходимые для проведения анализа
Прилагаемые материалы
Смотри раздел «Реактивы - состав и концентрации»
Необходимые материалы (не прилагаются)
• Кат. № 04854080, «Elecsys свободный Р-ХГЧ Калибровочный набор», 4 флакона х 1 мл
• Кат. № 04899881, PreciControl Maternal Care - контрольная сыворотка для материнского
скрининга, по 3 флакона х 2 мл для PreciControl Maternal Care 1, 2 и 3.
--- стр. 40 ---
• Кат. № 11732277, Elecsys Diluent Universal, 2 x 18 мл разбавителя для проб
• Кат. № 03183971, Elecsys Diluent Universal, 2 х 40 мл разбавителя для проб
• Кат. № 11776576, Elecsys CalSet Vials, 2 х 56, флаконы для калибраторов
• Обычное лабораторное оборудование
• Анализаторы Elecsys 2010, MODULAR ANALYTICS Е170 или cobas е
Для оценки риска трисомии 21:
• Кат. № 04854098, тест-система «Elecsys РАРР-А», 100 определений
• Кат. № 04854101, калибровочный набор «Elecsys РАРР-А CalSet», 4 флакона х 1 мл
• Подходящая компьютерная программа, например: Кат. № 05126193, «SsdwLab» (версия
5.0 или более)
Аксессуары для Elecsys 2010 и cobas е 411
• Кат. № 11662988, Elecsys ProCell, 6 х 380 мл системного буфера
• Кат. № 11662970, Elecsys CleanCell, 6 х 380 мл моющего раствора для измерительной
ячейки
• Кат. № 11930346, SysWash Elecsys, 1 х 500 мл добавка для дистиллированной воды
• Кат. № 11933159, Adapter for SysClean, адаптер для системного промывающего раствора
• Кат. № 11706802, Elecsys 2010 Assay Cup, 60 х 60 аналитических пробирок
• Кат. № 11706799, Elecsys 2010 Assay Tip, 30 х 120 наконечников для дозатора
Аксессуары для MODULAR ANALYTICS El 70 и cobas е 601
• Кат. № 04880340, Elecsys ProCell М, 2 бутыли х 2 л системного буфера
• Кат. № 04880293, Elecsys CleanCell М, 2 х 2 л моющего раствора для измерительной
ячейки
• Кат. № 03023141, PC/CC-Cups, 12 пробирок для предварительного прогревания растворов
ProCell М и CleanCell М
• Кат. № 03005712, ProbeWash М, 12 х 70 мл, чистящий раствор для финальной промывки и
промывок в процессе замены реагентов
• Кат. № 12102137, Assay Сир/Assay Tips Combimagazine М, 48 комплектов х 84
реакционных пробирок или наконечников, мешки для отходов
• Кат. № 03023150, WasteLiner, Waste bags, мешки для отходов
• Кат. № 03027651, SysClean Adapter М, адаптер для системного промывающего раствора
Аксессуары для обоих анализаторов:
• Кат. № 11298500, Elecsys SysClean, 5 х 100 мл системный промывающий раствор
Измерение
Для оптимального качества анализа важно следовать инструкциям к анализаторам, и следить
за тем, чтобы комплектация материалов для тест-системы и других расходуемых материалов
была адекватной. Перемешивание микрочастиц перед использованием и считывание
параметров данного теста из штрих-кода реактива происходит автоматически. Никакой
ручной работы не требуется. Если в исключительных случаях штрих-код не считывается,
введите последовательность из 15 цифр вручную.
MODULAR ANALYTICS E l70, Elecsys 2010 и cobas e: Довести температуру охлажденных
реактивов примерно до 20°С и поместить их на диск для реактивов анализатора. Избегать
образования пены. Система автоматически регулирует температуру реактивов и
открывание/закрывание флаконов.
