Наборы диагностических реагентов для иммуноферментных исследований in vitro — инструкция и характеристики

РУ: ФСЗ 2007/00067 от 09.07.2007 · класс риска 1

Производитель: DRG Instruments GmbH (ДРГ Инструментс ГмбХ) (Германия)

Вид изделия: Пролактин ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА) · Эстрадиол ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА) · Антикардиолипин антитела ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

Назначение: Наборы диагностических реагентов in vitro для иммуноферментных исследований.

В госконтрактах 44-ФЗ: 72 контракта, медианная цена за единицу 31 634 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 4 ---
5. Снять фольгу и выбросить ее. Сразу же вылить содержимое лунок планшета, затем удалить остатки 
жидкости из лунок, слегка постукивая перевернутым планшетом о фильтровальную бумагу.
6. Внести во все лунки по 1  мл разведенного концентрата промывочного буфера, закрыть планшет 
защитной фольгой и инкубировать в течение 5 минут при комнатной температуре при встряхивании на 
орбитальном шейкере (600 -  900 об/мин),
7. Снять фольгу и выбросить ее. Сразу же вылить содержимое лунок планшета, затем удалить остатки 
жидкости из лунок, слегка постукивая перевернутым планшетом о фильтровальную бумагу,
8. Повторить пункт 6, вылить содержимое лунок планшета, затем удалить остатки жидкости из лунок, 
слегка постукивая перевернутым планшетом о фильтровальную бумагу.
9. Внести во все лунки по 150 мкл ацилирующего буфера.
10. Внести во все лунки по 25 мкл ацилирующего реагента.
11. Инкубировать планшет, не закрывая фольгой, в течение 15 минут при комнатной температуре при 
встряхивании на шейкере (600 -  900 об/мин).
12. Сразу же вылить содержимое лунок, затем удалить остатки жидкости из лунок (см. пункт 5).
13. Внести во все лунки по 1  мл разведенного концентрата промывочного буфера.
14. Закрыть планшет защитной фольгой для заклеивания стрипов и инкубировать в течение 10 минут при 
комнатной температуре на орбитальном шейкере (600 -  900 об/мин).
1 5.  Сразу же вылить содержимое лунок, затем удалить остатки жидкости из лунок (см. пункт 5).
16. Внести во все лунки по 150 мкл соляной кислоты для элюции адреналина.
17. Закрыть планшет защитной фольгой и инкубировать в течение 10 минут при комнатной температуре 
на орбитальном шейкере (600 -  900 об/мин). Внимание! Не удаляйте супернатант после этого!
Для исследования в иммуноферментном анализе с помощью Набора Адреналин ИФА необходимо 
отобрать следующие объемы элюатов:
Адреналин
100 мкл
7.5. Иммуноферментный анализ адреналина
1 . Внести во все лунки стрипов с иммобилизованным адреналином по 25 мкл свежеприготовленного 
ферментного раствора.
2. Внести в соответствующие лунки стрипов по 100 мкл экстрагированных стандартов, контролей и 
исследуемых образцов.
3. Инкубировать в течение 30 минут при температуре 37°С на шейкере (400 -  500 об/мин).
4. Внести во все лунки по 50 мкл антисыворотки к адреналину.
5. Инкубировать в течение 2 часов при комнатной температуре на орбитальном шейкере (400 -  500 
об/мин).
6. Удалить содержимое лунок и тщательно их промыть, добавляя по 300 мкл разведенного 
промывочного буфера в каждую лунку. Повторить промывание 2 раза. Удалить остатки жидкости из 
лунок, слегка постукивая перевернутым планшетом о фильтровальную бумагу.
7. Внести во все лунки по 100 мкл конъюгата фермента.
8. Инкубировать в течение 30 минут при комнатной температуре на орбитальном шейкере (400 -  500 
об/мин).
9. Удалить содержимое лунок и тщательно промыть каждую 3 раза. Удалить остатки жидкости из лунок, 
слегка постукивая перевернутым планшетом о фильтровальную бумагу.
10. Внести во все лунки по 100 мкл субстрата.
11. Инкубировать в течение 20 - 30 минут при комнатной температуре на орбитальном шейкере (400 -  500 
об/мин).
Избегайте воздейст вия прямых солнечных лучей!
12. Внести во все лунки по 100 мкл стоп-реагента и встряхнуть микропланшет для обеспечения 
перемешивания субстрата и стоп-реагента.
13. Измерить оптическую плотность раствора не позже, чем через 10 минут с помощью планшетного 
спектрофотометра при длине волны 450 нм и референтной длине волны между 620 нм и 650 нм.
8. РАСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
Концентрация адреналина в стандартах;
А = О  нг/мл / В = 1  нг/мл / 0  = 4 нг/мл /0  = 16 нг/мл / Е = 64 нг/мл / F = 256 нг/мл.
Рассчитать среднюю оптическую плотность каждого стандарта, контроля или исследуемого образца.
На миллиметровой бумаге построить калибровочную кривую зависимости средней оптической плотности
стандартов (по оси Y) от log концентрации адреналина в стандартах в нг/мл (по оси X).
По калибровочной кривой рассчитать концентрации адреналина в контролях и исследуемых образцах,
сопоставляя значения их средней оптической плотности с соответствующими концентрациями аналита.


--- стр. 5 ---
Образцы мочи и контроли
Концентрации адреналина в образцах мочи и контролях можно рассчитать непосредственно по 
калибровочной кривой.
Образцы плазмы крови
Полученные значения концентрации адреналина в образцах плазмы крови следует разделить на 30.
8.1. Контроль качества
Рекомендуется использовать контрольные образцы в соответствии с государственными и федеральными 
нормативами. Используйте контроли как с нормальными, так и с патологическими уровнями. Концентрации 
адреналина в контролях LDN и других коммерческих контролях не должны выходить за рамки заданных 
диапазонов. Заданные диапазоны контролей LDN указаны в листе контроля качества (QC-Report).
8.2. Количественное определение
Калибровочная кривая, по которой определяются концентрации адреналина в исследуемых образцах, 
строится путем откладывания значений измеренных оптических плотностей 6 стандартов по оси Y 
{линейные значения), а значений соответствующих им концентраций -  по оси X (логарифмические 
значения). Результаты для исследуемых образцов вычисляют, используя один из следующих способов 
построения кривой: сплайн, Акима или 4-параметрическую логистику.
Ниже приводится образец типичной калибровочной кривой для набора Адреналин ИФА. Пожалуйста, не 
используйте эту кривую для определения концентрации адреналина в образцах.
9. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
9.1. Калибровка
Набор откалиброван в нанограммах на миллилитр (нг/мл).
Для каждой группы выполненных тестов концентрации контролей, содержащихся в наборе, должны 
укладываться в указанные для данной серии набора диапазоны. К набору прилагается протокол с 
указанием значений этих диапазонов. Если значения концентрации контролей выходят за рамки заданных 
диапазонов, следовательно, результаты анализа могут быть недостоверными, и тест необходимо 
повторить.
Связывание антисывороток и конъюгатов фермента, а также активность использованного фермента 
термозависимы, поэтому значения оптических плотностей могут изменяться, если не используется 
термостат. Чем выше температура, тем будут выше значения оптических плотностей. Сходные колебания 
связаны и с изменением времени инкубации. Оптимальная температура при иммуноферментном анализе -  
18-22°С.
Примечание:  При превышении максимальных значений оптической плотности, измеряемых прибором при 
длине волны 450 нм, можно измерить оптическую плотность в лунках не более чем через 10 минут, 
используя длину волны 405 нм.
9.2. Ожидаемые значения
Референтные значения, приведенные ниже, могут служить только в качестве ориентировочных. 
Рекомендуется для каждой лаборатории определить собственные значения нормы.
Адреналин
Моча < 20 мкг/день (110 нмоль/день)
Плазма крови <100  пг/мл


--- стр. 6 ---
9.3. Чувствительность
За чувствительность принимают кажущуюся концентрацию, определяемую как среднее значение для нуле­
вого стандарта минус две величины стандартного отклонения.
Адреналин
Чувствительность при исследовании мочи 0,33 нг/мл
Чувствительность при исследовании плазмы крови 11 пг/мл
9.4. Специфичность
Используемая в наборе Адреналин ИФА антисыворотка получена к N-ацилметанефрину. Специфичность 
антисыворотки оценивали, определяя перекрестную реакцию с различными биогенными аминами, их 
производными и родственными соединениями. Соединения разводили в 0,1 N HCI до следующих 
концентраций: 0,1; 1; 10 и 1000 мкг/мл и исследовали в ИФА в соответствии с приведенной в данной 
инструкции методикой анализа мочи.
Адреналин ИФА: ED-50-значение = 0,007 мкг/мл
Соединение ED-50-значение
(мкг/мл)
Перекрестная реакция 
(%)
Производное адреналина 0,007 100
Метанефрин 1,13 0,64
Норадреналин 3,67 0,00009
Норметанефрин 800 <0,0007
3-Метокситирамин >1000 <0,0007
Фенилаланин >1000 <0,0007
Допамин >1000 <0,0007
Кофеиновая кислота >1000 <0,0007
Гомованилиновая кислота >1000 <0,0007
Тирозин >1000 <0,0007
З-Метокси-4-гидроксиманделовая кислота >1000 <0,0007
Тирамин >1000 <0,0007
З-Метокси-4-гид роксифен ил гл икол ь 27 0,026
L-допа >1000 <0,0007
9.5. Воспроизводимость
Воспроизводимость ИФА оценивали по коэффициенту вариации (CV) в пределах одной постановки и между 
постановками, проводя повторные исследования двух образцов мочи с различной концентрацией 
адреналина.
Адреналин ИФА:
Вариабельность в пределах постановки, п = 40
Образец Среднее + SD (нг/мл) CV {%)
1 2,5 +0,4 15,0
2 11,7 + 0,8 6,9
Вариабельность между постановками, п » 11
Образец Среднее + SD (нг/мл) CV (%)
1 8,8 +1,1 13,2
2 34,2 + 5,2 15,4
9.6. Точность определения
К образцу мочи и образцу плазмы крови добавляли возрастающие количества адреналина. Исследовали 
каждый образец с дополнительно внесенным адреналином. Аналитическая точность определения 
адреналина оценивали в образцах с 9 различными концентрациями, используя теоретически ожидаемые и 
практически полученные значения. Среднее значение открытия во всех образцах мочи с различными 
концентрациями составило 107% (SD 10%, диапазон 84 -  119%), во всех образцах плазмы крови -  92% (SD 
9%, диапазон 80 -  113%).
9.7. Линейность
Линейность ИФА определяли, используя 7 различных разведений образца мочи и образца плазмы крови. 
Среднее значение линейности во всех разведениях образца мочи составило 100% (SD 13%, диапазон 86 -  
124%), во всех разведениях образца плазмы крови -  100% (SD 16%, диапазон 81 -  121%). В наборе 
Адреналин ИФА соотношение между концентрацией и разведением мочи и плазмы крови достоверно не 
отличалось от заданной линейности при различных исследованных диапазонах концентраций (4,6 -  81,4 
нг/мл и 184 -  545 пг/мл).


--- стр. 7 ---
9.8. Сравнение с другим методом анализа
Концентрацию адреналина в 30 образцах мочи и плазмы крови определяли набором LDN ИФА (ось X) и  
методом HPLC (высокоэффективной жидкостной хроматографии) (ось Y) (образцы для внешнего контроля 
качества присланы из UK NEQAS). Полученные результаты демонстрируют вьюокую степень корреляции 
между методом ИФА и HPLC. Это означает, что концентрации, измеренные в иммуноферментном анализе, 
мало отличаются от концентраций, полученных при использовании метода HPLC на образцах из UK 
NEQAS. Просим учесть, что значения концентраций контролей из UK NEQAS являются средней величиной, 
полученной при статистической обработке результатов HPLC примерно 40 различных пользователей, и в 
группе всегда есть один патологический образец. По результатам линейно-регрессионного анализа 
установлены следующие корреляционные характеристики: у = 1,17х + 0,06, г = 0,99. Два метода анализа 
сравнимы.
10. КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Адреналин (эпинефрин) и норадреналин (норэпинефрин) вместе с допамином составляют группу 
катехоламинов, которые играют важную роль в качестве гормонов и  нейромедиаторов. Катехоламины 
являются биогенными аминами, которые синтезируются из аминокислоты тирозина через промежуточный 
продукт допа.
После того, как закончится их действие, адреналин и норадреналин разлагаются через промежуточные 
продукты метанефрин и норметанефрин до конечного продукта метаболизма ванилилманделовой кислоты 
и экскретируются в мочу. Поэтому моча наравне с плазмой крови используется в качестве материала для 
анализа при определении концентрации катехоламинов.
Катехоламины синтезируются преимущественно в мозговом слое надпочечников и в нервных окончаниях 
симпатической нервной системы. Здесь они хранятся в гранулах и освобождаются под воздействием 
специфического раздражителя. Действие катехоламинов затем осуществляется путем присоединения к 
специфическим мембранным рецепторам на клетках-мишенях. После этого они быстро расщепляются 
различными ферментами. Главная роль катехоламинов -  способствовать приспособлению организма к 
острым и хроническим стрессам. Адреналин воздействует главным образом на сердечную мышечную ткань 
и метаболизм, тогда как норадреналин действует как сосудосуживающий агент периферических артерий. 
Особое применение определение концентрации катехоламинов в организме находит в сфере исследования 
стресса и спортивной медицины.
К заболеваниям, при которых происходит изменение уровня катехоламинов, относятся гипертония, 
дегенеративные заболевания сердца, шизофрения, маниакально-депрессивные состояния, а также 
развитие катехоламин-предуцирующих опухолей (нейробластом, ганглионевром и феохромоцитом). Среди 
них феохромоцитома имеет наибольшее значение. Феохромоцитомы являются опухолями, особенно 
активно секретирующими катехоламины. Они происходят из мозгового слоя надпочечников и могут, в 
сочетании с хирургическим вмешательством и анестезией, привести к угрожающим жизни ситуациям. 
Примерно в 10% всех феохромоцитом происходит злокачественное перерождение. В большинстве 
случаев, однако, они излечимы при применении оперативной терапии в сочетании с медикаментозной 
терапией с использованием а-адренергенных антагонистов. С другой стороны, неидентифицированная 
феохромоцитома является серьезным риском для здоровья пациента.
Определение концентраций адреналина и норадреналина, таким образом, необходимо для пациентов с 
подозрением на феохромоцитом у. Эти тесты также часто используются для первичной постановки диагноза 
гипертонии.


--- стр. 8 ---
11. ЗАМЕЧАНИЯ ПО ПРОЦЕДУРЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
11.1. Надежность результатов анализа
Для того, чтобы обеспечить надежные результаты анализа, его следует проводить в соответствии с 
прилагающимися инструкциями, а также с текущими правилами и нормативами (GLP(good laboratory 
practice), RILIBAK и т.д.). Особое внимание следует обращать на контрольные исследования точности и 
правильности во время проведения анализа; результаты этих контрольных исследований не должны 
выходить за рамки нормальных диапазонов. В случае значительных расхождений в характеристиках 
анализа, указанных производителем и реально полученных Вами, пожалуйста, свяжитесь с 
производителем набора для получения дальнейших инструкций.
11.2. Действия терапевта
Результаты анализа всегда должны интерпретироваться в совокупности с другими клиническими данными 
и результатами других лабораторных исследований для того, чтобы помочь терапевту определить, какой из 
методов лечения будет наиболее продуктивным для данного пациента. Окончательный диагноз должен 
ставиться только на основании результатов всех лабораторных анализов и  клинических данных.
11.3. Ре1сламации
В случае рекламации, пожалуйста, прилагайте письменный отчет, содержащий все данные по проведению 
анализа, полученным результатам, а также копии оригиналов распечаток. Пожалуйста, свяжитесь с Labor 
Diagnostika Nord для получения формы рекламации и верните эту форму полностью заполненной 
производителю / Labor Diagnostika Nord.
11.4. Гарантии
Набор произведен в соответствии с последними достижениями в технологии и подвергается обязательным 
внутренним и внешним проверкам контроля качества. Любые изменения в наборе или в процессе 
постановки анализа, а также использование реагентов непредусмотренного назначения могут отрицательно 
сказаться на результатах анализа и, таким образом, не подпадают под действие гарантии. Производитель 
не отвечает за повреждения, произошедшие при транспортировке.
12. СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Список литературы приведен в оригинале инст рукции на английском языке.
8


--- стр. 9 ---
1.
2 .
3.
4.
Адреналин ИФА
Краткая инструкция по применению
96 и [Г у ^  С € Номер по каталогу: 
ВА-10-0100 Labor D iagnostika N ord
Приготовление Ферментного раствора
Важно: Ферментный раствор необходимо готовить непосредственно перед использованием (не более чем за 10 -
15 минут). Растворить содержимое флакона с надписью «Фермент» {“Enzyme”) (ВА-1615) в 1  мл дистиллированной
воды и тщательно перемешать. Добавить 0,3 мл кофермента (“Coenzyme”) (ВА-1614), а затем -  0,7 мл буфера для
фермента (“Enzyme Buffer”) (BA-1616). Общий объем ферментного раствора составляет 2,0 мл.
Приготовление п р о м ы в о ч н о г о буфеоа
Развести 50 мл концентрата промывочного буфера дистиллированной водой до конечного объема 500 мл.
Разведенный концентрат промывочного буфера можно хранить при температуре 2 -  8 °С.
Взятие и хранение образцов
Плазма крови: ЭДТА-плазма. Хранение: до 6 часов при температуре 2 -  8 °С, более длительное хранение
-п р и  минус2 0 °С.
Моча: Можно использовать как разовую, так и суточную мочу.
Суточную мочу поместить в емкость, содержащую 10-15 мл 6 М HCI. Хранение: более 
длительное (до 6 месяцев) - при минус 20 °С. Избегать воздействия прямых солнечных 
лучей.
Схема экстракции и ацилирования
Стандарты Контроли Образцы мочи Образцы плазмы крови
Стандарты 10 мкл
Контроли 10 мкл
Образцы мочи 10 мкл
Образцы плазмы 300 мкл
Дистиллированная вода 250 мкл 250 мкл 250 мкл
Буфер для анализа 50 мкл 50 мкл 50 мкл 50 мкл
Буфер для экстракции 50 мкл 50 мкл 50 мкл 50 мкл
Закрыть планшет защитной фольгой и инкубировать в течение 30 минут при комнатной температуре при 
встряхивании на орбитальном шейкере при 600-900 об/мин.
Снять фольгу и выбросить ее. Сразу же вылить содержимое лунок планшета, затем удалить остатки жидкости из 
лунок, слегка постукивая перевернутым планшетом о фильтровальную бумагу.
________________________________
Внести во все лунки по 1  мл разведенного концентрата промывочного буфера, захрьп-ь планшет защитной фольгой 
и инкубировать в течение 5 минут при комнатной температуре на орбитальном шейкере при 600 -  900 об/мин.
Снять фольгу и выбросить ее. Вылить содержимое лунок планшета, затем удалить остатки жидкости из лунок. 
Повторить этот шаг еще раз.__________________________________________________________________________________
Ацилирующий буфер 150 мкл 150 мкл 150 мкл 150 мкл
Ацилирующий реагент 25 мкл 25 мкл 25 мкл 25 мкл
Инкубировать 15 минут при комнатной температуре, не закрывая фольгой, при встряхивании на шейкере при 600 -  
900 об/мин. Вылить содержимое лунок планшета, затем удалить остатки жидкости из лунок.
______________________
]I Разведенный промывочный буфер |  Тмл 1  мл 1  мл 1  мл
Инкубировать 10 минут при комнатной температуре, закрыв фольгой, на шейкере при 600 -  900 об/мин. Вылить 
содержимое лунок планшета, затем удалить остатки жидкости из лунок. __________________________________________
I  Соляная кислота" 150 мкл 150 мкп 150 мкл 150 мкл
Инкубировать 10 минут при комнатной температуре, закрыв фольгой, при встряхивании на шейкере при 600 -  900 
об/мин. Для ИФА необходим следующий объем элюата: ________________________________________________________
Адреналин
100 мкл
5. Схема постановки ИФА
Стандарты Контрол и Образцы мочи Образцы плазмы крови


--- стр. 10 ---
10
Адреналин:
Ферментный раствор 25 мкл 25 мкл 25 мкл 25 мкл
Стандарты/ Контроли/ Образцы 100 мкп 100 мкл 100 мкл 100 мкл
I  Инкубировать в течение 30 минут при температуре 37 °С. 
I  Антисыворотка к адреналин^ 50 мкл 50 мкл 50 мкл I 50 мкл
Инкубировать 2 часа при комнатной температуре при встряхивании на шейкере при 400 -  500 об/мин. Промыть 3 
раза по 300 мкл разведенного промывочного буфера. Удалить остатки жидкости из лунок, слегка постукивая 
перевернутым планшетом о фильтровальную бумагу. 
_____________________________________________________
I Конъюгат фермента 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл ]
Инкубировать 30 минут при комнатной температуре при встряхивании на шейкере при 400-500 об/мин. Промыть 
3 раза по 300 мкл разведенного промывочного буфера. Удалить остатки жидкости из лунок._____________________
Субстрат 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубировать 20 - 30 минут при комнатной температуре при встряхивании на шейкере при 400 -  500 об/мин.
I Стоп-реагент
6.
7.
100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Измерить оптическую плотность при длине волны 450 нм (референтная длина волны 620 -  650 им).
Расчет результатов
Концентрации адреналина в стандартах:
А = О  нг/мл / В = 1  нг/мл / 0  = 4 нг/мл / 0  = 16 нг/мл / Е = 64 нг/мл I F = 256 нг/мл.
Рассчитать среднюю оптическую плотность каждого стандарта, контроля или исследуемого образца.
На миллиметровой бумаге построить калибровочную кривую зависимости средней оптической плотности 
стандартов (по оси Y) от log концентрации адреналина в стандартах в нг/мл (по оси X).
По калибровочной кривой рассчитать концентрации адреналина в контролях и исследуемых образцах, сопоставляя 
значения их средней оптической плотности с соответствующими концентрациями аналита.
Образцы мочи и контрол и:
Концентрации адреналина в образцах мочи и контролях можно рассчитать непосредственно по калибровочной 
кривой.
Образцы плазмы крови:
Полученные концентрации адреналина в образцах плазмы крови следует разделить на 30.
Ожидаемые значения
Референсные значения, приведеннью ниже, могут служить только в качестве ориентировочных. Рекомендуется 
каждой лаборатории выработать собственные значения нормы.
Адреналин
Моча < 20 мкг/день (110 нмоль/день)
Плазма крови <100  пг/мл
8. Чувствительность
Адреналин
Чувствительность при исследовании мочи 0,33 нг/мл
Чувствительность при исследовании плазмы крови 11 пг/мл


--- стр. 11 ---
Ред. 27.12.2005
Плацентарный лактоген (EIA-1283)
hPL EIA-1283
Только для диагностического использования in vitro
Вступление
Набор для иммуноферментного анализа DRG® hPL позволяет определить количество Плацентарного Лактогена (ПЛ) 
человека в сыворотке.
Физиологическая роль ПЛ пока еще не выяснена, но офомное сходство с Гормоном Роста породило гипотезу про то, что ПЛ 
выступает в качестве регулятора фето-плацентарного роста и других физиологических изменений во время беременности. 
Предполагается, что уровень этого гормона в сыворотке матери может отражать так называемый «индекс плацентарной 
функции». Пониженные уровни ПЛ рассматриваются как внутриутробная гибель плода, болезненные дляплода роды и 
асфиксия новорожденных. Это подтверждается особенно, когда снижения уровня повторяются в процессе наблюдения, 
вызывая хроническое состояние плацентарного и, как следствие, эмбрионального компромисса. Снижения уровня не 
происходит, если беременность проходит без каких-либо событий, спокойно весь срок. Повышенные уровни обычно 
показывают оптимальный исход при беременности единственным ребенком. Однако повышения уровня могут показывать 
важные патологии плода при специфических заболеваниях, а именно: сахарный диабет, эмбриональная макросомия, резус 
изоиммунизация, гидрамнион.
Принцип анализа
Набор для иммуноферментного анализа DRG® hPL - это твердофазный, меченный ферментом, иммуносорбентный анализ 
(EL1SA), основанный на принципе «сендвича». Микротитро вал ьные лунки покрыты моноклональными антителами, 
направленными против уникального антигенного сайта на молекуле ПЛ. Аликвота пробы пациента с эндогенным ПЛ 
инкубируется в лунке с ферментным конъюгатом, который из себя представляет моноклональное анти-ПЛ антитело, 
конъюгированное с пероксидазой хрена. После инкубации несвязавшийся конъюгат вымывается. Количество связавшейся 
пероксидазы пропорционально концентрации ПЛ в образце. При добавлении субстратного раствора появится окрашивание, 
интенсивность которого пропорциональна концентрации ПЛ в пробе пациента.
Предупреждение для пользователей
1. Не существует надежных методов определения наличия вируса Гепатита В, ВИЧ или других в реагентах набора. Все
реагенты, приготовленные из человеческой крови, как и образцы пациентов, должны рассматриваться как
потенциально инфицированные.
2. Избегайте контакта со Стоп-раствором 0,5 М H 2 SO4
3. Растворы, содержащие добавки или консерванты не должны использоваться для анализа.
4. Только для диагностики in vitro.
5. Не используйте и не смешивайте компоненты из наборов с разными номерами партии.
Реагенты:
1 . М икротитровальная панель 96 лунок, 12x8 (разламываемые) стрипов, покрыта анти-ПЛ моноклональными
антителами.
2. Набор референс-стандартов 4 флакона по 0,5 мл каждый; 1,25; 5; 10; 20 мг/л;
Коэффициент пересчета 1  мг/л = 1  мМЕ/л,
Стандарты откалиброваны по международному стандарту NIBSC для ПЛ, IRP  
(73/545), содержит консервант Прокчин 0,3%.
3. Нулевой стандарт 1  флакон, 90 мл, О  мг/л, готов к использованию (он же раствор для разведения
образцов), содержит консервант Проклин 0,3%.
4. Ферментный конъюгат 1  флакон, 11 мл: анти-ПЛ антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена,
содержит консервант Проклин 0,3%.
5. Субстрат-раствор 1  флакон, 11 мл, готов к использованию, Тетраметилбензидин (ТМБ),
6 .  Стоп-раствор 1  флакон, 6  мл, готов к использованию, 0,5 М H 2SO4 .
Внимание: дополнительный Нулевой Стандарт дя разведения проб пациентов доступен по первому запросу.
Необходимые материалы, не входящие в набор
1. Ридер для микротитровальных панелей (450±10 нм) (например, DRG Instruments Microtiterplate Reader)
2. Прецизионные микропипетки со съемными наконечниками (10 мкл, 50 мкл, 100 мкл, 1000 мкл)
3. Абсорбирующая бумага
121248 Москва, Набережная Т. Шевченко, д.З, Московское Представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495) 243-5621,243-5228,243-4028, факс (495) 243-9300,232-0211 e-mail: drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 12 ---
Ред. 27.12.2005
4. Дистиллированная вода
5. Пробирки для разведения образцов (по I для каждого образца, стандартные без покрытия 12 х 75 мм)
Условия хранения
Реагенты сохраняют реакционную способность до окончания срока годности при хранении в закрытом виде при 2-8'^С. Не 
использовать реагенты после этой даты.
Ферментный коньюат, Субстрат-ратсвор, Стандарты  и Нулевой Стандарт  должны храниться при 2-8°С. 
Микротитровальные лунки  должны храниться при 2-8° С. После вскрытия упаковки необходимо плотно зарыть ее снова. 
Реакционная способность лунок сохраняется 6  недель во вскрытом, но плотно запечатанном пакете с влагопоглотителем.
Забор проб и подготовка реагентов
]. Заберите кровь венипункцией, дайте свернуться и отделите сыворотку центрифугированием при комнатной 
температуре. Образцы, содержащие натрия азид, не допустимы в данном аначизе.
2. Образцы хранятся в закрытом виде до 5 дней при 2-8°С до проведения анализа. Для более длительного хранения 
необходимо заморозить образцы при -20°С.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Общие замечания
1. Все реагенты и образцы необходимо довести до комнатной температуры перед использованием. Все реагенты 
необходимо перемешать, избегая вспенивания.
2. После начала анализа все этапы должны проводиться без перерыва.
3. Используйте новый наконечник для каждого образца.
4. Перед началом анализа рекомендуется подготовить все реагенты, закрепить желаемое количество лунок и т.д. 
Подготовка образцов
Перед началом анализа образцы необходимо развести 1:100 Нулевым стандартом.
1. Добавьте для каждого образца 1  мл Нулевого стандарта в пробирку.
2. Добавьте 10 мкл каждого образца в соответствующую пробирку. Смешивайте содержимое каждой пробирки в течение 
10 секунд в мешалке. Избегайте вспенивания.
Замечание по процедуре
1. Ручное пипетирование: Рекомендуется использовать не больше 32 лунок для проведения одной серии анализов. 
Пипетирование всех образцов, стандартов и контролей должно быть завершено в течение 3 минут.
2. Автоматическое пипетирование: Возможно использование полной планшеты из 96 лунок. Тем не менее, 
рекомендуется завершить пипетирование всех стандартов, образцов и контролей в течение 3 минут.
3. Все стандарты, образцьЕ, и контроли должны проводиться в дублях при одинаковых условиях тестирования.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
1. Закрепить желаемое количество лунок  в держателе
2. Раскапать 10 мкл стандартов  (0; 1,25; 5; 10; 20 мг/л), контролей и предварительно разведенных образцов сыворотки 
новыми наконечниками в соответствующие лунки
3. Раскапать 100 мкл ферментного конъюгата  в каждую лунку
4. Тщательно перемешать в течение 10 секунд. Важно добиться полного смешивания на этом этапе.
5. Инкубировать 30 минут при комнатной температуре.
6 . Резко вытряхнуть содержимое лунок. Промойте лунки 5 раз дистиллированной водой. Выстучите оставшиеся капли на 
абсорбирующую бумагу.
7. Добавить 100 мкл Субстрат-раствора  в каждую лунку
8 . Инкубировать 10 минут при комнатной температуре
9. Остановить ферментную реакцию, добавив 50 мкл Стоп-раствора  в кажд}/ю лунку
10. Читать 0D  при 450±10 нм при помощи ридера для микротитровальных панелей
Рекомендуется считывать результаты в течение 10 минут после этапа И .
Подсчет результатов
1. Подсчитайте среднюю величину абсорбции для каждого набора стандартов, контролей и образцов пациента.
2. Постройте стандартную кривую, поместив средние значения абсорбции для каждого референс-стандарта (ось Y) 
против концентрации в мг/л (ось X).
3. Используя средние значения абсорбции для каждого образца, определите соответствующую концентрацию ПЛ в мг/л 
по стандартной кривой.
Плацентарный лактоген (EIA-1283)
121248 Москва, Набережная Т. Шевченко, д.З, Московское Представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495) 243-5621,243-5228,243-4028, факс (495) 243-9300,232-0211 e-mail: drgtech@dolru http://www.drgtech.ru