Поместить калибраторы (Call и Са12) в отсек для проб анализатора. Открывать только на
время калибровки. Вся информация, необходимая для калибровки, содержится в штрих-коде
на этикетке флаконов и считывается автоматически. После завершения калибровки хранить
--- стр. 41 ---
калибраторы (Call и Са12) при 2-8°С или выбросить (MODULAR ANALYTICS Е170 и
cobas е 601).
Калибраторы
«Elecsys свободный Р-ХГЧ» стандартизован по отношению к Междунардному Стандарту для
Р-субъединицы ХГЧ Национального института биологических стандартов и контролей
(N1BSC), код 75/551.
Каждый набор реактивов «Elecsys свободный Р-ХГЧ» имеет этикетки со штриховым кодом,
содержащим полную специфическую информацию, необходимую для калибровки данной
серии реактива. Референсная калибровочная кривая адаптируется к анализатору путем
использования набора калибраторов: «Elecsys свободный Р-ХГЧ Калибровочный набор».
Частота калибровки. Калибровка должна проводиться каждый раз для новой партии
реактивов с использованием свежих реактив (т.е. бывшие в анализаторе не более 24 часов).
Рекомендуется обновлять калибровку следующим образом:
• через один месяц (когда используется одна и та же партия реактивов)
• через 7 дней (когда используется один набор реактивов в анализаторе)
Для всех типов анализаторов:
• по мере необходимости, например, если результаты контроля качества выходят за пределы
надлежащего диапазона.
Контроль качества
«Elecsys PreciControl Maternal Care 1,2 и 3» - контрольная сыворотка для материнского
скрининга 1, 2 и 3. Можно использовать и другие подходящие контроли.
Контроли для различных диапазонов концентраций должны исследоваться как одиночные
определения минимум один раз каждые 24 часа при использовании теста, один раз для
каждой новой упаковки реактивов и после каждой калибровки. Контрольные интервалы
должны соответствовать требованиям конкретных лабораторий. Полученные значения
должны находиться в пределах установленных диапазонов. Каждая лаборатория должна
выработать правила, позволяющие принять корректирующие меры в случае, если значения
выходят за пределы диапазона.
Расчет результатов
Анализаторы автоматически рассчитывают концентрацию аналита в каждом образце в МЕ/л,
мМЕ/мл или нг/мл.
Ограничения - интерференция
На анализ не влияют желтуха (билирубин <428 мкмоль/л или <25 мг/дл), гемолиз
(гемоглобин <0,621 ммоль/л или <1,0 г/дл), липемия (Интралипид < 1500 мг/дл) и биотин
< 123 нмоль/л или < 30 нг/мл.
Критерий: открытие в пределах ± 10% начального значения.
У пациентов, получающих лечение высокими дозами биотина, (а именно, > 5 мг/день)
следует брать пробы не раньше, чем через 8 часов после последнего введения биотина.
Не обнаружено влияние ревматоидного фактора (до 1000 МЕ/мл).
Отсутствует эффект высокой дозы при концентрации свободного р-ХГЧ до 800 МЕ/л.
Проведены тесты in vitro на 18 наиболее распространенных лекарственных препаратах.
Влияния на результаты анализа при этом не обнаружено.
В редких случаях может происходить интерференция, обусловленная очень высокими
титрами антител к стрептавидину или рутению. Тест-система содержит дополнительные
компоненты, сводящие к минимуму такие эффекты.
Для диагностических целей результаты теста всегда следует рассматривать в совокупности с
историей болезни пациента, результатами клинического обследования и другими данными.
Диапазон измерения
--- стр. 42 ---
%
0. 1.190 МЕ/л (диапазон определен по нижнему пределу обнаружения и максимальной точке
референсной калибровочной кривой). Значения ниже аналитической чувствительности
метода обозначаются как <0,1 МЕ/л. Значения выше верхнего предела измерения
обозначаются как >190 МЕ/л (или более
1 900 МЕ/л для образцов, разведенных в 10 раз).