--- стр. 13 ---
4. Автоматический метод: результаты в инструкции были посчитаны автоматически с помощью программы 4 PL. Другие 
функции обработки данных могут давать отличные данные от ниже перечисленных.
5. Концентрация в пробе может быть считана прямо из данной кривой. Образцы с концентрацией выше, чем у 
наивысшого стандарта, должны быть разведены. При этом обязательно принимается во внимание фактор разведения.
Пример стандартной кривой
Плацентарный лактоген (EIA-1283)
Ред. 27.12.2005
Стандарт Оптические Единицы (450 нм)
Нулевой стандарт ( 0 мг/л) 0,03
Стандарт 1 (1,25 мг/л) 0,17
Стандарт 2 (5,0 мг/л) 0,65
Стандарт 3 ( 1 0 , 0 мг/л) 1,71
Стандарт 4 (2 0 , 0 мг/л) 1,84
Нормальные значения:
Настоятельно рекомендуется каждой лаборатории разработать свои собственные нормативы.
Диагностика беременности Одноплодная беременность Много плодная беременность
■ 1 2 неделя 0,05-1,00 мг/л
■ 1 4  неделя 0,10-1,7 мг/л
14-16 0,3-2,8 мг/л
16-18 0,5-3,5 мг/л
18-20 0,9-4,0 мг/л
2 0 - 2 2 1Д-5,0 мг/л 2,2-7,0 мг/л
22-24 1,3-5,8 мг/л 3,0-8,1 мг/л
24-26 1 ,6 -6 ,7 мг/л 3,6-9,2 мг/л
26-28 2,0-7,7 мг/л 4,1-10,3 мг/л
28-30 2 ,7-8,5 мг/л 4,6-11,7 мг/л
30-32 3,2-9,5 мг/л 5,0-13,0 мг/л
32-34 3,7-10,1 мг/л 5,4-15,1 мг/л
34-36 4,0-10,7 мг/л 5,7-17,8 мг/л
36-38 4,3-11,2 мг/л 5,9-19,7 мг/л
38-40 4,4-11,7 мг/л 5,8-19,6 мг/л
40-42 4,3-11,6 мг/л
Характеристики анализа
1. Рабочий диапазон
Рабочий диапазон лежит в районе значений 0-20  мг/л
2. Специфичность
Антиген Эквивалент hPL
ХГЧ 2000 МЕ/л не определяется
АФП 300 МЕ/л не определяется
СТГ 1 0 0 мкг/л не определяется
Пролактин 2 0 0  мкг/л не определяется
3. Чувствительность
Минимальная определяемая концентрация ПЛ для данного набора 0,043 мг/л
4. Точность
А. Внутренняя точность определяется повторными тестами трех различных сывороток в одном анализе.
Образец сыворотки 1
Кол-во повторений 18
Средние значения ПЛ 0,66 
(мг/л)
Стандартное отклонение 0,04 
Коэффициент вариации 6,06 
(% )
18
2,34
0,13
5,55
18
6,24
0,42
6,73
121248 Москва, Набережная Т. Шевченко, д.З, Московское Представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495) 243-5621,243-5228,243-4028, факс (495) 243-9300,232-0211 e-mail; drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 14 ---
Ред. 27.12.2005
Плацентарный лактоген (EIA-1283)
Б. Внешняя точность определяется повторными измерениями трех разных контрольных сывороток в нескольких различных 
анализах
Образец сыворотки 1 2 3
Кол-во повторений 39 24 24
Средние значения ПЛ 0 , 6 8 2,52 6,87
(мг/л)
Стандартное отклонение 0,06 0,18 0,39
Коэффициент вариации 8,82 7,14 5,67
(%)
5. Воспроизводимость и линейность
А. Воспроизводимость
Различные образцы сыворотки с известным уровнем ПЛ были смешаны и протестированы i
равна 101,17%
Добавленные Ожидаемые Наблюдаемые
Образец концентрации концентрации концентрации Воспроизводимость
мг/л мг/л мг/л %
0 , 0 0 0 , 0 0
0,63 0,55 0,63 8 8 , 6
1 2,50 2,40 2,50 96,2
5,00 5,21 5,00 104,2
1 0 , 0 8,58 1 0 , 0 0 85,8
0 , 0 0 1,93
0,63 1,39 1,59 87,6
2 2,50 3,16 3,46 91,4
5,00 5,21 5,96 87,4
1 0 , 0 9,81 10,96 89,5
0 , 0 0 4,67
0,63 1,67 1,59 105,0
3 2,50 3,88 3,46 1 1 2 , 2
5,00 6,69 5,96 1 1 2 , 2
1 0 , 0 1 1 , 6 6 10,96 106,3
Б. Линейность
Два образца пациентов разводились Нулевым стандартом
Наблюдаемые Ожидаемые
Пациент№ Разведение концентрации концентрации Воспроизвод]
мг/л мг/л %
нет 1,93 1,93
1 : 2 0,84 0,96 86,7
1 1:4 0,45 0,48 93,7
1 : 8 0,26 0,24 108,0
1:16 0 , 1 2 0 , 1 2 95,5
нет 4,67 4,67
1 : 2 2,28 2,33 97,5
2 1:4 1,06 1,17 90,7
1 : 8 0,64 0,58 109,2
1:16 0,31 0,29 106,3
Контроль качества
Опыт лабораторной практики предполагает проведение контролен для каждой калибровочной кривой. 
Хук-эффект
Не наблюдается до 700 мг/л ПЛ.
121248 Москва, Набережная Т. Шевченко, д.З, Московское Представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495) 243-5621,243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300,232-0211 e-mail: drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 17 ---
DRG Фолликулостимулирующий гормон EIA-1288
Иммуноферментный набор для количественного определения в сыворотке фолликулостимулирующего гормона 
Только для диагностического использования in vitro
Внимание!! Изменения!
Референс-стандарты теперь лиофилизированы!
Внимательно читайте инструкцию перед использованием!
ВВЕДЕНИЕ
Два белковых гормона; фолликулостимулирующий (ФСГ) и лютеинизирующий (ЛГ) совместно регулируют (по механизму отрицательной обратной 
связи) рост и репродую-ивную а»стивность мужских и женских половых желез, в которых идет синтез и секреция стероидных половых гормонов 
(1, 2). Секреция ФСГ базофильными клетками передней доли гипофиза находится под контролем продуцируемого гипоталамусом гонадотропин- 
рил изинг-гормон а (ГНРФ). Подобно другим гликопротеинам, таким как ЛГ, ТСГ и ХГЧ, ФСГ состоит из двух субъединиц, обозначаемых аир. 
Гормоны этого типа имеют структурно очень похожую а-субъединицу, тогда как биологические и иммунологические свойства каждого гормона 
зависят от уникальной ст рукт уры (3-субъединицы (3, 4, 5).
У женщин ФСГ стимулирует рост и созревание фолликулов в яичниках, непосредственно воздействуя на ФСГ-рецепторы фанулярных клеток. В 
результате в этих клетках запускается стероидогенез, который затем приводит к стимуляции продукции ЛГ. В свою очередь, ЛГ связывается с 
клетками оболочки и также стимулирует в них стероидогенез. Увеличенная продукция яичниками эстрад иола способствует фа 1стически 
созреванию фолликул, так как он стимулирует увеличенную активность рецепторов ФСГ и, следовательно, связывание ФСГ фолликулами. Таким 
образом, ФСГ, ЛГ и эстрад иол тесно взаимодействуют, поддерживая циклическое развитие и созревание яичников у женщин (6, 7 ,9).
Увеличенный уровень ФСГ наблюдается в периоде пост-менопаузы, после кастрации и до наступления половой зрелости, когда яичники еще не 
развиты. Уровень ФСГ можно нормализовать введением эстрогенов (то есть путем использования их действия по механизму отрицательной 
обратной связи). При анорексии нервного происхождения и при поликистозном яичнике нормальное взаимодействие между ФСГ и  ЛГ, ФСГ и 
эстрогеном нарушается. На недостаточное функционирование яичников может указывать неожиданно возникающее возрастание уровня ФСГ 
выше 40 мЕд/мл (8).
У мужчин ФСГ регулирует рост семенных канальцев и  поддержание сперматогенеза. Однако андрогены, в отличие от эстрогенов, не снижают 
уровень ФСГ, они действуют по механизму отрицательной обратной связи только на сывороточный уровень ЛГ (10, 11,12). Не полностью 
изучены причины увеличения уровня ФСГ при азооспермии и олигоспермии. Радиоиммунные исследования показали, что рак яичка в основном 
подавляет сывороточную концентрацию ФСГ, но при этом уровень Л Г увеличен. Было постулировано, что кажущееся увеличение уровня Л Г 
может быть вызвано перекрестным взаимодействием с субстанциями, подобными ХГЧ, которые секретируются опухолями яичка (11, 12).
Высокие уровни ФСГ у мужчин обнаруживают при первичной тестикулярной недостаточности и при синдроме Кляйнфельтера. Увеличенные 
концентрации присутствуют также в случаях голодания, при почечной недостаточности, гипертиреоидизме и циррозе (1, 3).
ПРИНЦИП МЕТОДА
Набор DRG FSH EIA предназначен для твердофазного иммуноферментного анализа по принципу «сэндвича». На поверхности лунок 
микротитровального планшета, выполняющих роль твердой фазы, иммобилизованы моноклональные антитела, специфичные к уникальной 
антигенной детерминанте [З-субъединицы ФСГ. При добавлении в лунки образцов сыворотки, содержащих эндогенный ФСГ, а также Ферментного 
Конъюгата (поликлональные антитела к ФСГ, меченые пероксидазой хрена), в результате инкубации образуется тройной иммунный комплекс 
типа «сэндвич», иммобилизованный на твердой фазе. После удаления несвязанного материала промыванием количество связавшегося 
Конъюгата (пропорциональное концентрации ФСГ в Образце) определяют путем добавления Субстрата пероксидазы (тетраметилбензидина), 
который инициирует реакцию образования окрашенного в синий цвет продукта реакции.
Интенсивность окрашивания прямо пропорциональна концентрации ФСГ в образце. Эту концентрацию оценивают количественно в мМЕд./мл 
относительно ряда Референсных Стандартов.
РЕАГЕНТЫ
1 . Микротитровальные лунки, 96 лунок. Микролунки, покрытые моноклональными антителами к ФСГ.
2. Ферментный Коньюгат, 1  флакон, 11 мл. Анти-ФСГ антисыворотка, конъюгированная с пероксидазой хрена.
3. Субстратный Раствор, 1  флакон, 11 мл. Содержит ТМВ
4. Референс-Стандарты, 6 флаконов по 0,5 мл. О , 5,10, 20, 50 и 100 мМЕ/мл.
5. Стоп-раствор, 1  флакон, 6 мл. 0,5 М серная кислота.
МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА, НО НЕ ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА
1. Фотометр для микротитровальных планшетов (ридер) со светофильтром на 450+10 нм (например, микроппаншетный ридер фирмы DRG).
2. Автоматические пипетки на 25, 50 и 100 мкл со сменными наконечниками.
3. Стандартный холодильник.
4. Адсорбирующая бумага.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
Храните все реагенты в нераспечатанном виде при 2-8“С и используйте их до окончания срока годности.
Ферментный Конъюгат, Субстратный Раствор, Стандарты и Нулевой Стандарт следует хранить при 2-8°С.
Микролунки хранят при 2-8°С в запечатанном пакете из фольги. После вскрытия, когда вы достали необходимое для работы количество 
микролунок, пакет с оставшимися лунками следует снова плотно закрыть и убрать в холодильник (2-8“С). При соблюдении таких 
предосторожностей иммунореактивность лунок сохраняется в течение приблизительно 6 недель.
Стандарты восстанавливаются 1  мл воды. После восстановления стабильны в течение 2-х месяцев при 2-8°С или дольше при -20°С.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
• Ни один из существующих методов тестирования не может дать полной гарантии отсутствия в реагентах набора вирусов гепатита В, СПИДа 
или других инфекционных агентов. Поэтому, со всеми материалами, имеющими происхождение из человеческого организма, в том числе с 
исследуемыми Образцами крови и сыворотки следует обра 1цаться как с представляющими потенциальную биологическую опасность для 
здоровья и соблюдать соответствующие меры безопасности.
• Избегайте контакта с кислотой (Стоп-раствор), которая может вызвать раздражение или ожог кожи.
• Закрывайте флаконы с реагентами только своими крышками. Перепутывание крышек может привести к нарушению анализа.
• Если в Образцах содержатся какие-либо добавки или консерванты, подобные азиду натрия, они могут ингибировать ферментативную 
реакцию. Такие Образцы анализу не подлежат.
• Не набирайте исследуемый материал и реагенты в пипетку с помощью рта.
• Данный набор предназначен только для диагностического использования in vitro.
• Не заменяйте компоненты набора на аналогичные из других партий.
121248 Москва, Н абереж ная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495) 243-5621, 243-5228,243-4028, факс (495) 243-9300,232-0211 e-mail; drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 18 ---
DRG Фолликулостимулирующий гормон EIA 1288
ПРИГОТОВЛЕНИЕ И ХРАНЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
Возьмите кровь из вены, дайте свернуться и отделите сыворотку центрифугированием при комнатной температуре. Избегайте гемолиза.
Пробирки с сывороткой закройте крышками и  храните до проведения анализа в холодильнике (при 2-8°С). Если требуется длительное хранение 
(свыше 48 час), поместите Образцы в морозильную камеру (-20°С) и  не допускайте оттаивания и повторного замораживания. Перед проведением 
анализа растаявшие Образцы следует перемешать, несколько раз перевернув пробирку.
ВНИМАНИЕ; Данный набор используется для анализа только тех Образцов, которые не содержат никаких добавок.
ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ 
Н0ВЫЕМ1 Референс- стандарты
Восстановить лиофилизированное содержимое флаконов (стандарты), используя 1,0 мл бидистиллированной воды.
Примечание: восстановленные стандарты стабильны в течение 3 дней при 2-8°С. Для длительного хранения заморозить до -20°С С.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА 
ОБЩИЕ ЗАМЕЧАНИЯ
1  Перед использованием дайте реагентам и Образцам нафеться до комнатной температуры. При перемешивании избегайте вспенивания.
2. Начав анализ, выполняйте все стадии одну за другой, не допуская остановок.
3. Для каждого Образца используйте новый одноразовый наконечник.
4. Оптическая плотность в лунках зависит от времени инкубации и температуры. Поэтому перед тем как начать анализ подготовьте все 
необходимое, чтобы не допускать перерывов в добавлении реагентов: расположите все реагенты и Образцы на столе, снимите с флаконов 
крышки и закрепите в рамке-держателе необходимое количество микролунок и т.д..
5. Данный набор реагентов рассчитан на развитие максимальной окраски (1,0-2,0 ед. СП) при 22°С за 10 мин. Однако, учитывая линейность 
ферментативной реакции, время инкубации с субстратом, при необходимости, можно откорректировать (уменьшить, если показания выходят за 
верхнюю рамку чувствительности ридера, и увеличить, если ОП ниже 1,0),
ЗАМЕЧАНИЯ ПО ПРОЦЕДУРЕ АНАЛИЗА
1. Ручное пипетирование; За один раз рекомендуется анализировать не более 32 лунок. Внесение всех Стандартов, Образцов и Контролей 
должно быть закончено за 3 мин.
2. Автоматическое пипетирование: Можно проводить анализ с полностью заполненным 96-луночным планшетом. Но при этом внесение всех 
Стандартов, Образцов и Контролей должно быть закончено за 3 мин.
3. Тестирование всех Стандартов, Образцов и Контролей следует проводить в дубликатах.
ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
1. Закрепите необходимое для проведения анализа количество покрытых антителами микролунок в рамке-держателе.
2. Поместите в соответствующие лунки, используя индивидуальные одноразовые наконечники, по 25 мкл растворов Стандартов ФСГ (О , 5,
10, 20, 50 и 100 мМЕ/мл), Контролей или Образцов.
3. Добавьте во все лунки по 100 мкл Ферментного Конъюгата.
4. Тщательно перемешайте содержимое лунок, встряхивая планшету в течение 10 сек.
5. Инкубируйте 30 мин при комнатной температуре.
6. После первой инкубации переверните планшет и  энергично вытряхните его содержимое.
7. Промойте лунки 5 раз дистиллированной водой.
8. Затем удалите остатки жидкости, постукивая перевернутым планшетом по листу адсорбирующей бумаги.
9. Внесите в каждую лунку (через равные промежутки времени) по 100 мкл Субстратного Раствора.
10. Инкубируйте 10 мин при комнатной температуре.
11. Добавьте во все лунки (соблюдая такие же интервалы времени, как в п.9) по 50 мкл Останавливающего Раствора.
12. Не позднее, чем через 10 мин измерьте в лунках оптическую плотность (ОП) при 450±10 нм с помощью микропланшетного ридера.
ПОДСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА
1. В каждом проведенном эксперименте подсчитайте средние значения ОП для Референсных Стандартов, Контролей и  Образцов.
2. На листе миллиметровой бумаги постройте стандартный калибровочный фафик, вертикальная ось которого (Y, линейная), представляет 
собой значения ОП, а горизонтальная (X, линейная) - концентрацию ФСГ в мМЕ/мл. Отложите на фафике средние значения оптической 
плотности для Референсных Стандартов. Соедините полученные точки линией.
3. Отложите на фафике средние величины ОП для Образцов и, экстраполируя их на ось X, определите соответствующие концентрации ФСГ. 
При наличии соответствующего профаммного обеспечения вы можете провести обработку данных этим или другими методами, введя 
экспериментальные значения в компьютер.
4. Если анализируют разведенные Образцы, полученные величины умножают на фактор разведения.
Ожидаемые значения
Каждой лаборатории рекомендуется установить свои собственные уровни сравнения для разных групп пациентов. Приведенные ниже
Образцы № Разброс 
концентра­
ций ФСГ, 
мМЕд/мл
Средний уровень 
ФСГ мМЕд/мл
Стандартное отклоне­
ние мМЕд/мл
Мужчины 46 2,0-10 10,7 7,1
Женщины* 126 0,5-37,3 10,9 8,4
в фолликуляр­
ной фазе
2,0-10,0 - -
в середине цикла 7,0-20,0 - -
в лютеальной 
фазе
2,0-10,0 П - -
Женщины в пост­
менопаузе
36 20,3 - 207,6 93,3 41,4
Беременные
женщины
30 0,0-11,6 0,9 2,4
Некоторые из тестированных женщин, принимали оральные контрацептивы, что могло повлиять на результаты.
ХАРАКТЕРИСТИКИ ТЕСТА 
Чувствительность
Минимальная определяемая данным тестом концентрация ФСГ, составляет 2 мМЕ/мл.
Точность _____________________________________________________
______________________
121248  М осква, Н абереж ная Тараса Шевчен 1со, д. 3, Московское представительство «DRG Internationa), Inc.»
тел. (495) 243-5621,243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail; drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 19 ---
а) Точность анализа в пределах одного опыта
Этот показатель определяли, анализируя три различных контрольных сыворотки в одном опыте в восемнадцати повторах. В таблице показана 
вариабельность полученных результатов.
DRG Фолликулостимулирующий гормон EIA-1288
Образцы 1 2 3
Число повторов 18 18 18
Средняя концентрация ФСГ, 
(мМЕд/мл)
8,71 20,09 55,42
Стандартное отклонение 0,65 1,82 4,29
Коэффициент вариации (%) 7,46 9,06 7,74
б) Вариабельность результатов от опыта к опыту
Воспроизводимость результатов анализа определяли, тестируя в нескольких повторяющихся опытах три различных контрольных сыворотки. В 
таблице показана вариабельность полученных результатов от опыта к опыту.
Образцы 1 2 3
Число повторов 28 28 28
Средняя концентрация ФСГ 
(мМЕд/мл)
9,17 21,04 50,62
Стандартное отклонение 0,54 1,24 2,16
Коэффициент вариации (%) 5,89 5,90 4,27
Выход и линейность
а) Выход
Смешивали Образцы с известными концентрациями ФСГ и проводили анализ в двух параллелях. Средний выход составил 98,7%.
Ожидаемые
концентрации
ФСПмМЕд/мл)
Измеряемые 
концентрации 
ФСГ (мМЕд/мл)
% выхода
5,03 5,09 101,1
17,41 17,47 100,3
29,76 28,55 95,9
34,15 33,05 96,8
39,78 41,82 105,1
52,83 49,25 93,2
б) Линейность)
Делали серию двойных разведений двух исследуемых Образцов Нулевым Стандартом и  проводили с ними анализ. Средний выход составил 
109,25%.
Образец
№
Разве*
дение
Ожидаемые 
концентраци 
и ФСГ 
(мМЕд/мл)
Измеряе­
мые
концен­
трации
ФСГ
(мМЕд/мл)
% выхода
0 56,27 56,27 100,0
1 1:2 28,14 28,58 101,6
1:4 14,07 15,08 107,2
1:8 7,03 8,45 120,2
1:16 3,52 4,12 117,0
1:32 1,76 2,26 128,4
0 49,39 49,39 100,0
1:2 24,69 23,31 94,4
2 1:4 12,35 12,03 97,4
1:8 6,17 6,23 101,0
1:16 3,09 3,25 105,2
1:32 1,54 1,85 120,1
Специфичность
Для определения специфичности используемого теста изучали его перекрестную реактивность со следующими гормонами:
121248 М осква, Н абереж ная Тараса Шевченкго, д. Э, Московское представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495) 243-5621, 243-5228» 243-4028, факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 22 ---
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
• Ни один из существующих методов тестирования не может дать полной гарантии отсутствия в реагентах набора вирусов гепатита В, СПИДа 
или других инфекционных агентов. Поэтому, со всеми материалами, имеющими происхождение из человеческого организма, в том числе с 
исследуемыми Образцами крови и сыворотки следует обращаться как с представляющими потенциальную биологическую опасность для 
здоровья и соблюдать соответствующие меры безопасности.
• Избегайте контаета с кислотой (Стоп-раствор), которая может вызвать раздражение или ожог кожи.
• Закрывайте флаконы с реагентами только своими крышками. Перепутывание крышек может привести к нарушению анализа.
• Если в Образцах содержатся какие-либо добавки или консерванты, подобные азиду натрия, они могут ингибировать ферментативную 
реакцию. Такие Образцы анализу не подлежат.
• Не набирайте исследуемый материал и реагенты в пипетку с помощью рта.
• Данный набор предназначен только для диагностического использования in vitro.
• Не заменяйте компоненты набора на аналогичные из других партий.
ПРИГОТОВЛЕНИЕ И ХРАНЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
Возьмите кровь из вены, дайте свернуться и  отделите сыворотку центрифугированием при комнатной температуре. Избегайте гемолиза. 
Пробирки с сывороткой закройте крышками и храните до проведения анализа в холодильнике (при 2-8°С). Если требуется длительное хранение 
(свыше 48 час), поместите Образцы в морозильную камеру (-20°С) и не допускайте оттаивания и повторного замораживания. Перед 
проведением анапиза растаявшие Образцы следует перемешать, несколько раз перевернув пробирку.
ВНИМАНИЕ: Этот набор используется для анализа только тех Образцов, которые не содержат никаких добавок.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА 
ОБЩИЕ ЗАМЕЧАНИЯ
1. Перед использованием дайте реагентам и Образцам нафеться до комнатной температуры. При перемешивании избегайте вспенивания.
2. Начав анализ, выполняйте все стадии одну за другой, не допуская остановок.
3. Для каждого Образца используйте новый одноразовый наконечник,
4. Оптическая плотность в лунках зависит от времени инкубации и  температуры. Поэтому перед тем как начать анализ подготовьте все 
необходимое, чтобы не допускать перерывов в добавлении реагентов: расположите все реагенты и Образцы на столе, снимите с флаконов 
крышки и закрепите в рамке-держателе необходимое количество микролунок и т.д.,
5. Данный набор реагентов рассчитан на развитие максимальной окраски (1,0-2,0 ед.ОП) при 22°С за 10 мин. Однако, учитывая линейность 
ферментативной реакции, время инкубации с субстратом, при необходимости, можно откорректировать (уменьшить, если показания выходят за 
верхнюю рамку чувствительности ридера, и увеличить, если ОП ниже 1,0).
ЗАМЕЧАНИЯ ПО ПРОЦЕДУРЕ АНАЛИЗА
1. Ручное пипеттирование: За один раз рекомендуется анализировать не более 32 лунок. Внесение всех Стандартов, Образцов и  Контролен 
должно быть закончено за 3 мин.
2. Автоматическое пипеттирование: Можно проводить анализ с полностью заполненным 96-луночным планшетом. Но при этом внесение всех 
Стандартов, Образцов и Контрол ей должно быть закончено за 3 мин.
3. Тестирование всех Стандартов, Образцов и  Контролей следует проводить в дупликатах.
ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА (Количественный метод)
1. Закрепите необходимое для проведения анализа количество покрытых антителами микролунок в рамке-держателе.
2. Поместите в соответствующие лунки, используя индивидуальные одноразовые наконечники, по 25 мкл растворов Стандартов ЛГ (О , 10, 20, 
40, 100, 200 мМЕ/мл), Контролей и Образцов.
3. Добавьте во все лунки по 100 мкл Ферментного Конъюгата.
4. Тщательно перемешайте содержимое лунок, встряхивая планшет, в течение 10 сек.
5. Инкубируйте 30 мин при комнатной температуре.
6. После первой инкубации переверните планшет и энергично вытряхните его содержимое.
7. Промойте лунки 5 раз в струе проточной водопроводной воды.
8. Затем остатки жидкости удалите, постукивая перевернутым планшетом по листу адсорбирующей бумаги.
9. Внесите в каждую лунку (через равные промежутки времени) по 100 мкл Субстратного Раствора.
10. Инкубируйте 10 мин при комнатной температуре.
11. Добавьте во все лунки (соблюдая такие же интервалы времени, как в п,9) по 50 мкл Стоп-раствора.
12. Не позднее, чем через 10 мин измерьте в лунках оптическую плотность (ОП) при 450±10 нм с помощью микропланшетного ридера,
ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА (Качественный метод)
Используют для определения пика сывороточного ЛГ в середине цикла.
Тестируют Образцы и  Референсные Стандарты (20 и 40 мМЕ/мл). Анализ проводят, как описано выше, за исключением того, что стадии 1 1  и 12 
отсутствуют.
ПОДСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ КОЛИЧЕСТВЕННОГО АНАЛИЗА
1. В каждом проведенном эксперименте подсчитайте средние значения ОП для Референсных Стандартов, Контролей и Образцов.
2. На листе миллиметровой бумаги постройте стандартный калибровочный фафик, вертикальная ось которого (Y, линейная), представляет 
собой значения ОП, а горизонтальная (X, линейная) - концентрацию ЛГ в мМЕ/мл. Отложите на фафике средние значения оптической плотности 
для Референсных Стандартов. Соедините полученные точки линией.
3. Отложите на фафике средние величины ОП для Образцов и, экстраполируя их на ось X, определите соответствующие концентрации ЛГ. 
При наличии соответствующего профаммного обеспечения вы можете провести обработку данных этим или другими методами, введя 
экспериментальные значения в компьютер.
4. Если анализируют разведенные Образцы, полученные величины умножают на фактор разведения.
ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ КАЧЕСТВЕННОГО АНАЛИЗА.
Для оценки уровней ЛГ в качественном варианте анализа интенсивность голубого окрашиваний в лунках с Образцами сравнивайте с 
окрашиванием лунок с Референсными Стандартами (О , 20 и 40 мМЕ/мл),
Уровень ЛГ ниже 20 мМЕ/мл, 
если лунка с Образцом светлее или такая же, как лунка со Стандартом 20 мМЕ/мл.
Уровень Л Г выше 20 мМЕ/мл, но ниже 40 мМЕ/мл 
если лунка с Образцом темнее лунки со Стандартом 20 мМЕ/мл, но светлее лунки со Стандартом 40 мМЕ/мл.
Уровень ЛГ выше 40 мМЕ/мл 
если лунка с Образцом темнее лунки со Стандартом 40 мМЕ/мл.
DRG Лютеинизирующий гормон EIA-1289
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG International, Inc-»
тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 23 ---
ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
Каждой лаборатории рекомендуется установить свои собственные уровни сравнения для разных групп пациентов. Приведенные ниже
DRG Лютеинизирующий гормон EIA-1289
Группа Возраст, лет № Средний уровень ЛГ 
мМЕ/мл
Разброс концентра­
ций ЛГ, мМЕ/мл
Мальчики <10 10 1,1 от 0 до 2,9
Мужчины 18-65 30 4,6 от 1,0 до 13,8
Девочки <10 8 0,8 от 0 до 1,5
Женщины 20-36 47 14,8 от 0,6 до 96,2
в фолликулярной и  лютеиновой фазах <20
Пик ЛГ от 40 до 200
Женщины в пост-менопаузе 46-60 23 36,3 от 8,4 до 102,0
СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ТЕСТА 
Чувствительность
Минимальная определяемая данным тестом концентрация ЛГ составляет 2 мМЕ/мл.
Точность
а) Точность анализа в пределах одного опьла
Этот показатель определяли, анализируя три различных котрольных сыворотки в одном опыте в восемнадцати повторах. В таблице показана
Образцы 1 2 3
Число повторов 18 18 18
Средняя концентрация Л Г (мМЕ/мл) 4,88 23,59 57.86
Стандартное отклонение 0,32 1.37 3,97
Коэффициент вариации (%) 0,66 5.80 6,87
б) Вариабельность результатов от опыта к опыгу
Воспроизводимость результатов анализа определяли, тестируя в нескольких повторяющихся опытах три различных контрольных сыворотки. В
Образцы 1 2 3
Число повторов 39 24 24
Средняя концентрация Л Г (мМЕ/мл) 5,11 23,88 57,70
Стандартное отклонение 0,48 1.71 3,30
Коэффициент вариации (%) 9,39 7,16 5,71
% выхода и линейность
а) % выхода
Ожидаемые концентрации 
ЛГ (мМЕд/мл)
Измеряемые концентрации 
ЛГ (мМЕд/мл)
% выхода
5,03 5,09 101,2
23,65 25,31 107,0
35.64 36,43 102,2
46,95 51,10 108,8
72,32 69,37 95,9
91,78 86,61 94,4
б) Линейность
Делали серию двойных разведений двух исследуемых Образцов Нулевым Стандартом и проводили с ними анализ. Средний выход составил
•4 П 4  С О /
Образец № Разведение Ожидаемые 
концентрации 
ЛГ (мМЕ/мл)
Измеряемые 
концентрации Л  Г 
(мМ ^/мл)
% выхода
0 105,47 105,47 100,0
1 1:2 52,74 54,72 103,8
1:4 26,37 28,95 109,7
1:8 13,19 13,88 105,2
1:16 6,60 6,98 105,8
0 78,08 78,08 100,0
1:2 39,04 39,17 100,3
2 1:4 19,52 18,70 95,8
1:8 9,76 9,34 95,7
1:16 4,88 4,97 101,8
1:32 2,44 2,34 95,9
Специфичность
Тестируемый гормон Концентрация гормона Концентрация ЛГ в 
сыворотке (мМЕд/мл), 
которой соответствует 
интенсивность 
образовавшейся окраски
ХГЧ
(Стандарт
ВОЗ)
200 мМЕд/мл 5,2
те г
(Стандарт 62 мкМЕд/мл 3,0
121248 Москва, Набережная Тараса Ш евченко, д. 3, Московское представительство «DRG International, Inc.» 3  
тел. (495) 243-5621,243-5228. 243-4028, факс (495) 243-9300,232-0211 e-mail: drgtechf®doi.ru http.v/www.dr^ech.ru


--- стр. 24 ---
DRG Лютеинизирующий гормон EIA-1289
ВОЗ)
ФСГ
{Стандарт 
ВОЗ)
200 мМЕд/мл 2,5
ЗАМЕЧАНИЕ; Тест для определения уровня ЛГ не рекомендуется использовать во время беременности и  сразу после родов, когда увеличен 
уровень ХГЧ.
Хук-эффе 1а
Вплоть до концентрации Л Г 4000 мМЕ/мл хук-эффект не наблюдается.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
В соответствии с доброкачественной практикой лабораторных работ, вместе с каждой новой калибровочной кривой следует проверять 
контрольные материалы. Количество таких проверок должно быть достаточным для того, чтобы вывести статистически достоверные средние 
значения, величину стандартного отклонения и убедиться в правильности выполнения анализа. Нельзя при этом использовать Контроли, 
содержащие азид натрия.
ОГРАНИЧЕНИЯ
1. Выполнение процедуры анализа в полном соответствии с прилагаемыми к набору инструкциями, а также со стандартом GLP, обеспечивают 
получение правильных и воспроизводимых результатов.
2. Процедура промывки является критической. Недостаточная отмывка поверхности микролунок от несвязавшихся реагентов является 
причиной снижения точности анализа и  появления ложных высоких значений оптической плотности.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
См. оригинал инструкции на английском языке.
КРАТКАЯ СХЕМА АНАЛИЗА DRG LH SERUM ELISA KIT
Описание Стандарт
или
Образец,
мкл
Фермент­
ный
конъюгат,
мкл
Субст­
ратный
раствор,
мкл
Стоп
раствор,
мкл
Резуль­
таты,
мМЕ/мл
Стандарт 0 25 100 Перемеши­ 100 Инкубируйте 50 Измерьте 0
Стандарт 1 25 100 вайте 10 сек. 100 10 мин при 50 ОП при 10
Стандарт 2 25 100 Инкубируйте 100 комнатной 50 450 км 20
Стандарт 3 25 100 30 мин при 100 температуре. 50 с помощью 40
Стандарт 4 25 100 комнатной 100 50 микроплан- 100
Стандарт 5 25 100 температуре. 100 50 шетного 200
Образец 1 25 100 5 раз 100 50 ридера
Образец 2 25 100 промойте 100 50
Образец 3 25 100 водой. 100 50
Образец 4 25 100 100 50
Образец 5 25 100 100 50
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495) 2 4 3 -5 6 2 1 ,243-5228,243-4028, факс (495) 243-9300,232-0211 e-mail; drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 26 ---
МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ, НО НЕ ВКЛЮЧЕННЫЕ В НАБОР
1 . Микроплашечный ридер (450±10 нм), например DRG E-LIZA МАТ 3000
2. Прецизионные микропипетки с одноразовыми наконечниками на 25, 50 and 100 мкл.
3. Дистиллированная вода
4. Абсорбирубщая бумага
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
При хранении при 2° до 8°С нераспечатанные реагенты сохраняют активность до истечения срока годности. Не 
используйте реагенты после истечения срока годности. Микропланшеты должны храниться при 2° to 8°С. После 
вскрытия фольгированного пакета необходимо каждый раз плотно его закрывать. Работоспособность открытого 
набора сохраняется приблизительно 2 месяца со дня открытия при хранении в выше описанных условиях.
ЗАБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ
1 . Забрать пробу венопункцией, дождаться свертывания, отделить сыворотку центрифугированием при 
комнатной температуре. Избегайте гемолизных проб.
2. Образцы могут храниться в закрытых пробирках в течение 5  дней при 2-8°С до начала исследования. Более 
длительное время образцы сохраняются замороженными при -20'^С до начала исследования. Замораживать 
образцы более 1  раза не рекомендуется. Размороженные образцы необходимо несколько раз перемешать до 
начала исследования.
3. В случае, если количество искомого в образце больше, чем в самом высшем стандарте, образец может быть 
разведен Стандартом О и перепроанализирован (см. Процедуру Анализа)
ВНИМАНИЕ! Этот набор предназначен только для работы с сывороткой, и без добавок.
ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ:
Все реагенты и необходимое число стрипов должны быть доведены до комнатной температуры.
Стандарты:
Восстановить лиофилизированное содержимое виалов стандартов, используя 1,0 мл дистиллированной воды. 
Примечание: восстановленные стандарты стабшьны в течение 2 месяце при 2-8°С. Для длительного  
хранения заморозить до °20 С .
ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ОБЩИЕ ЗАМЕЧАНИЯ:
1 . Все реагенты и образцы перед началом исследования должны иметь комнатную температуру. Все реагенты 
должны быть перемешаны без образования пены.
2. После начала исследования все шаги должны быть завершены без остановок
3. Дня каждого образца необходимо использовать новые одноразовые наконечники пипеток
4. Абсорбция - это функция инкубационного времени и температуры. До начала исследования рекомендуется 
приготовить все реагенты, снять крышки, установить в держателе необходимые лунки, и т.д. Этим Вы 
обеспечите равное время для каждого раскапывания без остановок.
5. Настоящий набор предназначен для максимальной абсорбции от 1.0 до 2.0 в течение 10 минут при комнатной 
температуре (22°С). Если эти величины максимальной абсорбции превышают рабочие предельг Вашего 
спектрофотометра или менее 1.000, необходимо соответственно уменьшить или увеличить инкубационное 
время ферментативного формирования цвета. Общее правило таково: ферментативная реакция линейно 
пропорциональна времени и температуре. Поэтому интерполяция возможна для постоянных физико­
химических условий.
ЗАМЕЧАНИЕ ПО ПРОЦЕДУРЕ
1 . Раскапывание вручную: не рекомендуется использовать больше 32 лунок в одном цикле. Раскапывание всех 
стандартов, образцов и контрол ей должно быть завершено в течение 3 минут.
Пролактин EIA-1291
121248 Москва, Набережная Т. Шевченко, д.З, Московское Представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028 факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: dr 2 tech@d 0l.ru htfp://www.drgtech.ru