Разведение
Образцы с концентрацией свободного Р-ХГЧ, превышающей диапазон измерения, можно
развести Универсальным Раствором для разведения образцов. Рекомендуется разведение 1:10
(в автоматическом режиме на анализаторах MODULAR ANALYTICS Е170, Elecsys 2010 и
cobas е или вручную). Концентрация свободного Р-ХГЧ в разведенном образце должна быть
>19 МЕ/л. После ручного разведения необходимо умножить полученный результат на фактор
разведения. При разведении на анализаторах MODULAR ANALYTICS Е170, Elecsys 2010 и
cobas е прибор произведет расчет концентрации в автоматическом режиме с учетом фактора
разведения.
Ожидаемые значения
Ниже представлены данные, полученные при использовании тест-системы «Elecsys
свободный Р-ХГЧ».
1. Исследование для получения референсных диапазонов на панели образцов сыворотки крови
500 здоровых небеременных доноров (исследование Roche No. R04P026) < 0,012 МЕ/л (95-я
перцентиль).
2 . Исследование тест-систем «Elecsys свободный р-ХГЧ» и «Elecsys РАРР-А» для оценки
риска трисомии 21 в первом триместре беременности (исследование Roche No.
В05Р020стату Июль 2007).
Исследования проводились в четырех клинических центрах в Бельгии, Швейцарии и
Германии с использованием тест-систем «Elecsys свободный р-ХГЧ» и «Elecsys РАРР-А».
Показатели медиан (на 11-14 неделях гестации) были рассчитаны по анализу
логарифмически-линейной регрессии (log-linear regression) 3270 показателей свободного Р-
ХГЧ в середине соответствующих недель беременности. Гестационный возраст
|Неделя гестации 11 12 13 14
|Количество образцов сыворотки крови 206 |623 1384 |Ю57
Медиана (МЕ/л) 49.9 40.6 33.6 28.8
В каждой лаборатории необходимо исследовать допустимость перенесения ожидаемых
результатов на собственных пациентов и в случае необходимости определить собственные
референсные диапазоны.
Для пренатального тестирования рекомендуется периодически значения медиан
рассчитывать заново.
Клинические аналитические характеристики:
Всего было проанализировано 1079 поступивщих на рутинные клинические исследования
образцов сыворотки крови от пациенток с известным исходом.. В этой группе 32 образца
крови были получены от пациенток с подтвержденным синдромом Дауна у плода. Все
образцы были параллельно исследованы методами определения свободного (3-ХГЧ и РАРР-А,
сертифицированными FMF (Fetal Medicine Foundation — Фонд Фетальной Медицины). Оценка
риска производилась с помощью компьютерной программы SsdwLab, версия 5,0. Как уже
сообщалось ранее, в данной программе используется алгоритм, описанный Palomaki и
соавторами [14] с использованием математических расчетов по распределению Гаусса [15].
Оценка риска базируется на возрасте женщины, толщины воротникового пространства плода
--- стр. 43 ---
и результатах биохимических параметров, скорректированных различными факторами,
такими как вес, курение и этническая принадлежность беременной женщины.
Расчет индивидуального риска:
Расчет индивидуального риска беременности одним плодом с трисомией 21 был произведен
без учета показателей толщины воротникового пространства плода для демонстрации
эффективности биохимических методов. Учитывались вес женщины и курение как факторы
коррекции. Совпадение результатов оценки риска сравнивали с конкурирующими методами
при использованием дискриминационного уровня (cut-off), установленного лабораториями,
участвующими в исследовании [16,17].
Каждый пользователь метода в праве выбрать показатель дискриминационного уровня для
своей лаборатории.