--- стр. 27 ---
Пролактин EIA-1291
2. Автоматическое раскапывание: в каждом цикле может быть использована вся планшета на 96 лунок. 
Раскапывание всех стандартов, образцов и контролей должно быть завершено в течение 6 минут.
3. Все стандарты, образцы и контроли должны ставиться в дублях конкурентно так, чтобьЕ сохранить равные 
условия теста.
ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ (Количественный метод)
1 . Установите в рамку требуемое число лунок, покрытых антителами.
2. Распределите 25 мкл Стандарт ов  (0; 5; 20; 50; 100; 200 мМЕ/мл), Конт ролей  и Образцов  сыворотки новыми 
одноразовыми наконечниками в соответствующие лунки.
3. Распределите 100 мкл Ф ермент ного конъю гат а  в каждую лунку.
4. Тшательно перемешайте в течение 10 секунд. Необходимо полное смешивание реагентов.
5. Инкубировать 30 минут при комнатной температуре.
6. Резко вытряхнуть содержимое лунок.
Промыть 5  раз лунки дистиллированной водой. Резко вытряхнуть на абсорбирующую бумагу оставшиеся в 
лунках водяные капли.
7. Добавить 100 мкл Раст вора субст рат а  в каждую лунку.
8. Инкубировать 10 минут при комнатной температуре.
9. Остановить ферментативную реакцию добавлением 50 мкл Стоп-раствора  в каждую лунку.
10. Считать оптическую плотность при длине волны 450±10 на микропланшетном ридере в течение 10 минут с 
момента добавления Стоп-раствора.
ПОДСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
1. Подсчитайте средние величины абсорбции для каждого набора референс-стандартов, контролей и проб 
пациентов.
2. Постройте стандартную кривую построением на оси координат: средняя величина абсорбции, полученная от 
каждого референс-стандарта против его концентрации в нг/млс величиной абсорбции на вертикальной оси(У) 
и концентраци на горизонтальной оси(Х).
3. Используя среднюю величину абсорбции для каждого образца, определите соответствующую концентрацию 
пролактина в нг/мл от стандартной кривой. В зависимости от опыта и/или возможностей компьютера могут 
применяться другие методы обработки данных.
4. Автоматический метод подсчета: результаты в инструкции бьши получены с применением метода 4PL 
(Четырехпараметровая логистистика). Другие функцие могли бы дать слегка отличные данные.
5. Любые разбавленные образцы могут быть преобразованы с учетом соответствующего коэффициента 
разбавления.
Ожидаемые результаты
Каждой лаборатории необходимо установить свои нормальные уровни. Результаты, приведенные ниже,
отражают ограниченное число образцов здоровых взрослых.
______________________________________ Мужчины___________________Женщины _________
N 30 69
Средние (нг/мл) 6,44 14,27
S.D. 5,50 5,88
Диапазон (нг/мл)______________________0,94 -  20,94___________________2,39 -  25,15_________
Динамика анализа
Рабочий диапазон значений О  -  200 нг/мл
Чувствительность
Минимальная определяемая концентрация человеческого пролактина для данного теста составляет 0,35 нг/мл.
Точность
Образец сыворотки 1 1 2 3
Кол-во повторений 10 10 10
121248 Москва, Набережная Т. Шевченко, д.З, Московское Представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028 факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail; drgtech@dol.ru httD;//www.drgtech.ru


--- стр. 28 ---
Пролактин EIA-1291
Среднее содержание 
пролактина (нг/мл)
6,16 14,10 32,48
Стандартное 0,28 0,41 1,91
отклонение
Коэффициент 4,58 2,91 5,87
вариации %
Б/ между различными тестами
Образец сыворотки 1 2 3
Кол-во повторений 12 12 12
Среднее содержание 5,96 12,64 25,99
пролактина (нг/мл)
Стандартное 0,37 0,71 1,53
отклонение
Коэффициент 6,22 5,64 5,90
вариации %
Воспроизводимость и разведение
А. Воспроизводимость
Ожидаемые конценрации Наблюдаемые конценрации Воспроизводимость %
нг/мл нг/мл
6,42 5,99 93,3
7,25 6,76 93,2
13,90 14,64 105,3
27,14 28,74 105,9
52,40 56,74 107,3
68,57 68,20 99,5
Б. Линейность
№ пациента разведение Ожидаемые Наблюдаемые Воспроизводимость
конц. нг/мл конц. нг/мл %
1 Неразведенный 72,65 72,65 100,0
1:2 36,33 36,88 101,5
1:4 18,17 18,72 103,0
1:8 9,09 9,33 102,7
1:16 4,55 4,63 101,9
2 Неразведенный 61,86 61,86 100,0
1:2 30,93 31,01 100,3
1:4 15,47 16,02 103,6
1:8 7,74 8,06 104,1
1:16 3,87 4,12 106,5
Специфичность 
Тестируемый гормон
хгч
Концентрация Интенсивность цвета экв. 
Пролактину в сыворотке 
иг/мл
100 мМЕ/мл 
400 мМЕ/мл 
62.500 мМЕ/мл 
125.000 мМЕ/мл
121248 Москва, Набережная Т. Шевченко, д.З, Московское Представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028 факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 33 ---
Разведение образцов.
Если при первом анализе обнаруживается, что образец имеет более высокую концентрацию, чем самый высокий 
стандарт, такие образцы необходимо развести в 10 или 100 раз раствором для разведения образцов и протестировать 
повторно согласно описанию процедуры анализа.
а) разведение 1:10: 10 мкл образца + 90мкл раствора для разведения образцов (тщательно смешать)
б) разведение 1:100: 10 мкл раствора 1:10 (а) + 90мкл раствора для разведения образцов (тщательно смешать)
М оча: развест и 1:20 перед использованием
ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА 
Общие замечания:
-  Все реагенты и образцы перед началом исследования должны иметь комнатную температуру. Все реагенты должны 
быть перемешаны без образования пены.
-  После начала исследования все этапы должны быть завершеньЕ без остановок
-  Для каждого образца, реагента и стандарта необходимо использовать новые одноразовые наконечники пипеток. Для 
раскапывания субстрата и стоп-раствора избегайте металлических наконечников.
-  Абсорбция “  это функция, линейно пропорциональная инкубационному времени и температуре. Поэтому 
интерполяция возможна при постоянных физико-химических условиях. Если при проведении исследования 
абсорбция нулевого стандарта ниже 1,0 или выше верхнего предела обнаружения Вашего спектрофотометра, вы 
можете увеличить или уменьшить инкубационное время окончательного ферментного формирования цвета от 45 да 
15 минут соответственно. Т.к. калибраторы ставятся в каждом исследовании, эти изменения абсорбции не повлияют 
на результат.
-  Как главное правило, фермантная реакция линейно пропорциональна времени и температуре.
-  До начала исследования рекомендуется приготовить все реагенты, снять крышки, установить в держателе 
необходимые лунки, и т.д. Этим Вы обеспечите равное время для каждого раскапьшания без остановок.
-  Субстрат должен быть бесцветным или бледно голубым или зеленым. Если раствор стал темно-синим, реаген! 
использовать нельзя.
-  Во время инкубации с субстратом избегайте попадания прямых солнечных лучей на плашку
-  Все стандарты, образцы и контроли необходимо тестировать в дублях, обеспечив одинаковые условия реакции.
ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ:
1 . Установите необходимое количество лунок в рамку.
2. Раскапать по 100 мкл стандартов, контролей и образцов используя пипетку с новыми одноразовыми наконечниками 
в соответствующие лунки.
3. Раскапать по 50 мкл антисыворотки в каждую лунку.
4. Раскапать по 100 мкл конъюгата в каждую лунку.
5. Хорошо смешивать в течение 10 секунд. На данном этапе важно достичь полного смешивания.
6. Инкубировать 60 минут при комнатной температуре
7. Резко вытряхнуть содержимое лунок. Промыть трижды разведенным промывочным раствором (400 мкл на лунку) |
Вытряхнуть остатки влаги на абсорбирующую бумагу. .
Внимание: чувствительность и правильность этого анализа в значительной степени зависит от качественно^ 
процедуры промывки!
8.  Добавить по 100 мкл энзимного комплекса в каждую лунку.
9. Инкубировать 30 минут при комнатной температуре.
10. Резко вытряхнуть содержимое лунок. Промыть трижды разведенным промывочным раствором (400 мкл на лунку)! 
Вытряхнуть остатки влаги на абсорбирующую бумагу.
11. Добавить 100 мкл раствора субстрата в каждую лунку
12. Инкубировать 20 минут при комнатной температуре.
13. Остановить ферментативную реакцию, добавив по 100 мкл стоп-раствора в каждую лунку.
14. считать оптические плотности при 450± 10 нм на микропланшетном ридере в течение (не позднее) 10 минут после 
добавления стоп-раствора.
С-Пептид (EIA-1293)
121248 Москва, Набережная Т. Шевченко, д.З, Московское Представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495)243-5621, 243-5228, 243-4028 факс (495) 243-9300,232-0211 e-mail: drgtech@,dol.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 34 ---
ПОДСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
1 . Подсчитать средние значения абсорбции для каждого набора стандартов, контролей и образцов пациентов.
2. Построить стандартную кривую, отложив значения абсорбции каждого стандарта (на оси Y) напротив их. 
концентраций (отложенных на оси X).
3. Используя среднее значение абсорбции для каждого образца определить соответствующую концентрацию п о ^  
стандартной кривой.
4. Автоматический метод: компьютерные программы, использующие кубический сплайн, 4 -параметровую логистику^ 
или Logit-Log обычно дают точный результат.
5. Концентрацию образцов можно считать прямо со стандартной кривой. Образцы с концентрацией более высокой, чем 
у самого высокого стандарта необходимо развести 1  к 10 раствором для разведения образцов. При подсчете? 
концентрации коэффициент разведения необходимо учитывать.
С-Пептид (EIA-1293)
Стандарт Оптические единицы
Стандарт 0 (0 нг/мл) 1,82
Стандарт 1  (0,2 нг/мл) 1,64
Стандарт 2 (0,7 нг/мл) 1,46
Стандарт 3 (2,0 нг/мл) 1,02
Стандарт 4 (6,0 нг/мл) 0,47
Стандарт 5(16 нг/мл) 0,21
о ж и д а е м ы е з н а ч е н и я
Настоятельно рекомендуется каждой лаборатории разработать собственные нормальные значения и отклонения.
Во время исследования, проведенного на внешне зоровых людях, используя DRG® C-Peptide ELISA, были получены^
Количество Средний ± 2 СО _;
Сыворотка (12-часовое голодание) 60 0,5-3,2 нг/мл
Моча 1 -  200 мкг/день
ХАРАКТЕРИСТИКИ МЕТОДА 
Диапазон исследования
0-16  нг/мл
Специфичность антител (перекресная реактивность)
Перекресная реактивность с Проинсулином клинически не важна.
Аналитическакя чувствительность
Была посчитана со среднего значения минус два стандартных отклонения 20 репликантов Стандарта О и составила
0,064 нг/мл.
Точность
(Интра-анализ)
Образец Количество Среднее значение (нг/мл) Коэффициент вариации (%)
1 20 0,48 6,54
2 20 2,30 6,70
3 20 3,86 5,13
Межпостановочная вариация (Интер-анализ)
Образец Количество Среднее значение (нг/мл) Коэффициент вариации (%)
1 12 0,42 9,33
2 12 2,05 9,92
3 12 4,23 8,38
121248 Москва, Набережная Т. Шевченко, д.З, Московское Представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028  факс (495) 243-9300,232-0211 e-mail: drgtech@dol.ru http.V/www.drgtech.ru


--- стр. 35 ---
правильность 
Контроль качества
Рекомендуется использовать контроли согласно нормативной документации. Использование контролей рекомендуется 
проводить для удостоверения в правильности проведения анализа. Используйте контроли для нормальных и  
патологических значений. Результаты по контрольным сьЕВО роткам для данного лота можно найти в прилагаемом с  
каждым набором листе контроля качества. Также рекомендуется участвовать в национальных программах по контролк 
качества ВСВОК. Используйте соответствующие статистические методы расчета контрольных значений и зависимости 
Если результаты анализа не соответствуют заявленным значениям, тест признается неверным. В этом случае проверьте 
оборудование, оцените правильность выполненных при анализе действий и условия среды, в которой проводился 
анализ, обратите внимание на процедуру мойки и аспирации. Если никаких нарушений вы не выявили, свяжитесь с  
представительством напрямую DRG® .
Вое про изводимость
Образцы сыворотки были усилены добавлением С-пенптида с извесной концентрацией в пропорции 1:1.  Процент 
воспроизводимости был посчитан умножением отношения измеренных значений к ожидаемым на 100.
С-Пептид (EIA-1293)
Образец
сыворотки
Эндогенный 
С-пептид, нг/мл
Добавленный 
С-пептид, нг/мл
Измеренная конц,, 
нг/мл
Ожидаемая 
конц., нг/мл
Воспроизводимость,
%
1 5,36 0,00 5,36
8,00 10,31 10,68 96,6
3,00 5,57 5,68 98,0
1,00 3,63 3,68 98,7
0,35 3,08 3,03 101,8
2 9,70 0,00 9,70
8,00 12,49 12,85 97,2
3,00 8,23 7,85 104,8
1,00 5,15 5,85 87,9
0,35 4,54 5,20 87,2
3 12,12 0,00 12,12
8,00 15,52 14,06 110,4
3,00 9,72 9,06 107,3
1,00 7,30 7,06 103,4
0,35 5,65 6,41 88,1
Образец
Мочи
Эндогенный 
С-пептид, нг/мл
Добавленный 
С-пептид, нг/мл
Измеренная конц., 
нг/мл
Ожидаемая 
конц., нг/мл
Воспроизводимость,
%
1 2Л
8,00 10,9 10,1 107,9
3,00 5,57 5,1 109,2
1,00 2,6 2,62 99,2
2 1,01
8,00 9,2 9,01 102,1
3,00 4,03 4,01 100,5
1,00 2,2 2,01 109,5
3 12,12
8,00 10,1 10,5 96,2
3,00 5,3 5,5 96,4
1,00 3,8 3,5 108,6
121248 Москва, Набережная Т. Шевченко, д.З, Московское Представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028 факс (495) 243-9300, 232-0211 e-maih drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 40 ---
Общие замечания:
Все пробы и реагенты перед проведением анализа должны быть доведены до комнатной температуры. Смешивание 
реагентов надо осуществлять, избегая вспенивания.
После начала проведения теста следует осуществлять все этапы последовательно без прерывания.
-  Для каждого реагента используйте новые чистые пластиковые наконечники микропипеток для исключения перекрестной 
контаминации. Для раскапывания Субстрата и Останавливающего раствора не следует использовать пипетки с 
металлическими частями.
-  Вносите стандарты и пробы в нижнюю часть лунки с помощью микропипетки. Что касается внесения 
Иммуноферментного Конъюгата и Стоп-раствора, рекомендуется держать пипетку вертикально и направлять падающую 
каплю строго в центр лунки для осуществления полного перемешивания указанных компонентов.
-  Перед постановкой теста рекомендуется подготовить все реагенты, снять крышки, закрепить в держателе необходимое 
количество полосок с лунками. Это обеспечит равные затраты времени на все необходимые этапы ИФА и предотвратит 
задержки пипетирования.
В целом ферментативная реакция обычно линейно пропорциональна времени проведения и температуре. Это делает 
возможной интерполяцию для физико-химических условий реакции. В частности, если величина абсорбции нулевого 
стандарта ниже 1 . 0 или же превышает верхний уровень возможного измерения для используемого ридера, можно 
изменить время инкубации с Субстратом до 30 мин, или же до 10 мин, соответственно этим наблюдениям.
Поскольку калибрующие стандарты проставляются в каждом тесте, флюктуации абсолютных величин абсорбции не 
отражаются на конечном результате ИФА.
Раствор Субстрата перед использованием должен быть бесцветным, или иметь чуть различимый голубовато-зеленоватый 
оттенок. Наличие выраженного голубого окрашивания указывает на непригодность субстрата. Его следует заменить!
Во время инкубации с Субстратом следует защитить микротитровальные панели от света.
ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
1. Закрепите желаемое количество полосок с подготовленными лунками в держателе.
2. Внесите по 25 мкл Стандартов тестостерона, контролей и проб в соответствующие лунки.
3. Внесите 200 мкл Иммуноферментного конъюгата в каждую лунку.
4. В течение 10 сек. смешивайте реагенты в панели. На этом этапе чрезвычайно важно добиться полного смешивания 
реагентов.
5. Не закрывая панель, инкубируйте при комнатной температуре 60 мин.
6 . Освободите лунки от содержимого (например, выплеснув и постучав по фильтровальной бумаге). Трижды промойте 
лунки раствором для промывки (по 400 мкл в лунку). Тщательно “выстучите” остатки жидкости на фильтровальной 
бумаге.
7. Внесите 200 мкл Энзим-субстрата в каждую лунку с равными временными интервалами.
8 . Инкубация 15 мин при комнатной температуре.
9. Остановите реакцию добавлением в каждую лунку 100 мкл Стоп-раствора с такими же временными интервалами, как на 
этапе 7.
10. Измерьте оптическую плотность в лунках при длине волны 450 + 10 нм в течение 10 мин после добавления Стоп- 
раствора
ВЫЧИСЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
Используйте любой ридер для микропанелей, способный измерять оптическую плотность при 450 + 10 
нм. Содержание Тестостерона в пробе может быть рассчитано следующим образом:
1. Посчитайте среднее значение абсорбции для стандартов, контролей и образцов.
2. Используя любую миллиметровую или логарифмическую сетчатую бумагу, постройте стандартную кривую, нанося 
средние значения абсорбции (Y) Стандартов против их концентрации (X) в нг/мл.
3. Используйте среднюю величину абсорбции каждой пробы для интерполяции концентрации Тестостерона путем простого 
наложения данных на указанную кривую. Эту величину при необходимости следует умножить на величину разведения 
пробы, если таковое осуществлялось.
4. Для автоматического осуществления перечисленных задач хорошо подходят прибор DRG ELIZA МАТ с его 
компьтерным обеспечением ProxyMat.
DRC* Тестостерон (EIA-1 559)
Представленные данные приведены лишь для демонстрации и не могут подставляться вместо реальных 
значений, определяемых в каждом конкретном тесте:
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG International, Inc.»
________тел. (495) 243-5621, 243-5228, факс (495) 243-9300 e-mail: drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 41 ---
Стандарт 0 ( 0  нг/мл) 
Стандарт 1  ( 0.2 нг/мл) 
Стандарт 2 ( 0.5 нг/мл) 
Стандарт 3 ( 1  нг/мл) 
Стандарт 4 ( 2  нг/мл) 
Стандарт 5 ( 6  нг/мл) 
Стандарт 6(16 нг/мл)
DRG* Тестостерон (EIA-1 559)
2.1
1.71
1.44
1.18
0.89
0.46
0.24
ОП - величина оптической плотности
ОЖИДАЕМЫЕ ЗНА ЧЕНИЯ
Настоятельно рекомендуем каждой лаборатории разработать свои собственные нормы.
Население 5%  Процентиль 95% Процентиль
Мужчины 2 , 0 нг/мл 6,9 нг/мл
Женщины 0,26 нг/мл 1 , 2 2 нг/мл
КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Диапазон анализа: 0-16  нг/мл 
Чувствительность:
Нижний определяемый уровень Тестостерона в данном тесте определялся как разность между средним 
уровнем оптической плотности нулевого стандарта  и величиной удвоенного стандартного отклонения. 
Эта концентрация составила 0,083 нг/мл
Специфичность
Специфичность ИФА для определения Тестостерона определялась по методу Абрахама путем
Аналит Перекрестная реактивность
ТЕСТОСТЕРОН 1 0 0 %
5аДИГИДР0ТЕСТ0СТЕР0Н 0 .8 %
АНДРОСТЕНДИОН 0.9%
113-ГИДРОКСИТЕСТОТЕРОН 3.3%
17а-МЕТИЛТЕСТОСТЕРОН 0 . 1 %
19-НОРТЕСТОСТЕРОН 3.3%
ПРОГЕСТЕРОН <0 . 1 %
ЭСТРОН <0 . 1 %
ЭПИТЕСТОСТЕРОН <0 . 1 %
ЭСТРИОЛ < 0 . 1 %
КОРТИЗОЛ <0 . 1 %
ДАНАЗОЛ <0 . 1 %
Правильность
в  пределах одного теста:
Сыворотка Кол-во тестов Среднее, нг/мл КВ, %
1 2 0 0.73 4.16
2 2 0 4.88 3.28
3 2 0 11.26 3.34
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG International, Inc.»
________тел. (495) 243-5621,243-5228, факс (495) 243-9300 e-maih drgtech@dol.ru http ://www.drgtech.ru


--- стр. 42 ---
DRG* Тестостерон (EIA-1 559)
Между тестами:
Сыворотка Кол-во тестов Среднее, нг/мл КВ, %
1 2 0 0.82 9.94
2 2 0 5.20 6.71
3 2 0 11.38 3.34
КВ <  коэффициент вариации
Точность
Воспроизводимость
Сыворотка Внесенный тестостерон, 
нг/мл
Полученная 
концентрация, нг/мл
Ожидаемое 
значение, нг/мл
Воспроизводимость,
%
0 , 0 1 , 1 0
16,0 9,31 8,55 109,0
1 6 , 0 3,93 3,55 110,7
2 , 0 1,67 1,55 107,9
1 , 0 0,91 1,05 86,9
0 , 0 6,07
16,0 11,81 11,03 107,1
2 6 , 0 6,65 6,03 1 1 0 , 1
2 , 0 3,73 4,03 92,5
1 , 0 3,26 3,53 92,2
0 , 0 11,62
16,0 14,76 13,63 108,3
3 6 , 0 9,33 8,63 108,1
2 , 0 7,29 6,63 1 1 0 , 0
1 , 0 6,75 6,13 1 1 0 , 1
Линейность
Сыворотка Ф актор
разведения
Полученная концентрация, 
нг/мл
Ожидаемая концентрация, 
нг/мл
Воспроизводимость,
%
1
Неразведенная
1 : 2
1 , 1 0
0,51 0,55 93,8
1:4 0,24 0,27 8 6 , 1
1 : 8 0,15 0,14 106,6
Неразведенная
1 : 2
6,07
3,36 3,03 1 1 0 , 6
2 1:4 1 , 6 6 1,52 109,2
1 : 8 0 , 6 8 0,76 89,0
1:16 0,37 0,38 97,0
Неразведенная
1 : 2
11,26
5,76
11,26
5,63 102,4
3 1:4 2,76 2,81 97,9
1 : 8 1,55 1,41 1 1 0 , 0
1:16 0,77 0,70 109,5
Контроль качества
Рекомендуется использовать контроли согласно нормативной документации. Использование контролен 
рекомендуется проводить для удостоверения в правильности проведения анализа. Используйте 
контроли для нормальных и патологических значений. Результаты по контрольным сывороткам для 
данного лота можно найти в прилагаемом с каждым набором листе контроля качества. Также 
рекомендуется участвовать в национальных программах по контролю качества ВСВОК. Используйте
121248 Москва^ Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG International, Inc.»
________тел. (495) 243-5621, 243-5228, факс (495) 243-9300 e-mail: drgtech@doLru http://www.drgtech.ru


--- стр. 47 ---
Пересмотрено 27.02.2006
Если В С Я  плашка сразу не используется, необходимое количество ферментного конъюгата получается при смешивании 100 мкл 
1IX концентрата ферментного конъюгата с I мл раствора для разведения конъюгата на 1  стрип (см. таблицу ниже)
DRG Проинсулин EIA-1560
Кол-во стрипов И Х  конц. ферментный 
конъюгат, мкл
Раствор для  разведения 
конъюгата, мл
1 1 0 0 1
2 2 0 0 2
3 300 3
4 400 4
5 500 5
6 600 6
7 700 7
8 800 8
9 900 9
1 0 1 0 0 0 1 0
1 1 1 1 0 0 1 1
1 2 1 2 0 0 1 2
ПОДГОТОВКА ПРОБ
Для анализа пригодна сыворотка или гепарин-плазма. Значения у цитрат- и ЭДТА-плазмы выше от двух до трех раз, чем значения 
у сыворотки. Желтушные, гемолизированные пробы не подойдут для анализа. Пробы, содержащие азид натрия, также не подойдут 
для анализа. Если определение проводится непосредственно в течение 24 часов, пробы могут храниться при 2-8°С. При более 
длительных сроках пробы должны быть охлаждены до -  20°С и более. Избегать повторных охлаждений и оттаиваний. Пробы, чья
концентрация выше, чем у самого высокого стандарты, должны разводиться растворителем проб.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Общие наставления
• Все реагенты и пробы должны перед началом тестирования быть перенесены в комнатную температуру и хорошо 
перемешаны. При перемешивании не должно быть пены.
• После начала анализа все шаги должны проводиться без промедления.
• Для каждого реагента, пробы или стандарта должен быть свой пластиковый наконечник, чтобы избежать перекрестных 
реакций. Для пипетирования субстратного раствора и стоп-раствора не применять пипетки из металла.
• Стандарты и пробы пипетировать на дно лунки. При пипетировании буфера и стоп-раствора пипетку держать под наклоном и 
соответствующий раствор пипетировать в средину лунки, что обеспечивает хорошее перемешивание буфера с 
пробами\стандартами и стоп-раствора с субстратным раствором.
• Перед началом тестирования реагенты приготовить, бутылочки открыть, стрипы вставить в рамку, чтобы проделать все шаги 
при пипетировании без промедления.
• Так как ферментная реакция зависит от времени и температуры, можно сократить время инкубации субстратной реакции на 15 
мин, если экстинкции для высших концентраций стандарта лежат выше области измерения для ридера.
• Субстратный раствор должен быть бесцветным или слегка голубым или зеленым. Если раствор синий, то он не пригоден для 
анализа.
Проведение тестирования
1. Вставить нужное число стрипов в держатель.
2. Пипетировать 100 мкл стандартов, контролей и проб.
Московское представительство «DRG International, Inc.» 121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3,
тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300, 232-0211 е-таП: drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 48 ---
Пересмотрено 27.02.2006
3. Добавить 100 мкл буфера в каждую лунку.
10 сек хорошо перемешивать, это дает однородную смесь.
Запечатать плашку в пакет и инкубировать в течении ночи (16-24 часа) в камере при 4°С.
Осторожно вытряхнуть содержимое лунок. Полосы промыть 3 раза промывочным раствором, 350 мкл на лунку. После 
последнего ополаскивания убрать капли похлопыванием по фильтровальной бумаге.
Добавить 100 мкл разбавленного ферментного конъюгата.
10 сек хорошо перемешивать, это дает однородную смесь 
Инкубировать 60 мин при комнатной температуре (не запечатывать).
Вытряхнуть осторожно инкубационный раствор. Полосы промыть 5 раз разбавленным промывочным раствором, 350 мкл на 
лунку. После последнего ополаскивания похлопать по фильтровальной бумаге.
11. Добавить 100 мкл субстратного раствора в каждую лунку.
12. Инкубировать 30 мин при комнатной температуре.
13. Добавить в каждую полосу 50 мкл стоп-раствора.
14. Считать ОП при 450 ±10 нм на ридере в течение 10 мин после добавления стоп-раствора.
DRG Проинсулин EIA-1560
4.
5.
6 .
7.
8 .
9.
10.
РАСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
1. Посчитать среднюю величину поглощения для стандартов, контролей и проб.
2. Построить стандартную кривую, на которой функция (у) значение ОП наносится напротив соответствующей концентрации в 
пг\мл (х) как на линейной или на логарифмической бумаге.
3. Концентрации проинсулина проб пациентов можно рассчитать только при интерполяции стандартной кривой. Если позволяет 
ридер, то можно обсчет производить через компьютер.
4. Для построения стандартной кривой с помощью ПК использовали метод 4-х параметровой рефессии. Если пробы разбавлены, 
то данные необходимо корректировать в соответствии с разведением.
5. Если у пробы при первом тестировании концентрация выше стандартной области, надо развести растворителем проб и еще раз 
протестировать.
Пример стандартной кривой
Следующие данные служат исключительно как демонстрация.
Стандарт
Стандарт О  (О  пмоль\л) 
Стандарт 1  (2.6 пмоль\л) 
Стандарт 2 (6.6 пмоль\л) 
Стандарт 3 (16.5 пмоль\л) 
Стандарт 4 (33 пмоль\л) 
Стандарт 5 (66 пмоль\л)
Оптическая плотность 
0.05 
0.13 
0.24 
0.52 
0.96 
1.82
Ожидаемые значения
Каждая лаборатория должна иметь свои собственные значения нормы и отклонений! 
Ниже представлена таблица с нормами для здоровых мужчин и женщин
Количество образцов Возраст ± разброс Среднее значение ± разброс
После 12-часового голодания (Плазма) 32 - 4,5 ± 3,8
После 12-часового голодания (Сыворотка) 15 32± 1 1 2,5 ± 1,8
Также был проведен тест на переносимость глюкозы на 77 здоровьпс детях (возраст 14 ± 3) после 12 часового голодания. Была 
получена сыворотка после 12 часов голодания. Участникам было дано по 75 г глюкозы и после 3 0 -  120 мин снова была получена 
сыворотка.
Среднее (± отклонение) пмоль/л
После 12-часового голодания (Сыворотка) 1,3 (0 ,5 -3 ,5 )
30 мин после введения глюкозы 6,4 (3 ,0 -1 3 ,6 )
120 мин после введения глюкозы 1 4 ,8 (6 ,5 -3 3 .3 )
Московское представительство «DRG International, Inc.» 121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3,
тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drgtech@doKru http://www.drgtech.ru


--- стр. 49 ---
Пересмотрено 27.02.2006
DRG Проинсулин EIA-1560
Параметры теста
1. Динамика исследования; 0 - 6 6  пмоль/л.
2. Специфичность
Вещества, способные давать перекрестные реакции;
Пептиды Интенсивность окраски соответствует проинсулину в 
сыворотке (пмол\л)
Проинсулин 32-33, 500пмол\л 7,5
Проинсулин 32-33, 5 пмол\л 0
Проинсулин Дес 31-32, 500 пмол\л 4,5
Проинсулин Дес 31-32, 5 пмол\л 0
Проинсулин 65-66, 500 пмол\л 275
Проинсулин 65-66, 5 пмол\л 2,7
Проинсулин Дес 64-65, 500 пмол\л 266
Проинсулин Дес 64-65, 5 пмол\л 3,2
Проинсулин 56-57, 500 пмол\л 375
Проинсулин 56-57, 5 пмол\л 3,5
Проинсулин Дес 57-65, 500пмол\л 271
Проинсулин Дес 57-65, 5 пмол\л 3,4
Человеческий инсулин, 17000 пмол\л 0
Свиной проинсулин, 2.5 мкг\мл 0
Бычий проинсулин, 2 мкг\мл 0
Крысиный проинсулин инсулина, 160 пмол\л 0
Человеческий С-пептид, 33000 пмол\л 0
проинсулин соматомедина-С, 10 мкг\м 0
Соматомедин-С, 1  мкг\мл 0
1. Аналитическая чувствительность
Аналитическая чувствительность анализа установлена путем расчета среднего плюс два стандартных отклонения 20 репликантов 
Стандарта О и составила < 0,5 пмоль/л.
2. Качество
Интра-Анализ
Образец Кол-во тестов Среднее, пмоль/л к в ,%
1 10 6,97 4,3
2 10 27,2 2,9
3 10 60,3 7,4
Иитер-Анализ
Анализ тестов в течение нескольких постановочных сессий
Образец Кол-во тестов Среднее, пмоль/л КВ, %
1 10 7,38 6,8
2 10 29,6 5,5
3 10 64,7 5,5
Московское представительство «DRG International, Inc.» 121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3,
тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drgtech@doKru http://www.drgtech.ru


--- стр. 50 ---
Пересмотрено 27.02.2006
DRG® Проинсулин EIA-1560
1. Точность
-  Контроль качества
Производитель рекомендует дублировать каждый образец, стандарт и контроль.
Каждая лаборатория должна разработать свои собственные нормы уровня проинсулина, используя статистические методы.
Если Вас не устраивает качество анализа и при этом Вы убедились, что делали все согласно инструкции и Ваша техника исправна, 
пожалуйста, свяжитесь с производителем.
-  Воспроизводимость
Образцы были усилены добавлением растворов с известной концентрацией проинсулина. Процентная Воспроизводимость была 
подсчитана умножением отношения измерений к ожидаемым значениям со 100.
Образец Добавленная Измеренная Ожидаемая Воспроизводимость
концентрация концентрация концентрация
(пмоль/л) (пмоль/л) (пмоль/л)
0 6,8 6,8
10 16,9 16,8 101
1 30 36,7 36,8 100
50 52,6 56,8 93
0 27,2 27,2
10 34,7 37,2 93
2 30 55,0 57,2 96
50 73,1 77,2 95
-  Линейность
Сыворотки пациента бьши серийно разведены раствором для разведения. Процентная Воспроизводимость была подсчитана 
умножением отношения измерений к ожидаемым значениям со 100.
Образец Разведение Измеренная
концентрация
(пмоль/л)
Ожидаемая
концентрация
(пмоль/л)
Воспроизводимость
Нет 72,65 72,65
1:2 36,88 36,33 101,5
6 1:4 18,72 18,16 103,0
1:8 9,33 9,08 102,7
1:16 4,63 4,54 101,9
Нет 61,86 61,86
1:2 31,01 30,93 100,3
7 1:4 16,02 15,47 103,6
1:8 8,02 7,73 104,1
1:16 4,12 3,38 106,5
ОГРАНИЧЕНИЯ ПРОЦЕДУРЫ
1. Мешающие вещества
Любое неправильное действие в отношении образцов или модификации данного теста может повлиять на результаты. Высокая 
концентрация Гемоглобина, Билирубина, и Триглицеридов может повлиять на результаты анализа.
Азид натрия влияет на результат.
2. Влияние лекарств
На сегодняшний день не обнаружено вешеств (лекарств), влияющих на измерение про инсулина в образце.
3. Эффект «крюка»
Не наблюдалось эффекта «крюка» до 6000 пмоль/л в данном тесте.
Московское представительство «DRG International, Inc.» 121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3,
тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 51 ---
i
ТЕСТ-СИСТЕМА ИФА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОГЕСТЕРОНА
(на разборных микротитровальных панелях)
EIA-1561 96 лунок
Твердофазная тест-система ИФА для количественного определения прогестерона в сыворотке или плазме человека 
ВВЕДЕНИЕ
Прогестерон (pregn^-ene-3,20-dione) является 021-стероидным гормоном, содержащим кетогруппу в положении С-3 и имеющим двойную связь 
между С-4 и  С-5. Это половой женский гормон, который, действуя в ансамбле с эстрогенами, регулирует состояние вспомогательных органов в 
период менструального цикла и особенно важен в подготовке эндометрия к имплантации бластоцита и сохранении беременности.
У небеременных женщин прогестерон обычно секретируется желтым телом, тогда как во время беременности он преимущественно 
секретируется плацентой.
В меньшей степени секреция гормона происходит в коре надпочечников у лиц того и  другого пола, а также в тестикулах у мужчин. Прогестерон 
циркулирует в крови в связанном состоянии с кортикостероид-связывающим глобулином (CBG), глобулином, связывающим половые гормоны 
(SHBG), или альбумином.
В свободном виде циркулирует не более 2-10% прогестерона.
Концентрации прогестерона широко вариируют в зависимости от фазы менструального цикла: они ниже, чем 1  нг/мл (3.2 нмоль/л) в фазе 
фолликула и в пределах 10 -  20 нг/мл (32-64 нмоль/л) в фазе желтого тела.
Максимальные концентрации гормона достигаются через 4 - 7  дней после овуляции и сохраняются повышенными еще 4 - 6  дней, после чего, за
24 часа до начала менструации, достигают преовуляторного уровня.
Поскольку циклические подъемы и снижения уровня прогестерона отражают а 1аиность как фолликулов, так и  желтого тела, определение уровня 
гормона используется в клинической практике для подтверждения овуляции, равно как и для характеристики нормального функционирования 
желтого тела у небеременных женщин.
Если овуляция не происходит, желтое тело не формируется и, соответственно, не происходит циклического нарастания уровня прогестерона в 
плазме. Ненормальная секреция прогестерона отмечена при многих формах нарушения менструального цикла.
Концентрация прогестерона может варьировать не только у отдельных лиц, но также и у отдельного обследуемого пациента как в течение 
нескольких дней, так и часов. Поэтому для более точной интерпретации результатов определения гормона при гинекологических заболеваниях 
или патологии беременности рекомендуются серийные взятия проб для определения прог;естерона в динамике.
Во время беременности, когда прогестерон начинает секретироваться плацентой, его уровни в плазме существенно возрастают, достигая ко 
времени родов таких показателей, как 200 нг/мл.
ПРИНЦИП
Тест-система ИФА для определения прогестерона фирмы DRG основана на принципе конкуренции и  твердофазной иммуносорбции на 
микропанелях. Прогестерон в пробе и фиксированное его количество в конъюгате прогестерона с пероксидазой хрена конкурируют за активные 
центры поликлональной антипрогестероновой сыворотки, которая сорбирована на микропанелях. Через два часа инкубации проводится 
отмывание для остановки реакции конкуренции. После добавления раствора энзим-субстрата концентрация прогестерона определяется как 
величина, обратно пропорциональная интенсивности возникающего окрашивания по оптической плотности.
РЕАГЕНТЫ
1. Разборные микротитровальные панели Лунки панели (96) покрыты анти-прогестероновой сывороткой.
2. Иммуноферментный конъюгат, 25 мл. Прогестерон, конъюгированный с пероксидазой хрена.
3. Набор стандартов прогестерона, каждый по 1  мл: 0.3; 1.25; 2.5; 5; 15; 40 нг/мл
4. Нулевой стандарт или раствор для разведения пробы, 1  мл
5. Раствор субстрата - HS-TMB. 25 мл.
6.  Стоп-раствор - 0.5 М H 2SO4, 14 мл
7. Промывочный буфер, концентрат 40 х 30 мл.
НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЫ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В НАБОР
1. Ридер для микротитровальных панелей (450+10 нм), например,производства DRG Instruments.
2. Прецизионные микропипетки со сменными наконечниками на 25,100 и 200 мкл
3. Стандартный холодильник.
4. Адсорбирующая (фильтровальная) бумага.
5. Деионизованная вода.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
При хранении в неоткрытом состоянии при 2 - 8°С все реагенты сохраняются в течение обозначенного срока годности. После окончания сроков 
годности реагенты не использовать!
Обязательно храните Энзим-субстрат, Растворы стандартов, Иммуноферментный конъюгат, Отмывающий раствор и Нулевой стандарт при 2 - 
8°С.
Микротитровальные панели должны также храниться при 2 - 8°С. После нарушения целостности покрывающей фольги следует обеспечить 
тщательную укупорку. Иммунореактивность однажды раскрьггых микропанелей сохраняется при хранении в герметичном пластиковом пакете с 
осушителем до 6 недель.
ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ТЕСТ-СИСТЕМЫ.
1. ВНИМАНИЕ; Пока отсутствуют методы абсолютного контроля для исключения полного отсутствия в компоненетах набора вируса гепатита 
В, вирусов группы HIV/HTLV и других инфекционных агентов. Поэтому все препараты крови человека, включая пробы обследуемых лиц, должны 
рассматриваться как потенциально инфекционные. Работа с такими материалами определяется национальными руководствами по 
биологической безопасности, например в США таким руководством служит “Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories”, USA Center for 
Disease Control/ National Institute of Health, 1984.
2. Избегайте контакта со Стоп-раствором, который может вызвать раздражение или ожоги кожи.
3. После открывания и забора реагентов немедленно закрывайте крышки. Ни в коем случае не меняйте крышку одного реагента на другую!
4. Растворы, содержащие консервирующие компоненты, например азид натрия, не должны использоваться при проведении ИФА.
5. Не пипетируйте реагенты ртом!
6.  Предлагаемый набор предназначен только для диагностики in vitro.
7. Не смешивайте реагентов из различных серий и образцов наборов. Даже в пределах одной серии наборов не рекомендуется обменивать 
разборные полоски микропанелей ме>кду упаковками. Дело в том, что процесс транспортировки не всегда поддается контролю, в связи с чем 
сорбционная способность панелей в разных коробках может несколько отличаться.
ЗАБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ ДЛЯ АНАЛИЗА_____________________________________________________________________________________________
DRG Прогестерон EIA-1561
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail; drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 52 ---
1. Для исследования надо использовать сыворотки, или же плазму после обработки ЭДТА.
1 . Не требуется какой-либо дополнительной подготовки проб.
2. Пробы для анализа можно хранить при 2 -  8°С до 24 часов, при необходимости более длительного хранения пробы необходимо 
замораживать и хранить при -Ю ^’С или более низкой температуре. Не используйте пробы с выраженным гемолизом или с повышенным 
содержанием липидов.
3. Пробы, содержание прогестерона в которых предположительно превышает 40 нг/мл, следует разводить с использованием Нулевого 
стандарта.
ВНИМАНИЕ! В данном тесте нельзя использовать пробы, содержащие азид натрия.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА 
ВВОДНЫЕ ЗАМЕЧАНИЯ:
1. Все пробы и реагенты перед проведением анализа должны быть доведены до комнатной температуры. Смешивание реагентов надо 
осуществлять, избегая вспенивания.
2. После начала проведения теста следует осуществлять все этапы последовательно без прерывания.
3. Для каждого реагента используйте новые чистые пластиковые наконечники микропипеток для исключения перекрестной контаминации. Для 
раскапывания Энзим-субстрата и Останавливающего раствора не следует использовать пипетки с металлическими частями.
4. Вносите стандарты и пробы в нижнюю часть лунки с помощью микропипетки. Что касается внесения Иммуноферментного Конъюгата и 
Останавливающего раствора, рекомендуется держать пипетку вертикально и  направлять падающую каплю строго в центр лунки для 
осуществления полного перемешивания указанных компонентов.
5. Перед постановкой теста рекомендуется подготовить все реагенты, снять крышки, закрепить в держателе необходимое количество полосок 
с лунками.
6. Это обеспечит равные затраты времени на все необходимые этапы ИФА и предотвратит задержки пипетирования.
7. В целом ферментативная реакция обычно линейно пропорциональна времени проведения и температуре. Это делает возможной 
интерполяцию для физико-химических условий реакции. В частности, если величина абсорбции нулевого стандарта ниже 1.0 или же превышает 
верхний уровень возможного измерения для используемого ридера, можно изменить время инкубации с Энзим-субстратом до 30 мин, или же до 
10 мин, соответственно этим наблюдениям.
8. Поскольку калибрующие стандарты проставляются в каждом тесте, флюктуации абсолютных величин абсорбции не отражаются на 
конечном результате ИФА.
9. Раствор Энзим-субстрата перед использованием должен быть бесцветным, или иметь чуть различимый голубовато-зеленоватый оттенок. 
Наличие выраженного голубого окрашивания указывает на непригодность субстрата. Его следует заменить!
10. Во время инкубации с Энзим-субстратом следует защитить микротитровальные панели от света.
Отмывочный буфер: Добавьте деионизованную воду к концентрату (х 40) отмывающего раствора до конечного объема 1200 мл. Разведенный 
отмывающий раствор стабилен в течение 8 недель при 2-8°С.
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
1. Закрепите желаемое количество полосок с подготовленными лунками в держателе.
2. Внесите по 25 мкл Стандартов прогестерона в соответствующие лунки.
3. Внесите по 25 мкл пробы в соответствующие лунки. Время от начала раскапывания первого Стандарта до момента внесения последней 
пробы должно быть в пределах 10 мин без искажения результата.
4. Инкубация 5 мин при комнатной температуре.
5. Внесите 200 мкл Иммуноферментного конъюгата в каждую лунку.
6. В течение 10 сек смешивайте реагенты в панели. На этом этапе чрезвычайно важно добиться полного смешивания реагентов.
7. Не закрывая панель, инкубируйте при комнатной температуре 60 мин.
8. Освободите лунки от содержимого (например, выплеснув и постучав по фильтровальной бумаге).
9. Трижды промойте лунки Отмывающим раствором (по 400 мкл в лунку). Тщательно "выстучите” остатки жидкости на фильтровальной бумаге.
10. Внесите 200 мкл Энзим-субстрата в каждую лунку с равными временными интервалами.
11. Инкубация 15 мин при комнатной температуре.
12. Остановите реакцию добавлением в каждую лунку 100 мкл Стоп-раствора с такими же временными интервалами, как на этапе 10 и 
измерьте оптическую плотность в лунках при длине волны 450±10 нм.
Стабильность конечного окрашивания
Рекомендуется проводить измерение ОП не позднее 10 мин после завершения этапа 12.
ВЫЧИСЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
Используйте любой ридер для микропанелей, способный измерять оптическую плотность при 450±10 нм. Содержание Прогестерона в пробе 
может быть рассчитано следующим образом:
1. Используя любую миллиметровую или логарифмическую сетматую бумагу, постройте стандартную кривую, нанося средние значения 
абсорбции (Y) Стандартов против их концентрации (X) в нг/мл. Для построения стандартной кривой мы рекомендуем четырех-параметровую 
логическую функцию.
2. Используйте среднюю величину абсорбции каждой пробы для интерполяции концентрации прогестерона путем простого наложения данных 
на указанную кривую. Эту величину при необходимости следует умножить на величину разведения пробы, если таковое осуществлялось.
Для автоматического осуществления перечисленных задач хорошо подходит прибор DRG ELIZA МАТ с его компьтерным обеспечением DRG 
Regression Program.
ЗНАЧЕНИЯ НОРМАЛЬНЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ ПРОГЕСТЕРОНА
Здоровые женщины
Фаза фолликула 0.2 -1.4 нг/мл
Фаза желтого тела 4-25  нг/мл
Менопауза 0.1 - 1  нг/мл
Здоровые мужчины 0.1 - 1  нг/мл
Фактор пересчета: 1  нг/мл = 3.18 нмол/л
ТИПОВЫЕ ЗНАЧЕНИЯ ДЛЯ ПОСТРОЕНИЯ СТАНДАРТНОЙ КРИВОЙ
DRG Прогестерон EIA-1561
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drgtech^doLru http://www.drgtech.ru


--- стр. 53 ---
DRG Прогестерон EIA-1561
Представленные данные приведены лишь для демонстрации и не могут подставляться вместо реальных значений, определяемых в каждом
конкретном тесте;
СТАНДАРТ ОП*
Стандарт 0 ( 0 нг/мл) 1.52
Стандарт 1  { 0.3 нг/мл) 1.17
Стандарт 2 (1.25 нг/мл) 0.88
Стандарт 3 { 2.5 нг/мл) 0.69
Стандарт 4 ( 5 нг/мл) 0.55
Стандарт 5(15 нг/мл) 0.35
Стандарт 6 (40 нг/мл) 0.13
* ОП - величина оптической плотности
КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 
Чувствительность
Нижний определяемый уровень прогестерона в данном тесте определялся как разность между средним уровнем оптической плотности нулевого
стандарта и величиной утроенного стандартного отклонения. Эта концентрация составила 0,05 нг/мл
Специфичность
СТЕРОИД ПЕРЕКРЕСТНОЕ
РЕАГИРОВАНИЕ 
ПРОГЕСТЕРОН 100%
17& ОН ПРОГЕСТЕРОН 0.3 %
ЭСТРИОЛ <0.1%
ЭСТРАДИОЛ < 0.1%
ТЕСТОСТЕРОН <0.1%
11-ДЕЗОКСИКОР 1.1%
ТИКОСТЕРОН
DHEA-S <0.02%
КОРТИЗОЛ <0.02%
КОРТИКОСТЕРОН 0.2 %
ПРЕГНЕНОЛОН 0.35%
КОРТИЗОН <0.1%
11-ДЕЗОКСИ КОРТИЗОЛ 0,1%
Вариабельность результатов
Между тестами:
Сыворот­ № <Х>± SD CV* № <х>± SD CV
ка № ng/ml % ng/ml %
1 10 1.21 J: 0.10 8.3 10 1.31+0.13 9.9
2 10 2.62+ 0.12 4.6 10 2.71±0.13 4.8
3 10 12,3± 0.64 5.2 10 11.9 +0.77 6.5
CV - коэффициент вариации 
Точность
Сыворотка Эндогенный прогестерон 
нг/мл
Внесенный прогестерон нг/мл Воспроизведение %
1 3.1 5 109
2.5 106
1.25 98
2 1.9 5 101
2.5 92
1.25 106
0.5 91
Тест на разведение
Сыворотка Фактор разведения Определяемая концентрация 
нг/мл
% выявления
1 Неразведенная 6.95
1:2 3.52 101
1:4 1.81 104
1:8 0.89 102
2 Неразведенная 16.2
1:2 7.93 98
1:4 3.95 98
1:8 2.12 105
1:16 1.21 119
1:32 0.52 103
3 Неразведенная 10.1
1:2 4,98 99
1:4 2.49 99
1:8 1.31 104
1:16 0,64 101
1:32 0,34 108
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drgtech@doI.ru http://www.dl^tech.ru


--- стр. 54 ---
Правильная лабораторная практика требует, чтобы каждый контроль осуществлялся отдельно для каждой калибровочной кривой. Значительное 
число постановок контрольных проб требуется для выведения статистически значимых средних величин, демонстрирующих надлежащее 
проведение теста.
Для правильной калибровки мы рекомендуем использовать сыворотки BIO RAD Lyphochek Immunoassay Control Sera, поставляемые также 
фирмой DRG.
ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
1. Полноценные и воспроизводимые результаты получаются при строгом следовании прилагаемой инструкции и общим принципам 
правильной лабораторной практики(С1Р)
2. Критичной процедурой является отмывание. При недостаточном отмывании микротитровальных панелей ухудшается точность результатов 
и нередко возникают избыточные показатели абсорбции.
3. Столь же важное значение имеет смещивание конъюгата с соответствующими ииммунореагентами на этапах 6 и 12 проведения ИФА. 
Недостаточное смешивание также ведет к падению точности теста.
DRG Прогестерон EIA-1561
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG International, Inc.»
тел, (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drgtgch^dol.ru htfp://www.drgtech.ru


--- стр. 55 ---
только для ДИАГНОСТИКИ IN VITRO 
Набор для количественного и качественного 
методом в человеческой сыворотке.
определения DHEA-S иммуноферментным
Образцы должны быть закрытыми и могут храниться в течение 5 дней при t=2-8C перед 
началом исследования. Образцы, хранящиеся более длительное время, рекомендуется 
замораживать только однократно (t=-20) перед началом исследования.
DRG ДГЭА-Сульфат EIA-1562
РЕАГЕНТЫ. ВКЛЮЧЕННЫЕ В НАБОР
1 . Микротитровальные лунки, покрытые анти-DHEA-S моноклональным антителом.
1 . 12x8 делимых стрипов, 96 лунок.
2. Стандарт (Стандарт 0-6), 7 флаконов по 1  мл, готовые к использованию
3. Концентрации: 0,1; 0,5; 1; 2,5; 5; 10 мкг/мл
4. Пересчет: 1  мкг/мл = 2,6 мкмоль/л
2. Ферментный конъюгат. 1  флакон, 25 мл, готовый к использованию.
5. Анти-DHEA-S антисыворотка, конъюгированная с пероксидазой хрена
3. Раствор субстрата - ТМВ, 1  флакон, 14 мл, готовый к использованию.
4. Стоп-раствор -0,5М H2SO4 ,  1  флакон, 14 мл, готовый к использованию.
5. Промывочный раствор, 1  флакон, 40х, 30 мл
МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ, НО НЕ ВКЛЮЧЕННЫЕ В НАБОР
1 . Микроплашечный ридер(450±10 нм), например DRG E-LIZA МАТ 3000
2. Прецезионные микропипетки с одноразовыми наконечниками на 20, 100 и 200 мкл.
3. Абсорбирубщая бумага.
4. Дистиллированная вода.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
При хранении при 2° до 8"С нераспечатанные реагенты сохраняют активность до истечения 
срока годности. Не используйте реагенты после истечения срока годности 
Ферментный конъюгат, Субстрат-раствор, Стандарты  и  Нулевой стандарт  должны 
храниться при 2“ - 8°С.
Микропланшеты должны храниться при  2“ - З^С. После вскрытия фольгированного пакета 
необходимо каждый раз плотно его закрывать. Иммуноактивность лунок микропланшеты 
сохраняется приблизительно 6 недель при хранении в распечатанном, но плотно закрытом 
пакете.
ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ
Перед использованием рекомендуется довести все реагенты и  необходимое количество 
Стрипов до комнатной температуры.
ПРОМЫВОЧНЫЙ РАСТВОР
Разбавить 30 мл концентрированного промывочного раствора с 1170 мл деионизированной 
воды до получения объема 1200 мл. Разведенный промывочный раствор стабилен в течение 2 
недель при комнатной температуре.
ЗАБОР ОБРАЗЦОВ 
Сыворотка:
Забрать пробу венепункцией, дождаться свертывания, отделить сыворотку 
центрифугированием при комнатной температуре.
Плазма:
Всю кровь необходимо собрать в центрифужные флаконы, содержащие антикоагулянт и 
немедленно центрифугировать сразу же после забора.
ХРАНЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
РАЗВЕДЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
Если в первоначальном исследовании образец сыворотки содержеит самый высокий стандарт, 
в этом случае образцы необходимо развести 1:10 или 1:100 с нулевым стандартом и провести 
повторный анализ, как описано в процедуре исследования.
Для подсчета концентраций необходимо принимать во внимания данный фактор разведения. 
Например;
а) Разведение 1:10: 10 мкл сыворотки + 90 мкл нулевого стандарта (тщательно смешать)
б) Разведение 1:100; 10 мкл раствора а) 1:10 + 90 мкл нулевого стандарта (тщательно
смешать)
ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ 
ОБЩИЕ ЗАМЕЧАНИЯ:
1. Все реагенты и  образцы перед началом исследования должны иметь комнатную 
температуру. Все реагенты должны быть перемешаны без образования пены.
2. Исследование рекомендуется проводить без прерываний.
3. Для каждого стандарта и контрольного образца необходимо использовать новые 
одноразовые наконечники пипеток для того, чтобы избежать загрязнения.
4. Абсорбция - это функция инкубационного времени и температуры. До начала исследования 
рекомендуется приготовить все реагенты, снять крышки, установить в держателе необходимые 
лунки, и т.д. Этим Вы обеспечите равное время для каждого раскапывания без остановок.
5. Общее правило таково; ферментативная реакция линейно пропорциональна времени и 
температуре. Поэтому интерполяция возможна для постоянных физико-химических условий.
ЗАМЕЧАНИЯ ПО ПРОЦЕДУРЕ:
1. Раскапывание вручную: рекомендуется не использовать больше 32 лунок в одном цикле. 
Раскапывание всех стандартов, образцов и контролей должно быть завершено а течение 3 
минут.
2. Автоматическое раскапывание: в каждом цикле может быть использована вся планшета на 
96 лунок. Раскапывание всех стандартов, образцов и  контролей должно быть завершено в 
течение 3 минут.
3. Все стандарты, образцы и  контроли должны ставиться в дублях конкурентно так, чтобы 
сохранить равные условия теста.
ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ
• Установите требуемое число лунок в держатель,
• Распределите 25 мкл каждого стандарата, контролей и образцов с помощью новых 
одноразовых наконечников в соответствующие лунки.
• Распределите 200 мкл ферментного конъюгата в каждую лунку.
• Тщательно перемешайте в течение 10 секунд. Необходимо полное смешивание реагентов.
• Инкубировать 60 минут при комнатной температуре, не накрывая планшету.
• Резко вытряхнуть содержимое лунок. 3 раза промыть лунки промывочным раствором 
(400 мкл на лунку). Резко вытряхнуть на абсорбирующую бумагу оставшиеся в лунках водяные 
капли.
Внимание: Чувствительность и точность проведения исследования зависит от правильного 
выполнения процедуры промывки!
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG International, Inc.» 
тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300,232-0211 e-mail: drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 56 ---
• Добавить 100 мкл раствора субстрата в каждую лунку.
»  Инкубировать 15 минут при комнатной температуре,
• Остановить ферментативную реакцию добавлением 50 мкл стоп раствора в каждую лунку.
• Считать оптическую плотность при длине волны 450±10 нм на микропланшетном ридере в 
течение 10 минут после добавления стоп раствора.
ПОДСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
1 . Подсчитайте средние величины абсорбции для каждого набора референс-стандартов, 
контролей и проб пациентов.
2 . Постройте стандартную кривую построением на оси координат: средняя величина 
абсорбции, полученная от каждого референс-стандарта против его концентрации в нг/мл с 
величиной абсорбции на вертикальной оси (Y) и кон центра ци на горизонтальной оси (X).
3 . Используя среднюю величину абсорбции для каждого образца, определите 
соответствующую концентрацию от стандартной кривой. В зависимости от опыта и/или 
возможностей компьютера могул- применяться другие методы обработки данных.
4. Автоматический метод: оптимальный вариант достигается с помощью компьютерных 
программ, использующих кубический сплайн, 4 PL (4 параметровая логистика) или Logit-Log.
5. Концентрацию образцов можно читать непосредственно со стандартной кривой. Образцы с 
более высокими концентрациями необходимо разводить. Для подсчета концентраций, 
необходимо принимать во внимание этот фаю-ор разведения.
Пример типичной стандартной кривой -  дан в качестве образца для демонстрации
Женщины: до 50 лет 0,40-2,17 мкг/мл
после 50 среднее значение 0,63 мкг/мл
DRG ДГЭА-Сульфат EIA-1562
Standard ОП(450 нм)
Standard 0 (0 мкг/мл) 1.69
Standard 1  (0,1 мкг/мл) 1.35
Standard 2 (0,5 мкг/мл) 0.93
Standard 3 (1,0 мкг/мл) 0.67
Standard 4 (2,5 мкг/мл) 0.46
Standard 5 (5,0 мкг/мл) 0.33
Standard 5 (10,0 мкг/мл) 0.23
ХАРАКТЕРИСТИКИ ИССЛЕДОВАНИЯ 
Динамический диапазон анализа 
Диапазон анализа-О -1 0  мкг/мл 
Специфичность исследования
Следующие вещества были протестированы для перекрестной реакции исследования:
Steroid
DHEA-S
Androstenedione
Androsterone
Androsterone-Sulfate
Progesterone
Testosterone
Estrone
Estriol
17-.-Estradiol 
Estradiol Sulfate 
Cortisol
% Cross Reaction
100.0 
20.9 
8.5 
<0.1 
4.7 
0.3 
0.9 
< 0.1 
< 0.1 
< 0.1 
< 0.1
Аналитическая чувствительность
Аналитическая чувствительность была рассчитана из среднего значения + 2 стандартных 
отклонения 20 повторных анализов нулевого стандарта и составляет 0,044 мкг/мл.
ТОЧНОСТЬ
Образец № Значение (pg/ml) CV (%)
1 20 0.2 4.6
2 20 1.3 5.1
3 20 4.2 4.7
ОЖИДАЕМЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
Для каждой лаборатории рекомендуется устанавливать свои собственные нормальные и  
отклоненные значения.
С помощью DRG DHEA-S ELISA были протестированы здоровые люди. Наблюдались 
следующие значения:
Мужчины: до 50 лет 0,59-2,69 мкг/мл
после 50 среднее значение 1,01 мкг/мл
Интер тестовые вариации
Образец № Значение (мд/т1)
1 0.2 6,5
2 1,3 10,6
3 4,4 5.4
121248 Москва, Набережная Тараса Ш евченко, д. Э, Московское представительство «DRG International, Inc.» 
тел. (495) 243-5621,243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300,232-0211  e-mail: drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 57 ---
DRG ДГЭА-Сульфат ELISA EIA-1562
СХЕМА ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА
№ лунки
Описание Стандартный
образец
мкл
Ферментный
конъюгат
мкл
Субстрат-
раствор
мкл
Стоп-
раствор
мкл
Рвзульт
аты
м кг/мл I
А1. В1
С1, D 1 
Е1, F 1 
G1.H1 
А2, 82 
С2, D2 
Е2. F2 
G2, Н2 
АЗ, 83 
СЗ, D3 
ЕЗ. F3
Стандарт О  
Стандарт 1  
Стандарт 2 
Стандарт 3 
Стандарт 4 
Стандарт 5 
Стандарт 6 
Образец 1  
Образец 2 
Образец 3 
Образец 4
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
200
200
200
200
200
200
200
200
200
200
200
Перемешивать 10
сек.
Инкубировать при 
комнаьной 
температуре 60 
мин
промойте лунки 3 
раза разведенным 
промывочным 
раствором 400 
□1/лунка
100
1 0 0
100
100
100
1 0 0
100
100
100
1 0 0
100
Инкубировать 15 
минут
при комнатной 
температуре
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
Читать 0D при 
450 п т  на 
ридере для 
микротитровал 
ьных панелей
О
0,1
0,5
1,0
2.5
5.0
10.0


--- стр. 62 ---
DRG Эстрадиол ElA-2693
Прямой твердофазный иммуноферментный анализ для количественного определения эстрадиола в человеческой сыворотке или плазме. 
РЕАГЕНТЫ
1 . Микротитровальные лунки, 12 делимых стрипов по 8 лунок = 96 лунок. Лунки покрыты кроличьими поликлональными антителами к 
эстрадиолу.
2. Ферментный конъюгат, 25 мл. Эстрадиол, конъюгированный с пероксидазой хрена.
3. Набор референс стандартов по 1  мл каждый, 0; 25; 100; 250; 500; 1000; 2000 пг/мл.
Переводной коэффициент: 1 пг/мл = 3.67 пмоль/л,
4. Субстрат-раствор, -HS- ТМВ, 14 мл.
5. Стоп-раствор, 0.5 М H2SO4,  14 мл.
6. Промывочный буфер, 40Х, 30 мл.
НЕОБХОДИМЫЕ, НО НЕ ВКЛЮЧЕННЫЕ В НАБОР РЕАГЕНТЫ
1 .  Микропланшетный ридер(450±10 нм)(например, DRG E-LizaMat 3000).
2. Прецезионные микропипетки с одноразовыми наконечниками на 25,100 и 200 мкл.
3. Лабораторный холодильник
4. Абсорбирубщая бумага
5. Деионизированная вода
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
При хранении при 2-8"С невскрытые реагенты сохраняют реактивность до истечения срока годности. Не использовать реагенты после 
истечения срока годности
Ферментный конъюгат, Субстрат раствор и раствор для разведения образца должны храниться при 2-8С.
Микроплашка должна храниться при 2-80. После вскрытия фольгированного пакета, необходимо каждый раз плотно его закрывать. 
Иммунореактивность покрытых лунок сохраняется в течении приблизительно 6 недель при хранении в уже вскрытом, но затем плотно закрытом 
пакете с влагопоглатителем.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ ДЛЯ ПОЛЬЗОВАТЕЛЕЙ
1. ВНИМАНИЕ: Не существует методов тестирований, на 100% гарантирующих отсутствие компонентов вируса Гепатита Б, ВИЧ (H1V/HTLV- 
III/LAV) или других инфекций. Поэтому все продукты, содержащие компоненты человеческой крови, должны рассматриваться как потенциально 
инфицированные. При работе с ними необходимо соблюать все меры предосторожности, установленные в лабораторной праетике.
2. Избегайте контакта кожи со Стоп-раствором. Это может вызвать раздражения и ожоги.
3. Немедленно после использования закройте реагенты крышками. Не путайте крышки от реагентов.
4. Расторы, содержашие добавки или консерванты, такие как азид натрия, не должны использоваться в ферментной реакции.
5. Не брать реагенты в рот.
6.  Только для диагностики ин-витро.
7. Не используйте в исследовании компоненты из наборов разных Лотов.
ЗАБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ
Использовать сыворотку или ЭДТА плазму.
Нет необходимости в предварительной обработке образцов.
Сыворотка или плазма должны храниться при 2-8‘^С  до 24 часов или должны быть заморожены при -20°С или ниже для хранения в течении 
более длительного времени.
Не использовать сильно гемолизированные, желтушные и  липидемичные пробы.
ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 
ОБЩИЕ ЗАМЕЧАНИЯ
1. Все реагенты и образцы перед началом исследования должны иметь комнатную температуру. Все реагенты должны быть перемешаны без 
образования пены.
2. После начала исследования все шаги должны быть завершены без остановок.
3. Для каждого образца необходимо использовать новые одноразовые наконечники пипеток.
4. Абсорбция - это функция инкубационного времени и температуры. До начала исследования рекомендуется приготовить все реагенты, снять 
крышки, установить в держатель необходимые лунки, и т.д. Этим Вы обеспечите равное время для каждого раскапывания без остановок.
5. Уменьшить или увеличить инкубационное время ферментативного формирования цвета. Общее правило таково: ферментативная реакция 
линейно пропорциональна времени и температуре. Поэтому интерполяция возможна для постоянных физико-химических условий.
ЗАМЕЧАНИЯ ПО ПРОЦЕДУРЕ
1. Раскапывание вручную; рекомендуется не использовать больше 32 лунок в одном цикле. Раскапывание всех стандартов, образцов и  
контролей должно быть завершено в течении 3 минут.
2. Автоматическое раскапывание; в каждом цикле может быть использована вся планшета на 96 лунок. Раскапывание всех стандартов, 
образцов и контролей должно быть завершено в течении 3 минут.
3. Все стандарты, образцы и контроли должны ставиться в дублях конкурентно так, чтобы сохранить равные условия теста.
4. При раскапывании Субстрат-раствора и  Стоп-раствора избегайте пипеток с металлическими частями.
5. Общим правилом является то, что ферментная реакция линейно-пропорциональна времени и температуре. Это делает возможным 
интерполяцию для фиксированных физико-химических условий. Если в произведенном исследовании абсорбция нулевого стандарта ниже, чем
1,0 или выше верхнего предела для Вашего спектрофотометра, необходимо увеличить или уменьшить инкубационное время окончательного 
ферментативного цветообрацования до 30 или 10 минут соответственно.
6. Т.к. в каждом цикле ставятся калибраторы, вариации абсорбции не влияют на результат.
6. Субстрат-раствор должен быть бесцветным или слегка голубоватым или зеленоватым. Если раствор имеет темно-синий цвет, реагент 
должен быть утилизирован.
7. Во время инкубации с субстрат-раствором избегайте попадания прямых солнечных лучей на микропланшету.
ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ
Промывочный раствор: Добавить деионизированную воду к 40-кратно концентрированному промывочному раствору (содержимое: 30 мл) до 
окончательного объема 1200 мл. Разведенный промывочный раствор стабилен 2 недели при комнатной температуре.
ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ(Количественный метод)
1. Установите в рамку требуемое число лунок.
96 лунок
121248 М осква, Н абереж ная Тараса Ш евченюо, д. 3, Московское  представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 63 ---
2. Внесите по 25 мкл эстрад иол-стандартов, контролей и образцов сыворотки новыми одноразовыми наконечниками в соответствующие 
лунки.
3. Внесите по 200 мкл ферментного конъюгата в каждую лунку.
4. Тщательно перемешайте в течение 10 секунд. Необходимо полное смешивание реагентов,
5. Инкубировать 120 минут при комнатной температуре, НЕ НАКРЫВАЯ ПЛАНШЕТУ.
6. Резко вытряхнуть содержимое лунок. 3 раза промыть лунки разведенным промывочным раствором (400 мкл на лунку). Резко вытряхнуть на 
абсорбирующую бумагу оставшиеся в лунках водяные капли. Чувствительность и точность метода в высокой степени зависят от 
правильности процедуры промывки!
7. Добавить 100 мкл раствора субстрата в каждую лунку,
8. Инкубировать 15 минут при комнатной температуре,
9. Остановить ферментативную реакцию добавлением 50 мкл Стоп-раствора в каждую лунку
10. Считать оптическую плотность при длине волны 450±10 нм на микропланшетном ридере не позднее, чем через 10 минут после остановки 
реакции,
ПОДСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
1. Подсчитать средние значения абсорбции для каждого набора стандартов, контролей и образцов пациентов.
2. Построить стандартную кривую, отложив средние значения абсорбции каждого стандарта на оси Y напротив их концентрации на оси X.
3. Используя среднее значение абсорбции каждого образца, определить соответствующую концентрацию по стандартной кривой.
4. Автоматический метод: компьютерные программы, использующие кубический сплайн, 4 параметровую логистику, как правило, могут дать 
хорошую аппроксимацию.
5. Концентрации образцов можно считывать прямо со стандартной кривой. Образцы с концентрациями более высокими, чем концентрация 
самого высокого стандарта, необходимо развести и повторить исследование. При расчете концентрации необходимо учитывать фактор 
разведения.
DRG Эстрадиол EIA-2693
Ниже приведен типичный пример стандартной кривой для Estradiol ELISA
Стандарт ОП (450 нм)
Standard 0 (0 пг/мл) 2.40
Standard 1  (25 пг/мл) 1.92
Standard 2 (100 пг/мл) 1.25
Standard 3 (250 пг/мл) 0.72
Standard 4 (500 пг/мл) 0.48
Standard 5 (1000 пг/мл) 0.30
Standard 6 (2000 пг/мл) 0.21
ОЖИДАЕМЫЕ НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ
Рекомендуется, чтобы каждая лаборатория установила свой диапазон нормальных и ненормальных значений.
При исследовании образцов здоровых пациентов с использованием тест-системы ДРГ для определения эстрадиола ELISA методом были
Пациенты 5-95%
Мужчины 10-36 пг/мл
Женщины (пременопауза) 
Женщины (постменопауза)
13-191 пг/мл 
11 -95 пг/мл
ХАРАКТЕРИСТИКИ МЕТОДА 
Динамический диапазон
Диапазон измерений метода О  -  2000 пг/мл.
Специфичность антител (Кросс-реактивность)
Следующие вещества были исследованы на кросс-реактивность:
Соединение % кросс-реакции Соединение % кросс - реакции
Estradiol-17В 100 Dehydroepiandrosterone 0
Estriol 0 1 1  -Deoxycortisol 0
Androstenedione 0 21-Deoxycortisol 0
Androsterone 0 Dihydrotestosterone 0
Corticsterone 0 Dihydroepiandrosterone 0
Cortisone 0 20-Di hydroprogesterone 0
Epiandrosterone 0 11-Hydroxyprogesterone 0
16-Epiestriol 0 17a-Hydroxy progesterone 0
Estradiol-3-sulfate 0 17a-Pregnenolone 0
Estradiol-3-glucoronide 0 17a-Progesterone 0
Estradiol-17a 0 Pregnanediol 0
Estriol 0.05 Pregnanetriol 0
Estriol-16-glucoronide 0 Pregnenolone 0
Estrone 0.2 Progesterone 0
Estrone-3-sulfate 0 Testosterone 0
Чувствительность метода
Чувствительность рассчитывалась по среднему значению за вычетом 2 стандартных отклонений 20 репликатов 
9,714 пг/мл.
Точность метода
Вариации при внутреннем контроле
стандарта О  и равна
Образец Кол-во 
ре пл.
Среднее знач. 
в (пг/мл) C V  (% )
121248 М о с к в а , Н а б е р е ж н а я  Т а р а с а  Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG Internationab Inc.»  
тел. (495) 243-5621,243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drgtech(S)doI.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 64 ---
1 20 91.09 6.81
2 20 198.05 2.71
3 20 265.62 4.46
Вариации при внешнем контроле
DRG Эстрадиол Е1А>2693
Образец Кол-во 
ре пл.
Среднее знач. 
в (пг/мл) CV (%)
1 12 90.00 7.25
2 12 197.21 6.72
3 12 299.74 9.39
правильность 
Контроль качества
Рекомендуется использовать контрольные образцы для обеспечения каждодневных действительных результатов. Использовать контрол и  для 
нормальных и патологических уровней.
Контрол и и соответствующие результаты лаборатории контроля качества указаны в сертификате контроля качества, вложенном в набор. 
Значения и диапазоны указанные на листе контроля качества всегда относятся к текущему лоту набора и должны использоваться для прямого 
сравнения результатов.
Так же рекомендуется использовать национальные и международные программы оценки качества для того чтобы удостовериться в 
правильности результата.
Соотеетствующие статистические методы можно использовать для анализа контрольных значений и тенденций. Если результат анализа не 
сходится с установленными приемлемыми диапазонами контрольных материалов, результат пациента считается недействительным. В этом 
случае необходимо проверить следующее; приборы для пипетирования ; фотометр, даты срока годности реагентов, условия хранения и 
инкубации, методы промывки. В случае иной причины ошибки обратиться к ближайшему дистрибьютору продукции DRG.
Восстановление
Приведено исследование образцов с добавлением растворов Эстрад иола с известными концентрациями в соотношении 1:1.
Ожидаемые значения рассчитаны добавлением !4 значений, определенных на неразведенных образцах и V z  значений известных растворов. 
Процент восстановления рассчитан умножением соотношения результатов измерений и ожидаемых значений на 100.
________
образец Добавленная концентрация 
1:1 (v/v) (пг/мл)
2000
1000
500
250
2000
1000
500
250
2000
1000
500
250
Измеренная 
концентрация 
(пг/мл)
_______
63.51
1009,69
537.45
268.78
135.39
161.26
1171.98
622.81
361.57
188.77
285.32
1072.26
579.67
359.47
241.75
Ижидаемая концентрация 
(пг/мл)
1031,76
531.76
281.76
156.76
1080.63
580.63
330.63
205.63
1142.66
642.66
392.66
267.66
Восстановление (%)
97.9
101,1
95,4
86.4
108.5
107.3
109.4
91.8
93.8
90.2
91,5
90.3
Линейность
Образец Разведение Средн. Конц. 
(пг/мл) Восстановление (%)
None 63.51
1:2 31.10 97.9
1 1:4 16,84 106.1
1:8 8.90 112.1
1:16 3.74 94.2
None 161,21
1:2 85.38 105,9
2 1:4 42.22 104.8
1:8 17.80 88.3
1:16 11.01 109.3
None 285.32
1:2 140.01 98.1
3 1:4 67,59 94.8
1:8 35.52 99.6
1:16 16.80 94.2
Ограничения процедуры
Любое ненадлежащее обращение с образцами или модификация данного метода могут повлиять на результат. 
Гемоглобин (до 4 мг/мл), билирубин (до 0.5 мг/мл) и триглицериды (до 30 мг/мл) не влияют на результат. 
Влияние лекарств.
До сегодняшнего дня не наблюдалось влияние каких-либо лекарств на измерение эстрадиола в образце.
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 65 ---
DRGS
■II
DRG Insulin EIA-2935
DRG INSULIN ELISA KIT
coated microtiterstrips
Только для диагностического использования in vitro
Иммуноферментный анализ для количественного определения Инсулина в сыворотке, плазме или моче 
человека.
Catalog Number: EIA-2935
Параметры метода:
Объем образца: 25мкл 
Объем смеси для реакции: 50мкл
Инкубационное время и температура: 2x30  мин при комнатной температуре 
Подготовка образцов:
Обычно разведения образцов не требуется. Однако образцы, содержащие более 100микроШ/т1, должны 
быть разведены 1/10 v/v нулевым стандартом.
В набор входит:
Каждый набор рассчитан на 41 образец при постановке в дублях. Срок годности каждого набора 
обозначен на коробке. Температура хранения 2-8°С. Неиспользованные стрипы храняться в течение 2 
месяцев в запечатанных пакетах.
1 . Планшета с микролунками, покрытмми Инсулин антисывороткой, 12x8 стрипов, 96 лунок
2. Нулевой стандарт, 3 мл
3. Набор стандартов, 5 флаконов по 1  мл 
Концентрации: 6.25, 12.5, 25, 50, 100 ~lU/ml
4. Анти-Инсулин конъюгат, 1  флакон, 5 мл.
5. Ферментный комплекс, содержащий пероксидазу хрена, 7мл
6. Субстрат - ТМВ, 1  флакон, 14 мл.
7. Стоп-раствор, 0.5М H 2SO4, 14 ml.
8.  Промывочный раствор, 1  флакон, концентрированный, 40Х, 30 мл.
Внимание: дополнительный нулевой стандарт имеется в наличии по требованию.
Материалы, необходимые для исследования, но не включенные в набор:
1 . Микроплашечный ридер(450±10 пт), например DRG E-LIZA МАТ 3000
2. Прецезионные микропипетки с одноразовыми наконечниками.
3. Абсорбирубщая бумага
4. Дистиллированная вода
DRG International, Inc., 1167 U.S. Highway 22. E., Mountainside, N.J. 07092, USA 
Ph: (908) 233-2079 Fax: (908) 233-0758 
121248 Москва, Набережная Т. Ш евченко, д.З, Московское Представительство «DRG International, Inc.» 
_________тел. (095) 243-5621, 243-5228, факс (095) 243-9300 e-mail: drgtech@col.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 66 ---
Условия хранения набора
При температуре хранения от 2 до 8°С невскрытые реагенты сохраняют активность до истечения срока 
годности. После истечения этой даты реагенты использовать не рекомендуется.
После восстановления любой раствор стандарта может храниться при 2-8°С в течение 8 дней. При -20С 
раствор может храниться значительно дольше.
Конъюгат, ферментньЕЙ комплекс, субстрат, промывочный буфет и нулевой стандарт должны храниться 
при 2-8°С
Микропланшета должна храниться при 2-8°С. После вскрытия фольгированного пакета при хранении 
пакет необходимо держать плотно закрытым. Иммуноактивность лунок сохраняеся приблизительно в 
течение 6 недель при хранении во вскрытом, но плотно закрытом пакете с влагопоглотителем.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ ДЛЯ ПОЛЬЗОВАТЕЛЕЙ
ВНИМАНИЕ: Не существует методов тестирований, на 100% гарантирующих отсутствие компонентов 
вируса Гепатита Б, ВИЧ (HIV/HTLV-III/LAV), или других инфекций. Поэтому все продукты, 
содержащие компоненты человеческой крови должны рассматриваться как потенциально 
инфицированные. Поэтому при работе с ними необходимо соблюать все меры предосторожности, 
установленные в лабораторной практике.
Избегайте контакта кожи со Стоп-раствором -  0.5М Н2804.Это может вызвать раздражения и ожоги
3. Немедленно после использования закройте реагенты крышками. Не путайте крышки от реагентов.
4. Расторы, содержашие добавки или консерванты, такие как азид соды, не должны использоваться в 
ферментной реакции.
6. Только для диагностики ин-витро.
7. Не используйте в исследовании компоненты из наборов разных Лотов.
DRG Insulin EIA-2935
Подготовка реагентов
Перед использованием необходимо довести все реагенты и необходимое количество стрипов до 
комнатной температуры.
Промывочный раствор
Развести 30 мл. концентрированного промывочного раствора с 1170 мл. деионизированной воды, общий 
объем 1200 мл. Разбавленный промывочный раствор хранится в течение 2 недель при комнатной 
температуре.
Устранение набора
Устранение набора необходимо осуществлять в соответствие с правилами национальной безопасности. 
Вся необходимая информация о данном наборе предоставлена в Паспорте безопасности данных.
Поврежденные наборы
В случае серьезного повреждения набора или его компонентов, необходимо проинформировать об этом 
компанию ДРГ в письменной форме не позднее 1  недели после получения набора. Не рекомендуется 
тестировать поврежденные наборы.
DRG International, Inc., 1167 U.S. Highway 22. E., Mountainside, N.J. 07092, USA 
Ph: (908) 233-2079 Fax: (908) 233-0758 
121248 Москва, Набережная Т. Ш евченко, д.З, Московское Представительство «DRG International, Inc.» 
________т е л . (0 9 5 ) 2 4 3 -5 6 2 1 , 2 4 3 -5 2 2 8 , ф а к с  (0 9 5 ) 2 4 3 -9 3 0 0  e-mail: drgtech@col.ru hftp.V/www.drgtech.ru