Совпадение данных анализа
А. Совпадение данных анализа у беременных с нормально развивающимся плодом (п = 1047'
Риск > cut-off (Roche*) Риск < cut-off (Roche*)
i q
Риск > cut-off (конкурирующий метод**) |55 (5,2%) 26 (2,5%)
Risk < cut-off (конкурирующий метод **) 6 (0,6%) 960 (91,7%:
В 1047 случаях с нормально развивающимся плодом методом Roche было корректно
выявлено 986 образцов сыворотки крови (специфичность: 94,2%), при этом конкурирующим
методом было корректно выявлено 966 образцов (специфичность: 92,3%).
|Риск > cut-off (Roche*) Риск < cut-off (Roche*)
Риск > cut-off (конкурирующий метод **) |21 (65,6%) 0
Риск < cut-off (конкурирующий метод **) |з (9,4%) 8 (25%)
В 32 образцах сыворотки крови женщин беременных плодом с трисомией 21 показатель
выявления этой патологии составил 75% (24/32), а конкурирующим методом - 65,6% (21/32).
Комбинация результатов по тест-системам «Elecsys свободный Р-ХГЧ» и «Elecsys РАРР-
А»
Комбинация результатов по конкурирующим тест-системам для определения свободного
Р-ХГЧ и РАРР-А.
Аналитические характеристики
Ниже приведены репрезентативные данные, полученные на анализаторах. Результаты,
полученные в разных лабораториях, могут несколько различаться.
Воспроизводимость (точность)
Воспроизводимость определяли с использованием реактивов Elecsys, пулов человеческой
сыворотки и контролей в соответствии с модифицированным протоколом (ЕР5-А)
Национального комитета клинических лабораторных стандартов (NCCLS): 6 раз в день в
течение 10 дней (п=60). Воспроизводимость внутри анализа на MODULAR ANALYTICS
El70 рассчитана при п=21.
Анализаторы Elecsys 2010 и cobas е 411
Воспроизводимость
внутри
постановки
Общая
воспроизводимость
Образец Среднее SD CV SD CV
--- стр. 44 ---
I4i
значение
! МЕ/л МЕ/л % МЕ/л %
Сыворотка человека 1 7.56 0.195 2.6 0.198 2.6
Сыворотка человека 2 10.4 0.286 2.8 0.303 2.9
Сыворотка человека 3 101 1.80 1.8 2.13 2.1
для материнского
скрининга 1 13.9 0.133 1.0 0.172 1.2
КС для материнского
скрининга 2 46.2 0.554 1.2 0.633 1.4
КС для материнского
скрининга 3 91.5 0.975 1.1 1.12 1.2
КС = Контрольная сыворотка
Анализаторы MODULAR ANALYTICS E l70 и cobas e 601
Аналитическая чувствительность (нижний предел обнаружения)
<0,1 МЕ/л.
Предел обнаружения представляет собой самую низкую концентрацию аналита, которую
можно отличить от нуля. Его вычисляют как значение концентрации, лежащее на два
стандартных отклонения выше от самого низкого стандарта (стандарт I эталонного
калибратора + 2 SD, внутри-групповое сравнение, п = 21).
Метод сравнения
Сравнение метода производилось с использованием сыворотки человека по тест-системе
«Elecsys свободный Р-ХГЧ» (у) и коммерчески доступному методу определения свободного
Р-ХГЧ (х). Были получены следующие корреляции:
Количество проанализированных образцов: 634
Passing/BabloklS Линейная регрессия
у=0.953х-1.95 у = 0.989х-3.14
1„ = 0.910 г = 0.991
Воспроизводимость внутри
постановки
Общая
воспроизводимость
Образец Среднее
значение SD CV Mean SD CV
МЕ/л МЕ/л % МЕ/л МЕ/л %
Сыворотка человека 1 4.4 0.028 0.6 7.1 0.191 2.7
Сыворотка человека 2 10.3 0.078 0.8 9.7 0.234 2.4
Сыворотка человека 3 102 1.17 1.2 98.2 2.23 2.3
КС- для материнского
скрининга 1 13.5 0.096 0.7 13.2 0.209 1.6
КС для материнского
скрининга 2 45.4 0.386 0.9 44.1 0.733 1.7
КС для материнского
скрининга 3 90.3 0.568 0.6 87.9 1.58 1.8
I
!1