--- стр. 67 ---
Образцы
Сыворотка или плазма (только гепарин или цитрат плазма) могут использоваться в данном 
исследовании.
Не использовать гемолитические, желтушные или липемические образцы.
Забор образцов 
Сыворотка
Забрать кровь стандартным методом венопункции, дать свернуться и отделить сыворотку 
центрифугированием при комнатной температуре.
Плазма
Собрать всю кровь в центрифужные пробирки с анти коагулянтом и сразу же после забора 
центрифугировать.
Хранение образцов
Образцы должны быть закрытыми, их необходимо хранить в течение 5  дней при температуре 2-8°С и 
должны быть заморожены до -20°С или ниже для хранения в течении более длительного периода. 
Избегайте повторных разморозок.
Разведение образцов
В случае если в исходном анализе концентрация инсулина в образце больше чем в наивысшем 
стандарте, образцы необходимо разводить в 10 или 100 раз с нулевым стандартом и исследовать 
повторно, как описано в процедуре исследования.
Для подсчета концентраций необходимо принимаить во внимание данный фактор разведения образцов. 
Например:
а) разведение 1:10: 10 ul Сыворотки + 90 ul Нулевого стандарта (тщательно перемешать)
б) разведение 1:100: 10 ul раствор а) 1:10 + 90 ul Нулевой стандарт (тщательно перемешать)
Процедура исследования:
• Все реагенты и образцы перед началом исследования должны иметь комнатную температуру. 
Все реагенты должны быть перемешаны без образования пены.
• После начала исследования все шаги должны быть завершены без остановок
• Для каждого образца, реагента и стандарта необходимо использовать новые одноразовые 
наконечники пипеток.
• Абсорбция - это функция, линейно пропорциональная инкубационному времени и температуре. 
До начала исследования рекомендуется приготовить все реагенты, снять крышки, установить в 
держателе необходимые лунки, и т.д. Этим Вы обеспечите равное время для каждого 
раскапывания без остановок.
• Как правило, ферментная реакция линейно пропорциональна времени и температуре.
Все стандарты, образцы и контрол и необходимо исследовать в дублях с тем, чтобы обеспечить 
одинаковые условия исследования.
DRG Insulin EIA-2935
DRG International, Inc., 1167 U.S. Highway 22. E., Mountainside, N.J. 07092, USA  
Ph: (908) 233-2079 Fax: (908) 233-0758  
121248 Москва, Набережная Т. Шевченко, д.З, Московское Представительство «DRG International, Inc.»  
т е л . (0 9 5 ) 2 4 3 -5 6 2 1 , 2 4 3 -5 2 2 8 , факс (095) 2 4 3 -9 3 0 0  e-mail: drgtech@col.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 68 ---
DRG Insulin EIA-2935
1 . Установите необходимое количество лунок в держателе
2. Раскапать по 25мкл стандартов, контролей и образцов новыми одноразовыми наконечниками в 
соответствующие лунки
3. Раскапать 25мкл конъюгата в каждую лунку.
4. Тщательно перемешать в течение 10 секунд,
5. Инкубируйте в течение 30 мин при комнатной температуре, не накрывая плашку.
6. Резко вытряхните содержимое лунок.
Промыть лунки 3  раза разведенным промывочным раствором (400мкл/лунка)
Резко постучите плашкой об абсорбирующую бумагу, чтобы удалить остатки влаги.
Важно:
Точность и чувствительность данного анализа зависит от четко выполненной процедуры 
промывки!
7. Раскапать 50мкл ферментного комплекса в каждую лунку.
8. Инкубировать в течение 30 минут при комнатной температуре.
9. Резко вытряхните содержимое лунок.
Промыть лунки 3 раза разведенным промывочным раствором (400мкл/лунка). Резко постучите 
плашкой об абсорбирующую бумагу, чтобы удалить остатки влаги,
10. Раскапать 50мкл субстрата в каждую лунку,
11. Инкубировать в течение 15 минут при комнатной температуре.
12. Остановить ферментную реакцию добавлением 50мкл стоп-раствора в каждую лунку.
13. Считать оптическую плотность при 450±10 пт. микропланшетным ридером в течение 10 минут 
после добавления стоп раствора.
Подсчет результатов:
1 . Подсчитать средние значения абсорбции для каждого стандарта, контроля и образца пациента.
2. Постройте стандартную кривую соотношением средней абсорбции (У) каждого референс- 
стандарта к соответствующей концентрации (X) в нг/мл.
3. Используя среднюю абсорбцию каждого образца, определите соответствующую величину 
Инсулина простой интерполяцией от этой стандартной кривой, при необходимости умножая на 
коэффициент разведения,
4. Автоматический метод: компьютерные программы, использующие кубический сплайн, 4 PL (4 
параметра материально-технического обеспечения) или логит преобразование.
5. Концентрацию образцов можно считывать непосредственно со стандартной кривой. Образцы с 
концентрацией инсулина, превышающей самый высокий стандарт, необходимо разводить еще 
раз. Для подсчета концентраций необходимо принимать во внимание данный фактор разведения.
Ниже приведен пример стандартной кривой Инсулина ELISA,
Стандарт Оптические величины (450 нм)
Стандарт 0 (0 ulU/ml) 0.03
Стандарт 1  (6.25 ulU/ml) 0.07
Стандарт 2 (12.5 ulU/ml) 0.14
Стандарт 3 (25 ulU/ml) 0.35
Стандарт 4 (50 ulU/ml) 0.88
Стандарт 5  (100 ulU/ml) 2.05
DRG International, Inc., 1167 U.S. Highway 22. E., Mountainside, N.J. 07092, USA 
Ph: (908) 233-2079 Fax: (908) 233-0758 
121248 Москва, Набережная Т. Шевченко, д.З, Московское Представительство «DRG International, Inc.»  
тел. (095) 243-5621, 243-5228, факс (095) 243-9300 e-mail: drgtech@col.ru http://wwYy.drgtech.ru
______


--- стр. 69 ---
DRG Insulin EIA-2935
Ожидаемые величины
Для каждой лаборатории рекомендуется устанавливать свои собственные нормальные и ненормальные 
значения.
Концентрации инсулина у здоровых людей варьируются от 2 до 25 ци1/т1(предварительные 
результаты).
Характеристики исследования:
Динамический диапазон исследования
Диапазон данного исследования варьируется от О  -  100 ци1/т1.
Чувствительность
Нижний предел обнаружения Инсулина < 1,5ци1/т1, подсчитан как 2 стандартных отклонения от 
нулевого стандарта.
Специфичность антител (кросс-реактивность)
Кросс-реактивность определялась добавлением различных аналитов к сыворотке, содержащей 4 ng/ml 
(100 jiUl/ml) инсулина и измерением возможной концентрации инсулина.
Аналит (4 ng/ml) Содержание инсулина нг/мл Кросс-реакция (%)
Свиной инсулин 8 нг/мл 17 >100
Овечий инсулин 8 нг/мл 17,8 >100
Собачий инсулин 16 нг/мл 17,2 82
Кроличий инсулин 16 нг/мл 14,1 63
крысиный инсулин 16 нг/мл 4,0 0
Человеческий проинсулин 32 нг/мл 4,1 0
Свиной проинсулин 16 нг/мл 4,0 0
Овечий проинсулин 16 нг/мл 4,1 0
Аналитическая чувствительность:
Аналитическая чувствительность была подсчитана с помощью среднего значения + 2 стандартных 
отклонения двадцати повторных анализов нулевого стандарта = 1,76 цШ/тЬ
DRG International, Inc., 1167 U.S. Highway 22. E., Mountainside, N.J. 07092, USA 
Ph: (908) 233-2079 Fax: (908) 233-0758 
121248 Москва, Набережная Т. Ш евченко, д.З, Московское Представительство «DRG International, Inc.» 
тел. (095) 243-5621, 243-5228, факс (095) 243-9300 e-mail: drgtech@ col.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 70 ---
DRG Insulin EIA-2935
Точность
Интра-анализ
Образец Среднее
значение
MlU/ml
Коэф. 
Вариации (%)
20 17,45 2,6
20 66,43 1,79
Интер-анализ
Образец Среднее
значение
МШ /щ]
Коэф, 
Вариации
12 17,36 2,88
12 66,90 5,99
Контроль качества
Рекомендуется использовать контрольные образцы в соответствие с нормами федеральных и 
государственных прав. Использование контрольных образцов обеспечивает достоверность результатов 
анализа. Используйте контроли на нормальном и патологическом уровнях.
Контроли и соответствующие результаты Лаборатории контроля качества указаны в сертификате 
контроля качества, который прилагается к набору. Значения и диапазоны, указанньЕе в сертификате 
контроля качества всегда соответствуют данному лоту набора и должны использоваться для прямого 
сравнения результатов.
Так же рекомендуется использовать национальные или международные программы оценки качества для 
обеспечения точных результатов анализа.
Используйте соответствующие статистические методы для анализа контрольных значений и отклонений. 
Если результаты анализа не соответствуют установленным допустимым диапазонам контрольных 
материалов, результаты пациента необходимо рассматривать как недействительные. В этом случае, 
проверьте следующие технические данные: приборы для пипетирования, фотометр, срок годности 
реагентов, условия хранения и инкубации, аспирационные и промывочные методы.
В случае проверки всех выше перечисленных пунктов вы не обнаружили никаких неисправностей, 
обратитесь к вашему дистрибьютеру или же непосредственно в компанию ДРГ.
Воспроизведение
Образцы были обогащены путем добавления раствора Инсулина с концентрацией 1:1. Ожидаемые 
значения подсчитаны с помощью добавления половины значений, установленных для неразведенных 
образцов и половины значений известных растворов. Процент воспроизведения подсчитан путем 
умножения коэффициента измерений и ожидаемых значений на 100.
DRG International, Inc., 1167 U.S. Highway 22. E., M ountainside, N.J. 07092, USA 
Ph: (908) 233-2079 Fax; (908) 233-0758 
121248 Москва, Набережная Т. Ш евченко, д.З, Московское Представительство «DRG International, Inc.» 
________х е л . (0 9 5 ) 2 4 3 -5 6 2 1 , 2 4 3 -5 2 2 8 , факс (0 9 5 ) 2 4 3 -9 3 0 0  e-mail: drgtech(g)col.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 71 ---
DRG Insulin EIA-2935
Образец Добавленная 
концентрация 1;1 
(v/v) (uiu/ml)
Измеряемые
концентрации
(цШ/т1)
Ожидаемые
концентрации
(MlU/ml)
Воспроизведение
%
1 21,24
100 66,41 60,62 109,6
50 38,80 35,62 108,9
25 23,38 23,12 101,1
12,5 17,37 16,87 102,9
2 69,04
100 84,58 84,52 100,1
50 58,39 59,52 98,1
25 43,17 47,02 91,8
12,5 37,48 40,77 91,9
Линейность
Образец Разведение Измеряемые
концентрации
(цШ/mI)
Ожидаемые
концентрации
(цШ/mI)
Воспроизведение
(%)
1 Неразведенная 21,24 21,24
1:2 9,40 10,62 88,5
1:4 5,23 5,31 98,5
1:8 2,81 2,66 105,9
1:16 1,47 1,33 110,3
2 Неразведенная 69,04 69,04
1:2 30,51 34,52 88,4
1:4 17,60 17,26 102,0
1:8 8,73 8,63 101,2
1:16 4,76 4,32 110,4
DRG International, Inc., 1167 U.S. Highway 22. E., M ountainside, N.J. 07092, USA 
Ph; (908) 233-2079 Fax: (908) 233-0758 
121248 Москва, Набережная Т. Ш евченко, д.З, Московское Представительство «DRG International, Inc.» 
______тел. (095) 243-5621,243-5228, факс (095) 243-9300  e-mail: drgtech@ col.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 74 ---
хранение и стабилизация набора
Реагенты должны храниться при 2-8 град. Дата годности и 
обозначения должны быть на каждом флаконе. Неприменяемые 
микротитровальные полоски должны хранится в закрытом виде с 
поглотителями влаги при 2-8 град.
Подготовка реагентов.
Перед применением реагенты должны быть перенесены в комнатную 
температуру и тщательно перемешаны.
Промывочный буфер
Концентрат разводится бидист. водой 1  к 200 (наприм.Ю мл 
концентрата смешивается с 2000 мл диет, воды) Это дает готовый к 
применению промывочный буфер.
Стандарт О
В бутылочку пипетируют 1  мл диет, воды, отставляют на 15 мин, 
далее осторожно перемешивают
Стандарты 1-5 и контроли
В бутылочки каждого пиппетируют 0.5 мл диет, воды, отставляют на 
1 5 мин, далее осторожно перемешивают
Устойчивость приготовленных реагентов
Промывочный буфер
Буфер готовый к применению устойчив при комнатной температуре 
до выпадения осадка
Однако рекомендуется готовить каждый тестовый день новый буфер. 
Стандарты и контроли
Стандарты и контроли очень нестабильны.После приготовления 
рекомендуется заморозить.Для 6-недельного хранения заморозить до 
-20 град.
Вскрытие тестовой упаковки
Необходимо соблюдать принятые правила при вскрытии каждой 
упаковки.
Меры при повреждении
DRG Остеокальцин (EIA-3375)
В случае значительных поврежденЦ 
уведомить поставщика.
Материал для исследований
Взятие проб
Сыворотка\гепарин илиЕОТА-Плазма | 
При взятии проб необходимо ?  
безопастности. Необходимо избе rai
заморозки и разморозки. Не применят^ 
Хранение проб
Сыворотка\ЕОТА-плазма •
Сыворотка соотв.плазма должна бы1 
часов от клеток, необходима цеь| 
центрифугирования плазма доли^ 
Пипетировать из одной ампулы т! 
сыворотки для исследования от 100 М| 
В среднем это приготовление стаби.| 
длительного применения надо замора^
Подготовка проб
Все реагенты перенести в комнатн)| 
реагенты смешиваются без образована 
Пробы , где концетрация выше чем I  
быть разбавлены нольстандартом.
Подготовка к анализу
Перед пипетированием все реаге 
комнатную температуру. После нача 
должны выполняться бесперебойр 
смешивания, необходимо для каждог 
новую пипетку. Абсорбция зависит O ' 
перед тестированием необхлдимо все
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG Inte
тел. (495) 243-5621,243-5228,243-4028, факс (495) 243-9300,232-0211 e-mail; dr 2tech@d 0l.ru http://


--- стр. 75 ---
DRG Остеокальцин (EIA-3375)
Проведение анализа
1 . Пипетировать каждого по 25 мкл стандарта, контроля и пробы 
пациента
2. Пипетировать по 100 мкл анти-hOST в лунки.
3. Инкубировать 2 часа при комнатной температуре на 
встряхивателе при 700 об/мин ± 100.
4. Каждую лунку промыть 4 раза отмывочным буфером. Для этого 
лунки отряхнуть или отсосать и сполоснуть отмывочным буфером 
из водного аппарата или шприца каждое углубление. Это 
повторить 3  раза, остаток жидкости удаляют постукиванием из 
всех ячеек.
Важное замечание- Правильность дальнейшего во многом зависит 
от правильного проведения промывочных мероприятий.
5. Пипетировать по 100 мкл субстратного раствора во все лунки 
через 15 мин после отмывания
6. Инкубировать 30 мин при комнатной температуре при
встряхивании 700 ± 100 об/мин без попадания прямого
солнечного света
7. Зафиксировать с помощью 200 мкл ТМВ-стопраствора и 
встряхнуть платы недолго
8. Измерить в среднем через 180 мин после фиксации при 405 нм ( 
если есть вналичии вместо 600-650 нм)
Расшифровка теста
На диаграммную бумагу нанести концентрации стандарта 
(абсцисса, логарифм.), против которых расположить оптические 
плотности (ордината линейн.)
Можно как альтернатива, как показали на примере, также 
установить связь оптической плотности каждого отдельного 
стандарта или круга пациентов с оптической плотностью 
нольстандарта.
Существует соответствующая компьютерная программа.
При применении Трасилол концентрации проб пациентов должны 
быть считаны с кривой и скорректированы с фактором разведения 1 .1  
Каждая проба с концентрацией выще высшей стандартной должна 
быть разведена нольстандартом и еще раз измерена.
Результат теста должен корректриро^ 
приводится типичный пример стан^ 
ELISA.
Концентрация
нг\мл
О
2
5
14
35
95
ОП
0,011
0.039
0.11
0.54
1 .3
2.6
Характеристика теста
Предлагаемые данные являются ocH f 
разработать свои данные с учетом per? 
Специфичность
Эта методика измеряет прямой ос1 
терминальные фрагменты могут тести 
тесте не при максимальных значения^ 
нормальных и патологических про^ 
которая 100 раз больше как при хрон 
не измеряется.
Фрагмент 
проц
.........
ОС фрагмент 1-19 Н-терминальный 
ОС фрагмент 22-44 Средний 
ОС фрагмент 45-49 С-терминальный ^
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3,
тел. (495) 243-5621,243-5228,243-4028, факс (495) 243-
1
Московское представительство «DRG Intej 
■9300,232-0211 e-mail: drgtech@dol.ru http;/j


--- стр. 76 ---
BRUCELLA IgG ELISA (EIA-3455)
ВАЖН01
• Данный набор предназначен только для 
диагностики «ин-витро»,
• Не использовать вместе реагенты или стрипы из 
разных лотов.
• Не использовать вместе реагенты разных 
производителей.
• Не использовать реагенты после окончания 
срока годности . указанного на этикетке.
• Использовать только чистые наконечники для 
пипеток, пипетки и лабораторный инвентарь.
• Не путать колпачки реагентов во избежание 
кросс-контамииаци и.
• Плотно закрывать флаконы с реагентами сразу 
после использования.
• После первого открывания и последующего 
хранения проверять флаконы конъюгата и 
контролей на микробную контаминацию перед 
дальнейшим использованием.
• Во избежание кросс-контаминапин и ложно 
завышенных результатов пипетировать образны 
папиентов и раскапывать конъюгат без 
расплескивания прямо на дно лунок.
• Во время инкубации накрывать 
микротитровальные стрипы пленкой для 
предотвращения испарения.
ПРИГОТОВЛЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
Развести образец пациента 1  + 100 раствором для 
разведения образцов; напр. 10 мкл образца пациента +
1  мкл раствора для разведения образцов (хорошо 
смешать).
Важно:
положительный и отрицательный контроль готовы к 
использованию. Разводить контроли не нужно!
ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ
Внимательно прочитайте инструкцию перед 
выполнением анализа. Надежность результатов зависит 
от четкого следования инструкциям.
Очень важно довести все компоненты до комнатной 
температуры перед началом анализа!
Перед проведением анализа необходимо составить 
схему распределения и идентификации образцов и 
контролей с помощью формы вложенной в набор. 
Отобрать требуемое количество микротитровальных 
стрипов или лунок и поместить их в держатель. 
Разместите по меньшей мере:
1  лунка (напр., А1) для
бланка субстрата,
2 лунки (напр., В1 + С1) для
отрицательного контроля и
1  лунка (напр.,01) для
положительного контроля
На усмотрение пользователя можно ставить  
образцы и контроли в дублях.
ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА 
Этап 1
a) Раскапать
100 мкл готового к использованию отрицательного 
контроля в лунки 31 + С1,
100 мкл готового к использованию положительного 
контроля в лунку D1,
100 мкл раствора каждого образца пациента в 
оставшиеся лунки согласно схеме распределения. 
Оставить лунку А1 для бланка субстрата!
Накрыть лунки пленкой поставляемой в наборе.
b) Инкубировать 1  час при 37 °С.
Во время инкубации подготовить требуемое! 
кол-во промывочного раствора достаточное для| 
количества используемых лунок, (см. «Подготовка! 
реагентов»).
c) Удалить содержимое лунок и промыть их 3 раза| 
300 мкл рабочего промывочного раствора.
Примечание:
Промывка очень важна! Плохая промывка может | 
привести к низкой точности и завышенным! 
значениям абсорбции.
В конце осторожно удалить остатки жидкости, 
выстучав стрипы на салфетку перед 
следующим этапом!
Этап 2
a) Раскапать 100 мкл готового к употр. конъюгата 
антител IgG к Brucella во все лунки кроме А1 и 
накрыть их пленкой.
b) Инкубировать 30 минут при комнатной| 
температуре (20 ^  25 °С) в темноте.
c) Повторить процедуру промывки как описано в 
этапе 1).
Примечание: осторожно удалить остатки жидкости, \ 
выстучав стрипы на салфетку перед следующим 
этапом!
Этап 3
а) Раскапать по 100 мкл готового к употр. раствора| 
ТМБ во все лунки и ;
опять их накрыть.
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д- 3, Московское представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495) 243-5621,243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300,232-0211 e-mail: drgtech@doLru http;//www.drgtech.ru


--- стр. 77 ---
b) Инкубировать ровно 15 минут при комнатной
температуре (20 25 °С) в темноте.
c) Раскапать по 100 мкл стоп - раствора (как и ТМБ) 
во все лунки.
Любое голубое окрашивание, проявившееся во 
время инкубации, переходит в желтое.
Примечание: высоко-положительные образцы 
пациентов могут иметь темный осадок хромогена!
BRUCELLA IgG ELISA (EIA-3455)
Измерение
Настроить микропланшетный ридер для ELISA на 
нуль используя бланк субстрата в лунке А1.
Если по техническим причинам ELISA ридер не 
может быть настроен на нуль используя бланк 
субстрат в лунке А1, вычитайте значение абсорбции 
лунки А1 из всех остальных значений абсорбции. 
Измерить абсорбцию во всех лунках при 450 нм и 
записать значения абсорбции для каждого контроля и 
образца пациента в схему.
Двойная длина волны -  рекомендуется считывать на 
620 нм как референтной длине волны. Где
применимо рассчитать среднее значение абсорбции 
всех дублей.
Оценка надежности результатов
Постановка анализа может считаться действительной 
при соблюдении следующих условий:
> бланк субстрата в А1 на глаз кажется бесцветным.
> отрицательный контроль в лунках В1 и С1 должен 
иметь только легкое окрашивание, едва различимое 
на глаз: Значение абсорбции менее 0.300.
> положительный контроль в лунке D1 должен иметь 
значение абсорбции равное или более значения 
“Cut-Off’.
Пример: СО = MN + 0.250 = 0.085 + 0.250 = 0.335
(Среднее) значение абсорбции пациента более чем иа| 
10 % больше СО => ПОЛОЖИТЕЛЬНЫЙ
(Среднее) значение абсорбции пациента менее чем 
на 10% выше или ниже СО ^  серая зона 
^  повторить анализ через 2 - 4  недели на новых 
образцах пациента
Результат второго анализа в серой зоне 
ОТРИЦАТЕЛЬНЫЙ
(Среднее) значение абсорбции более чем на 10 % 
меньше СО ОТРИЦАТЕЛЬНЫЙ
Результат в единицах (NU):
Среднее значение абсорбции пациента * 10
СО
(единицы (Ж '))
Пример: 1.580 *  10
= 47 NU
0335
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Значение Cut-Off: 10 NU
Серая зона: 9-11 NU
Отрицательный < 9 NU
Положительный > 1 1  NU
Результ^:
Среднее значение абсорбции отрицательного контроля 
[MN]
Рассчитать среднее значение абсорбции двух 
отрицательных контролей (напр, в В1/С1).
Пример: (0.080 + 0.090) + 2 = 0.085 = MN
Cut-off (значение) [СО] 
добавить 0.250 к MN.
СО = MN + 0.250
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495) 243-5621,243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300,232-0211 e-mail: drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 78 ---
Н ам еченное использование
Иммуноферментный набор для качественного и 
полуколичественного определения антител класса IgM к антигену 
капсида вируса Эпштейна-Барр (ВЭБ) в сыворотке человека
П р и н ц и п  анализа
D R G -N o vu m  E P S T E IN -B A R R  V IR U S  (V C A ) Ig M  E L IS A  - 
это иммуноферментный набор со стрипами микротитра для 
определения антител класса IgM к антигену капсида вируса 
Эпштейна-Барр (АКВЭБ) в сыворотке человека.
О бразцы  с ы в о р о тки  п а ци ента разведены и совм естно 
абсорбированы  с растворителем  образца Ig M , содерж ащ им  
анти тела к  Ig G , чтоб ы  изб еж ать к о н к у р е н т н о го  и н ги б и р о в а н и я  
со сп е ци ф и че ски м и  Ig G  и ус тр а н и ть  р е в м а то и д н ы й  ф а кто р !
Ячейки со стрипами микротитра в качестве твердой фазы 
покрыты специфичными инактивированными антигенами капсида 
ВЭБ.
Разведённые образцы сыворотки и готовые к использованию 
контрольные образцы пипетируются в ячейки. Во время первой 
инкубации комплекс антиген капсида вируса Эпштейна-Барр -  
специфическое антитело, образец с положительным результатом и 
контрольный образец связываются с иммобилизированными 
антигенами. После промывки для удаления несвязавшихся образцов 
и контрольного материала в ячейки добавляется конъюгат 
пероксидазы хрена и антител к IgM. Во время второй инкубации этот 
анти-IgM конъюгат специфически связывается с IgM антителами, 
приводя к образованию энзим-связанного иммунного комплекса.
После второй промывки для удаления несвязавшегося конъюгата 
сформировавшиеся иммунокомплексы (в случае положительного 
результата) обнаруживаются инкубацией в веществе ТМБ и 
появлением синего окрашивания. Синее окрашивание меняется на 
желтое в результате остановки реакции ферментного индикатора с 
серной кислотой.
Интенсивность этого окрашивания прямо пропорциональна 
количеству комплекса АКВЭБ - IgM в образце пациента.
Поглощение при 450 нм считывается при помощи 
микротитровального ридера ELISA.
Общее время инкубации: 1  час, 45 минут.
Р Е А Г Е Н Т Ы  И  С О С Т А В  
12 В Э Б  с т р и п ы  м и к р о т и т р а  (Ig M )
8-ячеечные делимые стрипы, покрытые АКВЭБ; 
включительно 1  держатель для стрипов и 2 покровные 
фольги
100 мл Р аствори тель образца Ig M  * * *
Готов к использованию, окрашен ж е л т ы м ; pH 7,2 ± 0,2 
Содержит антитела к IgG человека 
12 мл С то п-ра ств о р
Готовая к использованию серная кислота, 0,2 моль/л 
О пасно: С ерная ки с л о та  разъедает к о ж у  и глаза.
Б еречь о т детей. В случае попад ания на глаза, 
тщ а те л ь н о  п р о м ы т ь  водой и о б ратить ся к  вр а чу!
50 мл Раствор д ля п р о м ы в к и *
20х концентрированный для разведения до 1000 мл; pH
7,2 ± 0,2
2х 10 мл В Э Б  - а н ти -Ig M  к о н ъ ю га т * *
Готов к использованию, окрашен красным, бесцветная 
крышка; анти-IgG кролика, связанный с пероксидазой.
12 мл Т М Б  раствор
Готов к использованию 3,3',5,5'-тетра-метил-бензидин 
2 .мл П о л о ж и те л ь н ы й  ко н т р о л ь н ы й  образец В Э Б  Ig M  * * *
Готов к использованию, окрашен жёлтым, кр а сн а я  
крышка
2 мл О тр и ц а те л ь н ы й  к о н т р о л ь н ы й  образец В Э Б  Ig M  * * *
Г отов к использованию, окрашен жёлтым, ж елтая 
крышка
EPSTEIN-BARR VIRUS (EBV) - IVCA] IgM (EIA-3476)
* содерж ит 0,01 %  Тим еросал
* *  содерж ит 0,01 %  Тимеросал +  0,01 %  Г е н там и ц и н а
сульф ат
**+  содерж ит 0,1 %  К а т о н  + 0,1 %  Н а тр и я  азид 
П редупреж аение:
• Тимеросал токсичен! Не глотать. Избегать контакта с кожей | 
и слизистыми оболочками!
• Все компоненты человеческого происхождения, 
используемые для производства этих реагентов, были 
протестированы на антитела к ВИЧ и к вирусу Гепатита-В на ?  
методах 3'^ поколения и показали отрицательный результат. ^
• ВЭБ IgM положительный контрольный образец признан не 
инфицирующим культуру клеток. Тем не менее со всеми 
материалами необходимо обращаться как с потенциально 
инфицирующими.
С та б и л ьн о сть и хранение
Реагенты стабильны до истечения срока годности, указанного I  
на этикетке при температуре хранения от 2 до 8 °С. '
Н е и спо л ьзо ва ть ре а ге н ты  по истечении ср о ка  год ности !
П р и го то в л е н и е  реагентов 
Работа с р а створом  д л я п р о м ы в к и
Развести промывочный раствор в соотношении 1:19 
(например, 10 мл к 190мл) свежей дистиллированной апирогенной j
водой; i
дозировка: ~ 5 м л на одно определение 
к р и с т а л л ы  в растворе исчезаю т п р и  н а гр ев а н и и  до 37 °С  
на водяной бане.
С та б и л ьн о сть после разведения: 4 недели пр и  2 - 8 °С  
С т р и п ы  м и к р о т и т р а
Стрипы имеют вакуумную упаковку. Сразу после 
распечатывания стрипа, другие стрипы должны быть запечатаны в I
пластиковый контейнер вместе с поглоти телем  влаги, прилагаемым :
в наборе, и должны храниться при 2 -  8 °С
В А Ж Н О !
• Этот тестовый набор предназначен только для 
использования в ин-витро диагностике.
• Не использовать вместе реагенты или стрипы из разных
лотов.
• Не использовать совместно реагенты этого набора с 
реагентами других производителей.
• Не использовать реагенты по истечении срока годности, 
указанного на этикетке.
• Использовать только чистые пипетки, распределители и 
лабораторный инвентарь.
• Не менять местами откручивающиеся крышки от пузырьков 
для реагентов во избежание перекрёстной контаминации
• Плотно закрывать пузырьки с реагентом сразу после 
использования во избежание испарения и микробного обсеменения.
• После первого вскрьггия и последующего хранения 
проверять конъюгат и пузырьки с контрольными образцами на 
микробную обсеменённость перед дальнейшим использованием.
• Во избежание перекрёстной контаминации и ложных 
результатов пипетировать образец пациента и распределять конъюгат 
аккуратно на дно ячеек, не расплёскивая их.
• Во время инкубации накрывать стрипы с микротитром 
фольгой во избежание испарения.
П О Д Г О Т О В К А  О Б Р А З Ц А
Развести каждый образец пациента 1:100 в растворителе для 
образца IgM',
Например, 10 мкл образца на 1  мл растворителя образца IgM 
(хорошо перемешать).
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028, факс (495) 243-930Q, 232-0211 e-mail: drgtech@doi.ru. httD://www.drgtcch.ru


--- стр. 79 ---
E PST E IN -B A R R  V IR U S
П р и м е чан и е : Положительные и отрицательные 
контрольные образцы готовы к использованию и не должны более 
разводиться!
П О Д Г О Т О В К А  К  А Н А Л И З У
1 . Внимательно прочитайте инструкцию перед выполнением 
анализа. Надежность результатов зависит от четкого следования 
инструкциям.
2. О чен ь в а ж н о  довести все ко м п о н е н т ы  до ко м н а тн о й  
те м пе р а тур ы  перед началом  анализа!
3. Перед проведением анализа необходимо составить схему 
распределения и идентификации образцов и контрольных образцов с 
помощью формы вложенной в набор.
4. Выбрать необходимое кличество стрипов с микротитром 
или ячеек и поместить их в держатель.
5. В зять по м еньш ей мере:
1  ячейку (напр., А1) для образца вещества,
2 ячейки (напр., В1+С1) для отрицательного контрольного 
образца.
1  ячейку (напр., D1) для положительного контрольного 
образца.
П ользователь реш ает сам, н у ж н о  л и  с та в и ть  ко н т р о л и  и п р о б ы  
па ци е н то в в д войном  ко л и че стве , п р и  необходим ости.
П роцедура анализа 
Э тап 1
a) П ипетирование
100 мкл готового к использованию отрицательного 
контрольного образца в лунки В1 + С1,
100 мкл готового к использованию положительного 
контрольного образца в лунки 1  D1 и
100 мкл каждой разведенной пробы пациента в оставщиеся 
лунки согласно схеме распределения.
О ставьте л у н к у  А  пусто й  для образца вещ ества!
Н а кр о й те  л у н к и  п л е н ко й , поставляем ой с набором.
b) Инкубируйте 1  час п р и  37®С
во время инкубации приготовьте требуемое количество 
рабочего промывного раствора, достаточное для 
используемых лунок (см. "Подготовка реагентов”)
c) Удалите содержимое ячейки (включите выгяжку) и 
промойте их три раза 300 мл промывочного раствора.
Примечание:  Промывка очень важна! Недостаточная
промывка приводит к низкой прецизионности (точности) и 
неправильным значениям частоты поглощения.
В заключение, осторожно удалите остатки жидкости, резко 
вытряхнув содержимое лунок на бумажное полотенце!
Э тап 2
a) Распределить 100 мкл ко н ъ ю га т а  во все ячейки кр о м е  А1 и 
покры ть их фольгой,
b) Инкубировать 30 м и н у т  п р и  к о м н а т н о й  тем пературе (20 - 
25 °С). Не подвергать воздействи ю  п р я м ы х  со л н е ч н ы х л учей !
c) П о в т о р и ть  п р о м ы в к у  как описано в этапе 1  п.п. с).
Примечание: В заключение, осторожно удалите остатки 
жидкости, резко вьгфяхнув содержимое ячеек на бумажное 
полотенце, прежде чем приступать к следующему этапу!
Э тап 3
a) Распределить 100 мкл готового к использованию раствора 
ТМБ во все ячейки и снова накрыть их.
b) Инкубировать р овно 15 м и н у т  п р и  ко м н а тн о й  
тем пературе (20 - 25 ®С) в тем ноте.
c) Распределить 100 мкл стоп-раствора (как и Т М Б ) во все 
ячейки.
Л ю бое синее о кр а ш и в а н и е  появивш ееся п р и  и н ку б а ц и и  
м еняется на желтое.
(EBV) - [VCA] IgM (EIA-3476)
Примечание:  положительные пробы пациентов с высоким 
результатом могут привести к появлению темного осадка хромогена!
И зм ерения
1. Н а стр о й те  ридер ELISA на ноль, используя образец 
вещ ества (я ч е й ка  А1)
Если по техническим причинам ридер не может быть настроен 
на «О» с помощью образца вещества в лунке А 1, вычтите значение 
поглощения ячейки А1 из значений поглощения всех остальных 
ячеек для получения точного результата.
2. И зм ерьте по гл о щ е н и е  всех ячеек при 450 нм и запишите 
значения для каждого контрольного образца и образца пациента в 
схем у распределения и и д е н ти ф и ка ц и и .
3. Рекомендовано считывание на двух длинах волн, 
используя 620 нм как волну сравнения.
4. Где возможно п о счи та ть  средние значения поглощ ени я 
всех дубликатов.
В ерность пр о хож д е ни я анализа
Прохождение анализа может считаться верным, если 
соблюдены следующие условия;
• Образц вещества в А1: Значение поглощения ниж е 0.100.
• Отрицательный конп^ольный образец  в 81 и С1: 
Значение поглощения н и ж е  0.300.
■  Положительный контрольный образец в D1: должен 
достигать значения поглощения р авного « C u t-o ff»  значению  или 
п р е в ы ш а ть  его.
Р езультаты
Среднее значение п о гл о щ е н и я  отрицательного 
контрольного образца [M N ]
Посчитать средние значения поглощения 2 определений 
отрицательных контрольньпс образцов (Напр., в В 1/С 1).
П р и м е р : (0,080 + 0,090) / 2 = 0,085 = MN
C u t-o ff (Значение) [С О ]
Добавить 0,250 к MN.
С О  = MN + 0,250
П р и м е р : С О  = MN + 0,250 = 0,085 + 0,250 = 0,335
Значение п о гл о щ е н и я  (среднее) проб ы  пациента 
п р е в ы ш а е т С О  более чем на 10 %  => полож ительно
Значение п о гл о щ е н и я  (среднее) пробы  пациента 
ва р ьи руе тся о т 10 %  вы щ е  до 10 ® /о  ни ж е С О  => серая зона => 
п о в то р и ть  анализ через 2 - 4  недели со свеж им и пробами 
па ци е нта
Р е зул ьтаты  в серой зоне п р и  п о вторном  анализе => 
о тр и ц а те л ьн о
Значение п о гл о щ е н и я  (среднее) проб ы  пациента ни ж е 
значения С О  более чем на 10 %  => о трицател ьно
Р е зул ьтаты  в еди ницах N O V U M  [N U ]:
Среднее значение^абсорбиии х Ю
Пример: ^  =  35 NU (единицы NOVUM)
0 , 4 5
И н те р п р е та ц и я  результатов
Cut-off значение: 10 NU
Серая зона: 9-11 NU
Отрицательно: < 9 NU
Положительно: > 1 1 NU
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495) 243-5621,243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drgtech@dol.ru. http://www.drgtech.ru


--- стр. 80 ---
EPSTEIN-BARR VIRUS (EBV) - [VCA] IgG (EIA-3475)
Намеченное
Иммуноферментный набор для качественного и 
полуколичественного определения антител класса IgG к антигену 
капсида вируса Эпштейна-Барр (ВЭБ) в сыворотке человека.
П р и н ц и п  анализа 
D R G -N o vu m  E P S T E IN -B A R R  V IR U S  (V C A ) Ig G  E L IS A  - 
это иммуноферментный набор со стрнпамн микротитра для 
определения антител класса IgG к антигену капсида вируса 
Эпштейна-Барр (АКВЭБ) в сыворотке человека.
Ячейки со Стрипами микротитра в качестве твердой фазы 
покрыты специфичными инактивированными антигенами капсида 
ВЭБ.
Разведённые образцы сыворотки и готовые к использованию 
контрольные образцы пипетируются в ячейки. Во время первой 
инкубации комплекс антиген капсида вируса Эпштейна-Барр -  
специфическое антитело, образец с положительным результатом и 
контрольный образец связываются с иммобилизированными 
антигенами. После промывки для удаления несвязавшихся образцов 
и контрольного материала в ячейки добавляется конъюгат 
пероксидазы хрена и антител к IgG. Во время второй инкубации этот 
анти-IgG конъюгат специфически связывается с IgG антителами, 
приводя к образованию энзим-связанного иммунного комплекса.
После второй промывки для удаления несвязавшегося конъюгата 
сформировавшиеся иммунокомплексы (в случае положительного 
результата) обнаруживаются инкубацией в веществе ТМБ и 
появлением синего окрашивания. Синее окрашивание меняется на 
желтое в результате остановки реакции ферментного индикатора с 
серной кислотой.
Интенсивность этого окрашивания прямо пропорциональна 
количеству комплекса АКВЭБ - IgG в образце пациента.
Поглощение при 450 нм считывается при помощи 
микротитровального ридера ELISA.
Обшее время инкубации: 1  час, 45 минут.
Р Е А Г Е Н Т Ы  И  С О С Т А В  
12 В Э Б  с т р и п ы  м и к р о т и т р а  (Ig G )
8-ячеечные делимые стрипы, покрытые АКВЭБ;
включительно 1  держатель для стрипов и 2 покровные 
фольги
100 мл Р аствори тель образца Ig G  * * *
Готов к использованию, окрашен ж е л т ы м ; pH 7,2 ± 0,2 
12 мл С то п -ра ств о р
Готовая к использованию серная кислота, 0,2 моль/л 
О пасно: С ерная ки сл о та  разъедает к о ж у  и глаза.
Беречь о т детей. В  случае по пад а ни я на глаза, 
тщ а те л ь н о  п р о м ы т ь  водой и  о б р а ти ть ся к  вр а ч у!
50 мл Раствор для п р о м ы в к и *
20х концентрированный для разведения до 1000 мл; pH
7,2 ± 0,2
2х 10 мл В Э Б  - а н ти -Ig G  к о н ъ ю га т * *
Готов к использованию, окрашен красным, бесцветная 
крышка; анти-IgG кролика, связанный с пероксидазой.
12 мл Т М Б  раствор
Готов к использованию 3,3',5,5'-тетра-метил-бензидин 
2 мл П о л о ж и те л ь н ы й  ко н т р о л ь н ы й  образец В Э Б  Ig G  ***
Готов к использованию, окрашен жёлтым, кр а с н а я  
крышка
2 мл О тр и ц а те л ь н ы й  ко н т р о л ь н ы й  образец В Э Б  Ig G  ***
Готов к использованию, окрашен жёлтым, ж е лтая 
крышка
* содерж ит 0,01 * /о  Т нм еросал
* *  содерж ит 0,01 %  Тим еросал + 0,01 %  Г е н т а м и ц н н а
сульф ат
* * *  содерж ит 0,1 %  К а т о н  +  0,1 %  Н а тр и я  азид
использование
П редупреж дение:
• Тимеросал токсичен! Не глотать. Избегать контакта с кожей^ 
и слизистыми оболочками!
Все компоненты человеческого происхождения^ 
используемые для производства этих реагентов, были| 
протестированы на антитела к ВИЧ и вирусу Гепатита-В на| 
методах 3'™  поколения и показали отрицательный результат. |
• ВЭБ IgG положительный контрольный образец признан ист 
инфицирующим культуру клеток. Тем не менее, со всеми| 
материалами необходимо обращаться как с потенциальной 
инфицирующими.
С та б и л ьн о сть и хранение
Реагенты стабильны до истечения срока годности, указаннога 
на этикетке при температуре хранения от 2 до 8 °С.
Н е и спо л ьзо ва ть ре а ге н ты  по и стечении ср о ка  годности!
П р и го то в л е н и е  реагентов 
Работа с раствором  для п р о м ы в к и
Развести промыеочный раствор  в соотнощении l:19f 
(например, 10 мл к 190мл) свежей дистиллированной апирогенноЩ 
водой;
дозировка: ~ 5 мл на одно определение ,
к р и с т а л л ы  в растворе и счезаю т п р и  н а гр ев а н и и  до 37 ®Q 
на вод яной бане4
С та б и л ьн о сть после разведения: 4 недели при 2 - 8 °С  
С т р и п ы  м н кр о т и т р а
Стрипы имеют вакуумную упаковку. Сразу после| 
распечатывания стрипа, другие стрипы должны быть запечатаны в| 
пластиковый контейнер вместе с по гл о ти тел е м  влаги, прилагаемы^ 
в наборе, и должны храниться при 2 -  8 °С
только лл?|
В А Ж Н О !
Этот тестовый набор предназначен 
использования в ин-витро диагностике.  '
• Не использовать вместе реагенты или стрипы из разных^
лотов. ;
• Не использовать совместно реагенты этого набора d
реагентами других производителей. ‘
■  Не использовать реагенты по истечении срока годности^ 
указанного на этикетке. ;
• Использовать только чистые пипетки, распределители li
лабораторный инвентарь. -
• Не менять местами откручивающиеся крышки от пузырько^
для реагентов во избежание перекрёстной контаминации |
• Плотно закрывать пузырьки с реагенто.м сразу поел 
использования во избежание испарения и микробного обсеменения.
• После первого вскрытия и последующего хранений 
проверять конъюгат и пузырьки с контрольными образцами щ  
микробную обсеменённость перед дальнейшим использованием.
• Во избежание перекрёстной контаминации и ложны 
результатов пипетировать образец пациента и распределять конъюга"^ 
аккуратно на дно ячеек, не расплёскивая их.
• Во время инкубации накрывать стрипы с микротитроу^ 
фольгой во избежание испарения.
П О Д Г О Т О В К А  О Б Р А З Ц А
Развести каждый образец пациента 1:100 в растворителе для 
образца IgG -,
Например, 10 мкл образца на 1  мл растворителя образца IgG 
(хорошо перемешать).
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300, 232-0211  e-mail: drgtech{^doU4J, httfi^/Avrnv^drgtecI^


--- стр. 81 ---
EPSTEIN-BARR VIRUS (EBV) - [VCA] IgG (EIA-3475)
П р им ечан ие: Положительные и отрицательные
контрольные образцы готовы к использованию и не должны более 
разводиться!
П О Д Г О Т О В К А  К  А Н А Л И З У
1 . Внимательно прочитайте инструкцию перед выполнением 
анализа. Надежность результатов зависит от четкого следования 
инструкциям.
2. О чен ь в а ж н о  довести все ко м п о н е н т ы  до ко м н а т н о й  
те м пе р а тур ы  перед началом  анализа!
3. Перед проведением анализа необходимо составить схему 
распределения и идентификации образцов и контрольных образцов с 
помощью формы вложенной в набор.
4. Выбрать необходимое кличество стрипов с микротитром 
или ячеек и поместить их в держатель.
5. Взять по меньшей мере:
1  ячейку (напр., А1) для образца вещества,
2 ячейки {напр., В1+С1) для отрицательного контрольного 
образца.
1  ячейку (напр., D1) для положительного контрольного 
образца.
П ользователь реш ает сам, н уж н о  л и  с та в и ть  ко н т р о л и  н пр о б ы  
па ци е н то в в д войном  ко л и че стве , п р и  необходим ости.
П роцедура анализа
Э тап 1
a) Пипетирование
100 мкл готового к использованию отрицательного 
контрольного образца в лунки В1 + С1,
100 мкл готового к использованию положительного 
контрольного образца в лунки 1  D1 и
100 мкл каждой разведенной пробы пациента в оставшиеся 
лунки согласно схеме распределения.
О ставьте л у н к у  А  пусто й  для образца вещ ества!
Н а кр о й те  л у н к и  п л е н ко й , п оставл яем ой с набором.
b) Инкубируйте 1  час п р и  37°С
во время инкубации приготовьте требуемое количество 
рабочего промывного раствора, достаточное для 
используемых лунок (см. ’’ Подготовка реагентов”)
c) Удалите содержимое ячейки (включите вытяжку) и 
промойте их три раза 300 мл промывочного раствора
Примечание.  Промывка очень важна! Недостаточная промывка приводит к 
низкой прецизионности (точности) и неправильным значениям частоты 
поглощения.
В заключение, осторожно удалите остатки жидкости, резко вытряхнув 
содержимое лунок на бумажное полотенце!
Э тап 2
a) Распределить 100 мкл к о н ъ ю га та  во все ячейки кр о м е  А 1 и 
покрыть их фольгой.
b) Инкубировать 30 м и н у т  п р и  ко м н а тн о й  те м пературе (20 -
25 °С ). Н е подвергать воздействию  п р я м ы х  с о л н е ч н ы х л уч ей !
c) П о в то р и ть  п р о м ы в к у  как описано в этапе 1  п.п. с).
Примечание: В заключение, осторожно удалите остатки 
жидкости, резко вытряхнув содержимое ячеек на бумажное 
полотенце, прежде чем приступать к следующему этапу!
Э тап 3
a) Распределить 100 мкл готового к использованию раствора 
ТМБ во все ячейки и снова накрьггь их.
b) Инкубировать ровно 15 м и н у т  п р и  ко м н а т н о й  
тем пературе (20 - 25 °С ) в темноте.
c) Распределить 100 мкл стоп-раствора (как и Т М Б ) во все 
ячейки.
Л ю бое синее о кр а ш и в а н и е  появивш ееся п р и  и н ку б а ц и и  
меняется на желтое.
Примечание:  положительные пробы пациентов с высоким f  
результатом могут привести к появлению темного осадка хромогена! |
И зм ерения
1. Н а стр о й те  ридер ELISA на нол ь, используя образец 
вещ ества (я ч е й ка  А1)
Если по техническим причинам ридер не может бьгть настроен! 
на «О» с помощью образца вещества в лунке А1, вычтите значение^ 
поглощения ячейки А1 из значений поглощения всех остальных! 
ячеек для получения точного результата. ;
2. И зм ерьте погл ощ ени е всех ячеек при 450 нм и запишите! 
значения для каждого контрольного образца и образца пациента в | 
схему распределения и и д е н ти ф и ка ц и и .
3. Рекомендовано считывание на двух длинах волн,]
используя 620 нм как волну сравнения. \
4 . Где возможно п о с ч и та ть  средние значения п о гл о щ е н и я! 
всех дубликатов.
В ерность пр о хож д е ни я анализа
Прохождение анализа может считаться верным, если; 
соблюдены следующие условия:
• Обращ вещества в А1: Значение поглощения ниж е 0.100. ^
• Отрицательный контрольный образец  в В1 и С1:^ 
Значение поглощения н и ж е  0.300.
• Положительный контрольный образец  в D1: должек| 
достигать значения поглощения р а вн о го  « C u t-o ff»  зна че ни ю  или| 
п р е в ы ш а ть  его.
Р езультаты
Среднее значение п о гл о щ е н и я  отрицательногс^
контрольного образца [M N ] i
Посчитать средние значения поглощения 2 определений! 
отрицательньЕх контрольных образцов (Напр., в В1/С1). '
П р и м е р : (0,080 + 0,090) / 2 = 0,085 = M N
C u t-o ff (Значение) [С О ]
Добавить 0,250 к IV IN .
С О  = M N  + 0,250
П рим ер: С О  = M N  + 0,250 = 0,085 + 0,250 = 0,335 :
Значение п о гл о щ е н и я  (среднее) проб ы  пациентам
пр е в ы ш а е т С О  более чем на 10 %  = >  п о л о ж и тел ь н о
Значение п о гл о щ е н и я  (среднее) пр о б ы  паци ента|
варьи руется о т 10 %  в ы ш е  до 10 %  н и ж е  С О  = >  серая зона = > | 
п о в то р и ть  анализ через 2 - 4  недели со све ж и м и  пробам и! 
паци ента
Р е зул ьтаты  в серой зоне п р и  по в то р н о м  анализе =>< 
о тр и ц а те л ьн о
Значение п о гл о щ е н и я  (среднее) пр о б ы  паци ента ниже^ 
значения С О  более чем на 10 %  => о тр и ц а те л ьн о
Р е зул ьтаты  в еди ницах N O V U M  [NUJ:
Значение поглощения (среднее) пробы пациента х 10
_________________________________________________  = [Единицы NOVUM = N q  j
СО
1.580 X 10
П р и м е р : 
_______________
0.335
И н те р п р е та ц и я  результатов
= 47 N11 (Е д и н и ц ы  N O V U M )
Cut-off значение: 
Серая зона: 
Отрицательно: 
Положительно:
10NU 
9 - 11NU 
<9NU 
> 1 1  NU
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495) 243-5621,243-5228,243-4028, факс (495) 243-9300,232-0211 e-mail:  drgtech@doLru. http://www.drstech.ru


--- стр. 82 ---
BRUCELLA IgG ELISA (EIA-3455)
ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ
DRG-BRUCELLA IgG ELISA -  это набор для 
качественного и полуколичественного определения 
антител класса IgG к Brucella в сыворотке человека.
ПРИНЦИП АНАЛИЗА
Микротитровальные стрипованные лунки в качестве 
твердой фазы покрыты антигенами Brucella. 
Разведенные образцы пациента и готовые к 
использованию контроли пипетируются в лунки. Во 
время инкубации специфичные к Brucella антитела 
положительных образцов и контролей связываются с 
иммобилизованными антигенами.
После промывки (для удаления несвязанных образцов и 
контролей) в лунки добавляется конъюгат антител IgG 
человека с меткой пероксидазы хрена. Во время второй 
инкубации этот конъюгат связывается специфически с 
антителами IgG, в результате чего формируются 
иммунные комплексы с ферментативными связями. 
После второй промывки (для удаления несвязанного 
конъюгата) сформированные иммунные комплексы (в 
случае положительного результата) определяются в 
ходе инкубации с субстратом ТМБ, в результате чего 
появляется голубое окрашивание. Голубое 
окрашивание меняется на желтое при добавлении 
серной кислоты для остановки индикаторной реакции. 
Интенсивность окрашивания прямо пропорциональна 
количеству в образце антител IgG специфичных к 
Brucella.
Абсорбция считывается при 450 нм на 
микропланшетном ELISA - ридере.
Обшее время инкубации: 1  час, 45 минут
РЕАГЕНТЫ И СОДЕРЖИМОЕ 
12 микротировальные лунки с Brucella (IgG)
8-луночные стрипы, покрытые антигенами 
Brucella;
вкл. 1  держатель для стрипов и 2 пленки для 
накрывания
1 00мл раствор для разведения образцов IgG
готов к использованию, желтого цвета pH 7.2 + 
0 .2,
12мл Стон-раствор, готов к использованию, 
серная к-та,, 0.2 моль/л 
Предупреждение:
Серная к-та раздражает глаза и кожу. Хранить в  
недоступном для детей месте, при контакте с глазами  
промыть водой и проконсультироваться с врачом!
50мл промывочный раствор*
концентрация: 2О х, 1000 мл; pH 7.2 ± 0,2
2x10мл конъюгат антител класса IgG к Brucella **
готов к употр., красного цвета, 
белый колпачок, кроличьи антитела IgG, 
конъюгированные пероксидазой 
12мл раствор ТМВ
готов к использованию 
3,3',5,5'-тетраметилбензидин
2 мл Положительный контроль Brucella IgG 
готов к использованию, желтого цвета, 
красный колпачок
2 мл Отрицательный контроль Brucella IgG ***
готов к использованию, желтого цвета, желтый 
колпачок
*  => содержит 0.01 % тимеросал
* * содержит 0.01 % тимеросал + 0.01 %
гентамицин сульфат
содержит 0.1 % катон + 0.1 % азид натрия 
Предупреждение
Тимеросал токсичен! Не глотать. Избегать контакта с 
кожей и слизистыми оболочками!
Все компоненты человеческого происхождения, 
используемые для производства этих реагентов, были 
протестированы на антитела к H1V и HBsAg на методах 3 
поколения и показали отрицательный результат. 
Положительный контроль IgG Brucella не инфицирован 
в клеточных культурах.
Тем не менее, со всеми материалами необходимо 
обращаться как с потенциально инфицированными
Стабильность и хранение
Реагенты стабильны до даты срока годности, указанной 
на этикетке при хранении при 2 -8  °С.
Не использовать реагенты после истечения срока 
годности!
ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ
Рабочий промывочный раствор
Развести промывочный раствор 1+19 (напр. 10 мл + 190 
мл) свежей, очищенной от бактерий дистиллированной 
водой; потребление: мл на определение
кристаллы в растворе исчезают при нагревании до 
37 °С на водяной бане.
Стабильность после разведения: 4 недели при 2-^8 
°С
Микротитровальные стрипы
Стрипы имеют вакуумную упаковку. Сразу после 
открытия упаковки и удаления стрипов оставшиеся 
стрипы необходимо запаковать герметично в 
пластиковую упаковку с влагопоглотителем, 
поставляемым в наборе и хранить при 2 ^ 8 °С.
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG International, Inc.»
тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 83 ---
Принцип исследования
Анти-Кардиолипиновый скрининг -  это непрямой твердофазный ферментный иммунометрический анализ. Он 
предназначен для полуколичественного определения IgG, IgA, и IgM анти-кардиолипин-аутоантител. 
Высокоочищенный кардиолипин прикреплен к твердофазной микротитровальной лунке и обогащен человеческим 
Ь2-Гликопротеином I (b2GPI). Ь2-Гликопротеин I -  это кофактор связывания анти-кардиолипиновых антител. Эта 
процедура гарантирует получение результата независимо от эндогенного b2GPI. Микротитровальная панель может 
быть разделена на 12 модулей, по 8 лунок в каждом, или может быть использована целиком на 96 определений. 
Каждая лунка может быть отделена от модуля. Связывание присутствующих аутоантител, образование «сэндвича» 
и ферментная цветная реакция происходят в течение трех фаз анализа:
Фаза 1:
Калибраторы, контроли и заранее разведенные образцы пациента пипетируются в лунки микроплашки. Любое 
присутствующее антитело связывается с внутренней поверхностью лунки. После 30 минут инкубации микроплашка 
промывается буфером для удаления нереакционных компонентов сыворотки.
Фаза 2:
Конъюгат анти-человеческих IgG (или IgM) и пероксидазы хрена пипетируется в лунки микроплашки для 
распознавания IgG (или IgM) аутоантител, связанных с иммобилизированными антигенами. После 1 5  минут 
инкубации лишний конъюгат, который не связался специфически, вымывается буфером.
Фаза 3:
В  лунки раскапывается раствор субстрата ТМБ (3’,3’,5’,5’-Тетраметилбензидин). В течение 15 минут инкубации 
цвет реакционной смеси меняется на синий. Добавление 1М  соляной кислоты, стоп-раствора, останавливает 
развитие окраски. Цвет раствора меняется на желтый. Интенсивность окрашивания прямо пропорциональна 
концентрации IgG (соотв. IgM) антител, присутствующих в исходном образце. Для того, чтобы считать оптическую 
плотность, необходим микропланшетный ридер с фильтром на 450 нм. Бихроматическое считывание 
рекомендуется при 600-690 нм.
Клиническая значимость
Кардиолипин (дифосфатидилглицерин) относится к группе отрицательно заряженных фосфолипидов. Антитела к 
этим фосфолипидам могут быть (правда, совсем не обязательно) идентичны антикоагулянтам волчанки (АВ), 
классу антител, ответственных за замедление свертывания крови. Аутоантитела к кардиолипину (КЛ) присутствуют 
при различных аутоиммунных заболеваний: системная красная волчанка (СКВ), тромбоз, тромбоцитопения, потеря 
плода. Также они обнаруживаются при цереброваскулярной недостаточности, церебральной ишемии или хорее и 
инфаркте миокарда. Эти антитела (АТ) встречаются в виде иммуноглобулинов класса G, М и А. Определение IgM 
ценно при диагностике аутоиммунных заболеваний в начальной стадии, в то время как IgG обнаруживаются во 
время прогрессирующих стадий проявившихся аутоиммунных заболеваний. Анти-кадиолипи-IgA часто связаны с 
IgG. Их обнаружение наиболее показательно при тромбозе и выкидышах. Основные заболевания связанные с АТ к 
КЛ -  это глубокий бенозный тромбоз и другие тромбозаболеваения. АТ к КЛ обнаруживаются примерно в 60% 
случаев у пациентов с СКВ. Присутствие этих антител -  большой фактор риска развития тромбоэмболии и 
тромбоцитопении. В гинекологии, АТ к КЛ хорошо зарекомендовали себя как индикатор повторного аборта или 
внутриутробной смерти. Более того, обычное исследование на антитела к кардиолипину рекомендуется при 
рискованной беременности женщин с СКВ или тромбозом. Количественное измерение этих антител, особенно IgG,
- очень важный параметр с высокой специфичностью при мониторинге лечения. Присутствие антител к 
кардиолипину описано также при неврологических заболеваниях. Например, церебральный тромбоз может вызвать 
ишемию. Нетромбозные заболевания ЦНС, как, например, хорея или эпилепсия, также связаны с анти- 
кардиолипиновыми антителами. Тест на данные антитела не показывает корреляции со специфическими 
антителами при пробе на сифилис (Реагиновый тест). Также, отсутствует перекрестная реактивность с антителами к 
ДНК, так как оба типа антител принадлежат к разным популяциям. Недавние исследования показали, что антитела 
к кардиолипину требуют присутствия в плазме/сыворотке кофактора для связывания кардиолипина. Кофактор был 
назван р2-гликопротеин I (p2GPI), также называемый аполипопротеин Н, р2-глобулин весом 50 кДа который 
появляется в плазме на уровне 200 мкг/мл. P2GPI связан ин виво с липопротеинами, амниотическими 
фосфолипидами, тромбоцитами и митохондриями. Было обнаружено, что р2-Гликопротеин I ингибирует 
внутренний коагуляционный путь и АДФ-связанную агрегацию тромбоцитов. Поэтому, предполагается, что P2GPI 
влияет на регуляцию коагуляции крови. Присутствие p2GPI просто необходимо для связывания АТ к КЛ и самого 
кардиолипина. Недавние исследования показали, что АТ к КЛ распознают как сам КЛ так и его комплекс с P2GPI.
121248 Москва. Набережная Тараса Шевченко, д. 3. Московское представительство «DRC International,
Inc.»
Анти-Кардиолипин IgG^gM (EIA-3587)
тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drqtech@dol.ru
_____ http://www.drgtech.ru


--- стр. 84 ---
Для ИФА-тестов необходимые концентрации P2GPI могут быть получены или путем добавления 
акрилонитрилбутаденстирола/сыворотки эмбриона теленка (АБС/СЭТ) либо покрытием лунок P2GPI. Последняя 
версия обеспечивает постоянное качество и количество получаемых результатов. Показания к определению анти- 
кардиолипиновых антител:
-  СКВ-Тромбоз
-  Тромбоцитопения -  Ишемия головного мозга
-  Хорея -  Эпилепсия
-  Повторный аборт -  Внутриутробная смерть 
СПЕЦИФИЧНОСТЬ
Микропланшет покрыт смесью высокоочищенных бычьего Кардиолипина и человеческим р2-Гликопротеином I. 
Особый процесс нанесения, разработанный производителем, гарантирует нативную иммуногенную структуру КЛ 
после иммобилизации на твердой фазе. Анти-КЛ ИФА специфичен к аутоантителам против КЛ или его комплексу 
с р2-Гликопротеином I. Перекрестной реактивности к анти-ДНК антителам и к антителам, появляющимся при 
сифилисе, обнаружено не было.
КАЛИБРАЦИЯ
Система анализа откалибрована по всемирно признанной референс сыворотке от E.N. Harris, Луисвилль, так как 
больше не было доступно никаких других международных стандартов.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Только для диагностики in vitro. Необходимо строго придерживаться этапов и порядка пипетирования, 
приведенных в данной инструкции. Рекомендуется проведение контроля качества. Все реагенты хранить при 2 - 8  
°С в оригинальной упаковке. Не использовать реагенты из наборов с разными номерами лотов. Не использовать 
компоненты набора после даты срока годности, указанной на упаковке и флаконах. Перед использованием довести 
компоненты до комнатной температуры и аккуратно смешать. При обращении с компонентами набора необходимо 
принимать следующие меры предосторожности:
-  запрещается есть, пить и курить в помещениях, где находятся реагенты и образцы
-  не пипетировать реагенты ртом
-  использовать одноразовые перчатки, после проведения анализа тщательно мыть руки.
Компоненты набора, содержащие продукты человеческого происхождения были протестированы и признаны не 
содержащими поверхностный антиген гепатита В и антитела ВИЧ. Однако не существует признанных методов, 
гарантирующих, что продукты человеческой крови не инфицированы. Все реагенты, содержащие продукты 
человеческого происхождения и образцы пациентов должны рассматриваться как потенциально инфицированные. 
Избегать контакта с ТМБ (3,3',5,5'-тетраметилбензидин). При попадании ТМБ на кожу тщательно промыть водой с 
мылом. Стоп-раствор содержит соляную кислоту. При попадании на кожу тщательно промыть водой и обратиться к 
врачу. Избегать контакта буферного раствора Пероксида и легко окисляемых материалов: экстремально высокая 
температура окисления может спровоцировать спонтанное возгарание
КОМПОНЕНТЫ НАБОРА
Количество 96 опр.
Микротитровальная панель из 12 модулей по 8 лунок каждый,...................................................................................I
покрыта Кардиолипином и сатурирована человеческим р2-гликопротеином I
Контроли с антиКЛ АТ IgG/I^/IgA класса............................................................................ 4 флакона, 1.5 мл каждый
в ФСБ/АБС матрице, содержащие:
Отрицательный Контроль (А) 3,3 Е/мл
Cut-Off Контроль (В) 1 0 Е/мл
Положительный Контроль (С) 30 Е/мл
Сильно Положительный Контроль (D) 90 Е/мл
Буфер антикардиолипиновый для образцов, желтый, концентрат...........................................................1  флакон, 20 мл
Раствор ферментного конъюгата (ярко красный).................................................................................. 1  флакон, 15 мл
Содержит смесь поликлональных кроличьих анти-h-IgO-IgG, анти-h-IgM-IgG, анти-h-IgA-IgG.
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRC International,
Inc.»
Анти-Кардиолипин IgG/IgM (EIA-3587)
тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drqtech@dol.ru
http: / / www.drgtech. ru


--- стр. 85 ---
Каждое антитело мечено пероксидазой хрена
ТМБ субстратный раствор.......................................................................................................  1  флакон, 15 мл
Стоп-раствор (1 М соляная кислота)....................................................................................  1  флакон, 15 мл
Промывочный буферный раствор, концентрат.....................................................................1  флакон, 20 мл
КОНТРОЛИ
Набор из двух контролей входит в состав набора.
ТЕХНИЧЕС1СИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Образцы: сыворотка или плазма
Необходимый объем образца: 1 0 мкл образца развести 1:1 00 буфером
100 мкл предварительно разведенного образца на одно определение 
Общее время инкубации: 60 минут при комнатной температуре (20 - 28 °С)
Хранение: при 2 - 8 °С
Срок годности: 12 месяцев от даты изготовления или до даты срока годности, указанной на
упаковке
Количество лунок: 96
НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЫ 
Оборудование
-  Спектрофотометр 450 нм
-  Вращательная мещалка
-  Пипетки на 10 мкл, 100 мкл и 1000 мкл 
Подготовка реагентов
-  Дистиллированная вода
-  Мерный цилиндр на 100 и 1000 мл
-  Пластиковый контейнер для хранения промывочного раствора 
Не обязательно
-  Мультиканальная пипетка
-  или пипетка с памятью на 100 мкл
-  Программа для обработки данных
ЗАБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ
Для определения АТ к КЛ подходят сыворотка или плазма. Все образцы сыворотки и плазмы развести 1  :  100 
буфером для образцов. Таким образом, 10 мкл образца могут быть разведены 1000 мкл буфера. Голодание пациента 
перед забором крови и какая-либо специальная подготовка не требуются. Забрать кровь венепункщтей и отделить 
сыворотку центрифугированием после свертывания. Образцы можно хранить при 2 - 8 °С до 5  дней. Для более 
длительного хранения до 6 месяцев необходима заморозка при -20 °С. Не замораживать образцы повторно после 
разморозки. Ни билирубин, ни гемолиз не влияют в значительной степени на процедуру.
ПОДГОТОВКА И ХРАНЕНИЕ РЕАГЕНТОВ
Все компоненты набора представлены в жидком виде и готовы к использованию, кроме буфера для образцов и 
промывочного буфера. При хранении при 2 - 8 °С компоненты стабильны 30 дней после вскрытия или до даты 
срока годности, указанной на флаконе. Неиспользованные модули микропанели должны храниться при 2 - 8 °С с 
влагопоглотителями в плотно закрытой пластиковой упаковке.
Подготовка буфера для образцов
Развести содержимое каждого флакона концентрата буфера (5х) дистиллированной водой до общего объема 100 мл 
перед использованием. Хранить в холодильнике: стабильны при 2 - 8 “С до 30 дней после приготовления или до 
даты срока годности, указанной на флаконе.
Подготовка промывочного буферного раствора
Анти-Кардиолипин IgGЯgM (EIA-3587)
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG International,
Inc.»
тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drqtech@dol.ru
______ ______ _____ http://www.drgtech.ru


--- стр. 86 ---
Развести содержимое каждого флакона концентрата промывочного буферного раствора (5О х) дистиллированной 
водой до общего объема 1000 мл перед использованием. Хранить в холодильнике: стабилен при 2 - 8 до 30 дней 
или до даты срока годности, указанной на флаконе.
Внимание; Контрольная сыворотка или пулы в анализе должны использоваться как неизвестные образцы для того, 
чтобы проверить точность набора. Для всех контролей допустимые концентрации указаны на этикетке. Используя 
эти концентрации, может быть построена калибровочная кривая, с помощью которой результаты пациентов можно 
интерпретировать полуколичественно.
Пипетированне
Для раскапывания использовать пипетки со сменными наконечниками. Пипетировать на дно лунки. Для каждого 
образца использовать новый наконечник. Образцы с ожидаемыми высокими концентрациями Должны 
дополнительно разводиться буфером для образцов. Дополнительное разведение необходимо учитывать при расчете 
результатов.
ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
Не использовать компоненты из наборов с разными номерами лотов. Довести все компоненты до комнатной 
температуры перед использованием. Развести образцы пациентов 1:100 буфером для образцов перед 
использованием. Например, 10 мкл образца развести 1000 мкл буфера. Хорошо перемещать. Калибраторы и  
контроли готовы к использованию и не требуют разведения.
1 . Подготовить необходимое количество модулей для пипетирования калибраторов, контролей и предварительно
Анти-Кардиолипин IgG/IgM (EIA-3587)
1 2 3 4 5 6
А SA SE PI P5
В SA SE PI P5
С SB SF P2 P...
D SB SF P2 P...
Е 1 s c Cl P3
F sc Cl P3
G SD C2 P4
Н SD C2 P4
2.
SA - SF: стандарты А - F 
Р1, Р2... образцы пациента 1 , 2 ... 
С1: положительный контроль 
С2: отрицательный контроль
Для определения аутоантител одного класса раскапать 100 мкл калибраторов, контролей и образцов в 
лунки. Для определения IgG и IgM аутоантител калибраторы, контроли и образцы необходимо раскапывать 
дважды.
Инкубировать 30 минут при комнатной температуре (20 - 28 °С).
Удалить содержимое лунок и промыть 3 раза 300 мкл промывочного раствора.
Раскапать 100 мкл раствора ферментного конъюгата в каждую лунку.
Инкубировать 15 минут при комнатной температуре.
Удалить содержимое лунок и промыть 3 раза 300 мкл промывочного раствора.
Раскапать 100 мкл субстрат-раствора ТМБ в каждую лунку.
Инкубировать 15 минут при комнатной температуре.
10. Добавить 100 мкл стон-раствора в каждую лунку и оставить на 5 минут.
11. Считать оптическую плотность 450 нм и подсчитать результаты. Цвет стабилен в течение 30 минут. 
Необходимо считать оптическую плотность за это время.
ПОДСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
Получение результатов теста достигается прямым сравнением оптических плотностей проб пациентов с 
оптическими плотностями контрольных образцов. Пробы пациента, у которых СП выше, чем СП cut-off контроля, 
расцениваются положительными.
Отрицательный: СП Пробы Пациента < СП Cut-off Контроля
Положительный: СП Пробы Пациента > СП Cut-off Контроля
Сильно Положительный: ОП Пробы Пациента > ОПСильно Положительного Контроля
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG International,
Inc.»
тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243->4028, факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drqtech(g>dol.ru
___ http://www.drgtech.ru _____ ______


--- стр. 87 ---
Для полуколичественного подсчета результатов пациента концентрация контролей может быть использована для 
построения калибровочной кривой. Для Анти-КЛ скрининга рекомендуется использовать 4-параметровую функцию 
с линейно-логарифмическими координатами для оптической плотности и концентрации. Концентрация 
неизвестных образцов может быть посчитана по этой кривой. Дальнейшую дифференциацию и типирование нужно 
проводить на полностью количественных наборах для определения Анти-КЛ IgG, IgM и/или IgA. Данный скрин- 
тест дает лишь суммарный результат по аутоантителам. Из-за эффектов аддитивности образцы пациента, 
содержащие 2 или 3 класса антител, с положительным результатом по КЛ-скринингу, могут дать отрицательный 
результат по отдельным тестам на каждый конкретный класс АТ (IgG, IgM или IgA).
ХАРАКТЕРИСТИКИ ИССЛЕДОВАНИЯ 
Паралеллизм
Выбранные сыворотки с IgG, IgM и IgA антителами были разведены буфером для образцов и протестированы на 
наборе для Анти-КЛ скрининга.
Анти-Кардиолипин IgGAgM (EIA-3587)
Анти-Кардиолипин Образец Разведение Наблюдаемый [Е/мл] Ожидаемый 1Е/мл] н/о
Скрининг 1 1 200 47,7
1 400 24,0 23,9 100 %
1 800 11,5 11,9 97%
1 1600 6,0 6,0 100%
1 3200 2,7 3,0 90%
Скрининг 2 1 100 138,0
1 200 69,7 69,0 101 %
1 400 33,5 34,5 97%
1 800 15,9 17,3 92%
1 1600 7,8 8,6 91%
1 3200 4,1 4,3 95%
Точность
Статистика по Коэффициенту Вариации (КВ) была посчитана для каждого из четырех образцов из результатов 22 
определений за одну постановку для анализа точности внутри постановки (интра-анализ). Межпостановочная
Интра-анализ
Образец № Среднее [Е/мл] КВ [%]
1 4,4 13,3
2 14,8 5,2
3 42,1 4,1
4 70,2 6,6
Интер-анализ
Образец № Среднее [Е/мл] КВ [% ]
1 5,8 12,4
2 15,8 8,1
3 43,7 4,7
4 75,9 2,5
ЛИТЕРАТУРА
1 . Hughes, G.R.V., Harris, E.N. and Gharavi, A.E. The Anticardiolipin Syndrome. The Journal of Rheumatology 1986; 13, 
3:486-489.
2. Domke, N. and Siegert, G. Phospholipidantikбфer and ihre klinische Bedeutung. Zeitschrift for Klinische Medizin 
1988; Heft 16: 1399- 1401.
3. Triplett, D.A. Coagulation Assays for the Lupus Anticoagulant: Review and Critique of CurrentMethodology. Stroke 
1992; Vol 23, No 2 [suppl I]: I-l 1  -1-14.
4. Harris, E.N. Serological Detection of Antiphospholipid Antibodies. Stroke 1992; Vol 23, No 2 [suppl I]: 1 -3  -1-6.
5. Matsuda, J. et al. Detection of Beta-2-Glycoprotein-I-Dependend Antiphospholipid Antibodies and Anti-Beta-2- 
Glycoprotein-I Antibody in Patients with Systemic Lupus Erythematosus and in Patients with Syphilis. Int. Arch. 
Allergy Immunol. 1994; 103: 239 - 244.
6. Kalunian, K.C. et al. Clinical Significante of a Single Test for Anti-Cardiolipin Antibodies in Patients with Systemic 
Lupus Erythematosus. The Americam Journal of Medicine 1988; Vol 85: 602 - 608.
7. Khalili, A. and Cooper, R.C. A study of immune responses to Myelin and Cardiolipin in patients with Systemic Lupus 
Erythematosus (SLE). Clinical and Experimental Immunology 1991; 85: 365 - 372.
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG International,
Inc.»
тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drgtech@dol.ru
_____ ________ http://www.drgtech.ru ____ ____


--- стр. 88 ---
Анти-Кардиолипин IgGAgM (EIA-3587)
□ересмотреио 15.08.2003
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG Internationa),
Inc.»
тел. (495) 243-5621. 243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mall: drqtech<g>dol.ru
_____________________________________http: /  / www.drgtech. ru


--- стр. 94 ---
Только для диагностического использования in vitro
Иммуноферментный анализ для количественного определения Эстрона в сыворотке или плазме человека.
ВВЕДЕНИЕ
Эстрон (З-гидрокси-1,2,3 9 {10)-эстратриен-17-ОН) -  это, помимо эстрадиола и эстриола, один из трех главных обычно обнаруживаемых 
эстрогенов. Эстрогены влияют на развитие женских половых органов и вторичных половых признаков. Результаты анализа показывают, 
что эстрогенная активность эстрона занчительно меньше, чем у эстрадиола. Однако физиологическая роль эндогенного эстрона до 
конца не выяснена.
Эстрон продуцируется преимущественно из андростендиона. У женщин до менопаузы 50% эстрона секретируется яичниками. У детей 
п ре пубертатного возраста, мужчин, а также женщин в постменопаузный период главным источником эстрона является периферическая 
тканевая конверсия. Во время фолликулярной фазы менструального цикла уровень эстрона повышается с четким пиком на 13-й день. 
Пик длится недолго и к 16-ому дню цикла уровень снова становится низким. Второй пик во время лютеиновой фазы появляется 
примерно на 21-й день цикла. Если оплодотворения не произошло, выработка эстрона снова снижается. Эти изменения концентрации 
эстрона кореллируют с эстрадиолом. До 4 -  6 недели беременности эстрон вырабатывается материнским организмом: яичниками, 
надпочечниками, периферической конверсией; таким образом, оставаясь в пределах нормальных значений. После 6-10  недели 
значения резко подскакивают из-за начала секреции эстрона плацентой. После менопаузы уровень эстрона снижается не так быстро, как 
уровень эстрадиола. У постменопаусальных женщин эстрон -  это главный эстроген, У мужчин концентрация эстрона по некоторым 
данным растет с возрастом по сравнению с 17-ОН-прогестероном, который ведет себя наоборот. У лременопаузных женщин высокий 
уровень эстрона может быть при повышенной конверсии андростендиона во время синдроме поликистозного яичника или его опухоли.
ПРИНЦИП АНАЛИЗА
Данный набор представляет собой твердофазный иммуносорбентный ферментный набор (ELISA), основанный на принципе 
конкурентного связывания.
Микротитровальные лунки покрыты антителами против антигена молекулы эстрона. Эндогенный эстрон в образце пациента конкурирует 
с конъюгатом «эстрон - пероксидаза хрена» за связывание антитела. После промывки несаязавшийся конъюгат отмывается.
Количество связавшегося конъюгата обратно пропорционально количеству эстрона в образце. После добавления субстрата 
интенсивность окрашивания обратно пропорциональна концентрации эстрона в образце.
СОСТАВ НАБОРА
1. Планшета с микролунками, покрытыми поликлональными антителами к эстрону, 12x8 стрипов (разделяемые), 96 лунок.
2.  Набор стандартов, 6 флаконов по 1 мл.
Концентрации; 0 ,15, 50, 200, 800, 2000 пг/мл 
Пересчет; 1  пг/мл х 3,69 = п мол ь/л
3. Ферментный конъюгат, 1  флакон, 14 мл.
4. Контроль, 1  флакон, 1,0 мл.
5. Субстрат - ТМВ, 1  флакон, 25 мл.
6.  Стоп-раствор, 0,5М H 2SO4, 14 мл.
7. Промывочный буфер, 1  флакон, концентрированный, 40Х, 30 мл.
Внимание: дополнительный нулевой стандарт имеется в наличии по требованию.
МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ, НО НЕ ВКЛЮЧЕННЫЕ В НАБОР
1. Микроплашечный ридер(450±10 нм), например DRG E-L1ZA МАТ 3000
2. Прецизионные микропипетки с одноразовыми наконечниками.
3. Абсорбирубщая бумага
4. Дистиллированная вода
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ НАБОРА
При температуре хранения от 2 до 8°С невскрытые реагенты сохраняют активность до истечения срока годности. После истечения этой 
даты реагенты использовать не рекомендуется.
После восстановления любой раствор стандарта может храниться при 2 -  8® С  в течение 8 дней. При -20°С раствор может храниться 
значительно дольше.
Конъюгат, субстрат, промывочный буфет и нулевой стандарт должны храниться при 2 -  8“С.
Микропланшета должна храниться при 2 -  8“С. После вскрытия фольгированного пакета пакет необходимо хранить плотно закрытым. 
Иммуноактивность лунок сохраняется приблизительно в течение 6 недель при хранении во вскрытом, но плотно закрытом пакете с 
влагопоглотителем,
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ ДЛЯ ПОЛЬЗОВАТЕЛЕЙ 
ВНИМАНИЕ!
1 . Не существует методов тестирования, на 100% гарантирующих отсутствие компонентов вируса Гепатита Б, ВИЧ (HIV/HTLV-lll/LAV), 
или других инфекций. Поэтому все продукты, содержащие компоненты человеческой крови, должны рассматриваться как потенциально 
инфицированные. Следовательно, при работе с ними необходимо соблюдать все меры предосторожности, установленные в 
лабораторной практике.
2. Избегайте контакта кожи со Стоп-раствором -  0,5М НгЗОд.Это может вызвать раздражения и ожоги кожи.
3. Немедленно после использования закройте реагенты крышками. Не путайте крышки от реагентов.
4. Растворы, содержавшие добавки или консерванты, такие как азид соды, не должны использоваться в ферментной реакции.
5. Только для диагностики ин-витро.
6.  Не используйте в исследовании компоненты из наборов разных Лотов.
ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ
Перед использованием необходимо довести все реагенты и  необходимое количество стрипов до комнатной температуры.
Промывочный раствор
Развести 30 мл концентрированного промывочного раствора с 1170 мл. деионизированной воды, общий объем 1200 мл. Разбавленный 
промывочный раствор хранится в течение 2 недель при комнатной температуре.
Утилизация набора
DRG Эстрон (EIA-4174)
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG International, Inc.» •
тел. (495) 243-5621,243-5228» 243-4028, факс (495) 243-9300,232-0211 e-mail: drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 95 ---
Утилизацию набора необходимо осуществлять в соответствие с правилами национальной безопасности. Вся необходимая информация 
о данном наборе предоставлена в Паспорте безопасности данных.
Поврежденные наборы
В случае серьезного повреждения набора или его компонентов, необходимо проинформировать об этом компанию ДРГ в письменной 
форме не позднее 1  недели после получения набора. Не рекомендуется использовать поврежденные наборы.
Образцы
Сыворотка или плазма (ЭДТА-, гепарин-, или цитрат плазма) могут использоваться в данном исследовании.
Не использовать гемолитические, желтушные или липидемические образцы.
ЗАБОР ОБРАЗЦОВ 
Сыворотка
Забрать кровь стандартным методом венепункции, дать свернуться и отделить сыворотку центрифугированием при комнатной 
температуре.
Плазма
Собрать кровь в центрифужные пробирки с антикоагулянтом и сразу же после забора центрифугировать.
Хранение образцов
Образцы должны быть закрьп-ыми, их можно хранить в течение 5 дней при температуре 2-8°С, для хранения в течении более 
длительного периода они должны быть заморожены до -20°С или ниже. Допускается только однократная заморозка.
Разведение образцов
В случае если в исходном анализе концентрация в образце больше, чем в наивысшем стандарте, образцы необходимо разводить в 10 
или 100 раз нулевым стандартом и исследовать повторно, как описано в процедуре исследования.
Для подсчета концентраций необходимо принимать во внимание данный фа 1аор разведения образцов.
Например:
а) разведение 1:10: 10 мкл Сыворотки + 90 мкл Нулевого стандарта (тщательно перемешать)
б) разведение 1:100: 10 мкл раствора а) 1:10 + 90 мкл Нулевой стандарт (тщательно перемешать)
ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ 
Общие замечания
• Все реагенты и образцы перед началом исследования должны иметь комнатную температуру. Все реагенты должны быть 
перемешаны без образования пены.
• После начала исследования все шаги должны быть завершены без остановок
• Для каждого образца, реагента и стандарта необходимо использовать новые одноразовые наконечники пипеток.
• Абсорбция - это функция, линейно пропорциональная инкубационному времени и температуре. До начала исследования 
рекомендуется приготовить все реагенты, снять крышки, установить в держателе необходимые лунки, и  т.д. Этим Вы обеспечите равное 
время для каждого раскапывания без остановок.
• Как правило, ферментная реакция линейно пропорциональна времени и температуре.
Последовательность действий
Все стандарты, образцы и  контроли необходимо исследовать в дублях с тем, чтобы обеспечить одинаковые условия исследования.
1. Установите необходимое количество лунок в держателе.
2. Раскапать по 50 мкл стандартов, контрол ей и образцов новыми одноразовыми наконечниками в соответствующие лунки.
3. Раскапать по 100 мкл конъюгата в каждую лунку.
4. Тщательно перемешать в течение 10 секунд.
5. Инкубируйте в течение 60 мин при комнатной температуре, НЕ НАКРЫВАЯ ПЛАШКУ.
6. Резко вытряхните содержимое лунок.
Промыть лунки 4 раза разведенным промывочным раствором (400 мкл/лунка)
Резко постучите плашкой об абсорбирующую бумагу, чтобы удалить остатки влаги.
Важно;
Точность и чувствительность данного анализа зависит от четко выполненной процедуры промывки!
7. Раскапать 150 мкл субстрата в каждую лунку.
8. Инкубировать в течение 30 минут при комнатной температуре.
9. Остановить ферментную реакцию добавлением 50 мкл Стоп-раствора в каждую лунку.
10. Считать оптическую плотность при 450±10 нм. микропланшетным ридером в течение 10 минут после добавления Стоп-раствора. 
ПОДСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
1. Подсчитать средние значения абсорбции для каждого стандарта, контроля и образца пациента.
2. Постройте стандартную кривую соотношением средней абсорбции (У) каждого референс-стандарта к соответствующей 
концентрации (X) в нг/мл.
3. Используя среднюю абсорбцию каждого образца, определите соответствующую величину простой интерполяцией от этой 
стандартной кривой, при необходимости умножая на коэффициент разведения.
4. Автоматический метод: компьютерные программы, использующие кубический сплайн, 4 PL (4 параметра материально-технического 
обеспечения) или логит преобразование,
5. Концентрацию образцов можно считывать непосредственно со стандартной кривой. Образцы с концентрацией, превышающей 
самый высокий стандарт, необходимо разводить еще раз. Для подсчета концентраций необходимо принимать во внимание данный 
фактор разведения.
Ниже приведен пример стандартной кривой Эстрона ELISA.
DRG Эстрон (EIA-4174)
Стандарт Оптические величины (450 нм)
Стандарт 0 (0 пг/мл) 1,80
Стандарт 1  (15пг/мл) 1,57
Стандарт 2 (50 пг/мл) 1,29
Стандарт 3 (200 пг/мл) 0,93
Стандарт 4 (800 пг/мл) 0,55
Стандарт 5 (2000 пг/мл) 0,36
121248 М о скв а , Н абережная Тараса Ш е в ч е н ко , д. 3, М о ско в ско е  представительство «DRG Iflte rn a tio n ^ i, 1ос.» ^ 
тел. (495) 243-5621,243-5228, 243~4028, ф акс (495) 243-9300,232-0211 e-m ail: d r2te ch (^d o l.ru  h ttp ;//w w w .drgtech.ru


--- стр. 96 ---
DRG Эстрон (EIA-4174)
Ожидаемые величины
Для каждой лаборатории рекомендуется устанавливать свои собственные нормальные и ненормальные значения.
Население 5% процентиль 95% процентиль
Женщины до менопаузы 18 пг/мл 183 пг/мл
Женщины после менопаузы 16 пг/мл 83 пг/мл
ХАРАКТЕРИСТИКИ ИССЛЕДОВАНИЯ:
Динамический диапазон исследования
Диапазон данного исследования варьируется от О  -  2000 пг/мл. 
Специфичность антител (кросс-реактивность)
Следующие вещества были проанализированы на перекрестную реаю-ивность.
Компонент
Эстрон
Эстриол
Эстрадиол
Тестостерон
Прогестерон
Кросс-реакция {%)
100
< 0,1
< 0,1
< 0,1
< 0,1
Аналитическая чувствительность
Аналитическая чувствительность была подсчитана с помощью среднего значения + 2 стандартных отклонения двадцати повторных 
анализов нулевого стандарта, и составила <6,3 пг/мл.
Точность
Образец № Среднее 
значение (пг/мл)
Козф.
Вариации(%)
1 20 15,11 9,3
2 20 110,00 8,46
3 20 265,62 4,46
Образец № Среднее 
значение (пг/мл)
Коэф.
Вариации (%)
1 12 14,98 12,87
2 12 112,87 7,50
3 12 280,85 7,37
Контроль качества
Рекомендуется использовать контрольные образцы в соотеетствие с нормами федеральных и государственных прав. Использование 
контрольных образцов обеспечивает достоверность результатов анализа. Используйте контроли на нормальном и патологическом 
уровнях.
Контроли и соответствующие результаты Лаборатории контроля качества указаны в сертификате контроля качества, который 
прилагается к набору. Значения и диапазоны, указанные в сертификате контроля качества всегда соответствуют данному лоту набора и 
должны использоваться для прямого сравнения результатов.
Так же рекомендуется использовать национальные или международные программы оценки качества для обеспечения точных 
результатов анализа.
Используйте соответствующие статистические методы для анализа контрольных значений и  отклонений. Если результаты анализа не 
соответствуют установленным допустимым диапазонам контрольных материалов, результаты пациента необходимо рассматривать как 
недействительные. В этом случае, проверьте следующие технические данные; приборы для пипетирования, фотометр, срок годности 
реагентов, условия хранения и инкубации, аспирационные и промывочные методы.
В случае проверки всех выше перечисленных пунетов вы не обнаружили никаких неисправностей, обратитесь к вашему дистрибьютеру 
или же непосредственно в компанию DRG.
Воспроизведение
Образцы были обогащены путем добавления раствора зстрона с концентрацией 1:1. Ожидаемые значения подсчитаны с помощью 
добавления половины значений, установленных для неразведенных образцов и половины значений известных растворов. Процент 
воспроизведения подсчитан путем умножения коэффициента измерений и  ожидаемых значений на 100.
Образец Добавленная Измеряемые Ожидаемые Воспроизведение
концентрация 1:1 концентрации концентрации %
(v/v) (пг/мл) (пг/мл) (пг/мл)
- 20,05
2000,00 963,33 1010,02 92,7
1 800,00 454,37 410,02 110,8
200,00 124,60 110,02 113,2
50,00 39,10 35,02 111,6
О
- 209,42
2000,00 1124,40 1104,71 101,8
121248 М осква, Н абереж ная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG Internationa^ 1пс.» ^
тел. (495) 243-5621,243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300,232-0211 e-mail: drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 97 ---
DRG Эстрон (EIA-4174)
800,00
200,00
50,00
482,02
198,87
115,14
504.71
204.71
129.71
95,5
97,1
88,8
- 130,80
2000,00 1144,18 1065,40 107,4
3 800,00 517,14 465,40 111,1
200,00 189,00 165,40 114,3
50,00 101,00 90,40 111,7
Линейность
Образец Разведение Измеряемые Воспроизведение
концентрации (пг/мл) (%)
1 Неразведенная 540,79
1:2 243,63 90,1
1:4 117,77 87,1
1:8 60,51 89,5
1:16 29,52 87,3
2 Неразведенная 130,00
1:2 64,70 99,5
1:4 28,10 86,5
1:8 18,30 112,6
1:16 7,56 93,0
3 Неразведенная 67,95
1:2 33,32 98,1
1:4 17,02 100,2
1:8 8,86 104,3
1:16 За пределом
обнаружения
121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG International, 1П С .» ^
тел. (495) 243-5621,243-5228, 243-4028, факс (495) 243-9300,232-0211 e-mail: drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ru


--- стр. 101 ---
14. Инкубируйте планшет, закрытый фольгой, в течение 10 минут при комнатной температуре на 
орбитальном шейкере (600 -  900 об/мин).
15. Немедленно вытряхните жидкость из лунок и ее остатки удалите (см. п.5).
16. Внесите во все лунки по 150 мкл хлористоводородной кислоты (0,025 М) для элюции норадреналина.
17. Закройте планшет фольгой и инкубируйте 10 минут при комнатной температуре на орбитальном 
шейкере (600 -  900 об/мин). Внимание: Не удаляйте супернатант из лунок после инкубации!
Для проведения ИФА необходимо следующее количество элюата, содержащего норадреналин:
Норадреналин
20 мкл
7.5. Иммуноферментный анализ с помощью набора Норадреналин ИФА
1. Внесите во все лунки по 25 мкл свежеприготовленного раствора фермента.
2. Внесите в соответствующие лунки по 20 мкл проэкстрагированных стандартов, контролен и образцов 
пациентов.
3. Инкубируйте в течение 30 минут при комнатной температуре на орбитальном шейкере (400-500 
об/мин).
4. Внесите в каждую лунку по 50 мкл антисыворотки к норадреналину.
5. Инкубируйте в течение 2 часов при комнатной температуре на орбитальном шейкере (400 -  500
об/мин).
6. Удалите содержимое лунок и тщательно их промойте, добавляя по 300 мкл разведенного концентрата 
промывочного буфера в каждую лунку. Повторите промывание 2 раза. После цикла промывки удалите 
остатки жидкости из лунок, постукивая перевернутым планшетом по впитывающей бумаге.
7. Внесите во все лунки по 100 мкл конъюгата фермента.
8. Инкубируйте в течение 30 минут при комнатной температуре на орбитальном шейкере (400 ~ 500
об/мин).
9. Удалите содержимое лунок и тщательно промойте каждую 3 раза. После цикла промывки удалите 
остатки жидкости из лунок, постукивая перевернутым планшетом по впитывающей бумаге.
10. Внесите во все лунки по 100 мкл субстрата.
11. Инкубируйте в течение 20 - 30 минут при комнатной температуре на орбитальном шейкере (400 -  500 
об/мин).
Избегайте воздействия прямых солнечных лучей!
12. Внесите во все лунки по 100 мкл стоп-реагента и встряхните планшет для обеспечения гомогенного 
распределения раствора.
13. Измерьте оптическую плотность раствора не позже, чем через 10 минут с помощью планшетного 
спектрофотометра при длине волны 450 нм и  референтной длине волны между 620 нм и 650 нм.
8. РАСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ  
Концентрации стандартов:
Норадреналин; А = О  нг/мл / В = 4 нг/мл / С = 16 нг/мл / D = 64 нг/мл / Е = 256 нг/мл / F = 1  024 нг/мл. 
Рассчитайте среднюю оптическую плотность каждого стандарта, контроля или исследуемого образца.
На миллиметровой бумаге постройте калибровочную кривую зависимости средней оптической плотности 
стандартов (по оси Y) от log концентрации норадреналина в стандартах в нг/мл {по оси X).
По калибровочной кривой рассчитайте концентрации норадреналина в контролях и исследуемых образцах, 
сопоставляя значения их средней оптической плотности с соответствующими концентрациями аналита.
Расчет концентрации норадреналина в образцах мочи и в контролях:
Содержание норадреналина в образцах мочи и в контролях рассчитывается непосредственно по 
калибровочной кривой.
Расчет концентрации норадреналина в образцах плазмы:
Для расчета концентрации норадреналина в образцах плазмы следует величины, определенные по 
калибровочной кривой, разделить на 30.
8.1. Контроль качества
Рекомендуется использовать контрольные образцы в соответствии с государственными и федеральными 
нормативами. Используйте контроли как с нормальными, так и с патологическими уровнями. Концентрации 
норадреналина в контролях LDN и других коммерческих контролях не должны выходить за рамки заданных 
диапазонов. Заданные диапазоны контролей LDN указаны в листе контроля качества (QC Report).
8.2. Количественное определение
Калибровочная кривая, по которой определяются концентрации норадреналина в исследуемых образцах, 
строится путем откладывания значений измеренных оптических плотностей 6 стандартов по оси Y 
(линейные значения), а значений соответствующих им концентраций -  по оси X (логарифмические


--- стр. 102 ---
значения). Результаты для исследуемых образцов вычисляют, используя один из следующих способов 
построения кривой: сплайн, Акима или четырех-параметрическая логистика. Ниже приводится образец 
типичной калибровочной кривой (см. рис. на стр. 6 английского варианта инструкции к данному набору). 
Пожалуйста, не используйте эту кривую для определения концентрации норадреналина в образцах.
9. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
9.1. Калибровка
Набор откалиброван в нанограммах на миллилитр (нг/мл).
Для каждой группы выполненных тестов концентрации контролей, содержащихся в наборе, должны 
укладываться в указанные для данной серии набора диапазоны. К набору прилагается протокол с 
указанием значений этих диапазонов. Если значения концентрации контролей выходят за рамки заданных 
диапазонов, значит, результаты анализа могут быть недостоверными, и тест необходимо повторить. 
Связывание антисывороток и конъюгатов фермента, а также активность использованного фермента 
термозависимы, поэтому значения оптических плотностей могут изменяться, если не используется 
термостат. Чем выше температура, тем будут выше значения оптических плотностей. Сходные колебания 
связаны и с изменением времени инкубации. Оптимальная температура при иммуноферментном анализе -  
18-22°С.
Примечание: при превышении максимальных значений оптической п л о тн о сти, измеряемых прибором  
при длине волны 450 нм, можно измерить оптическую п л о тн о сть в лунках не более чем через 10 минут, 
используя длину волны 405 нм.
9.2. Ожидаемые значения
Референсные значения, приведенные ниже, могут служить только в качестве ориентировочных. 
Рекомендуется каждой лаборатории выработать собственные значения нормы.
Норадреналин
Моча < 90 мкг/день (535 нмоль/день)
Плазма < 600 пг/мл
9.3. Чувствительность
Чувствительность рассчитана на основании значения оптической плотности стандарта О  минус удвоенное 
среднее квадратичное отклонение.
Норадреналин
Чувствительность в моче 1,33 нг/мл
Чувствительность в плазме 44 нг/мл
9.4. Специфичность
Различные биологические амины, их производные и похожие по структуре соединения проверяли на 
возможное перекрестное взаимодействие с антисывороткой к N-ацилнорметанефрину (используемой в 
наборе Норадреналин ИФА). Растворы этих соединений готовили в 0,1 N Н С 1 в следующих концентрациях:
0,1, 1 , 10 и 1  О О О  мкг/мл и тестировали, используя протокол анализа для образцов мочи.
Величина ED-50 для норадреналина = 0,03 мкг/мл.
Соединение Величина ED>50 (мкг/мл) Перекрестная реакция (%)
Дериватизированный норадреналин 0,03 100
Норметанефрин 5,8 0,48
Дофамин 14,2 0.2
Адреналин 19,6 0,14
3-метокситирамин >1,000 <0,003
Метанефрин >1,000 <0,003
Фенилаланин >1,000 <0,003
Кофеиновая кислота >1,000 <0,003
Гомованилиновая кислота >1,000 <0,003
Тирозин > 1,000 <0,003
З-метокси-4-гидроксиминдальная кислота >1,000 <0,003
Тирамин >1,000 <0,003
3-метокси-4-гидроксифенидгликоль 300 0,01
L-Дофа >1,000 <0,003


--- стр. 103 ---
9.5. Воспроизводимость
Воспроизводимость ИФА оценивали по коэффициенту вариации (CV) в пределах одной постановки и  между 
постановками, проводя повторные исследования двух образцов мочи с различной концентрацией 
норадреналина.
Вариабельность в пределах постановки, п = 40
Образец
1
Среднее + SD (нг/мл)
24,4 + 3,9
92,7 + 9,0
СУ (%)
16,1
9,8
Вариабельность между постановками, п = 11
Образец Среднее + SD (нг/мл) CV (%)
1 39,8 + 3,4 8,5
2 135 + 20,0 15,0
9.6. Открытие
К образцу мочи и образцу плазмы добавляли возрастающие количества норадреналина. Исследовали 
каждый образец с дополнительно внесенным норадреналином. Аналитическое открытие норадреналина 
оценивали в образцах с 9 различными концентрациями, используя теоретически ожидаемые и практически 
полученные значения. Среднее значение открытия во всех образцах мочи с различными концентрациями 
составило 109% (SD 11%, диапазон 83 -  115%), во всех образцах плазмы -  97% (SD 8%, диапазон 85 -  
108%).
9.7. Линейность
Линейность набора Норадреналин ИФА определяли, используя 7 различных разведений образца мочи и  
образца плазмы. Среднее значение линейности для норадреналина во всех разведениях образца мочи 
составило 100% (SD 14%, диапазон 85 -  123%), во всех разведениях образца плазмы -  100% (SD 14%, 
диапазон 84 -  123%). Соотношение между концентрацией и разведением мочи и плазмы достоверно не 
отличалось от заданной линейности при различных исследованных диапазонах концентраций (20 -  339 
нг/мл и  636 -  2436 пг/мл).
9.8. Сравнение с другим методом анализа
Концентрацию норадреналина в 30 образцах мочи определяли набором LDN-ИФА (ось X) и методом 
жидкостной хроматографии под высоким давлением (ось Y) (образцы для внешнего контроля качества QC, 
полученные от UK NEQAS). Корреляция между этими двумя методами была очень высокой. Это означает, 
что метод ИФА позволяет делать измерения по качеству не хуже, чем в случае ВЖХ. Следует принять во 
внимание, что величины данных контрольных образцов представляют собой средние значения, полученные 
примерно 40 различными пользователями ВЖХ и всегда содержат один патологический образец на 
постановку. По результатам линейно-регрессионного анализа установлена следующая корреляция; у =
1,27х - 0,04, г = 0,96. Два метода анализа сравнимы (см. рис. на стр. 7 английского варианта инструкции к 
данному набору).
10. КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Адреналин (эпинефрин) и норадреналин (норэпинефрин) вместе с дофамином составляют группу 
катехоламинов, играющих в организме важную роль в качестве гормонов и нейротрансмиттеров. 
Катехоламины являются биологическими аминами, синтезирующимися из аминокислоты тирозина через 
промежуточный продукт L-дофа.
После осуществления своих эффектов адреналин и норадреналин подвергаются распаду через 
промежуточные продукты метанефрин и норметанефрин до конечного продукта метаболизма 
ванилилминдальной кислоты и экскретируются с мочой. Поэтому моча, так же как и плазма, используется в 
качестве материала биологических образцов для определения концентрации катехоламинов.
Синтез катехоламинов осуществляется преимущественно в мозговом веществе надпочечников и в нервных 
окончаниях симпатической нервной системы. Здесь они хранятся в гранулах, вьювобождаются в ответ на 
воздействие специфических стимулов и осуществляют свои эффекты путем связывания со 
специфическими рецепторами клеточных мембран в органах-мишенях. Затем катехоламины быстро 
разрушаются под воздействием различных ферментов. Главная роль катехоламинов заключается в том, 
чтобы помочь организму адаптироваться к острым и хроническим стрессам. Адреналин влияет в основном 
на сердечную мускулатуру и метаболизм, тогда как норадреналин действует как вазоконстриктор на 
периферические артерии. Особым направлением, использующим определение концентрации 
катехоламинов в организме, являются исследования стресса и спортивная медицина.
Заболевания, связанные с измененными уровнями катехоламинов, включают гипертонию, дегенеративные 
заболевания сердца, шизофрению, маниакально-депрессивные состояния и  опухоли с продукцией 
катехоламинов (нейробластома, ганглионейрома и феохромоцитома). Из них наибольшее значение имеет 
феохромоцитома. Феохромоцитомы -  это опухоли, секретирующие катехоламины в чрезмерном количестве 
и происходящие из мозгового слоя надпочечников; при наличии феохромоцитомы хирургические операции 
с применением анестезии могут приводить к ситуациям, опасным для жизни. Около 10 % всех 
феохромоцитом дают злокачественный рост. Однако, в большинстве случаев их можно излечить путем


--- стр. 104 ---
оперативного вмешательства в сочетании с медикаментозной терапией с использованием о с - 
адренергических антагонистов. Неопознанная феохромоцитома представляет серьезный риск для 
пациента. Поэтому определение концентраций адреналина и норадреналина необходимо для пациентов с 
предполагаемой феохромоцитомой. Данные тесты также часто используются для первоначального 
установления диагноза гипертонии.
11. ЗАМЕЧАНИЯ ПО ПРОЦЕДУРЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
11.1. Надежность результатов анализа
Для того чтобы обеспечить надежные результаты анализа, его следует проводить в соответствии с 
прилагающимися инструкциями, а также с текущими правилами и нормативами (GLP (good laboratory 
practice), R! LI ВАК и т.д.). Особое внимание следует обращать на контрольные исследования точности и 
правильности во время проведения анализа; результаты этих контрольных исследований не должны 
выходить за рамки нормальных диапазонов. В случае значительных расхождений в характеристиках 
анализа, указанных производителем и реально полученных Вами, пожалуйста, свяжитесь с 
производителем набора для получения дальнейших инструкций.
11.2. Действия терапевта
Результаты анализа всегда должны интерпретироваться в совокупности с другими клиническими данными 
и результатами других лабораторных исследований для того, чтобы помочь терапевту определить, какой из 
методов лечения будет наиболее продуктивным для данного пациента. Окончательный диагноз должен 
ставиться только на основании результатов всех лабораторных анализов и клинических данных.
11.3. Рекламации
В случае рекламации, пожалуйста, прилагайте письменный отчет, содержащий все данные по проведению 
анализа, полученным результатам, а также копии оригиналов распечаток. Пожалуйста, свяжитесь с Labor 
Diagnostika Nord для получения формы рекламации и верните эту форму полностью заполненной 
производителю / Labor Diagnostika Nord.
11.4. Гарантии
Набор произведен в соответствии с последними достижениями в технологии и подвергается обязательным 
внутренним и внешним проверкам контроля качества. Любые изменения в наборе или в процессе 
постановки анализа, а также использование реагентов непредусмотренного назначения могут отрицательно 
сказаться на результатах анализа и, таким образом, не подпадают под действие гарантии. Производитель 
не отвечает за повреждения, произошедшие при транспортировке.
12. СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Список литературы приведен в оригинале инструкции на английском языке.


--- стр. 105 ---
Норадреналин ИФА
КРАТКАЯ СХЕМА ПОСТАНОВКИ АНАЛИЗА
S 6т т IV D  ;сс Номер по каталогу: 
ВАН 0-0200
Labor Diagnostika Nord GmbHACo KG
1. Приготовление раствора фермента
Это важно; Всегда следует готовить свежий раствор фермента перед проведением анализа (не дольше чем 
за 10 - 15 минут). Внесите во флакон с ферментом 1  мл дистиллированной воды и тщательно 
перемешайте. Затем добавьте 0,3 мл кофермента (ВА-1614) и затем - 0,7 мл буфера для фермента (ВА- 
1616). Суммарный объем раствора фермента равен 2,0 мл.
2. Приготовление промывочного буфера
Разведите 50 мл концентрата промывочного буфера дистиллированной водой до конечного объема 500 мл. 
Храните разведенный буфер при температуре 2 -  8 °С.
3. Взятие и хранение образцов
Плазма: ЭДТА-плазма; хранение: не более 6 часов при 2 -  8 °С, для более длительных периодов -
хранение при -2 0  ® С .
Моча: Можно использовать как разовую, так и суточную мочу.
Суточную мочу поместить в емкость, содержащую 10-15  мл 6М  НС!. Более длительное 
хранение (до 6 месяцев) - при минус 20°С. Избегать воздействия прямых солнечных лучей.
4. Схема внесения образцов для экст эакции и ацилирования
Стандарты Контроли Моча Плазма
Стандарты Юмкл
Контроли Юмкл
Моча Юмкл
Плазма 300 мкл
Дистиллированная вода 250 мкл 250 мкл 250 мкл
Буфер для анализа 50 мкл 50 мкл 50 мкл 50 мкл
Буфер для экстракции 50 мкл 50 мкл 50 мкл 50 мкл
4
Закройте планшет фольгой для заклеивания стрипов и инкубируйте 30 минут при комнатной  
температуре на орбитальном шейкере (600 -  900 об/мин). Снимите фольгу и удалите ее в  
отходы. Немедленно вытряхните жидкость из лунок и ее остатки удалите, постукивая  
перевернутым планшетом по впитывающей бумаге. ___________ __
Внесите во все лунки по 1  мл промывочного буфера, приготовленного из концентрата, закройте  
фольгой и инкубируйте 5 минут при комнатной температуре на шейкере при 600 -  900 об/мин.  
Снимите фольгу и удалите ее в отходы. Немедленно вытряхните жидкость из лунок и ее  
остатки удалите. _____ __________
Ацилирующий буфер 150 мкл 150 мкл 150 мкл 150 мкл
1  Ацилирующий реагент 25 мкл 25 мкл 25 мкл 25 мкл


--- стр. 106 ---
Инкубируйте планшет без фольги, 15 минут при комнатной температуре при встряхивании на  
шейкере при 600 -  900 об/мин. Немедленно вытряхните жидкость из лунок и ее остатки удалите.
Разведенный концентрат 1  мл 1  мл 1  мл 1  мл
промывочного буфера
Инкубируйте, закрыв планшет фольгой, 10 минут при комнатной температуре на шейкере при  
600 ~ 900 об/мин. Немедленно вытряхните жидкость из лунок и ее остатки удалите.
Хлористоводородная кислота 150 мкл 150 мкл 150 мкл 150 мкл
i;
Инкубируйте* закрыв планшет фольгой, 10 минут при комнатной температуре на шейкере при  
600 -  900 об/мин. Для проведения ИФА необходимы следующие объемы элюата:
Норадреналин
20 мкл
5. Схема постановки ИФА
Стандарты Контроли Моча Плазма
Норадреналин:
Раствор фермента 25 мкл 25 мкл 25 мкл 25 мкл
Ста н да рты/Ко нтрол и/Об раз ц ы20 мкл 20 мкл 20 мкл 20 мкл
Инкубируйте 30 минут при комнатной температуре на шейкере при 400 -  500 об/мин.
Антисыворотка к 50 мкл 50 мкл 50 мкл 50 мкл
норадреналину
Инкубируйте 2 часа при комнатной температуре на шейкере при 400 -  500 об/мин. Промойте 3 
раза, добавляя по 300 мкл разведенного концентрата промывочного буфера в лунку. Удалите  
остатки жидкости, постукивая перевернутым планшетом по впитывающей бумаге.
Конъюгат фермента 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубируйте 30 мин при комнатной температуре на шейкере при 400 -  500 об/мин. Промойте 3 
раза, добавляя по 300 мкл разведенного концентрата промывочного буфера в лунку. Удалите  
остатки жидкости, постукивая перевернутым планшетом по впитывающей бумаге. ______


--- стр. 107 ---
10
Субстрат 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Инкубируйте 20- 30 минут при комнатной температуре на шейкере при 400 -  500 об/мин.
Стоп-реагент 100 мкл 100 мкл 100 мкл 100 мкл
Измерьте оптическую плотность при 450 нм (референсная длина волны 620 -  650 нм).
6. Расчет результатов
Концентрации стандартов:
Норадреналин: А = О  нг/мл / В = 4 нг/мл / С = 16 нг/мл / D = 64 нг/мл / Е = 256 нг/мл / F = 1024 нг/мл.
Рассчитайте среднюю оптическую плотность каждого стандарта, контроля или исследуемого образца.
На миллиметровой бумаге постройте калибровочную кривую зависимости средней оптической 
плотности стандартов (по оси Y) от 
log концентрации норадреналина в стандартах в нг/мл {по оси X).
По калибровочной кривой рассчитайте концентрации норадреналина в контролях и исследуемых 
образцах, сопоставляя значения их средней оптической плотности с соответствующими 
концентрациями аналита.
Расчет концентрации норадреналина в образцах мочи и в контролях:
Содержание норадреналина в образцах мочи и в контролях рассчитывается непосредственно по 
калибровочной кривой.
Расчет концентрации норадреналина в образцах плазмы:
Для расчета концентрации норадреналина в образцах плазмы следует величины, определенные по 
калибровочной кривой, разделить на 30.
7. Ожидаемые значения
Референтные значения, приведенные ниже, могут служить только в качестве ориентировочных.
Норадреналин
Моча < 90 мкг/день (535 нмоль/день)
Плазма <600 пг/мл
Рекомендуется каждой лаборатории выработать собственные значения нормы.
8. Чувствительность
Чувствительность рассчитана на основании значения оптической плотности стандарта О  минус удвоенное 
среднее квадратичное отклонение.
Норадреналин
Чувствительность в моче 1,33 нг/мл
Чувствительность в плазме 44 пг/мл 1


--- стр. 108 ---
Серотонин ИФА (Serotonin EIA)
Иммуноферментный тест для количественного определения серотонина в сыворотке крови, моче, 
тромбоцитах, плазме крови, спинномозговой жидкости.
Номер по каталогу: ВА-10-0900 Набор рассчитан на 96 определений
НАЗНАЧЕНИЕ
Тест Серотонин ИФА -  диагностическая in vitro  иммуноферментная (ИФА) тест-система для 
количественного определения серотонина в сыворотке крови, моче, тромбоцитах, плазме крови и 
спинномозговой жидкости.
1. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
1. Набор предназначен только для in vitro диагностики.
2. Не используйте компоненты набора по истечении срока годности.
3. Не путайте реагенты набора разных предназначений!
4. Избегайте микробной контаминации реагентов и промывочных растворов.
5. Все реагенты данного набора, содержащие человеческую сыворотку или плазму крови, были 
проверены на наличие поверхностного антигена гепатита В, антител к ВИЧ 1/2 и вирусу гепатита С по 
программе, одобренной FDA, и показали отрицательные результаты. Однако все реагенты следует считать 
потенциально опасными и обращаться с ними, соблюдая необходимые меры предосторожности.
6. Соблюдайте указанные в инструкции режимы инкубации и промывки.
7. Никогда не пипетируйте ртом и  избегайте контакта реагентов и образцов с кожей.
8. Не курите, не ешьте и не пейте в зоне работы с образцами или тестовыми пробирками к набору.
9. При работе с компонентами набора или с образцами всегда надевайте предохраняющие перчатки, 
тщательно мойте руки сразу после окончания работы.
10. Избегайте любого разбрызгивания реагентов и образцов!
11. Необходимо точно соблюдать объемы всех реагентов и образцов, указанных в различных разделах 
инструкции {объемы при отборе пипеткой или в процессе подготовки). Правильные результаты анализа 
можно получить лишь при использовании аттестованных пипеток.
Производитель набора; Labor D iagnostika Nord GmbH &  Co. KG, Nordhorn.
2. ВВЕДЕНИЕ И ПРИНЦИП МЕТОДА
Серотонин (5-гидрокситриптамин) -  это биогенный амин, являющийся продуктом метаболизма триптофана. 
Это хорошо изученный нейромедиатор центральной нервной системы. В высоких концентрациях он 
содержится в хромаффинных клетках слизистой кишечника, в тромбоцитах и в серотонергических нейронах 
головного мозга. Центральные серотонергические нейроны влияют на такие физиологические функции, как 
сон и гормональная и сердечно-сосудистая регуляция. Повышенные уровни серотонина могут быть 
выявлены при злокачественной карциноме, эндогенной депрессии и шизофрении.
Набор содержит реагенты для количественного определения производных серотонина в сыворотке и 
плазме крови, моче, тромбоцитах, тканевых гомогенатах, супернатантах культур клеток и  
цереброспинальной жидкости. Производные серотонина получают при предварительной обработке 
образцов. Под действием ацилирующего реагента серотонин количественно преобразуется в N- 
ацилсеротонин.
Тест Серотонин ИФА представляет собой твердофазный конкурентный метод иммуноферментного анализа 
на микропланшетах. Серотонин иммобилизован на поверхности лунок микропланшета {твердой фазе). 
Ацилированный серотонин и серотонин, иммобилизованный на твердой фазе, конкурируют за ограниченное 
количество центров связывания специфичных к серотонину антител. Когда система достигает равновесия, 
несвязавшийся антиген и несвязавшиеся комплексы антиген-антител о удаляются промывкой. Антитела, 
связавшиеся с серотонином, иммобилизованным на твердой фазе, выявляют конъюгатом антикроличьих 
антител с пероксидазой. Интенсивность реакции субстрат ТМБ/пероксидаза измеряют при длине волны 450 
нм. Количество антител, связавшихся с серотонином, иммобилизованным на твердой фазе, обратно 
пропорционально концентрации серотонина в образце.
3. ХРАНЕНИЕ И  СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ
Все реагенты необходимо хранить при 2 -  8°С. Не используйте компоненты набора по истечении срока 
годности, указанного на этикетке. Не смешивайте компоненты из наборов разных серий в одном 
исследовании.
4. МАТЕРИАЛЫ И РЕАГЕНТЫ. ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА
Набор Серотонин ИФА {номер по каталогу ВА-10-0900) содержит реагенты, достаточные для выполнения
96 определений серотонина (включая стандарты).
4.1. Реагенты, необходимые для ацилирования образцов:


--- стр. 111 ---
8. ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ (спинномозговая жидкость, плазма крови, свободная от  
тромбоцитов)
8.1. Подготовка стандартов
Стандарты и  контроли следует развести 0,05 N раствором HCI в соотношении 1  + 24 (например, 50 мкл 
стандарта + 1,2 мл 0,05 N раствора HCI).
Разведение необходимо делать непосредственно перед анализом.
8.2. Подготовка образцов и ацилирование
Компоненты набора и образцы перед использованием необходимо прогреть до комнатной температуры. 
Рекомендуется проводить анализ как стандартов, так и исследуемых образцов в дубликатах.
1 . Внести в соответствующие лунки устройства для ацилирования по 100 мкл разведенных стандартов А -  
F, разведенных контролей 1  и 2 и образцов спинномозговой жидкости (СМЖ), плазмы крови, свободной 
от тромбоцитов (ПСТ).
2. Внести во все лунки по 100 мкл ацилирующего буфера.
3. Внести во все лунки по 10 мкл ацилирующего реагента.
4. Инкубировать в течение 15 минут при комнатной температуре на шейкере (400 -  500 об/мин).
5. Отобрать по 30 мкл подготовленных стандартов, контролей и образцов для исследования в
иммуноферментном анализе с помощью набора Серотонин ИФА.
8.3. Иммуноферментный анализ с помощью набора Серотонин ИФА
Компоненты набора и образцы перед использованием необходимо прогреть до комнатной температуры и 
тщательно перемешать, избегая пенообразования.
1 . Внести в соответствующие лунки стрипов с иммобилизованным серотонином по 30 мкл 
ацилированных стандартов, контролей и образцов.
2. Внести во все лунки по 50 мкл антисыворотки к серотонину.
3. Инкубировать в течение 60 минут при комнатной температуре на орбитальном шейкере (400 -  500 
об/мин).
4. Удалить содержимое лунок и тщательно их промыть, добавляя по 300 мкл разведенного 
промывочного буфера в каждую лунку. Повторить промывку еще 2 раза. После цикла промывки 
удалите остатки жидкости из лунок, слегка постукивая перевернутым планшетом о фильтровальную
5. бумагу.
6. Внести во все лунки по 100 мкл конъюгата фермента.
Инкубировать в течение 30 минут при комнатной температуре на орбитальном шейкере (400 -  500
7. об/мин).
Удалить содержимое лунок и тщательно промыть каждую 3 раза. После цикла промывки удалите
8. остатки жидкости из лунок, слегка постукивая перевернутым планшетом о фильтровальную бумагу.
9. Внести во все лунки по 100 мкл субстрата.
Инкубировать в течение 20 - 30 минут при комнатной температуре на орбитальном шейкере (400 -  500 
об/мин).
Избегайте воздействия прямых солнечных лучей!
10. Внести во все лунки по 100 мкл стоп-реагента и встряхнуть планшет для обеспечения перемешивания 
субстрата и стоп-реагента.
Измерить оптическую плотность раствора не позже, чем через 10 минут с помощью планшетного 
спектрофотометра при длине волны 450 нм и референтной длине волны между 620 нм и 650 нм.


--- стр. 112 ---
9. РАСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
Рассчитать среднюю оптическую плотность каждого стандарта, контроля или исследуемого образца. На 
миллиметровой бумаге построить калибровочную кривую зависимости средней оптической плотности 
стандартов (по оси Y) от log концентрации серотонина в стандартах в нг/мл (по оси X).
По калибровочной кривой рассчитать концентрации серотонина в контролях и исследуемых образцах, 
сопоставляя значения их средней оптической плотности с соответствующими концентрациями а налита. 
Концентрации серотонина в контролях, образцах сыворотки крови, мочи, тромбоцитов можно рассчитать 
непосредственно по калибровочной кривой.
Концентрации серотонина в образцах плазмы крови, свободной от тромбоцитов и СМЖ можно рассчитать 
непосредственно по калибровочной кривой (с разведенными стандартами). (Концентрации серотонина в 
разведенных стандартах: А = О  нг/мл / В = 0,6 нг/мл / С = 2 нг/мл / D = 6 нг/мл / Е = 20 нг/мл / F = 100 нг/мл).
9.1. Расчет концентрации серотонина в тромбоцитах
Содержание серотонина в тромбоцитах выражается отношением к 1 0 ®  тромбоцитов. Например:
Пусть концентрация серотонина составляет 100 нг/мл.
Количество тромбоцитов в ПОТ: 300 000/мкл = 0,3 х 1 0 ®  тромбоцитов/мл с содержанием серотонина 100 нг. 
Результирующее содержание серотонина в тромбоцитах составляет 333 нг/10® тромбоцитов (100 нг 
серотонина х 1,0 х 10 /0,3 х 1 0 ® ).
9.2. Контроль качества
Рекомендуется использовать контрольные образцы в соответствии с государственными и  федеральными 
нормативами. Используйте контроли как с нормальными, так и с патологическими уровнями.
Концентрации серотонина в контролях LDN и других коммерческих контролях не должны выходить за рамки 
заданных диапазонов. Заданные диапазоны контролен LDN указаны в листе контроля качества (QC Report).
9.3. Количественное определение
Калибровочная кривая, по которой определяются концентрации серотонина в исследуемых образцах, 
строится путем откладывания значений измеренных оптических плотностей 6 стандартов по оси Y 
(линейные значения), а значений соответствующих им концентраций -  по оси X (логарифмические 
значения). Результаты для исследуемых образцов вычисляют, используя один из следующих способов 
построения кривой: сплайн или Акима.
Ниже приводится образец типичной калибровочной кривой. Пожалуйста, не используйте эту кривую для 
определения концентрации серотонина в образцах.
Серотонин ИФА
нг/мл
10. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
10.1. Калибровка
Набор откалиброван в нанограммах на миллилитр (нг/мл). Для каждой группы выполненных тестов 
концентрации контролей, содержащихся в наборе, должны укладываться в указанные для данной серии 
набора диапазоны. К набору прилагается протокол с указанием значений этих диапазонов. Если значения 
концентрации контролей выходят за рамки заданных диапазонов, то результаты анализа могут быть 
недостоверными, и тест необходимо повторить.


--- стр. 113 ---
Связывание антисывороток и конъюгатов фермента, а также а 1стивность использованного фермента 
термозависимы, поэтому значения оптических плотностей могут изменяться, если не используется 
термостат. Чем выше температура, тем будут выше значения оптических плотностей. Сходные колебания 
связаны и с изменением времени инкубации. Оптимальная температура при иммуноферментном анализе -  
18-22°С.
Примечание:  при превышении максимальных значений оптической плотности, измеряемых прибором при 
длине волны 450 нм, можно измерить оптическую плотность в лунках не более чем через 10 минут, 
используя длину волны 405 нм.
10.2. Ожидаемые значения
Референсные значения, приведенные ниже, могут служить только в качестве ориентировочных. 
Рекомендуется каждой лаборатории выработать собственные значения нормы.
Серотонин
Сыворотка крови Женщины 80 -  450 нг/мл Мужчины 40 -  400 нг/мл
Моча 50 -  250 мкг/день
Плазма крови, свободная от тромбоцитов (ПСТ) 1,8 -  7,5 нг/мл
Серотонин тромбоцитов 215 -  850 нг/10^ тромбоцитов
10.3. Чувствительность
Серотонин 
Сыворотка крови, моча,  
тромбоциты
Серотонин 
Спинномозговая жидкость и плазма  
крови, свободная от тромбоцитов
Чувствительность 5 нг/мл 0,3 нг/мл
10.4. Специфичность
Используемые в наборе Серотонин ИФА антитела выработаны к N-ацилированному серотонину. 
Специфичность антисыворотки оценивали, определяя перекрестную реакцию с различными биогенными 
аминами и их производными в ИФА, включавшем стадию предварительной подготовки образцов.
Соединение Перекрестная реакция (%)
Серотонин 100
Триптамин 0,19
Мелатонин 0,03
5-гидрокси индол уксусная кислота <0,002
Фенилаланин <0,002
Гистидин <0,002
Тирамин <0,002
5-гидрокситриптофан <0,002
10.5. Воспроизводимость
Воспроизводимость ИФА оценивали по коэффициенту вариации (CV) в пределах одной постановки и между 
постановками, проводя повторные исследования двух образцов мочи и двух образцов сыворотки крови (в 
пределах одной постановки) или двух образцов мочи и  двух образцов сыворотки крови (между 
постановками) с различной концентрацией серотонина.
Вариабельность в пределах постановки;  
образцов мочи л = 32; сыворотки крови п 36
Образец Среднее + SD 
(нг/мл)
CV (%)
моча 1 111 +7,3 6,6
моча 2 355 + 22,8 6,4
сыворотка 1 110 + 6,0 5,4
сыворотка 2 297 + 11,6 3.9
Вариабельность между постановками;  
образцов мочи п = 15; сыворотки крови п = 15
Образец Среднее + SD 
(нг/мл)
CV {%)
моча 1 84 + 6,2 7,4
моча 2 310 + 24,7 7,9
сыворотка 1 121 +7,4 6,0
сыворотка 2 333 + 20,0 6,0
10.6. Открытие
К образцу мочи и образцу сыворотки крови добавляли возрастающие количества серотонина. Исследовали 
ка)едый образец с дополнительно внесенным серотонином. Аналитическое открытие серотонина оценивали 
в образцах с 10 различными концентрациями, используя теоретически ожидаемые и практически 
полученные значения. Среднее значение открытия во всех образцах мочи с различными концентрациями


--- стр. 114 ---
составило 94% (SD 7,3%, диапазон 86 -  102%), во всех образцах сыворотки крови -  97% {SD 4%, диапазон 
8 7 - 102%),
10.7. Линейность
Линейность И  ФА определяли, используя 9 различных разведений образца мочи и образца сыворотки крови. 
Среднее значение линейности во всех разведениях образца мочи составило 102% (SD 6%, диапазон 95 -  
113%), во всех разведениях образца сыворотки крови -  100% (SD 7%, диапазон 92 -  112%). Соотношение 
между концентрацией и разведением мочи и сыворотки крови достоверно не отличалось от заданной 
линейности при различных исследованных диапазонах концентраций {40 -  860 нг/мл).
10.8. Сравнение с другим методом анализа
Концентрацию серотонина в 37 образцах мочи и сыворотки крови определяли набором LDN-ИФА (ось X) и 
коммерческим набором lmmunotech-ИФА (ось Y). По результатам линейно-регрессионного анализа 
установлена следующая корреляция: у = 0,96х + 29,93, г = 0,99. Два метода анализа сравнимы.
Серотонин
2СС 4С0 бса В О О  1 G O O  1200 14(Ж
Серотонин (нг/мл)
LDN (ИФА)
11. КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Серотонин (5-гидрокситриптамин) относится к группе биогенных аминов и является промежуточным 
продуктом метаболизма триптофана. Он обладает сосудосуживающим действием на гладкую мускулатуру 
и играет важную роль в качестве нейромедиатора в регуляции различных действий, таких как двигательная 
активность, агрессия, сексуальное поведение и сон. Серотонин содержится в хромаффинных клетках 
слизистой кишечника, в моче и крови, а также в центральной нервной системе. В крови он 
транспортируется преимущественно тромбоцитами. Таким образом, тромбоциты наряду с сывороткой и 
плазмой крови и мочой могут служить материалом для исследования концентрации серотонина в 
организме.
Заболевания, при которых может происходить повышение концентрации серотонина, включают нарушения 
нервной системы, такие как аутизм, эпилепсия, шизофрения и депрессия, а также карциноидные опухоли 
кишечника и бронхов.
Карциноидные опухоли развиваются из энтерохромаффинных клеток и  являются одними из самых частых 
эндокринных опухолевых заболеваний желудка. Карциноидные опухоли можно идентифицировать по 
секреции ими продуктов метаболизма серотонина. Их группируют в карциноиды передней, средней или 
задней частей пищеварительного тракта в зависимости от их локализации, а также в зависимости от 
частоты и  природы преимущественно синтезирующихся биогенных аминов. Серотонин секретируется 
главным образом опухолями средней кишки и является, таким образом, специфическим опухолевым 
маркером этих злокачественных заболеваний.
12. ЗАМЕЧАНИЯ ПО ПРОЦЕДУРЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
12.1. Надежность результатов анализа
Для того чтобы обеспечить надежные результаты анализа, его следует проводить в соответствии с 
прилагающимися инструкциями, а также с текущими правилами и нормативами (GLP(good laboratory 
practice), RILIBAK и т.д.). Особое внимание следует обращать на контрольные исследования точности и 
правильности во время проведения анализа; результаты этих контрольные исследования не должны 
выходить за рамки нормальных диапазонов. В случае значительных расхождений в характеристиках 
анализа, указанных производителем и реально полученных Вами, пожалуйста, свяжитесь с 
производителем набора для получения дальнейших инструкций.


--- стр. 115 ---
12.2. Действия терапевта
Результаты анализа всегда должны интерпретироваться в совокупности с другими клиническими данными 
и результатами других лабораторных исследований для того, чтобы помочь терапевту определить, какой из 
методов лечения будет наиболее подходящим для данного пациента. Окончательный диагноз должен 
ставиться только на основании результатов всех лабораторных анализов и  клинических данных.
12.3. Рекламации
В случае рекламации, пожалуйста, прилагайте письменный отчет, содержащий все данные по проведению 
анализа, полученным результатам, а также копии оригиналов распечаток. Пожалуйста, свяжитесь с Labor 
Diagnostika Nord для получения формы рекламации и верните эту форму полностью заполненной 
производителю / Labor Diagnostika Nord.
12.4. Гарантии
Набор произведен в соответствии с последними достижениями в технологии и подвергается обязательным 
внутренним и внешним проверкам контроля качества. Любые изменения в наборе или в процессе 
постановки анализа, а также использование реагентов непредусмотренного назначения могут отрицательно 
сказаться на результатах анализа и, таким образом, не подпадают под действие гарантии. Производитель 
не отвечает за повреждения, произошедшие при транспортировке.
12.5. Утилизация отходов
Остатки материалов и/или все остатки реагентов и готовых к использованию растворов являются 
специальными отходами. Обращение с ними регулируется федеральными и государственными 
нормативами. Об удалении специальных отходов имеется информация соответствующих структур органов 
власти. Утилизация набора должна быть проведена в соответствии с действующими на территории страны 
нормативами. Законодательной базой утилизации специальных отходов является пакет социально- 
экономических законов.
Данные по безопасности набора можно найти на домашней страничке компании LDN. Данные по 
безопасности соответствуют стандарту ISO 11014-1.
12.6. Предостережение
Не используйте в одном анализе реагенты и растворы из разных серий набора. Учитывайте разные условия 
транспортировки и хранения набора. Отступления от инструкции при обработке образцов и работе с 
набором могут привести к получению искаженных результатов. Не используйте компоненты набора по 
истечении срока годности. Избегайте микробной контаминации реагентов и промывочного раствора. 
Соблюдайте указанные в инструкции режимы инкубации и промывки.
13. СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Список литературы приведен в оригинале инструкции на английском языке.
Внимание! Перевод сделан с английского оригинала инструкции. Перед постановкой исследования  
сверьте номер и д а ту  издания вложенного в набор оригинала с указанными в настоящ ем переводе (см.  
внизу справа). При несовпадении номеров или д а т  об ратите сь к Поставщ ику за новым переводом, либо 
руководствуйтесь оригиналом инструкции.
LDN S e r o t o n i n  ВА-10 - 0 9 0 0  n i s . d o c  3 / 2 1 / 2 0 0 7  1 2 : 0 8 : 0 0  РМ Оригинал S e r o t o n i n  EIA V e r .  0 3 . 0 9 . 0 3  aw I d n  R e v . 2 7 . 1 1 2 . 0 6  aw I d n
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------— ___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ 8